JPH06509822A - ポリマー結合型パクリタキセル誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ポリマー結合型パクリタキセル誘導体 この発明は、抗腫瘍活性が付与されたポリマー結台型パクリタキセル（ｐｇｃｌ ｉｌｔｘｅｌ）およびポリマー結合型パクリタキセル誘導体、それらの製造方法 、ならびにそれらを含む医薬組成物に関する。

タキサス・プレビフォリア（Ｔｓｔａｓ　ｂｒｅマ百ｏ百日１目）の樹皮から単 離され、その特徴が決定されている。パクリタキセルの他の類似体も知られてお り、タキサス・バッヵタ（Ｔｌ！ＩＩ　ｂｌｃｃｔｌｓＬ）の針状葉から抽出さ れた１０−デアセチル　バッ力チン■から出発する半合成によって製造された。

ｒｅｓｉｎ　ｅｌ　ｔｌ、、１ｎＩＡＣＳ、９３．２３２５　（１９７１１およ びＬｏｗｅｌｌｓ　ｅｔ　ｓｌ、、Ｐ＋ｏｃ、　Ａｍ＾ｒｓｏｃ、　Ｃｅｎｅｅ ＋　Ｒｅ１．、　３１．４１７　（１９９ＯＮ参照。これらの化合物は、強力な 抗腫瘍活性をもっことが示されてきたが、水に極めて溶けに＜＜、若干の毒性副 作用が、担体としてクレモフォアＥＬ（ＴＭ）を使ったこれら化合物の注射また は静注にともなって認められる。

この発明は、 下式で示される９０ないし９９．９ｍｏ１％の構成単位、下式で示される０、工 ないし５ｍｏ７％の構成単位、（式中、ＲおよびＲ２の一方が下式のコポリマー 残基であつて、 他方が水素原子である）、 下式で示される０ないし９．９ｍｏ１％の構成単位（式中、Ｒはフェニルまたは ｔ−ブトキシ基であり、Ｒ３はＨまたはアセチル基、同一であっても異なっても よいＡおよびＡ１は、化学的単結合、βＡｌａ、Ｇｌｙ％Ｐｈｅ−Ｇｌｙ。

Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−１Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｌｅｕ −Ｐｈｅ、Ｌｅｕ−ＡｌａＳＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ 、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ。

Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ　−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ 、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈ ｅＳＧｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−ｃｒｙ−βＡ　１　ａ、　Ｐｈ　ｅ−Ｐｈ　ｅ −βＡｌａ、Ｌｅｕ−ｃｙ＋ｙ−βＡｌａＳＶａｌ−Ａｌａ−βＡｌａ、Ｐｈｅ −Ａｌａ−βＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−βＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、 Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ。

Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−βＡｌａＸＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈ ｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−β、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ −Ｇｌｙ−βＡｌａ。

Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−βＡｌａまたはＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ ｌｙ−Ｐｈｅ−βＡｌａから選ばれるアミノ酸残基またはペプチドスペーサーを 示す）から本質的になる式Ｉで示されるポリマー複合体を提供する。

特に、この発明は、水溶性が改善されかつ毒性が減少したパクリタキセルのポリ マー複合体およびパクリタキセルの誘導体好ましくは、パクリタキセルおよびパ クリタキセル誘導体を含む構成単位のｍａ１％は０．５ないし２であり、より好 ましくは、ポリマー中のパクリタキセルの含量は２ないし１０％（ｗ／ｗ）であ り、最も好ましい化合物は、４ないし７％（Ｗ／Ｗ）の含量によって特徴付られ るものである。波状の線は、パクリタキセル構造の７位に結合した酸素が両方の コンフィグレイション、すなわち、β（天然）型またはα型をとり得ることを示 している。

好ましくは、Ｒはフェニル基、Ｒ３はアセチル基、およびＡはＰｈｅ−Ｌｅｕ− ＧｌｙまたはＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　−βＡｌａ残基である。すべてのアミノ 酸残基は、天然型のＬコンフィグレインヨンをとっている。好ましい実施態様に よれば、このポリマー複合体は、１−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプ ロパン、（メタクリロイルグリンルーフェニルアラニルロイシルグリシル）３− アミノ−２ヒドロキシプロパンおよび２′−（メタクリロイルグリシルフェニル アラニルロイシルグリシル−βアラニル）パクリタキセルのコポリマーである。

５ｗ　／　ｗ含量は、酵素的加水分解の後、ｒｃｘｎｃｅ＋　Ｔ＋ｅｘ１ｍｔｎ ｌＲｅｐ、　７１　（ｌ］、　ｔ９Ｂ？、　ｐ、５３−５９　Ｊに記載された方 法と類似のＨＰＬＣ法によって定量した。

酵素的加水分解 マウスまたはヒトの血漿１ｍｌにさまざまな濃度のポリマー結合型パクリタキセ ルを添加し、適当な時間（２４，４８，７２，９６時間）で１００μｌを回収し 、その後の使用に備えて一７０℃で保存した。

