JPH051091A - マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 - Google Patents
マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法Info
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- JPH051091A JPH051091A JP3180473A JP18047391A JPH051091A JP H051091 A JPH051091 A JP H051091A JP 3180473 A JP3180473 A JP 3180473A JP 18047391 A JP18047391 A JP 18047391A JP H051091 A JPH051091 A JP H051091A
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- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
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- C07H17/06—Benzopyran radicals
- C07H17/065—Benzo[b]pyrans
- C07H17/075—Benzo[b]pyran-2-ones
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 一般式
【化１】
（ｎは３〜５、Ｒは芳香族発色性基、Ｘは＞ＣＨＣＨ２
Ｎ３又は＞Ｃ＝ＣＨ２、Ｙは水素原子、炭化水素基又は
アルキル若しくはアリールスルホニル基）で表わされる
マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐ア
ミラーゼ活性測定用試薬及びα‐アミラーゼ含有試料に
該オリゴシド誘導体と共役酵素とを加えて酵素反応を行
わせ、遊離する発色性化合物を定量してα‐アミラーゼ
活性を測定する方法である。 【効果】 前記一般式で表わされるマルトオリゴシド誘
導体は新規な化合物であって、α‐アミラーゼ活性測定
用試薬として極めて有用で、これを用いることにより、
試料中に含まれる他の成分の影響を受けることなく、α
‐アミラーゼ活性を精度よく、短時間で容易に測定する
ことができる。
Ｎ３又は＞Ｃ＝ＣＨ２、Ｙは水素原子、炭化水素基又は
アルキル若しくはアリールスルホニル基）で表わされる
マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐ア
ミラーゼ活性測定用試薬及びα‐アミラーゼ含有試料に
該オリゴシド誘導体と共役酵素とを加えて酵素反応を行
わせ、遊離する発色性化合物を定量してα‐アミラーゼ
活性を測定する方法である。 【効果】 前記一般式で表わされるマルトオリゴシド誘
導体は新規な化合物であって、α‐アミラーゼ活性測定
用試薬として極めて有用で、これを用いることにより、
試料中に含まれる他の成分の影響を受けることなく、α
‐アミラーゼ活性を精度よく、短時間で容易に測定する
ことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なマルトオリゴシ
ド誘導体、該誘導体を有効成分とするα‐アミラーゼ活
性測定用試薬及び該誘導体を用いてα‐アミラーゼ活性
を効率よく、かつ正確に測定する方法に関するものであ
る。
ド誘導体、該誘導体を有効成分とするα‐アミラーゼ活
性測定用試薬及び該誘導体を用いてα‐アミラーゼ活性
を効率よく、かつ正確に測定する方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、血清、尿、膵液、唾液などの体液
を対象とするα‐アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上
極めて重要であり、特に急性や慢性の肝炎、膵臓炎、膵
臓ガン、流行性耳下腺炎などの鑑別診断においては必須
の測定項目となっている。
を対象とするα‐アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上
極めて重要であり、特に急性や慢性の肝炎、膵臓炎、膵
臓ガン、流行性耳下腺炎などの鑑別診断においては必須
の測定項目となっている。
【０００３】α‐アミラーゼ活性の測定方法については
従来より種々の方法が知られているが、近年、各種置換
フェニルマルトオリゴシド類の非還元末端グルコースが
各種の置換基で修飾された物質［共役酵素系に耐性（安
定性）を有する特徴をもつ］を基質として利用し、α‐
アミラーゼにより切断を行い、次いで共役酵素系を作用
させ、生成する置換フェノール類をそのまま、あるいは
必要に応じてｐＨを変化させたのち、あるいは縮合させ
たのちに比色定量する方法が、広く用いられるようにな
ってきた。
従来より種々の方法が知られているが、近年、各種置換
フェニルマルトオリゴシド類の非還元末端グルコースが
各種の置換基で修飾された物質［共役酵素系に耐性（安
定性）を有する特徴をもつ］を基質として利用し、α‐
アミラーゼにより切断を行い、次いで共役酵素系を作用
させ、生成する置換フェノール類をそのまま、あるいは
必要に応じてｐＨを変化させたのち、あるいは縮合させ
たのちに比色定量する方法が、広く用いられるようにな
ってきた。
【０００４】ところで、このように利用される基質につ
いては、一般に加水分解部位が１か所であること、アイ
ソザイムにより加水分解部位及び加水分解率が変らない
こと、加水分解生成物がα‐アミラーゼの作用を受けな
いものであること、α‐アミラーゼに対する親和性が強
くすなわちＫｍ値が小さく、加水分解速度が速いこと、
水溶性に優れていることなどの特性が要求される。しか
しながら、これらの要求特性を完全に満たす非還元末端
を修飾した基質は、これまで見出されていない。
いては、一般に加水分解部位が１か所であること、アイ
ソザイムにより加水分解部位及び加水分解率が変らない
こと、加水分解生成物がα‐アミラーゼの作用を受けな
いものであること、α‐アミラーゼに対する親和性が強
くすなわちＫｍ値が小さく、加水分解速度が速いこと、
水溶性に優れていることなどの特性が要求される。しか
しながら、これらの要求特性を完全に満たす非還元末端
を修飾した基質は、これまで見出されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来のα‐アミラーゼ活性の測定試薬及びそれを用いる
測定方法が有する欠点を克服し、α‐アミラーゼ活性を
効率よく、かつ正確に測定しうる試薬として好適な新規
化合物を提供するとともに、これを試薬とした新規なα
‐アミラーゼ活性の測定方法を提供することを目的とし
てなされたものである。
従来のα‐アミラーゼ活性の測定試薬及びそれを用いる
測定方法が有する欠点を克服し、α‐アミラーゼ活性を
効率よく、かつ正確に測定しうる試薬として好適な新規
化合物を提供するとともに、これを試薬とした新規なα
‐アミラーゼ活性の測定方法を提供することを目的とし
てなされたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記目的を
達成するために種々研究を重ねた結果、α‐アミラーゼ
活性測定用試薬として、特定の新規マルトオリゴシド誘
導体が極めて好適であり、これを用いてα‐アミラーゼ
活性を測定することにより、その目的を達成しうること
を見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。
達成するために種々研究を重ねた結果、α‐アミラーゼ
活性測定用試薬として、特定の新規マルトオリゴシド誘
導体が極めて好適であり、これを用いてα‐アミラーゼ
活性を測定することにより、その目的を達成しうること
を見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。
【０００７】すなわち、本発明は、一般式
【化２】
（式中のｎは３〜５の整数、Ｒは芳香族発色性基、Ｘは
＞ＣＨＣＨ２Ｎ３、又は＞Ｃ＝ＣＨ２、Ｙは水素原子、
置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキル若しくは
アリールスルホニル基である）で表わされるマルトオリ
ゴシド誘導体、一般式（Ｉ）の化合物を有効成分とする
α‐アミラーゼ活性測定用試薬、α‐アミラーゼ含有試
料に、一般式（Ｉ）の化合物のα‐アノマーとα‐グル
コシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両方を添
加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族発色性化合物
を定量することを特徴とするα‐アミラーゼ活性の測定
方法、及びα‐アミラーゼ含有試料に、一般式（Ｉ）の
化合物のβ‐アノマー又はとα‐アノマーとβ‐アノマ
ーとの混合物と、α‐グルコシダーゼ又はグルコアミラ
ーゼあるいはその両方と、β‐グルコシターゼを添加し
て酵素反応を行わせ、遊離する芳香族発色性化合物を定
量することを特徴とするα‐アミラーゼ活性の測定方法
を提供するものである。
＞ＣＨＣＨ２Ｎ３、又は＞Ｃ＝ＣＨ２、Ｙは水素原子、
置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキル若しくは
アリールスルホニル基である）で表わされるマルトオリ
ゴシド誘導体、一般式（Ｉ）の化合物を有効成分とする
α‐アミラーゼ活性測定用試薬、α‐アミラーゼ含有試
料に、一般式（Ｉ）の化合物のα‐アノマーとα‐グル
コシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両方を添
加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族発色性化合物
を定量することを特徴とするα‐アミラーゼ活性の測定
方法、及びα‐アミラーゼ含有試料に、一般式（Ｉ）の
化合物のβ‐アノマー又はとα‐アノマーとβ‐アノマ
ーとの混合物と、α‐グルコシダーゼ又はグルコアミラ
ーゼあるいはその両方と、β‐グルコシターゼを添加し
て酵素反応を行わせ、遊離する芳香族発色性化合物を定
量することを特徴とするα‐アミラーゼ活性の測定方法
を提供するものである。
【０００８】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体におけるマルトオリゴ糖部として
は、α‐及びβ‐Ｄ‐マルトペンタオースからα‐及び
β‐Ｄ‐マルトヘプタオースに対応するものがすべて使
用できる。
ルトオリゴシド誘導体におけるマルトオリゴ糖部として
は、α‐及びβ‐Ｄ‐マルトペンタオースからα‐及び
β‐Ｄ‐マルトヘプタオースに対応するものがすべて使
用できる。
【０００９】また、前記一般式（Ｉ）におけるＸは＞Ｃ
ＨＣＨ２Ｎ３、又は＞Ｃ＝ＣＨ２であり、該＞ＣＨＣＨ
２Ｎ３におけるＣＨのＨは紙面に対し下向きに結合した
構造をもつ。
ＨＣＨ２Ｎ３、又は＞Ｃ＝ＣＨ２であり、該＞ＣＨＣＨ
２Ｎ３におけるＣＨのＨは紙面に対し下向きに結合した
構造をもつ。
【００１０】一方、Ｙは水素原子、置換若しくは非置換
の炭化水素基又はアルキル若しくはアリールスルホニル
基であり、置換若しくは非置換の炭化水素基としては、
例えばメチル、エチル、イソプロピル、ブチル、シクロ
ヘキシルなどの直鎖状、分枝状若しくは環状のアルキル
基、ベンジルなどのアラルキル基、フェニル、トルイ
ル、ナフチルなどのアリール基が挙げられ、これらのア
ルキル基、アラルキル基及びアリール基は例えばアシ
ル、アルキルオキシ、カルボキシル、ニトロ、ハロゲ
ノ、アルキルシリル、スルホニルなどの官能基で置換さ
れていてもよく、アルキル基はビニル、アリルのような
不飽和のものでもよい。
の炭化水素基又はアルキル若しくはアリールスルホニル
基であり、置換若しくは非置換の炭化水素基としては、
例えばメチル、エチル、イソプロピル、ブチル、シクロ
ヘキシルなどの直鎖状、分枝状若しくは環状のアルキル
基、ベンジルなどのアラルキル基、フェニル、トルイ
ル、ナフチルなどのアリール基が挙げられ、これらのア
ルキル基、アラルキル基及びアリール基は例えばアシ
ル、アルキルオキシ、カルボキシル、ニトロ、ハロゲ
ノ、アルキルシリル、スルホニルなどの官能基で置換さ
れていてもよく、アルキル基はビニル、アリルのような
不飽和のものでもよい。
【００１１】また、該アルキル若しくはアリールスルホ
ニル基としては、例えばメシル基、トシル基、キノリン
スルホニル基などが挙げられる。
ニル基としては、例えばメシル基、トシル基、キノリン
スルホニル基などが挙げられる。
【００１２】さらに、前記一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体において、還元末端グルコースの
１位の水酸基に置換されるＲの芳香族発色性基として
は、分光学的に検出できればどのようなものを用いても
よいが、例えば、一般式
ルトオリゴシド誘導体において、還元末端グルコースの
１位の水酸基に置換されるＲの芳香族発色性基として
は、分光学的に検出できればどのようなものを用いても
よいが、例えば、一般式
【化３】
【００１３】（式中のＲ１ないしＲ５は水素原子、ハロ
ゲン原子、ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラル
キル基、アミノ基、スルホン酸基又はカルボキシル基で
あり、それぞれ同一であってもよいし、異なっていても
よく、またＲ１とＲ２、Ｒ２とＲ３とがそれぞれたがい
に結合して、縮合芳香環を形成してもよい）
ゲン原子、ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラル
キル基、アミノ基、スルホン酸基又はカルボキシル基で
あり、それぞれ同一であってもよいし、異なっていても
よく、またＲ１とＲ２、Ｒ２とＲ３とがそれぞれたがい
に結合して、縮合芳香環を形成してもよい）
【化４】
【００１４】（式中のＲ６は水素原子又はアルキル基で
ある）
ある）
【化５】
【００１５】（式中のＲ７は水素原子又はハロゲン原子
である）
である）
【化６】
【００１６】（式中のＲ５ないしＲ１５は水素原子、ハ
ロゲン原子、ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラ
ルキル基、アミノ基、スルホン酸基又はカルボキシル基
であり、それぞれ同一であってもよいし、異なっていて
もよく、またＲ８とＲ９、Ｒ１０とＲ１１とがそれぞれ
たがいに結合して、縮合芳香環を形成してもよく、さら
にＲ９とＲ１０及び／又はＲ１３とＲ１４が共通の酸素
原子となって縮合エーテル環を形成してもよく、Ｚは窒
素原子又はＮ→Ｏである）で表わされる基などが挙げら
れる。
ロゲン原子、ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラ
ルキル基、アミノ基、スルホン酸基又はカルボキシル基
であり、それぞれ同一であってもよいし、異なっていて
もよく、またＲ８とＲ９、Ｒ１０とＲ１１とがそれぞれ
たがいに結合して、縮合芳香環を形成してもよく、さら
にＲ９とＲ１０及び／又はＲ１３とＲ１４が共通の酸素
原子となって縮合エーテル環を形成してもよく、Ｚは窒
素原子又はＮ→Ｏである）で表わされる基などが挙げら
れる。
【００１７】そして、前記一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体はα‐アノマー（α‐配糖体）又
はβ‐アノマー（β‐配糖体）のいずれであってもよ
い。
ルトオリゴシド誘導体はα‐アノマー（α‐配糖体）又
はβ‐アノマー（β‐配糖体）のいずれであってもよ
い。
【００１８】このような前記一般式（Ｉ）で表わされる
化合物としては、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐
アジド‐６５‐デオキシ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、４‐ニトロフェニル＝５７‐エノ‐４７‐Ｏ
‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐
ニトロフェニル＝６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐マルトヘプタオシド、２，４‐ジクロロフェニル＝
６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４７‐Ｏ‐トシル‐β
‐Ｄ‐マルトへプタオシド、フェノールインド‐３′‐
クロロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐４５
‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐メチ
ルウンベリフェロニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、レザズリニル＝５４‐
エノ‐α‐Ｄ‐マルトヘキサオシド、ルシフェリニル＝
６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４７‐Ｏ‐アリル‐β
‐Ｄ‐マルトへプタオシド、フェノールインド‐３′‐
クロロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐（２‐メトキ
シ）エトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなど
が挙げられる。
化合物としては、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐
アジド‐６５‐デオキシ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、４‐ニトロフェニル＝５７‐エノ‐４７‐Ｏ
‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐
ニトロフェニル＝６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐マルトヘプタオシド、２，４‐ジクロロフェニル＝
６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４７‐Ｏ‐トシル‐β
‐Ｄ‐マルトへプタオシド、フェノールインド‐３′‐
クロロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐４５
‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐メチ
ルウンベリフェロニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、レザズリニル＝５４‐
エノ‐α‐Ｄ‐マルトヘキサオシド、ルシフェリニル＝
６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４７‐Ｏ‐アリル‐β
‐Ｄ‐マルトへプタオシド、フェノールインド‐３′‐
クロロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐（２‐メトキ
シ）エトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなど
が挙げられる。
【００１９】なお、上記において、記号６５‐、６
７‐、４５‐、４７‐などは、マルトオリゴ糖を構成す
るグルコース単位の還元末端側から、５番目、７番目の
グルコース（すなわち、非還元末端のグルコース）の６
位、４位の水酸基が置換されていることを示す。
７‐、４５‐、４７‐などは、マルトオリゴ糖を構成す
るグルコース単位の還元末端側から、５番目、７番目の
グルコース（すなわち、非還元末端のグルコース）の６
位、４位の水酸基が置換されていることを示す。
【００２０】これまで、マルトトリオースの非還元末端
の化学的修飾に関する研究において、その中間体として
１，６‐アンヒドロ‐６″‐アジド‐デオキシ‐β‐マ
ルトースオクタアセテートが知られている［「カルボハ
イドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒ
ｅｓｅａｃｈ）」第５１巻、第７３〜８４ページ（１９
７６年）］。この化合物は、前記一般式（Ｉ）のｎが１
の場合に相当するが、分子内エーテル構造を有し、発色
団を有しないという点で異なっている。しかも、前記一
般式（Ｉ）のｎが１のものは、α‐アミラーゼの作用を
ほとんど受けないため、α‐アミラーゼ活性の測定用基
質としては適当でないため、本発明の目的には使用でき
ない。
の化学的修飾に関する研究において、その中間体として
１，６‐アンヒドロ‐６″‐アジド‐デオキシ‐β‐マ
ルトースオクタアセテートが知られている［「カルボハ
イドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒ
ｅｓｅａｃｈ）」第５１巻、第７３〜８４ページ（１９
７６年）］。この化合物は、前記一般式（Ｉ）のｎが１
の場合に相当するが、分子内エーテル構造を有し、発色
団を有しないという点で異なっている。しかも、前記一
般式（Ｉ）のｎが１のものは、α‐アミラーゼの作用を
ほとんど受けないため、α‐アミラーゼ活性の測定用基
質としては適当でないため、本発明の目的には使用でき
ない。
【００２１】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体は文献未載の新規な化合物であっ
て、その製造方法については特に制限はなく、任意の方
法を用いることができるが、例えば次の方法によって製
造することができる。
ルトオリゴシド誘導体は文献未載の新規な化合物であっ
て、その製造方法については特に制限はなく、任意の方
法を用いることができるが、例えば次の方法によって製
造することができる。
【００２２】すなわち、出発原料として、市販品や公知
の製造方法で得ることのできる、一般式
の製造方法で得ることのできる、一般式
【００２３】
【化７】
（式中のＲ及びｎは前記と同じ意味をもつ）で表わされ
るＤ‐マルトオリゴシド、例えば２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロ
フェニル＝α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールイ
ンド‐３′‐クロロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドなどを用い、これに、一般式
るＤ‐マルトオリゴシド、例えば２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロ
フェニル＝α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールイ
ンド‐３′‐クロロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドなどを用い、これに、一般式
【００２４】
【化８】
（式中のＲ１６は水素原子、メトキシ基、エトキシ基、
アルキル基又はアリール基、Ｒ１７はメトキシ基又はエ
トキシ基である）で表わされるカルボニル化合物又はそ
のアセタール若しくはケタールを作用させて、一般式
アルキル基又はアリール基、Ｒ１７はメトキシ基又はエ
トキシ基である）で表わされるカルボニル化合物又はそ
のアセタール若しくはケタールを作用させて、一般式
【００２５】
【化９】
（式中のＲ１６、Ｒ１７、Ｒ及びｎは前記と同じ意味を
もつ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン
化マルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝
４７，６７‐Ｏ‐（１‐メトキシ）エチリデン‐α‐Ｄ
‐マルトヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐クロ
ロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチリ
デン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを製造する。
もつ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン
化マルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝
４７，６７‐Ｏ‐（１‐メトキシ）エチリデン‐α‐Ｄ
‐マルトヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐クロ
ロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチリ
デン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを製造する。
【００２６】前記一般式（ＩＩＩ）で表わされるカルボ
ニル化合物又はアセタール若しくはケタールとしては、
例えばテトラメトキシメタン、オルト酢酸トリエチル、
オルト酢酸トリメチルなどが挙げられる。
ニル化合物又はアセタール若しくはケタールとしては、
例えばテトラメトキシメタン、オルト酢酸トリエチル、
オルト酢酸トリメチルなどが挙げられる。
【００２７】前記一般式（ＩＶ）で表わされる４，６‐
Ｏ‐アルコキシメチリデン化マルトオリゴシド誘導体を
得るこの反応は、通常例えばＮ，Ｎ‐ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド（ＤＭ
