JP2662830B2 - Ｃｍ−キチン誘導体およびその用途 - Google Patents
Ｃｍ−キチン誘導体およびその用途Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Arg-Gly-Asp のトリペ
プチドを必須単位として有するＣＭ−キチン誘導体およ
びその塩、並びにそれを有効成分とする動物細胞の接着
阻害剤及び血小板の凝集・粘着抑制剤に関するものであ
る。
プチドを必須単位として有するＣＭ−キチン誘導体およ
びその塩、並びにそれを有効成分とする動物細胞の接着
阻害剤及び血小板の凝集・粘着抑制剤に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのArg-Gly-Asp 配列
を特異的に認識することが明らかにされ、レセプターと
の相互作用に重要なものであることが報告されている
（ネイチャー（Nature) 、第３０９巻、３０頁、１９８
４年）。以来、Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるい
はポリペプチドを用いる研究が進められている。
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのArg-Gly-Asp 配列
を特異的に認識することが明らかにされ、レセプターと
の相互作用に重要なものであることが報告されている
（ネイチャー（Nature) 、第３０９巻、３０頁、１９８
４年）。以来、Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるい
はポリペプチドを用いる研究が進められている。
【０００３】例えば、Arg-Gly-Asp 配列を有する種々の
鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集を
阻害する方法（高分子学会予稿集(Polymer Preprints,
Japan)、第３８巻、３１４９頁、１９８９年、特開平２
−１７４７９７号）、 Arg-Gly-Asp配列を有するペプチ
ドを細胞移動抑制剤として用いる方法 (特開平２−４７
１６号) 、Arg-Gly-Asp を固定化したＰＭＭＡ膜を細胞
接着膜として用いる方法（高分子学会予稿集（Polymer
Preprints,Japan)、第３７巻、７０５頁、1988年) が報
告されている。さらに、ポリマーにArg-Gly-Asp を必須
構成単位とするペプチドを共有結合させ動物細胞培養基
体、生体複合人工臓器用基体として用いる方法（特開平
１−３０９６８２号、特開平１−３０５９６０号）、Ar
g-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリペプチドを体外血液用
血小板保護剤として用いる方法が開示されている（特開
昭64−６２１７号）。また、Arg-Gly-Asp 配列を有する
オリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を有するポリ
ペプチドを用いて、ガン転移を抑制する方法が知られて
いる（(Int. J. Biol. Macromol.) 、第１１巻、２３
頁、１９８９年、同誌、第１１巻、２２６頁、１９８９
年、（Jpn. J. CancerRes.)第６０巻、７２２頁、１９
８９年）。
鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集を
阻害する方法（高分子学会予稿集(Polymer Preprints,
Japan)、第３８巻、３１４９頁、１９８９年、特開平２
−１７４７９７号）、 Arg-Gly-Asp配列を有するペプチ
ドを細胞移動抑制剤として用いる方法 (特開平２−４７
１６号) 、Arg-Gly-Asp を固定化したＰＭＭＡ膜を細胞
接着膜として用いる方法（高分子学会予稿集（Polymer
Preprints,Japan)、第３７巻、７０５頁、1988年) が報
告されている。さらに、ポリマーにArg-Gly-Asp を必須
構成単位とするペプチドを共有結合させ動物細胞培養基
体、生体複合人工臓器用基体として用いる方法（特開平
１−３０９６８２号、特開平１−３０５９６０号）、Ar
g-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリペプチドを体外血液用
血小板保護剤として用いる方法が開示されている（特開
昭64−６２１７号）。また、Arg-Gly-Asp 配列を有する
オリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を有するポリ
ペプチドを用いて、ガン転移を抑制する方法が知られて
いる（(Int. J. Biol. Macromol.) 、第１１巻、２３
頁、１９８９年、同誌、第１１巻、２２６頁、１９８９
年、（Jpn. J. CancerRes.)第６０巻、７２２頁、１９
８９年）。
【０００４】キチンはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
がβ−（１→４）結合した多糖で、甲穀類や昆虫類の外
骨格の主成分である。下等動物や無脊椎動物に広く分布
して生体の支持や防護の役割をになっており、植物界の
セルロースに相当する。キチンは最後のバイオマスとも
呼ばれ近年その誘導体の研究が盛んに行なわれ、特に溶
媒に可溶なキチン誘導体に関する研究が多く報告されて
いる。Ｃ−６位の水酸基にカルボキシルメチル基が結合
したＣＭ−キチンは水溶性であり、各種キチン誘導体の
出発物質としても重要な化合物である。キチンおよびそ
の誘導体については、キチン・キトサン研究会編“キチ
ン・キトサンの応用”（技報堂）、キチン・キトサン研
究会編“最後のバイオマス キチン・キトサン”（技報
堂）に詳しく記載されている。
がβ−（１→４）結合した多糖で、甲穀類や昆虫類の外
骨格の主成分である。下等動物や無脊椎動物に広く分布
して生体の支持や防護の役割をになっており、植物界の
セルロースに相当する。キチンは最後のバイオマスとも
呼ばれ近年その誘導体の研究が盛んに行なわれ、特に溶
媒に可溶なキチン誘導体に関する研究が多く報告されて
いる。Ｃ−６位の水酸基にカルボキシルメチル基が結合
したＣＭ−キチンは水溶性であり、各種キチン誘導体の
出発物質としても重要な化合物である。キチンおよびそ
の誘導体については、キチン・キトサン研究会編“キチ
ン・キトサンの応用”（技報堂）、キチン・キトサン研
究会編“最後のバイオマス キチン・キトサン”（技報
堂）に詳しく記載されている。
【０００５】ＣＭ−キチンはカルボキシル化の際に脱ア
セチル化が起こるため、カルボキシル基に加えてアミノ
基も存在している。ＣＭ−キチンのアミノ基は容易に二
塩基酸およびその誘導体好ましくは多塩基酸無水物によ
ってカルボキシル化することが出来る。また、ＣＭ−キ
チンのＮ，Ｏ−硫酸化も容易に行なうことが出来る。し
かし、ＣＭ−キチンの誘導体としてArg-Gly-Asp を必須
単位とするオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を
有するポリペプチドを導入した化合物は知られておら
ず、導入した場合にはレセプターとの結合能の増強およ
び血液中での安定化が期待できる。
セチル化が起こるため、カルボキシル基に加えてアミノ
基も存在している。ＣＭ−キチンのアミノ基は容易に二
塩基酸およびその誘導体好ましくは多塩基酸無水物によ
ってカルボキシル化することが出来る。また、ＣＭ−キ
チンのＮ，Ｏ−硫酸化も容易に行なうことが出来る。し
かし、ＣＭ−キチンの誘導体としてArg-Gly-Asp を必須
単位とするオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造を
有するポリペプチドを導入した化合物は知られておら
ず、導入した場合にはレセプターとの結合能の増強およ
び血液中での安定化が期待できる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
なＣＭ−キチン誘導体およびそれを有効成分とする動物
細胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提供
することである。
なＣＭ−キチン誘導体およびそれを有効成分とする動物
細胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提供
することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、ＣＭ−キチン
の側鎖にアミド結合、エステル結合、エーテル結合、ウ
レタン結合のいずれかを介し、下記一般式〔Ｉ〕又は
〔II〕で表される接着性ペプチドを必須単位として有す
るキチン誘導体またはその塩を提供するものである。 一般式〔Ｉ〕 −〔R 1 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 2 〕 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ 1
は、炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアルキレン基、
または炭素数が６〜９のアリーレン基であり、置換基を
有していてもよい。Ｒ 2 は、水素又は炭素数が１〜９の
直鎖または分岐のアルキル基、または炭素数が６〜９の
アリール基であり、置換基を有していてもよい。ｎは１
〜５の整数を示す。 一般式〔II〕 〔R 3 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 4 〕− 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ
3 は、水素又は炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアル
キル基、または炭素数が６〜９のアリール基であり、置
換基を有していてもよい。Ｒ 4 は、炭素数が１〜９の直
鎖または分岐のアルキレン基、または炭素数が６〜９の
アリーレン基であり、置換基を有していてもよい。ｎは
１〜５の整数を示す。
の側鎖にアミド結合、エステル結合、エーテル結合、ウ
レタン結合のいずれかを介し、下記一般式〔Ｉ〕又は
〔II〕で表される接着性ペプチドを必須単位として有す
るキチン誘導体またはその塩を提供するものである。 一般式〔Ｉ〕 −〔R 1 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 2 〕 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ 1
は、炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアルキレン基、
または炭素数が６〜９のアリーレン基であり、置換基を
有していてもよい。Ｒ 2 は、水素又は炭素数が１〜９の
直鎖または分岐のアルキル基、または炭素数が６〜９の
アリール基であり、置換基を有していてもよい。ｎは１
