JPH04225163A - ＩｇＥの検出方法およびそれに用いる装置およびキット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、診断アッセイに使用す
るために固相に結合させた抗原に関する。さらに詳しく
は、固相、たとえばニトロセルロースの薄多孔質シート
に結合し得る抗原の有効量を増加させることにより、イ
ムノアッセイにおいて抗体結合に利用することのできる
抗原部位を増大させた方法に関する。 【０００２】 【従来の技術および発明が解決しようとする課題】米国
特許第３，７２０，７６０号明細書には、ある種の免疫
源物質（「アレルゲン」と呼ばれる）が喘息、枯草熱な
どの形でアレルギー反応を引き起こすこと、および所定
のアレルゲンによりアレルギー反応が引き起こされてい
る患者の血液中には通常、低濃度の免疫グロブリン（「
レアギン免疫グロブリン」と呼ばれる；現在では通常、
「ＩｇＥ」と呼ばれ、本明細書では以後この語を用いる
）が含まれること（該免疫グロブリンは該アレルゲンに
特異的に向けられる）が開示されている。この特許には
アレルゲンに対する感度試験が開示されており、該試験
は、患者の皮膚に所定のアレルゲンを注射することを含
み、その後、熟練した観察者が各アレルゲンによって引
き起こされた反応（皮膚の発赤や腫脹）の観察に基づき
各アレルゲンに対する感度の度合を評価する。この特許
にはまた、「インビボ」試験も開示されており、この試
験において患者はエーロゾルの形態のアレルゲンを吸入
し、枯草熱や喘息などを引き起こした患者はアレルゲン
に感受性であるとしている。 【０００３】上記特許にはまた、体液中のＩｇＥの存在
または量のインビトロ決定法が開示されている。この方
法には、コポリマー（たとえばデキストラン−エピクロ
ルヒドリンコポリマー）の微細粒子を臭化シアンで処理
し、ついで該粒子とアレルゲンを水性媒体中に懸濁する
ことによりアレルゲンを該粒子に結合させることが含ま
れている。ついで、目的アレルゲンに対して向けられた
ＩｇＥの存在を試験しようとする体液を、該コポリマー
に結合させたアレルゲンと接触させる。ついで、上記工
程２の生成物を放射性標識抗体（コポリマーに結合した
アレルゲンに結合しているＩｇＥに結合する）と接触さ
せる。ついで、工程３の固相、工程３の液体、またはそ
れら両方から放出される放射線を測定することができる
。 【０００４】抗原（アレルゲンを含む）を固相に共有結
合させるのは、アッセイ手順中に固相から抗原が取り除
かれるのを防御もしくは抑制するためである。米国特許
第４，５９７，９９９号明細書には、それぞれ独立の活
性化に供された少なくとも２つの官能基を有する架橋剤
を用いた、２つの分子種を互いに共有カップリングさせ
ることが開示されている。そのような架橋剤の例として
は、４−メチルアジドベンズイミデートおよびＮ−ヒド
ロキシスクシンイミジルアジドベンゾエートなどが挙げ
られる。これら架橋剤は、利用できるアミノ基（たとえ
ば、アミノプロピルガラス、アミノフェニルガラスおよ
びアミノヘキシルアガロース中のアミノ基など）と暗所
で自然にカップリングし、適当な波長の光を照射させて
活性化すれば薬物、ステロイドまたはタンパク質などの
リガンドにもカップリングする。 【０００５】米国特許第４，４２５，４３４号明細書に
は、多孔質二酸化チタンスフェロイド、多孔質リン酸カ
ルシウムスフェロイド、多孔質酸化ジルコニウムスフェ
ロイドまたは類似の多孔質支持体物質の孔を充填するた
めに生物学的活性物質を使用すること、および該生物学
的活性物質を沈殿または架橋により孔中に固定化し得る
ことが記載されている。生物学的活性物質は、酵素など
のタンパク質性の物質であってよい。しかしながら、共
有カップリング法はコスト高であり時間がかかることが
わかった。加えて、幾つかのカップリング法ではアッセ
イ感度が減少することもわかった。 【０００６】 【課題を解決するための手段】本発明は、脱イオン水や
蒸留水などの溶媒を用いた新規なアレルゲン組成物を包
含する。本発明のアレルゲン組成物は、適当なタンパク
質試験により決定されるように、下記アレルゲンを含有
する。約０．０５〜約４．０ｍｇ／ｍｌのアルテルナリ
ア・アルテルナタ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ａｌｔｅｒ
ｎａｔａ）アレルゲン；約０．５〜約５０ｍｇ／ｍｌの
アスペルギルス・フミガツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）アレルゲン；約０．８〜約８１
．６ｍｇ／ｍｌのバミューダグラス（Ｂｅｒｍｕｄａ　
ｇｒａｓｓ）［シノドン・ダクチロン（Ｃｙｎｏｄｏｎ
　ｄａｃｔｙｌｏｎ）］アレルゲン；約０．１〜約６．
０ｍｇ／ｍｌのシラカンバ［ベツラ・ニグラ（Ｂｅｔｕ
ｌａ　ｎｉｇｒａ）］アレルゲン；【０００７】約０．
６〜約２０．６ｍｇ／ｍｌのネコ［フェリス・ドメスチ
クス（Ｆｅｌｉｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）］アレルゲ
ン；約０．０４〜約４．５ｍｇ／ｍｌのヤマシーダー［
ジュニペルス・アスヘイ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ　ａｓｈ
ｅｉ）］アレルゲン；約０．１〜約２０．５ｍｇ／ｍｌ
のスギ［クリプトメリア・ジャポニカ（Ｃｒｙｐｔｏｍ
ｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）］アレルゲン；約０．０
５〜１０．０ｍｇ／ｍｌのクラドスポリウム（Ｃｌａｄ
ｏｓｐｏｒｉｕｍ）アレルゲン；約１．３〜約３８．４
ｍｇ／ｍｌのイヌ［カニス・ファミリアルス（Ｃａｎｉ
ｓ　ｆａｍｉｌｉａｒｕｓ）］アレルゲン；約０．７〜
約２２．４ｍｇ／ｍｌのダーマトファゴイデス・ファリ
ナエ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ　ｆａｒｉｎ
ａｅ）アレルゲン； 【０００８】約０．６〜約８４．２ｍｇ／ｍｌのダーマ
トファゴイデス・プテロニシヌス（Ｄ．ｐｔｅｒｏｎｙ
ｓｓｉｎｕｓ）アレルゲン；約０．１〜１０．０ｍｇ／
ｍｌのニレ［ウルムス（Ｕｌｍｕｓ）］アレルゲン；約
０．０２〜約０．２ｍｇ／ｍｌの羽毛アレルゲン；約０
．２〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのジャイアントブタクサ（
ｇｉａｎｔ　ｒａｇｗｅｅｄ）［アンブロジア・トリフ
ィダ（Ａｍｂｒｏｓｉａ　ｔｒｉｆｉｄａ）］アレルゲ
ン；約０．４〜約１００ｍｇ／ｍｌの家ほこりアレルゲ
ン；約０．０５〜約１０．５ｍｇ／ｍｌのジューン／ケ
ンタッキーブルーグラス（Ｊｕｎｅ／Ｋｅｎｔｕｃｋｙ
　ｂｒｕｅｇｒａｓｓ）［ポア・プラテンシス（Ｐｏａ
　ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）］アレルゲン；約０．２〜約２
０．５ｍｇ／ｍｌのシロザ［ケノポジウム・アルブム（
Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｌｂｕｍ）］アレルゲン； 【０００９】約０．１〜約１１．５ｍｇ／ｍｌのカエデ
［アサー（Ａｃｅｒ）］アレルゲン；約０．３〜約９０
．４ｍｇ／ｍｌのヨモギ［アルテメシア・ヘテロフィラ
（Ａｒｔｅｍｅｓｉａ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ）］
アレルゲン；約０．１〜約１２ｍｇ／ｍｌのクワの実［
モルス（Ｍｏｒｕｓ）］アレルゲン；約０．２〜２５．
５ｍｇ／ｍｌのカシ［ケルクス（Ｑｕｅｒｃｕｓ）］ア
レルゲン；約０．１〜約６６．８ｍｇ／ｍｌのオリーブ
［オレア・エウロペア（Ｏｌｅａｅｕｒｏｐｅａ）］ア
レルゲン；約１．０〜約４０．０ｍｇ／ｍｌのパリエタ
リア（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ）［パリエタリア・オフィ
シナリス（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ　ｏｆｆｃｉｎａｌｉ
ｓ）］アレルゲン；約１．７〜約１３０．４ｍｇ／ｍｌ
のオオバコ［プランタゴ・ランセオラタ（Ｐｌａｎｔａ
ｇｏ　ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）］アレルゲン； 【００１０】約０．１〜約４．８ｍｇ／ｍｌのペニシリ
ウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）［ペニシリウム・ノタ
ツム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｎｏｔａｔｕｍ）］ア
レルゲン；約０．０５〜約８．５ｍｇ／ｍｌのホソムギ
［ロリウム・ペレネ（Ｌｏｌｉｕｍ　ｐｅｒｅｎｎｅ）
］アレルゲン；約０．２〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのショ
ートブタクサ（ｓｈｏｒｔ　ｒａｇｗｅｅｄ）［アンブ
ロジア・エラチオール（Ａｍｂｒｏｓｉａ　ｅｌａｔｉ
ｏｒ）］アレルゲン、および約０．０５〜約６．６ｍｇ
／ｍｌのオオアワガエリ［フレウム・プラテンセ（Ｐｈ
ｌｅｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）］アレルゲン。 【００１１】本発明はまた、試料中のＩｇＥの存在また
は量を検出するための装置をも包含する。このアッセイ
装置には固相および該固相上に固定化したアレルゲンが
含まれており、該アレルゲンは一般に上記アレルゲン組
成物の一つとして適用する。ある種のアッセイ装置にお
いては、上記アレルゲン組成物を変性剤、有機溶媒、架
橋剤または濃塩溶液などの前処理物質と組み合わせる。 予期しないことに、そのようなアレルゲン前処理物質は
、固相上へのアレルゲンの固定化を促進するとともに、
固相上に固定化することのできるアレルゲンの有効量を
増大させることがわかった。固相上の反応または結合部
位は、タンパク質ブロッキング試薬を添加することによ
り任意に修飾することができる。適当なブロッキング試
薬としては、ウマ血清アルブミン、ウシ血清アルブミン
、にべ、およびカゼインなどが挙げられる。 【００１２】加えて、本発明は、アレルゲンを溶媒中に
可溶化して調製したアレルゲン溶液と、変性剤、有機溶
媒、架橋剤または濃塩溶液から選ばれた前処理物質とを
含み、該アレルゲン溶液を該前処理物質と混合し、得ら
れたアレルゲン組成物を試料中のＩｇＥの存在または量
をインビトロ検出するのに使用することをも包含する。 インビトロ検出法には、上記アレルゲン組成物または前
処理したアレルゲン組成物を固相に適用し、試験しよう
とする試料を該固相と接触させてアレルゲン／アレルゲ
ン特異的ＩｇＥ抗体複合体を生成させることにより試料
中の該抗体を該固相上に固定化し、ついで固定化された
アレルゲン特異的抗体を検出することにより試料中の該
抗体の存在または量を決定することが含まれる。 【００１３】一般に、試料中のＩｇＥの存在または量を
決定するために固相を指示試薬と接触させる。指示試薬
には、アレルゲン、ＩｇＥまたは補助特異的結合成分の
いずれかに特異的な結合成分に結合させた標識が含まれ
る。選択した標識は本発明にとって重要ではなく、一般
に、色原体、触媒、蛍光化合物、化学発光化合物、放射
性同位体、コロイド状金属粒子、コロイド状セレン粒子
、染料粒子、酵素、基質、有機ポリマーラテックス粒子
およびリポソームまたはシグナル生成成分を含有する他
のベシクルなどが用いられる。本発明はまた、固相上に
固定化した１種または２種以上のアレルゲンおよび適当
な指示試薬を含むアッセイキットも包含する。本発明の
キットにはアッセイ緩衝液および洗浄試薬が任意に含ま
れていてよい。 【００１４】本発明は、アレルゲン溶液を用いることに
より、共有結合を採用する必要なくアレルゲンを固相物
質上に結合させることができるという発見に基づいてい
る。そのようにして調製した固相は、ついでＩｇＥのイ
ンビトロ診断アッセイに用いることができる。適当な固
相物質としては、硝酸セルロースまたは混合エステルセ
ルロースなどが挙げられる。加えて、アッセイの感度に
関する限り、ある種のアレルゲン濃度が最適であること
もわかった。 【００１５】本発明はまた、固相物質上への結合を改善
するために多くのアレルゲンを前処理することができる
という発見にも基づいている。本発明のアレルゲン前処
理法は、アッセイを通じて、固相へのアレルゲンの結合
を促進させる働きをする。アレルゲン前処理組成物およ
び方法はまた、予期しないことに、固相に結合させ得る
アレルゲンの量を増加させることによって、アッセイに
最適な量でアレルゲンを固相に結合させることを可能と
した。 【００１６】本発明は、結合アッセイに使用する固相装
置を調製するためのアレルゲン組成物を包含する。本発
明のアレルゲン組成物は、予期しないことに、固相物質
へのアレルゲンの結合を促進することがわかった。その
結果、より多量のアレルゲンを固相上に固定化すること
ができるため、アッセイの間に抗体を結合させるための
抗原部位を一層多く提供することができる。 【００１７】本発明はまた、ある種のアレルゲン組成物
を変性剤、有機溶媒、架橋剤および濃塩溶液などの物質
で前処理することをも包含する。これら物質の１種また
は２種以上でアレルゲン組成物を前処理することは、予
期しないことに、アッセイ手順（複数の洗浄工程または
他の仕方で固相からアレルゲンを除去させる操作を含む
）を通じて、固相へのアレルゲンの結合を促進させるこ
とがわかった。加えて、アレルゲンの前処理により、結
合アッセイでしばしば採用される上昇温度における結合
性能も向上する。 【００１８】適当な変性剤の例としては、塩酸や酢酸な
どの酸などが挙げられるが、これらに限られるものでは
ない。テトラヒドロフランなどの有機溶媒もアレルゲン
前処理に適している。塩化ナトリウムの濃い溶液などの
濃塩溶液も本発明によるアレルゲン前処理に適している
。アレルゲンの前処理のための適当な架橋剤としては、
ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよび１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ド（ＥＤＡＣ）などが挙げられるが、これらに限られる
