JPH06153987A - １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 - Google Patents
１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法Info
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- JPH06153987A JPH06153987A JP32989592A JP32989592A JPH06153987A JP H06153987 A JPH06153987 A JP H06153987A JP 32989592 A JP32989592 A JP 32989592A JP 32989592 A JP32989592 A JP 32989592A JP H06153987 A JPH06153987 A JP H06153987A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】マイロセシウム属に属し、４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを水酸化し、１４−α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを生産する能
力を有する微生物を４−アンドロステン−３，１７−ジ
オンを含む培地にて培養し、培養物より１４α−ヒドロ
キシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを採取す
ることを特徴とする。 【効果】本発明の方法を用いることにより、ホルモンの
合成の為に利用されるアンドロステン誘導体、１４α−
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの
生産性が高まり、より効率的に製造できる。
−３，１７−ジオンを水酸化し、１４−α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを生産する能
力を有する微生物を４−アンドロステン−３，１７−ジ
オンを含む培地にて培養し、培養物より１４α−ヒドロ
キシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを採取す
ることを特徴とする。 【効果】本発明の方法を用いることにより、ホルモンの
合成の為に利用されるアンドロステン誘導体、１４α−
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの
生産性が高まり、より効率的に製造できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ホルモンの合成の為に
利用されるアンドロステン誘導体、１４α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法
に関する。
利用されるアンドロステン誘導体、１４α−ヒドロキシ
−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、下記構造式で示される１４α−ヒ
ドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの製
造法としては、クルブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）
属に属する菌株、例えばクルブラリア・ルナタ（Ｃｕｒ
ｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ）を栄養源含有培地で培
養し、培養物より１４α−ヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンを採取する方法（ソビエト特許
第８０１５１７号「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ α−
ｈｙｄｒｏｘｙ−ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−ｄｉｏｎｅ
ｂｙ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｈｙｄｒｏｌ
ｙｓｉｓ ｏｆａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−ｄｉｏｎｅ ｕ
ｓｉｎｇ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ ｂａ
ｃｔｅｒｉａ，ｉｎ ａｑ．ｏｒ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ
ｍｅｄｉｕｍ」）が知られている。
ドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの製
造法としては、クルブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）
属に属する菌株、例えばクルブラリア・ルナタ（Ｃｕｒ
ｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ）を栄養源含有培地で培
養し、培養物より１４α−ヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンを採取する方法（ソビエト特許
第８０１５１７号「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ α−
ｈｙｄｒｏｘｙ−ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−ｄｉｏｎｅ
