JP2002508736A

JP2002508736A - ペプチジルプロドラッグ及びそれの製法と使用方法

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Publication number: JP2002508736A
Application number: JP50881698A
Authority: JP
Inventors: エス．ラゾ，ジョン; ウィフ，ピーター
Original assignee: University of Pittsburgh
Current assignee: University of Pittsburgh
Priority date: 1996-07-31
Filing date: 1997-07-08
Publication date: 2002-03-19
Also published as: IL128222A0; US5952294A; AU3652797A; EP0918534A1; WO1998004277A1; CA2261886A1; AU735243B2; EP0918534A4

Abstract

(57)【要約】活性官能基を有する治療用薬剤のペプチジルプロドラッグを開示する。該活性官能基を有する治療用薬剤は、アミノ、チオール、又はヒドロキシル基を有するものを含む。このようなプロドラッグの製法と使用方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチジルプロドラッグ及びそれの製法と使用方法［０００１］発明の背景１．発明の分野本発明は、一般的に、増殖性機能障害及びその他の疾患に有用である、生物学的に保護されたペプチジルプロドラッグに関する。これらプロドラッグは、薬剤を運ぶ新規な方式を意味しており、それは多くの治療法の薬物の生物学的な活性寿命を延長するものである。本発明は又、該プロドラッグの製造方法及び使用方法に関する。［０００２］２．発明の背景治療効果のある薬剤（agent）は、薬物寿命が短かいので、その使用は制約される。薬剤の薬物学的な効果は、薬剤が作用している時の薬剤濃度及び、薬剤の作用を受けている期間に関係する。更に、薬剤が作用している時の薬剤濃度と、体循環における薬剤の濃度には関係がある。迅速に代謝したり又は不活性化する薬剤は、循環系から急速に取り除かれる。それ故に、このような薬剤は、身体中での有効な濃度及び、身体中で所定の薬物作用を実現するために、多量の服用及び／又は頻繁な投与が必要なことがある。薬剤を多量に服用すること及び頻繁に薬剤を投与することは、費用が嵩み、危険であり、実際的でない場合がある。持続性薬物製剤は、同等の生物学的な作用を発揮しながら、このような問題を減少する。［０００３］本発明は、一般的に、疾患の中でもとりわけ、白血病の治療に有用である種々のプロドラッグに関するものである。本願で使用される「プロドラッグ(prodrug )」なる語は、当該分野の専門家に理解される如く、生物学的に不活性の化学化合物であって、体内では生物学的に活性な薬剤に転換されるものを意味する。本発明のプロドラッグは、生物学的に活性の薬剤形態を作るために体内で自然に活性化するまで、薬物学的な活動を欠いている。本発明の活性化されたプロドラッグは、一般的に、親化合物（parent compounds）と同様の有効性を体内にて示すが、体内での活性寿命が長いという追加的な利点を具えている。［０００４］プロドラッグの発想は、体内で急速に代謝される薬剤には特別に意味がある。このような薬剤の一例がアラＣ（Ara-C)であり、これは、シトシンアラビノシド、シタラビン及び1-(β-Ｄ-アラビノフラノシル)シトシンの名でも知られている。アラＣは、成人及び小児急性非リンパ細胞白血病、急性リンパ細胞白血病及び未熟期にある慢性骨髄性白血病の治療への使用には、重要で効果的な代謝拮抗物質である。また、髄膜白血病の治療及び予防と、成人及び小児の非ホジキンリンパ腫へも使用される。［０００５］アラＣは、ピリミジンヌクレオシドシチジン及びデオキシシチジンの類似体であって、リボース又はデオキシリボースを置換したアラビノース糖部を有する。アラＣは、アポプトシス（apoptosis）と称される活性化法によってサイクルのＤＮＡ合成期（Ｓ期）にある細胞を殺し、ＤＮＡポリメラーゼ即ちＤＮＡの形成に触媒作用をする酵素を抑制することによって機能する。この能力を発揮するには、薬剤は、ピリミジンヌクレオシドキナーゼによって活性化されなければならない。該ピリミジンヌクレオシドキナーゼは、先ずヌクレオチドアラシトシンモノリン酸塩（アラＣＭＰ）の形成を促進して、次にアラＣＭＰを二リン酸塩及び三リン酸塩ヌクレオチドアラシトシン二リン酸塩(アラＣＤＰ)、アラシトシン三リン酸塩（アラＣＴＰ）に変える。アラＣＴＰを蓄積すると、多くの細胞内でＤＮＡ合成を強く抑制する。ＤＮＡ鎖の伸長が抑制されるのは、延びているＤＮＡ鎖の末端部にアラＣが含まれている時である。ＤＮＡに含まれているアラＣが、ＤＮＡ鋳型機能を遅らせるという証拠もある。細胞の死が生じるのは、アラＣが、少なくとも１細胞サイクルの期間ＤＮＡ合成を継続的に抑制する場合であるので、細胞はＳ期で作用を受ける。人間の急性骨髄性白血病における細胞サイクル時間の平均は、１日から２日である。［０００６］効果的にＤＮＡ合成を抑制するための十分なアラＣＴＰの蓄積は、２つの酵素即ちシチジンデアミナーセ（cytidine deaminase）及びｄＣＭＰデアミナーセ（ｄＣＭＰ deaminase）の作用によって遅らされる。アラＣは、非中毒性の代謝物質アラウリジン（arauridine）(アラＵ)を形成するために、シチジンデアミナーセによって、体内で急速に代謝される。シトシンデアミナーセは、アラＣから第１級アミンを開裂（cleave）し、薬剤を不活性化する。更に、ｄＣＭＰデアミナーセは、アラＣＭＰを不活性代謝物質ウラシルアラビノシド（アラＵＭＰ）に変える。与えられたアラＣの約８０％が、２４時間以内に尿に排出され、１０％以下がシタラビンとして現われ、それ以外はアラＵである。従って、薬剤は、入院を必要とする連続的な点滴又は、顕著な都合の悪い影響をもたらすことがある多量の服用を頻繁に行うことによって、投与されなければならない。［０００７］種々の疾患の治療にアラＣを用いること及びその誘導体は、当該分野の技術者に知られている。例えば、米国特許第3,991,045号、第4,055,716号及び第4,097,665号は、Ｎ⁴-アシル-1-β-Ｄ- アラビノフラノシルシトシン、Ｎ⁴-アシル-1-β-Ｄ-アラビノフラノシルシトシン-5'-エステル及び、ジアシルヌクレオシドがそれぞれ開示されており、これらは、癌治療に化学療法薬剤として有用である。