抽出法 ７５μｌの０．５Ｍテトラブチルアンモニウムホスフェート（Ｔ　Ｂ　Ａ　Ｐ　 ）　、１２５０　ｕ　ｌ　ノＣＨ３ＣＮおよび１５０μｆ（７）５Ｍ　ＮａＣ１ を添加することによって試料を抽出し、４℃で２０分間はげしく震盪した。

その後、試料を１５０００Ｘｇで１０分間遠心し、上溝を回収し、高真空遠心分 離機を使って蒸発させた。試料を５００ｐｌのＭ　ｅ　ＯＨ：　Ｈ２０（７５： 　２５　Ｖ／　ｖ）の添加によって回収し、全パクリタキセルのパーセント含量 を定量するためにＨＰＬＣに注入した。

ＨＰＬＣ系 カラム：　Ｎｏｗｇ　Ｐｘｋ　Ｃ，８（’１ｘｌｅ＋を社）３．９Ｘ３００ｍｍ 流速・　１．５ｍｌ／ｍ 検出器：　ＵＶ２３１ｎｍ 注入・　２０μｌ 移動相：　ｐＨ２としたＲ２０　５７．５％ＣＨ３ＣＮ　４２．５％ この発明はまた、ポリマー複合体の製造方法を提供するが、この方法は下式■で 示される化合物 ［式中、Ａ２およびＡ３の一方は化学結合であり、他方はＡであって、Ａ、Ｒお よびＲ３は上記の通り］と、下式で示される９０ないし９９．９ｍｏ１％の構成 単位、および下式で示される１ｏないしＯ，１ｍｏ１％の構成単位［式中、Ａ１ は上記の通り］から本質的になる活性型ポリマーとを反応させること、次いで、 得られたポリマー複合体を２−ヒドロキシプロピルアミンで処理することを含む 。

好ましくは、式■の化合物と活性型ポリマーとの反応は、必要に応じアルカリ炭 酸塩、ジメチルアミノピリジンまたはトリエチルアミンなどの有機または無機塩 基の存在下、ジメチルスルホオキシドまたはジメチルホルムアミドなどの無水極 性有機溶媒中で行われる。反応は通常、工ないし２４時間行うことが可能である 。

反応は通常、１５ないし４０℃、好ましくは室温で行われる。

アルカリ炭酸塩は、例えば、アルカリ金属炭酸塩またはアルカリ土類金属炭酸塩 である。

式Ｈの出発化合物のいくつかは、既知化合物、すなわち、パクリタキセルまたは パクリタキセル類似体であるか、既知化合物から出発して製造することも可能で ある。例えば、７−エビ誘導体は、塩基（Ｎ　ａ　２　ＣＯ３またはジアザビシ クロウンデセン）の存在下、トルエンパクリタキセルまたはその類似体中で還流 することによって製造が可能である。式■で示される他の化合物は新規なもので あって、特に、Ａ３がβＡｌａ残基である化合物およびＡ　またはＡ３のどちら かは上記でＡについて定義したようなジ、トリまたはテトラペプチドスペーサー である化合物であって、この発明の範囲に入っている。

Ａ２が化学的単結合でない式■の化合物は、縮合剤の存在下、触媒添加の有無に かかわらず、好ましくは室温で、パクリタキセルまたはバクリタキセル類似体と 保護されたアミノ酸またはペプチドとを反応させ、その後に既知の方法で保護基 を除去することによって製造が可能である。

縮合は、ペプチドまたはアミノ酸のパラニトロフェニルエステルといった活性型 エステルを使って実施することも可能である。適切な縮合剤として、ジシクロへ キシルカルボジイミド（Ｄ　ＣＣ）などのカルボジイミドが挙げられる。

適切な触媒として、４−ジメチルアミノ−ピリジン（ＤＭＡＰ）　、ピリジンま たはトリエチルアミンが挙げられる。

さまざまな既知のアミノ保護基を利用することができ、市販の保護されたアミノ 酸またはペプチドを出発物質として利用することができる。ｔ−ＢＯＣ，ｌ−リ チル、ＦＭＯＣまたはカルボベンジロキシ（ＣＢ　Ｚ）で保護されたアミノ酸ま たはペプチドを利用することができる。ｔ−ＢＯＣ，）リチルまたはＦＭＯＣ基 で保護されたアミノ酸またはペプチドが好ましい。

Ａ３が化学的単結合でない式■の化合物は、２′−ヒドロキシ基を保護またはブ ロッキングし、７位のヒドロキシルをエルテル化してから、２′−保護またはブ ロッキング基を除去することによって製造が可能である。

より好ましくは、Ａ３がＧｌｙまたはβＡｌａ残基である式■の化合物は、パク リタキセルと２〜３当量のＮ保護アミノ酸とを反応させて、２′、７−二置換パ クリタキセルを合成することによって製造が可能であるが、２′位のアミノ酸が 開裂され、次いで７位のアミノ酸が脱保護される。

