JPH04217693A - ペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体とその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のト
リペプチド単位を有する、ポリエチレングリコール誘導
体またはその塩及びこれを有効成分とする動物細胞の接
着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤に関する。

［従来の技術］ フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の接着に関与する
タンパク質であり、血小板凝集やガン転移にも関与して
いると考えられている。これらの相互作用は一連の細胞
表面のレセプターにより仲介され、フィブロネクチンは
分子量約２５万の巨大分子であるにもかかわらず、これ
らのレセプターがそのアルギニン−グリシン−アスパラ
ギン酸（以下、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐと略す）配列を
特異的に認識することが明らかにされ、レセプターとの
相互作用に重要なものであることが報告されている（ネ
イチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３０９巻、３０頁、１９
８４年）。以来、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列を有する
オリゴあるいはポリペプチドを用いる研究が進められて
いる。

例えば、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列を有する種々の鎖
状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集を阻
害する方法（高分子学会予稿集（Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｐｒ
ｅ−ｐｒｉｎｔｓ，Ｊａｐａｎ）、第３８巻、３１４９
頁、１９８９年、特開平２−１７４７９７号）、Ａｒｇ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列を有するペプチドを細胞移動抑制
剤として用いる方法（特開平２−４７１６号）、Ａｒｇ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐを固定化したＰＭＭＡ膜を細胞接着膜
として用いる方法（高分子学会予稿集（Ｐｏｌｙｍｅｒ
　Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ，Ｊａｐａｎ）、第３７巻、７０
５頁、１９８８年）が報告されている。さらに、ポリマ
ーにＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを必須構成単位とするペプ
チドを共有結合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓
器用基体として用いる方法（特開平１−３０９６８２号
、特開平１−３０５９６０号）、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−Ｓｅｒ配列を有するポリペプチドを体外血液用血小
板保護剤として用いる方法が開示されている（特開昭６
４−６２１７号）。また、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列
を有するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を有
するポリペプチドを用いて、ガン転移を抑制する方法が
知られている（（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ、Ｍａｃｒｏｍ
ｏｌ．）、第１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１
１巻、２２６頁、１９８９年、（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ．）第６０巻、７２２頁、１９８９年）。

一方、ポリエチレングリコールは、疎水性および親水性
の両親媒性を兼ねそなえた合成高分子である。このポリ
エチレングリコールを用いて酵素の性質を改変する方法
が報告されており（Ｔｒｅｎｄｓｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈ
．、第４巻、６８頁、１９８６年）、ポリエチレングリ
コール誘導体に酵素を導入して様々な酵素の改変に成功
している。このポリエチレングリコール誘導体に、Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列を有するオリゴペプチドあるい
はその繰り返し構造を有するポリペプチドを導入した化
合物は知られておらず、導入した場合にはレセプターと
の結合能の増強および血液中での安定化が期待できる。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は、アルギニン−グリシン−アスパラギン
酸のトリペプチド単位を有する、ポリエチレングリコー
ル誘導体およびその合成法を提供することである。

本発明の他の目的は、これを有効成分とする動物細胞の
接着阻害剤及び血小板凝集・粘着抑制剤を提供すること
である。

［課題を解決するための手段］ 本発明の化合物は、下記一般式［Ｉ］または［ＩＩＩ］
で規定されるペプチド含有ポリエチレングリコール誘導
体であり、分子内に存在するイオン性基は適当なイオン
と塩を形成してもよい。

式中、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ下記一般式［ＩＩ］で表さ
れるペプチド残基を示す。

式中のＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐはそれぞれアルギニン、
グリシン、アスパラギン酸残基を表す。［Ｘ］、［Ｙ］
は存在するかあるいは存在しないアミノ酸残基またはペ
プチド残基を表す。存在する場合には、［Ｘ］、［Ｙ］
がセリン、グリシン、バリン、アスパラギン、プロリン
、システイン、トレオニン残基から選択されるアミノ酸
残基またはペプチド残基であることが好ましく、ペプチ
ド残基を構成するアミノ酸残基の数は２および３が好ま
しい。