ｂｙ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｈｙｄｒｏｌ
ｙｓｉｓ ｏｆａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−ｄｉｏｎｅ ｕ
ｓｉｎｇ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ ｂａ
ｃｔｅｒｉａ，ｉｎ ａｑ．ｏｒ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ
ｍｅｄｉｕｍ」）が知られている。
【０００３】しかし、この方法によると、出発物質の４
−アンドロステン−３，１７−ジオンの濃度を１．５ｇ
／ｌ以上にすると、生成物の１４α−ヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，１７−ジオンの収量が低く、同時
に生成する副生成物の為品質並びに精製収率が低下する
等の問題がある。
−アンドロステン−３，１７−ジオンの濃度を１．５ｇ
／ｌ以上にすると、生成物の１４α−ヒドロキシ−４−
アンドロステン−３，１７−ジオンの収量が低く、同時
に生成する副生成物の為品質並びに精製収率が低下する
等の問題がある。
【０００４】
【化１】
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、さらに効率
のよい１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，
１７−ジオンの製造法を提供することを課題とする。
のよい１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，
１７−ジオンの製造法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、効率の良
い１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７
−ジオンの製造法を目的として多数の微生物を土壌中よ
り分離し、その生成効率を調べたところ、マイロセシウ
ム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属する微生物が効率
良く１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１
７−ジオンを生産していることを見出した。
い１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７
−ジオンの製造法を目的として多数の微生物を土壌中よ
り分離し、その生成効率を調べたところ、マイロセシウ
ム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属する微生物が効率
良く１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１
７−ジオンを生産していることを見出した。
【０００７】本発明を概説すれば、本発明の第１の発明
は、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属
し、４−アンドロステン−３，１７−ジオンを水酸化し
１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−
ジオンを生成する能力を有する微生物を４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンを含む培地にて培養し、培養物
より１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１
７−ジオンを採取することを特徴とする。
は、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属
し、４−アンドロステン−３，１７−ジオンを水酸化し
１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−
ジオンを生成する能力を有する微生物を４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンを含む培地にて培養し、培養物
より１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１
７−ジオンを採取することを特徴とする。
【０００８】また、本発明の第２の発明は、マイロセシ
ウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属し、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを水酸化し、１４α−ヒド
ロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを生成
する能力を有する微生物に関する。
ウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属に属し、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを水酸化し、１４α−ヒド
ロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを生成
する能力を有する微生物に関する。
【０００９】前記培養物からこの生産物を単離し、理化
学的性質を調べた結果、１４α−ヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンの標準品と一致した。
学的性質を調べた結果、１４α−ヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンの標準品と一致した。