パクリタキセルと保護アミノ酸との反応は、上記で規定した化合物のような縮合 剤および触媒の存在下で行われる。

２′−アミノ酸の開裂は、例えば、ｐＨ７〜７．４のリン酸緩衝液中の２′、７ −ジ（アミノ酸）パクリタキセルと若干過剰のＮ　ａ　ＨＣＯ３との混合によっ て、２’−７−（アミノ酸）パクリタキセル溶液のｐＨをｐＨ７〜７．４に調節 することによって行われる。

アミノ酸の脱保護は、例えば酢酸を使った弱い酸処理または還元といった既知の アミノ酸脱保護方法のもとで行われる。

このようにして、例えば、パクリタキセルを、２〜３ｍｏｆ当量のＮ保護アミノ 酸（ｔ、ｂｏｃ、ＣＢＺまたはＦＭＯＡ保護）とＤＣＣおよび触媒量の４−ジメ チルアミノピリジンの存在下で反応させる。この方法では、保護アミノ酸は、２ ′および７位に導入される。パクリタキセルの２′、７−ビスアミノ酸誘導体を 、２〜５時間Ｈ２０Ｚ　Ｍ　ｅ　ＯＨ中、Ｎ　ａ　ＨＣＯ３の存在下で放置し、 それによって、２′位で選択的脱保護が生し、バクリタキセルの７置換型誘導体 が得られる。保護基は適当な脱保護剤（例えば、酸、弱い塩基または水添分解） によって除去される。

ＵＳ−Ａ−４０６２８３１およびＵＳ−Ａ−４０９７４７０に記載されているよ うに、活性型ポリマーは、Ｎ’−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド とＮ−メタクリロイルオリゴペプチド類のｐ−ニトロフェニルエステル類との共 重合によって製造された合成水溶性ポリマーである。

式Ｉで示されるポリマー複合体および式■で示される新しいバクリタキセル誘導 体は、優れた水溶性、生体適合性を示し、血漿中にパクリタキセルまたはバクリ タキセル誘導体を放出するか、または細胞中に取り込まれた後オリゴペプチドス ペーサーの開裂によりこれらの化合物を放出する。

ウシ脳のチューブリンを、会合−解離（Ｓｈｅｌ＊ｎ５ｋｉ　ｋｌ、Ｌ、。

Ｇ５５ｋｉｎＦ、ｔｎｄＣ＊ｎ’ｌｏ＋Ｃ，Ｒ，、Ｐ＋ｏｃ、Ｎ５ｌｌ＾ｃｘｄ 、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、＾。

７０、　７６５−７６１　１９７３　）の２サイクルによって調製し、ＭＡＲ（ ０，１Ｍ　ＭＥＳ、２．５ｍＭ　ＥＧＴＡ、０．５ｍＭＭｇＳＯ４，０，１ｍＭ 　ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ　ＤＴＴｐＨ６，４）中の液体窒素中で保存した。

すべての実験は、４週間未満保存したタンパク質で実施した。

各実験の前に、チューブリンを３０分間４℃に保った。

Ｇ５５ｋｉｎらの方法（Ｇ５５ｋｉｎ　Ｆ、、　Ｃ＋ｎｔｏ＋　Ｃ，Ｒ，、５ｈ ｅｌ＋ｎ＋ｋｉ　Ｍ、Ｌ、。

１、　Ｍｏ１ｅｃ、Ｂｉｏｌ、８９．　７３７−７５８．　１９７４　）によっ てモニターした。

チューブリン（１ｍｇ／ｍｆ）および１ｍＭ　ＧＴＰを含むキュベツト（光路長 １ｃｍ）を３７℃に上げ、連続的濁度測定は、自動記録計およびサーモスタット で温度調節された試料チャンバーのついたＰｅ「ｋｉｎ−Ｅｌｉｅｔ社の５５７ 型２波長２ビ一ム分光光度計を使って３４０ｎｍで行った。

３０分後４ｍＭのＣａ　Ｃｌ　２を加え、解重合を濁度の低下として１５分間測 定した。１５分の一定間隔をおいて、スカラー量の被験化合物を添加し、濁度の 変化をモニターした。データは、被験化合物によって誘導されたりポリメリゼイ シラン（＋ｉｐｏ１７ｍｅ＋ｉ■ｔｉｏｎ）のパーセントとして表わす。結果を 表１対数増殖期にあるＢ１６−ＦＩＯマウス黒色腫細胞をＲＰＭｌ−４６４０培 地に播種（２Ｘ１０’／ｍ！’）Ｌ、２４穴プレー　ｈ　（Ｃ０１１１１社）中 に１０％熱不活性化ウンつ児血清および２　ｍＭグルタミンを補充した。播種直 後に、スカラー濃度の被験化合物を添加した。細胞増殖の阻害は、７２時間イン キュベーションした後、コールタ−カウンターにより細胞を計数することによっ て評価した。各被験化合物の濃度に対して、３組の培養物を使用した。被験化合 物の抗増殖活性は、用量一応答曲線から計算し、ＩＣ５ｏ（未処理対照培養物に 対して処理培養物で細胞増殖の５０％阻害を起こす用量）として表示した。結果 を表Ｉに示す。