米国特許第4,145,414号は、アラシタジン（aracytadine）の5'-エステル及び、その製法と使用方法が開示されていて、ここでは、体内におけるアラＣの持続性を示している。米国特許第4,367, 332号は、一般的に抗腫瘍薬剤として有用であるＮ⁴-アルコキシカルボニルアラビノフラノシルシトシン化合物を開示している。［０００８］前述した特許には、本発明で開示するプロドラッグ或いはその製造と使用の方法が説明若しくは提案されていない。従って、体内で薬理学的に活性寿命が長い薬物を提供する必要が現実的且つ本質的にある。本発明は、この必要性に向けられたものである。［０００９］発明の要旨本発明は、活性官能基を供えた治療用薬剤のプロドラッグを開示するものである。本説明で使用される様に、「活性官能基(activating function)」なる語は、治療用薬剤の説明に使用される場合には、作用性アミノ機能、特に第１級又は第２級アミン、反応性チオール、又は反応性ヒドロキシル機能を含む治療用薬剤を意味する。本発明のプロドラッグは、通常、治療用薬剤のアミノ、チオール機能又はヒドロキシル機能に結合したペプチド部を有することに特徴がある。望ましい実施例において、ペプチド部は、アザペプチド結合を介して薬剤に結合する。本発明は更に、このようなプロドラッグの製造と使用の方法に関する物である。［００１０］本発明の目的は、生物学的に活性寿命が延長された活性官能基を有する治療用薬剤に関するプロドラッグの薬物構造（formulation）を明らかにすることである。本発明は更に、疾患の治癒効果がある治療法において使用するために、アラＣの薬物構造を提供することを目的とする。本発明のその他の目的は、活性官能基を有する治療用薬剤に関するプロドラッグの薬物構造を合成する方法を提供することである。また、本発明は、アラＣのプロドラッグの薬物構造を合成する方法を提供することを目的とする。本発明のその他の目的は、患者の体内で活性官能基がある治療用薬剤について、治療に効果的な量のプロドラッグの薬物構造を用いる方法を提供することである。［００１１］本発明は更に、治療に効果的な量のアラＣから成るプロドラッグの薬物構造を患者に用いる方法を提供することを目的とする。更に、本発明の目的は、プロドラッグが患者の体内で活性化する割合を変えられるように、抑制及び／又は変質され得るプロドラッグを提供することである。本発明は更に、特定の治療用薬剤を病院で点滴する必要性を、減少又は最小化するプロドラッグを提供することを目的とする。本発明は更に、望ましくない酵素の不活性化を阻止又は遅らせるプロドラッグを提供することを目的とする。このような本発明の目的は、図面と、後述する本発明の説明及び添付の請求項から十分に理解されるであろう。［００１２］図面の簡単な説明図１は、本発明の一実施例に基づくプロドラッグの薬物構造を作る方法の概略図を示す。図２は、本発明の他の実施例に基づくプロドラッグの薬物構造を作る方法の概略図を示す。図３は、本発明の他の実施例に基づくプロドラッグの薬物構造を作る方法の概略図を示す。図４は、本発明の一実施例に基づくアザペプチド結合を有するプロドラッグの薬物構造を作る方法の概略図を示す。図５は、本発明に従って作られた種々のプロドラッグの薬物構造を内部環化して形成された複素環を示す。図６は、２２℃でＭｅＯＨ-ｄ₄中にて化合物(10)(17)からアラＣの解放を¹ＨＮＭＲで観察し、実施例２の方法で確認したグラフである。図７は、２２℃でＮａＯＡｃの存在下、ＭｅＯＨ-ｄ₄中にて化合物(10)(15)(1 7)からのアラＣの解放を¹ＨＮＭＲで観察し、実施例２の方法で確認したグラフである。図８は、２２℃でＨＯＡｃの存在下、ＭｅＯＨ-ｄ₄中にて化合物(10)(17)からのアラＣの解放を¹ＨＮＭＲで観察し、実施例２の方法で確認したグラフである。図９は、当該分野ではアポプトシスとして知られている、活性細胞の死の形態的な証拠を表している人間の腫瘍細胞の割合を、時間についてプロットしたグラフであって、アラＣ、化合物(10)(15)(17)(19)について行い、ＤＭＳＯ制御し、実施例４の方法で確認したものである。図１０は、形態的なアポプトシス（％）対予備培養されたアラＣ、化合物(19) の濃度（μＭ）を座標で示すグラフであって、ＤＭＳＯ制御し、実施例４の方法に従って確認されたものである。［００１３］望ましい実施例の説明本説明で使用される場合、「患者」なる語は動物界の成員を意味しており、人間も含まれるが、それに限定されない。本発明は、一般的に、種々の疾患の治療に有用であるプロドラッグの組成のためのものである。本願で使用される「疾患」なる語は、増殖性機能障害を意味していて、白血病、リンパ種及び腫瘍性の髄膜炎のような癌を含むが、これらに限定されない。［００１４］より詳細には、本発明は、次式を有するプロドラッグに関するものである。前記式において、Ｒは、アミノ酸をおよそ１〜１０含むペプチド基であり、Ｒ¹ は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択される。Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換基及び１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択される。Ｚは、活性官能基を具えた治療用薬剤である。本説明で用いられる場合、「炭素置換基」なる語は、アルキル、アリル、アリール又はその他の炭素を基本とした基を意味する。［００１５］Ｒは、アミノ酸基をおよそ１〜５有するペプチド基であることが望ましく、２つのアミノ酸基であることが更に望ましい。最も望ましい実施例に於いて、Ｒは、α,α-二置換アミノ酸を含むジペプチドである。Ｚは、活性官能基を含む如何なる治療用薬剤でもあり得て、抗ウイルス性ヌクレオシド、抗新生物性薬剤、及びプリン、ピリミジンヌクレオチド薬剤が含まれるが、これらに限定されない。これらは、ヒドロキシ尿素、チオグアニン、マイトマイシンＣ、ザルシタビン(zalcitabine)、ジダノシン(didanosine)、ジドブジン(zidovudine)、スタブジン（stavudine）を含むが、これに限定されない。望ましい実施例では、ＺはアラＣである。当該分野の専門家に理解される様に、ＹがＮＨに等しいときは、プロドラッグはアザペプチド結合を含む。アザペプチドは、アミノ酸残留物であって、その中でアミノ酸のα炭素が窒素に置換されている。［００１６］当該分野の専門家に理解される様に、ペプチドはアミノ酸重合体であって、ここでは個々のアミノ酸残留物がアミド又はペプチド結合によって互いに結びつけられる。