JPH0597699A - プロペンアミド誘導体の重合物からなる癌転移抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記一般式（Ｉ）で表されるプロペンアミド
誘導体の重合物またはその薬理学的に許容される塩を有
効成分として含有してなる癌転移抑制剤。 一般式（Ｉ） H₂C=CR₁-CO-［NH-R₂-CO］-(［Ｘ］- Arg-Gly-Asp-［Ｙ］）_n -Z 式中、Ｒ₁は水素原子、メチル基、エチル基を表し、Ｒ₂
は炭素数が１〜11の直鎖又は分岐のアルキレン基を表
し、該アルキレン基中の炭素原子は−Ｏ−を介して連結
していてもよい。Ｘ，ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｔ
ｈｒ，Ｐｒｏ及びＧｌｎから選択されるアミノ酸残基ま
たはこれらのアミノ酸残基から構成されるペプチド残基
を表し、Ｚは−ＯＨ，−ＯＲ₃，−ＮＲ₄Ｒ₅を表し、Ｒ
_3,Ｒ_4,Ｒ₅は水素原子、メチル、エチル基の中から選択
される。ｎは１〜３の整数を表す。また、式中の［ ］
は［ ］内の残基が存在してもしなくてもよいことを示
す。 【効果】 本発明のプロペンアミド誘導体重合物は、細
胞接着性蛋白質のコア配列に比べて細胞接着性が大き
く、癌転移抑制作用等の種々の生物活性を有し、毒性の
問題も殆どない。また、その構造も単純であり合成も容
易であり、医薬としての価値は高いものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐ
のトリペプチドを必須単位として有するプロペンアミド
誘導体の重合物またはその薬理学的に許容される塩の癌
転移抑制剤としての用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与する蛋白質であり、血小板凝集や癌転移にも
関与していると考えられている。これらの相互作用は一
連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィブロネ
クチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもかかわら
ず、これらのレセプターはその中のArg-Gly-Asp配列を
特異的に認識することが明らかにされ、レセプターとの
相互作用に重要なものであることが報告されている（ネ
イチャー(Nature)、第309巻、30頁、1984年）。このArg
-Gly-Asp配列はビトロネクチン等の他の接着性蛋白質に
も存在しており、フィブロネクチンは上記コア配列を介
して、被接着細胞のレセプターと接合し、その情報を接
着細胞に伝達する。また、ヘパリン、コラーゲン、フィ
ブリン等の生体高分子との結合能も有し、細胞と間質結
合組織との接着、細胞の分化、増殖に関与しているとも
考えられている。この様に、細胞接着活性蛋白質は、種
々の生物活性を有するため、医薬、医用材料への応用が
検討されている。

【０００３】例えば、Arg-Gly-Asp 配列を有する種々
の鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集
を阻害する方法（高分子学会予稿集(Polymer Preprint
s, Japan)、第38巻、3149頁、1989年、特開平2-174797
号）、Arg-Gly-Asp 配列を有するペプチドを細胞移動
抑制剤として用いる方法（特開平2-4716号）、Arg-Gly-
Aspを固定化したPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法
(高分子学会予稿集(Polymer Preprints,Japan)、第37
巻、705頁、1988年）が報告されている。また、ポリマ
ーにArg-Gly-Aspを必須構成単位とするペプチドを共有
結合させ、動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体
として用いる方法（特開平1-309682号、特開平1-305960
号）、Arg-Gly-Asp-Ser配列を有するポリペプチドを体
外血液用血小板保護剤として用いる方法（特開昭64-621
7号）等も開示されている。

【０００４】さらに近年、細胞接着活性蛋白質は、癌転
移に関係する物質としても注目されてきている。癌転移
の一連の段階において、癌細胞は種々の宿主細胞や生体
高分子と接触する。このときフィブロネクチンのような
細胞接着分子が存在すると、該細胞は多細胞塊を形成
し、癌細胞の増殖や生存をより容易にする。ところがこ
の際、フィブロネクチンの接着コアであるトリペプチド
Arg-Gly-Aspが共存すると、競争的に癌細胞上のレセプ
ターと接合することにより癌転移阻害活性を示すことが
報告されている（サイエンス、第２３８巻、４６７ペー
ジ、１９８６年）。更に、効果の増強をはかる目的で、
この配列を有するオリゴペプチド、環状オリゴペプチ
ド、あるいはその繰り返し構造を有するポリペプチドを
用いた癌転移抑制方法も開示されている((Int.J.Biol.M
acromol.)、第11巻、23頁、1989年、同誌、第11巻、226頁、
1989年、(Jpn.J.Cancer Res.)第60巻、722頁、1989年、特
開平2-174797号）。

【０００５】上述のように、フィブロネクチン等の細胞
接着活性蛋白質あるいはそのペプチド断片は様々な生物
活性を有しておりその関連物質を医薬品として応用する
技術の開発が望まれていた。特に、接着コア配列の癌転
移抑制作用は医薬品として応用価値が高い物と考えられ
る。そこで、本発明者らは高分子物質が多様な性状、機
能を有し生体との間で示される相互作用も低分子の場合
と非常に異なっていることに着目し、接着コア配列の持
つ生物活性を充分に保持し、血流中でより安定で、重大
な副作用も示さず且つ合成も容易な新規な化合物を求め
て鋭意研究を行なった結果、Arg-Gly-Aspのトリペプチ
ドを必須単位として有する新規な水溶性プロペンアミド
誘導体重合物とその薬理学的に許容される塩を見出し本
研究を完成したのである。