Ａ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘキサメチ
ルホスホリックトリアミド（ＨＭＰＡ）などの非プロト
ン性極性溶媒中において、ｐ‐トルエンスルホン酸、塩
化水素、硫酸、無水塩化亜鉛、強酸性イオン交換樹脂な
どの触媒の存在下で行われる。
Ｏ‐アルコキシメチリデン化マルトオリゴシド誘導体を
得るこの反応は、通常例えばＮ，Ｎ‐ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド（ＤＭ
Ａ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘキサメチ
ルホスホリックトリアミド（ＨＭＰＡ）などの非プロト
ン性極性溶媒中において、ｐ‐トルエンスルホン酸、塩
化水素、硫酸、無水塩化亜鉛、強酸性イオン交換樹脂な
どの触媒の存在下で行われる。
【００２８】このようにして得られた前記一般式（Ｉ
Ｖ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン化
マルトオリゴシド誘導体をアシル化して、４，６‐Ｏ‐
アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘導
体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデ
カ‐Ｏ‐アセチル‐４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリ
デン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニ
ル＝エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４７，６７‐Ｏ‐（１
‐メトキシ）エチリデン‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシ
ド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラ
デカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５，６５‐Ｏ‐（１‐エトキ
シ）エチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどに導
く。この際、アシル化剤としては例えば酢酸、モノクロ
ロ酢酸、プロピオン酸、ｎ‐酪酸、安息香酸などやこれ
らの酸無水物、酸クロリド、エステルなどの反応性誘導
体が用いられる。アシル化反応の条件については特に制
限はなく、従来アシル化反応において慣用されている条
件を用いることができる。
Ｖ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン化
マルトオリゴシド誘導体をアシル化して、４，６‐Ｏ‐
アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘導
体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデ
カ‐Ｏ‐アセチル‐４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリ
デン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニ
ル＝エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４７，６７‐Ｏ‐（１
‐メトキシ）エチリデン‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシ
ド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラ
デカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５，６５‐Ｏ‐（１‐エトキ
シ）エチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどに導
く。この際、アシル化剤としては例えば酢酸、モノクロ
ロ酢酸、プロピオン酸、ｎ‐酪酸、安息香酸などやこれ
らの酸無水物、酸クロリド、エステルなどの反応性誘導
体が用いられる。アシル化反応の条件については特に制
限はなく、従来アシル化反応において慣用されている条
件を用いることができる。
【００２９】次いで、このようにして得た４，６‐Ｏ‐
アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘導体
に、脱アルコキシメチリデン化反応を行い、一般式
アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘導体
に、脱アルコキシメチリデン化反応を行い、一般式
【化１０】
【００３０】（式中のＲ１８はアシル基、Ｒ及びｎは前
記と同じ意味をもつ）で表わされる部分アシル化マルト
オリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル‐Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グル
コピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３‐
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド、４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシドなどを製造する。上記脱アルコ
キシメチリデン化反応の条件については特に制限はな
く、公知の方法、例えば酢酸又はギ酸を作用させる方法
［例えば「ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカ
ル・ソサエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）」、
第８４巻、第４３０ページ（１９６２）参照］を用いて
行うことができる。
記と同じ意味をもつ）で表わされる部分アシル化マルト
オリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル‐Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グル
コピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３‐
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド、４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシドなどを製造する。上記脱アルコ
キシメチリデン化反応の条件については特に制限はな
く、公知の方法、例えば酢酸又はギ酸を作用させる方法
［例えば「ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカ
ル・ソサエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）」、
第８４巻、第４３０ページ（１９６２）参照］を用いて
行うことができる。
【００３１】次に、このようにして得られた前記一般式
（Ｖ）で表わされる部分アシル化マルトオリゴシド誘導
体に、例えばトシルクロリド、ナフタレンスルホニルク
ロリドなどのバルキーなアルキル又はアリールスルホニ
ルハライドを反応させ、６位水酸基のみをアルキル又は
アリールスルホニル化したのち、さらに４位水酸基を修
飾し、一般式
（Ｖ）で表わされる部分アシル化マルトオリゴシド誘導
体に、例えばトシルクロリド、ナフタレンスルホニルク
ロリドなどのバルキーなアルキル又はアリールスルホニ
ルハライドを反応させ、６位水酸基のみをアルキル又は
アリールスルホニル化したのち、さらに４位水酸基を修
飾し、一般式
【００３２】
【化１１】
（式中のｎ，Ｒ，Ｒ１８は前記と同じ意味を有し、Ｗ１
はアルキル又はアリールスルホニル基、Ｗ２はアシル
基、置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキル若し
くはアリールスルホニル基である）で表わされるアシル
スルホニルマルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝ペンタデカ‐Ｏ‐アセチル‐６
５‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニ
トロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐
アセチル‐６５‐Ｏ‐ナフタレンスルホニル‐α‐Ｄ‐
マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４７‐Ｏ‐メシル‐６７
‐Ｏ‐トシル‐β‐マルトヘプタオシド、フェノールイ
ンド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐クロロ
アセチル‐６５‐Ｏ‐（２，４‐ジメチル）ベンゼンス
ルホニル‐４５‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドなどを製造する。
はアルキル又はアリールスルホニル基、Ｗ２はアシル
基、置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキル若し
くはアリールスルホニル基である）で表わされるアシル
スルホニルマルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝ペンタデカ‐Ｏ‐アセチル‐６
５‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニ
トロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐
アセチル‐６５‐Ｏ‐ナフタレンスルホニル‐α‐Ｄ‐
マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４７‐Ｏ‐メシル‐６７
‐Ｏ‐トシル‐β‐マルトヘプタオシド、フェノールイ
ンド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐クロロ
アセチル‐６５‐Ｏ‐（２，４‐ジメチル）ベンゼンス
ルホニル‐４５‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドなどを製造する。
【００３３】上記６位水酸基のアルキル又はアリールス
ルホニル化反応（Ｗ１の導入）の条件については特に制
限はないが、通常はピリジン中、あるいはジクロロメタ
ン、トルエンなどの無極性溶媒中において、トリエチル
アミン、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）などの塩
基の存在下に、通常加温しないでバルキーなアルキル又
はアリールスルホニルハライドを３〜３０倍モル作用さ
せることによって行われる。
ルホニル化反応（Ｗ１の導入）の条件については特に制
限はないが、通常はピリジン中、あるいはジクロロメタ
ン、トルエンなどの無極性溶媒中において、トリエチル
アミン、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）などの塩
基の存在下に、通常加温しないでバルキーなアルキル又
はアリールスルホニルハライドを３〜３０倍モル作用さ
せることによって行われる。
【００３４】さらに、４位水酸基に置換基Ｗ２を導入す
るためには、前記一般式（Ｉ）におけるＹが水素原子の
場合はアシル化反応を行い、それ以外の場合は必要に応
じて炭化水素基の導入、例えばアルキル若しくはアラル
キル化反応又はアルキル若しくはアリールスルホニル化
反応を行う。これらの反応はアシル化の場合は、例えば
前記に例を挙げた方法、アルキル化の場合は、例えばＤ
ＭＳＯ中において水酸化カリウムの存在下にハロゲン化
アルキルを作用させる方法［例えば「テトラヘドロン
（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）」第３５巻、第２１６９ペ
ージ（１９７９年）］、アラルキル化の場合は、例えば
ベンゼン中において、水素化ナトリウムの存在下にハロ
ゲン化アラルキルを作用させる方法［例えば「ジャーナ
ル・オブ・ケミカル・ソサエティ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．）、第８２ページ（１９６６）］、アルキル又はア
リールスルホニル化の場合は、例えばピリジン中におい
て、塩化スルホニルを作用させる方法［例えば「メソッ
ズ・オブ・カルボハイドレート・ケミストリー（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．）」、第６
３巻、第９９ページ（１９７８）］などに従って行えば
よい。Ｙがアルキル又はアリールスルホニル基の場合
は、例えば反応時間を長くしたり、反応温度を高くした
り、さらには例えばメタンスルホニルクロリドなどのバ
ルキーでないアルキル又はアリールスルホニル化剤を反
応試薬として用いて、４、６位を同時にスルホニル化し
てもよい。
るためには、前記一般式（Ｉ）におけるＹが水素原子の
場合はアシル化反応を行い、それ以外の場合は必要に応
じて炭化水素基の導入、例えばアルキル若しくはアラル
キル化反応又はアルキル若しくはアリールスルホニル化
反応を行う。これらの反応はアシル化の場合は、例えば
前記に例を挙げた方法、アルキル化の場合は、例えばＤ
ＭＳＯ中において水酸化カリウムの存在下にハロゲン化
アルキルを作用させる方法［例えば「テトラヘドロン
（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）」第３５巻、第２１６９ペ
ージ（１９７９年）］、アラルキル化の場合は、例えば
ベンゼン中において、水素化ナトリウムの存在下にハロ
ゲン化アラルキルを作用させる方法［例えば「ジャーナ
ル・オブ・ケミカル・ソサエティ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．）、第８２ページ（１９６６）］、アルキル又はア
リールスルホニル化の場合は、例えばピリジン中におい
て、塩化スルホニルを作用させる方法［例えば「メソッ
ズ・オブ・カルボハイドレート・ケミストリー（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．）」、第６
３巻、第９９ページ（１９７８）］などに従って行えば
よい。Ｙがアルキル又はアリールスルホニル基の場合
は、例えば反応時間を長くしたり、反応温度を高くした
り、さらには例えばメタンスルホニルクロリドなどのバ
ルキーでないアルキル又はアリールスルホニル化剤を反
応試薬として用いて、４、６位を同時にスルホニル化し
てもよい。
【００３５】次に６位水酸基に置換基Ｘを導入するため
には、Ｘが＞ＣＨＣＨ２Ｎ３の場合は、上記のようにし
て得られた一般式（ＶＩ）で表わされるアシルスルホニ
ルマルトオリゴシド誘導体にヨウ化ナトリウム又は臭化
ナトリウムを作用させ、６‐ヨード又は６‐ブロモ誘導
体としたのち、アジ化ナトリウムなどを作用させて一般
式
には、Ｘが＞ＣＨＣＨ２Ｎ３の場合は、上記のようにし
て得られた一般式（ＶＩ）で表わされるアシルスルホニ
ルマルトオリゴシド誘導体にヨウ化ナトリウム又は臭化
ナトリウムを作用させ、６‐ヨード又は６‐ブロモ誘導
体としたのち、アジ化ナトリウムなどを作用させて一般
式
【化１２】
【００３６】（式中のｎ，Ｒ，Ｒ１８，Ｗ２は前記と同
じ意味を有する）で表わされるアシルアジドマルトオリ
ゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝ペンタデカ‐Ｏ‐アセチル‐６５‐アジド‐６５‐デ
オキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェ
ニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐アセチル
‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐α‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝エイコサ
‐Ｏ‐ベンゾイル‐６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４
７‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノ
ールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐
クロロアセチル‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐４５
‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを製造
する。
じ意味を有する）で表わされるアシルアジドマルトオリ
ゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝ペンタデカ‐Ｏ‐アセチル‐６５‐アジド‐６５‐デ
オキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェ
ニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐アセチル
‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐α‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝エイコサ
‐Ｏ‐ベンゾイル‐６７‐アジド‐６７‐デオキシ‐４
７‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノ
ールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐
クロロアセチル‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐４５
‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを製造
する。
【００３７】上記の６位のヨウ化、臭化及びアジド化反
応の条件については特に制限はないが、通常はＤＭＳ
Ｏ、ＤＭＦ、ＨＭＰＡ、メチルエチルケトンなどの非プ
ロトン性極性溶媒中で通常加温して、ヨウ化ナトリウ
ム、臭化ナトリウム、アジ化ナトリウムなどを５〜５０
倍モル作用させることによって行われる。この際、段階
的にヨウ化又は臭化とアジド化反応を行って６‐ヨード
又は６‐ブロモ誘導体としてからアジド化反応を行う必
要はなく、同一反応系内で連続的に行ってもよい。ま
た、６‐ブロモ誘導体は前記４，６‐Ｏ‐アルコキシメ
チリデン化アシルマルトオリゴシド誘導体にＮＢＳを作
用させても製造することができる。この場合、Ｗ２はア
シル基となる。
応の条件については特に制限はないが、通常はＤＭＳ
Ｏ、ＤＭＦ、ＨＭＰＡ、メチルエチルケトンなどの非プ
ロトン性極性溶媒中で通常加温して、ヨウ化ナトリウ
ム、臭化ナトリウム、アジ化ナトリウムなどを５〜５０
倍モル作用させることによって行われる。この際、段階
的にヨウ化又は臭化とアジド化反応を行って６‐ヨード
又は６‐ブロモ誘導体としてからアジド化反応を行う必
要はなく、同一反応系内で連続的に行ってもよい。ま
た、６‐ブロモ誘導体は前記４，６‐Ｏ‐アルコキシメ
チリデン化アシルマルトオリゴシド誘導体にＮＢＳを作
用させても製造することができる。この場合、Ｗ２はア
シル基となる。
【００３８】また、Ｘが＞Ｃ＝ＣＨ２の場合は、上記の
ようにして得られた一般式（ＶＩ）で表わされるアシル
スルホニルマルトオリゴシド誘導体にヨウ化ナトリウム
又は臭化ナトリウムを作用させ、６‐ヨード又は６‐ブ
ロモ誘導体としたのち、フッ化銀などの脱ハロゲン化水
素剤を作用させて、一般式
ようにして得られた一般式（ＶＩ）で表わされるアシル
スルホニルマルトオリゴシド誘導体にヨウ化ナトリウム
又は臭化ナトリウムを作用させ、６‐ヨード又は６‐ブ
ロモ誘導体としたのち、フッ化銀などの脱ハロゲン化水
素剤を作用させて、一般式
【００３９】
【化１３】
（式中のｎ，Ｒ，Ｒ１８，Ｗ２は前記と同じ意味を有す
る）で表わされるアシル不飽和マルトオリゴシド誘導
体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデ
カ‐Ｏ‐アセチル‐５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β
‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝テト
ラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐アセチル‐５５‐エ
ノ‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝ヘンエイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐５７‐
エノ‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールインド
‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐クロロアセ
チル‐５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドなどを製造する。
る）で表わされるアシル不飽和マルトオリゴシド誘導
体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデ
カ‐Ｏ‐アセチル‐５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β
‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝テト
ラデカ‐Ｏ‐ブチリル‐４５‐Ｏ‐アセチル‐５５‐エ
ノ‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝ヘンエイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐５７‐
エノ‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールインド
‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐クロロアセ
チル‐５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドなどを製造する。
【００４０】上記の６位のヨウ化又は臭化反応の条件に
ついては特に制限はなく、例えば上記の方法を用いて行
うことができる。また上記の脱ハロゲン化水素反応の条
件についても特に制限はないが、ピリジン中でフッ化銀
を通常加温して２〜２０倍モル作用させるか、前記の非
プロトン性極性溶媒中でＤＢＵなどの塩基を加温する、
又は加温しないで、５〜５０倍モル作用させて行う。
ついては特に制限はなく、例えば上記の方法を用いて行
うことができる。また上記の脱ハロゲン化水素反応の条
件についても特に制限はないが、ピリジン中でフッ化銀
を通常加温して２〜２０倍モル作用させるか、前記の非
プロトン性極性溶媒中でＤＢＵなどの塩基を加温する、
又は加温しないで、５〜５０倍モル作用させて行う。
【００４１】最後に、前記一般式（ＶＩＩ）又は（ＶＩ
Ｉ′）で表わされるアシルマルトオリゴシド誘導体を脱
アシル化すれば、Ｗ２がアシル基のときはＹは水素原
子、Ｗ２が置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキ
ル若しくはアリールスルホニル基のときはＹはＷ２と同
じ基である前記一般式（Ｉ）で表わされる目的化合物の
マルトオリゴシド誘導体が得られる。この脱アシル化反
応の条件についても特に制限はないが、例えばアシルオ
キシマルトオリゴシド誘導体に、メタノールなどのアル
コール類中で炭酸カリウム、アンモニア水、シアン化カ
リウムなどの塩基を作用させる方法が用いられる［「プ
ロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シン
セシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」Ｔｈｅｏｄｏ
ｒａＷ．Ｇｒｅｅｎｅ著、第５０〜５５ページ、１９８
０年、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ＆ ＳＯＮＳ， Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ参照］。
Ｉ′）で表わされるアシルマルトオリゴシド誘導体を脱
アシル化すれば、Ｗ２がアシル基のときはＹは水素原
子、Ｗ２が置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキ
ル若しくはアリールスルホニル基のときはＹはＷ２と同
じ基である前記一般式（Ｉ）で表わされる目的化合物の
マルトオリゴシド誘導体が得られる。この脱アシル化反
応の条件についても特に制限はないが、例えばアシルオ
キシマルトオリゴシド誘導体に、メタノールなどのアル
コール類中で炭酸カリウム、アンモニア水、シアン化カ