〜５の整数を示す。 一般式〔II〕 〔R 3 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 4 〕− 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ
3 は、水素又は炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアル
キル基、または炭素数が６〜９のアリール基であり、置
換基を有していてもよい。Ｒ 4 は、炭素数が１〜９の直
鎖または分岐のアルキレン基、または炭素数が６〜９の
アリーレン基であり、置換基を有していてもよい。ｎは
１〜５の整数を示す。
【０００８】Ｒ1 及びＲ2 の置換基としては、カルボニ
ル基、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、ス
ルホ基、ハロゲン原子、アリール基、ニトロ基、シアノ
基、不飽和基の２重結合、３重結合等があげられ、同一
鎖に２つ以上有していてもよい。本発明はさらに上記Ｃ
Ｍ−キチン誘導体またはその塩を有効成分とする動物細
胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提供す
るものである。
ル基、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、ス
ルホ基、ハロゲン原子、アリール基、ニトロ基、シアノ
基、不飽和基の２重結合、３重結合等があげられ、同一
鎖に２つ以上有していてもよい。本発明はさらに上記Ｃ
Ｍ−キチン誘導体またはその塩を有効成分とする動物細
胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提供す
るものである。
【０００９】本発明は、硫酸化ＣＭ−キチン、カルボキ
シル化ＣＭ−キチンまたはＣＭ−キチンに、Arg-Gly-As
p を必須単位として有する接着性ペプチドを共有結合し
てなるＣＭ−キチン誘導体である。ＣＭ−キチン誘導体
の分子量は好ましくは２０万以下、特に３０００−１０
万の範囲で、室温で水溶性であることが好ましい。カル
ボキシル化剤として、無水コハク酸、無水マレイン酸、
無水フタル酸、無水イタコン酸、無水シトラコン酸、ピ
ロメリット酸無水物、トリメリット酸無水物、等が挙げ
られる。本発明に係わる接着性ペプチドに用いられるア
ミノ酸はＬ体、Ｄ体どちらでもよいが、好ましくはＬ体
である。
シル化ＣＭ−キチンまたはＣＭ−キチンに、Arg-Gly-As
p を必須単位として有する接着性ペプチドを共有結合し
てなるＣＭ−キチン誘導体である。ＣＭ−キチン誘導体
の分子量は好ましくは２０万以下、特に３０００−１０
万の範囲で、室温で水溶性であることが好ましい。カル
ボキシル化剤として、無水コハク酸、無水マレイン酸、
無水フタル酸、無水イタコン酸、無水シトラコン酸、ピ
ロメリット酸無水物、トリメリット酸無水物、等が挙げ
られる。本発明に係わる接着性ペプチドに用いられるア
ミノ酸はＬ体、Ｄ体どちらでもよいが、好ましくはＬ体
である。
【００１０】本発明のＣＭ−キチン誘導体の塩として
は、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、ホウ
酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ酢酸
塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、乳酸塩、酒石酸
塩等の有機酸との塩等が挙げられる。ペプチド合成法と
しては特に限定されないが、液相法、固相法、および自
動合成装置による合成方法が挙げられる。これらの合成
方法の詳細については、生化学実験講座“タンパク質の
化学IV”p2０７−４９５（日本生化学会編、東京化学同
人)、“続生化学実験講座タンパク質の化学（下）”（日
本生化学会編、東京化学同人）、泉屋ら編“ペプチド合
成の基礎と実験”（丸善）に記載されている。また、市
販されている合成ペプチドを利用することも可能であ
る。
は、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、ホウ
酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ酢酸
塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、乳酸塩、酒石酸
塩等の有機酸との塩等が挙げられる。ペプチド合成法と
しては特に限定されないが、液相法、固相法、および自
動合成装置による合成方法が挙げられる。これらの合成
方法の詳細については、生化学実験講座“タンパク質の
化学IV”p2０７−４９５（日本生化学会編、東京化学同
人)、“続生化学実験講座タンパク質の化学（下）”（日
本生化学会編、東京化学同人）、泉屋ら編“ペプチド合
成の基礎と実験”（丸善）に記載されている。また、市
販されている合成ペプチドを利用することも可能であ
る。
【００１１】ＣＭ−キチンおよびカルボキシル化ＣＭ−
キチンと接着性ペプチドの結合には、臭化シアン、酸ア
ジド、水溶性カルボジイミド等を利用したアミド結合合
成方法が挙げられる。本発明のＣＭ−キチン誘導体は、
細胞接着性蛋白質のコア配列Arg-Gly-Asp を有し、該コ
ア配列を介して細胞接着性蛋白質と同様の機序で細胞に
接着する。そのため、細胞接着性蛋白質のアゴニストま
たはアンタゴニストとして種々の生物活性を示し、免疫
調整作用、創傷治癒作用、毛細血管中で起こる癌細胞に
よる血小板凝集抑制作用、神経疾患治癒作用などの広範
な生物活性が認められている。
キチンと接着性ペプチドの結合には、臭化シアン、酸ア
ジド、水溶性カルボジイミド等を利用したアミド結合合
成方法が挙げられる。本発明のＣＭ−キチン誘導体は、
細胞接着性蛋白質のコア配列Arg-Gly-Asp を有し、該コ
ア配列を介して細胞接着性蛋白質と同様の機序で細胞に
接着する。そのため、細胞接着性蛋白質のアゴニストま
たはアンタゴニストとして種々の生物活性を示し、免疫
調整作用、創傷治癒作用、毛細血管中で起こる癌細胞に
よる血小板凝集抑制作用、神経疾患治癒作用などの広範
な生物活性が認められている。
【００１２】従って、本発明のＣＭ−キチン誘導体は、
その少なくとも一種を、場合により慣用の担体または医
薬用助剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒剤、免疫調
整剤、血小板凝集・粘着抑制剤として患者に投与するこ
とが可能である。特に、動物細胞接着阻害剤または血小
板凝集・粘着抑制剤としての使用が好ましい。その投与
量は、0.２μｇ／kg〜４００mg／kgの範囲で、症状、年
齢、体重等に基づいて決定される。
その少なくとも一種を、場合により慣用の担体または医
薬用助剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒剤、免疫調
整剤、血小板凝集・粘着抑制剤として患者に投与するこ
とが可能である。特に、動物細胞接着阻害剤または血小
板凝集・粘着抑制剤としての使用が好ましい。その投与
量は、0.２μｇ／kg〜４００mg／kgの範囲で、症状、年
齢、体重等に基づいて決定される。
【００１３】本発明のＣＭ−キチン誘導体は、ペプチド
系医薬に一般に使用されている投与方法、即ち非経口投
与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等に
よって投与するのが好ましい。そのような注射用製剤を
製造する場合、本発明のキチン誘導体を例えば、後記実
施例で示すようにＰＢＳまたは生理食塩水に溶解して、
注射用製剤としてもよく、あるいは0.１Ｎ程度の酢酸水
等に溶解した後、凍結乾燥製剤としてもよい。この様な
製剤には、グリシンやアルブミン等の慣用の安定剤を添
加してもよい。さらに、本発明のキチン誘導体は、例え
ばリポソーム中に包容したマイクロカプセル剤とすれ
ば、経口投与することも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化管以外の粘膜からも
吸収させることが可能である。
系医薬に一般に使用されている投与方法、即ち非経口投
与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等に
よって投与するのが好ましい。そのような注射用製剤を
製造する場合、本発明のキチン誘導体を例えば、後記実
施例で示すようにＰＢＳまたは生理食塩水に溶解して、
注射用製剤としてもよく、あるいは0.１Ｎ程度の酢酸水
等に溶解した後、凍結乾燥製剤としてもよい。この様な
製剤には、グリシンやアルブミン等の慣用の安定剤を添
加してもよい。さらに、本発明のキチン誘導体は、例え
ばリポソーム中に包容したマイクロカプセル剤とすれ
ば、経口投与することも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化管以外の粘膜からも
吸収させることが可能である。
【００１４】
【実施例】以下実施例により本発明を更に説明するが本
発明はこれらに限定されるものではない。 製造例１ 接着性ペプチドの固相法による合成 Merrifield方式によるペプチド合成装置を用いて合成を
行なった。αアミノ基の保護にはBoc 基を用い、樹脂か
ら切出した後、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラ
フィー）で精製し、単一ピークを示す接着性合成ペプチ
ドを得た。 接着性合成ペプチド 名 称 構造式 略号 配列番号 収率 ペプチド-1 H-Arg-Gly-Asp-OH RGD １ 37％ ペプチド-2 H-(Arg-Gly-Asp)2-OH (RGD)2 ２ 28％ ペプチド-3 H-(Arg-Gly-Asp)3-OH (RGD)3 ３ 19％ ペプチド-4 H-(Arg-Gly-Asp)5-OH (RGD)5 ４ 11％
発明はこれらに限定されるものではない。 製造例１ 接着性ペプチドの固相法による合成 Merrifield方式によるペプチド合成装置を用いて合成を
行なった。αアミノ基の保護にはBoc 基を用い、樹脂か
ら切出した後、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラ
フィー）で精製し、単一ピークを示す接着性合成ペプチ
ドを得た。 接着性合成ペプチド 名 称 構造式 略号 配列番号 収率 ペプチド-1 H-Arg-Gly-Asp-OH RGD １ 37％ ペプチド-2 H-(Arg-Gly-Asp)2-OH (RGD)2 ２ 28％ ペプチド-3 H-(Arg-Gly-Asp)3-OH (RGD)3 ３ 19％ ペプチド-4 H-(Arg-Gly-Asp)5-OH (RGD)5 ４ 11％
【００１５】製造例２ ペプチド−５ H-(Arg-Gly-Asp-Ser-Gly)-NH2（配列番号
５）ペプチド−５を逐次延長法により液相法で合成し
た。 (1)Boc Ser(Bzl)GlyNH2 の合成 BocSer(Bzl)59g (0.2mol）をCH2Cl2400ml に溶解しＤＣ
Ｃ41.2g(0.2mol）を氷冷下に加えた。この溶液に、GlyN
H2・HCl22.1gをCH2Cl2 400mlに溶かしてから、Ｎ−メチ
ルモルホリン２0.２ｇで氷冷下中和した溶液を添加し
