JPH06225793A - ６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 - Google Patents

６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法

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JPH06225793A
JPH06225793A JP5272912A JP27291293A JPH06225793A JP H06225793 A JPH06225793 A JP H06225793A JP 5272912 A JP5272912 A JP 5272912A JP 27291293 A JP27291293 A JP 27291293A JP H06225793 A JPH06225793 A JP H06225793A
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秀樹 吉岡
So Asada
創 浅田
Shinji Fujita
真司 藤田
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Nippon Kayaku Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【構成】マイロセシウム属に属し、４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを水酸化し、６β，１４α−ジヒド
ロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを生産
する能力を有する微生物を４−アンドロステン−３，１
７−ジオンを含む培地にて培養し、培養物より６β，１
４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−
ジオンを採取することを特徴とする。 【効果】本発明の方法を用いることにより、６β，１４
α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジ
オン及び１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，６，１７−トリオンを高収率で製造することができ
る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アンドロジェン活性、
アロマテース活性阻害作用、ヒト乳癌細胞に対する細胞
増殖阻害作用等を有することが知られているアンドロス
テン誘導体、６β, １４α −ジヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオン及び１４α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，６，１７−トリオンの新規
製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、下記構造式で示される６β, １４
α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジ
オンの製造法としては、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏ
ｎｉｕｍ）属に属する菌株、例えばアクレモニウム・ス
トリクタム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｔｒｉｃｔｕ
ｍ）を栄養源含有培地で培養し、培養物より ６β, １
４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−
ジオンを採取する方法（特開昭６３−１９２７９６号
「６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，１７−ジオン」）が知られている。しかし、この方
法によると、６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンの収量が低く、同時に生成
する副生成物の為精製収率が低い等の問題がある。
【０００３】
【化１】
【０００４】また、アクレモニウム（Acremonium) 属に
属する特定の菌株、アクレモニウム・ストリクタム（Ac
remonium Strictum)（前述）を栄養源含有培地で培養
し、培養物より採取した６β，１４α−ジヒドロキシ−
４−アンドロステン−３，１７−ジオンを酸化して、制
癌剤として開発が期待されている１４α−ヒドロキシ−
４−アンドロステン−３，６，１７−トリオンとするこ
とが知られている。（特公平１−３２２３６）。しか
し、この方法によっても、１４α−ヒドロキシ−４−ア
ンドロステン−３，６，１７−トリオンの収量が低い問
題がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題を
改善し、さらに効率のよい６β, １４α−ジヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオン及び１４α−
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，６，１７−トリ
オンの製造法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、効率の良
い６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，１７−ジオンの製造法を目的として多数の微生物を
土壌中より分離し、その生成効率を調べたところ、マイ
ロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属する微生
物が、副生物の生成も少なく，効率良く６β, １４α−
ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン
を生産していることを見出した。
【０００７】本発明を概説すれば、本発明の第１の発明
は、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属
