JPH0421694A - 新規なヌクレオシド―リン脂質複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なヌクレオシド−リン脂質複合体またはそ
の塩に関する。さらに詳しくは、本発明は下記−最大〔
Ｉ〕 ○Ｈ （ただし式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なった飽
和または不飽和の長鎖脂肪酸残基を示すで表される新規
なヌクレオシド−リン脂質複合体またはその塩に関する
。

〔従来の技術〕

ヌクレオシド系抗腫瘍剤は、種々の型の腫瘍細胞の化学
療法に有用な薬剤として従来から広（臨床に応用されて
きた。しかしながら、抗腫瘍化学療法剤としての応用に
おいて、いくつかの問題点が指摘されている。即ち、こ
れらヌクレオシド系抗腫瘍剤の作用機作として生体内で
、ヌクレオシドの５゛位水酸基がリン酸化を受けない限
り作用を発現し得ない。また加リン酸分解、脱アミノ化
等の不活化を受は急速に不活性な物質に分解されやすい
こと、腫瘍細胞がこれら抗腫瘍剤に抵抗性を有するよう
になること、分裂しつつある正常細胞に対しても毒性を
あられすことなど種々の欠点があった。このようなヌク
レオシド系抗腫瘍剤の欠点を改善する目的で種々のヌク
レオシド誘導体が合成されてきた。またリン脂質−ヌク
レオシド複合体として、５−フルオロ−２゛　−デオキ
シウリジン−５゛　−ホスフェート誘導体が得られてい
る（特開昭６１−９１１９５号）が、５−フルオロウラ
シル耐性細胞には効果が低いことが知られていた。

本発明者らの一部は、グリセロリン脂質とヌクレオシド
をホスホリパーゼＤの存在下反応させることにより、ヌ
クレオシドの一部アルコール基とグリセロリン脂質とが
簡便に反応して合成されるアラビノシトヌクレオシド−
リン脂質複合体を含むリン脂質−ヌクレオシド複合体を
得た（米国特許４，７９７，４７９号）。

〔発明が解決しようとする課題〕

抗腫瘍剤として汎用されている５−フルオロウラシル（
通称、５ＦＵ）誘導体には、耐性を示す抗腫瘍細胞が多
く存在することが知られ、またその耐性細胞に効果を示
し、動物実験で抗腫瘍性および抗ウィルス作用を示す、
２”　−デオキシ−５トリフルオロメチルウリジンが知
られている〔Ｃ，Ｈｅｉｄｅｒｂｅｒｇｅｒ他、Ｃａｎ
ｃｅｒＲｅｓ、、　　２４：１９７９　　（１９６４）
、　　Ｋａｕｆｍａｎ、Ｈ，Ｅ、他、５ｃｉｅｎｃｅ、
１４５　：　５８５　（１９６４））が、この２″　−
デオキシ−５−トリフルオロメチルウリジンの効果は生
体内でチミジンホスホリラーゼによる不活化のため、抗
腫瘍剤として臨床使用するには充分ではなかった。した
がって、５ＦＵに耐性を示す腫瘍細胞に有効であり、そ
して、生体内でヌクレオシドホスホリラーゼにより不活
化されることのない、２°　−デオキシ−５−トリフル
オロウリジン＝ｉ体の合成が望まれる。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは抗腫瘍活性を有し、医薬として開発の可能
性のある化合物を得るために研究を進め５ＦＵに耐性を
示す腫瘍細胞に活性を示し、生体内でのヌクレオシドホ
スホリラーゼにより不活化されることのない、新規なヌ
クレオシド−リン脂ｖＬ複合体を得、本発明を完成した
。

即ち、本発明は、下記−最大〔１〕 Ｈ （ただし式中、Ｒ，、Ｒ２は前記と同じ意味を有する）
で表されるヌクレオシド−リン脂質複合体またその塩で
ある。

まず、本発明の一般式（１）で表されるヌクレオシド−
リン脂質複合体を得るために用いられるグリセロリン脂
質としては、例えば下記−最大〔■〕で表されるホスフ
ァチジルコリン系グリセロリン脂質があげられる。

ＣＨ，−○−Ｒ１ ＣＨ−〇−Ｒ２ ＣＨｚ　　　ＯＰ　　　ＯＲ３ Ｈ （ただし式中、ＲｏおよびＲ２は前記と同じ基を示しＲ
８はコリン残基を示す） さらに−最大［Ｉｒ）で表されるホスファチジルコリン
系グリセロリン脂質において、基Ｒ，，Ｒ。