た。氷冷下３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌
した。沈澱物をろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶
解した。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶
液の順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白
色粉末５8.３g(収率８３％）を得た。
５）ペプチド−５を逐次延長法により液相法で合成し
た。 (1)Boc Ser(Bzl)GlyNH2 の合成 BocSer(Bzl)59g (0.2mol）をCH2Cl2400ml に溶解しＤＣ
Ｃ41.2g(0.2mol）を氷冷下に加えた。この溶液に、GlyN
H2・HCl22.1gをCH2Cl2 400mlに溶かしてから、Ｎ−メチ
ルモルホリン２0.２ｇで氷冷下中和した溶液を添加し
た。氷冷下３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌
した。沈澱物をろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶
解した。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶
液の順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白
色粉末５8.３g(収率８３％）を得た。
【００１６】(2)BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)GlyNH2 の合成 Boc Ser(Bzl)GlyNH2 ５6.２ｇ（0.１６mol)にTFA/CH2Cl
2＝1/１ 400mlを加え室温で１時間攪拌した後、TFA とC
H2Cl2を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解しNaHCO
3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄した。Na2SO4で
乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
2＝1/１ 400mlを加え室温で１時間攪拌した後、TFA とC
H2Cl2を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解しNaHCO
3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄した。Na2SO4で
乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
【００１７】この化合物と、BocAsp(OBzl)51.7g (0.16m
ol）をCH2Cl2 800mlに溶解し、DCC33g(0.16mol）を氷冷
下加え３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌し
た。減圧下CH2Cl2を留去してから酢酸エチルに溶解し
た。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶液の
順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白色粉
末71.2g(収率80％）を得た。
ol）をCH2Cl2 800mlに溶解し、DCC33g(0.16mol）を氷冷
下加え３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌し
た。減圧下CH2Cl2を留去してから酢酸エチルに溶解し
た。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶液の
順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白色粉
末71.2g(収率80％）を得た。
【００１８】(3)BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)GlyNH2 の合
成 BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)Gly NH2 66.7g(0.12mol)にTFA:CH
2Cl2＝１：１ 400mlを加えて室温で１時間攪拌した後、
ＴＦＡを減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解しNaHC
O3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄した。Na2SO4で
乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
成 BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)Gly NH2 66.7g(0.12mol)にTFA:CH
2Cl2＝１：１ 400mlを加えて室温で１時間攪拌した後、
ＴＦＡを減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶解しNaHC
O3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄した。Na2SO4で
乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
【００１９】この化合物とBocGly51.7g(0.12mol)をCH2C
l2 700mlに溶解し、DCC24.7g (0.12mol)を氷冷下加え３
時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌した。DCurea
をろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。NaHC
O3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶液の順に洗浄
し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白色粉末61.8g
(収率84％）を得た。
l2 700mlに溶解し、DCC24.7g (0.12mol)を氷冷下加え３
時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌した。DCurea
をろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。NaHC
O3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水溶液の順に洗浄
し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して白色粉末61.8g
(収率84％）を得た。
【００２０】(4)BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)GlyN
H2の合成 BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)Gly NH2 61.3g(0.1mol)にTFA:
CH2Cl2＝１：１ 400mlを加えて室温で1 時間攪拌した
後、TFA とCH2Cl2を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに
溶解しNaHCO3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄し
た。Na2SO4で乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
H2の合成 BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)Gly NH2 61.3g(0.1mol)にTFA:
CH2Cl2＝１：１ 400mlを加えて室温で1 時間攪拌した
後、TFA とCH2Cl2を減圧濃縮した。これを酢酸エチルに
溶解しNaHCO3水溶液で中和した後NaCl水溶液で洗浄し
た。Na2SO4で乾燥してから酢酸エチルを減圧留去した。
【００２１】この化合物とBocArg(Mts)(Mts はメシチレ
ン−２−スルホニル基を示す）45.6g(0.1mol）をDMF 80
0ml に溶解し、DCC22.5g(0.1mol ）、HOBt14g(0.1mol）
を氷冷下加え３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪
拌した。DCureaをろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに
溶解した。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水
溶液の順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して
白色粉末42.8g(収率45％）を得た。
ン−２−スルホニル基を示す）45.6g(0.1mol）をDMF 80
0ml に溶解し、DCC22.5g(0.1mol ）、HOBt14g(0.1mol）
を氷冷下加え３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪
拌した。DCureaをろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに
溶解した。NaHCO3水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、NaCl水
溶液の順に洗浄し、Na2SO4で乾燥してから減圧乾固して
白色粉末42.8g(収率45％）を得た。
【００２２】(5) ペプチド−５ 保護体の脱保護 BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)GlyNH2 5g(5.3mmol)
のTFA 溶液に、1Mトリフルオロメタンスルホン酸- チオ
アニソール−ｍ−クレゾールのTFA 溶液を氷冷下加えて
１時間反応させ、ペプチド側鎖および末端の保護基の脱
保護を行った。反応液をエーテル中に投入しオイル状の
沈殿物を蒸留水に溶解し酢酸エチルで洗浄した後、陰イ
オン交換樹脂カラム（アンバーライトＩＲＡ−４００Ｃ
l 型）に通して塩酸塩とし凍結乾燥した。白色固体2.17
g(収率８６％）が得られた。 アミノ酸分析 (nmol/50 μl) Arg 4.9877, Gly 10.3916, Asp 5.0199, Ser 4.8891, マススペクトル Ｍ+ ４０４
のTFA 溶液に、1Mトリフルオロメタンスルホン酸- チオ
アニソール−ｍ−クレゾールのTFA 溶液を氷冷下加えて
１時間反応させ、ペプチド側鎖および末端の保護基の脱
保護を行った。反応液をエーテル中に投入しオイル状の
沈殿物を蒸留水に溶解し酢酸エチルで洗浄した後、陰イ