特に、［Ｘ］がグリシン残基、［Ｙ］がセリン残基であ
ることが好ましく、［Ｙ］がセリン−プロリンペプチド
残基であることが好ましい。また［Ｘ］、［Ｙ］がとも
に存在しない場合も好ましい。ｎは１から１５０までの
整数が好ましく、５から１２０までの整数が特に好まし
い。ｍは１から５までの整数を表し、ｍが１から３まで
の整数が特に好ましい。Ｚは−ＯＨまたは−ＮＨ２を表
す。

本発明の化合物の好ましい塩の例としてはナトリウム塩
、カリウム塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、塩酸
塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩が挙げられる。

以下に、本発明の好ましい化合物例を挙げるが、本発明
はこれらに限られるものではない。

化合物例 本発明の化合物は、レセプターとの結合能の増強および
血液中での安定化が期待され、アルギニン−グリシン−
アスパラギン酸ペプチド部位がガン細胞、血小板、リン
パ球等の表面に存在するフィブロネクチンレセプターと
結合できることを利用して、ガン転移抑制、血小板凝集
抑制、リンパ球活性化の目的に使用することができる。

次に本発明の化合物の合成法について説明する。

本発明の化合物は、たとえば次の４段階で合成すること
ができる。

■ポリエチレングリコール誘導体［ＩＶ］及び［Ｖ］の
合成 ■保護アミノ酸の逐次延伸による保護ペプチドの合成 ■保護ペプチドのポリエチレングリコール誘導体への導
入による式［ＶＩ］及び［ＶＩＩ］の化合物の合成 Ｒ３及びＲ４は式［ＩＩ］で表されるペプチド残基の保
護体を示す。

■脱保護および精製 以下、各段階を詳細に説明する。

■一般式［ＩＶ］および［Ｖ］で表される化合物は、例
えばＢｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍ
ｍｕｎ、８３，３８５（１９７８）、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ、３３，１４６７（１９８３）に記載されて
いる方法によって合成でき、［Ｖ］の化合物は市販もさ
れている。

■保護アミノ酸を逐次伸長する方法としては、既知の方
法、すなわち、泉屋ら著「ペプチド合成の基礎と実験」
（丸善）やＢｏｄａｎｓｚｋｙ著“ＰＲＩＮＣＩＰＬＥ
Ｓ　ＯＦ　ＰＥＰＴＩＤＥ　ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ”、“
ＴＨＥＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦ　ＰＥＰＴＩＤＥ　ＳＹＮ
ＴＨＥＳＩＳ”（ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，Ｎｅ
ｗＹｏｒｋ）に記載されている方法がいずれも有効であ
る。縮合反応の段階では、ＤＣＣ−ａｄｄｉｔｉｖｅ法
、アジド法、混酸無水物法、活性エステル法のいずれを
採用してもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
とジシクロヘキシルカルボジイミドを併用するＤＣＣ−
ａｄｄｉｔｉｖｅ法が最も良好な結果を与える。

■一般式［ＶＩ］および［ＶＩＩ］で表される化合物は
、一般式［ＩＶ］および［Ｖ］で表されるポリエチレン
グリコール誘導体および保護ペプチドをこれらが溶解す
る有機溶媒中で塩基存在下室温で撹拌、反応させること
により得られる。

■保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた保
護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護条
件は、接触水素添加、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。また、目的物の精製は、ゲルろ過法等を用いる
ことにより行うことができる。

本発明において数平均分子量はゲルパーミエーションク
ロマトグラフィー（ＧＰＣ）による測定結果をもとに算
出することができる。

ＧＰＣの測定条件は以下のとおりである。

カラム：ＴＳＫｇｅｌ（東洋曹達製） Ｇ１０００Ｈｇ 排除限界分子量　１０００ カラム寸法　７．５１Ｄ×６００ｍｍ　１本Ｇ２０００
Ｈｇ 排除限界分子量　１００００ カラム寸法　７．５１Ｄ×６００ｍｍ　２本Ｇ２５００
Ｈｇ 排除限界分子量　２００００ カラム寸法　７．５１Ｄ×６００ｍｍ　１本溶媒：テト
ラヒドロフラン 流量：１ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃ 検出器：ＵＶ、ＲＩ併用 ＴＳＫスタンダードポリエチレンオキサイドで検量線を
作成。