リウムなどの塩基を作用させる方法が用いられる［「プ
ロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シン
セシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」Ｔｈｅｏｄｏ
ｒａＷ．Ｇｒｅｅｎｅ著、第５０〜５５ページ、１９８
０年、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ＆ ＳＯＮＳ， Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ参照］。
【００４２】また、前記一般式（Ｉ）で表されるマルト
オリゴシド誘導体を製造する別の方法としては、例えば
公知の方法で製造した６‐アジド‐６‐デオキシ‐シク
ロデキストリン［例えば「カルボハイドレーツ・リサー
チ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．）」第１８巻、第２９
〜３７ページ（１９７１）参照］に、公知のシクロデキ
ストリナーゼを作用させ（例えば特開平３−８６７０１
号公報参照）、続いてグルコアミラーゼなどのエキソ型
糖化酵素類を作用させて、非還元末端グルコースの６位
水酸基がアジド基に置換されたマルトオリゴ糖とし、こ
れに公知の方法で芳香族発色性基を導入して（例えば特
開昭６０−７８９９４号公報参照）製造する方法、又は
芳香族発色性基をアグリコンとして有する市販又は公知
のグルコシドに、前記した６‐アジド‐６‐デオキシ‐
シクロデキストリンを加え、公知の酵素、シクロデキス
トリングルコシルトランスフェラーゼを作用させ、続い
てグルコアミラーゼなどのエキソ型糖化酵素類を作用さ
せて製造する方法などが挙げられる。
オリゴシド誘導体を製造する別の方法としては、例えば
公知の方法で製造した６‐アジド‐６‐デオキシ‐シク
ロデキストリン［例えば「カルボハイドレーツ・リサー
チ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．）」第１８巻、第２９
〜３７ページ（１９７１）参照］に、公知のシクロデキ
ストリナーゼを作用させ（例えば特開平３−８６７０１
号公報参照）、続いてグルコアミラーゼなどのエキソ型
糖化酵素類を作用させて、非還元末端グルコースの６位
水酸基がアジド基に置換されたマルトオリゴ糖とし、こ
れに公知の方法で芳香族発色性基を導入して（例えば特
開昭６０−７８９９４号公報参照）製造する方法、又は
芳香族発色性基をアグリコンとして有する市販又は公知
のグルコシドに、前記した６‐アジド‐６‐デオキシ‐
シクロデキストリンを加え、公知の酵素、シクロデキス
トリングルコシルトランスフェラーゼを作用させ、続い
てグルコアミラーゼなどのエキソ型糖化酵素類を作用さ
せて製造する方法などが挙げられる。
【００４３】以上のようにして得られた一般式（Ｉ）で
表わされるマルトオリゴシド誘導体は、α‐アミラーゼ
活性の測定に極めて有用であり、このマルトオリゴシド
誘導体を用いてα‐アミラーゼ活性の測定をすることが
できる。前記したように、一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体にはα‐アノマーとβ‐アノマー
が存在するが、α‐アミラーゼ活性の測定に際して、α
‐アノマーのみを用いる場合には共役酵素系として、α
‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両
方を用いることが必要であり、β‐アノマーのみあるい
はα‐アノマーとβ‐アノマーの混合物を用いる場合に
はα‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはそ
の両方に加えてさらにβ‐グルコシダーゼを併用するこ
とが必要である。なお、必要に応じてβ‐アミラーゼを
用いることもできる。
表わされるマルトオリゴシド誘導体は、α‐アミラーゼ
活性の測定に極めて有用であり、このマルトオリゴシド
誘導体を用いてα‐アミラーゼ活性の測定をすることが
できる。前記したように、一般式（Ｉ）で表わされるマ
ルトオリゴシド誘導体にはα‐アノマーとβ‐アノマー
が存在するが、α‐アミラーゼ活性の測定に際して、α
‐アノマーのみを用いる場合には共役酵素系として、α
‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両
方を用いることが必要であり、β‐アノマーのみあるい
はα‐アノマーとβ‐アノマーの混合物を用いる場合に
はα‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはそ
の両方に加えてさらにβ‐グルコシダーゼを併用するこ
とが必要である。なお、必要に応じてβ‐アミラーゼを
用いることもできる。
【００４４】α‐アミラーゼ活性の測定をするための有
利な系としては、例えば一般式（Ｉ）で表わされるマル
トオリゴシド誘導体０．１〜１０ｍＭ及び緩衝液２〜３
００ｍＭを含有し、かつ共役酵素としてα‐グルコシダ
ーゼ及び／又はグルコアミラーゼをそれぞれ５〜１００
０単位／ｍｌ、さらに、β‐グルコシダーゼを用いると
きは０．５〜３０単位／ｍｌを含有するｐＨ４〜１０の
系が挙げられる。この系に用いられる緩衝剤としては、
例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、グッズ（Ｇｏｏｄ’
ｓ）の緩衝剤、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタ
ル酸塩などが挙げられる。
利な系としては、例えば一般式（Ｉ）で表わされるマル
トオリゴシド誘導体０．１〜１０ｍＭ及び緩衝液２〜３
００ｍＭを含有し、かつ共役酵素としてα‐グルコシダ
ーゼ及び／又はグルコアミラーゼをそれぞれ５〜１００
０単位／ｍｌ、さらに、β‐グルコシダーゼを用いると
きは０．５〜３０単位／ｍｌを含有するｐＨ４〜１０の
系が挙げられる。この系に用いられる緩衝剤としては、
例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、グッズ（Ｇｏｏｄ’
ｓ）の緩衝剤、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタ
ル酸塩などが挙げられる。
【００４５】α‐グルコシダーゼは動物、植物、微生物
などいかなる起源のものを用いてもよいが、例えば酵母
由来のものが好ましい。また、グルコアミラーゼもいか
なる起源のものを用いてもよいが、例えばリゾプス属
（Ｒｉｚｏｐｕｓ ｓｐ）などに由来するものが好まし
い。さらに、β‐グルコシダーゼもいかなる起源のもの
を用いてもよく、例えばアーモンドの種子から得たもの
が用いられる。
などいかなる起源のものを用いてもよいが、例えば酵母
由来のものが好ましい。また、グルコアミラーゼもいか
なる起源のものを用いてもよいが、例えばリゾプス属
（Ｒｉｚｏｐｕｓ ｓｐ）などに由来するものが好まし
い。さらに、β‐グルコシダーゼもいかなる起源のもの
を用いてもよく、例えばアーモンドの種子から得たもの
が用いられる。
【００４６】β‐アミラーゼもいかなる起源のものを用
いてもよいが、例えば細菌や植物由来のものを用いるこ
とができる。
いてもよいが、例えば細菌や植物由来のものを用いるこ
とができる。
【００４７】このような系に、前記成分以外に、本発明
の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用
の種々の添加成分、例えば溶解補助剤、安定化剤とし
て、グリセリン、牛血清アルブミン、α‐又はβ‐シク
ロデキストリン、トリトンＸ‐１００などを加えること
ができるし、α‐アミラーゼ活性化剤としてＮａＣｌ，
ＭｇＣｌ２，ＭｇＳＯ４，ＣａＣｌ２，ＣａＣｌ２・Ｈ
２Ｏなどの形で用いられるＣｌ−イオン、Ｃａ２＋イオ
ン、Ｍｇ２＋イオンなどを加えてもよい。これらの添加
成分は１種用いてもよいし、２種以上を組合せて用いて
もよく、また前記系調製の適当な段階で加えることがで
きる。
の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用
の種々の添加成分、例えば溶解補助剤、安定化剤とし
て、グリセリン、牛血清アルブミン、α‐又はβ‐シク
ロデキストリン、トリトンＸ‐１００などを加えること
ができるし、α‐アミラーゼ活性化剤としてＮａＣｌ，
ＭｇＣｌ２，ＭｇＳＯ４，ＣａＣｌ２，ＣａＣｌ２・Ｈ
２Ｏなどの形で用いられるＣｌ−イオン、Ｃａ２＋イオ
ン、Ｍｇ２＋イオンなどを加えてもよい。これらの添加
成分は１種用いてもよいし、２種以上を組合せて用いて
もよく、また前記系調製の適当な段階で加えることがで
きる。
【００４８】本発明の試薬は、乾燥物あるいは溶解した
形で用いてもよいし、薄膜状の担体、例えばシート、含
浸性の紙などに含浸させて用いてもよい。このような本
発明の試薬を用いることにより、各種の試料に含有され
るα‐アミラーゼ活性を簡単な操作で正確に、かつ高感
度で測定することができる。
形で用いてもよいし、薄膜状の担体、例えばシート、含
浸性の紙などに含浸させて用いてもよい。このような本
発明の試薬を用いることにより、各種の試料に含有され
るα‐アミラーゼ活性を簡単な操作で正確に、かつ高感
度で測定することができる。
【００４９】次に、本発明方法の好適な実施態様を説明
する。まず、α‐アミラーゼを含む試料に、共役酵素と
してのα‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるい
はその両方をそれぞれ５〜１０００単位／ｍｌ、好まし
くは１０〜５００単位／ｍｌ加え、前記一般式（Ｉ）で
表わされるマルトオリゴシド誘導体がβ‐アノマーを含
むときは、さらにβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単
位／ｍｌ、好ましくは１〜１５単位／ｍｌ加え、これと
同時又はこれらの後に、該マルトオリゴシド誘導体０．
１〜１０ｍＭ、好ましくは０．３〜５ｍＭを緩衝剤とと
もに添加したのち、温度２５〜４５℃、好ましくは３５
〜４０℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８の条件下で
少なくとも１分間、好ましくは２〜１０分間酵素反応さ
せ、生成した芳香族発色性化合物を、常法に従いそのま
まであるいは必要に応じｐＨを調整したのち、又は縮合
反応を行ったのちに、適当な吸光波長で連続的に又は断
続的に吸光度変化量を測定し、あらかじめ測定したα‐
アミラーゼ標品の吸光度変化量と対比させて試料中のα
‐アミラーゼ活性を算出する。また、芳香族発色性化合
物の分子吸光係数から算出することもできる。
する。まず、α‐アミラーゼを含む試料に、共役酵素と
してのα‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるい
はその両方をそれぞれ５〜１０００単位／ｍｌ、好まし
くは１０〜５００単位／ｍｌ加え、前記一般式（Ｉ）で
表わされるマルトオリゴシド誘導体がβ‐アノマーを含
むときは、さらにβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単
位／ｍｌ、好ましくは１〜１５単位／ｍｌ加え、これと
同時又はこれらの後に、該マルトオリゴシド誘導体０．
１〜１０ｍＭ、好ましくは０．３〜５ｍＭを緩衝剤とと
もに添加したのち、温度２５〜４５℃、好ましくは３５
〜４０℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８の条件下で
少なくとも１分間、好ましくは２〜１０分間酵素反応さ
せ、生成した芳香族発色性化合物を、常法に従いそのま
まであるいは必要に応じｐＨを調整したのち、又は縮合
反応を行ったのちに、適当な吸光波長で連続的に又は断
続的に吸光度変化量を測定し、あらかじめ測定したα‐
アミラーゼ標品の吸光度変化量と対比させて試料中のα
‐アミラーゼ活性を算出する。また、芳香族発色性化合
物の分子吸光係数から算出することもできる。
【００５０】本発明で用いられるα‐アミラーゼ含有試
料については、α‐アミラーゼ活性を含有するものであ
ればよく、特に制限はないが、具体的には微生物の培養
液、植物の抽出液、あるいは動物の体液や組織及びそれ
らの抽出液などを用いることができる。α‐アミラーゼ
含有試料が固体の場合には、いったん精製水又は前記し
たような緩衝液に溶解又は懸濁させるのがよい。また、
必要により、不溶物をろ過などの操作で除去してもよ
い。
料については、α‐アミラーゼ活性を含有するものであ
ればよく、特に制限はないが、具体的には微生物の培養
液、植物の抽出液、あるいは動物の体液や組織及びそれ
らの抽出液などを用いることができる。α‐アミラーゼ
含有試料が固体の場合には、いったん精製水又は前記し
たような緩衝液に溶解又は懸濁させるのがよい。また、
必要により、不溶物をろ過などの操作で除去してもよ
い。
【００５１】
【発明の効果】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされる
マルトオリゴシド誘導体は基質としての要求特性をすべ
て備えた新規な化合物であって、α‐アミラーゼ活性測
定用試薬として極めて有用であり、このものを用いるこ
とにより、試料中に含まれるグルコース、マルトース、
ビリルビン、ヘモグロビンなどの影響を受けることな
く、α‐アミラーゼ活性を自動分析法、用手法などによ
り、精度よく短時間で容易に測定することができる。
マルトオリゴシド誘導体は基質としての要求特性をすべ
て備えた新規な化合物であって、α‐アミラーゼ活性測
定用試薬として極めて有用であり、このものを用いるこ
とにより、試料中に含まれるグルコース、マルトース、
ビリルビン、ヘモグロビンなどの影響を受けることな
く、α‐アミラーゼ活性を自動分析法、用手法などによ
り、精度よく短時間で容易に測定することができる。
【００５２】また本発明の化合物は、長期間安定である
ので、基質としての有用性を一層高めるという利点も有
している。
ので、基質としての有用性を一層高めるという利点も有
している。
【００５３】
【実施例】次に実施例により、本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定され
るものではない。なお、各例中の吸収極大波長は特に示
されていない限り、メタノール中で測定した値であり、
比旋光度は２５℃においてＤ線で測定した値である。
明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定され
るものではない。なお、各例中の吸収極大波長は特に示
されていない限り、メタノール中で測定した値であり、
比旋光度は２５℃においてＤ線で測定した値である。
【００５４】実施例１
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐
Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４５，６５
‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド１５．０ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン１５．
０ｍｌ（１１３ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト（１５
Ｅ）７．５ｇを加え、３５℃で４時間かきまぜながら反
応させた。次いでこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜながら
ゆっくりと滴下した。この混合液をＯＤＳ（オクタデシ
ルシリカゲル）カラムクロマトグラフィーにより精製
し、アセトニトリル‐水混液（容量比３：７）で溶出し
た目的区分を濃縮し、イソプロパノール‐メタノールか
ら再結晶すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドが１０．７ｇ（１０．１ｍｍｏｌ，収率６
６．５％）得られた。
Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４５，６５
‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド１５．０ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン１５．
０ｍｌ（１１３ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト（１５
Ｅ）７．５ｇを加え、３５℃で４時間かきまぜながら反
応させた。次いでこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜながら
ゆっくりと滴下した。この混合液をＯＤＳ（オクタデシ
ルシリカゲル）カラムクロマトグラフィーにより精製
し、アセトニトリル‐水混液（容量比３：７）で溶出し
た目的区分を濃縮し、イソプロパノール‐メタノールか
ら再結晶すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドが１０．７ｇ（１０．１ｍｍｏｌ，収率６
６．５％）得られた。
【００５５】融点（℃）：９３．０〜９５．０（分解）
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９５（ｌｏｇε＝３．９５），２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．１７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４２０，２９４
０，１６４８，１５８８，１５２４，１４９０，１３５
２，１２７６，１２４６，１１５４，１０８２，１０５
０，１０２６，９３０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２３（３
Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．３０〜４．７０（ｍ），
５．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），５．２５〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝１：４ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０，５０ｍＭリン酸ｂｕ
ｆｆｅｒ）；＋８６．７° 元素分析：Ｃ３９Ｈ５８ＣｌＮＯ３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３５ ５．５３ １．３３ 実測値（％） ４４．５５ ５．４３ １．３４
ｘ］（ｎｍ）＝２９５（ｌｏｇε＝３．９５），２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．１７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４２０，２９４
０，１６４８，１５８８，１５２４，１４９０，１３５
２，１２７６，１２４６，１１５４，１０８２，１０５
０，１０２６，９３０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２３（３
Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．３０〜４．７０（ｍ），
５．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），５．２５〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝１：４ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０，５０ｍＭリン酸ｂｕ
ｆｆｅｒ）；＋８６．７° 元素分析：Ｃ３９Ｈ５８ＣｌＮＯ３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３５ ５．５３ １．３３ 実測値（％） ４４．５５ ５．４３ １．３４
【００５６】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシドの製造
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシドの製造
【００５７】実施例１の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデ
ン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド３．００ｇ（２．８４
ｍｍｏｌ）をピリジン６０ｍｌに溶解し、無水酢酸３０
ｍｌ（３８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２日間かきまぜ
ながら反応させた。次いで反応液を減圧下濃縮し、ここ
に含まれるピリジン、無水酢酸、酢酸を留去した。得ら
れたオイル状のアセチル体を精製しないで酢酸１００ｍ
ｌに溶解し、水２５ｍｌを加え、３０℃で３日間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液を氷水６００ｍ
ｌ中へ、かきまぜながらゆっくりと滴下したのち、この
混合液をジクロロメタン６００ｍｌで３回抽出した。次
いでジクロロメタン層を水６００ｍｌで３回洗浄し、ジ
クロロメタン層部を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ別し
たのち、ろ液を減圧下濃縮し、ジクロロメタンを留去し
た。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに
より精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン
混液（容量比６６：２．５：３３）で溶出した目的区分
を濃縮することにより、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド２．０８ｇ（１．３２ｍｍｏｌ，
２工程通算収率４６．５％）が得られた。
ニトロフェニル＝４５，６５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデ
ン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド３．００ｇ（２．８４
ｍｍｏｌ）をピリジン６０ｍｌに溶解し、無水酢酸３０
ｍｌ（３８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２日間かきまぜ
ながら反応させた。次いで反応液を減圧下濃縮し、ここ
に含まれるピリジン、無水酢酸、酢酸を留去した。得ら
れたオイル状のアセチル体を精製しないで酢酸１００ｍ
ｌに溶解し、水２５ｍｌを加え、３０℃で３日間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液を氷水６００ｍ
ｌ中へ、かきまぜながらゆっくりと滴下したのち、この
混合液をジクロロメタン６００ｍｌで３回抽出した。次
いでジクロロメタン層を水６００ｍｌで３回洗浄し、ジ
クロロメタン層部を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ別し
たのち、ろ液を減圧下濃縮し、ジクロロメタンを留去し
た。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに
より精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン
混液（容量比６６：２．５：３３）で溶出した目的区分
を濃縮することにより、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド２．０８ｇ（１．３２ｍｍｏｌ，
２工程通算収率４６．５％）が得られた。
【００５８】融点（℃）：１２６．０〜１３０．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）（ｎｍ）］＝２８２（ｌｏｇε＝
３．９４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４８０，２９７
０，１７５２，１５８８，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２３６，１０３０，９４
４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．８１〜２．１２（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．５０〜４．７４（ｍ），５．０５（ｍ），
７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．０９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝４．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．２５，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０°
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）（ｎｍ）］＝２８２（ｌｏｇε＝
３．９４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４８０，２９７
０，１７５２，１５８８，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２３６，１０３０，９４