【０００６】尚、細胞接着分子の不溶性高分子基体への
連結という観点でArg-Gly-Aspを必須単位とするオリゴ
ペプチドを高分子担体に導入した例は見られるが、活性
増強や安定性向上を目的として、Arg-Gly-Aspを必須単
位とするオリゴペプチドを側鎖に有する水溶性のプロペ
ンアミド誘導体重合物を癌転移抑制剤へ応用する例は知
られていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、レセプターの結合能の増強および血液中での安定化
が図られ、かつより簡便な手法で生産可能なArg-Gly-As
pのトリペプチドを必須単位として有する新規なプロペ
ンアミド誘導体の重合物とその薬理学的に許容される塩
を含有する医薬組成物を提供することである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】従って本発明は、下記一
般式（Ｉ）で表されるプロペンアミド誘導体の重合物ま
たはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有
してなる癌転移抑制剤である。 一般式（Ｉ） H₂C=CR₁-CO-［NH-R₂-CO］-(［Ｘ］- Arg-Gly-Asp-［Ｙ］）_n -Z

【０００９】式中、Ｒ₁は水素原子、メチル基、エチ
ル基を表し、Ｒ₂は炭素数が１〜１１の直鎖又は分岐の
アルキレン基を表し、該アルキレン基中の炭素原子は−
Ｏ−を介して連結していてもよい。Ｘ，ＹはＳｅｒ，Ｇ
ｌｙ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ及びＧｌｎから選択され
るアミノ酸残基またはこれらのアミノ酸残基から構成さ
れるペプチド残基を表し、Ｚは−ＯＨ，−ＯＲ₃，−Ｎ
Ｒ₄Ｒ₅を表し、Ｒ_3,Ｒ_4,Ｒ₅は水素原子、メチル、エチ
ル基の中から選択される。ｎは１〜３の整数を表す。ま
た、式中の［ ］は［ ］内の残基が存在してもしなく
てもよいことを示す。

【００１０】プロペンアミド誘導体の重合物またはその
塩の平均分子量は、好ましくは１０万以下、特に好まし
くは５０００〜５万の範囲で、室温で水溶性であること
が好ましい。本発明のプロペンアミド誘導体重合物に含
まれる接着性ペプチドに用いられるアミノ酸はＬ体、Ｄ
体どちらでもよいが、好ましくはＬ体である。

【００１１】本発明のプロペンアミド誘導体重合物の塩
としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸
塩、ホウ酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオ
ロ酢酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、乳酸塩、
酒石酸塩等の有機酸との塩が挙げられ、そのような塩へ
の変換は慣用手段で行なうことができる。

【００１２】ペプチド合成方法は特に限定されないが、
液相法、固相法、および自動合成装置による合成方法が
挙げられる。これらの合成方法の詳細については、生化
学実験講座「タンパク質の化学IV」ｐ２０７−４９５
（日本生化学会編、東京化学同人）、「続生化学実験講
座タンパク質の化学（下）」（日本生化学会編、東京化
学同人）、「ペプチド合成の基礎と実験」（泉屋等編、
丸善）に記載されている。また、市販されている合成ペ
プチドを利用することも可能である。

【００１３】プロペン酸誘導体と細胞接着性ペプチドと
の結合方法としては、活性エステル法、混合酸無水物
法、アジド法、酸塩化物法、対称酸無水物法、ＤＣＣ
法、ＤＣＣ−添加物法、カルボニルジイミダゾール法等
を利用したアミド結合合成方法が挙げられる。さらに、
プロペンアミド誘導体の重合物は一般のラジカル重合
法、イオン重合法により得られる。重合物はゲル濾過
法、透析法、その他既知の方法により特定の分子量分画
を行なうことができる。

【００１４】本発明のプロペンアミド誘導体の重合物ま
たはその塩は、細胞接着性蛋白質のコア配列Ａｒｇ-Ｇ
ｌｙ-Ａｓｐを有し、該コア配列を介して細胞接着性蛋
白質と同様の機序で細胞に接着する。そのため、細胞接
着性蛋白のアゴニストまたはアンタゴニストとして種々
の生理活性を示し、免疫調整作用、創傷治癒作用、毛細
血管中で起こる癌細胞による血小板凝集抑制作用、神経
疾患治癒作用などの広範な生物活性が認められている。
従って、本発明のプロペンアミド誘導体の重合物または
その塩は、その少なくとも一種を、場合により慣用の担
体または医薬用助剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒
剤、免疫調整剤、血小板凝集粘着抑制剤として患者に投
与することが可能である。その投与量は、非経口投与の
場合、０．２μｇ／ｋｇ（体重）〜４００ｍｇ／ｋｇ
（体重）の範囲、経口投与の場合、０．６μｇ／ｋｇ
（体重）〜１．２ｇ／ｋｇ（体重）の範囲で、症状、年
齢、体重等に基づいて決定される。

【００１５】本発明のプロペンアミド誘導体の重合物ま
たはその塩は、非経口、経口のいずれの経路によっても
投与可能であるが、ペプチド系医薬に一般に使用されて
いる投与方法、即ち、非経口投与方法、例えば静脈内投
与、筋肉内投与、皮下投与等によって投与するのが好ま
しい。そのような投与方法に用いられる注射用製剤を製
造する場合、本発明のプロペンアミド誘導体の重合物ま
たはその塩を、例えば、後記実施例で示すようにＰＢＳ
または生理食塩水に溶解して注射用製剤としてもよく、
あるいは０．１Ｎ程度の酢酸水等に溶解した後、凍結乾
燥製剤としてもよい。このような製剤には、グリシンや
アルブミン等の慣用の安定剤を添加してもよい。さら
に、本発明のプロペンアミド誘導体の重合物またはその
塩は、例えばリポソーム中に包容したマイクロカプセル
剤あるいはミクロスフェア状、ハイドロゲル状とすれ
ば、経口投与することも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化菅以外の粘膜からも
吸収させることも可能である。