は同一または異なった飽和または不飽和の長鎖脂肪酸残
基であり、詳しくはＲ，は炭素数１６〜１８の飽和また
は不飽和の長鎖脂肪酸残基であり、Ｒ２は炭素数１６〜
１８の飽和または不飽和の長鎖脂肪酸残基である。具体
的な例としては、Ｒ３はバルミトイル基、ステアロイル
基またはオレオイル基であり、Ｒ２はバルミトイル基、
ステアロイル基、オレオイル基またはりルオイル基を有
する長鎖の飽和または不飽和脂肪酸残基があげられる。

好ましい例としては、Ｒ１およびＲアがともにバルミト
イル基で示されるジパルミトイルホスファチジルコリン
、Ｒ１およびＲ２がともにオレオイル基で示されるジオ
レオイルホスファチジルコリン、Ｒ１およびＲ２がとも
にステアロイル基で示されるジステアロイルホスファチ
ジルコリン、Ｒ１がバルミトイル基またはステアロイル
基、Ｒ２がオレオイル基またはリルオイル基で示される
ホスファチジルコリン化合物などの飽和または不飽和長
鎖脂肪酸残基を有するホスファチジルコリンがよい。ま
たこれらのＲ，およびＲ２の基を有するホスファチジル
コリンは、適宜上記した炭素数１６〜１８の脂肪酸を用
いて合成して得たものでもよく、市販のものを用いても
よい。

また本発明に使用されるヌクレオシドとしては２゛　−
デオキシ−５−トリフルオロメチルウリジンがあげられ
る。さらに−最大ＣＩ）で表されるヌクレオシド−リン
脂質複合体を得るためには、前記のグリセロリン脂質と
ヌクレオシドとを、必要に応じて金属イオンの存在下、
ホスホリパーゼＤを用いて溶媒中で反応せしめればよい
。用いられるホスホリパーゼＤとしては、例えばストレ
プトミセス属に属するストレプトミセス・ニス・ピーＡ
Ａ５３５　　（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　５ｐ−Ａ
Ａ５８６；ＦＥＲＭＰ−６１００）由来のホスホリパー
ゼＤ−Ｐ　（以下、時としてＰＬＤＰという）（特開昭
５８−１５２４８１号公報、東洋醸造社製カタログ番号
Ｔ−３９）が好ましい。

またその使用量は、グリセロリン脂質、例えばホスファ
チジルコリン１　ｍ　ｇ当たりのホスホリパーゼＩ）０
．１単位以上、好ましくは１〜１００単位である。さら
に用いられる溶媒としては、例えばエーテル、ベンゼン
、メチレンクロリド、酢酸エチル、アセトニトリルまた
はクロロホルムなどの有機溶媒とくに非プロトン性溶媒
と水またはｐＨ３〜１０緩衝液、好ましくはｐＨ３〜６
の緩衝液の有機溶媒層−水層の二層系溶媒があげられる
。

さらにまた金属イオン形成のための水溶性塩類としては
、通常塩化カルシウムが用いられる。また反応温度は通
常１０〜６０℃で、反応時間は３０分〜５日間で充分で
ある。さらに好ましい条件としては、反応は例えば２５
〜４５℃で、３０分から２日間行えばよく、２°　−デ
オキシ−５−トリフルオロメチルウリジン　１ミリモル
当たりホスファチジルコリン０．１〜５ミリモル、ＰＬ
ＤＰ５００〜１００００単位、反応液ｐＨ４〜７の水層
とクロロホルムまたはベンゼンの２層系を用いる。この
ようにして得られたヌクレオシド−リン脂質複合体は、
分液法およびシリカゲルクロマトグラフィーにより簡便
に精製することができる。

以上述べたような本発明のヌクレオシド−リン脂質複合
体の一段工程合成法は、以下のように示される。

叶 ＣＨ２ 叶 このようにして得られたヌクレオシド−リン脂質複合体
は、リン脂質のリン酸基の部分と、用いた２°　−デオ
キシ−５−トリフルオロメチルウリジンの５゛位の一級
水酸基の部分が結合したもので新規物質である。さらに
本誘導体は、ナトリウム塩などの無毒性塩となすことも
でき、一般にそのまま経口投与するか注射用蒸留水に懸
濁して投与することができる。

