JP2649871B2 - 疎水性単量体、該疎水性単量体とプロペンアミド誘導体単量体の共重合物およびその用途 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、共重合高分子物質の改
質に供するイソプレノイド骨格を有する疎水性単量体に
関するものである。また、本発明はＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐのトリペプチドを必須単位として有するプロペンア
ミド誘導体と疎水性単量体との共重合物およびその塩、
およびそれを有効成分とする動物細胞の接着阻害剤、血
小板の凝集および粘着抑制剤にに関するものである。

【０００２】

【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのＡｒｇ−Ｇｌｙ−
Ａｓｐ配列を特異的に認識することが明らかにされ、レ
セプターとの相互作用に重要なものであることが報告さ
れている（ネイチャー(Nature)、第309 巻、30頁、1984
年）。以来、Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるいは
ポリペプチドを用いる研究が成されている。

【０００３】例えば、Arg-Gly-Asp 配列を有する種々の
鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集を
阻害する方法（高分子学会予稿集(Polymer Preprints,
Japan)、第38巻、3149頁、1989年、特開平2-174797
号）、Arg-Gly-Asp 配列を有するペプチドを細胞移動抑
制剤として用いる方法（特開平2-4716号）、Arg-Gly-As
p を固定化したPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法(
高分子学会予稿集(PolymerPreprints,Japan) 、第37
巻、705頁、1988年）が報告されている。さらに、ポリ
マーにArg-Gly-Asp を必須構成単位とするペプチドを共
有結合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体
として用いる方法（特開平1ー309682号、特開平1ー305960
号）、Arg-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリペプチドを体
外血液用血小板保護剤として用いる方法が開示されてい
る（特開昭64ー6217 号）。また、Arg-Gly-Asp 配列を有
するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を有する
ポリペプチドを用いて、ガン転移を抑制する方法が知ら
れている((Int.J.Biol.Macromol.) 、第11巻、23 頁、198
9 年、同誌、第11巻、226頁、1989 年、(Jpn.J.Cancer Re
s.) 第60巻、722頁、1989 年）。

【０００４】一般に高分子物質は多様な性状、機能を有
し生体との間で示される相互作用も低分子の場合と非常
に異なっている。そこで低分子薬物、生理活性ペプチド
などを高分子に結合させることで、それらの化合物と細
胞との相互作用や生体内における挙動を制御しようとす
る研究が盛んに行なわれている。この様な、高分子のラ
イフサイエンスへの応用は、医用高分子材料、高分子医
薬、診断用材料、バイオリアクター、バイオアフィニテ
ィー材料などへ幅広く試みられており、これらに関する
高分子材料とその用途については、竹本喜一、砂本順
三、明石満 共編「高分子と医療」（三田出版会）、稲
田祐二著「タンパク質ハイブリッド」、稲田祐二、前田
浩編「続タンパク質ハイブリッド」、稲田祐二、和田博
編「タンパク質ハイブリッド第３巻」（共立出版）等に
詳しく記載されている。

【０００５】一般に生物の脂質は、直鎖脂肪酸を主体と
して構成されている。しかし分岐脂肪酸を生体膜の主構
成成分とする菌が知られており、この生体膜の柔軟性が
直鎖のそれより高いことが示差熱分析計で求めた相転移
温度からあきらかになった。イソプレノイドを含む古細
菌、分岐脂肪酸を多く含むグラム陽性菌、グラム陰性菌
は多数研究されている。

【０００６】例えば、グラム陽性菌の中で、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ属が詳細に研究されており生理学的に多様な菌種
（好高温、好低温、好アルカリ、好酸）に加えて、動物
病原菌、昆虫病原菌や、日常生活（納豆菌）、醗酵工業
に重要な多数の菌を含んでいる。その他に、Ａｒｔｈｒ
ｏｂａｃｔｅｒ，Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ，Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌ
ｕｍ，Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｆｒａｎｋｉａ，Ｋｕ
ｒｕｔｈｉａ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ，Ｎｏｃａｒｄｉａ，Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐ
ｅｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，Ｐｒｏｐｉｏｎｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｒｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｒ
ｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ，Ｓａｒｃｉｎａ，Ｓｐｏｒｏ
ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｓｔａｐｙｌｏｃｃｏｃ
ｃｕｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属等が知られてい
る。

【０００７】一方グラム陰性菌の中では、Ｇｌｉｄｉｎ
ｇ Ｂａｃｔｅｒｉａの１群の細菌、Ａｒｃｈａｎｇｉ
ｕｍ，Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ，Ｃｙｔｏｐｈａ
ｇａ，Ｆｌｅｘｉｂａｃｔｅｒ，Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕ
ｓ，Ｓｐｏｒｏｃｙｔｏｐｈａｇａ等、Ｌｅｇｉｏｎｎ
ａｉｒｅｓ病を起こすＬｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍ
ｏｐｈｉｌａ、やＴｈｅｒｍｕｓ，Ｂａｃｔｅｒｏｉｄ
ｅｓ，Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ，Ｄｅｓｕｌｆｏｂｕ
ｌｂｕｓ，Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｓｐｈｉｎ
ｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等が知られている。

【０００８】この様な分岐脂肪酸、特にイソプレノイド
骨格を有するアルキル基の性質は直鎖アルキル基と大き
く異なるものである故、高分子化合物の改質剤として有
用なものと考えられるが、未だ炭素数２０のイソプレノ
イド骨格を有する疎水性単量体は知られていない。

【０００９】プロペン酸誘導体から合成したプロペンア
ミド誘導体はビニル基を有しており、ビニル重合により
容易に重合体が得られ種々の材料に供することが出来
る。水不溶性のビニル重合体にＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
を必須単位とするオリゴペプチドを高分子反応により高
分子に導入した例は見られるが、水溶性を有するＡｒｇ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐを必須単位とするオリゴペプチドを側
鎖に有する重合可能なプロペンアミド誘導体の疎水性単
量体との共重合物は知られていない。これらは両親媒性
高分子物質であり局所濃縮効果によるレセプターとの結
合能の増強およびミセル形成等による血液中での安定化
等が期待できる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
な、水溶性を有するプロペンアミド誘導体の疎水性単量
体との共重合物およびその塩、とそれを有効成分とする
動物細胞の接着阻害剤、血小板凝集・粘着抑制剤を提供
することである。また、共重合高分子物質の改質に供す
るイソプレノイド骨格を有する疎水性単量体を提供する
ことである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】下記一般式（１）の側鎖
にアミド結合、エステル結合、エ−テル結合、ウレタン
結合のいずれかを介して下記一般式（２）の疎水部が結
合された疎水性単量体を提供するものである。 一般式（１）

【００１２】

【化５】

【００１３】式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は水素原子またはカルボ
キシル基を表す。Ｒ₃ は水素原子、メチル基、エチル
基、ハロゲン原子、カルボキシメチル基のいずれか１つ
を表す。Ｒ₄ は炭素数が１〜１１の直鎖もしくは分岐の
アルキレン基、または炭素数が６〜１１のアリーレン基
であり、置換基を有していても良い。置換基としては、
カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシ
ル基、スルホ基、ハロゲン原子、アリール基、ニトロ
基、シアノ基、不飽和基の２重結合、３重結合等があげ
られ、同一鎖に２つ以上有していても良くヘテロ環を有
していても良い。Ａ、Ｂ は−Ｏ− 又は、−ＮＨ−を
示す。［ ］は存在するかあるいは存在しなくても良
い。 一般式（２）