ものではない。 【００１９】上記前処理物質と混合したアレルゲン組成
物は、ついで本発明の固相アッセイ装置を調製するのに
用いる。アレルゲン組成物または前処理したアレルゲン
組成物を固相物質に適用し、該固相物質上でアレルゲン
組成物を乾燥させることにより固定化させる。ついで、
固相装置を結合アッセイに用いることができる。結合ア
ッセイとしては、競合アッセイ、サンドイッチアッセイ
および間接アッセイなどが挙げられ、前進アッセイ態様
および逆アッセイ態様の両方を包含するが、これらに限
られるものではない。 【００２０】本発明の好ましい態様においては、ニトロ
セルロースまたはニトロセルロース誘導体または複合体
（酢酸セルロース／硝酸セルロース混合エステルセルロ
ースなど）からできた固相物質上に所望のアレルゲンを
固定化させる。タンパク質であるウシ血清アルブミンに
対するニトロセルロースの最大結合能は約１４０μｇ／
ｃｍ２である。この結合能値は、本発明の固相反応また
は結合範囲の所望のサイズに従って変えることができ、
２．２ｍｇ／ｍｌの値を得ることができる。この濃度は
、すべてのアレルゲンの開始タンパク質濃度として用い
ることができるが、最適アレルゲン濃度はこの値よりも
上の値または下の値である。下記実施例に記載するよう
に、異なる濃度のアレルゲンを前処理し、ニトロセルロ
ース上に固定化し、陽性の試料で試験する。アレルゲン
濃度は、シグナルに対して濃度をプロットしたときに放
物曲線が得られ、最大検出シグナルからアレルゲンの最
適濃度を決定できるようにして調節する。 【００２１】試験したアレルゲンタンパク質の濃度は、
約０．０５ｍｇ／ｍｌ溶媒（前処理の前）から約１７０
ｍｇ／ｍｌの範囲であった。試験した各アレルゲンの最
も有効な濃度については、下記実施例に示す通りである
。 本発明は、下記実施例から一層完全に理解されるであろ
う。これら実施例は、本発明者らによって現在のところ
考えられる最良の態様を示すものである。しかしながら
、これら実施例は説明のためにのみ示すものであり、限
定を意図するものではないことを理解すべきである。 【００２２】本発明の特定の態様について記載する前に
、幾つかの語句を定義しておく。本明細書においてアレ
ルゲン含有量はすべて、クーマシーブルーやニンヒドリ
ンなどの当該技術分野でよく知られた適当なタンパク質
試験を用いて決定した、アレルゲン溶液のタンパク質含
有量をいう。 【００２３】本明細書において「分析対象物」とは、試
料中で検出すべき、または試料から分離すべき物質をい
う。分析対象物は、それに対して特異的結合成分が天然
に存在するか、または特異的結合成分を調製することの
できるいかなる物質であってもよい。加えて、分析対象
物は、２種以上の特異的結合成分と結合してもよい。 「分析対象物」にはまた、あらゆる抗原性物質、ハプテ
ン、抗体、およびこれらの組み合わせも含まれる。本発
明においては、検出もしくは測定すべき主たる分析対象
物はＩｇＥ抗体である。 【００２４】本発明において「試料」とは、実質的にあ
らゆる液体試料をいう。試料は、生理学的流体、たとえ
ば血液、唾液、眼の水晶体液、脳脊髄液、汗、尿、母乳
、腹水、粘液、滑液、腹腔内液、羊水などのあらゆる所
望の採取源から得られたものであってよい。液体試料は
、使用前に、血液から血漿を調製したり、粘液を希釈し
たりなどの前処理を施してもよい。そのような処理法に
はまた、分離、濾過、蒸留、濃縮、妨害成分の不活化、
および試薬の添加なども含まれる。加えて、固体試料も
液体媒体を生成するように修飾すれば使用することがで
きる。 【００２５】本明細書において「特異的結合成分」とは
、特異的結合ペア、すなわち２つの異なる分子において
一方の分子が他方の分子に化学的または物理的手段によ
り特異的に結合する場合の一方の分子をいう。アレルゲ
ンと抗体のペアのような抗原と抗体との特異的結合ペア
に加えて、他の特異的結合ペアとしては、ビオチンとア
ビジン、炭水化物とレクチン、相補的ヌクレオチド配列
、相補的ペプチド配列、エフェクター分子とレセプター
分子、酵素コファクターと酵素、酵素インヒビターと酵
素、ペプチド配列と該配列タンパク質に特異的な抗体、
ポリマー酸と塩基、染料とタンパク質結合剤、ペプチド
と特異的タンパク質結合剤（たとえば、リボヌクレアー
ゼ、Ｓ−タンパク質およびリボヌクレアーゼ、Ｓ−タン
パク質など）などが挙げられる。 【００２６】さらに、特異的結合ペアにはまた、元の特
異的結合成分の類似体、たとえば分析対象物類似体など
の成分も含まれる。特異的結合成分が免疫反応性の物質
である場合は、たとえば、抗体、抗原、ハプテン、また
はそれらの複合体であってよい。抗体を使用する場合は
、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体、組換
えタンパク質または組換え抗体、またはそれらの混合物
またはそれらの断片、並びに抗体と他の特異的結合成分
との混合物であってよい。そのような抗体の調製方法の
詳細およびそのような抗体が特異的結合成分として使用
するのに適していることについては、当業者によく知ら
れている。 【００２７】本明細書において「指示試薬」とは、特異
的結合成分に結合させた標識をいう。指示試薬は、試料
中の分析対象物の量に相関したレベルの検出可能なシグ
ナルを生成する。一般に、指示試薬は固相物質上に捕捉
した後に検出もしくは測定するが、未結合の指示試薬を
測定することによってアッセイ結果を決定することもで
きる。指示試薬中の特異的結合成分は、分析対象物、補
助特異的結合成分、捕捉試薬またはそれらの複合体への
標識の間接的結合を可能にする。 【００２８】本明細書において「標識」とは、特異的結
合成分に結合して、視覚手段または機器手段により検出
可能なシグナルを生成することのできる物質をいう。本
発明に使用するのに適した標識としては、色原体；触媒
；蛍光化合物；化学発光化合物；放射性同位体；コロイ
ド状金属粒子およびコロイド状非金属粒子、染料粒子、
酵素または基質、または有機ポリマーラテックス粒子な
どの直接視覚標識；シグナル生成物質を含有するリポソ
ームまたは他のベシクルなどが挙げられる。 【００２９】標識に適した多くの酵素が米国特許第４，
２７５，１４９号明細書の１９〜２３欄に記載されてい
る（該文献を参照のため本明細書に引用する）。たとえ
ば、本発明に有用な酵素／基質シグナル生成系は、基質
として５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフ
ェートまたはその誘導体またはその類似体を用いた酵素
アルカリホスファターゼである。西洋ワサビペルオキシ
ダーゼを用いる場合は、酵素基質としてｏ−フェニレン
ジアミンまたは４−クロロナフトールを加えて発色生成
物を生成させ、この生成物を視覚または機器を用いて検
出および／または測定することができる。 【００３０】他のシグナル生成系においては、標識は蛍
光化合物であってよく、その場合は検出可能なシグナル
を生成させるために酵素的操作は必要でない。フルオレ
