CN101531666B - 一种从柚核中提取柠檬苦素的工艺 - Google Patents
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Abstract
一种从柚核中提取柠檬苦素的工艺，其特征在于依次包括下述步骤：(1)柚核预处理：水洗涤、干燥后，粉碎至20～40目；(2)提取：柚核粉末料，以乙醇水溶液作为溶剂，90℃～100℃热回流抽提；(3)杂质分离：以大孔吸附树脂分离杂质，依次以30％～50％乙醇水溶液淋洗，淋洗液弃去；再以60％～80％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(4)所述洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；加入2倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；再过滤和干操，得最终产品。本发明的有益效果是：利用热回流提取、吸附树脂分离杂质等过程，从柚核中提出了含量大于90％的柠檬苦素。该工艺简单，淋洗剂可回收，循环利用，成本低，可进行大规模生产应用。
Description
技术领域
本发明属于生物化学分离纯化技术领域，具体涉及从柚核中分离纯化提取柠檬苦素的工艺。
背景技术
柠檬苦素(limonin)即黄柏内酯，又称吴茱萸苦素、白藓内酯，是一种三萜类植物次生代谢产物，主要存在于芸香科和楝科植物中。科属芸香科的柚子果实中含有柠檬苦素，以柚核中含量最大。柠檬苦素具有抗癌、镇痛、除虫和杀虫、调节体内胆固醇水平，防止动脉粥样化等功效。因此分离纯化柠檬苦素引起了生化科研工作者的重视，文献中已有相关分离纯化柠檬苦素工艺的报道。
中国专利CN1279242A中提供了一种从芸香科果实中提取柠檬苦素的工艺。该工艺先将芸香科果核烘干粉碎，再用石油醚彻底脱脂三次，然后用丙酮抽提柠檬苦素，提取液蒸发浓缩至干后，用二氯甲烷和异丙醇的混合液溶解浓缩物，过滤后，置于低温下，进行结晶，产品用二氯甲烷和异丙醇混合液重结晶两次，得到柠檬苦素产品。该工艺在脱脂过程中，需消耗大量溶剂、电能，成本高，操作繁琐且工艺不易放大。
施英等应用大孔吸附树脂对柠檬苦素类似物进行了分离纯化(施英，徐玉娟，吴娱明等.桔核中柠檬苦素类物质纯化工艺的研究[J].广东农业科学，2006，11：70～72)。该工艺用桔核提取的浓缩水溶液，经大孔吸附树脂吸附分离，用乙醇水溶液淋洗，收集淋洗液后，冷冻干燥，得到柠檬苦素类似物。该技术能够将柠檬苦素类似物分离出来，但含量不高，且不能分离出柠檬苦素单体。
综上所述，现有技术工艺复杂，成本高，多为实验室采用，不能大规模生产。
发明内容
本发明的目的是：提供一种简单实用、溶剂淋洗剂可回收循环利用，成本低，适于进行大规模生产柠檬苦素制品的工艺。
为达到上述目的，采用的技术方案是：
一种从柚核中分离纯化柠檬苦素的工艺，其特征在于依次包括下述步骤：
(1)柚核预处理 柚核经水洗涤、干燥后，粉碎；
(2)提取 柚核粉末料，以60％～80％乙醇水溶液作为溶剂，90℃～100℃热回流抽提，得提取液；
(3)杂质分离 步骤(2)所述提取液稀释至乙醇浓度为40％～60％，pH为3.0～5.0，以大孔吸附树脂分离杂质，以30％～50％乙醇水溶液淋洗，淋洗液弃去；再以60％～80％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
(4)浓缩、溶解 步骤(3)所述洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5)结晶 步骤(4)得到的二氯甲烷过滤液中，加入2倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6)过滤和干操 步骤(5)得到晶体物过滤，50℃～70℃真空干燥。
所述大孔吸附树脂是骨架为苯乙烯-二乙烯苯共聚物的非极性吸附树脂：市售HZ816、HZ818、HZ820中的一种。
步骤(1)中将经过水洗涤、60℃～70℃干燥6～8小时至衡重的柚核粉碎至20目～60目。
步骤(2)中，热回流提取仪中柚核粉末料，粉末料重量(g)∶乙醇溶液(ml)为1∶(4-6)，进行20～35次的连续抽提。
经步骤(6)过滤和干操后，干燥成品用HPLC(Agilent 1100 Series)高效液相色谱仪测量含量，色谱柱：ZORBAX SB-C18(4.6mm×100mm，3.5)；流动相：甲醇∶乙腈∶水＝45∶10∶45(v/v)；流速：0.6ml/min；检测波长：210nm；柱温：20℃。
结晶母液减压蒸干，用乙醇溶解后，返回大孔吸附树脂柱吸附分离。
本发明的有益效果是：利用热回流提取、吸附树脂分离杂质等过程，从柚核中提出了纯度大于90％的柠檬苦素。工艺简单，淋洗剂可回收循环利用，成本低，适合大规模生产应用。
附图说明