本発明で用いられる保護されたペプチド基は、適当なアミノ酸又はアミノ酸誘導基であってよい。本説明で使用される場合に、「適当なペプチド(suita ble peptide)」及び「保護ペプチド(protective peptide)」は、次の一般式のペプチド又はペプチド類似体を意味する。前記式において、Ｒ¹及びＹは、先に定義されたものであり、ｎは１〜１０であって、これは本発明の治療用薬剤に共用できるものであり、また、そこに結合され得る。ペプチド基がおよそ１〜１０のアミノ酸（ｎ＝１〜１０）を含んでいることが望ましく、最も望ましいのは、およそ１〜５のアミノ酸（ｎ＝１〜５）であり、２つのアミノ酸（ｎ＝２）を含むことが更に望ましい。本発明に於けるペプチド基で使用されるアミノ酸は、アルファ型又はベータ型の何れかであるが、アルファ型が望ましい。本発明での使用に適するペプチド基は、例として、2-アミノイソ酪酸(Aib)、イソバリン、2-メチルセリン、tert-ロイシン、2-メチルフェニルアラニン、2,2-ジプロピルグリシン及びβ-アラニンを含むが、これらに限定されるものではない。［００１７］ある種のペプチドは、各種ペプチダーゼによって早急に減成（degradation）するため、活性薬剤のペプチド誘導体の使用は制限される。タンパク質を生成しないアミノ酸と一体化しているペプチドは、タンパク質分解酵素に対して安定性を著しく増大する。α,α-二基置換アミノ酸を有するペプチドと治療用薬剤との間の結合の開裂率は、著しく減少する。それ故に、本発明の治療用薬剤を、α,α-ジアルキルアミノ酸を含む小ペプチドでアシル化することが最も望ましい。これらの化合物で最も望ましいものは、2-アミノイソ酪酸（Aib）である。更に、α,α-二基置換アミノ酸の存在は、分子内環化反応を著しく促進する。後述するように、プロドラッグを活性薬剤の形態へ転換するものが分子内環化反応である。この特有な特性は、ペプチドと治療用薬剤間の結合を選択的に開裂することに用いることが出来る。［００１８］前述の様に、プロドラッグの発想は、体内で急速な代謝を受ける治療用薬剤の活性寿命を生物学的に延長することに有用である。このような治療用薬剤の一例には、第１級アミンがある。邪魔な物が無い第１級アミンは、通常生物学的活性化に必要である。しかしながら、体内に存在する種々のデアミダーゼは、これらの治療用薬剤から、第１級アミンを開裂し、それらを不活性に変える。本発明の発明者らは、ペプチド基によって該第１級アミンを保護することによって、体内に存在する種々のデアミダーゼの作用を回避することに役立つということを発見した。治療用薬剤は、プロドラッグ又は不活性の形状で体に挿入され、この不活性化は、保護ペプチド基を第１級アミンに結びつけることによって引き起こされる。この発想は、反応的なチオール又はヒドロキシル機能を有する治療用薬剤にも同様に使用できる。プロドラッグは、体内に入ると、自然に活性化して、活性薬剤を形成する。一般的に、活性化したプロドラッグは、構造と機能の点で親化合物と見分けが付かない。自然な活性化はペプチド基の環化によって起こり、これにより、ペプチド基が治療用薬剤から分離され、ペプチド基に対応する複素環及び活性治療用薬剤をもたらす。従って、反応機能は、自由で邪魔されることがなく、治療用薬剤は、活性化合物として機能することができる。［００１９］本発明の特徴は、生物学的に活性の薬剤の解放割合を、望むように変更出来ることである。この変更は分子内活性官能基の脱アシル化率を増大したり、減少したりすることによって達成され、該率は、活性官能基に付随するペプチド部（pe ptidyl moieties）の化学的組成によって決定する。アラＣの場合、生物学的に活性のアラＣの解放割合は、分子内のＮ⁴脱アシル化の割合によって決まり、該割合は、Ｎ⁴の位置に付随するペプチド部の化学的組成によって決定する。従って、本発明のプロドラッグは、時期が決められた解放構造として機能する。このプロドラッグの解放率は、そこに付随するペプチド部の構造を変更することによって調節される。通常、５〜７の要素を有する環から成る複素環が優先的に発生して、アミノ酸部での二基置換の立体体積における増加は、活性化工程を促進する。［００２０］本発明は、前記したプロドラッグを製造する方法にも関係している。より具体的には、本発明は、活性官能基を具えた治療用薬剤に関するプロドラッグの薬物構造を作る方法を目指しており、該方法は、保護ペプチド基を前記記載の治療用薬剤の活性官能基へ結合する工程を含んでいる。これらの方法に従って作られたプロドラッグの薬物構造は、次の一般式である。前記式において、Ｒ、Ｒ¹、Ｙ及びＺは上記に規定の通りである。［００２１］所望に応じて、治療用薬剤は、結合工程の前にリチオ化され得る。リチオ化は、治療用薬剤を、リチウムを含む強い塩基、例えばヘキサン中のｎ-ＢｕＬｉ、ＬＤＡ又はシュヴェジンガー基（Schwesinger base）と混合することによって達成される。治療用薬剤が活性官能基として第１級アミンを含む場合の様な、ある特定の条件下では、治療用薬剤のリチオ化によって所望プロドラッグの生成が増加する。［００２２］更に、治療用薬剤において活性官能基とは別のヒドロキシル基が存在することは、一般的な有機溶媒中への化合物が低溶解性であることの一因になる。それ故に、ヒドロキシル基を溶解性が高い基に転換することは、結合工程が行われる以前に所望により行われる工程であって、或いは、リチオ化が行われる場合、リチオ化工程の以前に行われる。本説明で用いられる場合に、「溶解性が高い基」は、本発明の治療用薬剤の酸素分子に結合した基を意味しており、これは、ヒドロキシル基が存在する時に達成される有機溶媒中の溶解度より高い溶解度を有する治療用薬剤を提供する。ヒドロキシル基は、化合物の溶解性を増大する基に転換されることが可能であり、これには塩化t-ブチルジメチルシリル(ＴＢＤＭＳＣＩ)、t-ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳＣＩ）、その他のシリル、塩化アセチル基、塩化ベンゾイル基又はメトキシトリチル基を含むが、これらに限定されない。ＴＢＤＭＳＣＩを使用する場合、ＯＨ基をＯＴＢＤＭＳ基へ転換することは、ＴＢＤＭＳＣＩを治療用薬剤と混ぜ合わせることにより達成が可能であって、これは、周囲温度で約１日から３日、望ましくは２日間、イミダゾール、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びジメチルアミノプリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で反応が行われる。