【００１４】

【化６】

【００１５】式中、Ｒ_５は炭素数が１〜１１の直鎖もし
くは分岐のアルキレン基、または炭素数が６〜１１のア
リーレン基であり、置換基を有していても良い。置換基
としては、カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、
ヒドロキシル基、スルホ基、ハロゲン原子、アリール
基、ニトロ基、シアノ基、不飽和基の２重結合、３重結
合等があげられ、同一鎖に２つ以上有していても良くヘ
テロ環を有していても良い。Ｑ、Ｄ は−Ｏ− 又は、
−ＮＨ−を示す。Ｒ_６は炭素数２０のイソプレノイド骨
格を有するアルキル基で不飽和基を有していても良い。
〔 〕は存在するかあるいは存在しなくても良い。本発
明に用いることのできるイソプレノイド骨格に結合する
化合物は、通常の重合可能なビニル単量体であれば特に
限定されない。例えば、アクリル酸、メタクリル酸、イ
タコン酸、エタクリル酸、マレイン酸、フマル酸、クロ
トン酸、２−アクリルアミドグリコール酸、２−メタク
リルアミドグリコール酸、４−ビニル安息香酸等のカル
ボキシル基、を有するビニル単量体、５−アミノ吉草
酸、６−アモノプロペン酸、１２−アミノラウリン酸の
Ｎ−メタクリロイル誘導体およびＮ−アクリロイル誘導
体等が挙げられる。

【００１６】さらに、Ｎ−メタクリロイルグリシン、Ｎ
−メタクリロイル−β−アラニン、Ｎ−メタクリロイル
アラニン、Ｎ−メタクリロイル−γ−アミノ酪酸、Ｎ−
メタクリロイルバリン、Ｎ−メタクリロイルロイシン、
Ｎ−メタクリロイルイソロイシン、Ｎ−メタクリロイル
ノルバリン、Ｎ−メタクリロイルノルロイシン、Ｎ−メ
タクリロイルセリン、Ｎ−メタクリロイルスレオニン、
Ｎ−メタクリロイルメチオニン、Ｎ−メタクリロイルフ
ェニルアラニン、Ｎ−メタクリロイルチロシン、Ｎ−α
−メタクリロイルトリプトファン、Ｎ−メタクリロイル
プロリン、Ｎ−メタクリロイルヒドロキシプロリン、Ｎ
−メタクリロイルアスパラギン酸、Ｎ−メタクリロイル
アスパラギン、Ｎ−メタクリロイルグルタミン酸、Ｎ−
メタクリロイルグルタミン、Ｎ−α−メタクリロイルア
ルギニン、Ｎ−α−メタクリロイルシトルリン、Ｎ−ア
クリロイルグリシン、Ｎ−アクリロイル−β−アラニ
ン、Ｎ−アクリロイルアラニン、Ｎ−アクリロイル−γ
−アミノ酪酸、Ｎ−アクリロイルバリン、Ｎ−アクリロ
イルロイシン、Ｎ−アクリロイルイソロイシン、Ｎ−ア
クリロイルノルバリン、Ｎ−アクリロイルノルロイシ
ン、Ｎ−アクリロイルセリン、Ｎ−アクリロイルスレオ
ニン、Ｎ−アクリロイルメチオニン、Ｎ−アクリロイル
フェニルアラニン、Ｎ−アクリロイルチロシン、Ｎ−α
−アクリロイルトリプトファン、Ｎ−アクリロイルプロ
リン、Ｎ−アクリロイルヒドロキシプロリン、Ｎ−アク
リロイルアスパラギン酸、Ｎ−アクリロイルアスパラギ
ン、Ｎ−アクリロイルグルタミン酸、Ｎ−アクリロイル
グルタミン、Ｎ−α−アクリロイルアルギニン、Ｎ−α
−アクリロイルシトルリン等のアミノ酸残基を有するビ
ニル単量体が挙げられる。

【００１７】好ましくは、アクリル酸、メタクリル酸、
イタコン酸、Ｎ−メタクリロイルグリシン、Ｎ−メタク
リロイル−β−アラニン、Ｎ−メタクリロイルアラニ
ン、Ｎ−メタクリロイル−β−アミノプロピオン酸、Ｎ
−メタクリロイル−γ−アミノ酪酸、Ｎ−メタクリロイ
ルバリン、Ｎ−メタクリロイルロイシン、Ｎ−メタクリ
ロイルイソロイシン、Ｎ−メタクリロイルノルバリン、
Ｎ−メタクリロイルノルロイシンである。又、ジアミノ
アルキル誘導体およびジアミノアリール誘導体のモノメ
タクリルアミドが挙げられるが、好ましくはエチレンジ
アミンモノメタクリルアミド、１，３−ジアミノプロパ
ンモノメタクリルアミド、Ｎ−アルギニル−Ｎ′−メタ
クリロイルエチレンジアミン、１，４−ジアミノブタン
モノメタクリルアミドおよび１，６−ジアミノヘキサン
モノメタクリルアミドである。

【００１８】イソプレノイド骨格を有する化合物として
は以下の物が挙げられるがこれらに限るものではない
３，７，１１−トリメチルドデカ−２、６、１０−トリ
エノール、３，７，１１−トリメチルドデカ−２、６、
１０−トリエノイックアシッド。本発明に係わるわこれ
らの化合物の不斉炭素の立体化学に関しては光学活性体
・ラセミ体のどちらでも良い。さらに本発明は、下記一
般式（３）の側鎖に、下記一般式（４）で示される接着
性ペプチドを必須単位として有するプロペンアミド誘導
体と、上記のイソプレノイド骨格を有する疎水性単量体
との共重合物とその塩を提供するものである。 一般式（３）

【００１９】

【化７】

【００２０】式中、Ｒ₇ 、Ｒ₈ は水素原子またはカルボ
キシル基を表す。Ｒ₉ は水素原子、メチル基、エチル
基、ハロゲン原子、カルボキシメチル基のいずれか１つ
を表す。［ ］は存在するかあるいは存在しなくても良
い。 一般式（４）

【００２１】

【化８】

【００２２】式中、Ｘ，ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，
Ａｓｎ，Ｐｒｏから選択されるアミノ酸残基又はペプチ
ド残基を示し、Ｚは−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。Ｒ₁₀
、Ｒ₁₁ のいずれか一方は水素原子又は炭素数が１〜
１１の直鎖もしくは分岐のアルキレン基、または炭素数
が６〜１１のアリーレン基であり、置換基を有していて
も良い。他方は水素原子である。置換基としては、カル
ボニル基、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル
基、スルホ基、ハロゲン原子、アリール基、ニトロ基、
シアノ基、不飽和基の２重結合、３重結合等があげら
れ、同一鎖に２つ以上有していても良い。他方は水素原
子である。ｎは１〜５の整数を表す。［ ］は存在する
かあるいは存在しなくても良い。