【００１６】

【実施例】以下実施例により本発明を詳細に説明するが
本発明はこれに限定されるものではない。

【００１７】製造例１ モノマー１の合成 β−アラニン１７．８ｇ（０．２ｍｏｌ）の水酸化ナト
リウム水溶液にメタクリル酸クロリド２０．９ｇ（０．
２ｍｏｌ）を氷冷下滴下し、４時間撹拌後塩酸により中
和した。減圧濃縮により濃縮し沈殿した塩化ナトリウム
をろ別した。濃縮液をクロロホルムで抽出し、乾燥後減
圧濃縮してクロロホルムを留去した。濃縮物をエーテル
で洗浄しモノマー１を白色固体として１７．６ｇ得た
（収率５６％）。

【００１８】モノマー１ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃−ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂−ＣＯＯＨ

【００１９】製造例２〜１０ モノマー２〜１０の合成 製造例１と同様の方法によりアクリル酸クロリドと４−
アミノ酪酸、エタクリル酸クロリドと５−アミノ吉草
酸、メタクリル酸と６−アミノカプロン酸、アクリル酸
と１２−アミノラウリン酸、アクリル酸とロイシン、メ
タクリル酸とグルタミン、アクリル酸と２（２−アミノ
エトキシ）プロピオン酸、メタクリル酸と２（２−アミ
ノエトキシ）酢酸、メタクリル酸とグリシルグリシンと
の反応により以下のプロペン酸誘導体を製造した。

【００２０】モノマー２ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−ＣＯＯＨ 収率 ５２％

【００２１】モノマー３ ＣＨ₂＝ＣＣ₂Ｈ₅ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−ＣＯ
ＯＨ 収率 ６１％

【００２２】モノマー４ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ
ＯＯＨ 収率 ６９％

【００２３】モノマー５ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）₁₁−ＣＯＯＨ 収率 ７１％

【００２４】モノマー６ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨ−ＣＨ（iso-Ｃ₄Ｈ₉）−ＣＯＯＨ 収率 ６４％

【００２５】モノマー７ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ₂ＣＨ₂
ＣＯＮＨ₂ 収率 ５９％

【００２６】モノマー８ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨ−ＣＨ₂ＣＨ₂−０−ＣＨ₂ＣＨ₂−
ＣＯＯＨ 収率 ６８％

【００２７】モノマー９ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−Ｃ
ＯＯＨ 収率 ７４％

【００２８】モノマー１０ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨ−ＣＨ₂ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＯＯＨ 収率 ７０％

【００２９】製造例１１ ポリマー１１の合成 製造例１で合成したカルボキシエチルメタクリルアミド
をラジカル重合により重合した。カルボキシエチルメタ
クリルアミド２ｇを２０ｍｌのＤＭＦに溶解し、和光純
薬製のラジカル開始剤Ｖ65（２，２−アゾビス（２，４
−ジメチルバレロニトリル））１０ｍｇを加え窒素気流
下６５℃で４時間重合した。重合物は酢酸エチルで沈殿
させた後、スペクトラポア７（分子分画量 ３０００）
を用い純水に対して透析し低分子量画分を除いた後凍結
乾燥した。収量は１．２４ｇであった。

【００３０】ポリマー１１ Ｈ−（ＣＨ₂−ＣＨＣＨ₃（ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯ
Ｈ））_n 分子量は東ソー（株）製ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ
カラムを用い、移動相は０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）とし、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎで測定した。Ｐ
ＥＧ換算分子量は約３００００であった。

【００３１】製造例１２〜２７ ペプチドモノマー１２
〜２１、２３〜２７及び２９の合成 上記で製造したプロペンアミド酸誘導体に細胞接着性ペ
プチドを結合したペプチドモノマーに使用する細胞接着
性ペプチドは、固相法、液相法いずれの方法でも得るこ
とができるが、下記のようにして固相法により製造した
接着性ペプチドを使用してペプチドモノマー１２〜２
１、２３〜２７及び２９を製造した。以下に各ペプチド
モノマーの収率、アミノ酸分析及び質量スペクトルを示
す。

【００３２】接着性ペプチドの固相法よる合成 Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ方式によるペプチド合成装置を用
いて合成を行なった。α−アミノ酸の保護には、Ｂｏｃ
基を用いＡｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐを必須単位として含むオ
リゴペプチドを合成しその末端に製造例１〜１０に示し
たプロペン酸誘導体およびアクリル酸、メタクリル酸、
エタクリル酸を縮合させた。トリフルオロメタンスルホ
ン酸を用いて樹脂からの切断及び側鎖保護基の除去を行
ない、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）
で精製し、単一ピークを示すプロペンアミド誘導体を得
た。これを、陰イオン交換樹脂カラム（アンバーライト
ＩＲＡ−４００；Ｃｌ型）を通し塩酸塩とした。

【００３３】以下、アミノ酸残基、保護基、試薬につい
て以下の略号を使用する。

【００３４】 Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＯＢｚｌ ：ベンジルエステル ＨＯＢｔ ：ヒドロキシベンゾトリアゾール ＯＳｕ ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド ＯＮｂ ：ニトロベンジルエステル ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 ＤＣＣ ：ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＣウレア ：シクロヘキシルウレア Ｍｔｓ ：メシチレンスルホニル ＤＭＦ ：ジメチルホルムアミド Ｔ ：Ｔｈｒ スレオニン Ｒ ：Ａｒｇ アルギニン Ｇ ：Ｇｌｙ グリシン Ｄ ：Ａｓｐ アスパラギン酸 Ｓ ：Ｓｅｒ セリン Ｐ ：Ｐｒｏ プロリン Ｖ ：Ｖａｌ バリン Ｑ ：Ｇｌｎ グルタミン

【００３５】ペプチドモノマー１２ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤ 収率３５％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９９８２ Ｇ：１．０３１９ Ｄ：０．９９７１ ４−アミノ酪酸：１．０２４ マススペクトル Ｍ⁺： ４８６

【００３６】ペプチドモノマー１３ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−（ＲＧＤ）₂ 収率２４％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：１．９５６８ Ｇ：２．１００４ Ｄ：１．９６７３ β−アラニン：１．０２５７ マススペクトル Ｍ⁺： ８１５