【００１０】本発明で用いられる微生物として具体的に
は、例えば前記マイロセシウム・ストリアチスポラム
（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕ
ｍ）ＮＫ−９２８４６１株〔微工研菌寄第１３１７５号
（FERM P- １３１７５）〕があげられる。
は、例えば前記マイロセシウム・ストリアチスポラム
（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕ
ｍ）ＮＫ−９２８４６１株〔微工研菌寄第１３１７５号
（FERM P- １３１７５）〕があげられる。
【００１１】また該菌株の自然的および人工的変異株は
もちろん、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）
属に属する菌株で４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンを水酸化し１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生物はす
べて本発明において使用することができる。
もちろん、マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）
属に属する菌株で４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンを水酸化し１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生物はす
べて本発明において使用することができる。
【００１２】ＮＫ−９２８４６１株は次の菌学的性質を
有する。
有する。
【００１３】（１）各種培地における成育状態 各種寒天培地におけるＮＫ−９２８４６１株の生育状態
は下表のとおりである。観察は２５℃で１０日後に行っ
た。
は下表のとおりである。観察は２５℃で１０日後に行っ
た。
【００１４】
【表１】
【００１５】本菌は、バレイショ・ブドウ糖寒天培地上
で直径１ｍｍ以下の分生子座を集落周辺部に形成する。
分生子座は、分生子が粘塊状に存在するために、暗緑色
〜黒緑色を呈する。
で直径１ｍｍ以下の分生子座を集落周辺部に形成する。
分生子座は、分生子が粘塊状に存在するために、暗緑色
〜黒緑色を呈する。
【００１６】分生子柄は、子座層から形成され、無色、
枝状に分岐していて、表面はややいぼ状。分生子形成細
胞は、フィアライド構造を有し、数本が輪生し、互いに
密生して平行した層になる。円形状（１０〜１５×１．
５〜２．５μｍ）、無色、分生子形成部周辺が暗色とな
る。
枝状に分岐していて、表面はややいぼ状。分生子形成細
胞は、フィアライド構造を有し、数本が輪生し、互いに
密生して平行した層になる。円形状（１０〜１５×１．
５〜２．５μｍ）、無色、分生子形成部周辺が暗色とな
る。
【００１７】分生子は、舟形〜紡錘形（６．９〜９．８
×２．３〜３．９μｍ）、基部は突き出て裁断状、灰褐
色〜オリーブ褐色、表面には、縦方向にらせん状にねじ
れた細い溝を有する。
×２．３〜３．９μｍ）、基部は突き出て裁断状、灰褐
色〜オリーブ褐色、表面には、縦方向にらせん状にねじ
れた細い溝を有する。
【００１８】（２）生理学的性質 至適生育温度は２５℃前後で、１０℃〜３３℃で生育
し、好ましい生育温度は２０〜３０℃、３７℃では生育
しない。至適生育ｐＨは、４．０〜６．０である。
し、好ましい生育温度は２０〜３０℃、３７℃では生育
しない。至適生育ｐＨは、４．０〜６．０である。
【００１９】以上の各種菌学的性質より本菌は、Ｍｏｒ
ｅ Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ（１９７６．ＣＭＩ，Ｋｅｗ．Ｅｌｌｉｓ，Ｍ．
Ｂ．）に従い、真正菌類、不完全菌亜目、不完全糸状菌
亜網のマイロセシウム・ストリアチスポラム（Ｍｙｒｏ
ｔｈｅｃｉｕｍ ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕｍ）に属す
る一菌株であることが明らかになり本菌株をマイロセシ
ウム・ストリアチスポラム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ
ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕｍ）ＮＫ−９２８４６１株と
命名した。
ｅ Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ（１９７６．ＣＭＩ，Ｋｅｗ．Ｅｌｌｉｓ，Ｍ．
Ｂ．）に従い、真正菌類、不完全菌亜目、不完全糸状菌
亜網のマイロセシウム・ストリアチスポラム（Ｍｙｒｏ
ｔｈｅｃｉｕｍ ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕｍ）に属す
る一菌株であることが明らかになり本菌株をマイロセシ
ウム・ストリアチスポラム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ
ｓｔｒｉａｔｉｓｐｏｒｕｍ）ＮＫ−９２８４６１株と
命名した。
【００２０】本発明による１４α−ヒドロキシ−４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンの生産は、炭素源、窒
素源、無機物その他使用菌株の必要とする微量の栄養素
をほどよく含有する通常の培地に基質となる４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを添加し培養する。炭素源
としては、グリセリンの他に、例えばグルコース、フラ
クトース、シュークロース、マルトース、ラクトース、
デキストリン、澱粉、水飴、糖蜜、油脂類、有機酸類な
どを用いることができる。
ンドロステン−３，１７−ジオンの生産は、炭素源、窒