し、４−アンドロステン−３，１７−ジオンを水酸化し
６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生物を４−
アンドロステン−３，１７−ジオンを含有する培地にて
培養し、培養物より６β, １４α−ジヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，１７−ジオンを採取することを特
徴とする。
【０００８】また、本発明の第２の発明は、マイロセシ
ウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属し、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを水酸化し、６β, １４α
−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンを生成する能力を有する微生物に関する。
【０００９】また、本発明の第３の発明は、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを、微生物で、水酸化し、
６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−
３，１７−ジオンとした後、酸化して１４α−ヒドロキ
シ−４−アンドロステン−３，６，１７−トリオンを製
造する方法において、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅ
ｃｉｕｍ）属に属し、４−アンドロステン−３，１７−
ジオンを水酸化し６β，１４α−ジヒドロキシ−４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンを生成する能力を有す
る微生物を４−アンドロステン−３，１７−ジオンを含
有する培地にて培養し、培養物より６β，１４α−ジヒ
ドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを採
取する工程を含むことを特徴とする１４α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，６，１７−トリオンの製造
方法に関する。
【００１０】前記培養物から培養生産物を単離し、理化
学的性質を調べた結果、６β, １４α−ジヒドロキシ−
４−アンドロステン−３，１７−ジオンの標準品と一致
した。
【００１１】即ち培養生産物の理化学的性質は次の通り
である。 外観 白色粉末 分子量 318 分子式 Ｃ19Ｈ26Ｏ4 融点 256〜257 ℃ 紫外部吸収スペクトル 極大吸収 236 nm（中性、メ
タノール中） Ｅ１マススペクトル m/z=318 赤外吸収スペクトル （KBr 法）3460,2960,1748,168
2,1650cm-1
【００１２】プロトン核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ
ｌ3 ） δｐｐｍ；１８−Ｈ：１．０８（３Ｈ，ｓ） １９−Ｈ：１．４２（３Ｈ，ｓ） ６−Ｈ：４．４９（１Ｈ，ｔ） ４−Ｈ：５．８３（１Ｈ，ｓ）13 Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3 ） δｐｐｍ；Ｃ−１：３４．３，Ｃ−２：３２．６， Ｃ−３：２００．４，Ｃ−４：１２６．８， Ｃ−５：１６７．４，Ｃ−６：７３．０， Ｃ−７：３７．３，Ｃ−８：３２．６， Ｃ−９：４７．０，Ｃ−１０：３８．５， Ｃ−１１：１９．４，Ｃ−１２：２４．７， Ｃ−１３：５２．９，Ｃ−１４：８０．５， Ｃ−１５：３０．３，Ｃ−１６：３３．０， Ｃ−１７：２１８．２，Ｃ−１８：１８．０ Ｃ−１９：１９．６
【００１３】本発明で用いられる微生物として具体的に
は、例えば前記マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕ
ｍ）ｓｐ．ＮＫ−９２８５２１株〔微工研菌寄第１３２
３４号（FERM P- １３２３４）〕があげられる。また該
菌株の自然的および人工的変異株を含め、マイロセシウ
ム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属する菌株で４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンを水酸化し６β, １４
α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジ
オンを生成する能力を有する微生物はすべて本発明にお
いて使用することができる。人工的変異株は、紫外線の
照射など通常行う方法で得ることができる。
【００１４】ＮＫ−９２８５２１株は次の菌学的性質を
有する。 （１）各種培地における生育状態 各種寒天培地におけるＮＫ−９２８５２１株の生育状態
は下表のとおりである。観察は２５℃で１４日後に行っ
た。
【００１５】
【表１】
【００１６】本菌は、コーンミール寒天培地上で分生子
形成細胞は、散在または白色の周辺部を伴った淡オリー
ブ〜黒緑色の分生子座に集まる。培地上での分生子形成
には３〜４週間要する。菌糸は、無色、滑面、薄壁、隔
壁があり、幅は２．０〜３．０μｍ。分生子座は、無色
の細胞の薄い層からなる。周縁菌糸は、ねじれて分岐し
ており、無色、滑面、隔壁がある。
【００１７】分生子柄は、薄い子座層から形成され、繰
り返し分岐し、それぞれの分岐部で２〜４本の分岐を生
じ、最後の分岐上にフィアライドを着生する。無色、隔
壁があり、細胞の大きさは７．０〜１５．０×２．０〜
３．０μｍ。フィアライドは、２〜６本輪生、互いに密
着して平行した層となる。円柱形（８．０〜１６．０×
２．０〜３．０μｍ）、無色、分生子形成部周辺が暗色
となる。
【００１８】分生子は、舟形〜紡錘形〜レモン形（５．
０〜７．０×２．１〜４．０μｍ）、基部は突き出て裁
断状、オリーブ褐色、表面は平滑、多くは子座上に粘塊
となって集まる。
【００１９】（２）生理学的性質 至適生育温度は２５℃前後で、１０〜３３℃で生育し、
好ましい生育温度は２０〜３０℃、３７℃では生育しな
い。至適生育ｐＨは、６．０前後で、４．０〜８．０で
生育する。
【００２０】以上の各種菌学的性質より本菌は、Ａｉｎ