４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．８１〜２．１２（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．５０〜４．７４（ｍ），５．０５（ｍ），
７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．０９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝４．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．２５，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０°
【００５９】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐
メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐
メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
【００６０】実施例１の（２）と同様にして得た２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．０
ｇ（７．００ｍｍｏｌ）をピリジン５００ｍｌに溶解
し、メシルクロリド４．９ｍｌ（６３．３ｍｍｏｌ）及
びモレキュラーシーブス２０．０ｇを加え、室温下で１
６時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液を
セライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留
去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタ
ン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目的区
分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メシ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．６ｇ
（６．６７ｍｍｏｌ，収率９５．３％）が得られた。
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．０
ｇ（７．００ｍｍｏｌ）をピリジン５００ｍｌに溶解
し、メシルクロリド４．９ｍｌ（６３．３ｍｍｏｌ）及
びモレキュラーシーブス２０．０ｇを加え、室温下で１
６時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液を
セライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留
去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタ
ン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目的区
分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メシ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．６ｇ
（６．６７ｍｍｏｌ，収率９５．３％）が得られた。
【００６１】融点（℃）：１１６．０〜１１９．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８），２２６
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：２９５０，１７５
２，１５８６，１５２８，１３６８，１３５０，１２３
８，１１７６，１０３２，８９６，８２６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０８（３Ｈ，ｓ）３．１０（３Ｈ，ｓ）、
３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝４．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８５．８° 元素分析：Ｃ６６Ｈ８６ＣｌＮＯ４６Ｓ２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．８５ ５．０１ ０．８１ 実測値（％） ４６．０５ ５．０９ ０．７８
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８），２２６
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：２９５０，１７５
２，１５８６，１５２８，１３６８，１３５０，１２３
８，１１７６，１０３２，８９６，８２６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０８（３Ｈ，ｓ）３．１０（３Ｈ，ｓ）、
３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ：Ｒｔ
＝４．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８５．８° 元素分析：Ｃ６６Ｈ８６ＣｌＮＯ４６Ｓ２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．８５ ５．０１ ０．８１ 実測値（％） ４６．０５ ５．０９ ０．７８
【００６２】（４） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造
【００６３】実施例１の（３）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４，６‐ジ‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１１．６ｇ（６．６７ｍｍｏｌ）をメチルエチ
ルケトン１０００ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム３
０．２ｇ（２０１ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間か
きまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライト
ベットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧下
留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目的
区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐
ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１０．３ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，収率８７．７
％）が得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４，６‐ジ‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１１．６ｇ（６．６７ｍｍｏｌ）をメチルエチ
ルケトン１０００ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム３
０．２ｇ（２０１ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間か
きまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライト
ベットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧下
留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目的
区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐
ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１０．３ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，収率８７．７
％）が得られた。
【００６４】融点（℃）：１２７．０〜１２９．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８）、２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３５５０，２９６
０，１７５０，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２３４，１１８０，１０４
０，９６０，８９８，８２８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０６（３Ｈ，ｓ），３．３０（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．４Ｈｚ），３．５０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．６８
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５．４Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），
８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝５．６ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋８０．７° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８３ＣｌＩＮＯ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３４ ４．７５ ０．８０ 実測値（％） ４４．３４ ４．８２ ０．８２
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８）、２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３５５０，２９６
０，１７５０，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２３４，１１８０，１０４
０，９６０，８９８，８２８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０６（３Ｈ，ｓ），３．３０（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．４Ｈｚ），３．５０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．６８
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５．４Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），
８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝５．６ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋８０．７° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８３ＣｌＩＮＯ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３４ ４．７５ ０．８０ 実測値（％） ４４．３４ ４．８２ ０．８２
【００６５】（５） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐メシル‐
α‐Ｄ‐キシロヘクス‐５‐エノピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐メシル‐
α‐Ｄ‐キシロヘクス‐５‐エノピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造
【００６６】実施例１の（４）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８４ｇ（１．６１ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１７０ｍｌに溶解し、フッ化銀２．０
５ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノピ
リジン２８．４ｍｇ（０．２３２ｍｍｏｌ）、モレキュ
ラーシーブス５．７ｇを加え、２５℃で１５時間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライトベッ
トでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去した。この
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比１００：１：４００）で溶出した目的区分を濃縮す
ると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３
‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐キシロ
ヘクス‐５‐エノピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．８９ｇ
（１．１６ｍｍｏｌ，収率７２．０％）が得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８４ｇ（１．６１ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１７０ｍｌに溶解し、フッ化銀２．０
５ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノピ
リジン２８．４ｍｇ（０．２３２ｍｍｏｌ）、モレキュ
ラーシーブス５．７ｇを加え、２５℃で１５時間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライトベッ
トでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去した。この
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比１００：１：４００）で溶出した目的区分を濃縮す
ると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３
‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐キシロ
ヘクス‐５‐エノピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．８９ｇ
（１．１６ｍｍｏｌ，収率７２．０％）が得られた。
【００６７】融点（℃）：１１３．０〜１１５．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９９）、２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９７
０，２１１０，１７４８，１５８６，１５３２，１４８
８，１４３４，１３７２，１３５０，１２３６，１１８
２，１０３０，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１８（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１０（３Ｈ，ｓ），３．８０〜４．９５
（ｍ），５．０５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋７５．３° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８２ＣｌＮＯ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．８１ ５．０６ ０．８６ 実測値（％） ４７．４２ ５．０８ ０．８６
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９９）、２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９７
０，２１１０，１７４８，１５８６，１５３２，１４８
８，１４３４，１３７２，１３５０，１２３６，１１８
２，１０３０，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１８（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１０（３Ｈ，ｓ），３．８０〜４．９５
（ｍ），５．０５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋７５．３° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８２ＣｌＮＯ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．８１ ５．０６ ０．８６ 実測値（％） ４７．４２ ５．０８ ０．８６
【００６８】（６） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造
＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造
【００６９】実施例１の（５）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４
‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐キシロヘクス‐５‐エノピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．５２ｇ（０．９３１ｍｍｏｌ）にメ
タノール１５０ｍｌ及び無水炭酸カリウム１９３ｍｇ
（１．４０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１５時間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液を減圧濃縮し、
ここに含まれるメタノールを留去した。次いでその残渣
をＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより精製し、アセ
トニトリル‐水混液（容量比２５：７５）で溶出した目
的区分を濃縮し、凍結乾燥することにより、２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド７４６ｍｇ（０．７１５
ｍｍｏｌ，収率７６．８％）が得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４
‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐キシロヘクス‐５‐エノピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．５２ｇ（０．９３１ｍｍｏｌ）にメ
タノール１５０ｍｌ及び無水炭酸カリウム１９３ｍｇ
（１．４０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１５時間かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液を減圧濃縮し、
ここに含まれるメタノールを留去した。次いでその残渣
をＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより精製し、アセ
トニトリル‐水混液（容量比２５：７５）で溶出した目
的区分を濃縮し、凍結乾燥することにより、２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド７４６ｍｇ（０．７１５
ｍｍｏｌ，収率７６．８％）が得られた。
【００７０】融点（℃）：１７５．０〜１８０．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．０１），２２８
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．４３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４００，２９３
０，１６４４，１５８４，１５２０，１４８６，１３５
０，１２７４，１２５０，１１５２，１０７８，１０２
０，９２８，８９０ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２９（３
Ｈ，ｓ），４．０５（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．３０〜
４．６０（ｍ），４．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈ
ｚ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），５．２５〜５．６５（ｍ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝５．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１２，Ｈ２Ｏ）：＋８
４．５° 元素分析：Ｃ３７Ｈ５４ＣｌＮＯ２９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．５５ ５．２１ １．３４ 実測値（％） ４２．２３ ５．２８ １．４０
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．０１），２２８
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．４３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４００，２９３
０，１６４４，１５８４，１５２０，１４８６，１３５
０，１２７４，１２５０，１１５２，１０７８，１０２
０，９２８，８９０ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２９（３
Ｈ，ｓ），４．０５（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．３０〜
４．６０（ｍ），４．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈ
ｚ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），５．２５〜５．６５（ｍ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝５．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１２，Ｈ２Ｏ）：＋８
４．５° 元素分析：Ｃ３７Ｈ５４ＣｌＮＯ２９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．５５ ５．２１ １．３４ 実測値（％） ４２．２３ ５．２８ １．４０
【００７１】実施例２
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５
‐デオキシ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシドの製造
‐デオキシ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシドの製造
【００７２】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐６‐
デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グル
コピラノシドの製造 実施例１の（４）と同様の操作で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．５０ｇ（０．８５２ｍ
ｍｏｌ）をＤＭＳＯ１３０ｍｌに溶解し、アジ化ナトリ
ウム８３１ｍｇ（１２．８ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で
３時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液に
トルエン７００ｍｌを加え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各３０
０ｍｌで３回洗浄した。次にトルエン層を無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、綿栓でろ過したのち、ろ液中のトルエ
ンを減圧下留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール
‐ジクロロメタン混液（容量比１００：１：４００）で
溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐ア
ジド‐６‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド１．２７ｇ（０．７５８ｍｍｏ
ｌ，収率８９．０％）が得られた。
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐６‐
デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グル
コピラノシドの製造 実施例１の（４）と同様の操作で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．５０ｇ（０．８５２ｍ
ｍｏｌ）をＤＭＳＯ１３０ｍｌに溶解し、アジ化ナトリ
ウム８３１ｍｇ（１２．８ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で
３時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液に
トルエン７００ｍｌを加え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各３０
０ｍｌで３回洗浄した。次にトルエン層を無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、綿栓でろ過したのち、ろ液中のトルエ
ンを減圧下留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール
‐ジクロロメタン混液（容量比１００：１：４００）で
溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐ア
ジド‐６‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド１．２７ｇ（０．７５８ｍｍｏ
ｌ，収率８９．０％）が得られた。
【００７３】融点（℃）：１１５．０〜１１７．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝
３．９７），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．
２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９６
０，２１１０，１７５４，１５３２，１３７２，１３５
０，１２３６，１１８８，１０３２，９５８，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），３．４３〜３．６０
（２Ｈ，ＡＢ様），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１
５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．
７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝７．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，１，４‐ジオキサ
ン）：＋９２．６° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８３ＣｌＮ４Ｏ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４６．５９ ４．９９ ３．３４ 実測値（％） ４６．４３ ５．０１ ３．３８
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝
３．９７），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．
２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９６
０，２１１０，１７５４，１５３２，１３７２，１３５
０，１２３６，１１８８，１０３２，９５８，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），３．４３〜３．６０
（２Ｈ，ＡＢ様），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１
５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．
７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝７．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，１，４‐ジオキサ
ン）：＋９２．６° 元素分析：Ｃ６５Ｈ８３ＣｌＮ４Ｏ４３Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４６．５９ ４．９９ ３．３４ 実測値（％） ４６．４３ ５．０１ ３．３８
【００７４】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造 実施例２の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐６
‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．２２ｇ（０．７２８ｍｍｏｌ）を原
料とした以外は、実施例１の（６）と同様の操作を行う
ことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシド６８７ｍｇ（０．６３２ｍｍｏｌ，収率８６．８
％）が得られた。
＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造 実施例２の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐６
‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．２２ｇ（０．７２８ｍｍｏｌ）を原
料とした以外は、実施例１の（６）と同様の操作を行う
ことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシド６８７ｍｇ（０．６３２ｍｍｏｌ，収率８６．８
％）が得られた。
【００７５】融点（℃）：１７０．０〜１７２．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝３．９６），２２７
（ｌｏｇε＝３．９８），２０９（ｌｏｇε＝４．１
８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４００，２９３
０，２１１０，１６３２，１５８４，１５２２，１４８
６，１３５０，１２７６，１２５０，１１７２，１１５
２，１０８０，１０２６，９５８，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２０〜３．８５（ｍ），３．８５〜
３．９５（１Ｈ，ｄｄｄ様）、４．２８（２Ｈ，ｂｒ
ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．４０〜４．６０（ｍ），
５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．９Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ），５．３０〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．６ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１６，Ｈ２Ｏ）：＋８
６．１° 元素分析：Ｃ３７Ｈ５５ＣｌＮ４Ｏ２９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４０．８７ ５．１０ ５．１５ 実測値（％） ４０．６２ ４．９２ ５．０５
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝３．９６），２２７
（ｌｏｇε＝３．９８），２０９（ｌｏｇε＝４．１
８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４００，２９３
０，２１１０，１６３２，１５８４，１５２２，１４８
６，１３５０，１２７６，１２５０，１１７２，１１５
２，１０８０，１０２６，９５８，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２０〜３．８５（ｍ），３．８５〜
３．９５（１Ｈ，ｄｄｄ様）、４．２８（２Ｈ，ｂｒ
ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．４０〜４．６０（ｍ），
５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．９Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ），５．３０〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．６ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１６，Ｈ２Ｏ）：＋８
６．１° 元素分析：Ｃ３７Ｈ５５ＣｌＮ４Ｏ２９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４０．８７ ５．１０ ５．１５ 実測値（％） ４０．６２ ４．９２ ５．０５
【００７６】
実施例３
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５
‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造
‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造
【００７７】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
【００７８】実施例１の（２）と同様の操作で得た２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．
６ｇ（７．３８ｍｍｏｌ）をピリジン３００ｍｌに溶解
し、トシルクロリド２１．１ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を加
え、室温下で５時間、かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応中のピリジンを減圧下留去し、この残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸
エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比５
０：１：１００）で溶出した目的区分を濃縮すると２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド６．４３ｇ（３．７２ｍｍｏｌ、収率５
０．５％）が得られた。
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．
６ｇ（７．３８ｍｍｏｌ）をピリジン３００ｍｌに溶解
し、トシルクロリド２１．１ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を加
え、室温下で５時間、かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応中のピリジンを減圧下留去し、この残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸
エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比５
０：１：１００）で溶出した目的区分を濃縮すると２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド６．４３ｇ（３．７２ｍｍｏｌ、収率５
０．５％）が得られた。
【００７９】融点（℃）：１０９．０〜１１３．５
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８１（ｌｏｇε＝
３．９５），２７２（ｓｈ） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９７
０，１７５２，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２４０，１１７８，１０３
４，９４２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１７（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．５０〜４．８０
（ｍ），５．１０〜５．５０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．
５Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），
８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝８．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６５０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０° 元素分析：Ｃ７１Ｈ８８ＣｌＮＯ４４Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．３８ ５．１４ ０．８１ 実測値（％） ４９．１４ ５．１０ ０．７９
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８１（ｌｏｇε＝
３．９５），２７２（ｓｈ） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９７
０，１７５２，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２４０，１１７８，１０３
４，９４２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１７（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．５０〜４．８０
（ｍ），５．１０〜５．５０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．
５Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），
８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝８．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６５０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０° 元素分析：Ｃ７１Ｈ８８ＣｌＮＯ４４Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．３８ ５．１４ ０．８１ 実測値（％） ４９．１４ ５．１０ ０．７９
【００８０】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐ト
シル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリ
ス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐
グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐ト
シル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリ
ス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐
グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造
【００８１】実施例３の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド４．２４ｇ（２．４６ｍｍｏｌ）をピリジン２０ｍｌ
に溶解し、無水酢酸１０ｍｌを加え、室温下で１５時
間、かきまぜながら反応させた。次いでこの反応中のピ
リジンを減圧下留去し、この残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノー
ル‐ジクロロメタン混液（容量比４０：１：１００）で
溶出した目的区分を濃縮すると２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド２．９０ｇ（１．６４ｍｍｏｌ、収率６６．６％）が
得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド４．２４ｇ（２．４６ｍｍｏｌ）をピリジン２０ｍｌ
に溶解し、無水酢酸１０ｍｌを加え、室温下で１５時
間、かきまぜながら反応させた。次いでこの反応中のピ
リジンを減圧下留去し、この残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノー
ル‐ジクロロメタン混液（容量比４０：１：１００）で
溶出した目的区分を濃縮すると２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド２．９０ｇ（１．６４ｍｍｏｌ、収率６６．６％）が
得られた。
【００８２】融点（℃）：１１６．５〜１１８．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
３．９７），２２６（ｌｏｇε＝４．３４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９６
０，１７５４，１５８４，１５２８，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５２，１２３８，１１８０，１０４
０，９９４，９４０、８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９３〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．８０〜４．８０
（ｍ），４．９６（１Ｈ，ｔ様）、５．１０〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．４Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６９２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９２．６° 元素分析：Ｃ７３Ｈ９０ＣｌＮＯ４５Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．５６ ５．１３ ０．７９ 実測値（％） ４９．４３ ５．１７ ０．８４
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
３．９７），２２６（ｌｏｇε＝４．３４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９６
０，１７５４，１５８４，１５２８，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５２，１２３８，１１８０，１０４
０，９９４，９４０、８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９３〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．８０〜４．８０
（ｍ），４．９６（１Ｈ，ｔ様）、５．１０〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．４Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６９２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９２．６° 元素分析：Ｃ７３Ｈ９０ＣｌＮＯ４５Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．５６ ５．１３ ０．７９ 実測値（％） ４９．４３ ５．１７ ０．８４
【００８３】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造
【００８４】実施例３の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド２．００ｇ（１．１３ｍｍｏｌ）を原料とした以
外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うことによ
り、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，
４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．９４ｇ（１．
１３ｍｍｏｌ、収率９９．９％）が得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド２．００ｇ（１．１３ｍｍｏｌ）を原料とした以
外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うことによ
り、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，
４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．９４ｇ（１．
１３ｍｍｏｌ、収率９９．９％）が得られた。
【００８５】融点（℃）：１２７．０〜１２９．０
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
４．１０），２２７（ｓｈ），２１４（ｌｏｇε＝４．
２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３５００，２９７
０，１７５４，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
４，１３７４，１３５４，１２３８，１０４０，９４
６，９００ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，
６．２Ｈｚ），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈ
ｚ，１．５Ｈｚ）、３．６８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
８Ｈｚ，６．２Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．８５〜４．８
５（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ，２．８Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．８Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝６．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６３４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９１．０° 元素分析：Ｃ６６Ｈ８３ＣｌＩＮＯ４２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．９６ ４．８５ ０．８１ 実測値（％） ４５．８７ ４．８４ ０．６８
ｘ（ＣＨ３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
４．１０），２２７（ｓｈ），２１４（ｌｏｇε＝４．
２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３５００，２９７
０，１７５４，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
４，１３７４，１３５４，１２３８，１０４０，９４
６，９００ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．９９〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，
６．２Ｈｚ），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈ
ｚ，１．５Ｈｚ）、３．６８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
８Ｈｚ，６．２Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．８５〜４．８