オン交換樹脂カラム（アンバーライトＩＲＡ−４００Ｃ
l 型）に通して塩酸塩とし凍結乾燥した。白色固体2.17
g(収率８６％）が得られた。 アミノ酸分析 (nmol/50 μl) Arg 4.9877, Gly 10.3916, Asp 5.0199, Ser 4.8891, マススペクトル Ｍ+ ４０４
【００２３】製造例３ ペプチド−６ Ｈ−（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro)−ＯＨ
（配列番号６）Merrifield方式によるペプチド合成装置
を用いて合成を行なった。αアミノ基の保護にはBoc 基
を用い、樹脂から切出した後分取用ＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着
性合成ペプチドを得た。 収率 ２５％
（配列番号６）Merrifield方式によるペプチド合成装置
を用いて合成を行なった。αアミノ基の保護にはBoc 基
を用い、樹脂から切出した後分取用ＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着
性合成ペプチドを得た。 収率 ２５％
【００２４】合成例１ ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（配列
番号７）の合成 粘度９ｃｐｓ（１％溶液、２０℃）、エーテル化度0.７
８、脱アセチル化度0.５のＣＭ−キチン（焼津水産化学
工業製）0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ〔１−エチル−3,３
−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド〕１２
８mgの2.６mlリン酸バッファー溶液を加えて、1.５時間
反応させた。ついで、８mlのリン酸バッファーに溶解し
た接着性ペプチド Arg-Gly-Asp-Ser (RGDS)（国産化学
工業製）４００mgを添加し４℃で一晩反応させた。反応
溶液を、Visking tubeに入れ、イオン交換水、ついで純
水に対して透析し低分子量成分を除いて精製、凍結乾燥
した。収量0.２４ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 （ nmol/50μl ） グルコサミン ２0.５５５８ Ａｒｇ 2.０５５６ Ｇｌｙ 2.１３５２ Ａｓｐ 1.９８５４ Ｓｅｒ 1.８７９２ 以下の計算式に従いアルギニン残基濃度とグルコサミン
濃度の比よりＲＧＤＳフラグメントの導入率を計算し約
１０％の値を得た。
番号７）の合成 粘度９ｃｐｓ（１％溶液、２０℃）、エーテル化度0.７
８、脱アセチル化度0.５のＣＭ−キチン（焼津水産化学
工業製）0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ〔１−エチル−3,３
−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド〕１２
８mgの2.６mlリン酸バッファー溶液を加えて、1.５時間
反応させた。ついで、８mlのリン酸バッファーに溶解し
た接着性ペプチド Arg-Gly-Asp-Ser (RGDS)（国産化学
工業製）４００mgを添加し４℃で一晩反応させた。反応
溶液を、Visking tubeに入れ、イオン交換水、ついで純
水に対して透析し低分子量成分を除いて精製、凍結乾燥
した。収量0.２４ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 （ nmol/50μl ） グルコサミン ２0.５５５８ Ａｒｇ 2.０５５６ Ｇｌｙ 2.１３５２ Ａｓｐ 1.９８５４ Ｓｅｒ 1.８７９２ 以下の計算式に従いアルギニン残基濃度とグルコサミン
濃度の比よりＲＧＤＳフラグメントの導入率を計算し約
１０％の値を得た。
【００２５】 導入率＝ [Ａｒｇ] ／ [グルコサミン] ×100 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動
１６５２cm-1 合成例２ スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの合
成 合成例１のＣＭ−キチン２0.０ｇを１％トリエチルアミ
ン溶液１００mlに溶解、これに無水コハク酸３4.０ｇ、
４−ジメチルアミノピリジン2.00ｇを加え室温で一昼夜
かくはんした。反応終了後溶液を大過剰のアセトンに投
入して、スクシニル化ＣＭ−キチンを再沈殿させた。沈
殿を集め更に大量のメタノールで洗浄した後エーテルで
洗浄し真空乾燥させた。収量２2.４０ｇスクシニル化Ｃ
Ｍ−キチン0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ（１−エチル−３，
３−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド）１
２８mgの2.６mlリン酸バッファー溶液を加えて、1.５時
間反応させた。ついで、８mlのリン酸バッファーに溶解
したＲＧＤＳ４００mgを添加し４℃で一晩反応させた。
反応溶液を、Visking tubeに入れイオン交換水、ついで
純水に対して透析し、低分子量成分を除いて精製、凍結
乾燥した。収量0.２６ｇ構造の確認は、ＩＲおよびアミ
ノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。
１６５２cm-1 合成例２ スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの合
成 合成例１のＣＭ−キチン２0.０ｇを１％トリエチルアミ
ン溶液１００mlに溶解、これに無水コハク酸３4.０ｇ、
４−ジメチルアミノピリジン2.00ｇを加え室温で一昼夜
かくはんした。反応終了後溶液を大過剰のアセトンに投
入して、スクシニル化ＣＭ−キチンを再沈殿させた。沈
殿を集め更に大量のメタノールで洗浄した後エーテルで
洗浄し真空乾燥させた。収量２2.４０ｇスクシニル化Ｃ
Ｍ−キチン0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ（１−エチル−３，
３−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド）１
２８mgの2.６mlリン酸バッファー溶液を加えて、1.５時
間反応させた。ついで、８mlのリン酸バッファーに溶解
したＲＧＤＳ４００mgを添加し４℃で一晩反応させた。
反応溶液を、Visking tubeに入れイオン交換水、ついで
純水に対して透析し、低分子量成分を除いて精製、凍結
乾燥した。収量0.２６ｇ構造の確認は、ＩＲおよびアミ
ノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。
【００２６】スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構
造式を以下に示す。
造式を以下に示す。
【００２７】
【化１】
【００２８】 スクシニル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２3.６２１８ Ａｒｇ 2.３６２２ Ｇｌｙ 2.１２５３ Ａｓｐ 2.２３９１ Ｓｅｒ 2.００３１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動 １６
５２cm-1
５２cm-1
【００２９】合成例３ マレイル化ＣＭ−キチンＲＧ
ＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと３6.６ｇの無水マ
レイン酸を合成例２と同様に反応させマレイル化ＣＭ−
キチン２1.６０ｇを得た。マレイル化ＣＭ−キチン0.３
０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解し、合成例２と
同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収
量0.33ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析によ
り行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメント
の導入率は約１１％であった。 マレイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50 μl) グルコサミン ２8.４９５６ Ａｒｇ 3.１３４５ Ｇｌｙ 2.７７５１ Ａｓｐ 2.７２１３ Ｓｅｒ 2.５６９４ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
ＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと３6.６ｇの無水マ
レイン酸を合成例２と同様に反応させマレイル化ＣＭ−
キチン２1.６０ｇを得た。マレイル化ＣＭ−キチン0.３
０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解し、合成例２と
同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収
量0.33ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析によ
り行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメント
の導入率は約１１％であった。 マレイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50 μl) グルコサミン ２8.４９５６ Ａｒｇ 3.１３４５ Ｇｌｙ 2.７７５１ Ａｓｐ 2.７２１３ Ｓｅｒ 2.５６９４ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
【００３０】合成例４ フタロイル化ＣＭ−キチン−
RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと５0.０ｇの無水フ
タル酸を合成例２と同様に反応させ、フタロイル化ＣＭ
−キチン２2.３１ｇを得た。
RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと５0.０ｇの無水フ
タル酸を合成例２と同様に反応させ、フタロイル化ＣＭ
−キチン２2.３１ｇを得た。
【００３１】フタロイル化ＣＭ−キチン0.３０ｇをpH7.
４のリン酸バッファーに溶解し、合成例２と同様にして
ＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収量0.４４ｇ
構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率
は約１２％であった。 フタロイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １9.１８５６ Ａｒｇ 2.３０２３ Ｇｌｙ 2.２２３１ Ａｓｐ 1.８９３７ Ｓｅｒ 1.７６３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５２