活性官能基がヒドロキシル基である場合、治療用薬剤上のその他のヒドロキシル基を変換する前に、弱酸、塩基、又はフッ化物アニオンで選択的に保護の除去がなされねばならない。［００２３］転換工程が該方法の最終工程として行われる場合には、ＯＨ基は保護基を除去することよって回復されなければならない。除去は、当該分野の専門家に知られている任意の方法で達成される。例えば、シリルに対しフッ化物での処理、ベンゾイル基に対し触媒水素化、アセチル及びメトキシトリチル基に対し希薄酸中での加水分解である。保護ペプチド基を治療用薬剤の活性官能基に結合する工程は、Ｃ末端のアミノ酸をオキサゾリノンへ転換すること又は、カップリング剤で活性化することによって達成される。アザペプチド結合を有するプロドラッグの場合、アシルイミダゾール化合物でＣ末端ヒドロジン（c-terminal hydrozine）を縮合することが望ましい。例えば、治療用薬剤は、カップリング剤、陰性非プロトン性溶媒及びアシル化触媒の存在下、縮合作用によって任意の適当なペプチドに結合することが出来る。本発明の方法で使用するために適当な非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）であり、適当なアシル化触媒はＤＭＡＰである。望ましくは、ペプチドはドライＴＨＦ中で分解され、約−７０℃から−９０℃の温度で、望ましくは−８０℃で治療用薬剤を含む混合物へ加えられる。ＤＭＡＰを加えた後、冷却浴は取り除かれ、反応混合物は周囲温度で撹拌される。該工程は、およそ１２〜２０時間、望ましくは約１６時間をかけて達成され、これにはおよそ１〜３時間、望ましくは２時間の間、周囲温度で撹拌することが含まれる。ペプチド結合は、陰性非プロトン性溶媒及びアシル化触媒の存在下で、治療用薬剤の追加の前に、化学結合薬剤で適当なペプチドを初めて混ぜることによって形成される。［００２４］更に、本発明は、アラＣのプロドラッグを作る方法を説明するものであり、該方法は、（ａ）ＯＨ基を溶解度が高い基に転換すること、（ｂ）工程（ａ）の生成物をリチオ化すること、（ｃ）保護ペプチド基を、工程（ｂ）の生成物のＮ⁴ の位置に結合すること、及び（ｄ）該溶解度が高い基をＯＨ基に転換することで構成される。アラＣのＮ⁴の位置に於けるペプチド結合した構造は、該アミノ官能基の本質的に低い求核性によって複雑化する。その上、アラビノースヒドロキシル基が３つ存在することは、一般的な有機溶媒中の化合物が低い溶解度であることの一因である。それ故に、３つのアラビノースヒドロキシル基を、有機溶媒はアラＣの溶解度を増大する基へ変換することは、前述の方法の第１工程として行われる。ヒドロキシル基は、任意の高溶解性基へ転換が可能である。ヒドロキシル基は、Ｏ-tert-ブチルジメチルシリル（ＯＴＢＤＭＳ）基へ転換されることが望ましい。これは、ドライＤＭＦ中でアラＣを、ＤＭＡＰの存在下でＴＢＤＭＳＣＩ及びイミダゾールと共に撹拌することによって実現される。［００２５］次の工程では、工程（ａ）の生成物がリチオ化される。これは、工程（ａ）の tri-(tert-ブチルジメチルシリル)アラＣを、十分な量のリチウムを含む強い塩基で、望ましくはヘキサン中のＮ-ＢｕＬｉで、化合することにより達成される。次に、保護ペプチド基は、工程（ｂ）の生成物のＮ⁴の位置に結合される。本工程で使用される望ましいペプチドの例は、上記したが、その他の適当な化合物は、ペプチド、Boc-Tyr(OBn)-Aib-OMe、Boc-Tyr(0Bn)-Aib、Boc-Gly-Aib及びBoc -Aib-Aibから誘導されるオキサゾリノンを含むものである。前述の様な当該分野の専門家に知られているどのような方法でも、これらの基をＮ⁴の位置に結合するために使用することが可能である。［００２６］ＯＴＢＤＭＳ基又はその他の高溶解性基を変換して、ヒドロキシル基へ戻すことは、専門家に知られているどの様な方法によってでも実現出来る。望ましくは、ＯＴＢＤＭＳ基に関して、この変換は、保護基を含む化合物をＴＢＡＦ及びＴＨＦと共に周囲温度で約１５分から１時間、望ましくは３０分の間混合して、更にこの混合物を３ＮＨＣｌ及びＥＴ₂Ｏ/ＣＨ₂Ｃｌ₂と共に約０℃から２１℃の周囲温度で約１５分から１時間、望ましくは３０分の間化合して実現される。［００２７］本発明に関して特有な実施例が、後述の例に示される。前記した様に、治療用薬剤の活性官能基に結合した保護ペプチド基は、治療用薬剤から活性官能基を開裂することによって薬剤を不活性化するという種々の酵素の働きを回避する。保護ペプチド基を有する本発明のプロドラッグを使用すると、この結果を避けられる又は、本質的に遅らせる。本発明に従って、保護ペプチド基は、身体内で環化を受けて、該基を受容治療用薬剤（host the rapeutic agent）から分離する。この結果は、ペプチド基及び治療用薬剤の活性化した形に対応する複素環である。図５が示すものは、本発明の方法に従って作られた様々なプロドラッグの薬物構造の分子内環化になる複素環化合物である。ペプチド基が環化を受ける割合は、使用されるペプチド基に依存しており、第１の順序工程即ち当該分野の専門家によく知られた概念である。身体内で５０％のプロドラッグを環化、即ちプロドラッグを生物学的に活性の薬剤に転換するのに要する時間は、本説明では「半減期(half-life)」と称される。［００２８］本発明は更に、患者の疾患を治療処理する方法を開示するが、これは以下の工程で構成される。（ａ）次式を有するプロドラッグを使用する。前記式に於いて、Ｒは、アミノ酸群をおよそ１〜１０含むペプチド基であり、Ｒ¹ は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択される。Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換した１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、Ｚは、活性官能基を具えた治療用薬剤である。（ｂ）該化合物を適当な医薬用担体（pharma ceutical carrier）に一体化する(incorporating)。（ｃ）治療に効果的な量の該担体に一体化した化合物を患者に投与する。［００２９］本説明で使用される「適当な医療用担体」なる語は、プロドラッグの薬物構造と適合性の点で問題のない医薬用担体を指している。適当な担体には、例えば、生理学上の塩水、水、自家移植の脊髄麻酔液体及びブドウ糖薬が含まれる。本説明で使用される「治療に効果的な量」なる語は、適当な医薬用担体に一体化したプロドラッグの薬物構造の量を意味して、白血病の小康状態の誘導、ガン細胞の破壊の様な望ましい効果をもたらすことを目標とする。