【００２３】本発明の、ＲＧＤを必須単位として有する
ペプチド断片のＮ末端に結合する単量体として、Ｎ−メ
タクリロイルグリシン、Ｎ−メタクリロイル−β−アラ
ニン、Ｎ−メタクリロイルアラニン、Ｎ−メタクリロイ
ル−γ−アミノ酪酸、Ｎ−メタクリロイルバリン、Ｎ−
メタクリロイルロイシン、Ｎ−メタクリロイルイソロイ
シン、Ｎ−メタクリロイルノルバリン、Ｎ−メタクリロ
イルノルロイシン、Ｎ−メタクリロイルセリン、Ｎ−メ
タクリロイルスレオニン、Ｎ−メタクリロイルメチオニ
ン、Ｎ−メタクリロイルフェニルアラニン、Ｎ−メタク
リロイルチロシン、Ｎ−α−メタクリロイルトリプトフ
ァン、Ｎ−メタクリロイルプロリン、Ｎ−メタクリロイ
ルヒドロキシプロリン、Ｎ−メタクリロイルアスパラギ
ン酸、Ｎ−メタクリロイルアスパラギン、Ｎ−メタクリ
ロイルグルタミン酸、Ｎ−メタクリロイルグルタミン、
Ｎ−α−メタクリロイルアルギニン、Ｎ−α−メタクリ
ロイルシトルリン等の各種α、β、γあるいはω−アミ
ノ酸残基を有するプロペンアミド誘導体が挙げられる。

【００２４】好ましくは、Ｎ−メタクリロイルグリシ
ン、Ｎ−メタクリロイル−β−アラニン、Ｎ−メタクリ
ロイルアラニン、Ｎ−メタクリロイル−β−アミノプロ
ピオン酸、Ｎ−メタクリロイル−γ−アミノ酪酸、Ｎ−
メタクリロイルバリン、Ｎ−メタクリロイルロイシン、
Ｎ−メタクリロイルイソロイシン、Ｎ−メタクリロイル
ノルバリン、Ｎ−メタクリロイルノルロイシンである。

【００２５】本発明の、ＲＧＤを必須単位としとして有
するペプチド断片のＣ末端に結合する単量体として、ジ
アミノアルキル誘導体およびジアミノアリール誘導体の
モノメタクリルアミドが挙げられるが、好ましくはエチ
レンジアミンモノメタクリルアミド、１，３−ジアミノ
プロパンモノメタクリルアミド、１，４−ジアミノブタ
ンモノメタクリルアミドおよび１，６−ジアミノヘキサ
ンモノメタクリルアミドである。

【００２６】本発明はさらに、上記プロペンアミド誘導
体の疎水性単量体との共重合物、並びにその塩を有効成
分とする動物細胞の接着阻害剤および血小板凝集・粘着
抑制剤を提供するものである。プロペンアミド誘導体の
疎水性単量体との共重合物およびその塩の分子量は好ま
しくは３０万以下、特に３０００〜２０万の範囲で、室
温で均一な分散水溶液となることが好ましい。疎水性単
量体の組成は０．０１〜２０ｍｏｌ％の範囲で好ましく
は０．０５〜５％である。本発明に係わる接着性ペプチ
ドに用いられるアミノ酸はＬ体、Ｄ体どちらでも良い
が、好ましくはＬ体である。本発明のプロペンアミド誘
導体共重合物の塩として例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、リン酸塩、ホウ酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、
トリフルオロ酢酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸
塩、乳酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩にしても良く、
そのような塩への変換は慣用手段で行なうことができ
る。

【００２７】イソプレノイド骨格を有する単量体は、イ
ソプレノイド骨格側にヒドロキシル基がある場合、カル
ボン酸を有する単量体との酸触媒（ｐ−トルエンスルホ
ン酸等）を用いた脱水反応、酸ハロゲン化物を有する単
量体との反応や酸無水物を有する単量体との反応等によ
る一般的なエステル化反応で合成する事ができる。一
方、イソプレノイド骨格側にカルボキシル基がある場
合、アミノ基を有する単量体との一般的なアミド化反
応、例えば、酸ハロゲン化物法、酸無水物法、活性エス
テル化法やＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣ）法等で合成する事ができる。これらの合成方
法の詳細については、新実験化学講座１４巻「有機化合
物の合成と反応（２）」（日本化学会編、丸善）、ＯＲ
ＧＡＮＩＣ ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ ＧＲＯＵＰ ＰＲ
ＰＡＲＡＴＩＯＮＳ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ
Ｖｏｌｕｍｅ １（ＡＣＡＤＥＭＩＣ ＰＲＥＳＳ）に
記載されている。

【００２８】ペプチド合成方法としては特に限定しない
が、液相法、固相法、および自動合成装置による合成方
法が挙げられる。これらの合成方法の詳細については、
生化学実験講座「タンパク質の化学ＩＶ」ｐ２０７−４
９５（日本生化学会編、東京化学同人）、「続生化学実
験講座タンパク質の化学（下）」（日本生化学会編、東
京化学同人）、泉屋ら編「ペプチド合成の基礎と実験」
（丸善）に記載されている。また、市販されている合成
ペプチドを利用することも可能である。

【００２９】プロペンアミド誘導体はプロペン酸誘導体
とアミノアルキルカルボン酸および細胞接着性ペプチド
の結合には、活性エステル法、混合酸無水物法、アジド
法、酸塩化物法、対称酸無水物法、ＤＣＣ法、ＤＣＣー
アディティブ法、カルボニルジイミダゾール法等を利用
したアミド結合合成方法が挙げられる。さらに、プロペ
ン誘導体の共重合体は一般のラジカル重合法、イオン重
合法により得られる。共重合体の溶液はゲルろ過法、透
析法等により特定の分子量分画を行なうことが出来る。

【００３０】本発明のプロペンアミド誘導体の疎水性単
量体との共重合体並びにその塩は、細胞接着性蛋白質の
コア配列Ａｒｇ- Ｇｌｙ- Ａｓｐを有し、該コア配列を
介して細胞接着性蛋白質と同様の機序で細胞に接着す
る。そのため、細胞接着性蛋白のアゴニストまたはアン
タゴニストとして種々の生物活性を示し、免疫調整作
用、創傷治癒作用、毛細血管中で起こる癌細胞による血
小板凝集抑制作用、神経疾患治癒作用などの広範な生物
活性が認められている。

【００３１】従って、本発明のプロペンアミド誘導体の
疎水性単量体との共重合体並びにその塩は、そのすくな
くとも一種を、場合により慣用の担体または医薬用助剤
とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒剤、免疫調整剤、血
小板凝集粘着抑制剤として患者に投与することが可能で
ある。疎水性坑癌剤と混合あるいは坑癌剤を含む単量体
と共重合すれば癌治療剤として患者に投与することも可
能である。特に、動物細胞接着阻害剤または血小板凝集
粘着抑制剤としての使用が好ましい。その投与量は、
０．２μｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇの範囲で、症状、
年齢、体重等に基づいて決定される。

【００３２】本発明のプロペンアミド誘導体の疎水性単
量体との共重合体並びにその塩は、ペプチド系医薬に一
般に使用されている投与方法、即ち非経口投与方法、例
えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等によって投与
するのが好ましい。そのような注射用製剤を製造する場
合、本発明のプロペンアミド誘導体の疎水性単量体との
共重合体およびその塩を例えば、後記実施例で示すよう
にＰＢＳまたは生理食塩水に対し室温で均一な分散水溶
液とし、注射用製剤としてもよく、あるいは０．１Ｎ程
度の酢酸水等に溶解した後、凍結乾燥製剤としても良
い。この様な製剤には、グリシンやアルブミン等の慣用
の安定剤を添加しても良い。さらに、本発明のプロペン
アミド誘導体の疎水性単量体との共重合体並びにその塩
は、経口投与することも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化菅以外の粘膜からも
吸収させることも可能である。