ｓｗｏｒｔｈ，Ｇ．Ｃ．：Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ
Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈ
ｅＦｕｎｇｉ，７ｔｈ ｅｄ．（ｂｙ Ｈａｗｋｓｗｏ
ｒｔｈ，Ｓｕｔｔｏｎ，ａｎｄ Ａｉｎｓｗｏｒｔ
ｈ），ＣＭＩ，Ｋｅｗ（１９８３）に従い、真菌門、不
完全菌亜門、不完全糸状菌綱のマイロセシウム（Ｍｙｒ
ｏｔｈｅｃｉｕｍ）に属する一菌株であることが明らか
になり本菌株をマイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕ
ｍ）ｓｐ．ＮＫ−９２８５２１株と命名した。
【００２１】本発明による６β, １４α−ジヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの生産は、炭
素源、窒素源、無機物その他使用菌株の必要とする微量
の栄養素をほどよく含有する通常の培地に基質となる４
−アンドロステン−３，１７−ジオンを添加し培養す
る。炭素源としては、グリセリンの他に、例えばグルコ
ース、フラクトース、シュークロース、マルトース、ラ
クトース、デキストリン、澱粉、水飴、糖蜜、油脂類、
有機酸類などを用いることができる。好ましくは、シュ
ークロ−スがよい。
【００２２】窒素源としては、例えば大豆粉（ソイビー
ンミール）、綿実粉、コーンスチープリカー（Ｃ．Ｓ．
Ｌ．）、ペプトン、カゼイン、カザミノ酸、酵母エキ
ス、胚芽、肉エキス、尿素、アミノ酸、アンモニウム塩
などの有機窒素化合物や無機窒素化合物が使用可能であ
り好ましくはソイビーンミールやＣ．Ｓ．Ｌ．がよい。
さらに無機物としてはナトリウム塩、カリウム塩、カル
シウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類が
単独あるいは適宜組み合わせて用いられる。
【００２３】さらに必要に応じて鉄塩、銅塩、亜鉛塩、
マンガン塩、コバルト塩などの重金属、ビオチン、ビタ
ミンＢ1 などのビタミン類を適宜添加してもよい。ま
た、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコールエー
テルなどの界面活性剤を培地に加えてもよい。
【００２４】培養法としては、微生物の培養に用いられ
る一般的方法が採用されるが、液体培養法、特に振盪ま
たは深部通気攪拌培養が最適である。培養温度は通常１
０〜３３℃であり、好ましくは２０〜３０℃である。培
養ｐＨは通常２〜８が好ましく、より好ましくは４〜７
である。
【００２５】また培養日数は培養条件によって異なる
が、通常１〜１０日である。培地中の４−アンドロステ
ン−３，１７−ジオン濃度は、通常０．０２〜２．０％
濃度（w/v)好ましくは０．１〜１．５％（w/v)になるよ
うに添加するのがよい。
【００２６】また４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンの添加時期は、培養開始時に培地の一部として存在さ
せてもよいし、培養中連続的または間欠的に添加しても
よい。培養中、グルコースやマルトースあるいはシュー
クロースなどの炭素源またはペプトンや酵母エキスなど
の窒素源を添加する場合、これに伴って添加してもよ
い。
【００２７】培養終了後、培養物中に蓄積された６β,
１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７
−ジオンを培養物中から採取する為には本物質の理化学
的性質を利用することにより行う。
【００２８】即ち、６β, １４α−ジヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，１７−ジオンは菌体を含む不溶性
画分及び培養濾液中に含まれるので培養物を遠心分離ま
たは濾過により培養菌体を含む不溶性画分と濾液とに分
離してから６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロ
ステン−３，１７−ジオンを抽出採取することができ
る。
【００２９】また、培養物を直接非親水性有機溶媒、た
とえばクロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノ
ール、メチルイソブチルケトンなどの有機溶媒で抽出す
ることにより分離し、採取することもできる。
【００３０】培養濾液から６β, １４α−ジヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを分離採取す
るには、培養濾液を活性炭、粉末セルロース、吸着樹脂
例えばポリスチレン系ポーラスポリマーゲル、メタアク
リル酸エステル系ポーラスポリマーゲル、ポリビニルア
ルコールを球状の多孔質ゲルにしたもの、アクリルエス
テル系ポーラスポリマーゲルなどの担体に吸着させ、次
いで適宜の溶媒で溶出することができる。
【００３１】これらの担体から６β, １４α−ジヒドロ
キシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを溶出す
るためには、水溶性有機溶剤例えば含水アルコールや含
水アセトンなどで溶出することができる。必要に応じて
カラムクロマトグラフィーによる精製を行なってもよ
い。
【００３２】培養菌体を含む不溶性画分からの６β, １
４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−
ジオンの分離採取は該不溶性画分からアセトン、エタノ
ールなどの親水性有機溶媒で目的化合物を抽出し、ステ
ロイド類の通常知られた分離精製法を用い、さらに精製
することができる。例えばシリカゲル、活性アルミナ、
吸着樹脂などの担体を用いるカラムクロマトグラフィー
による方法である。
【００３３】担体としてシリカゲルを用いたカラムクロ
マトグラフィーでは、溶出溶媒としてクロロホルム、酢
酸エチル、アセトン、メタノール、水などを単独あるい
は適宜組み合わせた混合溶媒を用いて溶出することがで
きる。また高速液体クロマトグラフィーによる分離精製
も有利に利用できる。用いる担体としてはシリカゲル、
オクタデシル基、アミノ基、オクチル基、などが結合し
た化学結合型シリカゲル、またはポリスチレン系ポーラ
