CN106831919A - 生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 - Google Patents
生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106831919A CN106831919A CN201510884001.1A CN201510884001A CN106831919A CN 106831919 A CN106831919 A CN 106831919A CN 201510884001 A CN201510884001 A CN 201510884001A CN 106831919 A CN106831919 A CN 106831919A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bis
- product
- extraction process
- alpha
- extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺。本工艺主要步骤包括发酵液固液分离、收集水相产物、萃取、浓缩、结晶、重结晶和干燥,所得11α,17α-双羟基黄体酮的纯度≥99%,收率≥95%。本方法具有工艺简单,产品纯度高的特点。
Description
技术领域
本发明属于生物化工技术领域,具体地说,涉及一种生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺。
背景技术
微生物羟基化反应是甾体药物生物转化类型中最重要的反应,在甾体微生物羟化反应研究中,关于C11α微生物羟基化转化的报道较多,多集中在转化工艺的研究,包括培养基优化、底物增溶、转化条件等。
上海市农药研究开发的利用微生物转化17α-双羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮项目,菌种转化水平高,已达到工业化生产水平,产物11α,17α-双羟基黄体酮是一种生产甾体药物的关键中间体,用途广泛,如用于生产皮质激素、性激素、孕激素和螺内酯蛋白同化激素,还可用于合成可的松、强的松、黄体酮、雌烯醇、地塞米松等100余种药物。而关于这种生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺,尤其是可大规模工业化应用的提取工艺尚未有报道,本发明填补了这一空缺。
发明内容
本发明的目的是提供一种生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺。提取工艺包括以下步骤:
对生物转化得到的发酵液进行提纯得到高纯度11α,17α-双羟基黄体酮晶体,包括发酵液固液分离、吸附液相中产物、萃取、浓缩、结晶、重结晶和干燥等步骤,具体如下:
(1)、发酵液经板框过滤,将固相(菌体和大部分产物)和液相(含少量产物)分离。
(2)、用吸附剂吸附发酵液固液分离所得液相中的产物,吸附剂可为活性炭、硅藻土、大孔吸附树脂等,优选2w/v%粉剂活性炭。过滤分离收集吸附剂。
(3)、将发酵液固液分离所得固相和吸附了液相产物的吸附剂合并,所得合并物简称固相物。
(4)、用萃取剂萃取固相物,每次用量值(ml)=固相物重量值×10,萃取3次或以上,使萃取收率>95%,萃取液合并。萃取剂可为甲醇、丙酮、乙酸乙酯等,优选甲醇为萃取剂。
(5)、浓缩萃取液,完全去除溶剂,得到11α,17α-双羟基黄体酮粗晶体。
(7)、溶解粗晶体,溶剂可为二氯甲烷、二氯乙烷等,优选二氯甲烷。
(8)、粗晶体溶解液减压浓缩,温度在30-80℃,压力在0.09-0.020MPa,优选温度50℃、压力0.09Mpa。
(9)、浓缩液在4℃下搅拌结晶,过滤晶体,晶体烘干。重结晶的母液再减压浓缩,浓缩液在4℃下搅拌结晶,过滤晶体,晶体烘干。晶体纯度≥99%,两次结晶的产物结晶总收率≥95%。
本工艺具有操作简单、易于放大生产的优点,得到的11α,17α-双羟基黄体酮晶体纯度高。弥补了相关技术的缺失。
附图说明
图1为提取工艺流程图。
图2为不同吸附剂的吸附率图。
图3为粉剂活性炭投料量对吸附率的影响图。
具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1、底物和产物在各溶剂系统中的分配情况研究
分别测定17α-羟基黄体酮(底物d)和11α,17α-双羟基黄体酮(产物s)在常用溶剂氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、DMF(二甲基甲酰胺)、甲醇、丙酮、乙酸乙酯以及水中的溶解度,为后续研究打下基础。
在50ml三角烧瓶中加入10ml溶剂,置于20℃振荡水浴锅中预热10min,向三角瓶中加入溶质,少量多次加入,直至出现少量溶质不溶解现象,此时达到饱和状态,再振荡10min,停止振荡静置片刻,取清液进行第一次液相分析,再振荡1h,停止振荡静置片刻,取清液进行第二次液相分析,两次结果具有重复性即获得饱和溶解度数据。
