CN104529984A - 一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法 - Google Patents

一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及了一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法，所述方法包括以下步骤：(1)将原料大叶千斤拔切碎，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取1.5～5h，得提取液；(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为大孔吸附树脂；以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，收集洗脱液；(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物，将滤液重结晶，用乙醇洗涤晶体，真空干燥，即得染料木苷。本发明提供的方法原料丰富易得，工艺简单可行，污染少，周期短，所得产品纯度高，易于规模化制备。

Description

一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法
技术领域
本发明涉及天然产物的提取，具体涉及一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法。
背景技术
染料木苷(Genistin)是一种异黄酮类化合物，在体内代谢具有雌激素样作用，被称为植物雌激素类药物。染料木苷在人体肠道菌群作用下水解成染料木素，通过竞争性地结合雌激素受体而发挥作用，在医药行业主要用于治疗妇科类疾病。
在现有技术中，专利文献CN1876671公开了一种从豆粕中提取的大豆异黄酮提取物及提取方法，所述提取物中含有染料木苷、大豆苷和大豆黄苷，该方法提供的产物为异黄酮苷的混合物，且没有涉及针对染料木苷的分离方法。目前，亟需开发一种适于规模化生产的提取高纯度染料木苷的方法。
发明内容
本发明公开了一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法；该方法的原料丰富易得，工艺简单可行，污染少，周期短，所得产品纯度高，易于规模化制备。
本发明提供了一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将原料大叶千斤拔切碎，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取1.5～5h，得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为大孔吸附树脂；以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物，将滤液重结晶，用乙醇洗涤晶体，真空干燥，即得染料木苷。
本发明所述步骤(1)中：
所述乙醇水溶液的浓度为乙醇与水的体积比，该浓度优选为60％；
所述步骤(1)中将原料大叶千斤拔切碎优选为将大叶千斤拔切成2-3cm的片段；
所述提取可以提取一次，加入乙醇水溶液的体积为原料大叶千斤拔重量的7.5～8.5倍，优选为8倍，提取时间优选为1.5～5h，进一步优选为4h；也可以以相同浓度的乙醇水溶液提取多次后将提取液合并，优选为提取两次，其中，第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量7.5～8.5倍体积的乙醇水溶液，优选为8倍体积，回流提取1.5～2.5小时，优选为2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量5.5～6.5倍体积的乙醇水溶液，优选为6倍体积，回流提取1.5～2.5小时，优选为2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并；该步骤所述大叶千斤拔重量的单位为kg，乙醇水溶液体积的单位为L。
本发明所述步骤(2)中：
步骤(1)所得提取液应被浓缩至与色谱柱规格相匹配的、适于上样的体积，且应确保所有溶质均处于充分溶解状态；样品浓缩后，采用常规方法上色谱柱，应使样品充分吸附到大孔吸附树脂上，且不浪费；
所述固定相使用的大孔吸附树脂型号优选为D101，所述固定相中粒度0.3-1.25mm的树脂颗粒不少于95％；大孔吸附树脂被填充于色谱柱中，在使用之前，应采用常规方法进行活化处理；
所述流动相中，乙醇-水的体积比通过大量实验进行筛选得到，在15～25:85～75的范围内可以将目标化合物染料木苷集中洗脱下来；所述乙醇-水的体积比优选为20:80；
所述流动相洗脱将目标化合物充分洗脱下来且不浪费流动相即可，洗脱体积优选为1.5～2倍于色谱柱体积；洗脱速度为以大孔吸附树脂为固定相进行洗脱的常规速度；
为了提高洗脱液中染料木苷的纯度，在样品充分吸附到大孔吸附树脂后、流动相洗脱前，可先用不含乙醇的水进行预洗脱，预洗脱所得产物不作为洗脱液收集；所述预洗脱的体积优选为1.5～2倍色谱柱体积。
本发明所述步骤(3)中：
所述溶解稠状浸膏的溶剂用量以将浸膏充分溶解且不浪费溶剂为宜，优选为3～5倍稠状浸膏体积，进一步优选为4倍体积；所述溶剂乙醇中冰醋酸的浓度优选为2.5％，所述浓度为冰醋酸与乙醇的体积比；
所述将滤液重结晶具体为：将滤液在55～65℃下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，优选为在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2～4℃下充分析出晶体，优选为4℃下充分析出晶体，过滤除去母液，即得晶体；
所述真空干燥的条件优选为：55～65℃下真空干燥3～5小时，进一步优选为60℃下真空干燥4小时。
作为优选方案，本发明所述方法包括以下步骤：
(1)将大叶千斤拔切成长度2-3cm的片段，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量7.5～8.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量5.5～6.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用1.5～2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5～2倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入3～5倍于浸膏体积的含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在55～65℃下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，自然冷却后，置于2～4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在55～65℃下真空干燥3～5小时，即得染料木苷。
作为最优选方案，本发明所述方法包括以下步骤：
(1)将大叶千斤拔切成长度2-3cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量8倍体积的乙醇水溶液，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量6倍体积的乙醇水溶液，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得染料木苷。
本发明提供的方法可以取得显著的技术效果。本发明提供的方法可以得到高纯度染料木苷；无需进行多次分离纯化，只需要进行一次大孔吸附树脂柱色谱即可得到高纯度染料木苷，方法操作简单，重现性好；仅用到水、乙醇及少量冰醋酸，节省试剂，成本低廉，安全环保；非常适宜大规模、工业化生产。
附图说明
图1，为实施例1所得产物的1H-NMR谱图。
图2，为实施例1所得产物的13C-NMR谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明各实施例中，固定相为D101型大孔吸附树脂，规格为粒度0.3-1.25mm的大孔吸附树脂颗粒不少于95％，购自天津市光复精细化工研究所；色谱柱规格为：150cm×50cm。
实施例1
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液160L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液120L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末120g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.8％。
所得产物的1H-NMR谱图见图1，13C-NMR谱图见图2，证实产物为染料木苷。
实施例2
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2cm的片段，用浓度50％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液150L，回流提取2.5小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液110L，回流提取2.5小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至7.5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比25:75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为2倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入5倍于浸膏体积的含有2％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在65℃下减压浓缩至原体积的1/3，自然冷却后，置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在65℃下真空干燥3小时，即得固体粉末110g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.4％。
实施例3
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度3cm的片段，用浓度70％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液170L，回流提取1.5小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液130L，回流提取1.5小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至7L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用1.5倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比15:85的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为2倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入3倍于浸膏体积的含有3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在55℃下减压浓缩至原体积的1/3，自然冷却后，置于2℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在55℃下真空干燥5小时，即得固体粉末106g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.6％。
实施例4