表１ 実施例６で製造されたコポリマーパクリタキセルは、８１６Ｆ１０マウス黒色腫 に対してｉｎマ１（ＴＯでパクリタキセルと比較して試験された。

ヱごＬ各 メスのＣ５７Ｂ１６７ウスを、イタリアのＣｈｇ＋ｌｅｓ　Ｒｉｙｅ＋社から入 手した。

実験開始時、これらのマウスは８ないし１０週齢であった。

１り 水溶性に限界があるので、パクリタキセルを、ポリオキシエチル化キャスター油 （Ｃ＋ｅ＋＋ｏｐｈｏｒ　ＥＬ）　５０％およびエタノール５０％からなるビヒ クルに溶解し、次いで５％グルコース溶液で所定の濃度に希釈した。この溶液は 若干濁りを帯びており、短時間の後に沈澱物の形成が認められた。実施例６の化 合物は５％グルコース溶液に容易に溶解して、得られた溶液は長時間（２時間を 超える）透明であった。最終濃度は、この化合物のバクリタキセル含量（総量の ４％）であった。

リ マウスの黒色腫Ｂ１６Ｆ１０を使用した。０．２ｍｌ中の１０５腫瘍細胞の懸濁 物をマウスの側腹部に皮下注射した。

腫瘍のサイズはカリパスを使って測定し、腫瘍の重さは下式を使って計算した。

薬物投与 パクリタキセルは、その溶解度が低くビヒクルに毒性があるため、腹腔内投与し た。

実施例６の化合物は静注した。両方の化合物は、腫瘍の移植後１．５．９日目に 投与した。

表２のデータは、この発明の化合物がパクリタキセルより強い活性のあることを 示している。

このポリマー複合体の用量はパクリタキセル含量とする。

表２ ＴＯＸ　：毒性のために死亡したマウスの数ＴＯＸの決定がなされたのは、マウ スが対照群よりも先に死亡した場合か、体重の顕著な減少および／または牌およ び／または肝サイズの減少が認められた場合である。

上記のデータから、この発明のポリマー複合体は優れた抗腫瘍活性を発揮するこ とが分かる。したがって、これらの化合物は、パクリタキセルまたはパクリタキ セル誘導体に比較して、毒性が低く水溶性が高いために有用な抗腫傷薬である。

治療可能な腫瘍の例は、肉腫、癌腫、リンパ種、神経芽腫、黒色腫、骨髄腫、ウ イルム腫、白血病および腺癌である。

この発明のポリマー複合体の溶解度が改善され、毒性が低下していることは、こ れら複合体が静注または注入に好適であることを意味する。投与量は、咀者の年 令、体重および体調に応じて異なる。その投与量は、体重１ｋｇあたり１ｍｇな いし１ｇであり、好ましくは体重１ｋｇあたり４ないし８００ｍｇである。典型 的な製剤は、０．５．１５．１０．２０．２５または５０ｍｇの活性パクリタキ セル／バクリタキセル誘導体に相当する量のポリマー結合型バクリタキセル／ポ リマー結合型パクリタキセル誘導体を含む。

このポリマー複合体は、薬理学的組成物として、薬理学的に許容し得る担体また は希釈液とともに製剤化してもよい。適切ないかなる担体または希釈液も使用す ることができる。静注または注入用の溶液は、担体もしくは希釈液として、例え ば滅菌水を含んでいてもよい、または好ましくは、これら溶液は、滅菌、水溶性 もしくは等張の生理食塩水の形態をとっていてもよい。

以下の実施例によってこの発明を詳述する。

実施例１ １−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、１（メタクリロイル−グ リシル−フェニルアラニル−ロイシル−グリシル）アミノ−２−ヒドロキシプロ パンおよび２′　（メタクリロイルーグリンルーフェニルアラニルーロインルー グリシル）パクリタキセルのコポリマー １−メタクリロイル−アミノ−２−ヒドロキシプロパンとＮ−（メチレンカルボ ニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　４−二トロフェノキン）メタクリルアミドのコ ポリマーは、［ｊＫｏｐｅｃｅｋ　ｅｔ　！１．．　Ｍ＊に＋ｏｓｏｌ　Ｃｈｅ １１１７７、ｐ、２ｇ３３　（１９７６）　Ｊに従って製造されたものであるが 、無水ジメチルホルムアミド１５ｍ！中にこのコポリマー１．４ｇを含む溶液に パクリタキセル１００ｍｇおよびジメチルアミノピリジン１５ｍｇを添加した。

この黄色溶液を、無水条件下で室温にて８時間撹拌した。次いで、２−ヒドロキ シプロピルアミン（０，２ｒｒ＋１）を反応フラスコに滴下してから、全体を３ ０分間撹拌した。

反応溶液をＱ、３ｍｇの氷酢酸で停止し、真空下で少量にまで濃縮し、次いで、 ２００ｍ１のアセトン中に注いだ。

３０分間撹拌した後、沈澱物を濾過してアセトンで洗浄し、標題の化合物１．２ ５ｇを得た。

パクリタキセル含量は４．５％であった（酵素的加水分解およびＨＰＬＣ分析に よって評価）。

未反応のパクリタキセルをアセトン溶液から回収した。

実施例２ ２′　（Ｎ−トリチル−フェニルアラニル−ロイシル−グリシル）バクリタキセ ル アセトニトリル１６ｍ１中にパクリタキセル１７０ｍｇを含む溶液に、ジメチル アミノ−ピリジン２４ｍｇおよびＮ−トリチルーフェニルアラニルーロインルー グリシン　４−ニトロフェニルエステル１５０ｍｇを添加した。