［００３０］治療に効果的な量の該化合物は、専門家に知られているどの様な手段によっても投与が可能であり、この手段には点滴、非口径的(intraparenterally)、カプセル充填(intrathecally)、又は経口が含まれるが、これらに限定されない。当業者に周知の様に、投薬量及び投薬回数の決定は、患者の体重、疾患の種類及び疾患の重さによって、夫々の患者にとって治療に効果的な量に従って行われる。夫々の患者の必要性に基づいたプロドラッグの薬物構造を投与するのに最も適当な方法を選択することも、当業者の知るところである。［００３１］本発明のプロドラッグ化合物は、２〜１０半減期で、望ましい予定では４半減期で、１０〜２００ｍｇ／ｍ²の量を皮下に注射する。１０〜６０ｍｇ／ｍ²の量のカプセル（intrathecal）の投与は、２〜１０半減期、望ましくは４半減期の治療予定に用いられる。［００３２］実施例以下の例は、本発明を例示する目的のものであり、本発明をそれらに限定して解釈してはならない。例１以下の例は、化合物(10)(15)(17)を合成する方法を示す。これらの符号は、図１から図４の符号と対応している。2',3',5'-tri(tert- ブチルジメチルシリル)-アラＣ（４）約７ｇのＴＢＤＭＳＣＩ、３.１５ｇのイミダゾール及び６３０ｍｇのＤＭＡＰを、５５ｍｌのドライＤＭＦ中でアラＣを２.５０ｇ含む溶液に加えた。この澄んだ溶液を約２２℃で攪拌した。生成物の形成及び開始時の物質の消失は、薄膜クロマトグラフィ（ＴＬＣ）で観察した(ＭｅＯＨ/ＣＨＣｌ₃ １：９)。約２日後、反応混合物を、２００ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂に注入し、水（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥して、乾燥物となるまで蒸発させて、その残留物をＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して(ＭｅＯＨ/ＣＨＣｌ₃ １：１９ )、化合物(4)をおよそ３.６ｇと約２.１６ｇのtetraシリル化生成物（Ｎシリル化）を得た。後者の化合物を、約４０ｍｌのＴＨＦで溶解して、１０％の水を含むＮＨ４ＯＨ溶液で処理した。２２℃でおよそ４時間攪拌した後、有機溶媒を蒸発させて、その残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３×２５ｍｌ）で抽出した。化合した有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾かして、乾燥するまで蒸発させて、その残留物をＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して(ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃ １：１９)、約１. ４５ｇの化合物(4)を得た。［００３３］Ｂｏｃ-Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-ＯＭｅ（７）約１.５ｇのＢｏｃ-Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-ＯＨ(5)を含む溶液を、乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂１０ｍｌ中にて、０℃で約４１７ｍｇのＤＣＣを用いて処理した。混合物が０℃でおよそ５分撹拌して、２ｍｌのドライＤＭＦ中で約６２０ｍｇのＡｉｂ-ＯＭｅ塩酸塩(6)及び約４９０ｍｌのＮＭＭを含む溶液を用いて処理した。２２℃でおよそ１２時間撹拌した後、反応生成物を飽和したＮＨ₄Ｃｌ含水溶液で抽出した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥するまで蒸発させて、その残留物をＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して(ＥｔＯＡｃ/ヘキサン３：７)、約９００ｍｇの化合物(7) を得た。［００３４］Ｂｏｃ-Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-2',3',5'-tri-(tert-ブチルジメチルシリル)-アラＣ（９）７.５ｍｌのＴＨＦ/Ｈ₂Ｏ中に約２６０ｍｇの化合物(7)及び９１.５ｍｇのＬｉＯＨ一水和物を含む溶液を、２２℃でおよそ３時間撹拌した。有機層を蒸発させて、含水溶液をＥｔ₂Ｏ（２×１０ｍｌ）で抽出して、１ＮＨＣｌを有する１より少ないｐＨまで酸性化される。混合物を、Ｅｔ₂Ｏ（３×１０ｍｌ）で再度抽出して、化合された有機抽出物はＮａ₂ＳＯ₄で乾かして、およそ２４０ｇのＢｏｃ-Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-ＯＨを得るまで蒸発させる。ＣＨ₃ＣＮ中に約２００ｇのＢｏｃ- Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-ＯＨを含む溶液を、９５ｇのＤＣＣを用いて０℃で処理して、約２時間撹拌した。フロロシル（florosil）を通して濾過した後、溶液を乾燥するまで蒸発させる。乾燥ＴＨＦ２ｍｌ中で、結果として生じた粗生成物(8 )を溶解し、４ｍｌの乾燥ＴＨＦにて−７８℃で化合物(4)１３０ｍｇとヘキサン中のＮ-ＢｕＬｉの１.５Ｍ溶液を１６５μＭとの混合物へ加えた。ＤＭＡＰを約１３ｍｇ加えた後、冷却溶液を取り除き、反応生成物を２２℃で約２時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、４ｍｌの水を加えた。ＣＨ₂Ｃｌ₂（３×１０ｍｌ）で抽出した後、化合された有機層をＮａ₂ＳＯ₄に濾過して、乾燥するまで蒸発させた。残留物をＳｉＯ₂（ＥｔＯＡｃ/ヘキサン、１：１）をカラムクロマトグラフィーして、約２８５ｍｇの化合物（９）を得た。［００３５］Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-アラＣ塩酸塩(10) ２ｍｌのＴＨＦ中に化合物(9)を２５０ｍｇ含む溶液は、ＴＨＦ中のＴＢＡＦ１Ｍ溶液約０．９３ｍｌと共に処理して、２２℃で約２０分間撹拌し、乾燥するまで蒸発させた。残留物は、ＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して（ＭｅＯＨ/ＣＨＣｌ₃１：９）、Ｂｏｃ-Ｔｙｒ(ＯＢｎ)-Ａｉｂ-アラＣを約１５４ｍｇ得た。１.