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度3cm的片段，用浓度55％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液170L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液130L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至6L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比15:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为2倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入3.5倍于浸膏体积的含有2％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在65℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于3℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在55℃下真空干燥5小时，即得固体粉末100g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.3％。
实施例5
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度3cm的片段，在原料中加入160L浓度60％的乙醇水溶液回流提取5小时，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末85.0g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.2％。
实施例6
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液160L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液120L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末108g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.3％。
实施例7
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2.5cm的片段，在原料中加入160L浓度60％的乙醇水溶液，回流提取4小时，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末80g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.1％。
实施例8
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度8cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液170L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液130L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于3℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末107g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.3％。
实施例9
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液160L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液120L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至10L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用3倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为3倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末115g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.2％。
实施例10
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入乙醇水溶液160L，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入乙醇水溶液120L，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至5L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，立即置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得固体粉末119g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.0％。
实施例11
按以下步骤制备染料木苷：
(1)将20kg大叶千斤拔切成长度2.5cm的片段，在原料中加入160L浓度60％的乙醇水溶液，回流提取1.5小时，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至6L后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；以体积比18:82的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.8倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4.5倍于浸膏体积的含有2％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4.5小时，即得固体粉末90g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为99.3％。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(1)中乙醇水溶液的浓度为80％。产物得固体粉末76.8g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为92.5％。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(1)中乙醇水溶液的浓度为40％。产物得固体粉末70.2g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为93.1％。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(2)中流动相为体积比30:70的乙醇-水溶液。产物得固体粉末75.0g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为91.0％。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(2)中流动相为体积比10:90的乙醇-水溶液。产物得固体粉末75.0g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为90.5％。
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(3)中用于溶解稠状浸膏的乙醇中不含冰醋酸。产物得固体粉末78g；经高效液相色谱法检测，所得染料木苷纯度为85.0％。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将原料大叶千斤拔切碎，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取1.5～5h，得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为大孔吸附树脂；以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物，将滤液重结晶，用乙醇洗涤晶体，真空干燥，即得染料木苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述提取加入乙醇水溶液的体积为原料大叶千斤拔重量的7.5～8.5倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取为提取两次，具体为：在原料中加入占原料大叶千斤拔重量7.5～8.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量5.5～6.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3-1.25mm的树脂颗粒不少于95％。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述流动相中乙醇-水的体积比为20:80。
6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)还包括：在流动相洗脱前，用水进行预洗脱，弃预洗脱液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述将滤液重结晶具体为：将滤液在55～65℃下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，自然冷却后，置于2～4℃下充分析出晶体，过滤除去母液，即得晶体。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述真空干燥具体为：55～65℃下真空干燥3～5小时。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将大叶千斤拔切成长度2-3cm的片段，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量7.5～8.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量5.5～6.5倍体积的乙醇水溶液，回流提取1.5～2.5小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用1.5～2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5～2倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入3～5倍于浸膏体积的含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在55～65℃下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，自然冷却后，置于2～4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在55～65℃下真空干燥3～5小时，即得染料木苷。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将大叶千斤拔切成长度2-3cm的片段，用浓度60％的乙醇水溶液回流提取两次；第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量8倍体积的乙醇水溶液，回流提取2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量6倍体积的乙醇水溶液，回流提取2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并，即得提取液；
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为D101大孔吸附树脂，固定相中粒度为0.3～1.25mm的树脂颗粒不少于95％；用2倍色谱柱体积的水进行预洗脱，弃预洗脱液；再以体积比20:80的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，洗脱体积为1.5倍色谱柱体积，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入4倍于浸膏体积的含有2.5％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物；将滤液在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于4℃下充分析出晶体，过滤除去母液；用乙醇洗涤晶体，在60℃下真空干燥4小时，即得染料木苷。
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