セイン、フィコビリンタンパク質、ローダミンおよびそ
れらの誘導体および類似体などの蛍光分子が、この系に
標識として使用するのに適している。 【００３１】特に好ましい標識としては、さらにシグナ
ル生成試薬を用いることなく試料中の分析対象物の存在
または濃度を直接発色読み取りすることが可能な、視覚
的に検出可能な発色粒子が挙げられる。そのような粒子
として用いるための物質としては、米国特許第４，３１
３，７３４号および同第４，３７３，９３２号各明細書
に開示されているように、コロイド状金属（たとえば、
金など）、および染料粒子などが挙げられる。コロイド
状セレン粒子などのような非金属コロイドの調製および
使用は、本願出願人の出願に係る米国特許出願第０７２
．０８４号明細書（１９８７年７月９日出願）に開示さ
れている（該文献を参照のため本明細書に引用する）。 標識として使用するための有機ポリマーラテックス粒子
は、本願出願人に係る米国特許出願第２４８，８５８号
明細書（１９８８年９月２３日出願）に開示されている
（該文献を参照のため本明細書に引用する）。 【００３２】標識かまたは特異的結合成分を変えること
により種々の異なる指示試薬を調製することができる。 この選択には、検出すべき分析対象物および所望の検出
手段に関する考慮が含まれることは当業者により評価さ
れるであろう。標識がそれ自体で、または１種または２
種以上の別のシグナル生成成分とともに用いて検出可能
なシグナルを生成することができる限り、特定の標識を
選択することは重要ではない。そのような標識／特異的
結合成分結合体の調製法の詳細は、当業者にはよく知ら
れている。 【００３３】本明細書において「シグナル生成成分」と
は、他のアッセイ試薬または分析対象物と反応して、分
析対象物の存在を示し視覚または機器手段により検出し
得る反応生成物またはシグナルを生成し得る物質をいう
。本明細書において「シグナル生成系」とは、所望の反
応生成物またはシグナルを生成させるのに必要な一群の
アッセイ試薬をいう。すなわち、１種または２種以上の
シグナル生成成分を用いて標識と反応させて検出可能な
シグナルを生成させることができる、すなわち、標識が
酵素である場合は、該酵素を１種または２種以上の基質
またはべつの酵素と反応させて検出可能な反応生成物を
得ることにより検出可能なシグナルを増幅させることが
できる。 【００３４】本明細書において「捕捉試薬」とは、捕捉
結合成分に結合した分析対象物または指示試薬を未結合
の分析対象物または未結合の指示試薬から分離すること
ができるように、固相物質に結合させた捕捉結合成分を
いう。一般に、固相物質への捕捉結合成分の結合は実質
的に可逆的なものである。 【００３５】アッセイに使用する捕捉試薬を調製するに
当たって、一旦、捕捉結合成分（たとえば、アレルゲン
など）を固相上に固定化したら、固相の残りの表面は一
般に適当な不活化溶液、たとえばウシ血清アルブミン、
ウマ血清アルブミン、カゼインまたは他のタンパク質性
の物質でブロックして、特異的結合成分を含有する反応
混合物を固相と接触させた場合にタンパク質の非特異的
な結合を防御する。 【００３６】アッセイ成分の間で複合体が生成されたら
、固相を分離手段として用いることができる。たとえば
、反応混合物を捕捉試薬と接触させると、固相は新たに
生成した反応複合体を保持するであろう。 【００３７】アッセイ装置は多くの態様であってよく、
そのうちの幾つかは固相用に選択した物質に依存する。 「固相物質」とは、あらゆる適当なクロマトグラフィー
用物質、吸湿性物質、多孔質物質、または特異的結合成
分の固定化に用いることが当業者によく知られた他の通
常の固体物質などをいう。固相物質としては、繊維ガラ
ス、ナイロンまたはセルロースまたはその誘導体（たと
えば、硝酸セルロース、または酢酸セルロース／硝酸セ
ルロース混合エステルセルロースなど）などが挙げられ
る。しかしながら、固相は多孔質物質に限られるもので
はない。固相物質にはまた、ポリマービーズ、ガラスビ
ーズ、微細粒子、チューブ、シート、プレート、スライ
ド、マグネチックビーズ、１または２以上の反応ウエル
を有するマイクロタイタープレート、またはガラス製も
しくはプラスチック製の試験管などが含まれるが、これ
らに限られるものではない。 【００３８】固相物質としては、天然に存在する物質、
合成物質、または天然に存在する物質で合成的に修飾し
たものなどを用いることができ、その例としては、たと
えば紙、セルロースおよびセルロース誘導体（酢酸セル
ロース、ニトロセルロース、および酢酸セルロース／硝
酸セルロース混合エステルセルロースなど）を含むセル
ロース物質などの多糖類；シリカ；繊維ガラス；不活化
アルミナ、ケイソウ土、または多孔質ポリマーマトリッ
クス中に均一に分散させた他の無機微細物質（ポリマー
としては、塩化ビニル、塩化ビニル−プロピレンコポリ
マー、および塩化ビニル−酢酸ビニルコポリマーなど）
；天然に存在する布（たとえば、綿など）および合成の
布（たとえば、ナイロンなど）；シリカゲル、アガロー
ス、デキストランおよびゼラチンなどの多孔質ゲル；ポ
リアクリルアミドなどの多孔質フィルム；磁性粒子；マ
イクロタイタープレート；ポリスチレンチューブ；タン
パク質結合膜；アガロース；セファデックス（ファルマ
シア・ファイン・ケミカルズ、ピスカタウエイ、ニュー
ジャージー）；トリスアクリル（Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ）
［ポワント・ジラール（Ｐｏｉｎｔｅｔ−Ｇｉｒａｒｄ
）、フランス］；ケイ素粒子；多孔質繊維マトリックス
などが挙げられる。固相物質は妥当な固有の強度を有し
ているか、または支持体手段により強度を付与し得なけ
ればならず、また検出可能シグナルの生成を妨害しては
ならない。 【００３９】場合により、捕捉試薬の特異的結合成分を
粒子（たとえば、微細粒子など）に結合させることがで
きる。これら微細物質は固相物質として働き、カラム中
に保持し、可溶性試薬と試料との混合物中に懸濁するか
、他の固相基体物質により保持および固定化する。「保
持および固定化」とは、固相基体物質に結合した微細粒
子がその物質内のいずれかの位置に実質的に移動し得な
いことを意味する。微細粒子は当業者により、ポリスチ
レン、ポリメチルアクリレート、ポリプロピレン、ポリ
テトラフルオロエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリ
カーボネートまたは同様の物質からできたものを含む、
あらゆる適当なタイプの微細な粒子から選択することが
できる。微細粒子のサイズは重要ではないが、固相基体
物質が多孔質であるものを使用した場合は平均孔径より
も小さな平均直径を有するものが好ましい。 【００４０】「補助特異的結合成分」とは、捕捉試薬や
指示試薬の特異的結合成分に加えて使用する特異的結合
成分をいう。アッセイにおいて１種または２種以上の補
助特異的結合成分を用いることができる。たとえば、補
助特異的結合成分は、指示試薬の特異的結合成分が補助
特異的結合成分に結合することができ、該補助特異的結
合成分が今度は分析対象物に結合することができるよう