数平均分子量は、高分子学会編「高分子科学実験法」（
東京化学同人１９８１年）Ｐ．２０４〜２０８に記載の
一般的な方法、すなわち線分法を用いて計算した。得ら
れたクロマトグラムを等間隔のカウント（Ｄ）に分割し
てｉ番目の高分子種のベースラインからのピーク高さを
Ｈｉとし、以下の関係式（１）を利用して求めた。

によって ここで、Ｎｉはｉ番目の高分子種の数を表わし、Ｍｉは
ｉ番目の高分子種の分子量を表わす。（Ｍｉは前記の検
量線から求めることができる。）。

本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体は
、細胞接着性蛋白質のコア配列（アルギニン−グリシン
−アスパラギン酸）を有し、該コア配列を介して細胞接
着性蛋白質と同様の機序で細胞に接着する。そのため、
細胞接着性蛋白質のアゴニストまたはアンタゴニストと
して様々の生物活性を示す。その他にも、免疫調整作用
、創傷治癒作用、毛細血管中で起こる癌細胞による血小
板凝集の抑制作用、神経疾患治癒作用等の広範な生物活
性が認められる。

従って、本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール
誘導体は、その少なくとも一種を、場合により慣用の担
体または医薬用製剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒
剤、免疫調整剤、血小板凝集抑制剤または神経疾患治療
剤として患者に投与することが可能である。特に動物細
胞接着阻害剤または血小板凝集・粘着抑制剤としての使
用が好ましい。その投与量は、０．２μｇ／ｋｇ〜４０
０ｍｇ／ｋｇの範囲で症状、年令、体重等に基づいて決
定される。

本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体は
、ペプチド系医薬に一般に使用されている投与方法、即
ち非経口投与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮
下投与等によって投与するのが好ましい。そのような注
射用製剤を製造する場合、本発明のペプチド含有ポリエ
チレングリコール誘導体を例えば、後記実施例で示すよ
うにＰＢＳ（ＮａＨ２ＰＯ４０．００５Ｍ、ＮａＣｌ０
．０７Ｍ）または生理食塩水に溶解して、注射用製剤と
してもよく、あるいは０．１Ｎ程度の酢酸水等に溶解し
た後、凍結乾燥製剤としてもよい。このような製剤には
、グリシンやアルブミン等の慣用の安定化剤を添加して
もよく、血中半減期を延長させる等の目的のために、コ
ラーゲンやリボソームを担体として用いてもよい。

さらに、本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール
誘導体は、例えばリボソーム中に包含したマイクロカプ
セル剤とすれば、経口投与剤とすることも可能であり、
座剤、舌下錠、点鼻スプレー剤等の形にすれば、消化管
以外の粘膜から吸収させることも可能である。

実施例１ 以下に本発明の化合物（１）の合成例を示す。

化合物（１）を以下の合成経路で合成した。なお、アミ
ノ酸、各種保護基および脱保護試薬は通常用いられてい
る略号を使って表した。また、他の化合物例もここに例
示した方法で合成できる。

Ｂｚｌ：ベンジル基、 ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、 Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル基、 ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｚ：ベ
ンジルオキシカルボニル基、 以下にそれぞれの合成法を記す。

（１ｂ）の合成 文献（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．，８３，３８５（１９７８）、Ｌｉｆｅ　Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，３３，１４６７（１９８３））に記載
の方法により、アルドリッチ社から購入した平均分子量
５，０００のポリエチレングリコールモノメチルエーテ
ル（１ａ）（１０ｇ、２ｍｍｏｌ）を充分乾燥し、トル
エン（１００ｍｌ）、炭酸ナトリウム（５ｇ）、塩化シ
アヌル（１．１ｇ、６ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１２
０時間撹拌した。反応液が室温になるまで放冷した後に
ろ過し、ろ液にヘキサンを加えて結晶化した。さらにト
ルエン・アセトン・ヘキサンの溶媒系からこの結晶を再
結晶させ精製し、白色粉末（７ｇ）を得た。