【００３７】ペプチドモノマー１４ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−（ＲＧＤ）₃ 収率１７％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：２．８３８２ Ｇ：３．１１２１ Ｄ：２．９４５１ β−アラニン：１．０２８７ マススペクトル Ｍ⁺： １１４４

【００３８】ペプチドモノマー１５ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＧＲＧＤＳ 収率１０％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：１．０４８４ Ｇ：２．１９６５ Ｄ：１．０３３３ Ｓ：１．１０３２ β−アラニン：１．０４４９ マススペクトル Ｍ⁺： ６３０

【００３９】ペプチドモノマー１６ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤＳ 収率 ３３％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９９８９ Ｇ：１．１００８ Ｄ：０．９５９６ Ｓ：０．８９９１ β−アラニン：１．００５４ マススペクトル Ｍ⁺： ５７３

【００４０】ペプチドモノマー１７ ＣＨ₂＝ＣＣ₂Ｈ₅ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−
ＲＧＤＳ 収率 ３１％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９８７４ Ｇ：０．９９２７ Ｄ：０．９９３５ Ｓ：０．８８６９ ４−アミノ酪酸：０.７４１ マススペクトル Ｍ⁺： ６１５

【００４１】ペプチドモノマー１８ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）₅−ＣＯ−ＲＧＤＳ 収率 ３０％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９７５５ Ｇ：１．０３６１ Ｄ：０．９６７１ Ｓ：０．８９４３ マススペクトル Ｍ⁺： ６１５

【００４２】ペプチドモノマー１９ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）₁₁−ＣＯ−ＲＧＤＳ 収率 ２７％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９６４７ Ｇ：１．０５７０ Ｄ：０．９８８４ Ｓ：０．８６０３ マススペクトル Ｍ⁺： ６８６

【００４３】ペプチドモノマー２０ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ（isoＣ₄Ｈ₉）ＣＯ−ＲＧＤＳ 収率 ３１％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９８１４ Ｇ：１．０５１９ Ｄ：０．９７３１ Ｓ：０．８９８９ ロイシン：０．９８５３ マススペクトル Ｍ⁺： ６０１

【００４４】ペプチドモノマー２１ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ（ＣＯ−ＲＧＤＳ）ＣＨ₂
ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂ 収率 ３３％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９７７１ Ｇ：１．０５０１ Ｄ：０．９６５１ Ｓ：０．８９６９ グルタミン酸：０．９５８７ マススペクトル Ｍ⁺： ６３０

【００４５】ペプチドモノマー２３ ＣＨ₂＝ＣＣ₂Ｈ₅ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）₄−ＣＯ−ＧＲＧ
ＤＳ 収率 ３５％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９５８２ Ｇ：２．０３７１ Ｄ：０．９８７４ Ｓ：０．８７３３ マススペクトル Ｍ⁺： ６７２

【００４６】ペプチドモノマー２４ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯ−ＧＲＧＤＳＰ 収率 ２６％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９６６９ Ｇ：２．０５５２ Ｄ：０．９８０９ Ｓ：０．８６７７ Ｐ：０．９５４６ マススペクトル Ｍ⁺： ６５６

【００４７】ペプチドモノマー２５ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯ−ＧＧＧＲＧＤＳ 収率 ３０％ アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９５５４ Ｇ：４．００１１ Ｄ：０．９３８０ Ｓ：０．８５１８ マススペクトル Ｍ⁺： ６５９

【００４８】ペプチドモノマー２６ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂ＣＯ−
ＧＲＧＤＳ 収率 ２４％ アミノ酸分析（nmol/50μl) R: 1.0480 G: 2.1073 D: 0.9884 S: 0.9005 マススペクトル Ｍ⁺ ： 659

【００４９】ペプチドモノマー２７ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤＴ 収率 ３０％ アミノ酸分析（nmol/50μl) R: 1.0612 G: 0.9879 D: 1.0265 T: 0.8996 β−アラニン : 0.9973 マススペクトル Ｍ⁺ ： 586

【００５０】ペプチドモノマー２９ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯ−ＶＶＶＲＧＤＳ 収率 １９％ アミノ酸分析（nmol/50μl) R :0.9647 G :1.0518 D :0.9896 S :1.0391 V :3.0996 マススペクトル Ｍ⁺ ：７８４

【００５１】製造例２８ ペプチドモノマー３０の合成
（液相法） ペプチドモノマー３０ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤＳ 上記ペプチドモノマー３０を逐次延長法により以下に記
す経路で液相法で合成したペプチドを使用して製造し
た。 （A）Ｂｏｃ Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）６０ｇ（０．２ｍｏｌ）を４０
０ｍｌの酢酸エチルに加え、さらにトリエチルアミン２
１ｇ（０．２ｍｏｌ）臭化ベンジル３５．４ｇ（０．２
ｍｏｌ）を加えて還流下４時間反応した。冷却後塩を濾
別した後ＮａＨＣＯ₃水溶液、ＮａＣｌ水溶液で洗浄し
た。これをＮａ₂ＳＯ₄で乾燥した後減圧乾固し、白色粉
末５４ｇ（収率６８％）を得た。

【００５２】（B）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌ ３０ｇ（７８ｍｍｏ
ｌ）にＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂＝１／１ ２００ｍｌを加え
室温で１時間撹拌した後、ＴＦＡとＣＨ₂Ｃｌ₂を減圧濃
縮した。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ₃水溶液
で中和した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ₂ＳＯ₄で
乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。

【００５３】この化合物と、ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）
ＯＳｕ ３２．８ｇ（７８ ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂５
００ｍｌに溶解し終夜撹拌した。減圧下ＣＨ₂Ｃｌ₂を留
去してから酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ3水溶
液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄
し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥してから減圧乾固して白色粉末を
４１ｇ（収率８９％）得た。