なアッセイにおいて用いることができる。 【００４１】本発明はイムノアッセイに関する。それゆ
え、本発明の開示および特許請求の範囲の理解を容易に
するため、下記にイムノアッセイの説明およびイムノア
ッセイに関連して使用される語句の定義を挙げる。 【００４２】本発明の方法の一態様においては、固相に
結合させたアレルゲンを捕捉試薬が含む、サンドイッチ
アッセイを行うことができる。この捕捉試薬を、分析対
象物を含有していると思われる試料、および標識に結合
させた分析対象物特異的成分を含む指示試薬と接触させ
る。これら試薬は試料と同時に接触させることもできる
し、また連続的に加えることもできる。結合反応の結果
、捕捉試薬／分析対象物／指示試薬複合体を生成する。 アッセイにはまた、これら生成した複合体を過剰の試薬
および試料から分離するための洗浄工程も含まれていて
よい。ついで、未反応の指示試薬かまたは固相上に保持
された複合体のいずれかを観察して、それらに結合した
標識を検出しその量を測定する。分析対象物が試料中に
存在する場合には、標識は固相物質上に存在するであろ
う。固相上に存在する標識の量は、試料中の分析対象物
の量に正比例する。 【００４３】本発明はまた、競合アッセイを行うために
使用することもできる。競合アッセイの一態様において
、捕捉試薬には再び固相物質に結合させた特異的結合成
分が含まれる。この捕捉試薬を、試料、およびシグナル
生成化合物で標識した分析対象物または分析対象物類似
体を含む指示試薬と接触させる。この指示試薬と分析対
象物とは、捕捉試薬への結合に対して競合する。競合的
結合反応の結果、捕捉試薬／分析対象物複合体または捕
捉試薬／指示試薬複合体が生成する。捕捉試薬／指示試
薬複合体は指示試薬中の標識により検出することができ
る。競合アッセイにおいては、固相に結合する標識の量
は試料中に存在する分析対象物の量に反比例する。 【００４４】本発明はまた、１種または２種以上の補助
特異的結合成分を用いた間接イムノアッセイにおいても
用いることができる。たとえば、捕捉試薬／分析対象物
／抗分析対象物抗体／指示試薬複合体の生成を伴う間接
サンドイッチイムノアッセイを行うことができ、この場
合、指示試薬は、分析対象物に特異的な補助特異的結合
成分の特異的結合パートナーである。本発明はまた、前
進イムノアッセイプロトコールおよび逆イムノアッセイ
プロトコールにおいて用いることもできる。 【００４５】つぎに実施例の基づいて本発明をさらに詳
しく説明するが、本発明はこれらに限られるものではな
い。 実施例１ 　　本実施例においては、アルテルナリア・アルテルナ
タアレルゲンを固相への結合のため前処理する。３７％
ホルムアルデヒド水溶液（１２．５μｌ）を脱イオン水
中のアルテルナリア・アルテルナタ（２８．８μｇ／ｍ
ｌ）の溶液（１００μｌ）と混合する。３７％ホルムア
ルデヒド水溶液を用いた場合には、前処理に有効なホル
ムアルデヒドの量は約１０μｌ〜約２０μｌの範囲であ
ることがわかった。得られた混合物を４℃で約１０時間
インキュベートし、インキュベートした組成物を約２０
℃で３０〜６０分間放置する。ついで、この混合物を遠
心分離にかけ、得られた上澄み液（前処理アルテルナリ
ア・アルテルナタアレルゲン組成物）をデカントする。 この前処理組成物を多孔質硝酸セルロースのディスク（
厚さ約１４０μｌ、直径約３ｍｍ）上に注ぎ、乾燥させ
る。その結果、アレルゲンは固相物質上に固定化される
。ついで、ディスクの残りの表面を１０％ウマ血清溶液
でブロックする。 【００４６】ついで、固相結合アレルゲン、すなわちア
ルテルナリア・アルテルナタ捕捉試薬を酵素イムノアッ
セイ（「ＥＩＡ」）に用いる。ＥＩＡ法には下記工程が
含まれていた。試験しようとする試料（たとえば、血清
）を捕捉試薬と接触させて固相上にアレルゲン特異的Ｉ
ｇＥ抗体を固定化させる。場合により、抗体固定化工程
の後に洗浄工程を行って未結合の試料を除去する。つい
で、捕捉試薬を酵素標識抗ＩｇＥ抗体（指示試薬）と接
触させると、試料中にＩｇＥが存在しておれば指示試薬
は固相に結合したＩｇＥと結合する。ついで、固相を洗
浄して未結合の指示試薬を除去する。固相を酵素基質シ
グナル生成成分と接触させ、複合体中の指示試薬の酵素
成分が基質と反応して検出可能なシグナルを生成するよ
うにする。検出前に固相を３回目の洗浄に供して未結合
の基質を除去してもよい。検出されたシグナルは、試料
中に存在するアレルゲン特異的ＩｇＥの量に正比例する
。 【００４７】ＥＩＡ法の一態様においては、酵素標識は
アルカリホスファターゼであり、基質は５−ブロモ−４
−クロロ−３−インドリルホスフェートであり、検出ま
たは測定工程は反射分光光度計を用いて行う。固相に基
質を加えるとディスクは暗青色に変わる、すなわち、血
清試料がアルテルナリア・アルテルナタに特異的なＩｇ
Ｅ抗体を含有している場合に陽性のアッセイ結果が得ら
れる。このアッセイ法を異なる患者からの血清について
繰り返すと、得られた結果は、別の試験、たとえば当業
者によく知られた放射アレルゲン吸着テスト（ラスト法
）や皮膚刺（ｓｋｉｎｐｒｉｃｋ）試験などで同じ血清
試料から得られた結果と相関関係があることがわかった
。 【００４８】実施例２ 　　本実施例では、固相として用いたニトロセルロース
ディスクは、ニトロセルロースのシートをにかわ付けし
たマイラーシートからなるラミネート上の多くのディス
クのうちの一つであった。円形の形をニトロセルロース
シート上に浮き彫りにさせて各ディスクを形成させる。 ニトロセルロースシート中の微細孔の直径は約４５０ｎ
ｍであった。個々の各ディスクには別々のアレルゲンを
結合させる。それゆえ、この装置は複数のアレルゲンに
対する抗体を検出するのに用いることができる。 【００４９】実施例３ 　　シラカンバアレルゲン（１３７μｇ）またはイヌア
レルゲン（２８０μｇ）を含有する溶液（１００μｌ）
を３７％ホルムアルデヒド水溶液（１２．５μｌ）と混
合し、インキュベートして前処理アレルゲン組成物を生
成させる他は実施例１の手順を用いる。３７％ホルムア
ルデヒド水溶液を用いる場合は、前処理に有効なホルム
アルデヒドの量は約１０μｌ〜約１５μｌであることが
わかった。 これら組成物を実質的に実施例１および２に記載の手順
に従って用いて装置を調製し、ついで、この装置を血清
試料を試験するのに用いる。アッセイ結果は、他の手段
で同じ血清試料を試験して得られた結果と相関関係を有
することがわかった。固相上に固定化されたアレルゲン
に特異的なＩｇＥが血清試料中に含まれている場合には
、ディスクは暗青色に変わる。 【００５０】実施例４ 　　テトラヒドロフラン（２５μｌ）を、脱イオン水中
にバミューダグラスアレルゲン（５１０μｇ）を含有す
る溶液（１００μｌ）と混合する。前処理に有効なテト
ラヒドロフランの量は、約１０μｌ〜約５０μｌの範囲
であることがわかった。得られた混合物を４℃で約１０
時間インキュベートし、このインキュベート組成物を２
０℃で３０〜６０分間放置する。ついで、この溶液を遠
心分離にかけ、得られた上澄み液（前処理バミューダグ
ラス組成物）をデカントする。 【００５１】脱イオン水中にスギアレルゲン（１５０μ
ｇ）、ジューン／ケンタッキーブルーグラスアレルゲン