表1为两次测定数据的平均值,对分配情况进行分析:
在甲醇和丙酮中,11α,17α-双羟基黄体酮的溶解度明显高于17α-羟基黄体酮,分配比均大于1.5,这两种溶剂可以选作为萃取剂,其中甲醇的分配比高达2.7,是首选的萃取剂。
在二氯甲烷和二氯乙烷中,17α-羟基黄体酮的溶解度高于11α,17α-双羟基黄体酮,分配比均接近0.4,这两种溶剂可以选作为结晶步骤溶剂。
虽然底物和产物在水中的分配比达到7.46,但溶解度只有10-3-10-2g/L,溶解度过小,不适用于提取工艺。
表1底物和产物溶解度(单位:g/100ml)
实施例2、吸附剂筛选
由于产物在水相中有一定溶解度,大规模生产时水相中产物累积量也很可观,需要收集水相中的产物,筛选适用于吸附产物的吸附剂,共筛选7种吸附剂,分别为活性炭(4种型号,分别为粉剂、椰壳、颗粒769、颗粒781)、活性白土、硅藻土和酸性氧化铝,筛选吸附率高的吸附剂。取吸附剂1g,投入装有50ml发酵液水相的250ml具塞三角烧瓶中,于25℃水浴振荡30min,取水相分析产物含量,吸附前发酵液也分析产物含量,计算吸附率:吸附率%=(初始含量-剩余含量)/初始含量×100
筛选到的吸附剂,对投料量进行考察,分别取吸附剂0.5g、1g、1.5g、2g、2.5g,投入装有50ml发酵液水相的250ml具塞三角烧瓶中,对应投料比为1%、2%、3%、4%、5%,于25℃水浴振荡1h,取水相分析产物含量,吸附前发酵液也分析产物含量,计算吸附率。
7种吸附剂的吸附率见图2,吸附率最佳的吸附剂为粉剂活性炭,吸附30min的吸附率达到99.5%。投料量为2w/v%的粉剂活性炭吸附1h的吸附率已接近100%,投料量达到3%后可以完全吸附(见图3),考虑到生产成本和产生固体废料量两个因素,投料量选择2w/v%。
实施例3、萃取工艺
选用甲醇作为萃取剂。甲醇与水互溶,不能直接用于萃取发酵液。设计工艺路线:将发酵液固液分离,用2w/v%活性炭吸附液相中的产物,过滤收集活性炭,与固相合并得到待萃取固相物。用甲醇萃取上述固相物,每次用量值(ml)=固相物重量值×10,考察萃取次数和收率。
用500ml发酵液(产物11α,17α-双羟基黄体酮8.1g;底物17α-羟基黄体酮2.4g)进行实验,固液分离后得到固相29g,液相475ml。用2w/v%活性炭吸附液相中产物,过滤收集活性炭9.5g,与固相合并得到固相物38.5g。
用甲醇萃取(385ml/次),萃取结果见表2。从表中看,萃取2次时产物的收率就可达到近94%,萃取3次的产物收率达到97.5%,萃取4次的产物收率与萃取3次的收率接近,从生产成本考虑,采用萃取3次的工艺。
表2甲醇萃取结果
实施例4、结晶工艺
实施例2所得的萃取液约1150ml,经减压浓缩、烘干,得到粗晶体10g。
用1L二氯甲烷溶解粗晶体,50℃、0.09MPa减压浓缩至650ml左右(产物浓度1.22%,底物浓度0.32%)。浓缩液在4℃下搅拌结晶4h,过滤晶体,晶体烘干,得到晶体6.8g,分析晶体纯度达到99.4%,产物的结晶收率约为85%。
重结晶的母液约580ml,再减压浓缩至90ml左右(产物浓度1.21%,底物浓度2.21%)。浓缩液在4℃下搅拌结晶4h,过滤晶体,晶体烘干,得到晶体1.0g,分析晶体纯度达到99.0%,产物的结晶收率为85%。
两次结晶的产物结晶总收率为98%。
产物11α,17α-双羟基黄体酮和底物17α-羟基黄体酮在几种常用有机溶剂中的分配差异大,此特点大大简化了提取工艺,经图1所示的工艺流程可以得到纯度99%以上的产品晶体,产品的提取收率达到95%以上。
Claims (6)
1.一种11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺,其特征在于:是从微生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的发酵液中提取出产物11α,17α-双羟基黄体酮。
2.如权利要求1所述的提取工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)、发酵液分离得到固相和液相;
(2)、用吸附剂收集(1)所述液相中产物,过滤收集吸附剂;
(3)、合并(1)、(2)所得固体,萃取;
(4)、浓缩;
(5)、结晶,得到粗晶体;
(6)、溶解粗晶体;
(7)、浓缩;
(8)、重结晶;
(9)、干燥。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述的发酵液是通过压滤分离固体和液体。
4.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述的吸附剂包括但不限于:活性炭、硅藻土、大孔吸附树脂。
5.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述的萃取剂包括但不限于:甲醇、丙酮、乙酸乙酯。