素源、無機物その他使用菌株の必要とする微量の栄養素
をほどよく含有する通常の培地に基質となる４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンを添加し培養する。炭素源
としては、グリセリンの他に、例えばグルコース、フラ
クトース、シュークロース、マルトース、ラクトース、
デキストリン、澱粉、水飴、糖蜜、油脂類、有機酸類な
どを用いることができる。
【００２１】窒素源としては、例えば大豆粉、綿実粉、
コーンスチープリカー、ペプトン、カゼイン、カザミノ
酸、酵母エキス、胚芽、肉エキス、尿素、アミノ酸、ア
ンモニウム塩などの有機窒素化合物や無機窒素化合物が
使用可能である。
コーンスチープリカー、ペプトン、カゼイン、カザミノ
酸、酵母エキス、胚芽、肉エキス、尿素、アミノ酸、ア
ンモニウム塩などの有機窒素化合物や無機窒素化合物が
使用可能である。
【００２２】さらに無機物としてはナトリウム塩、カリ
ウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩など
の無機塩類が単独あるいは適宜組み合わせて用いられ
る。
ウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩など
の無機塩類が単独あるいは適宜組み合わせて用いられ
る。
【００２３】さらに必要に応じて鉄塩、銅塩、亜鉛塩、
マンガン塩、コバルト塩などの重金属、ビオチン、ビタ
ミンＢ1 などのビタミン類を適宜添加してもよい。ま
た、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコールエー
テルなどの界面活性剤を培地に加えてもよい。
マンガン塩、コバルト塩などの重金属、ビオチン、ビタ
ミンＢ1 などのビタミン類を適宜添加してもよい。ま
た、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコールエー
テルなどの界面活性剤を培地に加えてもよい。
【００２４】培養法としては、微生物の培養に用いられ
る一般的方法が採用されるが、液体培養法、特に振盪ま
たは深部通気攪拌培養が最適である。培養温度は１０℃
〜３３℃の範囲で可能であるが通常１５〜３０℃が好ま
しく、培養ｐＨは通常２〜８が好ましい。
る一般的方法が採用されるが、液体培養法、特に振盪ま
たは深部通気攪拌培養が最適である。培養温度は１０℃
〜３３℃の範囲で可能であるが通常１５〜３０℃が好ま
しく、培養ｐＨは通常２〜８が好ましい。
【００２５】また培養日数は培養条件によって異なる
が、通常１〜１０日である。培地中の４−アンドロステ
ン−３，１７−ジオン濃度は微生物の生育を阻害しない
濃度であれば特に制限はなく、最高１０％（Ｗ／Ｖ）程
度まで可能であるが、通常０．０２〜２．０％濃度にな
るように添加するのがよい。
が、通常１〜１０日である。培地中の４−アンドロステ
ン−３，１７−ジオン濃度は微生物の生育を阻害しない
濃度であれば特に制限はなく、最高１０％（Ｗ／Ｖ）程
度まで可能であるが、通常０．０２〜２．０％濃度にな
るように添加するのがよい。
【００２６】また４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンの添加時期は、培養開始時に培地の一部として存在さ
せてもよいし、培養中連続的または間欠的に添加しても
よい。培養中、グルコースやマルトースあるいはシュー
クロースなどの炭素源またはペプトンや酵母エキスなど
の窒素源を添加する場合、これに伴って添加してもよ
い。
ンの添加時期は、培養開始時に培地の一部として存在さ
せてもよいし、培養中連続的または間欠的に添加しても
よい。培養中、グルコースやマルトースあるいはシュー
クロースなどの炭素源またはペプトンや酵母エキスなど
の窒素源を添加する場合、これに伴って添加してもよ
い。
【００２７】培養終了後、培養物中に蓄積された１４α
−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン
を培養物中から採取する為には本物質の理化学的性質を
利用することにより行う。
−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン
を培養物中から採取する為には本物質の理化学的性質を
利用することにより行う。
【００２８】即ち、１４α−ヒドロキシ−４−アンドロ
ステン−３，１７−ジオンは菌体を含む不溶性画分及び
培養濾液中に含まれるので培養物を遠心分離または濾過
により培養菌体を含む不溶性画分と濾液とに分離してか
ら１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７
−ジオンを抽出採取することができる。
ステン−３，１７−ジオンは菌体を含む不溶性画分及び
培養濾液中に含まれるので培養物を遠心分離または濾過
により培養菌体を含む不溶性画分と濾液とに分離してか
ら１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７
−ジオンを抽出採取することができる。
【００２９】また、培養物を直接非親水性有機溶媒、た
とえばクロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノ
ール、メチルイソブチルケトンなどの有機溶媒で抽出す
ることにより分離し、採取することもできる。
とえばクロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノ
ール、メチルイソブチルケトンなどの有機溶媒で抽出す
ることにより分離し、採取することもできる。
【００３０】培養濾液から１４α−ヒドロキシ−４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンを分離採取するには、