（１ｄ）の合成 文献（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２４，３０
２５（１９７６））に記載の方法により、国産化学（株
）から購入した（１ｃ）（２９．５ｇ、０．１ｍｏｌ）
、トリエチルアミン（１４ｍｌ）、臭化ベンジル（１７
．１ｇ）、酢酸エチル（２００ｍｌ）の混合物を３時間
加熱還流した。反応液を室温になるまで放冷した後に、
１Ｎ炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水各２００ｍ
ｌで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナト
リウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃縮して無色油状物
を得た。この反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィ
ー（溶出液ヘキサン／酢酸エチル４０：１）で精製し、
（１ｄ）（３６ｇ）を得た。

（１ｅ）の合成 （１ｄ）（７．７１ｇ、２０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン
２０ｍｌに溶解し、トリフルオロ酢酸２０ｍｌを加えて
室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧留去した後にクロ
ロホルム１００ｍｌを加え、１Ｎ炭酸水素ナトリウム水
溶液、飽和食塩水各１００ｍｌで数回洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除き
、ろ液を減圧濃縮して無色油状物を得た。これとＢｏｃ
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）（国産化学（株）から購入）（６．
４７ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（４．５４ｇ、２２ｍ
ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．７６ｇ、１８ｍｍｏｌ）、Ｄ
ＭＦ８０ｍｌの混合物を０℃で３時間、さらに室温で１
２時間撹拌した。ＤＣＵｒｅａを除去した後に溶媒を減
圧留去し、クロロホルム１００ｍｌを加え、１Ｎ炭酸水
素ナトリウム水溶液、飽和食塩水各２００ｍｌで洗浄し
、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ
過して除き、ろ液を減圧濃縮し、ｔ１ｃ（薄層クロマト
グラフィー）で単独スポットなので精製することなく次
の反応に用いた。

（１ｆ）の合成 （１ｅ）の合成と同様に行った。トリフルオロ酢酸で脱
保護した後に、ＢｏｃＧｌｙ（国産化学（株）から購入
）（３．５０ｇ、２０ｍｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（４．５４
ｇ、２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．７６ｇ、１８ｍｍ
ｏｌ）、ＤＭＦ８０ｍｌを加えて縮合反応した。ｔ１ｃ
で単独スポットなので精製することなく次の反応に用い
た。

（１ｇ）の合成 （１ｅ）の合成と同様に行った。トリフルオロ酢酸で脱
保護した後に、ＢｏｃＡｒｇ（Ｚ）２（国産化学（株）
から購入）（１０．８３ｇ、２０ｍｍｍｏｌ）、ＤＣＣ
（４．５４ｇ、２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．７６ｇ
、１８ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ８０ｍｌを加えて縮合反応し
た。クロマトグラフィー（溶出液クロロホルム・メタノ
ール９９：１）により精製して、（１ｇ）の白色粉末１
４．４ｇを得た。

（１ｈ）の合成 （１ｇ）（１．０３ｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン１
０ｍｌに溶解し、トリフルオロ酢酸１０ｍｌを加えて室
温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧留去した後にクロロ
ホルム１００ｍｌを加え、１Ｎ炭酸水素ナトリウム水溶
液、飽和食塩水各１００ｍｌで数回洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除き、
ろ液を減圧濃縮して白色粉末を得た。これと（１ｂ）（
２．５ｇ）、トリエチルアミン（０．１ｇ）、クロロホ
ルム５０ｍｌの混合物を室温で２４時間撹拌した。ゲル
ろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−６０）により精製し、
（１ｈ）を３．１ｇ得た。

（１）の合成 （１ｈ）（３．１ｇ）を酢酸５０ｍｌに溶解し、１０％
パラジウム炭素１ｇを加え、室温で常圧加水素分解を２
４時間行った。触媒をセライトを用いてろ別し、溶媒を
減圧留去した。ゲルろ過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−６
０）により精製し、（１）を２．５ｇ得た。