（５４５μｇ）、ホソムギアレルゲン（４３３μｇ）ま
たはオオアワガエリアレルゲン（４３μｇ）を含有する
溶液（１００μｌ）を用いて上記手順を繰り返す。これ
ら前処理アレルゲン組成物を固相ディスクを調製するの
に用い、また実質的に実施例１に記載の手順に従ったイ
ムノアッセイに用いる。アッセイ結果は、他の手段で同
じ血清試料を試験して得られた結果と相関関係を有する
ことがわかった。固相上に固定化したアレルゲンに特異
的なＩｇＥが血清試料中に含まれている場合には、ディ
スクは暗青色に変わる。 【００５２】実施例５ 　　３７％ホルムアルデヒド水溶液（１５．６μｇ）を
、脱イオン水中にヤマシーダーアレルゲン（７３３μｇ
）を含有する溶液（１００μｌ）と混合する。得られた
混合物を約２０℃で約３０分間インキュベートする。つ
いで、テトラヒドロフラン（２８．７μｌ）を上記イン
キュベート溶液と混合する。前処理に有効ホルムアルデ
ヒドの量は約１０μｌ〜約２０μｌであり、テトラヒド
ロフランの量は約１０μｌ〜約５０μｌであった。この
混合物を４℃で約１０分間インキュベートし、約２０℃
で３０〜６０分間放置する。ついで、この混合物を遠心
分離にかけ、得れらた上澄み液（前処理ヤマシーダーア
レルゲン組成物）をデカントする。 【００５３】ヤマシーダーアレルゲンの代わりに脱イオ
ン水中にカシアレルゲン（７２９μｇ）またはオリーブ
アレルゲン（１６７０μｇ）を含有する溶液（１００μ
ｌ）を用いる他は、上記アレルゲン前処理手順を繰り返
す。これら前処理アレルゲン組成物を実質的に実施例１
および２に記載の手順に従ってイムノアッセイ装置を調
製するのに用いる。ＥＩＡの結果は、他の手段で同じ血
清試料を試験して得られた結果と相関関係を有すること
がわかった。固相上に固定化したアレルゲンに特異的な
ＩｇＥが血清試料中に含まれている場合には、ディスク
は暗青色に変わる。 【００５４】実施例６ 　　ＮａＣｌ水溶液（５Ｍ、１２μｌ）を、脱イオン水
中にクラドスポリウム（９６０μｇ）を含有する溶液（
１００μｌ）と混合する。得られた混合物を約４℃で約
１０時間インキュベートし、ついで、このインキュベー
ト組成物を約２０℃で３０〜６０分間放置する。ついで
、この混合物を遠心分離にかけ、得られた上澄み液（前
処理クラドスポリウムアレルゲン組成物）をデカントす
る。使用した濃塩溶液のモル値（約０．５Ｍ〜約１０Ｍ
の範囲の値である）に依存して、前処理に有効なＮａＣ
ｌ水溶液の量は約１０μｌ〜約２０μｌである。 【００５５】脱イオン水中に羽毛アレルゲン（７μｇ）
を含有する溶液（１００μｌ）を用いる他は、上記手順
を繰り返す。ついで、前処理アレルゲン組成物を用いて
アッセイ装置を調製し、実質的に実施例１に記載の手順
に従ったイムノアッセイに用いる。本発明の組成物およ
び装置を用いて得られたアッセイ結果は、他の手段で同
じ血清試料を試験して得られた結果と相関関係を有する
ことがわかった。固相上に固定化したアレルゲンに特異
的なＩｇＥが血清試料中に含まれている場合には、ディ
スクは暗青色に変わる。 【００５６】実施例７ 　　１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
カルボジイミド（ＥＤＡＣ）の水溶液（１０μｌ、５０
ｍｇ／ｍｌ）を、脱イオン水中にダーマトファゴイデス
・ファリナエ（２８０μｇ）を含有する溶液（１００μ
ｌ）と混合する。前処理の第一段階に有効なＥＤＡＣの
量は、約５．０μｌ〜約１５μｌであった。得られた混
合物を約２２℃で約１５分間インキュベートする。１０
μＭリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７）中に水素化ホウ素ナト
リウム（ＮａＢＨ４、２０ｍｇ／ｍｌ）を含有する溶液
（２μｌ）を上記インキュベート溶液と混合し、この混
合物を約４℃でさらに１０時間インキュベートする。前
処理の第二段階に有効なＮａＢＨ４の量は、約１．０μ
ｌ〜約５．０μｌであった。ついで、混合物を約２０℃
で約３０〜６０分間放置する。この混合物を遠心分離に
かけ、得られた上澄み液（前処理ダーマトファゴイデス
・ファリナエアレルゲン組成物）をデカントする。 【００５７】脱イオン水中にダーマトファゴイデス・プ
テロニシヌス（２６３μｇ）を含有する溶液（１００μ
ｌ）を用い、上記手順を繰り返す。これら前処理アレル
ゲン組成物を実質的に実施例１に記載の手順に従って用
いて、イムノアッセイのための処理ディスクを調製する
。 ＥＩＡの結果は、他の手段で同じ血清試料を試験して得
られた結果と相関関係を有することがわかった。固相上
に固定化したアレルゲンに特異的なＩｇＥが血清試料中
に含まれている場合には、ディスクは暗青色に変わる。 【００５８】実施例８ 　　１００％酢酸（１２．５μｌ、有効量は約５．０μ
ｌ〜約３０μｌである）を、脱イオン水中にシロザアレ
ルゲン（１１７６μｇ）を含有する溶液（１００μｌ）
と混合する。得られた混合物を約２２℃で約５分間イン
キュベートし、その後、６Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を加えて
ｐＨを約７．０に調節する。この中和溶液を約４℃で１
０時間インキュベートし、ついで約２０℃で３０〜６０
分間放置する。ついで、この混合物を遠心分離にかけ、
得られた上澄み液（前処理シロザアレルゲン組成物）を
デカントする。 【００５９】脱イオン水中にクワの実アレルゲン（４０
μｇ）を含有する溶液（１００μｌ）を用い、上記手順
を繰り返す。これら前処理アレルゲン組成物を用い、実
質的に実施例１に記載の手順に従った酵素イムノアッセ
イのためのディスクを調製する。アッセイの結果は、他
の手段で同じ血清試料を試験して得られた結果と相関関
係を有することがわかった。固相上に固定化したアレル
ゲンに特異的なＩｇＥが血清試料中に含まれている場合
には、ディスクは暗青色に変わる。 【００６０】実施例９ 　　６Ｎ−ＨＣｌ水溶液（２４μｌ、有効量は約６．０
μｌ〜約３０μｌである）を、ペニシリウム（１２０μ
ｇ）を含有する溶液（１００μｌ）と混合する。得られ
た混合物を約２０℃で約５分間インキュベートし、その
後、６Ｎ−ＮａＯＨ水溶液を加えてｐＨを約７．０に調
節する。 この中和溶液を約４℃で１０時間インキュベートし、つ
いで約２０℃で３０〜６０分間放置する。ついで、この
混合物を遠心分離にかけ、得られた上澄み液（前処理ペ
ニシリウムアレルゲン組成物）をデカントする。 【００６１】脱イオン水中にパリエタリアアレルゲン（
４００μｇ）を含有する溶液（１００μｌ）を用い、上
記手順を繰り返す。これら前処理アレルゲン組成物を用
い、実質的に実施例１に記載の手順に従ってディスクを
調製し、ＥＩＡにおいて血清試料を試験する。アッセイ
の結果は、他の手段で同じ血清試料を試験して得られた
結果と相関関係を有することがわかった。固相上に固定
化したアレルゲンに特異的なＩｇＥが血清試料中に含ま
れている場合には、ディスクは暗青色に変わる。 【００６２】実施例１０ 　　未処理アレルゲン組成物には、脱イオン水中に約０
．５〜約５０ｍｇ／ｍｌのアスペルギルスアレルゲン、