【００５４】（C）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌ３
５ｇ（５９ｍｍｏｌ）にＴＦＡ：ＣＨ₂Ｃｌ₂＝１：１を
２００ｍｌを加えて、室温で１時間撹拌した後、ＴＦＡ
とＣＨ₂Ｃｌ₂を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解
しＮａＨＣＯ₃水溶液で中和した後ＮａＣｌ水溶液で洗
浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥してから酢酸エチルを減圧留去
した。

【００５５】この化合物とＢｏｃＧｌｙの９．８ｇ（５
９ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解し、ＤＣＣ１２．２ｇ
（５９ｍｍｏｌ）を氷冷下加え３時間撹拌してから、さ
らに室温で終夜撹拌した。ＤＣウレアをろ別してから減
圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ₃水溶液、
１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄し、Ｎ
ａ₂ＳＯ₄で乾燥してから減圧乾固して白色粉末を３０．
５ｇ（収率７５％）得た。

【００５６】（D）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの合成 ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＢ
ｚｌの２５ｇ（３９ｍｍｏｌ）にＴＦＡ：ＣＨ₂Ｃｌ₂＝
１：１の２００ｍｌを加えて室温で１時間撹拌した後、
ＴＦＡとＣＨ₂Ｃｌ₂ を減圧濃縮した。これを酢酸エチ
ルに溶解しＮａＨＣＯ₃水溶液で中和した後ＮａＣｌ水
溶液で洗浄した。Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥してから酢酸エチル
を減圧留去した。

【００５７】この化合物とＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）１
７．８ｇ（３９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ４００ｍｌに溶解
し、ＤＣＣの８．０ｇ（３９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔの
６．８ｇ（４５ｍｍｏｌ）を氷冷下加え３時間撹拌して
から、さらに室温で終夜撹拌した。ＤＣウレアを濾別し
てから減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ₃
水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗
浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥してから減圧乾固して白色粉末
を１９．５ｇ（収率５０％）得た。

【００５８】（E）ペプチドモノマー３０の合成 ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）ＯＢｚｌの１５．０ｇ（１５ｍｍｏｌ）に
ＴＦＡ：ＣＨ₂Ｃｌ₂＝１：１ １００ｍｌ加えて室温で
１時間撹拌した後、ＴＦＡとＣＨ₂Ｃｌ₂ を減圧濃縮し
た。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ₃水溶液で中
和した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥
してから酢酸エチルを減圧留去した。

【００５９】この化合物とカルボキシエチルメタクリル
アミド２．４ｇ（１５ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂ ２００
ｍｌに溶解しＤＣＣ３．１ｇ（１５ｍｍｏｌ）を氷冷下
加え３時間撹拌してから、さらに室温で終夜撹拌した。
減圧濃縮してからアセトンを加え生じたＤＣウレアをろ
別した。減圧濃縮後、酢酸エチルに続いてエーテルで洗
浄し、減圧乾燥して白色粉末を１０．０ｇ（収率６５
％）得た。

【００６０】この化合物１０ｇ（９．８ｍｍｏｌ）のＴ
ＦＡ溶液に、１Ｍートリフルオロメタンスルホン酸−チ
オアニソール−ｍ−クレゾールのＴＦＡ溶液を氷冷下加
えて１時間反応させ、ペプチド側鎖および末端の保護基
の脱保護を行なった。反応液をエーテル中に投入しオイ
ル状の沈殿物を蒸留水に溶解し酢酸エチルで洗浄した
後、陰イオン交換樹脂カラム（アンバーライトＩＲＡ−
４００；Ｃｌ型）に通して塩酸塩とし凍結乾燥した。白
色固体としてペプチドモノマー３０が４．８ｇ（収率８
０％）得られた。以下にアミノ酸分析と質量スペクトル
を示す。 アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９８７７ Ｇ：０．９９１６ Ｄ：０．９８９９ Ｓ：０．８８９１ β−アラニン：１．０１１５ マススペクトル Ｍ⁺： ５７３

【００６１】製造例２９ ペプチドモノマー３１の合成 ペプチドモノマー３１ ＣＨ₂＝ＣＣＨ₃ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤＳＧ−
ＮＨ₂ 製造例２８と同様な方法でペプチドモノマー３１を製造
した。以下に製造に使用した試薬及び各収量、並びにペ
プチドモノマー３１のアミノ酸分析と質量スペクトルを
示す。 （A）ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂の合成 ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ） ： ５９ｇ（０．２ｍｏｌ） ＧｌｙＮＨ₂・ＨＣｌ ： ２２．１ｇ（０．２ｍｏｌ） Ｎ−メチルモルホリン ： ２０．２ｇ（０．２ｍｏｌ） ＣＨ₂Ｃｌ₂ ： ８００ｍｌ ＤＣＣ ：４１．２ｇ（０．２ｍｏｌ） （A）の収量 ５８．３ｇ（収率８３％）

【００６２】 （B）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂の合成 （１）の生成物 ：５６．２ｇ（０．１６ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ） ：５１．７ｇ（０．１６ｍｏｌ） ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：８００ｍｌ ＤＣＣ ：３３ｇ（０．１６ｍｏｌ） （B）の収量 ７１．２ｇ（収率 ８０％）

【００６３】 （C）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ₂の合成 （B）の生成物 ：６６．７ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＧｌｙ ：５１．７ｇ（０．１２ｍｏｌ） ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：７００ｍｌ ＤＣＣ ：２４．７（０．１２ｍｏｌ） （C）の収量 ６１．８ｇ（収率 ８４％）

【００６４】 （D）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｇｌ ｙＮＨ₂ の合成 （C）の生成物 ：６１．３ｇ（０．１ｍｏｌ ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：２００ｍｌ／２００ｍｌ ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ） ：４５．６ｇ（０．１ｍｏｌ） ＤＭＦ ：８００ｍｌ ＤＣＣ ：２２．５（０．１ｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：１４ｇ（０．１ｍｏｌ） （D）の収量 ４２．８ｇ（収率 ４５％）