この黄色溶液を室温で２０時間撹拌し、次いで真空下で蒸発乾固した。残渣を、 溶離液としてエチルアセテート／ヘキサン（３５：２５）を使ってシリカゲル上 でクロマトグラフィーにかけ、標題の化合物３８０ｍｇを得た。

’　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒ（４００Ｍ　Ｈｚ　、ＣＤ　Ｃｌ　３　）　’δ０．８２　 （ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ，δ−Ｌｅｕ）０．８５　（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、 ３Ｈ，δ−Ｌｅｕ）１．１５　（ｓ、３Ｈ，１６） １．２６　（ｓ、３Ｈ，１７） １．２−１．６　（ｍ、３Ｈ９β＋β＋７−Ｌｅｕ）１．６９　（ｓ、３８．１ ９） １．８５　（ｓ、ＩＨ，０Ｈ−１） １．８９　（ｍ、ＩＨ，６β） １．９６　（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、３Ｈ，１８）２．１４　（ｄｄ、Ｊ＝５．９ Ｈｚ、Ｊ＝１３．５Ｈｚ、ＩＨ。

β−Ｐｈｅ） ２　、　２４　（ｓ　、３　Ｈ、ＣＨ３ＣＯ−１０）２　、　２〜２　、　７　 （ｍ　、５　Ｈ、ＣＨ２１４＋　ＯＨ７＋　６　ａ　＋βＰｈｅ＋Ｎ）（−Ｐｈ ｅ） ２　、　４７　（ｓ　、３　Ｈ、ＣＨ３ＣＯ４）３．５０　（ｍ、ＩＨ，ａ−Ｐ ｈｅ） ３．７４　（ｄｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、Ｊ＝１８．２Ｈｚ、ＩＨ。

α−Ｇｌｙ） ３、　８０　（ｍ、ＩＨ，ａ−Ｌｅｕ）３．８３　（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＩＨ ，３）４．１７　（ｄｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｊ＝１８．２Ｈｚ、ＩＨ。

α’　−Ｇｌｙ） ４．２２．４．３３　（２つのｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ。

ＣＨ２−２０） ４、　４６　（ｍ、ＩＨ，７） ４．９７　（ｄｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、Ｊ＝９．９Ｈｚ、ＩＨ，５Ｅ５．４４　（ ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、ＬＨ，２’　）５．７１　（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＩＨ， ２）５．９７　（ｄｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＬＨ。

ＮＨ−Ｇｌｙ） ６．０７　（ｄｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、ＬＨ。

３′　） ６．２〜６．３　（ｍ、２ｔ（、１３＋１０）６．８〜９．２　（ｍ、３０Ｈ， ６−Ｐｈ）６．９５　（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、ＬＨｌＮＨ−Ｌｅｕ）８．００　 （ｄ、Ｊ−９，４Ｈｚ、ＬＨ，ＮＨ−４’　）実施例３ ２′　（フェニルアラニル−ロイシル−グリシル）パクリタキセル 化合物２’　（Ｎ−Ｔｒｉｔ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ）パクリタキセル（２５ ０ｍｇ）を、氷酢酸（２２ｍｌ）と水（６ｍｇ）との混合物に溶解し、全体を室 温で１時間撹拌した。

溶媒を真空中で蒸発乾固し、残渣をジエチルエーテル／ヘキサン（１：　１）と ともに３０分間撹拌し、濾過して、標題の化合物１６０ｍｇを得た。

１÷　。

ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚｌ１７１．Ｍ＋Ｈ，１１１２゜Ｍ−Ｃ！（３ＣＯＯＨ＋２ Ｈ；１０５１．１０２４．９１１゜６０３．５６９，５０９ ’　ＨＮ　Ｍ　Ｒ（４００Ｍ　Ｈｚ　、ＣＤ　ＣＩ　３　）：δ０．８８　（ｄ 、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ，δＬｅｕ）０．９２　（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ， δ’　Ｌｅｕ）１．１３　（ｓ、３Ｈ，１６） １．１６　（ｓ、３Ｈ，１７） １．４〜２．Ｏ（ｍ、４Ｈ，β＋β’　＋７Ｌｅｕ−ｉ−６β）１．６９　（ｓ 、３８．１９） １、　９１　（ｄ、Ｊ＝１．　２Ｈｚ、３８．　１８）２．　１６　（ｄｄ、Ｊ ＝６．　０Ｈｚ、Ｊ＝１３．　８Ｈｚ、ＬＨ。