アミノ酸分析：Ｇｌｙ（１．０３）、Ａｓｐ（０．９８
）、Ｓｅｒ（０．９２） 数平均分子量：６０００ 実施例２ 実施例１記載の方法にしたがい、化合物（２）を合成し
た。平均分子量５，０００のポリエチレングリコールモ
ノメチルエーテルを用いて、ポリエチレングリコール誘
導体［Ｖ］を合成した、化合物（２）の物性値を表１に
示す。

実施例３ 実施例１記載の方法にしたがい、化合物（３）を合成し
た。平均分子量２，０００のポリエチレングリコールモ
ノメチルエーテルを用いて、ポリエチレングリコール誘
導体［ＩＶ］を合成した。保護ペプチドはＢｏｃ　Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）ＯＢｚｌを出発物質にＮ端側へ逐次延長
した。化合物（３）の物性値を表１に示す。

実施例４ 実施例１記載の方法にしたがい、化合物（４）を合成し
た。平均分子量７５０のポリエチレングリコールモノメ
チルエーテルを用いて、ポリエチレングリコール誘導体
［Ｖ］を合成した。化合物（４）の物性値を表１に示す
。

実施例５ 実施例１記載の方法にしたがい、化合物（５）を合成し
た。平均分子量５，０００のポリエチレングリコールモ
ノメチルエーテルを用いて、ポリエチレングリコール誘
導体［ＩＶ］を合成した。保護ペプチドはＢｏｃ　Ｐｒ
ｏ　ＯＢｚｌを出発物質にＮ端側へ逐次延長した。化合
物（５）の物性値を表１に示す。

実施例６ 実施例１記載の方法にしたがい、化合物（６）を合成し
た。平均分子量５，０００のポリエチレングリコールモ
ノメチルエーテルを用いて、ポリエチレングリコール誘
導体［ＩＶ］を合成した。保護ペプチドはＢｏｃ　Ｐｒ
ｏ　ＮＨ２を出発物質にＮ端側へ逐次延長した。化合物
（６）の物性値を表１に示す。

製剤例 生理食塩水に、本発明のペプチド含有ポリエチレングリ
コール誘導体（１）を１００μｇ／ｍｌの濃度で溶解し
て、注射用製剤を鋼製した、この製剤は、動物細胞の接
着阻害剤及び血小板凝集・粘着抑制剤として使用可能で
ある。

試験例 『細胞接着阻害活性の測定』 本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体は
細胞のフィブロネクチンやビトロネクチンに対する接着
を阻害する。その活性測定方法を以下に示す。ここで用
いられた競争法は基本的に生化学分野では広く用いられ
ているものであり、例えば『Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ』８２　８０３（１９８１）、特開
平１−３０９６８２、同２−１７４７９７に開示されて
いる。

実験方法 １、吸着プレートの作製 市販のフィブロネクチン（ヒト由来：生化学工業（株）
から購入）あるいはビトロネクチン（ヒト由来：フナコ
シ（株）から購入）をＰＢＳ（ＮａＨ２ＰＯ４０．００
５Ｍ＋ＮａＣｌ　０．０７Ｍ）で各々１．０μｌ／ｍｌ
、２．０μｌ／ｍｌに希釈し、その希釈液０．５ｍｌを
２４ウェルのプラスチックプレートにいれ、３７℃で一
晩保温し、コーティングした。次に非特異吸着を防ぐ目
的で牛血清アルブミン（ＢＳＡ　１％）を加え、３７℃
、１時間保温し、その後通常の洗浄操作（ＰＢＳ）を行
い充分に水きりして吸着プレートを作製した。