cm-1
４のリン酸バッファーに溶解し、合成例２と同様にして
ＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収量0.４４ｇ
構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率
は約１２％であった。 フタロイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １9.１８５６ Ａｒｇ 2.３０２３ Ｇｌｙ 2.２２３１ Ａｓｐ 1.８９３７ Ｓｅｒ 1.７６３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５２
cm-1
【００３２】合成例５ イタコニル化ＣＭ−キチン−
RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと３8.０ｇの無水イ
タコン酸を合成例２と同様に反応させイタコニル化ＣＭ
−キチン２1.４５ｇを得た。イタコニル化ＣＭ−キチン
0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解し、合成例
２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させ
た。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸
分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラ
グメントの導入率は約９％であった。 イタコニル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ３5.２３１６ Ａｒｇ 3.１７０８ Ｇｌｙ 3.２５１１ Ａｓｐ 3.１００５ Ｓｅｒ 2.８８６２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５０
cm-1
RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと３8.０ｇの無水イ
タコン酸を合成例２と同様に反応させイタコニル化ＣＭ
−キチン２1.４５ｇを得た。イタコニル化ＣＭ−キチン
0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解し、合成例
２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させ
た。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸
分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラ
グメントの導入率は約９％であった。 イタコニル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ３5.２３１６ Ａｒｇ 3.１７０８ Ｇｌｙ 3.２５１１ Ａｓｐ 3.１００５ Ｓｅｒ 2.８８６２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５０
cm-1
【００３３】合成例６ トリメリチル化ＣＭ−キチン
−RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと６4.９ｇのトリメ
リト酸無水物を合成例２と同様に反応させトリメリチル
化ＣＭ−キチン２3.７５ｇを得た。トリメリチル化ＣＭ
−キチン0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有
結合させた。収量0.３７ｇ構造の確認は、ＩＲおよびア
ミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果 RGDS
フラグメントの導入率は約１４％であった。 トリメリチル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １8.７６１２ Ａｒｇ 2.６２６６ Ｇｌｙ 2.７８９９ Ａｓｐ 2.５５３２ Ｓｅｒ 2.２６８９ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５６
cm-1
−RGDS 合成例１のＣＭ−キチン２0.００ｇと６4.９ｇのトリメ
リト酸無水物を合成例２と同様に反応させトリメリチル
化ＣＭ−キチン２3.７５ｇを得た。トリメリチル化ＣＭ
−キチン0.３０ｇをpH7.４のリン酸バッファーに溶解
し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有
結合させた。収量0.３７ｇ構造の確認は、ＩＲおよびア
ミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果 RGDS
フラグメントの導入率は約１４％であった。 トリメリチル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １8.７６１２ Ａｒｇ 2.６２６６ Ｇｌｙ 2.７８９９ Ａｓｐ 2.５５３２ Ｓｅｒ 2.２６８９ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５６
cm-1
【００３４】合成例７ ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ
（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントとしてGly-Arg-Gly-Asp-Se
r（ＧＲＧＤＳ）（国産化学工業製）４６０mgを用い、
合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合成
した。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。 ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １5.３３１９ Ａｒｇ 1.５３３２ Ｇｌｙ 3.２１３２ Ａｓｐ 1.３４６８ Ｓｅｒ 1.１１３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントとしてGly-Arg-Gly-Asp-Se
r（ＧＲＧＤＳ）（国産化学工業製）４６０mgを用い、
合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合成
した。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。 ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １5.３３１９ Ａｒｇ 1.５３３２ Ｇｌｙ 3.２１３２ Ａｓｐ 1.３４６８ Ｓｅｒ 1.１１３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
【００３５】合成例８ スクシニル化ＣＭ−キチン−
GRGDS 接着性ペプチドフラグメントとしてＧＲＧＤＳ４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量0.３９ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＧＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１２％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ３0.３２６８ Ａｒｇ 3.６３９２ Ｇｌｙ 7.０６２４ Ａｓｐ 3.５６９１ Ｓｅｒ 3.３００６ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
GRGDS 接着性ペプチドフラグメントとしてＧＲＧＤＳ４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量0.３９ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＧＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１２％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ３0.３２６８ Ａｒｇ 3.６３９２ Ｇｌｙ 7.０６２４ Ａｓｐ 3.５６９１ Ｓｅｒ 3.３００６ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
【００３６】合成例９ スクシニル化ＣＭ−キチン−
ＲＧＤ（配列番号９） 接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤ 460mgを用
い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチン−
ＲＧＤを合成した。収量0.３４ｇ構造の確認は、ＩＲお
よびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果
ＲＧＤフラグメントの導入率は約１６％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２7.８８６７ Ａｒｇ 4.４６１９ Ｇｌｙ 4.５５１８ Ａｓｐ 4.４９１１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５０
cm-1
ＲＧＤ（配列番号９） 接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤ 460mgを用
い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチン−
ＲＧＤを合成した。収量0.３４ｇ構造の確認は、ＩＲお
よびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果
ＲＧＤフラグメントの導入率は約１６％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２7.８８６７ Ａｒｇ 4.４６１９ Ｇｌｙ 4.５５１８ Ａｓｐ 4.４９１１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５０
cm-1
【００３７】合成例１０ スクシニル化ＣＭ−キチン−
（ＲＧＤ）２（配列番号１０） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)2４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)2を合成した。収量0.３１ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)2フラグメントの導入率は約１２％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ)2 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２5.１９１３ Ａｒｇ 6.０４５９ Ｇｌｙ 5.９８８３ Ａｓｐ 5.８９９６ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