【００６５】 （E）ペプチドモノマー３１の合成 （D）の生成物 ：５．０ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ：５０ｍｌ／５０ｍｌ カルボキシエチルメタクリルアミド ：０．８３ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＤＭＦ ：５０ｍｌ ＤＣＣ ：１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ） ＨＯＢｔ ：０．７２ｇ（５．３ｍｍｏｌ） １Ｍ−トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール− ｍ−クレゾールのＴＦＡ溶液： ２５０ｍｌ アンバーライトＩＲＡ−４００；Ｃｌ型処理 ペプチドモノマー３１の収量 ２．２９ｇ（収率 ６
５％） アミノ酸分析(nmol/50μl) Ｒ：０．９５１７ Ｇ：２．１００４ Ｄ：０．９７５３ Ｓ：０．８９２６ β−アラニン：１．０１４３ マススペクトル Ｍ⁺： ６２９

【００６６】製造例３０ ペプチドモノマー２２の合
成 ペプチドモノマー２２ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯ−ＧＧＲＧＤＳ−ＮＨ₂ 製造例２９と同様な方法で上記ペプチドモノマー２２を
製造した。以下に製造に使用した試薬及び各収量並びに
ペプチドモノマー２２のアミノ酸分析と質量スペクトル
を示す。 （A) BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)NH₂の合成 BocAsp(OBzl) ： 32.3 g (0.1 mol) Ser(Bzl)NH₂ HCl ： 23.0 g (0.1 mol) N-メチルモルフォリン ： 10.1 g (0.1 mol) CH₂Cl₂ ： 500 ml DCC ： 20.6 g (0.1 mol) (A)の収量 44.2 g （収率 88 ％）

【００６７】(B)BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)NH₂ の合成 (A)の生成物 ：25.0 g (0.05 mol) TFA/CH₂Cl₂ ：150 ml/150 ml BocGly ： 8.75 g (0.01 mol) CH₂Cl₂ ： 300 ml DCC ：10.3 g (0.05 mol) (B)の収量 26.1 g （収率 91 ％）

【００６８】(C)BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)NH₂
の合成 （B）の生成物 ： 17.3 g (0.03 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 100 ml/100ml BocArg(Mts) ：13.7 g (0.03mol) DMF ：250 ml DCC ：6.18 g (0.03 mol) HOBt ：4.0 g (0.03mol) (c)の収量 17.5 g （収率 63 ％）

【００６９】(D)BocGlyArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)N
H₂の合成 (C)の生成物 ：9.3 g (0.01 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 100 ml/100ml BocGly ： 1.75 g (0.01 mol) DMF ： 80 ml DCC ： 2.06 g (0.01 mol) HOBt ： 1.36 g (0.01mol) (D)の収量 6.53 g （収率 65 ％）

【００７０】(E)BocGlyGlyArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bz
l)NH₂ の合成 (D) の生成物 ： 5.02 g (0.005 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 50 ml/50 ml BocGly ： 0.88 g (0.005 mol) DMF ： 200 ml DCC ： 1.03 g (0.005 mol) HOBt ： 0.68 g (0.005 mol) (e)の収量 3.84 g （収率 70 ％）

【００７１】(F) ペプチドモノマー２２の合成 (E) の生成物 ： 3.23 g (0.003 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 40 ml/40 ml メタクリル酸 ：0.22 g (0.003 mol) DMF ： 60 ml DCC ： 0.62 g (0.003 mol) HOBt ： 0.41 g (0.003 mol) 1M−トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール−
m-クレゾールのＴＦＡ溶液： 25 ml アンバーライトIRA-400;Cl型処理 ペプチドモノマー22の収量 2.6 g アミノ酸分析（nmol/50μl) R: 0.9845 G: 3.1361 D: 0.9554 S: 0.8879 マススペクトル Ｍ⁺ : 600

【００７２】製造例３１ ペプチドモノマー２８の合成 ペプチドモノマー２８ ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ−ＲＧＤＳＰ−Ｎ
（ＣＨ₃）₂ 製造例３０と同様の方法でペプチドモノマー２８を製造
した。以下に製造に使用した試薬及び各収量、並びにペ
プチドモノマー２８のアミノ酸分析と質量スペクトルを
示す。

【００７３】(A)BocSer(Bzl)ProN(CH₃)₂の合成 BocSer(Bzl) ：29.5 g (0.1mol) ProN(CH₃)₂ HCl ：17.8 g (0.1 mol) Ｎ−メチルモルホリン ：10.1 g (0.1 mol) CH₂Cl₂ ：500 ml DCC ：20.6 g (0.1 mol) (A)の収量 31.6 g （収率 45 ％）

【００７４】(B) BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)ProN(CH₃)₂の合
成 （A)の生成物 ： 22.8 g (0.05 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 150 ml/ 150 ml BocAsp(OBzl) ： 16.2 g (0.05 mol) CH₂Cl₂ ：500 ml DCC ： 10.3 g (0.05mol) (B)の収量 24.8 g （収率 79 ％）

【００７５】(C)BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)ProN(CH₃)₂
の合成 (B) の生成物 ： 12.5 g (0.02 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 150 ml/150 ml BocGly ： 3.5 g (0.02mol) CH₂Cl₂ ： 350 ml DCC ： 4.1 g (0.02 mol) (C)の収量 10.2 g （収率 75 ％）

【００７６】(D)BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)ProN
(CH₃)₂ の合成 (C) の生成物 ： 6.8 g (0.01 mol) TFA/CH₂Cl₂ ：100 ml/100ml BocArg(Mts) ：4.6 g (0.01 mol) DMF ：150 ml DCC ：2.06 g (0.01mol) HOBt ：1.36 g (0.01mol) (D)の収量 5.8 g （収率 57 ％）