４５ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に、前記化合物をおよそ８９ｍｇ含む溶液は、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌ（ガス）の３Ｎ溶液１.５ｍｌと共０℃で処理した。反応生成物は、約３０分２２℃で撹拌して、この沈殿物は、プロドラッグ化合物(10)をおよそ８１ｍｇ得るまで濾過した。［００３６］Ｂｏｃ-Ａｉｂ-Ａｉｂ-ＯＭｅ(12) 約２００ｍｇのＥｔ₃Ｎ及び１００ｍｇのＤＭＡＰを、１０ｍｌドライＣＨ₂Ｃｌ₂中にＢｏｃ-Ａｉｂ-ＯＨ(11)約４００ｍｇ含む溶液に加えた。この澄んだ溶液を氷浴にて冷却し、５ｍｌのドライＣＨ₂Ｃｌ₂中で約４０８ｍｇのＤＣＣと共に処理した。反応生成物は、約１２時間２２℃で撹拌して、生成されたスラリーは、フロロシルを通して濾過した。更に、濾過液を空胞(vacuo)中で蒸発して、残留物は、ＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して（ＥｔＯＡｃ/ヘキサン２：３）化合物(12)を約４４０ｍｇ得た。［００３７］Ｂｏｃ-Ａｉｂ-Ａｉｂ-2',3',5'-tri-(tert-ブチルジメチルシリル)-アラＣ(14) 化合物(9)の生成に用いた工程を、化合物(7)の代わりに３００ｍｇの化合物(1 2)を使って繰り返し、およそ４６５ｍｇの化合物(14)を得た。Ａｉｂ-Ａｉｂ-アラＣ塩酸塩(15) 化合物(10)の生成に用いた工程を、化合物(9)の代わりに２５０ｍｇの化合物( 14)を使って繰り返し、およそ１０５ｍｇの化合物(15)を得た。Ｇｌｃ-Ａｉｂ-アラＣ(17) 化合物(9)の生成に用いた工程を、化合物(7)の代わりに２００ｍｇの化合物(1 6)を使って繰り返し、およそ４６８ｍｇのＧｌｃ-Ａｉｂ-2',3',5'-tri-(tert- ブチルジメチルシリル)-アラＣを得た。化合物(9)の代わりに前記の化合物３３０ｍｇを使って、化合物(10)の生成に用いた工程を繰り返し、およそ９８ｍｇのプロドラッグ化合物(17)を得た。［００３８］2- Ｂｏｃ-1'-アミノイソ酪酸-1,3,4-オキサジアゾール-5-ワン(18) ＴＨＦ４ｍｌ中に約１６０ｍｇの化合物(22)を含む溶液を、２２℃で約１４４ｍｇのＮ,Ｎ'-カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を用いて処理した。反応混合物を３時間撹拌した。溶媒は蒸発させて、残留物はＳｉＯ₂上でクロマトグラフィ分析して(ＡｃＯＥｔ/ヘキサン２：３)、化合物(18)を約１５２ｍｇ得た。Ｂｏｃ-Ａｉｂ-ＮＨＮＨ₂(21) 約１.５ｍｌのＭｅＯＨ中にＢｏｃ-Ａｉｂ-ＯＭｅ(20)をおよそ５７０ｍｇ含む溶液を、２２℃で約６２２ｍｇのＨ₂ＮＮＨ₂一水和物と共に処理した。該溶液を加熱して、約２４時間５５℃で撹拌して、更に約２２℃まで冷却した。溶媒は空胞(vacuo)の中で蒸発して、粗化合物(21)をおよそ４１０ｍｇ得た。［００３９］Ｂｏｃ-Ａｉｂ-2-Azagly-2',3',5'-tri-(tert-ブチルジメチルシリル)-アラＣ(2 3) ２ｍｌのドライＴＨＦ中に約１３０ｍｇの化合物(4)を含む溶液を、−７８℃ まで冷却し、ヘキサン中のＮ-ＢｕＬｉの２.５Ｍ溶液およそ１００マイクロリットルと共に処理した。約５分後、２ｍｌのＴＨＦ中にＣＤＩ約５４ｍｇ含む溶液を加えた。１０分後にドライアイスアセトン浴が取り除かれ、９６ｍｇの化合物 (21)及び１３ｍｇのＤＭＡＰを加える前に、反応混合物を１時間撹拌した。約２０時間撹拌した後、溶媒を蒸発させて、残留物はＳｉＯ₂でクロマトグラフィ分析して（ＡｃＯＥｔ/ヘキサン４：１）、化合物(4)を約５８ｍｇ及び化合物(23) を約５５ｍｇ得た。Ａｉｂ-2-Azagly-アラＣ塩酸塩(19) 化合物(10)の生成に用いた工程を、化合物(9)の代わりに９０ｍｇの化合物(23)を使って繰り返し、およそ３４ｍｇのアラペプチドプロドラッグ化合物(19)を得た。［００４０］例２例１に基づいて作られたアラＣプロドラッグ化合物(10)(15)(17)(19)の安定性が種々の媒体と反応するとき、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ分析によって調べた。環化工程の¹ＨＮＭＲ研究は、ＣＤ₃ＯＤ又はＤ₂Ｏ中のプロドラッグを１ｍｌに４ｍｇ含む溶液で行った。ｐＨを調節するために、酢酸ナトリウム（２ｍｇ）又は酢酸（２マイクロリットル）を手際よくサンプルに加えた。スペクトルを適当な時間間隔で集めて、プロドラッグ対薬剤の割合を、プロドラッグ及びアラＣのヌクレオシドにおけるＨ-Ｃ(6)の融合を比較することにより決定した。［００４１］血漿における環化工程のＨＰＬＣ検査は、血漿中にて１ｍｌ中に４ｍｇのプロドラッグを含む状況で行われた。適当な時間間隔で、２５マイクロリットルのアリコートを除去して、０.２０ｍｌのＣＨ₃ＣＮを加えてタンパク質を沈澱させた。遠心分離機で分離した後、２５マイクロリットルの澄んだ上澄み液をＨＰＬＣのポートに直接注入した。ＨＰＬＣ分析は、Ｈ₂Ｏ/ＣＨ₃ＣＮ（１：１）溶離剤を使用してＣ-１８可逆相コラム（reverse phase column）と共に行い、ＵＶ検知器を２５０ｎｍにセットした。アラＣの相対的な濃度は、相対的最大値領域によって決定された。アラＣを開放する割合は、ペプチド構造及び媒体のｐＨに依るということが分かった。プロドラッグの特徴的なシグナルが消失したとき、アラＣ及び対応する複素環のシグナルが出現した。動的分析によって、薬剤は、第１順序の割合の法則に従って形式された。図６乃至図８は、時間経過とプロドラッグの濃度の割合をプロットしている。次の表１は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ分析によって決定された様にプロドラッグ(10)(15)(17)(1 9)からアラＣが開放される半減期（時間で）を示している。［００４２］表１種々の条件においてプロドラッグ(10)(15)(17)(19)からアラＣが開放される半減期（時間） ND＝決定されていない上記の表から理解される様に、プロドラッグ(10)は、全ての誘導体の中で半減期が最も短いことが判った。薬剤開放工程は、ＮａＯＡＣの存在下で大幅に拡がった。しかしながら、ＨＯＡｃの存在中、分子内環化は、少ししか促進されず、実際化合物(17)においては減じられた。アミン(10)(15)の環化の割合は、アンモニウム塩に対する自由アミンの濃度に依るものと考えられ、それ故に中性又は基準環境において促進されるはずである。二座プロトン受容体／ドナー体部は、分子内カルボニル付加に対して特に有利のようである。