（ＲＧＤ）２（配列番号１０） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)2４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)2を合成した。収量0.３１ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)2フラグメントの導入率は約１２％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ)2 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２5.１９１３ Ａｒｇ 6.０４５９ Ｇｌｙ 5.９８８３ Ａｓｐ 5.８９９６ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
【００３８】合成例１１ スクシニル化ＣＭ−キチン−
(RGD)3（配列番号１１） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)3４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)3を合成した。収量0.３３ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)3フラグメントの導入率は約１０％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ)3 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２2.３１６１ Ａｒｇ 6.６９４９ Ｇｌｙ 6.５１３２ Ａｓｐ 6.２３２３ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
(RGD)3（配列番号１１） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)3４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)3を合成した。収量0.３３ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)3フラグメントの導入率は約１０％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ)3 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２2.３１６１ Ａｒｇ 6.６９４９ Ｇｌｙ 6.５１３２ Ａｓｐ 6.２３２３ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６４８
cm-1
【００３９】合成例１２ スクシニル化ＣＭ−キチン−
(RGD)5（配列番号１２） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)5４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)5を合成した。収量0.２８ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)5フラグメントの導入率は約１５％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ)5 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２3.６８１１ Ａｒｇ ２3.０１０８ Ｇｌｙ ２1.０９９３ Ａｓｐ ２0.３３３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５６
cm-1
(RGD)5（配列番号１２） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)5４６０mg
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−（ＲＧＤ)5を合成した。収量0.２８ｇ 構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果（ＲＧＤ)5フラグメントの導入率は約１５％
であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ)5 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２3.６８１１ Ａｒｇ ２3.０１０８ Ｇｌｙ ２1.０９９３ Ａｓｐ ２0.３３３２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５６
cm-1
【００４０】合成例１３ 硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧＤ
Ｓ（配列番号７） エーテル化度0.５０、脱アセチル化度0.０５のＣＭ−キ
チンを戸倉らの方法(Jpn. J. Cancer Res., 80, 866-87
2(1989),Cancer Res., 50, 3631-3637(1990)) に従い硫
酸化し、合成例１と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを
共有結合させた。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲお
よびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果
ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１２％であった。
Ｓ（配列番号７） エーテル化度0.５０、脱アセチル化度0.０５のＣＭ−キ
チンを戸倉らの方法(Jpn. J. Cancer Res., 80, 866-87
2(1989),Cancer Res., 50, 3631-3637(1990)) に従い硫
酸化し、合成例１と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを
共有結合させた。収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲお
よびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果
ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１２％であった。
【００４１】 硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ３3.１５６９ Ａｒｇ 3.９７８０ Ｇｌｙ 3.９２５１ Ａｓｐ 3.６０５３ Ｓｅｒ 3.４９２１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５０
cm-1
cm-1
【００４２】合成例１４ 硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧ
ＤＳ（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントＧＲＧＤＳ４６０mgと合成
例１３の硫酸化ＣＭ−キチンとを合成例１と同様にして
共有結合させ、硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合成
した。収量0.３５ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。 硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２5.１５１５ Ａｒｇ 2.５１ Ｇｌｙ 5.２１３４ Ａｓｐ 2.４２５１ Ｓｅｒ 2.１１１１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５５
cm-1
ＤＳ（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントＧＲＧＤＳ４６０mgと合成
例１３の硫酸化ＣＭ−キチンとを合成例１と同様にして
共有結合させ、硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合成
した。収量0.３５ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ
酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳ
フラグメントの導入率は約１０％であった。 硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２5.１５１５ Ａｒｇ 2.５１ Ｇｌｙ 5.２１３４ Ａｓｐ 2.４２５１ Ｓｅｒ 2.１１１１ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５５
cm-1
【００４３】合成例１５ 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キ
チン−ＲＧＤＳ（配列番号７） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラ
グメントを共有結合させた。収量0.３７ｇ構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１４％で
あった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １8.６９３２ Ａｒｇ 2.６１７０ Ｇｌｙ 2.７７３９ Ａｓｐ 2.５９３１ Ｓｅｒ 2.２１６８ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
チン−ＲＧＤＳ（配列番号７） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラ
グメントを共有結合させた。収量0.３７ｇ構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１４％で
あった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １8.６９３２ Ａｒｇ 2.６１７０ Ｇｌｙ 2.７７３９ Ａｓｐ 2.５９３１ Ｓｅｒ 2.２１６８ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５４
cm-1
【００４４】合成例１６ 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キ