培養濾液を活性炭、粉末セルロース、吸着性樹脂などの
担体に吸着させ、次いで適宜の溶媒で溶出することがで
きる。
ンドロステン−３，１７−ジオンを分離採取するには、
培養濾液を活性炭、粉末セルロース、吸着性樹脂などの
担体に吸着させ、次いで適宜の溶媒で溶出することがで
きる。
【００３１】これらの担体から１４α−ヒドロキシ−４
−アンドロステン−３，１７−ジオンを溶出するために
は、水溶性有機溶剤例えば含水アルコールや含水アセト
ンなどで溶出することができる。
−アンドロステン−３，１７−ジオンを溶出するために
は、水溶性有機溶剤例えば含水アルコールや含水アセト
ンなどで溶出することができる。
【００３２】菌体からの１４α−ヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンの分離採取はアセトン、
エタノールなどの親水性有機溶媒で抽出し、ステロイド
類の通常知られた分離精製法を用い、さらに精製するこ
とができる。例えばシリカゲル、活性アルミナ、吸着性
樹脂などの担体を用いるカラムクロマトグラフィーによ
る方法である。
ドロステン−３，１７−ジオンの分離採取はアセトン、
エタノールなどの親水性有機溶媒で抽出し、ステロイド
類の通常知られた分離精製法を用い、さらに精製するこ
とができる。例えばシリカゲル、活性アルミナ、吸着性
樹脂などの担体を用いるカラムクロマトグラフィーによ
る方法である。
【００３３】担体としてシリカゲルを用いたカラムクロ
マトグラフィーでは、溶出溶媒としてクロロホルム、酢
酸エチル、アセトン、メタノール、水などを単独あるい
は適宜組み合わせた混合溶媒を用いて溶出することがで
きる。また高速液体クロマトグラフィーによる分離精製
も有利に利用できる。用いる担体としてはシリカゲル、
オクタデシル基、アミノ基、オクチル基、などが結合し
た化学結合型シリカゲル、またはポリスチレン系ポーラ
スポリマーゲルなどを用いる。
マトグラフィーでは、溶出溶媒としてクロロホルム、酢
酸エチル、アセトン、メタノール、水などを単独あるい
は適宜組み合わせた混合溶媒を用いて溶出することがで
きる。また高速液体クロマトグラフィーによる分離精製
も有利に利用できる。用いる担体としてはシリカゲル、
オクタデシル基、アミノ基、オクチル基、などが結合し
た化学結合型シリカゲル、またはポリスチレン系ポーラ
スポリマーゲルなどを用いる。
【００３４】移動層としてはヘキサン、イソプロピルア
ルコール、含水メタノール、含水アセトニトリルなどを
用いて溶出することができる。また液相間の分配に基づ
く分離、精製法である交流分配法も有利に利用できる。
分配液系としてはヘキサン−酢酸エチル−アセトニトリ
ル系、クロロホルム−メタノール−水系などの混合溶媒
を用いることができる。
ルコール、含水メタノール、含水アセトニトリルなどを
用いて溶出することができる。また液相間の分配に基づ
く分離、精製法である交流分配法も有利に利用できる。
分配液系としてはヘキサン−酢酸エチル−アセトニトリ
ル系、クロロホルム−メタノール−水系などの混合溶媒
を用いることができる。
【００３５】
【実施例】以下、実施例をあげて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
【００３６】実施例 ＮＫ−９２８４６１株〔微工研菌寄第１３１７５号（FE
RM P- １３１７５）〕の斜面培養から一白金耳を１００
ｍｌの液体培地（Ｍａｌｔ ｅｘｔ．３．０％、ポリペ
プトン２．０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ
ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳＯ
4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ））を
入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２７℃で
３日間、振盪し、一次種培養液を得た。
RM P- １３１７５）〕の斜面培養から一白金耳を１００
ｍｌの液体培地（Ｍａｌｔ ｅｘｔ．３．０％、ポリペ
プトン２．０％、ソイビーンミール（Ｓｏｙｂｅａｎ
ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５％、ＭｇＳＯ
4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度はすべてＷ／Ｖ））を
入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２７℃で
３日間、振盪し、一次種培養液を得た。
【００３７】この種培養液全量を２０Ｌの液体培地Ａ
（砂糖５％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．０％、ソイビーンミール
（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4
０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度は
すべてＷ／Ｖ））を入れた３０Ｌ容のジャーファメンタ
ーに接種し、２７℃で３日間、通気攪拌培養を行い、二
次種培養液を得た。
（砂糖５％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．０％、ソイビーンミール
（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ4
０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％（以上の濃度は
すべてＷ／Ｖ））を入れた３０Ｌ容のジャーファメンタ
ーに接種し、２７℃で３日間、通気攪拌培養を行い、二
次種培養液を得た。