【００３３】

【実施例】以下実施例により本発明を更に説明するが本
発明はこれに限定されるものではない。なお、以下にお
いてＲはアルギニル、Ｇはグリシル、Ｄはアスパルチ
ル、Ｓはセリル、Ｐはプロリルを表す。

【００３４】製造例１ カルボキシエチルメタクリルアミドをショッテンバウマ
ン反応により合成した。即ち、β−アラニン１７．８ｇ
（０．２ｍｏｌ）の水酸化ナトリウム水溶液にメタクリ
ル酸クロリド２０．９ｇ（０．２ｍｏｌ）を氷冷下滴下
し、４時間撹拌後塩酸により中和した。減圧濃縮により
濃縮し沈殿した塩化ナトリウムをろ別した。濃縮液をク
ロロホルムで抽出し、乾燥後減圧濃縮してクロロホルム
を留去した。濃縮物をエーテルで洗浄し製造物１を白色
固体として１７．６ｇ得た。（収率５６％） 製造物１ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＣＯＯＨ

【００３５】製造例２〜４ 製造例１と同じ方法によりアクリル酸クロリド、メタク
リル酸クロリド、エタクリル酸クロリドと４−アミノ酪
酸、５−アミノ吉草酸、グルタミン、との反応により以
下のプロペン酸誘導体を製造した。 製造物２ 収率 ５２％ ＣＨ₂ ＝ＣＨＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₃ ＣＯＯＨ 製造物３ 収率 ６１％ ＣＨ₂ ＝Ｃ（Ｃ₂ Ｈ₅ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₄ ＣＯＯＨ 製造物４ 収率 ５９％ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ₂ ＣＨ₂ ＣＯＮＨ₂ ）ＣＯＯＨ

【００３６】製造例５ アミノエチルメタクリルアミドをショッテンバウマン反
応により合成した。即ち、エチレンジアミン１２０ｇ
（２ｍｏｌ）を溶かしたクロロホルム溶液（４００ｍ
ｌ）へ、メタクリル酸クロリド２０．９ｇ（０．２ｍｏ
ｌ）を氷冷下滴下し４時間撹拌後減圧濃縮してクロロホ
ルムを留去した。濃縮物に５％炭酸水素ナトリウム水溶
液５０ｍｌを加えクロロホルムで抽出した。硫酸ナトリ
ウム上で乾燥の後濃縮し、クロロホルム／メタノール＝
７／３を溶離液としたアルミナカラムクロマトグラフィ
ーにより精製した。（製造物 ５） 収量１４．８ｇ（５７．８％，０．１１６ ｍｏｌ） ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＮＨ₂

【００３７】製造例６ 製造例１で合成したカルボキシエチルメタクリルアミド
をラジカル重合により重合した。カルボキシエチルメタ
クリルアミド２ｇを２０ｍｌのＤＭＦに溶解し、和光純
薬製のラジカル開始剤Ｖ65（２，２−アゾビス（２，４
−ジメチルバレロニトリル））１０ｍｇを加え窒素気流
下６５度で４時間重合した。重合物は酢酸エチルで沈殿
させた後、スペクトラポア７（分子分画量 ３０００）
を用い純水に対して透析し低分子量画分を除いた後凍結
乾燥した。 収量１．２４ｇ（製造物６）

【００３８】分子量は東ソー（株）製ＴＳＫｇｅｌ Ｇ
３０００ＳＷカラムを用い、移動相は０．２Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．４）とし、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎで測
定した。ＰＥＧ換算分子量は約３００００であった。

【００３９】合成例１〜８ 接着性ペプチドの固相法に
よる合成 Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ方式によるペプチド合成装置を用
いて合成を行なった。α−アミノ酸の保護には、Ｂｏｃ
基を用いＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを必須単位として含む
オリゴペプチドを合成しその末端に製造例１〜４に示し
たプロペン酸誘導体およびアクリル酸、メタクリル酸、
エタクリル酸を縮合させた。トリフルオロメタンスルホ
ン酸を用いて樹脂からの切断及び側鎖保護基の除去を行
ない、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）
で精製し、単一ピークを示すプロペンアミド誘導体を得
た。これを、陰イオン交換樹脂カラム（アンバーライト
ＩＲＡ−４００；Ｃｌ型）を通し塩酸塩とした。

【００４０】以下、ＡｒｇをＲ、ＧｌｙをＧ、Ａｓｐを
Ｄ、ＳｅｒをＳ、ＰｒｏをＰと示す。また保護基、試薬
の略号は以下の様である。 Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＯＢｚｌ ：ベンジルエステル ＨＯＢｔ ：ヒドロキシベンゾトリアゾール ＯＳｕ ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド ＯＮｂ ：ニトロベンジルエステル ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 ＤＣＣ ：ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＣ ｕｒｅａ ：シクロヘキシルウレア Ｍｔｓ ：メシチレンスルホニル ＤＭＦ ：ジメチルホルムアミド

【００４１】合成物 １ ＣＨ₂ ＝ＣＨＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₃ ＣＯ−ＲＧＤ 収率３５％

【００４２】合成物 ２ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＣＯ−（ＲＧＤ）₂ （配列番号１） 収率２４％

【００４３】合成物 ３ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＣＯ−（ＲＧＤ）₃ （配列番号２） 収率１７％

【００４４】合成物 ４ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＣＯ−（ＲＧＤ）₅ （配列番号３） 収率１０％

【００４５】合成物 ５ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ₂ ＣＨ₂ ＣＯＮＨ₂ ）ＣＯ−ＲＧＤＳ （配列番号４） 収率 ３３％

【００４６】合成物 ６ ＣＨ₂ ＝Ｃ（Ｃ₂ Ｈ₅ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₄ ＣＯ−ＧＲＧＤＳ （配列番号５） 収率 ３５％

【００４７】合成物 ７ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯ−Ｇ
ＲＧＤＳＰ （配列番号６） 収率 ２６％

【００４８】合成物 ８ ＣＨ₂ ＝ＣＨＣＯ−ＧＧＧＲＧＤＳ （配列番号７） 収率 ３０％

【００４９】合成例 ９ 合成物 ９ ＣＨ_２＝Ｃ（ＣＨ_３）ＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＣＯ−ＲＧ
ＤＳ （配列番号８） 合成物９を逐次延長法により液相法で合成した。 （１）Ｂｏｃ Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ） ６０ｇ（０．２ｍｏｌ）を４
００ｍｌの酢酸エチルに加え、さらにトリエチルアミン
２１ｇ（０．２ｍｏｌ）、臭化ベンジル３５．４ｇ
（０．２ｍｏｌ）を加えて還流下４時間反応した。冷却
後塩をろ別した後ＮａＨＣＯ_３水溶液、ＮａＣｌ水溶液
で洗浄した。これをＮａ_２ＳＯ_４で乾燥した後減圧乾固
し、白色粉末５４ｇ（収率６８％）を得た。