５（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ，２．８Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．８Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝６．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６３４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９１．０° 元素分析：Ｃ６６Ｈ８３ＣｌＩＮＯ４２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．９６ ４．８５ ０．８１ 実測値（％） ４５．８７ ４．８４ ０．６８
【００８６】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造
＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造
【００８７】実施例３の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド２．１６ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）を原料
とした以外は、実施例２の（１）と同様の操作を行って
得た、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝ペンタデカ‐
Ｏ‐アセチル‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ
‐マルトペンタオシド２．０４ｇ（１．２０ｍｍｏｌ、
収率９５．２％）を原料として、実施例１の（６）と同
様の操作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ
マルトペンタオシドが８７６ｍｇ（０．８６８ｍｍｏ
ｌ，収率７２．３％）得られた。
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド２．１６ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）を原料
とした以外は、実施例２の（１）と同様の操作を行って
得た、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝ペンタデカ‐
Ｏ‐アセチル‐６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ
‐マルトペンタオシド２．０４ｇ（１．２０ｍｍｏｌ、
収率９５．２％）を原料として、実施例１の（６）と同
様の操作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ
マルトペンタオシドが８７６ｍｇ（０．８６８ｍｍｏ
ｌ，収率７２．３％）得られた。
【００８８】融点（℃）：１３０．０〜１３５．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９８），２２７
（ｌｏｇε＝３．９９），２０９（ｌｏｇε＝４．２
０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９３
０，２１１０、１５８４，１５２０，１４８４，１２７
４，１１５０，１０７８，１０２４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．０５〜３．９０（ｍ），４．２０〜
４．５５（ｍ），４．７４（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．
８Ｈｚ），４．９６（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．４Ｈ
ｚ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１
０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．２５〜５．６０（ｍ），
７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）ＴＳＫｇｅｌ
Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍ
ｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル／
水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１６，Ｈ２Ｏ）；＋９
２．４° 元素分析：Ｃ３６Ｈ５３ＣｌＮ４Ｏ２７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．８４ ５．２９ ５．５５ 実測値（％） ４２．８８ ５．３１ ５．５９
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９８），２２７
（ｌｏｇε＝３．９９），２０９（ｌｏｇε＝４．２
０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９３
０，２１１０、１５８４，１５２０，１４８４，１２７
４，１１５０，１０７８，１０２４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．０５〜３．９０（ｍ），４．２０〜
４．５５（ｍ），４．７４（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．
８Ｈｚ），４．９６（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．４Ｈ
ｚ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１
０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．２５〜５．６０（ｍ），
７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）ＴＳＫｇｅｌ
Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍ
ｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル／
水＝３：１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１６，Ｈ２Ｏ）；＋９
２．４° 元素分析：Ｃ３６Ｈ５３ＣｌＮ４Ｏ２７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．８４ ５．２９ ５．５５ 実測値（％） ４２．８８ ５．３１ ５．５９
【００８９】実施例４
４‐ニトロフェニル＝５７‐エノ‐４７‐Ｏ‐メトキシ
メチル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシドの製造
メチル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシドの製造
【００９６】（１） ４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造 市販の４‐ニトロフェニル＝α‐Ｄ‐グルコピラノシド
１５．０ｇ（１１．８ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ７５ｍｌ
に溶解し、テトラメトキシメタン１５．０ｍｌ（１１３
ｍｍｏｌ）、アンバーリスト（１５Ｅ）７．５ｇを加
え、３５℃で４時間、かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜながらゆっくりと滴下
した。この混合液をＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）
カラムクロマトグラフィーにより精製し、アセトニトリ
ル‐水混液（容量比３５：６５）で溶出した。目的区分
を濃縮して得られたオイル状の４‐ニトロフェニル＝４
７，６７‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐α‐Ｄ‐マルト
ヘプタオシド１０．０ｇ（７．４３ｍｍｏｌ、収率６
３．０％）を原料とした以外は、実施例１の（２）と同
様の操作を行うことにより、オイル状の４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グル
コピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，
３‐６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド６．７０ｇ（３．１７ｍｍ
ｏｌ，２工程通算収率４２．６％）が得られた。
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造 市販の４‐ニトロフェニル＝α‐Ｄ‐グルコピラノシド
１５．０ｇ（１１．８ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ７５ｍｌ
に溶解し、テトラメトキシメタン１５．０ｍｌ（１１３
ｍｍｏｌ）、アンバーリスト（１５Ｅ）７．５ｇを加
え、３５℃で４時間、かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜながらゆっくりと滴下
した。この混合液をＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）
カラムクロマトグラフィーにより精製し、アセトニトリ
ル‐水混液（容量比３５：６５）で溶出した。目的区分
を濃縮して得られたオイル状の４‐ニトロフェニル＝４
７，６７‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐α‐Ｄ‐マルト
ヘプタオシド１０．０ｇ（７．４３ｍｍｏｌ、収率６
３．０％）を原料とした以外は、実施例１の（２）と同
様の操作を行うことにより、オイル状の４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グル
コピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，
３‐６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド６．７０ｇ（３．１７ｍｍ
ｏｌ，２工程通算収率４２．６％）が得られた。
【００９０】紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９
８），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３６４０，２９７
０，１７５２，１６１２，１５９４，１５２６，１４９
６，１４３２，１３７０，１３５０，１２３６，１０３
８，９４８，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．２０（ｃａ．６０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ）．３．６５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
５（ｍ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），
８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝５．３ｍｉｎ
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９
８），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３６４０，２９７
０，１７５２，１６１２，１５９４，１５２６，１４９
６，１４３２，１３７０，１３５０，１２３６，１０３
８，９４８，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．２０（ｃａ．６０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ）．３．６５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
５（ｍ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），
８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝５．３ｍｉｎ
【００９１】（２） ４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐４
‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐４
‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造
【００９２】実施例４の（１）で得た４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド６．７０ｇ（３．１７ｍｍ
ｏｌ）を原料とした以外は、実施例３の（１）と同様の
操作を行い、４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシド５．５７ｇ（２．４６ｍｍｏｌ，
収率７７．６％）が得られた。これをアセトニトリル４
０ｍｌに溶解し、メトキシメチルクロリド１．９３ｇ
（２４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ‐ジイソプロピル‐Ｎ‐エ
チルアミン３．１０ｇ（２４ｍｍｏｌ）を加え、かきま
ぜながら３時間還流しながら反応させたのち、過剰の溶
媒とアミンを減圧下留去した。得られた残渣をメチルエ
チルケトン５００ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム１
５．１ｇ（１００ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間、
かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライ
トベットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧
下留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロ
メタン混液（容量比１００：１：１００）で溶出した目
的区分を濃縮すると、オイル状の４‐ニトロフェニル＝
Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐
ヨード‐４‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラ
ノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシド３．５８ｇ（１．５８ｍｍｏｌ，
２工程通算収率６４．２％）が得られた。
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド６．７０ｇ（３．１７ｍｍ
ｏｌ）を原料とした以外は、実施例３の（１）と同様の
操作を行い、４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシド５．５７ｇ（２．４６ｍｍｏｌ，
収率７７．６％）が得られた。これをアセトニトリル４
０ｍｌに溶解し、メトキシメチルクロリド１．９３ｇ
（２４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ‐ジイソプロピル‐Ｎ‐エ
チルアミン３．１０ｇ（２４ｍｍｏｌ）を加え、かきま
ぜながら３時間還流しながら反応させたのち、過剰の溶
媒とアミンを減圧下留去した。得られた残渣をメチルエ
チルケトン５００ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム１
５．１ｇ（１００ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間、
かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライ
トベットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧
下留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロ
メタン混液（容量比１００：１：１００）で溶出した目
的区分を濃縮すると、オイル状の４‐ニトロフェニル＝
Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐
ヨード‐４‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラ
ノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３‐６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシド３．５８ｇ（１．５８ｍｍｏｌ，
２工程通算収率６４．２％）が得られた。
【００９３】紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９
８）、２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３６３０，２９６
０，１７５０，１６１０，１５９２，１５２６，１４９
４，１４３０，１３７０，１３５０，１２３４，１０４
０，９６０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．６０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，
６．５Ｈｚ），３．３６（３Ｈ，ｓ），３．４６（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．６８
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，６．５Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），
８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝１０．８ｍｉｎ 元素分析：Ｃ９０Ｈ１１８ＩＮＯ５８として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．６４ ５．２４ ０．６２ 実測値（％） ４７．３４ ５．４２ ０．５５
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９
８）、２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３６３０，２９６
０，１７５０，１６１０，１５９２，１５２６，１４９
４，１４３０，１３７０，１３５０，１２３４，１０４
０，９６０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１９（ｃａ．６０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，
６．５Ｈｚ），３．３６（３Ｈ，ｓ），３．４６（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．６８
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，６．５Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），
８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒｔ＝１０．８ｍｉｎ 元素分析：Ｃ９０Ｈ１１８ＩＮＯ５８として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．６４ ５．２４ ０．６２ 実測値（％） ４７．３４ ５．４２ ０．５５
【００９４】（３） ４‐ニトロフェニル＝５７‐エノ
‐４７‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオ
シドの製造
‐４７‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオ
シドの製造
【００９５】実施例４の（２）で得た４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐
６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３
‐６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド３．６４ｇ（１．５８ｍｍ
ｏｌ）を原料に用いた以外は、実施例１の（５）続いて
（６）と同様の操作を行うことにより、４‐ニトロフェ
ニル＝５７‐エノ‐４７‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ
‐マルトヘプタオシド１．１５ｇ（０．８９７ｍｍｏ
ｌ，２工程通算収率５６．８％）が得られた。
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐
６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３
‐６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド３．６４ｇ（１．５８ｍｍ
ｏｌ）を原料に用いた以外は、実施例１の（５）続いて
（６）と同様の操作を行うことにより、４‐ニトロフェ
ニル＝５７‐エノ‐４７‐Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ
‐マルトヘプタオシド１．１５ｇ（０．８９７ｍｍｏ
ｌ，２工程通算収率５６．８％）が得られた。
【００９６】紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．０
１），２２８（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９３
０，１６４４，１６１２，１５９２，１５２０，１５０
０，１３４６，１２５０，１１５２，１０８０，１０２
０，９３４，８７６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．１５〜３．８０（ｍ），３．２５（３
Ｈ，ｓ），４．２５〜４．６０（ｍ），４．５６（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），４．７０〜４．９０
（ｍ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．
１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１９（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
４Ｈｚ），５．２５〜５．６５（ｍ），７．２３（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
９．２Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝６５：３５ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝８．８ｍｉｎ 元素分析：Ｃ５０Ｈ７７ＮＯ３７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４６．７７ ６．０４ １．０９ 実測値（％） ４６．５０ ６．２８ １．０１
波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．０
１），２２８（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９３
０，１６４４，１６１２，１５９２，１５２０，１５０
０，１３４６，１２５０，１１５２，１０８０，１０２
０，９３４，８７６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．１５〜３．８０（ｍ），３．２５（３
Ｈ，ｓ），４．２５〜４．６０（ｍ），４．５６（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），４．７０〜４．９０
（ｍ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．
１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１９（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
４Ｈｚ），５．２５〜５．６５（ｍ），７．２３（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