【００７７】(E) ペプチドモノマー２８の合成 (D) の生成物 ： 1.02 g (0.001 mol) TFA/CH₂Cl₂ ： 100 ml/100 ml カルボキシエチルメタクリルアミド： 0.143 g (0.001
mol) DMF ： 100 ml DCC ： 0.206 g (0.001 mol) HOBt ： 0.13 g (0.00mol) 1M−トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール−
m-クレゾールのTFA溶液 ： 50 ml ペプチドモノマー28の収量 0.6 g アミノ酸分析（nmol/50μl) R : 1.0761 G : 1.0049 D : 0.9959 P : 1.0834 マススペクトル Ｍ⁺ : 611

【００７８】製造例３２ 目的物（本発明のプロペンア
ミド誘導体重合物）３２の合成 ペプチドモノマー１５の５００ｍｇを水５ｍｌに溶解
し、１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７．４に調整した後、開始剤
として過硫酸カリウム２．５ｍｇと亜硫酸水素ナトリウ
ム１．０ｍｇを加え窒素気流下２０℃で２０時間重合し
目的物３２を得た。

【００７９】スペクトラポア７分子分画量３０００を用
いて純水に対して透析し低分子量分を除いた後凍結乾燥
させた（収量２４０ｍｇ）。ゲルクロマトグラフィーに
より目的物３２の分子量分画を行なった。分子量は製造
例１１と同様の方法で測定した。 画分１ 分子量約 ４８０００ （目的物３２−１） 画分２ 分子量約 ２１０００ （目的物３２−２） 画分３ 分子量約 １２０００ （目的物３２−３）

【００８０】製造例３３ 目的物３２−４の合成（開始
剤量の変更） 上記製造例３２において開始剤を下記のものに変更して
ペプチドモノマー１５の重合を行い、目的物３４−４を
製造した。下記に収量と分子量を示す。 開始剤 過硫酸カリウム１０ｍｇ 亜硫酸水素ナトリウム４ｍｇ 収量 １８０ｍｇ（目的物３２−４） 分子量 約５０００

【００８１】製造例３４〜５２ 目的物３３〜５１の合
成 製造例３２及び３３と同様の方法でペプチドモノマー１
２〜１４及び１６〜３１の重合を行ない、目的物３３〜
５１を製造した。各ポリマーの収量及び分子量を以下に
示す。 ──────────────────────────────── 目的物No. モノマーNo. ポリマー収量(mg) 分子量 ──────────────────────────────── ３３ １２ ２３０ １５０００ ３４ １３ １８０ １３０００ ３５ １４ １９０ １５０００ ３６ １６ １５０ １１０００ ３７ １７ ２４０ １６０００ ３８ １８ １２０ ８０００ ３９ １９ １７０ １００００ ４０ ２０ １４０ ９０００ ４１ ２１ １７０ １１０００ ４２ ２２ １３０ １２０００ ４３ ２３ １５０ ９０００ ４４ ２４ １４０ ８０００ ４５ ２５ １３０ ８０００ ４６ ２６ １７０ １００００ ４７ ２７ ２００ １５０００ ４８ ２８ １９０ １３０００ ４９ ２９ １５０ １００００ ５０ ３０ １２０ １５０００ ５１ ３１ １８０ ７５００ ────────────────────────────────

【００８２】試験例１（実験的肺転移） 以下のような試験を行い、本発明の化合物の癌転移阻止
作用について検討した。目的物３２−３、目的物３２−
４、目的物３５、目的物３７、目的物３９、目的物４
０、目的物４４、目的物４６、目的物４９、目的物５０
を各々１０００μgと、非常に転移性の強い癌細胞であ
るB16-BL6 メラノーマ細胞を各々PBS中で混合後、その
０.2mlを１群５匹のC57BL/6の雄マウスに静脈注射し
た。注射された混合物0.2 ml中にはB16-BL6 細胞が５×
10⁴ 個含まれていた。投与１４日後にマウスの肺におけ
る癌細胞コロニー数を数えて対照のPBS投与群と比較し
た（実験１）。その結果を表１に示す。この結果から明
らかな通り、目的物３２、３５、３９、４０、４４、４
６、４９あるいは５０の投与により肺への癌転移は顕著
に抑制された。これに対して、Arg-Gly-Asp 及び接着性
ペプチドを含まないポリマー１１の投与ではそのような
転移の抑制は見られなかった。同表に示すように,本発
明の化合物中の活性ペプチドArg-Gly-Aspや Arg-Gly-As
p-Ser 等の含量が４００〜９００μg/1000μgであるこ
とを考慮すると、少ない量で高い効果を発現しているこ
とがわかる。

【００８３】更に、目的物３２、３５、３７、４７、５
０の投与量をそれぞれ５００μgに減じて上記実験１と
同様の方法でマウスに投与したときの効果を検討した
（実験２）。表１に示す結果によれば、本発明の化合物
はいずれも、対照のPBS投与群に比べて顕著な転移抑制
効果を示した。また、本発明の化合物群をB16-BL 6細胞
と混合せずにB16-BL 6細胞を投与した５分後にマウスに
静脈投与しても、やはり高い転移抑制効果が得られた。
この結果は、本発明の化合物を静脈注射等の適当な方法
で投与して、癌の転移抑制効果が得られることを示して
いる。

