JPS63192796A - ６β，１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 童！上立丑貝立互 本発明は、特定な生物学的活性を示す新規なアンドロス
テン誘導体、６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンに関する。

孜茗像侃を虱 従来、種々のアンドロステン誘導体が合成されており、
その多くはアンドロジエン活性を始め多くの生物学的活
性を有することが知られている。

本発明者は、公知のアンドロジエンである４−アンドロ
ステン−３，１７−ジオンを基質とし、これにアクレモ
ニウム属（Ａｃｒｅｓ＋ｏｎ　ｉｕｍ）に属する特定な
微生物を作用させると、新規なアンドロステン誘導体で
ある６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，１７−ジオンを産生ずること、及び本物質が特定
な生物学的活性を有することを見出し、本発明をなすに
至った。

Ｈが７ンしようとする課 したがって、本発明は、アンドロジエン活性及びヒト乳
ガン細胞Ｍ　ＣＦ−７（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ培養）に対す
る増殖抑制作用及びヒト胎盤由来のニストロジエン合成
酵素（アロマテース）活性阻害作用などの生物学的活性
を有する新規な６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンを提供することを課題と
する。

以下本発明の詳細な説明する。

尤里皇皇底 本発明の特徴は、下記式（Ｉ）を有する新規物質、６β
、１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１
７−ジオンにある。

す■ 本物質は下記の理化学的性質を有することにより特定さ
れる。

■　外観　　　　　　　　白色粉末 ■　分子量　　　　　　　　３１８ ■　分子式　　　　　　　ＣｒｑＨｔｂＯ＜■　融点　
　　　　　　　２５６〜２５７℃■　比旋光度　　　　
　　〔α〕ｒ＝＋ｔｏ４゜（Ｃ＝０．１　、メタノール
） ■　紫外部吸収スペクトル　極大吸収２３６ｒｖ（中性
、メタノール中）、 第１図参照 ■　Ｅｌマススペクトル＊／ｚ＝３１８　、第２図参照
■　赤外吸収スペクトル　（ＫＢｒ法）第３図参照３４
６０、．２９６０．１７４８． １６８２．１６５０ｃｍ−’。

■　プロトン核磁気共鳴スペクトル　第４図参照＠１３
Ｃ−核磁気共鳴スベクトル　　　第５図参照□　　Ｒｆ
値　　　　　　　　０．１３（展開溶媒；クロロホルム
：メタノール＝９：１）■溶解性　　　　　　エタノー
ル、メタノール、酢酸エチル、クロロホルム に可溶、水、ヘキサンに不溶。

課　を”するための 本発明に係る、６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アン
ドロステン−３，１７−ジオンは下記方法により製造す
ることができる。

６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３
，１７−ジオンの製造： アクレモニウム・ストリクタム（Ａｃｒｅ＋＋＋ｏｎｉ
ｕｍ　ｓｔｒｉｃｔｕｍ）ハンガリー国立衛生研究所保
存株ＮＮ　１０６株（微工研菌寄第９１４３号）を、麦
芽エキス等の炭素源並びにペプトン、大豆粉などの窒素
源及び無機塩類を含有する培地中で培養し、次いで培養
終了後、４−アンドロステン−３，１７−ジオンを基質
とし、これをジメチルホルムアミドに特定濃度に溶解し
た液を、上記培養液に添加して反応を行う。反応終了後
、培養液から固形分及び菌体成分を除去し、得られた上
澄に酢酸エチルで抽出を行う、得られた抽出液から溶媒
成分を除去して粗精製画分を得る。この両分を少量のク
ロロホルム又はメタノールで溶解し、シリカゲルカラム
及び溶出溶媒（クロロホルム：メタノール−９８：２）
を用い、高速液体クロマトグラフィーにより６β、１４
α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジ
オンを溶出して分散する。

１訓Ｌ１旧１１ 本発明に係る６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，１７−ジオンは、公知物質である４−ア
ンドロステン−３，１７−ジオンを基質とし、特定な微
生物を利戸して容易に製造することができ、また、本物
質そのものは、ヒト乳ガン細胞Ｍ　ＣＦ　−７（ｉｎν
ｉ　ｔｒｏ培養）に対する増殖抑制作用及びヒト胎盤由
来のニストロジエン合成酵素（アロマテース）の活性を
阻害する作用を有するので、制癌剤等の医療分野での利
用が期待される。