图1为从柚核中分离纯化柠檬苦素的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但并不限于实施例。
实施例中浓度非特别注明，均为体积百分浓度。
淋洗液可回收循环使用。
实施例1
将经水洗涤后的柚核，置于烘干箱中65℃烘7小时直至衡重，粉碎至20目得粉料。称量柚核粉料60克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用60％乙醇水溶液300ml在100℃温度下，连续抽提30次。提取液稀释至乙醇浓度为50％，提取液pH＝3.0，流过装有50ml HZ816树脂柱，流速1ml/min。先用40％乙醇水溶液200ml淋洗，流速为1ml/min，得到淋洗液弃去，再用70％乙醇水溶液300ml洗脱，流速为1ml/min，收集洗脱液，减压蒸馏(0.8bar，80℃)，浓缩至干，用20ml的二氯甲烷溶解，过滤后，加入40ml的异丙醇，置于冰箱4℃中，缓慢搅拌结晶。将结晶液过滤，得到无色晶体，60℃真空干燥，得纯度91.2％的柠檬苦素成品约159mg。
实施例2
将实施例1中大孔吸附树脂HZ816换成HZ818，其他与实施例1相同，得到纯度为92.5％的柠檬苦素成品约为150mg。
实施例3
将洗涤后的柚核，置于烘干箱中60℃烘8小时直至衡重，将烘干的柚核粉碎至40目，得粉料。称量60克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用70％乙醇水溶液300ml在110℃温度下，连续抽提25次。提取液稀释至乙醇浓度为50％，提取液pH＝4.0，流过装有50ml HZ818树脂柱，流速1ml/min。分别用45％乙醇水溶液150ml淋洗，流速为1ml/min，得到淋洗液弃去，再用80％乙醇水溶液250ml洗脱，流速为1ml/min，收集洗脱液，减压蒸馏(0.8bar，80℃)，浓缩至干，用20ml的二氯甲烷溶解，过滤后，加入40ml的异丙醇，置于冰箱4℃中，缓慢搅拌结晶。将结晶液过滤，得到无色晶体，65℃真空干燥，可以得到纯度为90.5％的柠檬苦素成品约149mg。
实施例4
将实施例3中大孔吸附树脂HZ818换成HZ820，其他同实施例3操作，可得纯度为90.3％的柠檬苦素成品约为151mg。
实施例5
将洗涤后的柚核，置于烘干箱中70℃烘干6小时，将烘干的柚核粉碎至60目，得粉料。称量60克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用80％乙醇水溶液300ml在100℃温度下，连续抽提30次。提取液稀释至乙醇浓度为50％，提取液pH＝3.5，流过装有50ml HZ820树脂柱，流速1ml/min。分别用200ml体积分数50％乙醇水溶液淋洗，流速为1ml/min，弃去淋洗液，再用70％乙醇水溶液300ml洗脱，流速为1ml/min，收集洗脱液减压蒸馏(0.8bar，80℃)，浓缩至干，用20ml的二氯甲烷溶解，过滤后，加入40ml的异丙醇，置于冰箱4℃中，缓慢搅拌结晶。将结晶液过滤，得到无色晶体，60℃真空干燥，得纯度92.3％的柠檬苦素成品约154mg。
实施例6
将实施例5中大孔吸附树脂HZ820换成HZ816，其他同实施例5一样操作，得纯度为91.8％的柠檬苦素成品约为157mg。
Claims (4)
1.一种从柚核中提取柠檬苦素的工艺，其特征在于依次包括下述步骤：
(1)柚核预处理柚核经水洗涤、干燥后，粉碎至20～40目；
(2)提取所述步骤(1)制得的柚核粉末料，以60％～80％乙醇水溶液作为溶剂，90℃～100℃热回流抽提，得提取液；
(3)杂质分离步骤(2)所述提取液稀释至乙醇浓度为40％～60％，pH为3.0～5.0，以非极性大孔吸附树脂分离杂质，以30％～50％乙醇水溶液淋洗，淋洗液弃去；再以60％～80％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
(4)浓缩、溶解步骤(3)所述洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5)结晶步骤(4)得到的二氯甲烷过滤液中，加入2倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6)过滤和干操步骤(5)得到晶体物过滤，50℃～70℃真空干燥。
2.根据权利要求1所述从柚核中提取柠檬苦素的工艺，其特征在于：所述步骤(2)中柚核粉末料重量g∶乙醇溶液ml为1∶(4-6)，连续抽提20～35次。
3.根据权利要求1所述从柚核中提取柠檬苦素的工艺，其特征在于：所述非极性大孔吸附树脂骨架为苯乙烯-二乙烯苯共聚物。
4.根据权利要求1或3所述从柚核中提取柠檬苦素的工艺，其特征在于：所述大孔吸附树脂为HZ816、HZ818、HZ820中的一种。
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