２．２３　（ｓ＝　３Ｈ，ＣＯＣＨ３１０）２　４〜２．６　（ｍ、３Ｈ，６ａ ＋１４　＋βＰｈｅ）２　、　５３　（ｓ　、３　Ｈ、ＣＯＣＨ３−４）２、　 ９０　（ｄｄ、Ｊ＝４．　１Ｈｚ、Ｊ＝１３．　５Ｈｚ、ＩＨ１β’　−Ｐｈｅ ） ３、　４９　（ｄｄ、Ｊ＝４．　１Ｈｚ、Ｊ＝９．　１Ｈｚ、ＬＨ。

α　Ｐｈｅ） ３、　８２　（ｄ、Ｊ−７，３Ｈｚ、ＩＨ，３）３、　９〜４．　１　（ｍ、２ Ｈ，ａ＋ａ’　Ｇ　ｌ　ｙ）４．２２．４．３３　（２−）のｄ、Ｊ＝８．７Ｈ ｚ、２Ｈ。

ＣＨ２−２０） ４、　２７　（ｍ、１．Ｈ，ａ−Ｌｅｕ）４、　４４　（ｄｄ、Ｊ＝６．　４Ｈ ｚ、Ｊ＝１０．　８Ｈｚ、７）４、　９８　（ｄｄ、Ｊ＝２．　４Ｈｚ、Ｊ＝９ ．　７Ｈｚ、５）５、　６１　（ｄ、Ｊ＝３．　２Ｈｚ、ＩＨ，２’　）５、　 ７０　（ｄ、Ｊ＝７．　３Ｈｚ、ＬＨ，２）６、　１２　（ｄｄ、Ｊ＝３．　２ Ｈｚ　、　Ｊ＝９．　４Ｈｚ、ＬＨ。

３′　） ６、　２１　（ｍ、ＬＨ，１３） ６、　２８　（ｓ、ＬＨ，１０） ６、　８〜８．　２　（ｍ、２１Ｈ，４−Ｐｈ＋ＮＨＬｅｕ）７、　８７　（ｄ 、Ｊ＝９．　４Ｈｚ、ＩＨ，ＮＨ−４’　）実施例４ １−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、１（メタクリロイル−グ リシル）アミノ−２−ヒドロキシプロパンおよび２°　（メタクリロイル−グリ シル−フェニルアラニル−ロイシル−グリシル）パクリタキセルのコポリマー１ −メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンとＮ−（メチレンカルボニル −４−二トロフエノキシ）メタクリルアミドのコポリマーは、ｒＰ、Ｒｅ１ｉ＋ ｎｏｙｘ　ｅｔ　＋１．、　Ｍｔｋ＋ｏｍｏｌＣｈｅｉ、１７８．　ｐ、２１５ ９−２１６８　Ｊに従って製造されたものであるが、無水ジメチルホルムアミド １０ｍ１中にこのコポリマー１ｇを含む溶液に、２’　Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ −パクリタキセル１００ｍｇおよびジメチルアミノピリジン１０ｍｇを添加した 。

この黄色溶液を、無水条件下で室温にて２時間撹拌した。次いで、２−ヒドロキ シプロピルアミン（０，１５ｍ１＋）を反応溶液に添加してから、全体を３０分 間撹拌した。反応溶液をＱ、２ｍｌの氷酢酸で停止し、真空下で少量にまで濃縮 し、次いで、２００＋ｎ＋ｌのアセトン中に注いだ。

混合物を１時間撹拌した後、沈澱物を濾過してアセトンで洗浄し、標題の化合物 ９６　Ｑｍｇを得た。

パクリタキセル含量は６％であった（酵素的加水分解およびＨＰＬＣ分析によっ て評価）。

実施例５ １−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、１（メタクリロイルーグ リンル）アミノ−２−ヒドロキシプロパンおよび２′　（メタクリロイルーグリ ンル）パクリタキセルのコポ無水ジメチルホルムアミド１５ｍ１中に１−メタク リロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンとＮ−（メチレン−カルボニル−４− ニトロフェノキシ）メタクリルアミドのコポリマー１．６ｇを含む溶液に、パク リタキセル１００ｍｇおよびジメチルアミノ−ピリジン２０ｍｇを添加した。こ の黄色溶液を、室温にて２０時間撹拌し、次いで２−ヒドロキシプロピルアミン （０，２ｍｌ　）を添加してから、全体を３０分間撹拌した。

この反応溶液をＱ、３ｍｌの氷酢酸で停止し、真空下で少量にまで濃縮し、次い で、２００ｍ１のアセトン中に注いだ。この混合物を１時間撹拌し、沈澱物を濾 過してアセトンで洗浄し、標題の化合物１４４０ｍｇを得た。