〔発明の効果〕

このようにして得られた本発明の新規なヌクレオシド−
リン脂質複合体は、母化合物の２゛　−デオキシ−５−
トリフルオロメチルウリジンと比較して、脂溶性が大き
いため生体内に長時間溜まり（従って活性が持続するこ
とになる）、ホスホリラーゼによる不活性化を受けに（
い、生体膜への親和性が高まる、キナーゼの関与なしに
抗腫瘍性ヌクレオシドである２′　−デオキシ−５−ト
リフルオロメチルウリジンの５“　−モノリン酸体が細
胞内で生成する、等の利点があり、活性が持続、増強さ
れ、毒性が低くなる。

本発明の新規ヌクレオシド−リン脂質複合体は、後に示
すように生体内（ｉｎ　　ｖｉｖｏ）での顕著な抗腫瘍
作用が認められ、更に５ＦＵ耐性細胞に対しても明らか
な抗腫瘍効果も認められる。

本発明のヌクレオシド−リン脂質複合体についてＭｅｔ
ｈ−Ａ線維肉腫（Ｍｅｔｈ　　Ａ　　ｆｊｂｒｏｓａｒ
ｃｏｍａ）および５ＦＵ耐性Ｐ−３８８白血病（５ＦＵ
　　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　　Ｐ−３３３１ｅｕｋｅｍｉ
ａ）に対する抗腫瘍活性を調べた結果を以下に示す。

〈動物〉 Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス、雄、６週令、ＢＤＦ、
マウス、雄、５週令を日本チャールスリハー社より購入
して用いた。１群のマウスの数は対照群＝７、投与群−
５匹とした。

〈使用細胞および接種方法〉 Ｍｅｔｈ−Ａ線維肉腫細胞（Ｍｅｔｈ　　Ａ　　ｆｉｂ
ｒｏｓａｒｃｏｍａ）ＩＸＩＯ６１０，２ｍｌを、Ｂ　
Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ　７ウス側腹部皮下（ｓ　ｃ）に接
種した。５ＦＵ耐性Ｐ３８８白血病細胞（ｌｅｕ　ｋ　
ｅ　ｍ　ｉ　ａ　）は、腹腔にＰ３８８細胞を移植した
ＢＤＦ、マウスに移植翌日より連日２０ｍｇ／ｋｇの５
ＦＵを腹腔内に投与して７代継いで樹立したもので、約
５０倍５ＦＵに耐性を示す。この３ＦＵ耐性Ｐ３８８白
血病細胞ｌＸｌ０’個１０２ｍ１を、ＢＤＦ、−７ウス
の腹腔内（ｉｐ）に移植した。

〈薬物〉 ＦＵＤＲ：　２’　　−デオキシ−５−フルオロウリジ
ン−５°　−イル ＴＦ：＋　Ｕｄ　ｒ　：　２’　　−デオキシ−５−ト
リフＪＬ／オロメチルウリジン−５゛　−イ ル 〈薬物濃度及び投与方法〉 各化合物は、所定濃度になるように、超音波処理により
蒸留水に懸濁または溶解した。いずれの化合物も、マウ
スの体重１０ｇ当たり０．１ｒｒ＋ＪをＩＩ！瘍細胞接
種２４時間後より５日間連続して経口（ｐｏ）または腹
腔内（ｉｐ）に投与した。

〈判定方法〉 ＭｅｔｈＡ線維肉腫を接種したマウスの腫瘍容積は、移
植１４日後の腫瘍の短径及び長径をノギスを用いて測定
し以下の式を用いて算出した。

腫瘍容積（ｍｍ”　）＝　（短径（ｍｍ））”　Ｘ長径
（ｍｍ）／２ 判定は、未処置群の平均腫瘍容積（Ｃ）と投与群の平均
腫瘍容積（Ｔ）よりＴ／Ｃ（％）を求めた。

５ＦＵ耐性Ｐ３８８白血病細胞移植群については、延命
率［Ｉｎｃｒｅａｓｅ　　ｉｎ　　ＬｉｆｅＳｐａｎ　
　（ＩＬＳ％）〕で示した。

く結果、考察〉 米国国立癌研究所（ＮＣＩ）の制癌剤効果判定基準を参
考に固形癌に対する抗腫瘍効果の判定基準をＴ／Ｃ４０
％として、ＭｅｔｈＡｖＡ維肉腫についてもＴ／Ｃ４０
％以下の場合について抗腫瘍効果あり、と判断した。表
１の結果より、本願化合物（化合物１〜７）は、Ｑ、１
ｍ　　ｍｏｌ／ｋｇの５連投によりＭｅｔｈＡ線維肉腫
の増殖をいずれもＴ／Ｃ４０％以下と有意に抑制した。