【００５０】（２）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌ ３０ｇ（７８ｍｍｏ
ｌ）にＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ＝１／１の２００ｍｌを加
え室温で１時間撹拌した後、ＴＦＡとＣＨ₂ Ｃｌ₂ を減
圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ₃ 水
溶液で中和した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ₂ Ｓ
Ｏ₄ で乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。この化
合物と、ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）ＯＳｕ ３２．８ｇ
（７８ｍｍｏｌ）をＣＨ₂ Ｃｌ₂ ５００ｍｌに溶解し終
夜撹拌した。減圧下ＣＨ₂ Ｃｌ₂ を留去してから酢酸エ
チルに溶解した。ＮａＨＣＯ₃ 水溶液、１Ｍクエン酸水
溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾
燥してから減圧乾固して白色粉末を４１ｇ（収率８９
％）得た。

【００５１】（３）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌ３
５ｇ（５９ｍｍｏｌ）にＴＦＡ：ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ＝１：１
の２００ｍｌを加えて室温で１時間撹拌した後、ＴＦＡ
とＣＨ₂ Ｃｌ₂ を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶
解しＮａＨＣＯ₃ 水溶液で中和した後ＮａＣｌ水溶液で
洗浄した。Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥してから酢酸エチルを減
圧留去した。この化合物とＢｏｃＧｌｙ ９．８ｇ（５
９ｍｍｏｌ）をＣＨ₂ Ｃｌ₂ に溶解し、ＤＣＣ１２．２
ｇ（５９ｍｍｏｌ）を氷冷下加え３時間撹拌してから、
さらに室温で終夜撹拌した。ＤＣｕｒｅａをろ別してか
ら減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ₃ 水溶
液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄
し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥してから減圧乾固して白色粉末
を３０．５ｇ（収率７５％）得た。

【００５２】（４）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢ
ｚｌ ２５ｇ（３９ｍｍｏｌ）にＴＦＡ：ＣＨ_２Ｃｌ_２
＝１：１ １００ｍｌを加えて室温で１時間撹拌した
後、ＴＦＡとＣＨ_２Ｃｌ_２を減圧濃縮した。これを酢酸
エチルに溶解しＮａＨＣＯ_３水溶液で中和した後ＮａＣ
ｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥してから酢酸
エチルを減圧留去した。 この化合物とＢｏｃＡｒｇ
（Ｍｔｓ）１７．８ｇ（３９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ４００
ｍｌに溶解し、ＤＣＣ８．０ｇ（３９ｍｍｏｌ） ＨＯ
Ｂｔ６．８ｇ（４５ｍｍｏｌ）を氷冷下加え３時間撹拌
してから、さらに室温で終夜撹拌した。ＤＣｕｒｅａを
ろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨ
ＣＯ_３水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の
順に洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥してから減圧乾固して
白色粉末を１９．５ｇ（収率５０％）得た。

【００５３】（５）合成物１５の合成 ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの１５．０ｇ（１５ｍｍｏｌ）に
ＴＦＡ：ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ＝１：１の１００ｍｌを加えて室
温で１時間撹拌した後、ＴＦＡとＣＨ₂ Ｃｌ₂ を減圧濃
縮した。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ₃水溶液
で中和した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ₂ ＳＯ₄
で乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。この化合物
とカルボキシエチルメタクリルアミド２．４ｇ（１５ｍ
ｍｏｌ）をＣＨ₂ Ｃｌ₂２００ｍｌに溶解しＤＣＣ３．
１ｇ（１５ｍｍｏｌ）を氷冷下加え３時間撹拌してか
ら、さらに室温で終夜撹拌した。減圧濃縮してからアセ
トンを加え生じたＤＣｕｒｅａをろ別した。減圧濃縮
後、酢酸エチルに続いてエーテルで洗浄し、減圧乾燥し
て白色粉末を１０．０ｇ（収率６５％）得た。この化合
物１０ｇ（９．８ｍｍｏｌ）のＴＦＡ溶液に、１Ｍ−ト
リフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール−ｍー ク
レゾールのＴＦＡ溶液を氷冷下加えて１時間反応させ、
ペプチド側鎖および末端の保護基の脱保護を行なった。
反応液をエーテル中に投入しオイル状の沈殿物を蒸留水
に溶解し酢酸エチルで洗浄した後、陰イオン交換樹脂カ
ラム（アンバーライトＩＲＡ−４００；Ｃｌ型）に通し
て塩酸塩とし凍結乾燥した。白色固体４．８ｇ（収率８
０％）が得られた。

【００５４】

【００５５】合成例１０ 合成物１０ ＣＨ₂ ＝Ｃ（ＣＨ₃ ）ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）₂ ＣＯ−ＲＧＤＳＧＮＨ₂ （配列番号９） 合成例９と同様な方法でペプチド鎖を延長した。以下に
その概略を示す。 （１）ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂ の合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ） ： ５９ｇ（０．２ｍｏｌ） ＧｌｙＮＨ₂ ・ＨＣｌ ： ２２．１ｇ（０．２ｍｏｌ） Ｎ−メチルモルホリン ： ２０．２ｇ（０．２ｍｏｌ） ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ： ８００ｍｌ ＤＣＣ ：４１．２ｇ（０．２ｍｏｌ） （１）の収量 ：５８．３ｇ（収率８３％）

【００５６】（２）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂ の合成 （１）の生成物 ：５６．２ｇ（０．１６ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ） ：５１．７ｇ（０．１６ｍｏｌ） ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：８００ｍｌ ＤＣＣ ：３３ｇ（０．１６ｍｏｌ） （２）の収量 ：７１．２ｇ（収率 ８０％）

【００５７】（３）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂ の合成 （２）の生成物 ：６６．７ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＧｌｙ ：５１．７ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＣＨ2 Ｃｌ ：７００ｍｌ ＤＣＣ ：２４．７（０．１２ｍｏｌ） （３）の収量 ：６１．８ｇ（収率 ８４％）

【００５８】（４）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂ の合成 （３）の生成物 ：６１．３ｇ（０．１ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ） ：４５．６ｇ（０．１ｍｏｌ） ＤＭＦ ：８００ｍｌ ＤＣＣ ：２２．５（０．１ｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：１４ｇ（０．１ｍｏｌ） （４）の収量 ：４２．８ｇ（収率 ４５％）

【００５９】（５）合成物１０の合成 （４）の生成物 ：５．０ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：５０ｍｌ／５０ｍｌ カルボキシエチルメタクリルアミド ：０．８３ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＤＭＦ ：５０ｍｌ ＤＣＣ ：１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：０．７２ｇ（５．３ｍｍｏｌ） １Ｍ−トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール−ｍー クレゾール のＴＦＡ溶液 ： ２５０ｍｌ アンバーライトＩＲＡ−４００；Ｃｌ型処理 合成物１０ ：２．２９ｇ（収率 ６５％）

【００６０】合成例１１ 合成物１１ ＲＧＤＧ−ＮＨ−（ＣＨ₂ ）₂ ＮＨＣＯ（ＣＨ₃ ）Ｃ＝ＣＨ （配列番号１０） 合成物１１を逐次延長法により液相法にて合成した。 （１）ＢｏｃＧｌｙＯＮｂの合成 ＢｏｃＧｌｙ３５．０ｇ（０．２ｍｏｌ）、トリエチル
アミン２８ｍｌ（０．２ｍｏｌ）および臭化ｐ−ニトロ
ベンジル４３．２ｇ（０．２ｍｏｌ）を４００ｍｌの酢
酸エチルに溶解し、５時間還流した後室温で一晩放置し
た。生成した塩をろ別し、ＮａＨＣＯ₃ 水溶液で洗浄し
た後さらに水洗し、Ｎａ₂ＳＯ₄ で乾燥、ろ液を減圧濃
縮し酢酸エチル−ヘキサンより再結晶した。 ５２．７
ｇ （収率８５％）以下合成例９と同様な方法でペプチ
ド鎖を延長した。以下に、その概略を示す。