２、接着阻害実験 Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅｓ
　Ｍｅｄｉｕｍ（以下ＤＭＥＭと略記する）で希釈した
ペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体溶液０．２
５〜１．５ｍｌを上記方法で作成したプレートにいれ、
そこへ血管内皮細胞（４×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）懸
濁液を０．２５ｍｌ加え、３７℃で一時間保温し細胞を
接着させた。ＤＭＥＭ培地で３回洗浄し、未接着の細胞
を除いた後、０．０２５％ＥＤＴＡトリプシン溶液で接
着した細胞を剥離し、２％トリパンブルーで染色して細
胞数を計測した。結果を下記表２に示す。表中、ＲＧＤ
はアルギニン−グリシン−アスパラギン酸のトリペプチ
ドを表し、ＧＲＧＤＳはグリシン−アルギニソーダリシ
ン−アスパラギン酸−セリンのペンタペプチドを表す。

『血小板凝集阻害活性試験』 本発明のペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体の
ＩＮ　ＶＩＴＲＯ系での血小板凝集阻害作用をヒト多血
小板血漿を用いて検定した。以下にその実験方法を示す
。

実験方法 新鮮なヒト血液に１／９量の３．８％クエン酸ナトリウ
ムを加え遠心（１０００ｒｐｍ、１０分）し、上層を多
血小板血漿として分取した。この血漿２００μｌにペプ
チド含有ポリエチレングリコール誘導体溶液２５μｌ（
ｍａｘ１．５ｍｇ／ｍｌ）を加え、３分間３７℃でイン
キュベートしたのち、２０−５０μＭＡＤＰ（アデノシ
ンニリン酸）溶液あるいは２００μｇ／ｍｌのコラーゲ
ン溶液を２５μｌ加えて凝集の程度を、アグリゴメータ
ーを用いて透過度を測定することにより検定した。結果
を表３に示す。

凝集阻害率（１−Ｔ／Ｔｏ）×１００％Ｔ０＝ペプチド
含有ポリエチレングリコール誘導体非添加時の透過度 Ｔ＝ペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体添加時
の透過度

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記一般式［Ｉ］で表されるペプチド含有
   ポ リエチレングリコール誘導体またはその塩。 ただし、ｎは１から１５０までの整数を表す。 また、Ｒ１は下記一般式［ＩＩ］で表されるペプチド残
   基を示す。式中、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐはそれぞれア
   ルギニン、グリシン、アスパラギン酸残基を表す。［Ｘ
   ］、［Ｙ］は存在するかあるいは存在しないアミノ酸残
   基またはペプチド残基を表す。ｍは１から５までの整数
   を表す。Ｚは−ＯＨまたは−ＮＨ２を表す。 −（［Ｘ］−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−［Ｙ］）ｍ−Ｚ
   …［ＩＩ］
2. 【請求項２】下記一般式［ＩＩＩ］で表され
   るペプチド含有ポ リエチレングリコール誘導体またはその塩。 ただし、ｎは１から１５０までの整数を表す。 また、Ｒ２は請求項（１）の一般式［ＩＩ］で表される
   ペプチド残基を示す。
3. 【請求項３】一般式［ＩＩ］において、［Ｘ］、［Ｙ］
   が存在するアミノ酸残基を表し、［Ｘ］、［Ｙ］がセリ
   ン、グリシン、バリン、アスパラギン、プロリン、シス
   テイン、トレオニン残基から選択されるアミノ酸残基ま
   たはペプチド残基である請求項（１）記載のペプチド含
   有ポリエチレングリコール誘導体またはその塩。
4. 【請求項４】一般式［ＩＩ］において、［Ｘ］、［Ｙ］
   が存在するアミノ酸残基を表し、［Ｘ］、［Ｙ］がセリ
   ン、グリシン、バリン、アスパラギン、プロリン、シス
   テイン、トレオニン残基から選択されるアミノ酸残基ま
   たはペプチド残基である請求項（２）記載のペプチド含
   有ポリエチレングリコール誘導体またはその塩。
5. 【請求項５】請求項（１）−（４）のいずれか１項記載
   のペプチド 含有ポリエチレングリコール誘導体またはその塩を有効
   成分とする動物細胞の接着阻害剤。
6. 【請求項６】請求項（１）−（４）のいずれか１項記載
   のペプチド 含有ポリエチレングリコール誘導体またはその塩を有効
   成分とする血小板凝集・粘着抑制剤。