しかし、この実験条件では母化合物のＦ：＋ｄＵｒｄは
Ｔ／Ｃ６１，２％であり、明らかな抗腫瘍効果を示さな
かった。なお、本願化合物（化合物１〜７）の０．５ｍ
　　ｍｏｌ／ｋｇ経口１回投与では、−時的でごく弱い
体重の減少が認められたが、死亡例はどの群においても
全く見られなかった。

また、５ＦＵ耐性Ｐ３８８白血病細胞株に対して本願化
合物Ｔ／Ｃ４０〜４５％と明らかな抗腫瘍効果を示した
（表２）。しかし、特開昭６１−９１１９５号に記載さ
れてい乙長鎖アシル基を側鎖に有するリン脂質とＦＵＤ
Ｒの複合体（化合物８）は、この５ＦＵ耐性Ｐ３８８白
血病細胞株に対して明らかな抗腫瘍効果を示さなかった
。

表１ ｅｔ Ａ線維肉腫に対する抗腫瘍 効果 （ｓｃ ｐｏ） Ｎ＝５ 有意差は、５ｔｕｄｅｎｔ’ｓ　　を−検定を用いて算
出した。

＊＊ｐ＜０，０１　　＊ｐ＜０．０５ 表２　５ＦＵ耐性Ｐ３８８白血病に対する抗腫瘍効果（
ｉｐ−ｉｐ） 〔実施例〕 以下に本発明の実施例を挙げて具体的に述今るが、本発
明は何らこれらに限定されるものではない。

スｍ−１ ２゛　−デオキシ−５−トリフルオロメチルウリジン２
３７ｍｇ　（０，８ｍＭ）を２ｍｌの０．２５　Ｍ　　
Ｃａ　Ｃｌ　、を含む０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，７
）に溶解し、ＰＬＤＰ　　（ストレプトミセス属由来ホ
スホリパーゼＤ−Ｐ　１７４ユニット／ｍｇ）３０ｍｇ
、及び５　Ｑ　ｍ　Ｅのりｏｏホルムニ？容した１、２
−ジパルミトイル− −３−ホスホコリン１．７６ｇ　（Ｆ３　ｄＵｒｄに対
して３倍当量）を加え、４５℃で６時間攪拌した。反応
液にメタノール３　０　ｍ　ｌおよび水１３ｍｌを加え
分液し、有機層の溶媒を減圧上留去し、残渣をシリカゲ
ルフラッシュカラム（メルク　Ａｒｔ９３８５シリカゲ
ル）で精製した（溶媒系；クロロホルム→クロロホルム
：メタノールエ２０：１−１０：１−同４　：　１）　
、目的物含有画分の溶媒を減圧留去し、残渣をクロロホ
ルム：メタノール（２　：　１）４　０ｍ／にン容解し
、０．５ＮＨＣ！、水、０．５Ｎ炭酸水素ナトリウム、
水の順で分液した後、減圧上溶媒を留去した。残渣をク
ロロホルム：メタノール：水（１０：５：１）４０ｍｌ
に溶解し、ダイアイオンＷＫ−２０樹脂（Ｎａ型：三菱
化成工業社製）カラムを通し、同溶媒で溶出し、その溶
出液を回収し、溶媒を留去した。

残渣として目的物をナトリウム塩として得た。

収量４　７　７ｍｇ ＵＶメタノール　−２６１ｎｍ λｌＩｓｘ ＭＳ　　（ＦＡＢ）ｍ／ｅ＝９　４　９　　（ＭＮａ”
　　）天［２ 実施例１において、１．２−ジパルミトイル−ｓｎ−グ
リセロ−３−ホスホコリンの代わりに、−最大［Ｉ［）
で示されるグリセロリン脂質のｐＨ２として表３に示す
基を有するグリセロリン脂質を用いた他は、実施例１と
同様に行って、表３に示す目的物■〜■を得た。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）、下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 （ただし、式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は同一または異な
   った飽和または不飽和の長鎖脂肪酸残基を意味する）で
   表される新規なヌクレオシド−リン脂質複合体またはそ
   の塩。
2. （２）、一般式〔 I 〕におけるＲ＿２が、炭素数１６
   〜１８の飽和または不飽和の長鎖脂肪酸残基である請求
   項（１）記載の新規なヌクレオシド−リン脂質複合体ま
   たはその塩。
3. （３）、一般式〔 I 〕におけるＲ＿１が、パルミトイ
   ル基、ステアロイル基またはオレオイル基であり、Ｒ＿
   ２がパルミトイル基、ステアロイル基、オレオイル基ま
   たはリノレオイル基である請求項（１）記載の新規なヌ
   クレオシド−リン脂質複合体またはその塩。