【００６１】（２）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）ＧｌｙＯ
Ｎｂの合成 （１）の生成物 ：４６．５ｇ（０．１５ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ） ：４８．５ｇ（０．１５ｍｏｌ） ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：７５０ｍｌ ＤＣＣ ：３０．９ｇ（０．１５ｍｏｌ） （２）の収量 ：６４．０ｇ（収率 ８０％）

【００６２】（３）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｇ
ｌｙＯＮｂの合成 （２）の生成物 ：６４．０ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＧｌｙ ：２１ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：７５０ｍｌ ＤＣＣ ：２４．７ｇ（０．１２ｍｏｌ） （３）の収量 ：５８．８ｇ（収率 ８３％）

【００６３】（４）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）ＧｌｙＯＮｂの合成 （３）の生成物 ：５３．７ｇ（９１ｍｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ） ：４１．５ｇ（９１ｍｍｏｌ） ＤＭＦ ：８００ｍｌ ＤＣＣ ：１８．７ｇ（９１ｍｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：１３．５ｇ（０．１ｍｏｌ） （４）の収量 ：４６．５ｇ（収率
５５％）

【００６４】（５）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）ＧｌｙＯＨの合成 （４）の生成物９．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）を９０％酢
酸３００ｍｌに溶かし、Ｚｎ末３２．７ｇ（０．５ｍｏ
ｌ）を加え、０度Ｃで３時間撹拌した。Ｚｎ末をろ別
し、ろ液を減圧濃縮、これにクエン酸を加えて酸性にし
酢酸エチルで抽出した。Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し減圧濃縮
してからエーテルを加えて白色粉末 ６．４１ｇ（収率
７９％）を得た。

【００６５】（６）合成物１１の合成 （５）の生成物 ：５．４４ｇ（６．７ｍｍｏｌ） アミノエチルメタクリルアミド ：０．８６ｇ（６．７ｍｍｏｌ） ＤＭＦ ：６０ｍｌ ＤＣＣ ：１．４ｇ（６．７ｍｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：０．９５ｇ（７ｍｍｏｌ） １Ｍ−トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール−ｍー クレゾール のＴＦＡ溶液 ： ２５０ｍｌ アンバーライトＩＲＡ−４００；Ｃｌ型処理 合成物１１ ：２．９ｇ（収率 ７５％） アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：４．５９１５ Ｇ：９．４３２４ Ｄ：４．６６１８ マススペクトル Ｍ+ ：５１４

【００６６】合成例１２ 合成物１２

【００６７】

【化９】

【００６８】３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサ
デカ−２−エノ−ル １５ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）をク
ロロホルム ５００ｍｌに溶かし、トリエチルアミン
５．１３ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下メタ
クリル酸クロライド ５．３ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）を
滴下し４時間撹拌した。減圧濃縮により濃縮し沈殿物を
ろ別した。クロロホルムを加えＮａＣｌ水溶液で洗浄し
てからＮａ₂ ＳＯ₄ で乾燥の後濃縮し、クロロホルムを
溶離液としたシリカカラムクロマトグラフィ−により精
製した。 オイル状生成物の収量１３．９ｇ （７５．５％，３８．３ｍｍｏｌ） ＭＳ：３６４ ＮＭＲ：ビニル基のプロトン化学シフト δ ５．５５，６．１ｐｐｍ エステル結合α位メチレンプロトン化学シフト δ ４．６〜４．７ｐｐｍ

【００６９】合成例１３ 合成物１３

【００７０】

【化１０】

【００７１】３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサ
デカノ−ル １５．１ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）をクロロ
ホルム ５００ｍｌに溶かし、トリエチルアミン５．１
３ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下メタクリル
酸クロライド ５．３ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）を滴下し
４時間撹拌した。減圧濃縮により濃縮し沈殿物をろ別し
た。クロロホルムを加えＮａＣｌ水溶液で洗浄してから
Ｎａ₂ＳＯ₄ で乾燥の後濃縮し、クロロホルムを溶離液
としたシリカカラムクロマトグラフィ−により精製し
た。 オイル状生成物の収量 １４．４ｇ（７７．８
％、３８．３ｍｍｏｌ） ＭＳ：３６６ ＮＭＲ：ビニル基のプロトン化学シフト δ ５．５５，６．１ｐｐｍ エステル結合α位メチレンプロトン化学シフト δ ４．０〜４．１ｐｐｍ

【００７２】合成例１４ 合成物９と合成物１２のモノマーをラジカル共重合し
た。合成物９ １．０ｇ（１．６４ｍｍｏｌ）と合成物
１２ １２．４ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）を１０ｍｌ
のＤＭＦに溶解し、和光純薬製のラジカル開始剤Ｖ６５
（２，２−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリ
ル））５ｍｇを加え窒素気流下６５度で５時間重合し
た。重合物は酢酸エチルで沈殿させた後、スペクトラポ
ア７（分子分画量 ３０００）を用い純水に対して透析
し低分子量画分を除いた後凍結乾燥した。収量２６５ｍ
ｇ（合成物１４）。合成物１４中の合成物９の組成を元
素分析Ｎ値より算出したところ、約 ９８．４％であっ
た。 元素分析Ｎ値１８．２３％ 合成物１４をゲルクロマトグラフィーにより分子量分画
を行なった。分子量は東ソー（株）製ＴＳＫｇｅｌ Ｇ
３０００ＳＷカラムを用い、移動相はＤＭＦとし、流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎで測定した。ＰＥＧ換算分子量は約
２７０００であった。

【００７３】合成例１５ 合成物９と合成物１２とのラジカル共重合を開始剤量を
変えて合成例１４と同様の方法で行なった。 開始剤 Ｖ６５： ２０ｍｇ 収量 ２０３ｍｇ（合成物１５） 分子量 ４０００ 合成物９の組成 約 ９８．２％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１８．２１％

【００７４】合成例１６〜１７ 合成例１４と同じ方法でモノマー組成を変更して共重合
を行なった。 合成物１６ モノマー 合成物 ９ １．０ｇ （１．６４ｍｍｏｌ） 合成物１２ ６６．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．３ｍｇ 収量 １７８ｍｇ（合成物１６） 分子量 １００００ 合成物９の組成 約 ８９．５％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１７．２０％

【００７５】合成例１７ モノマー 合成物 ９ １．０ｇ （１．６４ｍｍｏｌ） 合成物１２ ３．０ｍｇ（０．００８２ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．０ｍｇ 収量 ２３０ｍｇ（合成物１７） 分子量 ２５０００ 合成物９の組成 約 ９９．３％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１８．３３％

【００７６】合成例１８〜２７ 合成物１４と同じ方法により合成物１〜８および１０、
１１とイソプレノイド骨格を有する疎水性単量体との共
重合を行なった。 合成例１８ モノマー 合成物 １ １．０ｇ（１．９２ｍｍｏｌ） 合成物１２ １４．３ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２３７ｍｇ（合成物１８） 分子量 １２０００ 合成物１の組成 約 ９７．８％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１８．５０％