【００３８】この種培養液６Ｌを２０Ｌの液体培地Ｂ
（砂糖１０％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．０％、ソイビーンミー
ル（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ
4 ０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオン０．７５％（以上の濃度は
すべてＷ／Ｖ））を入れた３０Ｌ容のジャーファメンタ
ーに接種し、２７℃で５日間、通気攪拌培養を行った。
（砂糖１０％、Ｃ．Ｓ．Ｌ．２．０％、ソイビーンミー
ル（Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ）１．０％、ＫＨ2 ＰＯ
4 ０．５％、ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2 Ｏ０．５％、４−アンド
ロステン−３，１７−ジオン０．７５％（以上の濃度は
すべてＷ／Ｖ））を入れた３０Ｌ容のジャーファメンタ
ーに接種し、２７℃で５日間、通気攪拌培養を行った。
【００３９】このようにして得た培養液２リットルを遠
心分離により上澄と菌体に分離した。得られた菌体画分
をメタノールで３回抽出する（１リットル、１リット
ル、０．８リットル）。アセトン抽出液を減圧下１５０
ｍｌに濃縮し、ジクロロメタンで３回抽出する（０．５
リットル、０．５リットル、０．４リットル）。
心分離により上澄と菌体に分離した。得られた菌体画分
をメタノールで３回抽出する（１リットル、１リット
ル、０．８リットル）。アセトン抽出液を減圧下１５０
ｍｌに濃縮し、ジクロロメタンで３回抽出する（０．５
リットル、０．５リットル、０．４リットル）。
【００４０】ジクロロメタン抽出液を無水硫酸ナトリウ
ムで脱水後、濃縮乾固し粗結晶を得た。更に、この結晶
を１６０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、予め２％メタ
ノールを含むジクロロメタンで平衡化した１００ｇのシ
リカゲルカラムに通液し、上記組成の溶媒で展開し所望
生成物６．３ｇを含む精製画分を得た。
ムで脱水後、濃縮乾固し粗結晶を得た。更に、この結晶
を１６０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、予め２％メタ
ノールを含むジクロロメタンで平衡化した１００ｇのシ
リカゲルカラムに通液し、上記組成の溶媒で展開し所望
生成物６．３ｇを含む精製画分を得た。
【００４１】
【発明の効果】本発明によれば、１４α−ヒドロキシ−
４−アンドロステン−３，１７−ジオンの生産性が著し
く高く、この化合物をより効率的に製造できる。
４−アンドロステン−３，１７−ジオンの生産性が著し
く高く、この化合物をより効率的に製造できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (2)
- 【請求項１】 マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉ
ｕｍ）属に属し、４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンを水酸化し１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生物を４
−アンドロステン−３，１７−ジオンを含む培地にて培
養し、培養物より１４α−ヒドロキシ−４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンを採取することを特徴とする方
法。 - 【請求項２】 マイロセシウム（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉ
ｕｍ）属に属し、４−アンドロステン−３，１７−ジオ
ンを水酸化し、１４α−ヒドロキシ−４−アンドロステ
ン−３，１７−ジオンを生成する能力を有する微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32989592A JPH06153987A (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32989592A JPH06153987A (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06153987A true JPH06153987A (ja) | 1994-06-03 |
Family
ID=18226459
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32989592A Pending JPH06153987A (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06153987A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100457771C (zh) * | 2004-06-15 | 2009-02-04 | 上海迪赛诺医药发展有限公司 | 从发酵液的油相中提取4-雄烯二酮的方法 |
-
1992
- 1992-11-17 JP JP32989592A patent/JPH06153987A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100457771C (zh) * | 2004-06-15 | 2009-02-04 | 上海迪赛诺医药发展有限公司 | 从发酵液的油相中提取4-雄烯二酮的方法 |
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