次に本物質のアンドロジエン活性並びにヒト乳ガン細胞
ＭＣＦ−７に対する増殖抑制作用を試験した結果を示す
。

ヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７）に対する６β、１４α−ジ
ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの
生育抑制作用 試験方法： 直径２ｃｗのシャーレに１麹β当り、牛脂児血清５％を
含むイーグル最少必須培地を添加し、予め同培地で培養
したヒト乳癌細胞（Ｍ　ＣＦ−７）をｌＸｌ０’ケ接種
した。これを３７℃、５％ＣＯ□雰囲気下に２日間培養
を行った後、本物質を含む培地と交換し、以ｌ！ｓ２日
毎に同様に本物質を含む培地と交換した。

この間経時的にトリプシン処理を行い、顕微鏡下で細胞
数を計数し、その生育を測定した。

結果は第６図に示すとおりである。

また、市販の制癌剤タモキシフェン（商品名、ノルバテ
ックス）との併用効果を同様に試験し、その効果を認め
た。結果は第７図に示す。

ヒト胎盤由来ニストロジエン合成酵素（アロマテース）
活性阻害作用 測定方法： Ｅ、Ａ、Ｔｈｏｍｐｓｏｎの方法〔ジャーナルオプバイ
オロジカルケミストリイ（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、＋
）　２９４ｐ　５３６４〜５３７２．１９７４）に準じ
、ヒト胎盤よりアロマテースを抽出、精製し、〔１β、
２β−３１１）アンドロステンジオンを基質とした酵素
阻害活性測定における本物質の阻害作用を測定した。

結果は下記に示すとおりである。

柔カロ」コｗ４旦　　ヱヱ？　９−≦幻１咀　　里１！
（Ｅｌｐｍｏｌｅｓ／ｓ＋ｉｎ、／ｍｇ）　　　　Ｃ％
）本物質（２０μＭ）　　　　　　１２．４６　　　　
　３６．８無添加　　　　　　　　　１９．７０　　　
　　　０以下に実施例を示して本物質の製造法を具体的
に説明する。

実施例 アクレモニウム・ストリクタムＮＮ　１０６（寄託番号
ＦＥＲＭ　Ｐ−９１４３）を表１に示した組成の培地Ｌ
ｏｏｍ　Ｉｔに接種し、５００１１１容三角フラスコ中
で２４℃の温度に４８時間、振盪しながら（ロータリ一
式振盪培養機使用）培養を行った。

表　１　（培地組成） 培養終了後、基質としての４−アンドロステン−３゜１
７−ジオンを予め基質濃度が５０ｍｇ／ｍ　ｊ！となる
ようにジメチルホルムアミドで溶解した液２ｍｌを上記
培養フラスコ中の培養液に添加し、さらに２４〜４８時
間、上記と同様の条件で反応を行った。

反応終了後、濾過（又は遠心分離）により培養液中から
固形分及び菌体成分を除去し、得られた上澄からその１
７３量の酢酸エチルで３回抽出を行い、抽出成分からロ
ータリーエバポレーターにより溶媒成分を除去した。

得られた粗精製画分をクロロホルム（又はメタノール）
で溶解し、シリカゲルカラム（直径２０Ｉｌ＋ｌｌＸ　
３０ｍｍ）及び溶出溶媒（クロロホルム：メタノール＝
　９８７２）を用い、高速液体クロマトグラフィーで、
６β、１４α−ジヒドロキシ−４−アンドロステン−３
，１７−ジオンを溶出、分取した。

収量は１４ｍｇ　。

【図面の簡単な説明】

第１図は本物質の紫外部吸収スペクトルを、第２図はＥ
ｌマススペクトルを、第３図は赤外吸収スペクトルを、
第４図はプロトン核磁気共鳴スペクトルを、第５図は１
３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ示す。 第６図は本物質のヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７）に対する
生育抑制作用を、第７図は同じく本物質とタモキシフェ
ンを併用した場合についての作用をそれぞれ示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記式（ I ）を有する６β，１４α−ジヒドロキシ−
   ４−アンドロステン−３，１７−ジオン。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）