９．２Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝６５：３５ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：Ｒｔ＝８．８ｍｉｎ 元素分析：Ｃ５０Ｈ７７ＮＯ３７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４６．７７ ６．０４ １．０９ 実測値（％） ４６．５０ ６．２８ １．０１
【００９７】実施例５ α‐アミラーゼ活性の測定
（１） （１） 基質液の調製 実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１０４４）を１．１４ｍＭの濃度になるよう
に、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有
する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
（１） （１） 基質液の調製 実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１０４４）を１．１４ｍＭの濃度になるよう
に、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有
する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
【００９８】（２） 共役酵素液の調製
酵母由来の市販α‐グルコシダーゼ及びアーモンド由来
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１７ｕ／ｍｌ、１３
ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２
ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら市販の
α‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用
した。
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１７ｕ／ｍｌ、１３
ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２
ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら市販の
α‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用
した。
【００９９】（３） 標品α‐アミラーゼ液の調製
市販のヒトα‐アミラーゼ（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水
を加え、０，１４８，２８４，４０１，５２５ＩＵ／ｌ
の濃度に溶解して標品α‐アミラーゼ液とした。なお、
この市販のヒトα‐アミラーゼは国際試薬（株）製キャ
リブザイム・ＡＭＹを使用した。また、α‐アミラーゼ
の活性は、３７℃、１分間に１μｍｏｌの２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（市
販品）を分解する酵素量を１国際単位（ＩＵ）として定
義した。
を加え、０，１４８，２８４，４０１，５２５ＩＵ／ｌ
の濃度に溶解して標品α‐アミラーゼ液とした。なお、
この市販のヒトα‐アミラーゼは国際試薬（株）製キャ
リブザイム・ＡＭＹを使用した。また、α‐アミラーゼ
の活性は、３７℃、１分間に１μｍｏｌの２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（市
販品）を分解する酵素量を１国際単位（ＩＵ）として定
義した。
【０１００】（４） 試料液の調製
α‐アミラーゼ活性測定用試料が液体の場合はそのまま
試料液とする。固体の場合は通常、試料５００ｍｇを正
確に秤量し、精製水を加えて全量を５ｍｌとして試料液
とした。必要に応じて、不溶物をろ過などの操作で除去
してから用いた。
試料液とする。固体の場合は通常、試料５００ｍｇを正
確に秤量し、精製水を加えて全量を５ｍｌとして試料液
とした。必要に応じて、不溶物をろ過などの操作で除去
してから用いた。
【０１０１】（５） 検量線の作成
標品α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍ
ｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基
質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温
したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量
を測定した。各標品α‐アミラーゼ液の活性と、吸光度
の変化量の関係より検量線を作成した。その結果検量線
の式はＵ＝８．３４・ΔＡ×１０３＋１１．２［Ｕ；酵
素活性（ＩＵ／ｌ）、ΔＡ；吸光度の変化量］となっ
た。そのグラフを図１に示す。
ｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基
質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温
したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量
を測定した。各標品α‐アミラーゼ液の活性と、吸光度
の変化量の関係より検量線を作成した。その結果検量線
の式はＵ＝８．３４・ΔＡ×１０３＋１１．２［Ｕ；酵
素活性（ＩＵ／ｌ）、ΔＡ；吸光度の変化量］となっ
た。そのグラフを図１に示す。
【０１０２】（６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の
測定 試料液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．０ｍｌ
を加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温したのち、２分
間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した、こ
の測定値と（５）で作成した検量線から算出して試料液
中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うことができる。な
お、試料液中の酵素活性の値が検量線の適用範囲（０〜
５２５ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を用いて相当す
る倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
測定 試料液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．０ｍｌ
を加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温したのち、２分
間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した、こ
の測定値と（５）で作成した検量線から算出して試料液
中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うことができる。な
お、試料液中の酵素活性の値が検量線の適用範囲（０〜
５２５ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を用いて相当す
る倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
【０１０３】実施例６ α‐アミラーゼ活性の測定
（２） （１） 基質液の調製 実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１００９）を２．２８ｍＭの濃度になるよう
に、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有
する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
（２） （１） 基質液の調製 実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１００９）を２．２８ｍＭの濃度になるよう
に、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有
する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
【０１０４】（２） 共役酵素液の調製
（３） 標品α‐アミラーゼ液の調製
（４） 試料液の調製
（５） 検量線の作成
実施例５の（２）〜（５）と同一の操作で共役酵素液の
調製、標品α‐アミラーゼ液の調製、試料液の調製及び
検量線の作成を行った。その結果検量線の式はＵ＝８．
６６・ΔＡ×１０３−６．７となった。そのグラフを図
２に示す。
調製、標品α‐アミラーゼ液の調製、試料液の調製及び
検量線の作成を行った。その結果検量線の式はＵ＝８．
６６・ΔＡ×１０３−６．７となった。そのグラフを図
２に示す。
【０１０５】（６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の
測定 実施例５の（６）と同様の操作で試料液中のα‐アミラ
ーゼ活性の測定を行った。
測定 実施例５の（６）と同様の操作で試料液中のα‐アミラ
ーゼ活性の測定を行った。
【０１０６】実施例７
前記６３‐アジド‐６３‐デオキシマルトオリゴシド誘
導体と本発明の新規化合物である６５‐アジド‐６５‐
デオキシマルトオリゴシド誘導体とのα‐アミラーゼに
よる加水分解速度の比較を行った。
導体と本発明の新規化合物である６５‐アジド‐６５‐
デオキシマルトオリゴシド誘導体とのα‐アミラーゼに
よる加水分解速度の比較を行った。
【０１０７】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６３‐アジド‐６３‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトトリ
オシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トトリオシド（１０．０ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を原料
に用いた以外は、実施例３と同様の操作を行って製造し
た。得量は１．１４ｇ（１．６７ｍｍｏｌ，８工程通算
収率１１．０％）であり、以下の性質を有していた。
＝６３‐アジド‐６３‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトトリ
オシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トトリオシド（１０．０ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を原料
に用いた以外は、実施例３と同様の操作を行って製造し
た。得量は１．１４ｇ（１．６７ｍｍｏｌ，８工程通算
収率１１．０％）であり、以下の性質を有していた。
【０１０８】融点（℃）：１００．５〜１０３．５（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９９），２２７
（ｌｏｇε＝４．００），２０９（ｌｏｇε＝４．２
２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９４
０，２１１２，１５８６，１５２２，１４８６，１２７
４，１１５６，１０７８，１０２４，９２４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．０５〜３．９０（ｍ），４．２５〜
４．５５（ｍ），４．７２（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．
０Ｈｚ），４．９６（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），５．１
１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．２５〜５．６０（ｍ），
７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．２０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝３．９ｍｉｎ 元素分析：Ｃ２４Ｈ３３ＣｌＮ４Ｏ１７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．０８ ４．８６ ８．１８ 実測値（％） ４２．０１ ４．９９ ８．２９
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９９），２２７
（ｌｏｇε＝４．００），２０９（ｌｏｇε＝４．２
２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４１０，２９４
０，２１１２，１５８６，１５２２，１４８６，１２７
４，１１５６，１０７８，１０２４，９２４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．０５〜３．９０（ｍ），４．２５〜
４．５５（ｍ），４．７２（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．
０Ｈｚ），４．９６（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），５．１
１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．２５〜５．６０（ｍ），
７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．２０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝３．９ｍｉｎ 元素分析：Ｃ２４Ｈ３３ＣｌＮ４Ｏ１７として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．０８ ４．８６ ８．１８ 実測値（％） ４２．０１ ４．９９ ８．２９
【０１０９】（２） 基質液（ア）の調製
実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（以下本発明基質という）を３．００ｍＭの濃度にな
るように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２
を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶
解した。
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（以下本発明基質という）を３．００ｍＭの濃度にな
るように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２
を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶
解した。
【０１１０】（３） 基質液（イ）の調製
前記（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
３‐アジド‐６３‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトトリオシ
ド（以下対照基質という）を３．００ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。
３‐アジド‐６３‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトトリオシ
ド（以下対照基質という）を３．００ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。
【０１１１】（４） 共役酵素液の調製
実施例５の（２）と同様の操作で行った。
【０１１２】（５） α‐アミラーゼ液の調製
実施例５の（３）と同様に市販のヒトα‐アミラーゼ
（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水を加え、０，２５０，５０
０ＩＵ／ｌの濃度に溶解してα‐アミラーゼ液とした。
（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水を加え、０，２５０，５０
０ＩＵ／ｌの濃度に溶解してα‐アミラーゼ液とした。
【０１１３】（６） α‐アミラーゼ加水分解反応
α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを
加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、それぞ
れの基質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分
間加温したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の
変化量を測定した。その結果を表１に示す。
加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、それぞ
れの基質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分
間加温したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の
変化量を測定した。その結果を表１に示す。
【表１】
表１から、α‐アミラーゼの作用を対照基質ではほとん
ど受けないのに対し、本発明基質では極めて順調に受け
ることが分かる。
ど受けないのに対し、本発明基質では極めて順調に受け
ることが分かる。
【０１１４】実施例８
５３‐エノマルトオリゴオシド誘導体と、本発明の５５
‐エノマルトオリゴオシド誘導体とのα‐アミラーゼに
よる加水分解速度の比較を行った。
‐エノマルトオリゴオシド誘導体とのα‐アミラーゼに
よる加水分解速度の比較を行った。
【０１１５】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝５３‐エノ‐４３‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトトリ
オシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トトリオシド（１０．０ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）を原料
に用いた以外は、実施例１と同様の操作を行って製造し
た。得量は１．２３ｇ（１．７１ｍｍｏｌ，７工程通算
収率１１．３％）であり、以下の性質を有していた。
＝５３‐エノ‐４３‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトトリ
オシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トトリオシド（１０．０ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）を原料
に用いた以外は、実施例１と同様の操作を行って製造し
た。得量は１．２３ｇ（１．７１ｍｍｏｌ，７工程通算
収率１１．３％）であり、以下の性質を有していた。
【０１１６】融点（℃）：１４２．０〜１４５．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．００），２２８
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．４４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−1）：３４００，２９２
０，１６４２，１５８４，１５１８，１４８８，１３４
８，１２７６，１２５０，１１５２，１０８０，１０２
０，９２８，８９２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．３０（３
Ｈ，ｓ），４．０４（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．３０〜
４．６０（ｍ），４．５８（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．
２Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），
５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．２６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），５．２５〜５．６５
（ｍ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝４：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．６ｍｉｎ 元素分析：Ｃ２５Ｈ３４ＣｌＮＯ１９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４１．７０ ４．７６ １．９５ 実測値（％） ４１．５３ ４．８８ １．９０
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε＝４．００），２２８
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．４４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−1）：３４００，２９２
０，１６４２，１５８４，１５１８，１４８８，１３４
８，１２７６，１２５０，１１５２，１０８０，１０２
０，９２８，８９２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．３０（３
Ｈ，ｓ），４．０４（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．３０〜
４．６０（ｍ），４．５８（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．
２Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），
５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．２６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），５．２５〜５．６５
（ｍ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝４：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
ｔ＝４．６ｍｉｎ 元素分析：Ｃ２５Ｈ３４ＣｌＮＯ１９Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４１．７０ ４．７６ １．９５ 実測値（％） ４１．５３ ４．８８ １．９０
【０１１７】（２） 基質液（ア）の調製
実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（以下本発明基質という）を３．００ｍＭの濃度にな
るように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２
を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶
解した。
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（以下本発明基質という）を３．００ｍＭの濃度にな
るように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２
を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶
解した。
【０１１８】（３） 基質液（イ）の調製
前記（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５
３‐エノ‐４３‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトトリオシ
ド（以下対照基質という）を３．００ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。
３‐エノ‐４３‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトトリオシ
ド（以下対照基質という）を３．００ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。
【０１１９】（４） 共役酵素液の調製
実施例５の（２）と同様の操作で行った。
【０１２０】（５） α‐アミラーゼ液の調製
実施例７の（５）と同様の操作で行った。
【０１２１】（６） α‐アミラーゼ加水分解反応
実施例７の（６）と同様の操作で吸光度変化量を測定し
た。その結果を表２に示す。
た。その結果を表２に示す。
【表２】
表２から、α‐アミラーゼの作用を、対照基質ではほと
んど受けないのに対し、本発明の基質では極めて順調に
受けることが分かる。
んど受けないのに対し、本発明の基質では極めて順調に