パクリタキセル含量は２．７５％Ｗ／Ｗ％であった。

実施例６ １−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、１　（メタクリロイル− グリシル−フェニルアラニル−ロイシル−グリシル）アミノ−２−ヒドロキシプ ロパンおよび２′　（メタクリロイル−グリシル−フェニルアラニル−ロイフル ーグリンルーβアラニル）パクリタキセルのコポリマー無水ジメチル−ホルムア ミド６ｍｌ中に１−メタクリルアミノ−２−ヒドロキシプロパンとＮ−（メチレ ンカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−４−ニドｏ−フェノキシ）メタクリル アミドのコポリマー６２０ｍｇを含む溶液に、ｒ　Ｎ、　Ｆ、　Ｍ＋ｇ＋ｉｅｌ 　ｔｌ、、１．　Ｎｔｌ、Ｐ＋ｏｄａｅｌ＋　５１．２９８−３０６．　１９８ ｊＪに従って製造した２′−（βアラニル）パクリタキセル６２ｍｇおよびジメ チルアミノピリジン１０ｍｇを添加した。この黄色溶液を、無水条件下で室温に て５時間撹拌した。

次いで、２−ヒドロキシプロピルアミン（０，１ｍ／）を添加してから、全体を ３０分間撹拌した。

この反応溶液を０．１５ｍ１の氷酢酸で停止し、真空下で少量にまで濃縮し、１ ５０ｍ１のアセトン中に注いだ。この混合物を１時間撹拌し、沈澱物を濾過して アセトンで洗浄し、標題の化合物５．８５ｍｇを得た。

バクリタキセル含量は４％Ｗ　／　Ｗ％であった。

実施例７ ２′、７−ジ（カルボベンジルオキシ−β−アラニル）パクリタキセル アセトニトリル１５ｎｌ中にバクリタキセル２００ｍｇを含む溶液に、Ｎ、Ｎ’ −ジシクロへキシルカルボジイミド４００ｍｇ１カルボベンジルオキシ−β−ア ラニン２００ｍｇおよびジメチルアミノ−ピリジン６０ｍｇを添加した。この反 応混合物を２０時間撹拌し、沈澱物を濾過して、溶媒を真空下で蒸発乾固した。

残渣を、溶媒としてエチルアセテート／ヘキサン（１：　１）を使ってシリカゲ ルのクロマトグラフィーにかけたところ、標題の化合物３００ｍｇを得た。

コ÷ ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ１２６４．Ｍ＋Ｍ　、１２０４゜１１３０．１０７０ 実施例８ ７−（カルボベンジルオキシ−βアラニル）パクリタキセルメタノールＱＱｍｆ 中に２′、７−ジ（カルボベンジルオキシ−β−アラニル）パクリタキセル１７ １ｍｇを含む溶液に、重炭酸ナトリウムａｏｍｇおよび水７ｍＡを添加した。こ の反応混合物を室温で３時間撹拌した。

メタノールを蒸発させ、生成物をエチルアセテートで抽出した。

この溶媒を真空下で蒸発乾固したところ、標題の化合物１３４ｍｇを得た。

実施例９ ７−（βアラニル）パクリタキセル メタノール２０ｍ１および蟻酸１３ｍ１中に７−（カルボベンジルオキシ−βア ラニル）パクリタキセル１３５ｍｇを含む溶液に、５％Ｐｄ／Ｃ２００ｍｇを添 加した。この反応混合物を室温で６時間撹拌した。触媒を濾過し、メタノールで 洗浄して、溶媒を真空下で蒸発乾固した。残渣をメタノール８ｍｌにｉｔ［Ｌ、 ジエチルエーテル１５０ｍ１で沈澱させたところ、標題の化合物８５ｍｇを得た 。

＋ ＦＡＲ−ＭＳ＋Ｍ／ｚ９２５．Ｍ＋Ｈ１；９４７゜Ｍ＋Ｎａ”　’ＨＮＭＲ（４ ００ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）：δ１．７９　（ｓ、３Ｈ，ＣＨ３１９） １．８５　（ｓ、３Ｈ，ＣＨ３１８） ２．１７（ｓ、３Ｈ，ＣＨ３Ｃｏ−１０）２．２〜２．６　（ｍ、６Ｈ，ＣＨ２ −１４＋Ｃ）１２−６＋０ＣＯＣＨＣＨＮＨ２） ２□２ ２．４２　（ｓ、３Ｈ，ＣＨ３Ｃｏ　４）３．０−３．２　（ｍ、２Ｈ９ＯＣＯ ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）３．９０　（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、ＩＨ，３）４．１８， ４．３１　（２つのｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ。

ＣＨ２−２０） ４．８０　（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、ＩＨ，２’　）４．９１　（ｄ、Ｊ＝８．５ Ｈｚ、ＩＨ，５）５、　６２　（ｄｄ、Ｊ＝１０．　２Ｈｚ、Ｊ＝７．　０Ｈｚ 、ＬＨ。

５、　６６　（ｄ、Ｊ＝６．　８Ｈｚ、ＩＨ，２）５、　８１　（ｄｄ、Ｊ＝２ ．　９Ｈｚ、Ｊ＝９．　１Ｈｚ、ＩＨ。

３′　） ６、　１７　（ｍ、ＬＨ，１３） ６、　１９　（ｓ、ＬＨ，１０） ７、　３〜８．　２　（ｍ、１６Ｈ，ＮＨ−４’　＋３−Ｐｈ）実施例１０ １−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、１−（メタクリロイルー グリンルーフェニルアラニルーロイシルーグリシル）アミノ−２−ヒドロキシプ ロパンおよび７−（メタクリロイル−グリシル−フェニルアラニル−ロインルー グリシル−βアラニル）パクリタキセルのコポリマー無水ジメチルホルムアミド １３ｍ１中に１−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンとＮ−（メチ レンカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−４二ｈｏフエノキン）メタクリルア ミドのコポリマー１５００ｍｇを含む溶液に、７−（βアラニル）パクリタキセ ル１３５ｍｇおよびジメチルアミノピリジ７２０ｍｇを添加した。