約０．６〜約２０．６ｍｇ／ｍｌのネコアレルゲン、約
０．１〜約１０．０ｍｇ／ｍｌのニレアレルゲン、約０
．４〜約１００ｍｇ／ｍｌの家ほこりアレルゲン、約０
．１〜約１１．５ｍｇ／ｍｌのカエデアレルゲン、約０
．３〜約９０．４ｍｇ／ｍｌのヨモギアレルゲンおよび
約１．７〜約１３０．４ｍｇ／ｍｌのオオバコアレルゲ
ンが含まれていた。 【００６３】ついで、これら溶液を実質的に実施例１に
記載の手順に従って用いてディスクを調製し、ＥＩＡに
おいて血清試料を試験するのに用いる。アッセイの結果
は、他の手段で同じ血清試料を試験して得られた結果と
相関関係を有することがわかった。固相上に固定化した
アレルゲンに特異的なＩｇＥが血清試料中に含まれてい
る場合には、ディスクは暗青色に変わる。 【００６４】実施例１１ 　　実施例１および３〜９に記載の手順に従って調製し
アレルゲン含量がそれぞれ異なる前処理アレルゲン組成
物を用い、一連の血清試料中のＩｇＥについて試験する
。 一層濃いアレルゲン溶液で陽性の試験結果が得られた血
清試料で最大の陽性ＩｇＥ試験結果が得られなかった組
成物について「希釈しすぎ」として、一層薄いアレルゲ
ン溶液で陽性の試験結果が得られた血清試料で最大の陽
性ＩｇＥ試験結果が得られなかった組成物について「濃
縮しすぎ」として前処理アレルゲン組成物を分類するこ
とにより、アレルゲン濃度の上限および下限を設定した
。 試験したアレルゲン濃度は、水１ｍｌ当たり約０．０５
ｍｇのアレルゲン（前処理の前）から約１７０ｍｇ／ｍ
ｌの範囲であった。それら試験結果を、試験した各アレ
ルゲンについて最も有効な濃度として第１表に示す。 【００６５】 　　　　第１表 　　アレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　有効濃
度範囲アルテルナリアアレルゲン　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　０．０５〜４．０ｍｇ／ｍｌアス
ペルギルス・フミガツスアレルゲン　　　　　　　　０
．５〜５０．０ｍｇ／ｍｌバミューダグラスアレルゲン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８〜８１．
６ｍｇ／ｍｌシラカンバアレルゲン　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　０．１〜６．０ｍｇ／
ｍｌヤマシーダーアレルゲン　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　０．０４〜４．５ｍｇ／ｍｌスギ
アレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　０．１〜２０．５ｍｇ／ｍｌクラ
ドスポリウムアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　
　　　　０．０５〜３８．４ｍｇ／ｍｌネコアレルゲン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　０．６〜２０．６ｍｇ／ｍｌイヌアレルゲン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１．３〜３８．４ｍｇ／ｍｌダーマトファゴ
イデス・ファリナエアレルゲン　　　　０．７〜２２．
４ｍｇ／ｍｌダーマトファゴイデス・プテロニシヌスア
レルゲン　０．６〜８４．２ｍｇ／ｍｌ　　　　　　【
００６６】 ニレアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　０．１〜１４６．０ｍｇ／ｍ
ｌ羽毛アレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．０２〜０．２ｍｇ／ｍ
ｌジャイアントブタクサアレルゲン　　　　　　　　　
　　　　　０．２〜１４８．２ｍｇ／ｍｌ家ほこりアレ
ルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　０．４〜１００ｍｇ／ｍｌジューン／ケンタッ
キーブルーグラスアレルゲン　０．０５〜２１．８ｍｇ
／ｍｌシロザアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　０．２〜４７．０ｍｇ／
ｍｌカエデアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．１〜１６６．３ｍｇ／
ｍｌヨモギアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．３〜９０．４ｍｇ／ｍ
ｌクワの実アレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．１〜１２ｍｇ／ｍｌカシア
レルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　０．２〜２９．２ｍｇ／ｍｌオリー
ブアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　０．１〜６６．８ｍｇ／ｍｌ　　　　　
　【００６７】 パリエタリアアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１．０〜４０．０ｍｇ／ｍｌオオバコ
アレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１．７〜１３０．４ｍｇ／ｍｌペニシリウ
ムアレルゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　０．１〜４．８ｍｇ／ｍｌホソムギアレルゲン　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
０．０５〜１７．３ｍｇ／ｍｌショートブタクサアレル
ゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２〜１
５１．６ｍｇ／ｍｌオオアワガエリアレルゲン　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５〜６．６ｍ
ｇ／ｍｌ【００６８】本発明の発明概念が多くの異なる
アレルゲン（特異的結合成分）、固相物質およびイムノ
アッセイプロトコールに適用し得ることは当業者には評
価されるであろう。また、所定の標識、補助特異的結合
成分または固相を選択することは本発明にとって一般に
重要ではないことも評価されるであろう。これら物質は
、選択した所定のアッセイ態様によって最適の結果が得
られるように選択する。本明細書中に示した態様は例示
のためのものであり、本発明を限定することを意図する
ものではない。それゆえ、本発明の記載は詳細に記載し
た特定の態様に本発明を限定するものではなく、上記発
明の詳細な説明および添付の特許請求の範囲の思想およ
び範囲内においてすべての等価物および対象物を包含す
ることを意図するものである。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　試料中のＩｇＥの存在または量を検出