受けることが分かる。
【０１２２】実施例９ 耐共役酵素試験（１）
（１） 基質液（ア）の調製
実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１０４４）（以下本発明基質という）を３．０
ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍ
Ｍ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解した。
‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１０４４）（以下本発明基質という）を３．０
ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍ
Ｍ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解した。
【０１２３】（２） 基質液（イ）の調製
常法で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド（Ｍｗ９８４）（以下対照基質とい
う）を３．０ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎａ
Ｃｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
マルトペンタオシド（Ｍｗ９８４）（以下対照基質とい
う）を３．０ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎａ
Ｃｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
【０１２４】（３） 共役酵素液の調製
酵母由来の市販α‐グルコシダーゼ及びアーモンド由来
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１０５３ｕ／ｍｌ、１
５．５ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ
及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら
市販のα‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製
を使用した。
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１０５３ｕ／ｍｌ、１
５．５ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ
及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら
市販のα‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製
を使用した。
【０１２５】（４） 共役酵素反応
共役酵素液１．０ｍｌを３７℃で５分間加温したのち、
本発明基質液又は対照基質液をそれぞれ２．０ｍｌ加え
てよく混合し、３７℃で３分間加温後から５分間、４０
０ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した。その結果を
図３に示す。図３において▽印は基質液（ア）、□印は
基質液（イ）によるものである。図３から、本発明基質
は共役酵素と反応することなく、測定系内で安定に存在
することが分かる。
本発明基質液又は対照基質液をそれぞれ２．０ｍｌ加え
てよく混合し、３７℃で３分間加温後から５分間、４０
０ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した。その結果を
図３に示す。図３において▽印は基質液（ア）、□印は
基質液（イ）によるものである。図３から、本発明基質
は共役酵素と反応することなく、測定系内で安定に存在
することが分かる。
【０１２６】実施例１０ 耐共役酵素試験（２）
実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１００９）（以下本発明基質という）を基質液
（ア）として用いた以外は、実施例９と同様の操作を用
いて行った。その結果を図４に示す。図４において、△
印は基質液（ア）、□印は基質液（イ）によるものであ
る。図４から、本発明基質は共役酵素と反応することな
く、測定系内で安定に存在することが分かる。
‐アジド‐６５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド（Ｍｗ１００９）（以下本発明基質という）を基質液
（ア）として用いた以外は、実施例９と同様の操作を用
いて行った。その結果を図４に示す。図４において、△
印は基質液（ア）、□印は基質液（イ）によるものであ
る。図４から、本発明基質は共役酵素と反応することな
く、測定系内で安定に存在することが分かる。
【０１２７】実施例１１ 測定試薬（１）
（１） 試薬の調製
精製水に以下の成分を以下の濃度で溶解することによ
り、試薬を調製した。 成 分 濃 度 ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐ ４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド ０．７０ｍＭ α‐グルコシダーゼ ４０μ／ｍｌ β‐グルコシダーゼ ５．０μ／ｍｌ β‐グリセロリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０） ２０ｍＭ ウシ血清アルブミン ０．０５％
り、試薬を調製した。 成 分 濃 度 ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐ ４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド ０．７０ｍＭ α‐グルコシダーゼ ４０μ／ｍｌ β‐グルコシダーゼ ５．０μ／ｍｌ β‐グリセロリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０） ２０ｍＭ ウシ血清アルブミン ０．０５％
【０１２８】（２） 測定法
測定用試料が液体の場合はそのまま試料液とする。固体
の場合は試料５００ｍｇを正確に秤量し、精製水を加え
て全量を５．０ｍｌとし、これを試料液とした。試料液
２５０μｌにあらかじめ３７℃で２分間加温した試薬
３．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温した
のち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測
定した。この測定値とあらかじめ作成した検量線から算
出して試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うこと
ができる。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適
用範囲（０〜５２５ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を
用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行
う。
の場合は試料５００ｍｇを正確に秤量し、精製水を加え
て全量を５．０ｍｌとし、これを試料液とした。試料液
２５０μｌにあらかじめ３７℃で２分間加温した試薬
３．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温した
のち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測
定した。この測定値とあらかじめ作成した検量線から算
出して試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うこと
ができる。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適
用範囲（０〜５２５ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を
用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行
う。
【０１２９】実施例１２ 測定試薬（２）
試薬の調製及び測定法
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐
Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの代わりに２
‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐
デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドを用い、２．０
０ｍＭの濃度で溶解した以外は、実施例１１と同様の操
作を用いて行った。
Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの代わりに２
‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐
デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドを用い、２．０
０ｍＭの濃度で溶解した以外は、実施例１１と同様の操
作を用いて行った。
【０１３０】実験例
実施例で得た本発明の基質である２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド（ＥＭＧ５ＣＮＰ）及び２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（ＡＤＧ５ＣＮＰ）のＫ
ｍ値、加水分解速度、水溶性及び加水分解部位につい
て、以下に示す方法に従って調べた。その結果を表３及
び表４に示す。
ロフェニル＝５５‐エノ‐４５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド（ＥＭＧ５ＣＮＰ）及び２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝６５‐アジド‐６５‐デオキシ
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（ＡＤＧ５ＣＮＰ）のＫ
ｍ値、加水分解速度、水溶性及び加水分解部位につい
て、以下に示す方法に従って調べた。その結果を表３及
び表４に示す。
【０１３１】なお、対照基質として、市販の２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド
（Ｇ５ＣＮＰ）を用いた。
‐４‐ニトロフェニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド
（Ｇ５ＣＮＰ）を用いた。
【０１３２】（１） Ｋｍ値：
（ｉ） 基質液（ア）の調製
各基質を０．１６，０．３２，０．４８，０．６４，
０．８０，０．９６ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。 （ｉｉ） Ｋｍ値の概算 上記（ｉ）の各基質液について、後記加水分解速度の測
定と同様の操作を行って速度を測定し、ラインウェーバ
ー・バークの逆数プロット［掘尾武一、山下仁平編「蛋
白質・酵素の実験法」第３８３頁、南江堂、１９８１年
発行参照］でＫｍ値の概算値を求めた。 （ｉｉｉ） 基質液（イ）の調製 各基質を上記（ｉｉ）の概算Ｋｍ値の０．８〜１．６倍
の範囲で３種の濃度、１．６〜３．２倍の範囲で３種の
濃度となるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐Ｍ
ｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．
０）に溶解した 。（ｉｖ） Ｋｍ値の測定 上記（ｉｉ）と同様の操作を行い、Ｋｍ値を算出した。
０．８０，０．９６ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。 （ｉｉ） Ｋｍ値の概算 上記（ｉ）の各基質液について、後記加水分解速度の測
定と同様の操作を行って速度を測定し、ラインウェーバ
ー・バークの逆数プロット［掘尾武一、山下仁平編「蛋
白質・酵素の実験法」第３８３頁、南江堂、１９８１年
発行参照］でＫｍ値の概算値を求めた。 （ｉｉｉ） 基質液（イ）の調製 各基質を上記（ｉｉ）の概算Ｋｍ値の０．８〜１．６倍
の範囲で３種の濃度、１．６〜３．２倍の範囲で３種の
濃度となるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐Ｍ
ｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．
０）に溶解した 。（ｉｖ） Ｋｍ値の測定 上記（ｉｉ）と同様の操作を行い、Ｋｍ値を算出した。
【０１３３】（２） 加水分解速度；
（ｉ） 基質液の調製
各基質の濃度をＫｍ値の７〜９倍になるように、４０ｍ
Ｍ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。この濃度
は後記α‐アミラーゼ反応時において、ヒトα‐アミラ
ーゼに対してＫｍ値の約５倍に相当するため、最大反応
速度に達するには十分な基質量である。 （ｉｉ） 共役酵素液の調製 前記実施例５の（２）と同様にして調製した。 （ｉｉｉ） α‐アミラーゼ液の調製 前記実施例５の（３）と同様にして、約５００ＩＵ／ｌ
の濃度の市販ヒトＰ型及びＳ型α‐アミラーゼ液を調製
した。 （ｉｖ） 加水分解速度の測定（α‐アミラーゼ反応） 上記（ｉｉｉ）のα‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵
素１．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温し
たのち、基質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で
２分間加温したのちからの２分間の４００ｎｍにおける
吸光度の変化量を測定した。対照基質のＧ５ＣＮＰを用
いた場合、加水分解速度、すなわち単位時間当りの吸光
度の変化量を１０とし、各基質の加水分解速度を相対値
で示した。
Ｍ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。この濃度
は後記α‐アミラーゼ反応時において、ヒトα‐アミラ
ーゼに対してＫｍ値の約５倍に相当するため、最大反応
速度に達するには十分な基質量である。 （ｉｉ） 共役酵素液の調製 前記実施例５の（２）と同様にして調製した。 （ｉｉｉ） α‐アミラーゼ液の調製 前記実施例５の（３）と同様にして、約５００ＩＵ／ｌ
の濃度の市販ヒトＰ型及びＳ型α‐アミラーゼ液を調製
した。 （ｉｖ） 加水分解速度の測定（α‐アミラーゼ反応） 上記（ｉｉｉ）のα‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵
素１．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温し
たのち、基質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で
２分間加温したのちからの２分間の４００ｎｍにおける
吸光度の変化量を測定した。対照基質のＧ５ＣＮＰを用
いた場合、加水分解速度、すなわち単位時間当りの吸光
度の変化量を１０とし、各基質の加水分解速度を相対値
で示した。
【０１３４】（３） 水溶性；水１００ｍｌに基質２０
ｇを添加し、その溶解状態を観察した。
ｇを添加し、その溶解状態を観察した。
【０１３５】（４） 加水分解部位；各基質の濃度を
０．５ｍＭになるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍ
Ｍ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解し、この基質液１．０ｍｌに、上記加
水分解速度の項の（ｉｉｉ）のα‐アミラーゼ液１００
μｌを加えてよくかきまぜたのち、３７℃で２０分間反
応させた。この反応液を高速液体クロマトグラフィーで
分析することにより加水分解生成物を定量した。
０．５ｍＭになるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍ
Ｍ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解し、この基質液１．０ｍｌに、上記加
水分解速度の項の（ｉｉｉ）のα‐アミラーゼ液１００
μｌを加えてよくかきまぜたのち、３７℃で２０分間反
応させた。この反応液を高速液体クロマトグラフィーで
分析することにより加水分解生成物を定量した。
【０１３６】
【表３】
【表４】
（注）Ａｉ：ヒトα‐アミラーゼアイソザイム
Ｐ：ヒト膵液由来のα‐アミラーゼ
Ｓ：ヒト唾液由来のα‐アミラーゼ
表３及び表４から、本発明の基質は、加水分解部位が実
質的に１か所であり、またアイソザイムによる加水分解
部位及び加水分解率が同じであり、かつα‐アミラーゼ
に対する親和性が極めて強く加水分解速度及び水溶性も
良好であって基質として極めて優れたものであることが
分かる。
質的に１か所であり、またアイソザイムによる加水分解
部位及び加水分解率が同じであり、かつα‐アミラーゼ
に対する親和性が極めて強く加水分解速度及び水溶性も
良好であって基質として極めて優れたものであることが
分かる。
【図１】 実施例５におけるα‐アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線のグラフ
に用いる検量線のグラフ
【図２】 実施例６におけるα‐アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線のグラフ
に用いる検量線のグラフ
【図３】 実施例９における本発明基質と対照基質との
測定系内での安定性を示すグラフ
測定系内での安定性を示すグラフ
【図４】 実施例１０における本発明基質と対照基質と
の測定系内での安定性を示すグラフ
の測定系内での安定性を示すグラフ
フロントページの続き
(72)発明者 冨倉 正
千葉県野田市野田339番地 キツコーマン
株式会社内
(72)発明者 小谷 一夫
東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化
学薬品株式会社東京技術センター内
(72)発明者 齋藤 和典
東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化
学薬品株式会社東京技術センター内
(72)発明者 戸辺 光一朗
千葉県野田市野田339番地 盛進製薬株式
会社内
Claims (4)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中のｎは３〜５の整数、Ｒは芳香族発色性基、Ｘは
＞ＣＨＣＨ２Ｎ３、又は＞Ｃ＝ＣＨ２、Ｙは水素原子、
置換若しくは非置換の炭化水素基又はアルキル若しくは
アリールスルホニル基である）で表わされるマルトオリ
ゴシド誘導体。 - 【請求項２】 請求項１記載のマルトオリゴシド誘導体
を有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬。 - 【請求項３】 α‐アミラーゼ含有試料に、請求項１記
載のマルトオリゴシド誘導体のα‐アノマーと、α‐グ
ルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両方を
添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族発色性化合
物を定量することを特徴とするα‐アミラーゼ活性の測
定方法。 - 【請求項４】 α‐アミラーゼ含有試料に、請求項１記
載のマルトオリゴシド誘導体のβ‐アノマー又はα‐ア
ノマーとβ‐アノマーとの混合物と、α‐グルコシダー
ゼ又はグルコアミラーゼあるいはその両方とβ‐グルコ
シダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族
発色性化合物を定量することを特徴とするα‐アミラー
ゼ活性の測定方法。
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|---|---|---|---|
| JP3180473A JP2770891B2 (ja) | 1991-06-26 | 1991-06-26 | マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 |
| US07/894,468 US5302514A (en) | 1991-06-26 | 1992-06-05 | Maltooligoside derivative, reagent for determining α-amylase activity containing the same as effective ingredient and a process for determining the α-amylase activity using same |
| GB9212529A GB2257139B (en) | 1991-06-26 | 1992-06-12 | Maltooligoside derivative, and its use for determining alpha-amylase activity |
| DE4220984A DE4220984A1 (de) | 1991-06-26 | 1992-06-26 | Maltooligosidderivat, dieses als wirksamen bestandteil enthaltendes reagens zur bestimmung der alpha-amylase-aktivitaet und verfahren unter verwendung dieses derivats zur bestimmung der alpha-amylase-aktivitaet |
| KR1019920011239A KR0168864B1 (ko) | 1991-06-26 | 1992-06-26 | 말토올리고시드 유도체, 이것을 유효 성분으로 함유하는 알파-아밀라아제 활성측정용 시약 및 이것을 사용한 알파-아밀라아제 활성의 측정방법 |
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|---|---|---|---|
| JP3180473A JP2770891B2 (ja) | 1991-06-26 | 1991-06-26 | マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| ATE170925T1 (de) * | 1986-07-11 | 1998-09-15 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Verfahren zur herstellung eines modifizierten oligosaccharids |
| US5192666A (en) * | 1986-07-11 | 1993-03-09 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | α-amylase assay using modified oligosaccharide and process for producing said modified oligosaccharide |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| JPH0631293B2 (ja) * | 1987-12-11 | 1994-04-27 | 東洋紡績株式会社 | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 |
| US5208151A (en) * | 1988-08-18 | 1993-05-04 | Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd. | Process for the preparation of derivatives of maltooligosaccharides |
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- 1991-06-26 JP JP3180473A patent/JP2770891B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-06-05 US US07/894,468 patent/US5302514A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-12 GB GB9212529A patent/GB2257139B/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-26 DE DE4220984A patent/DE4220984A1/de not_active Ceased
- 1992-06-26 KR KR1019920011239A patent/KR0168864B1/ko not_active IP Right Cessation
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