反応混合物がＣＤ₃ＯＤからＤ₂Ｏへ変化するときに、混合物(10)は約５０％速い速度で環化した。［００４３］通常、化合物(17)は、混合物(10)より環化が遅かった。このことは、アミノ基に対してヒドロキシルの求核性が低い結果だと考えられる。また、化合物(17)は、中性媒体内に於けるより、酸性媒体内では環化が更に遅かった。誘導体(15)は、ＮａＯＡＣの存在下ですぐに環化したが、該誘導体の半減期は、ＮａＯＡＣが存在しない又はＨＯＡｃが過剰であることによって非常に長かった。アザペプチド誘導体(19)は、中性又は酸性状態にある薬剤を開放するための環化を受けなかった。また、ＮａＯＡＣの存在下であっても環化は非常に遅かった。ウシ亜科及び人間の血漿におけるこれらの混合物の安定性は、ＨＰＬＣ分析によって決定された(表１中の項目５及び６)。化合物(10)(15)(17)は、ウシ亜科及び人間の血漿ではすぐに環化することが判った。対照的に、化合物(19)は、血漿中で安定性が良いことを示した。４８時間経過後、アラＣは、検出されなかった。［００４４］例３アラＣと比較したときの化合物(10)(15)(17)(19)の抗増殖性の活性は、種々の濃度及び継続的接触（exposure）を用いてＬ-１２１０細胞線増大抑制評価で分析した。最初の薬剤接触から７２時間後に、細胞の数が決定された。ネズミ科のＬ-１２１０白血病細胞は、懸濁液中で増殖された。これには、ウシ亜科の胎児の漿液（ＦＢＳ、HyClone）を１０％補ったダルベッコの媒体(Gibco/ＢＲＬ)、２マイクロモルのＬ−グルタミン、１００Ｕ/ｍｌのペニシリンＧナトリウム、及び１００μｇ/ｍｌのストレプトマイシン（Gibco/ＢＲＬ）が用いられる。９５％が空気で５％がＣＯ₂である大気で３７℃に湿度調節した低温器で、細胞を増殖した。細胞は１：５の割合で規定通りに通過し、マイコプラズマ汚染の無いことが分かった。下記の表２は、検査した夫々の化合物に関する細胞増殖抑制を１ミリリットル中のナノグラムで示す。表２Ｌ-１２１０細胞増殖抑制（ｎｇ/ｍｌ）［００４５］ＩＣ₅₀及びＩＣ₉₀は、細胞の活性化をそれぞれ５０及び９０％抑制するのに必要とする化合物の濃度を意味する。当該分野の専門家が認めるように、ＩＣ値が低いほど薬剤は効力が高い。化合物(10)(15)(17)のＩＣ₅₀及びＩＣ₉₀値は、本質的にアラＣ抑制と同じであった。このことによって、化合物(10)(15)(17)が、アラＣに匹敵する有効性を有することが論証される。［００４６］例４人間の腫瘍細胞を殺すために、プロドラッグ化合物の能力を分析した。特に、人間のpromyelocytic白血病ＨＬ-６０細胞中のアポプトシスを誘起するために分析した。これらの細胞は、アラＣへの接触に続いてアポプトシスを受けることで知られている。ＨＬ-６０細胞中のアポプトシスの特有な特徴である、ヌクレオソーム内（intern ucleosomal）のＤＮＡフラグメンテーションを、引き起こすためのプロドラッグの能力も調べられた。ＨＬ-６０は、媒体にはイソクアの変性体（Iscoue's modi fication）を用いたが、本質的にＬ-１２１０と同様の方法で培養した。次の様に、ヌクレオソーム内のＤＮＡフラグメンテーションを決定した。必要とされる薬剤処理に続いて、細胞のアリコート（１×１０⁶）を５分間１００×ｇで遠心分離して小型球にして、ＰＢＳで洗浄した。２０マイクロリットルの溶菌緩衝液（１０ｍＭＥＤＴＡ、０．５％sarkosyl、１ｍｇ/ｍｌのプロテイナーゼ、５０ｍＭTris、ｐＨ８）で可溶化し、１時間５０℃で培養した。培養の後、RNaseA(B oehringer Mannheim)を１ｍｌ中０.３３ｍｇの最終濃度に加えて、もう１時間３７℃で培養した。１.８％がアガロースゲルの吸い込み升（dry well）へ、溶菌液を充填して、融解点が低いアガロースで吸い込み升を密封した。Tris-リン酸塩-ＥＤＴＡ（ＴＰＥ）流動性の緩衝液を使用して、ＤＮＡを電気泳動させた。電気泳動の後、１ｍｌにエチジウムブロミド（ethidium bromide）(Sigma)を１ μｇ含む水にゲルを液浸することによって、ＤＮＡを染色した。紫外光透過照明器を用いて、視覚化及び撮影した。［００４７］約１０マイクロモルのアラＣへ２４時間照射した後、ＨＬ-６０内で明らかなアポプトシス（apoptotic）体の出現が見られた。化合物(10)(15)(17)は、同様な結果を生み出したが、化合物(1 9)は異なった。図９に示すように、活性化合物の有効性に目立った相違点は無く、アラＣ、(10)、(15)、(17)によって処理した細胞を最大約２５％用いて、ハッキリしたアポプトシス形態を示した。アポプトシス体の生成は、最小４時間の半減期で発生し、アラＣ、(10)(15)(17)においてアポプトシスの運動に顕著な相違点は無い。２４時間の観察期間中、化合物(19)はアポプトシスの明確な増加はなかった。［００４８］該化合物のＤＮＡフラグメンテーションを分析した。４時間の間、約１０マイクロモルのアラＣと共に処理したＨＬ-６０細胞は、ヌクレオソーム内塩基対ＤＮＡ断片を１８０〜２００示す。同様なＤＮＡラダーが、化合物(10)(15)(17)にも見られた。化合物(19)は、インビトロで半減期が比較的長いので、１５日間、漿液が無い媒体中で予備培養した。図１０から分かるように、化合物(19)を予備培養することによって、アラＣより少し低いレベルまでアポプトシスの活性化を拡げた。更に、ＤＮＡフラグメンテーションは、予備培養した化合物(19)でも確認され、これはアラＣと同様なＤＮＡラダーを示した。このように、予備培養した化合物(19)の有効性は、アラＣの有効性と同様であった。［００４９］本発明は、治療用薬剤のプロドラッグ、及びそれの製造と使用方法を提供する。該治療用薬剤は、活性官能基を供えていることが特徴であり、アミノ基、チオール基或いはヒドロキシル基を含むが、これらに限定されない。これらのプロドラッグは、活性化基が、治療用薬剤から酵素によって除去されることを回避し、これによって接続的に機能する。更に、これらのプロドラッグは、人間に対して毒性ではない。本発明の具体的実施例を例示的に説明したが、当該分野の専門家であれば、請求の範囲に規定された発明から逸脱することなく、発明の詳細について種々の変形をなし得るであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 １２３Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ウィフ，ピーターアメリカ合衆国 15213，ペンシルベニア, ピッツバーグ，テクビューテラス 135

Claims