【００８４】 表１ B16-BL6メラノーマ細胞の注射で誘発された癌の実験的肺転移に対するポ リペプチドの効果 ──────────────────────────────────── 投与化合物 投与時** 投与量 肺への転移数 有効ペプチド含量 （μg） 平均±SD（範囲） （μg/投与量） ──────────────────────────────────── 実験１ ＰＢＳ（未処理）同時 −−−− 85±20 (53-101) 目的物３２−３ 同時 １０００ 14±３ (11-18)* 676 目的物３２−４ 同時 １０００ 16±13 (2-33)* 676 目的物 ３５ 同時 １０００ 20±７ (6-12)* 910 目的物 ３７ 同時 １０００ 16±６ (8-14)* 706 目的物 ３９ 同時 １０００ 18±８ (8-13)* 619 目的物 ４０ 同時 １０００ 25±９ (12-25)* 738 目的物 ４４ 同時 １０００ 21±10 (10-22)* 894 目的物 ４６ 同時 １０００ 12±９ (4-19)* 652 目的物 ４９ 同時 １０００ 22±10 (6-29)* 552 目的物 ５０ 同時 １０００ 8±５ (2-12)* 753 ＲＧＤ 同時 １０００ 66±16 (13-20) ＲＧＤＳ 同時 １０００ 42±18 (14-60)* ＧＲＧＤＳ 同時 １０００ 40±15 (26-59) ＧＧＲＧＤＳＰ 同時 １０００ 45±20 (28-70) ポリマー１１ 同時 １０００ 74±14 (57-89)

【００８５】 実験２ ＰＢＳ（未処理）同時 −−−− 64±11 (48-85) 目的物３２−３ 同時 ５００ 21±８ (12-24)* 別個 ５００ 30±９ (18-27)* 目的物 ３５ 同時 ５００ 16±13 (2-33) 別個 ５００ 19±８ (13-29)* 目的物 ３７ 同時 ５００ 20±６ (13-28) 目的物 ４７ 同時 ５００ 14±５ (8-18)* 目的物 ５０ 同時 ５００ 13±４ (8-18)* ──────────────────────────────────── * t検定で未処理対照と比較して p＜0.001 ** 「同時」は投与化合物と癌細胞を同時に注射したこ
とを示し、「別個」は投与化合物と癌細胞を別々に注射
したことを示す。

【００８６】試験例２ 自然転移モデルによる癌転移抑
制効果 さらに本発明の化合物群が癌の転移を抑制することを自
然転移モデルによって確認した。即ち、B16-BL6細胞を
１群５匹のC57BL/マウスの足踵に移植し、移植後一定期
間内に本発明の化合物群を５０μgまたは１００μgを移
植癌部に直接単回あるいは複数回局所投与した。移植後
２１日目に癌部を切除し、その２週間後にマウスを解剖
し肺への癌の転移を調べた。その結果を表２に示す。癌
移植後７日目に本発明の化合物群を１００μgを単回投
与しその後２日毎に複数回投与することにより、または
７、１０、１３、及び１６日目に５０μgずつ複数回投
与することにより、移植癌自体の増殖は抑制されなかっ
たものの、肺への癌の転移は顕著に抑制された。

【００８７】 表２ 足踵に投与したＢ１６−ＢＬ６メラノーマ細胞の自然肺転移モデルにおけ るプロペンアミド誘導体重合物の抑制効果 ──────────────────────────────────── 投与化合物 投与量 投与日 ２１日目における （μg/マウス) 移植癌の大き 肺への転移数 さ（mm±SD) 平均±SD（範囲） ──────────────────────────────────── 未処理（PBS) 12±2 50±20(28ー86) 目的物32-3 100x7 7,9,11,13,15,17,19 12±2 24±12(5-36) 目的物32-4 同上 同上 11±1 19±10(9ー36) 目的物35 同上 同上 12±2 20±8(10ー31) 目的物36 同上 同上 11±2 26±8(19ー43) 目的物37 50X4 7,10,13,16 11±2 18±9(8-31) 目的物39 100x7 7,9,11,13,15,17,19 13±3 20±6(15-27) 目的物42 同上 同上 12±2 9±5(1ー16) 目的物44 同上 同上 13±3 12±6(7ー22) 目的物49 同上 同上 13±3 17±7(7ー28) 目的物50 同上 同上 13±3 7±3(3ー10) RGDS 同上 同上 12±2 62±13(41ー77) GGRGDSP 同上 同上 12±2 45±17(26ー64) ──────────────────────────────────── * スチューデントのt検定で未処理群に対して p＜0.001

【００８８】試験例３ 毒性 上記の試験において、本発明の化合物群は、宿主マウス
の赤血球細胞や脾臓及び胸腺細胞に対する細胞毒性や血
清蛋白質に対する好ましくない凝集作用を有しないこと
が確認された。

【００８９】

【発明の効果】以上説明した通り、本発明のプロペンア
ミド誘導体重合物は、細胞接着性蛋白質のコア配列に比
べて細胞接着性が大きく、癌転移抑制作用等の種々の生
物活性を有し、毒性の問題も殆どない。また、その構造
も単純であり合成も容易であり、医薬としての価値は高
いものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 済木 育夫 北海道札幌市厚別区厚別北３条西５丁目12 −６ (72)発明者 東 市郎 北海道札幌市南区真駒内上町５丁目３−２

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で表されるプロペンア
   ミド誘導体の重合物またはその薬理学的に許容される塩
   を有効成分として含有してなる癌転移抑制剤。 一般式（Ｉ） H₂C=CR₁-CO-［NH-R₂-CO］-(［Ｘ］- Arg-Gly-Asp-［Ｙ］）_n -Z （式中、Ｒ₁は水素原子、メチル基またはエチル基を表
   し、Ｒ₂は炭素数が１〜１１の直鎖又は分岐のアルキレ
   ン基を表し、該アルキレン基中の炭素原子は−Ｏ−を介
   して連結していてもよい。Ｘ，ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，Ｖ
   ａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ及びＧｌｎから選択されるアミノ
   酸残基またはこれらのアミノ酸残基から構成されるペプ
   チド残基を表し、Ｚは−ＯＨ，−ＯＲ₃または−ＮＲ₄Ｒ
   ₅を表し、Ｒ_3,Ｒ_4,Ｒ₅は水素原子、メチル、エチル基の
   中から選択される。ｎは１〜３の整数を表す。また、式
   中の［ ］は［ ］内の残基が存在してもしなくてもよ
   いことを示す。）