   するための装置であって、 （ａ）固相、および （ｂ）該固相に固定化した少なくとも１種のアレルゲン
   であって、該アレルゲンはアレルゲン組成物として適用
   し、該アレルゲン組成物は該アレルゲンと変性剤、有機
   溶媒、架橋剤および濃塩溶液よりなる群から選ばれた前
   処理物質との組み合わせからなるものからなることを特
   徴とする装置。
2. 【請求項２】　　固相がセルロース、セルロース誘導体
   、シリカ、繊維ガラス、多孔質ポリマーマトリックス、
   多孔質ゲル、ポリマーフィルム、アガロースおよび多孔
   質繊維マトリックスよりなる群から選ばれたものである
   、請求項１に記載の装置。
3. 【請求項３】　　（ａ）該アレルゲン組成物を該固相に
   適用し、ついで（ｂ）該固相を乾燥させて該アレルゲン
   を該固相上に固定化させることを特徴とする、請求項１
   に記載の装置の製造方法。
4. 【請求項４】　　（ａ）アレルゲンを溶媒中に可溶化す
   ることにより調製したアレルゲン溶液、および（ｂ）変
   性剤、有機溶媒、架橋剤および濃塩溶液よりなる群から
   選ばれた前処理物質からなり、該アレルゲン溶液（ａ）
   を該前処理物質（ｂ）と混合してアレルゲン組成物を生
   成させたものであることを特徴とする、試料中のＩｇＥ
   の存在または量のインビトロ検出に使用するためのアレ
   ルゲン組成物。
5. 【請求項５】　　前処理物質が塩酸、酢酸、テトラヒド
   ロフラン、塩化ナトリウム溶液、ホルムアルデヒド、グ
   ルタルアルデヒドおよび１−エチル−３−（３−ジメチ
   ルアミノプロピル）カルボジイミドよりなる群から選ば
   れたものである、請求項４に記載のアレルゲン組成物。
6. 【請求項６】　　アレルゲン組成物が、水中のアレルゲ
   ンタンパク質に基づいて、（ｉ）０．０５〜４．０ｍｇ
   ／ｍｌのアルテルナリアアレルゲン、（ｉｉ）０．０５
   〜５０ｍｇ／ｍｌのアスペルギルスアレルゲン、（ｉｉ
   ｉ）０．８〜８１．６ｍｇ／ｍｌのバミューダグラスア
   レルゲン、（ｉｖ）０．１〜６．０ｍｇ／ｍｌのシラカ
   ンバアレルゲン、（ｖ）０．６〜２０．６ｍｇ／ｍｌの
   ネコアレルゲン、（ｖｉ）０．０４〜４．５ｍｇ／ｍｌ
   のヤマシーダーアレルゲン、（ｖｉｉ）０．１〜２０．
   ５ｍｇ／ｍｌのスギアレルゲン、（ｖｉｉｉ）０．０５
   〜３８．４ｍｇ／ｍｌのクラドスポリウムアレルゲン、
   （ｉｘ）１．３〜３８．４ｍｇ／ｍｌのイヌアレルゲン
   、（ｘ）０．７〜２２．４ｍｇ／ｍｌのダーマトファゴ
   イデス・ファリナエアレルゲン、（ｘｉ）０．６〜８４
   ．２ｍｇ／ｍｌのダーマトファゴイデス・プテロニシヌ
   スアレルゲン、（ｘｉｉ）０．１〜１４６．０ｍｇ／ｍ
   ｌのニレアレルゲン、（ｘｉｉｉ）０．０２〜０．２ｍ
   ｇ／ｍｌの羽毛アレルゲン、（ｘｉｖ）０．２〜１４８
   ．２ｍｇ／ｍｌのジャイアントブタクサアレルゲン、（
   ｘｖ）０．４〜１００ｍｇ／ｍｌの家ほこりアレルゲン
   、（ｘｖｉ）０．０５〜２１．８ｍｇ／ｍｌのジューン
   ／ケンタッキーブルーグラスアレルゲン、（ｘｖｉｉ）
   ０．２〜４７．０ｍｇ／ｍｌのシロザアレルゲン、（ｘ
   ｖｉｉｉ）０．１〜１６６．３ｍｇ／ｍｌのカエデアレ
   ルゲン、（ｘｉｘ）０．３〜９０．４ｍｇ／ｍｌのヨモ
   ギアレルゲン、（ｘｘ）０．１〜１２ｍｇ／ｍｌのクワ
   の実アレルゲン、（ｘｘｉ）０．２〜２９．２ｍｇ／ｍ
   ｌのカシアレルゲン、（ｘｘｉｉ）０．１〜６６．８ｍ
   ｇ／ｍｌのオリーブアレルゲン、（ｘｘｉｉｉ）１．０
   〜４０．０ｍｇ／ｍｌのパリエタリアアレルゲン、（ｘ
   ｘｉｖ）１．７〜１３０．４ｍｇ／ｍｌのオオバコアレ
   ルゲン、（ｘｘｖ）０．１〜４．８ｍｇ／ｍｌのペニシ
   リウムアレルゲン、（ｘｘｖｉ）０．０５〜１７．３ｍ
   ｇ／ｍｌのホソムギアレルゲン、（ｘｘｖｉｉ）０．２
   〜１５１．６ｍｇ／ｍｌのショートブタクサアレルゲン
   、または（ｘｘｖｉｉｉ）０．０５〜６．６ｍｇ／ｍｌ
   のオオアワガエリアレルゲンを含む、請求項３に記載の
   方法。
7. 【請求項７】　　試料中のＩｇＥの存在または量の決定
   方法であって、 （ａ）アレルゲンを変性剤、有機溶媒、架橋剤および濃
   塩溶液よりなる群から選ばれた前処理物質と混合してア
   レルゲン組成物を調製し、 （ｂ）該アレルゲン組成物を固相上に固定化し、（ｃ）
   試料を該固相と接触させてアレルゲン／アレルゲン特異
   的ＩｇＥ抗体複合体を生成させることにより試料中の該
   抗体を該固相上に固定化させ、ついで（ｄ）該固定化さ
   れたアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体を検出して試料中の該
   ＩｇＥの存在または量を決定することを特徴とする方法
   。
8. 【請求項８】　　前処理物質が塩酸、酢酸、テトラヒド
   ロフラン、塩化ナトリウム溶液、ホルムアルデヒド、グ
   ルタルアルデヒドおよび１−エチル−３−（３−ジメチ
   ルアミノプロピル）カルボジイミドよりなる群から選ば
   れたものである、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】　　試料中のＩｇＥの存在または量の決定
   方法であって、（ａ）固相上に固定化した少なくとも１
   種のアレルゲンを調製し、その際、該アレルゲンは、（
   ｉ）該アレルゲンを溶媒中に可溶化することにより調製
   したアレルゲン溶液、および （ｉｉ）変性剤、有機溶媒、架橋剤および濃塩溶液より
   なる群から選ばれた前処理物質からなり、該アレルゲン
   溶液（ｉ）を該前処理物質（ｉｉ）と混合することによ
   り調製したアレルゲン組成物として適用し、（ｂ）試料
   を該固相と接触させてアレルゲン／アレルゲン特異的Ｉ
   ｇＥ抗体複合体を生成させることにより試料中の該抗体
   を該固相上に固定化させ、ついで（ｃ）該固定化された
   アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体を検出して試料中の該Ｉｇ
   Ｅの存在または量を決定することを特徴とする方法。
10. 【請求項１０】　　試料中のＩｇＥの存在または量を決
    定するためのキットであって、（ａ）固相上に固定化し
    たアレルゲンであって、 （ｉ）該アレルゲンを溶媒中に可溶化することにより調
    製したアレルゲン溶液、および （ｉｉ）変性剤、有機溶媒、架橋剤および濃塩溶液より
    なる群から選ばれた前処理物質からなり、該アレルゲン
    溶液（ｉ）を該前処理物質（ｉｉ）と混合することによ
    り調製したアレルゲン組成物として該アレルゲンを固相
    に適用したもの、および（ｂ）試料中のＩｇＥの存在ま
    たは量を決定するための指示試薬であって、アレルゲン
    、ＩｇＥおよび補助特異的結合成分よりなる群から選ば
    れたものに特異的な結合成分に結合した標識を含むもの
    からなることを特徴とするキット。