チン−ＧＲＧＤＳ（配列番号８） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例７と同様にしてＧＲＧＤＳフ
ラグメントを共有結合させた。収量0.３１ｇ構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１７％で
あった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２2.５６６１ Ａｒｇ 3.８３６２ Ｇｌｙ 7.４９６３ Ａｓｐ 3.６８１１ Ｓｅｒ 3.２５９３ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５２
cm-1
チン−ＧＲＧＤＳ（配列番号８） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例７と同様にしてＧＲＧＤＳフ
ラグメントを共有結合させた。収量0.３１ｇ構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１７％で
あった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２2.５６６１ Ａｒｇ 3.８３６２ Ｇｌｙ 7.４９６３ Ａｓｐ 3.６８１１ Ｓｅｒ 3.２５９３ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５２
cm-1
【００４５】合成例１７ ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 （配列番号１３） 接着性ペプチドフラグメントとしてペプチド −５（Ｒ
ＧＤＳＧ−ＮＨ2)４６０mgを用い、合成例１と同様にし
てＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 を合成した。 収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行った。
アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 フラグメントの
導入率は約１０％であった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １7.６３６８ Ａｒｇ 1.８１６６ Ｇｌｙ 3.８２４３ Ａｓｐ 1.８４６８ Ｓｅｒ 1.６１１２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５８
cm-1
ＧＤＳＧ−ＮＨ2)４６０mgを用い、合成例１と同様にし
てＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 を合成した。 収量0.３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行った。
アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 フラグメントの
導入率は約１０％であった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳＧ−ＮＨ2 アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １7.６３６８ Ａｒｇ 1.８１６６ Ｇｌｙ 3.８２４３ Ａｓｐ 1.８４６８ Ｓｅｒ 1.６１１２ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５８
cm-1
【００４６】合成例１８ ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（配列番号７） 接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤＳ1.５ｇを用
い、合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＲＧＤＳを合
成した。 収量0.３２ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳの導入率は約２０％で
あった。
い、合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＲＧＤＳを合
成した。 収量0.３２ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳの導入率は約２０％で
あった。
【００４７】 ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン ２0.４５９８ Ａｒｇ 4.１０５２ Ｇｌｙ 4.２６８８ Ａｓｐ 3.９８０８ Ｓｅｒ 3.７７８４ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５５
cm-1
cm-1
【００４８】合成例１９ ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳＰ（配列番号１４） 接着性ペプチドフラグメント−６（製造例３）、Gly-Ar
g-Gly-Asp-Ser-Pro(ＧＲＧＤＳＰ）４８０mgを用い、合
成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳＰを合成
した。 収量0.３５ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳＰフラグメントの導
入率は約１０％であった。
g-Gly-Asp-Ser-Pro(ＧＲＧＤＳＰ）４８０mgを用い、合
成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳＰを合成
した。 収量0.３５ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なっ
た。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳＰフラグメントの導
入率は約１０％であった。
【００４９】 ＣＭ−キチンＧＲＧＤＳＰ アミノ酸分析 (nmol/50μl) グルコサミン １5.３３１９ Ａｒｇ 1.５３３２ Ｇｌｙ 3.２１３２ Ａｓｐ 1.３４６８ Ｓｅｒ 1.１１３２ Ｐｒｏ 1.３３２６ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５７
cm-1
cm-1
【００５０】試験例１ 『細胞接着阻害活性の測定』 本発明のＣＭ−キチン誘導体が細胞のフィブロネクチン
やビトロネクチンに対する接着を阻害する活性測定方法
を以下に示す。ここで用いられた競争法は基本的に生化
学分野では広く用いられているものであり、例えば『Me
thods in Enzymology 』８２ ８０３〜８３１頁（１９
８１）、特開平１−３０９６８２、同２−１７４７９７
に開示されている。
やビトロネクチンに対する接着を阻害する活性測定方法
を以下に示す。ここで用いられた競争法は基本的に生化
学分野では広く用いられているものであり、例えば『Me
thods in Enzymology 』８２ ８０３〜８３１頁（１９
８１）、特開平１−３０９６８２、同２−１７４７９７
に開示されている。
【００５１】実験方法 1. 吸着プレートの作製 市販のフィブロネクチン（ヒト由来：生化学工業（株）
より購入）あるいはビトロネクチン（ヒト由来：フナコ
シ（株）より購入）をＰＢＳ（NaH2PO4 0.005 M + NaCl
0.０７Ｍ）で各々1.０μl ／ml、2.０μl ／mlに希釈し
その希釈液0.５mlを２４ウエルのプラスチックプレート
にいれ、３７℃で一晩保温しコーテイングした。次に非
特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミン（ＢＳＡ １
％）を加え３７℃で１時間保温し、その後通常の洗浄操
作（ＰＢＳ）を行い充分に水きりして吸着プレートを作
製した。
より購入）あるいはビトロネクチン（ヒト由来：フナコ
シ（株）より購入）をＰＢＳ（NaH2PO4 0.005 M + NaCl
0.０７Ｍ）で各々1.０μl ／ml、2.０μl ／mlに希釈し
その希釈液0.５mlを２４ウエルのプラスチックプレート
にいれ、３７℃で一晩保温しコーテイングした。次に非
特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミン（ＢＳＡ １
％）を加え３７℃で１時間保温し、その後通常の洗浄操
作（ＰＢＳ）を行い充分に水きりして吸着プレートを作
製した。
【００５２】2. 接着阻害実験 凍結乾燥により得たＣＭキチン誘導体をDulbecco ,s Mo
dified Eagles Medium（以下DMEMと略記する）で希釈し
て、０、0.２５、0.５、1.０及び1.５mg／mlの各濃度の
ＣＭ−キチン誘導体溶液とした。この溶液0.２５mlを上
記方法で作成したプレートにいれ、そこへ血管内皮細胞
（４×１０6 cells／ml）懸濁液を0.２５ml加え、３７
℃で一時間保温し細胞を接着させた。ＤＭＥＭ培地で３
回洗浄し、未接着の細胞を除いた後、0.025％ EDTA トリ
プシン溶液で接着した細胞を剥離し、 ２％トリパンブル
ーで染色して細胞数を計測した。 結果を下記表１及び表
２に示す。
dified Eagles Medium（以下DMEMと略記する）で希釈し
て、０、0.２５、0.５、1.０及び1.５mg／mlの各濃度の
ＣＭ−キチン誘導体溶液とした。この溶液0.２５mlを上
記方法で作成したプレートにいれ、そこへ血管内皮細胞
（４×１０6 cells／ml）懸濁液を0.２５ml加え、３７
℃で一時間保温し細胞を接着させた。ＤＭＥＭ培地で３
回洗浄し、未接着の細胞を除いた後、0.025％ EDTA トリ
プシン溶液で接着した細胞を剥離し、 ２％トリパンブル
ーで染色して細胞数を計測した。 結果を下記表１及び表
２に示す。
【００５３】 表−１フィブロネクチンに対する細胞接着阻害（細胞／ウェル） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 濃度 添加 （mg/ml) ０ 0.25 0.5 1.0 1.5 化合物 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ＣＭ−キチン 160 171 157 165 152 CM−キチン誘導体−１ 160 131 106 79 69 〃 ２ 160 135 99 82 75 〃 ３ 160 123 100 77 55 〃 ４ 160 141 121 80 67 〃 ５ 160 136 105 86 72 〃 ６ 160 127 107 93 66 〃 ７ 160 119 98 84 71 〃 ８ 160 130 113 80 59 〃 ９ 160 121 97 85 65 〃 10 160 122 110 87 73 〃 11 160 143 125 78 70 〃 12 160 125 101 89 77 硫酸化 CM−キチン 160 150 155 147 141 CM−キチン誘導体 -13 160 97 77 57 33 〃 14 160 111 93 68 41 〃 15 160 105 89 65 37 〃 16 160 103 81 75 50 〃 17 160 99 84 61 35 〃 18 160 133 101 75 52 〃 19 160 127 106 79 56 ＲＧＤ 160 157 162 141 83 ＧＲＧＤＳ 160 154 140 95 80 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