6.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述的粗晶体溶解剂包括但不限于:二氯甲烷、二氯乙烷。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510884001.1A CN106831919A (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510884001.1A CN106831919A (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106831919A true CN106831919A (zh) | 2017-06-13 |
Family
ID=59149132
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510884001.1A Withdrawn CN106831919A (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106831919A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106916872A (zh) * | 2015-12-28 | 2017-07-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高效生物转化制备11α,17α-二羟基黄体酮的方法 |
CN109182440A (zh) * | 2017-06-30 | 2019-01-11 | 湖南成大生物科技有限公司 | 微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法 |
CN112725325A (zh) * | 2021-02-02 | 2021-04-30 | 上海应用技术大学 | 一种利用固定化羟化酶转化制备11α,17α-羟基黄体酮的方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1095418A (zh) * | 1992-11-27 | 1994-11-23 | 日本化药株式会社 | 生产6β,14α-二羟基-4-雄甾烯-3,17-二酮的方法 |
CN102061320A (zh) * | 2010-12-02 | 2011-05-18 | 浙江仙琚制药股份有限公司 | 11α,17α-二羟基-雄甾-4-烯-3,20-二酮的制备方法 |
CN102827913A (zh) * | 2012-08-31 | 2012-12-19 | 湖南诺凯生物医药有限公司 | 微生物混菌发酵制备11α-OH-ADD的方法 |
CN103215335A (zh) * | 2013-03-28 | 2013-07-24 | 山东泰华生物科技有限公司 | 霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物的工艺及所用新型氮源 |
CN103255194A (zh) * | 2013-03-25 | 2013-08-21 | 天津科技大学 | 一种提高16α,17α-环氧黄体酮转化率的方法 |
CN103966299A (zh) * | 2014-04-28 | 2014-08-06 | 河北众盛生物科技有限公司 | 一种甾体激素类物质重要中间体的11α羟化制备方法 |
CN104711311A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-06-17 | 江西君业生物制药有限公司 | 一锅法连续发酵制备Δ1-11α,17α-二羟基黄体酮的方法 |
-
2015
- 2015-12-04 CN CN201510884001.1A patent/CN106831919A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1095418A (zh) * | 1992-11-27 | 1994-11-23 | 日本化药株式会社 | 生产6β,14α-二羟基-4-雄甾烯-3,17-二酮的方法 |
CN102061320A (zh) * | 2010-12-02 | 2011-05-18 | 浙江仙琚制药股份有限公司 | 11α,17α-二羟基-雄甾-4-烯-3,20-二酮的制备方法 |
CN102827913A (zh) * | 2012-08-31 | 2012-12-19 | 湖南诺凯生物医药有限公司 | 微生物混菌发酵制备11α-OH-ADD的方法 |
CN103255194A (zh) * | 2013-03-25 | 2013-08-21 | 天津科技大学 | 一种提高16α,17α-环氧黄体酮转化率的方法 |