【特許請求の範囲】１．次式を有し自然に活性化するプロドラッグ。但しＲは、アミノ酸群をおよそ１〜１０含むペプチド基であり、Ｒ¹は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択され、Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換した１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、Ｚは、活性官能基を具えた治療用薬剤である。２．活性官能基は、アミノ基、チオール基及びヒドロキシル基で構成される群から選択される請求項１のプロドラッグ。３．Ｒは、およそ１〜５のアミノ酸基を有するペプチドである請求項２のプロドラッグ。４．Ｒは、２つのアミノ酸基を有するペプチドである請求項３のプロドラッグ。５．Ｒは、α,α-二置換アミノ酸を含む請求項４のプロドラッグ。６．Ｒは、2-アミノイソ酪酸(Aib)、イソバリン、2-メチルセリン、tert-ロイシン、2-メチルフェニルアラニン、2,2-ジプロピルグリシン及びβ-アラニンで構成される群から選択される請求項１のプロドラッグ。７．Ｚは、抗ウイルス性ヌクレオシド、抗新生物性薬剤、及びプリン、ピリミジンヌクレオチド薬剤で構成される群から選択される請求項１のプロドラッグ。８．Ｒは、2,2-ジアルキル、及び2,2-ジアリールアミノ酸で構成される群から選択され、ＹはＮＨであり、ＺはアラＣである、請求項１のプロドラッグの薬物構造。９．活性官能基を有する治療用薬剤についての自然に活性化するプロドラッグの薬物構造を作る方法であって、ペプチド基を治療用薬剤の活性官能基へ結合する工程を含む。 10．結合工程の前に、治療用薬剤をリチオ化する工程を更に含む請求項９の方法。 11．該治療用薬剤は更に、ヒドロキシル基を含み、リチオ化工程の前にヒドロキシル基を高溶解度基へ転換する、及び前記結合工程の後に、該高溶解度基をヒドロキシル基へ変換する工程を含む請求項10の方法。 12．ペプチド基は、次の一般式を有する請求項11の方法。但しＲ¹は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択され、Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換基及び１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、ｎは、１〜１０である。 13．ペプチド基は、2-アミノイソ酪酸、イソバリン、2-メチルセリン、tert-ロイシン、2-メチルフェニルアラニン、2,2-ジプロピルグリシン及びβ-アラニンを含む群から選択される、請求項12の方法。 14．治療用薬剤は、抗ウイルス性ヌクレオシド、抗新生物性薬剤、及びプリン、ピリミジンヌクレオチド薬剤で構成される群から選択される請求項９方法。 15．結合工程は、陰性非プロトン性溶媒及びアシル化触媒の存在中に、ペプチド基で治療用薬剤を縮合することによって作用を受ける、請求項９の方法。 16．アラＣが入っており自然に活性化するプロドラッグを作る方法であって、ａ）ＯＨ基を高溶解性基へ変換する、ｂ）工程ａ）の生成物をリチオ化する、ｃ）ペプチド基を工程ｂ）の生成物のＮ⁴の位置に結合する、ｄ）該高溶解性基をＯＨ基へ変換する、工程を含む。 17．該高溶解度基は、ＯＴＢＤＭＳ基である、請求項16 の方法。 18．該ＯＨ基からＯＴＢＤＭＳ基への変換は、イミダゾール、ジメチルホルムアミド及びジメチルアミノプリジンの存在下で行われ、該リチオ化工程は、ヘキサン中の十分な量のＮ-ＢｕＬｉと工程（ａ）の生成物とを混合することによって達成され、該結合工程は、工程（ｂ）の生成物を次式のペプチド基とを混合することによって達成され、前記式において、Ｒ¹は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択され、Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換基及び１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、ｎは、１〜１０であり、ＯＨ基からＯＴＢＤＭＳ基への変換は、工程（ｃ）の生成物をテトラブチルアンモニウム塩及びテトラヒドロフランと混合して、更に３ＮＨＣｌとＥｔ₂Ｏ/ ＣＨ₂Ｃｌの混合物と混合することによって達成される、請求項17の方法。 19．保護ペプチド基は、2-アミノイソ酪酸、イソバリン、2-メチルセリン、tert -ロイシン、2-メチルフェニルアラニン、2,2-ジプロピルグリシン及びβ-アラニンで構成される群から選択される請求項18の方法。 20．保護ペプチド基は、2-アミノイソ酪酸である請求項19の方法。 21．患者を治療処理する方法であって、ｅ）次式を有するプロドラッグを使用する、但しＲは、アミノ酸群をおよそ１〜１０含むペプチド基であり、Ｒ¹は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択され、Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換した１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、Ｚは、活性官能基を具えた治療用薬剤である、ｆ）該化合物を適当な医薬用担体に一体化する、及び、ｇ）該担体に一体化した化合物の治療に効果的な量を患者へ投与する、工程を含む。 22．患者は、白血病、リンパ腫及び腫瘍性の髄膜炎を含むグループから選択される疾患を有する、請求項21の方法。 23．担体は、生理学上の塩水、ブドウ糖、水、自家移植の脊髄麻酔液体を含むグループから選択される、請求項22の方法。 24．該担体に一体化した化合物を皮下注射によって患者へ投与することを含む、請求項21の方法。 25．該担体に一体化した化合物をカプセル充填したものを患者へ投与することを含む、請求項21の方法。 26．該担体に一体化した化合物を点滴によって患者へ投与することを含む、請求項21の方法。 27．患者の体内で、約１０分から１０日の半減期を有することが更に特徴である、請求項１のプロドラッグ。 28．次式を有しており自然に活性化するプロドラッグを投与する方法。但しＲは、アミノ酸群をおよそ１〜１０含むペプチド基であり、Ｒ¹は、炭素置換基、水素、窒素及び酸素で構成される群から選択され、Ｙは、２つの炭素置換基に結びついた炭素、２つの水素又は１炭素置換した１水素、炭素置換基に結びついた窒素、及びＮＨで構成される群から選択され、Ｚは、２〜１０時間毎に患者へ該プロドラッグを与える工程を含む、活性官能基を具えた治療用薬剤である。