スポリマーゲルなどの吸着樹脂を用いる。
【００３４】移動層としてはヘキサン、イソプロピルア
ルコール、含水メタノール、含水アセトニトリルなどを
用いて溶出することができる。また液相間の分配に基づ
く分離、精製法である交流分配法も有利に利用できる。
分配液系としてはヘキサン−酢酸エチル−アセトニトリ
ル系、クロロホルム−メタノール−水系などの混合溶媒
を用いることができる。所望により、脱色用に使用され
るハイポーラス樹脂などの吸着樹脂や活性炭などで、菌
体ろ液やクロマトグラフィー溶出液を処理して脱色して
もよい。
【００３５】このようにして得られた、６β，１４α−
ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン
を酸化して、１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，６，１７−トリオンを製造するには、特公平１−
３２２３６号に記載の方法もしくはこれに準じて行えば
よい。すなわち、６β，１４α−ジヒドロキシ−４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンをクロロホルムに溶解
し、活性二酸化マンガン等の酸化剤を加えて反応を行
い、反応終了後、反応混合物をろ過して酸化剤を除去
し、十分洗浄した後、溶媒を除去して、粗精製品を得
る。次いで、この粗精製品を少量のクロロホルム又はメ
タノールで溶解し、シリカゲルカラム及び溶出溶媒（ク
ロロホルム：メタノール＝９８：２）を用い、高速液体
クロマトグラフィに付して１４−α−ヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，６，１７−トリオンを溶出、分取
する。
【００３６】
【実施例】以下、実施例をあげて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
【００３７】実施例１ ＮＫ−９２８５２１株〔微工研菌寄第１３２３４号（FE
RM P- １３２３４）〕の斜面培養から一白金耳を１００
ｍｌの液体培地（Ｍａｌｔ ｅｘｔ．３．０％、ポリペ
プトン２．０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ
ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳＯ
4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ））を
入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２７℃で
３日間、振盪し、一次種培養液を得た。この種培養液全
量を２０Ｌの液体培地Ａ（砂糖５％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．
０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）
１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ
０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ））を入れた３０
Ｌ容のジャーファメンターに接種し、２７℃で３日間、
通気攪拌培養を行い、二次種培養液を得た。
【００３８】この種培養液０．６Ｌを２０Ｌの液体培地
Ｂ（砂糖１０％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．０％、ソイビーンミ
ール（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 Ｐ
Ｏ4 ０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％、４−アン
ドロステン−３，１７−ジオン０．７５％（以上の濃度
はすべてＷ／Ｖ））を入れた３０Ｌ容のジャーファメン
ターに接種し、２７℃で５日間、通気攪拌培養を行っ
た。
【００３９】このようにして得た培養液２リットルを水
２リットルで希釈し、濾過助剤３．０％を添加し、予め
硅そう土を敷き詰めたヌッチェで濾過し、上澄と菌体に
分離した。得られた濾液をダイヤイオンＨＰ−２０（商
品名）吸着樹脂に通液し６β, １４α−ジヒドロキシ−
４−アンドロステン−３，１７−ジオンを吸着させ、６
０％メタノールで溶出を行った。溶出液を減圧濃縮し、
析出した結晶を濾過で集めた。
【００４０】更に、この結晶を１４０ｍｌのアセトンに
溶解し、精密濾過により濁りを除去した後、２８ｍｌの
水を添加し再度減圧濃縮し、析出した結晶を濾過で集め
た。上記アセトンによる再結晶化をもう一度繰り返し行
い、６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，１７−ジオンの白色粉末２．４ｇを得た。
【００４１】実施例２ 変異株の取得方法 ３．６×１０5 個／ｍｌの濃度ＮＫ−９２８５２１株
〔微工研菌寄第１３２３４号（FERM P−１３２３４）〕
の胞子懸濁液１０ｍｌをガラスシャーレに入れ、マグネ
チックスターラーでゆっくり攪拌しながら、１５Ｗの紫
外線殺菌灯から４０ｃｍ離して３分間紫外線処理を行っ
た。処理液を生理食塩水で１００〜１０００倍に希釈し
て、その希釈液０．１ｍｌずつを市販のＰＤＡ（ポテト
デキストロース寒天）培地で作製したシャーレ上にガラ
ス棒で塗布し、２５℃、１週間培養した。出現したコロ
ニーを斜面培地に移植し、さらに２５℃、１週間培養し
た。このようにして得られた変異株によっても実施例と
同様に、６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンの製造に用いることが出来る。
【００４２】実施例３ 変異株の６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンの生産性の確認方法 実施例２で得られた変異株の斜面培養から一白金耳を１
０ｍｌの液体培地（Ｍａｌｔ ｅｘｔ．３．０％、ポリ
ペプトン２．０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ
ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳ
Ｏ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ）を
入れた２５×２００ｍｍの試験管に接種し、２７℃で３
日間、振盪し、種培養液を得た。この種培養液１．５ｍ
ｌを５０ｍｌの液体培地Ｃ（砂糖５％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．
２．０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａ
ｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ
2 Ｏ０．５％、４−アンドロステン−３，１７−ジオン
０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ）を入れた５００
ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２７℃で５日間、通気
攪拌培養を行った。
【００４３】６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンの分析方法 上記培養液１ｇを試験管に秤量し９ｍｌのメタノールを
添加し抽出を行った後、その一部を遠心管に移し、１５
０００ｒｐｍ、５分間の遠心により菌体残渣を除いたの
ちその上清を、以下の条件でＨＰＬＣにより定量を行っ
た。 分析カラム：Ｓｅｎｓｈｕ−ｐａｋ Ｃ１８ ６．０×
１５０ｍｍ 移動相 ：アセトニトリル／水−１／２ 流量 ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃ 検出 ：２４０ｎｍ サンプル注入量：５μｌ 変異株の６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンの生産量は１．８２ｍｇ／ｇで
あった。
【００４４】実施例４ 実施例１で得られた６β，１４α−ジヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，１７−ジオン１ｇを４８ｍｌのク
ロロホルムに溶解し、この溶液に活性二酸化マンガン６
ｇを加えて、数時間、室温で反応を行った。反応後、反
応混合物より二酸化マンガンを除去し、十分洗浄した
後、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去して粗精製
画分を得た。この画分を少量のクロロホルム（又はメタ
ノール）で溶解し、シリカゲルカラム及び溶出溶媒（ク
ロロホルム；メタノール＝９８：２）を用い、高速液体
クラマトグラフイー（センシュ−科学社製）で１４α−
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，６，１７−トリ
オンを溶出し、分取した。
【００４５】
【発明の効果】本発明によれば、特定の生物的活性を有
し医薬品の原料として有用な６β, １４α−ジヒドロキ
シ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン及び１４α
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，６，１７−トリ
オンの生産性が高く、単離しにくい副生成物を含まない
ので、この化合物をより効率的に製造できる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１２月１３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００３】
【化１】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕ
    ｍ）属に属し、４−アンドロステン−３，１７−ジオン
    を水酸化し６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンドロ
    ステン−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生
    物を４−アンドロステン−３，１７−ジオンを含有する
    培地にて培養し、培養物より６β, １４α−ジヒドロキ
    シ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを採取する
    ことを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕ
    ｍ）属に属し、４−アンドロステン−３，１７−ジオン
    を水酸化し、６β, １４α−ジヒドロキシ−４−アンド
    ロステン−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微
    生物。
  3. 【請求項３】４−アンドロステン−３，１７−ジオン
    を、微生物で、水酸化し、６β，１４α−ジヒドロキシ
    −４−アンドロステン−３，１７−ジオンとした後、酸
    化して１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，
    ６，１７−トリオンを製造する方法において、マイロセ
    シウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属し、４−アン
    ドロステン−３，１７−ジオンを水酸化し６β, １４α
    −ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオ
    ンを生成する能力を有する微生物を４−アンドロステン
    −３，１７−ジオンを含有する培地にて培養し、培養物
    より６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン
    ３，１７−ジオンを採取する工程を含むことを特徴とす
    る１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，６，
    １７トリオンの製造方法。
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