【００７７】合成例１９ モノマー 合成物 ２ １．０ｇ（１．１３ｍｍｏｌ） 合成物１２ ８．４ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．０ｍｇ 収量 ２０３ｍｇ（合成物１９） 分子量 １１０００ 合成物２の組成 約 ９８．１％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値２０．３８％

【００７８】合成例２０ モノマー 合成物 ３ １．０ｇ（０．８０ｍｍｏｌ） 合成物１２ ３２．３ｍｇ（０．０８９ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．２ｍｇ 収量 １７８ｍｇ（合成物２０） 分子量 ９００００ 合成物３の組成 約 ９０．７％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値２０．６６％

【００７９】合成例２１ モノマー 合成物 ４ １．０ｇ（０．５１ｍｍｏｌ） 合成物１３ ２０．４ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 １５２ｍｇ（合成物２１） 分子量 ８０００ 合成物４の組成 約 ８９．１％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値２１．４４％

【００８０】合成例２２ モノマー 合成物 ５ １．０ｇ（１．５０ｍｍｏｌ） 合成物１３ １１．２ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２４１ｍｇ（合成物２２） 分子量 １３０００ 合成物５の組成 約 ９８．１％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１８．７３％

【００８１】合成例２３ モノマー 合成物 ６ １．０ｇ（１．４１ｍｍｏｌ） 合成物１３ １０．６ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２０４ｍｇ（合成物２３） 分子量 ８０００ 合成物６の組成 約 ９７．３％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１７．５６％

【００８２】合成例２４ モノマー 合成物 ７ １．０ｇ（１．４５ｍｍｏｌ） 合成物１２ １０．７ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２３４ｍｇ（合成物２４） 分子量 １１０００ 合成物７の組成 約 ９８．４％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１８．０７％

【００８３】合成例２５ モノマー 合成物 ８ １．０ｇ（１．４４ｍｍｏｌ） 合成物１２ １０．７ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２５６ｍｇ（合成物２５） 分子量 １４０００ 合成物８の組成 約 ９７．２％（元素分析Ｎ値より算
出） 元素分析Ｎ値１９．８６％

【００８４】合成例２６ モノマー 合成物１０ １．０ｇ（１．５０ｍｍｏｌ） 合成物１２ １１．２ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２３５ｍｇ（合成物２６） 分子量 １２０００ 合成物１０の組成 約 ９７．５％（元素分析Ｎ値より
算出） 元素分析Ｎ値２０．７８％

【００８５】合成例２７ モノマー 合成物１１ １．０ｇ（１．７１ｍｍｏｌ） 合成物１２ １２．７ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ） 開始剤 Ｖ６５ ５．１ｍｇ 収量 ２１４ｍｇ（合成物２７） 分子量 １３０００ 合成物１２の組成 約 ９７．６％（元素分析Ｎ値より
算出） 元素分析Ｎ値２１．２１％

【００８６】試験例１ 細胞接着性阻害活性の測定 本発明のプロペンアミド誘導体共重合物の塩が細胞のフ
ィブロンネクチンやビトロネクチンに対する接着阻害活
性の測定方法を以下に示す。本実験例で用いられた競争
法は基本的に生化学分野では広く用いられているもので
あり例えば「Methods in Enzymology 」,82,803-831 (1
981), 特開平１ー３０９６８２号、同２ー１７４７９
７号に開示されている。

【００８７】実験方法 １．フィブロネクチンおよびビトロネクチン吸着プレー
トの作製 市販のフィブロネクチン（ヒト由来：生化学工業（株）
より購入）あるいはビトロネクチン（ヒト由来 フナコ
シ薬品（株）より購入）をＰＢＳで各々１．０μｌ／ｍ
ｌ、２．０μｌ／ｍｌに希釈しその希釈液０．５ｍｌを
２４穴のプラスチックプレートに入れ３７度で一晩保温
しコーティングした。次に非特異的吸着を防ぐ目的で牛
血清アルブミン（ＢＳＡ １％）を加え３７度で１時間
保温し、その後通常の洗浄操作（ＰＢＳ）を加え充分に
水切りしてフィブロネクチン吸着プレートを作製した。
同様の操作によりビトロネクチン吸着プレートを作製し
た。

【００８８】２．接着阻害実験 凍結乾燥により得たプロペンアミド誘導体共重合物の塩
をDulbecco's Modified Eagles Medium （以下DMEMと略
記する）を用い、０、０．２５、０．５、１．０、１．
５ｍｇ／ｍｌの各濃度のプロペンアミド誘導体共重合物
の塩溶液とした。この溶液０．２５ｍｌを上記方法で作
製したプレートに入れ、そこへ血管内皮細胞（４×１０
⁶ ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の懸濁液を０．２５ｍｌ加え３７
度で１時間保温し細胞を接着させた。ＤＭＥＭ倍地で３
回洗浄し、未接着の細胞を剥離し、２％トリパンブルー
で染色して細胞数を計測した。結果を表１及び表２に示
す。

【００８９】 表１ フィブロネクチンに対する細胞接着阻害（cells/well） 濃度（mg/ml ） 添加化合物 ０ ０．２５ ０．５ １．０ １．５ 合成物１４−１ × △ △ ○ ○ 合成物１４−２ × △ △ ○ ○ 合成物１４−３ × △ △ ○ ○ 合成物１５ × △ △ ○ ○ 合成物１６ × △ △ ○ ○ 合成物１７ × △ △ ○ ○ 合成物１８ × × △ △ ○ 合成物１９ × △ △ ○ ○ 合成物２０ × △ △ ○ ○ 合成物２１ × △ △ ○ ○ 合成物２２ × △ △ ○ ○ 合成物２３ × △ △ ○ ○ 合成物２４ × △ △ ○ ○ 合成物２５ × △ △ ○ ○ 合成物２６ × △ △ ○ ○ 合成物２７ × △ △ ○ ○ 製造物 ６ × × × × × ＲＧＤ × × × × △ ＲＧＤＳ × × × △ △ （cells/well）；○：５０以下、△：５０〜１００、×：１００以上

【００９０】 表２ ビトロネクチンに対する細胞接着阻害（cells/well） 濃度（mg/ml ） 添加化合物 ０ １０ ５０ １００ ３００ 合成物１４−１ × △ △ ○ ○ 合成物１４−２ × △ △ ○ ○ 合成物１４−３ × △ △ ○ ○ 合成物１５ × △ △ ○ ○ 合成物１６ × △ △ ○ ○ 合成物１７ × △ △ ○ ○ 合成物１８ × △ △ ○ ○ 合成物１９ × △ △ ○ ○ 合成物２０ × △ △ ○ ○ 合成物２１ × △ △ ○ ○ 合成物２２ × △ △ ○ ○ 合成物２３ × △ △ ○ ○ 合成物２４ × △ △ ○ ○ 合成物２５ × △ △ ○ ○ 合成物２６ × △ △ ○ ○ 合成物２７ × △ △ △ ○ 製造物 ６ × × × × × ＲＧＤ × × × × △ ＲＧＤＳ × × × △ △ （cells/well）○：100 以下、△：100 〜200 、×：200 以上