CN103215335A (zh) * | 2013-03-28 | 2013-07-24 | 山东泰华生物科技有限公司 | 霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物的工艺及所用新型氮源 |
CN103966299A (zh) * | 2014-04-28 | 2014-08-06 | 河北众盛生物科技有限公司 | 一种甾体激素类物质重要中间体的11α羟化制备方法 |
CN104711311A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-06-17 | 江西君业生物制药有限公司 | 一锅法连续发酵制备Δ1-11α,17α-二羟基黄体酮的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
姚文兵: "《生物技术制药概论 第2版》", 31 January 2010, 中国医药科技出版社 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106916872A (zh) * | 2015-12-28 | 2017-07-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高效生物转化制备11α,17α-二羟基黄体酮的方法 |
CN106916872B (zh) * | 2015-12-28 | 2020-09-08 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高效生物转化制备11α,17α-二羟基黄体酮的方法 |
CN109182440A (zh) * | 2017-06-30 | 2019-01-11 | 湖南成大生物科技有限公司 | 微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法 |
CN112725325A (zh) * | 2021-02-02 | 2021-04-30 | 上海应用技术大学 | 一种利用固定化羟化酶转化制备11α,17α-羟基黄体酮的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101531666B (zh) | 一种从柚核中提取柠檬苦素的工艺 | |
CN101948450B (zh) | 一种生产制备奥利司他的方法 | |
CN107501045B (zh) | 一种利用大孔吸附树脂从发酵液中分离提纯丁三醇的方法 | |
CN106831919A (zh) | 生物转化17α-羟基黄体酮生产11α,17α-双羟基黄体酮的提取工艺 | |
CN104529984A (zh) | 一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法 | |
CN102887877A (zh) | 一种纯化卡巴他赛的方法 | |
CN104844620B (zh) | 一种雷帕霉素的分离纯化方法 | |
CN103265536A (zh) | 一种当药黄素的制备方法 | |
CN102086226B (zh) | 一种制备环孢菌素a的方法 | |
CN107141329A (zh) | 一种植物甾醛类化合物的分离精制方法 | |
CN108250273A (zh) | 纽莫康定高效分离纯化方法 | |
CN110396058A (zh) | 一种新型骨化二醇(25-羟基维生素d3)分离纯化方法 | |
CN101353294A (zh) | 高含量白藜芦醇分离纯化的方法 | |
CN105820213B (zh) | 高效分离纯化纽莫康定的方法 | |
CN103554133A (zh) | 一种制备高纯度他克莫司的工艺 | |
CN103408616A (zh) | 一种鸦胆子苷a的制备方法 | |
CN104710389A (zh) | 一种纯化紫杉烷类衍生物的方法 | |
CN100402547C (zh) | 高含量大豆皂苷的制备方法 | |
CN109651391B (zh) | 一种从青蒿素重结晶废料中回收青蒿素的方法 | |
CN108929335B (zh) | 一种他克莫司粗晶的制备方法 | |
CN106220646A (zh) | 一种酶法合成头孢氨苄母液的循环利用的方法 | |
CN101314601B (zh) | 一种高纯度盐酸帕洛诺司琼的制备工艺 | |
CN101671383B (zh) | 单体7-乙氧基灵芝酸o及单体灵芝酸t分离纯化方法 | |
CN104119421B (zh) | 甾体羟化杂质的去除方法 | |
CN103467352A (zh) | 一种灵菌红素提取纯化的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20170613 |