【００５４】 表−２ ビトロネクチンに対する細胞接着阻害（細胞／ウェル） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 濃度 添加 （mg/ml) ０ 10 50 100 300 化合物 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ＣＭ−キチン 249 260 243 240 255 CM−キチン誘導体−１ 249 148 89 72 41 〃 ２ 249 137 96 78 59 〃 ３ 249 141 87 69 49 〃 ４ 249 145 90 67 45 〃 ５ 249 129 91 80 48 〃 ６ 249 133 98 71 56 〃 ７ 249 143 85 79 55 〃 ８ 249 130 95 69 47 〃 ９ 249 139 88 77 58 〃 10 249 136 86 71 43 〃 11 249 147 100 73 45 〃 12 249 150 101 80 59 硫酸化 CM−キチン 249 231 235 222 200 CM−キチン誘導体 -13 249 103 70 47 31 〃 14 249 107 78 43 34 〃 15 249 115 69 54 38 〃 16 249 122 81 63 40 〃 17 249 114 76 48 33 〃 18 249 125 83 56 44 〃 19 249 130 92 63 39 ＲＧＤ 249 171 132 104 73 ＧＲＧＤＳ 249 157 116 87 61 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
【００５５】試験例２ 『血小板凝集阻害活性試験』 本発明のＣＭ−キチン誘導体の IN VITRO 系での血小板
凝集阻害作用をヒト多血小板血漿を用いて検定した。以
下にその実験方法を示す。
凝集阻害作用をヒト多血小板血漿を用いて検定した。以
下にその実験方法を示す。
【００５６】実験方法 新鮮なヒト血液に１／９量の3.８％クエン酸ナトリウム
を加え遠心（１０００rpm 、１０分）し、上層を多血小
板血漿として分取した。凍結乾燥により得たＣＭ−キチ
ン誘導体を生理食塩水に０−1.５mg／mlの種々の濃度に
なるように溶解した。ＣＭ−キチン誘導体溶液２５μl
を血漿２００μl に加え、３７℃で３分間インキュベー
トしたのち、５０μM ＡＤＰ（アデノシン二リン酸）溶
液あるいは２００μg ／mlのコラーゲン溶液を２５μl
加えて凝集の程度をアグリゴメーターを用いて透過度を
測定することにより検定した。結果を表−３に示す。 凝集阻害率（１−Ｔ／Ｔ0 ) ×１００％ Ｔ0 ＝ＣＭ−キチン誘導体の塩非添加時の透過度 Ｔ ＝ＣＭ−キチン誘導体の塩添加時の透過度
を加え遠心（１０００rpm 、１０分）し、上層を多血小
板血漿として分取した。凍結乾燥により得たＣＭ−キチ
ン誘導体を生理食塩水に０−1.５mg／mlの種々の濃度に
なるように溶解した。ＣＭ−キチン誘導体溶液２５μl
を血漿２００μl に加え、３７℃で３分間インキュベー
トしたのち、５０μM ＡＤＰ（アデノシン二リン酸）溶
液あるいは２００μg ／mlのコラーゲン溶液を２５μl
加えて凝集の程度をアグリゴメーターを用いて透過度を
測定することにより検定した。結果を表−３に示す。 凝集阻害率（１−Ｔ／Ｔ0 ) ×１００％ Ｔ0 ＝ＣＭ−キチン誘導体の塩非添加時の透過度 Ｔ ＝ＣＭ−キチン誘導体の塩添加時の透過度
【００５７】
【００５８】
【００５９】 配列番号：１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００６０】 配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００６１】 配列番号：３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００６２】 配列番号：４ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Arg Gly Asp Arg Gly Asp Arg Gly Asp Arg Gly Asp Arg Gly Asp １ ５ １０ １５
【００６３】 配列番号：５ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００６４】 配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００６５】 配列番号：７ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００６６】 配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００６７】 配列番号：９ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００６８】 配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００６９】 配列番号：１１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００７０】 配列番号：１２ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００７１】 配列番号：１３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
【００７２】 配列番号：１４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列
Claims (4)
- 【請求項１】 ＣＭ−キチンの側鎖にアミド結合、エス
テル結合、エーテル結合、ウレタン結合のいずれかを介
し、下記一般式〔Ｉ〕又は〔II〕で表される接着性ペプ
チドを必須単位として有するキチン誘導体またはその
塩。 一般式〔Ｉ〕 −〔R 1 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 2 〕 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ 1
は、炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアルキレン基、
または炭素数が６〜９のアリーレン基であり、置換基を
有していてもよい。Ｒ 2 は、水素又は炭素数が１〜９の
直鎖または分岐のアルキル基、または炭素数が６〜９の
アリール基であり、置換基を有していてもよい。ｎは１
〜５の整数を示す。 一般式〔II〕 〔R 3 〕−〔CO〕−（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) n −〔Ｚ〕−〔R 4 〕− 式中〔 〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、
存在する場合はＸ、ＹはSer, Gly, Val, Asn, Pro から
選択されるアミノ酸残基又はペプチド残基を示し、
（〔Ｘ〕-Arg-Gly-Asp−〔Ｙ〕) は６個までのアミノ酸
残基からなり、Ｚは−Ｏ−または−NH−を示す。Ｒ
3 は、水素又は炭素数が１〜９の直鎖または分岐のアル
キル基、または炭素数が６〜９のアリール基であり、置
換基を有していてもよい。Ｒ 4 は、炭素数が１〜９の直
鎖または分岐のアルキレン基、または炭素数が６〜９の
アリーレン基であり、置換基を有していてもよい。ｎは
１〜５の整数を示す。 - 【請求項２】 分子量が約3,０００−１０0,０００の範
囲である請求項１記載のＣＭ−キチン誘導体またはその
塩。 - 【請求項３】 請求項１または２記載のＣＭ−キチン誘
導体またはその塩を有効成分とする動物細胞の接着阻害
剤。 - 【請求項４】 請求項１または２記載のＣＭ−キチン誘
導体またはその塩を有効成分とする血小板凝集・粘着抑
制剤。
Priority Applications (3)
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|---|---|---|---|
| US07/780,790 US5298488A (en) | 1990-10-26 | 1991-10-23 | CM-chitin derivatives and use thereof |
| EP91118179A EP0482649B1 (en) | 1990-10-26 | 1991-10-24 | CM-chitin derivatives and use thereof |
| DE69119185T DE69119185T2 (de) | 1990-10-26 | 1991-10-24 | Derivate von Carboxymethyl-Chitin und ihre Verwendung |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-289491 | 1990-10-26 | ||
| JP28949190 | 1990-10-26 | ||
| JP33371890 | 1990-11-30 | ||
| JP2-333718 | 1990-11-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
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| JPH04217700A JPH04217700A (ja) | 1992-08-07 |
| JP2662830B2 true JP2662830B2 (ja) | 1997-10-15 |
Family
ID=26557615
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3066156A Expired - Fee Related JP2662830B2 (ja) | 1990-10-26 | 1991-03-29 | Ｃｍ−キチン誘導体およびその用途 |
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|---|---|---|---|---|
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-
1991
- 1991-03-29 JP JP3066156A patent/JP2662830B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04217700A (ja) | 1992-08-07 |
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