【００９１】試験例２ 血小板凝集阻害活性の測定 本発明において合成したプロペンアミド誘導体共重合物
の塩のｉｎ ｖｉｔｒｏ系での血小板凝集阻害作用をヒ
ト多血小板血漿を用いて検討した。以下にその実験方法
を示す。

【００９２】実験方法 新鮮なヒト血液に１／９量の３．８％クエン酸ナトリウ
ムを加え遠心分離（１０００ｒｐｍ，１０分）し、上層
を多血小板血漿として分取した。凍結乾燥より得たプロ
ペンアミド誘導体共重合物の塩を０〜１．５ｍｇ／ｍｌ
の種々の濃度になる様に生理食塩水に溶解した。この塩
の溶液２５μｌを血しょう２００マイクロリットルに加
え、３７度で３分間でインキュベートしたのち、５０μ
Ｍ アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）溶液あるいは２００
μｇ／ｍｌのコラーゲン溶液を２５μｌ加え凝集の様子
をアグリゴメーターを用いて透過度を測定することによ
り検定した。結果を表３に示す。血小板凝集阻害率は下
記の式で示される値である。 凝集阻害率（１−Ｔ／Ｔ_ｏ）× １００％ Ｔ_ｏ＝プロペンアミド誘導体共重合物の塩非添加時の透過度 Ｔ ＝プロペンアミド誘導体共重合物の塩添加時の透過度

【００９３】 表３ 血小板凝集阻害 阻害活性 添加化合物 ＡＤＰ刺激 コラーゲン刺激 合成物１４−１ ○ ○ 合成物１４−２ ○ ○ 合成物１４−３ ○ ○ 合成物１５ ○ ○ 合成物１６ ○ ○ 合成物１７ ○ ○ 合成物１８ △ ○ 合成物１９ ○ ○ 合成物２０ ○ ○ 合成物２１ ○ ○ 合成物２２ ○ ○ 合成物２３ ○ ○ 合成物２４ ○ ○ 合成物２５ ○ ○ 合成物２６ ○ ○ 合成物２７ ○ ○ 製造物 ６ × × ＲＧＤ △〜○ △〜○ ＲＧＤＳ △〜○ △〜○ ＩＣ50（μｇ/ml ）；○：４０以下、△：８０〜４０、×：８０以上

【００９４】

【発明の効果】本発明の疎水性単量体は、Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐを必須単位とするオリゴペプチドを分子内に
含むプロペンアミド誘導体と共重合させることにより、
細胞接着抑制効果や血小板凝集・粘着抑制効果を示す両
親媒性の高分子化合物を作るのに有用である。また、こ
の高分子化合物は、局所濃縮効果によるレセプターとの
結合能の増強およびミセル形成等による血液中での安定
化等が期待できる。

【００９５】

【配列表】

【００９６】配列番号：１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 β- Ala-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp 1 5

【００９７】配列番号：２ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 β- Ala-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp 1 5

【００９８】配列番号：３ 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 β- Ala-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp 1 5 10 15

【００９９】配列番号：４ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gln-Arg-Gly-Asp-Ser 1 5

【０１００】配列番号：５ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly-Arg-Gly-Asp-Ser 1 5

【０１０１】配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro 1 5

【０１０２】配列番号：７ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser 1 5

【０１０３】配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 β-Ala-Arg-Gly-Asp-Ser 1 5

【０１０４】配列番号：９ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 β-Ala-Arg-Gly-Asp-Ser-Gly 1 5

【０１０５】配列番号：１０ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Arg-Gly-Asp-Gly 1

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/08 Ｃ０７Ｋ 7/06 Ｚ 5/10 Ｃ０８Ｆ 220/16 ＭＭＣ 7/06 220/58 ＭＮＧ Ｃ０８Ｆ 220/16 ＭＭＣ 220/60 ＭＮＨ 220/58 ＭＮＧ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＢ 220/60 ＭＮＨ ＡＤＳ Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ (56)参考文献 特開 昭54−76513（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−118830（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−95525（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−127493（ＪＰ，Ａ) 米国特許3746748（ＵＳ，Ａ) Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉ ｃａｔｉｏｎｓ，ｖｏｌ．20 ｎｏ. ４，（1990）ｐ．557−562 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏＦ Ａｐｐｌｉｅ ｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ, ｖｏｌ．30（1985）ｐ．3961−3970 Ｐｏｌｙｍｅｒ，ｖｏｌ．16（1975) ｐ．881−888 第11回日本バイオマテリアル学会大会 予稿集（1989）第82頁

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記一般式（１）の側鎖にアミド結合、エ
   ステル結合、エーテル結合、ウレタン結合のいずれを介
   して下記一般式（２）の疎水部が結合された疎水性単量
   体。 一般式（１） 【化１】 式中、Ｒ_１、Ｒ_２は水素原子またはカルボキシル基を表
   す。Ｒ_３は水素原子、メチル基、エチル基、ハロゲン原
   子、カルボキシメチル基のいずれか１つを表す。Ｒ_４は
   炭素数が１〜１１の直鎖もしくは分岐のアルキレン基、
   または炭素数が６〜１１のアリーレン基であり、置換基
   を有していても良い。Ａ、Ｂ は−Ｏ−又は、−ＮＨ−
   を示す。〔 〕は存在するかあるいは存在しなくても良
   い。 一般式（２） 【化２】 式中、Ｒ_５は炭素数が１〜１１の直鎖もしくは分岐のア
   ルキレン基、または炭素数が６〜１１のアリーレン基で
   あり、置換基を有していても良い。Ｑ、Ｄ は−Ｏ−
   又は、−ＮＨ−を示す。Ｒ_６は炭素数２０のイソプレノ
   イド骨格を有するアルキル基で不飽和基を有していても
   良い。〔 〕は存在するかあるいは存在しなくても良
   い。
2. 【請求項２】下記一般式（３）の側鎖にアミド結合を介
   して下記一般式（４）で表される接着性ペプチドが必須
   単位として結合されたプロペンアミド誘導体と請求項１
   記載の疎水性単量体との共重合物またはその塩。 一般式（３） 【化３】 式中、Ｒ₇ 、Ｒ₈ は水素原子またはカルボキシル基を表
   す。Ｒ₉ は水素原子、メチル基、エチル基、ハロゲン原
   子、カルボキシメチル基のいずれか１つを表す。［ ］
   は存在するかあるいは存在しなくても良い。 一般式（４） 【化４】 式中、Ｘ，ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｐｒ
   ｏから選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示
   し、Ｚは−Ｏ−又は−ＮＨ−を示す。Ｒ₁₀、Ｒ₁₁ のい
   ずれか一方は水素原子又は炭素数が１〜１１の直鎖もし
   くは分岐のアルキレン基、または炭素数が６〜１１のア
   リーレン基であり、置換基を有していても良い。他方は
   水素原子である。ｎは１〜５の整数を表す。［ ］は存
   在するかあるいは存在しなくても良い。
3. 【請求項３】分子量が約３，０００〜２００，０００の
   範囲である、請求項２記載のプロペンアミド誘導体の共
   重合物およびその塩。
4. 【請求項４】請求項２または３記載のプロペンアミド誘
   導体の共重合物およびその塩を有効成分とする動物細胞
   の接着を阻害する薬剤。
5. 【請求項５】請求項２または３記載のプロペンアミド誘
   導体の共重合物およびその塩を有効成分とする血小板凝
   集・粘着抑制剤。