黄色溶液を、室温で無水条件下にて５時間撹拌した。

次いで、２−ヒドロキシプロピルアミン（０，２ｍＡ’）を添加し、全体を３０ 分間撹拌した。

反応溶液を氷酢酸０．３ｍｌで停止し、真空下で少量にまで濃縮して、アセトン ２５０ｍｊ中に注いだ。この混合物を１時間撹拌し、沈澱物を濾過してアセトン で洗浄したところ、標題の化合物１５２０ｍｇを得た。

バクリタキセル含量は、７．８％Ｗ　／　Ｗ％であった。

ＰＣＴ／Ｅρ　９３１０１４３３ フロントページの続き （７２）発明者　ペセンテイ、エンリコイタリー国、２００９３・コロニョ・モ ンツエーセ（ミラン）、ビアレ・ビスコンティ、（７２）発明者　スアラト、ア ジト二ノイタリー国、２０１５８・ミラン、ビア・デリイ・インブリア一二、３ ９ （７２）発明者　ビアソリ、ジョバンニイタリー国、２１０４６・ガビラテ（バ レセ）、ビア・スカラリ一二、３１

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．９０ないし９９．９ｍｏｌ％の下式で示される構成単位、▲数式、化学式、 表等があります▼； ０．１ないし５ｍｏｌ％の下式で示される構成単位、及び▲数式、化学式、表等 があります▼ （式中、Ｒ１およびＲ２の一方が下式のコポリマー残基であって、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 他方が水素原子である）、 ０ないし９．９ｍｏｌ％の下式で示される構成単位▲数式、化学式、表等があり ます▼ （式中、Ｒはフェニルまたはｔ−ブトキシ基であり、Ｒ３はＨまたはアセチル基 であり、同一であっても異なってもよいＡおよびＡ１は化学的、単結合、βＡｌ ａ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａ ｌａ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ ｌｙ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａ ｌａ、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ ｌｙ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−βＡｌａ、 Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−βＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡ ｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ａｌａ−βＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｐｈｅ −βＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、 Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＬｅｕβＡｌａ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈｅ −Ｔｙｒ−Ａｌａ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｐ ｈｅ−Ｇｌｙ−βＡｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−βＡｌａまたはＧ ｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−βＡｌａから選ばれるアミノ酸残基ま たはペプチドスペーサーを示す）から本質的になるポリマー複合体。
2. ２．Ｒがフェニル基を示し、Ｒ３がアセチル基であって、ＡがＰｈｅ−Ｌｅｕ− ＧｌｙまたはＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−βＡｌａ残基である、請求の範囲第１項 に記載のポリマー複合体。
3. ３．１−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン、（メタクリロイルグ リシル−フェニルアラニルロイシルグリシル）３−アミノ−２ヒドロキシプロパ ンおよび２′−（メタクリロイルグリシルフェニルアラニルロイシルグリシル− βアラニル）パクリタキセルのコポリマーである、請求の範囲第１または２項に 記載のポリマー複合体。
4. ４．下式ＩＩの化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）（式中、Ａ２およびＡ３の一方は化 学結合であり、他方はＡであって、Ａ、ＲおよびＲ３は請求の範囲第１項に記載 の通り）と、 ９０ないし９９．９ｍｏｌ％の下式で示される構成単位▲数式、化学式、表等が あります▼ および１０ないし０．１ｍｏｌ％の下式で示される構成単位▲数式、化学式、表 等があります▼ （式中、Ａ１は請求の範囲第１項に記載の通り）から本質的になる活性型ポリマ ーとを反応させること、次いで、得られたポリマー複合体を２−ヒドロキシプロ ピルアミンで処理することを含む、請求の範囲第１項に記載のポリマー複合体の 製造方法。
5. ５．上記の反応が、無水極性溶媒中で有機または無機塩基の存在下１５ないし４ ０℃にて１ないし２４時間行われる、請求の範囲第４項に記載の方法。
6. ６．Ａ２が、Ａについて請求の範囲第１項に記載したようなジ、トリまたはテト ラペプチドスペーサーである、請求の範囲第４項に記載の式ＩＩで示される化合 物。
7. ７．触媒の添加の有無にかかわらず、縮合剤の存在下または活性型エステル類を 使って、パクリタキセルまたはパクリタキセル類似体と所望の保護アミノ酸また はペプチドとを反応させること、次いで、保護基を除去することを含む、請求の 範囲第６項に記載の式ＩＩで示される化合物の製造方法。
8. ８．Ａ３が、Ａについて請求の範囲第１項に記載したようなβアラニン、または ジ、トリもしくはテトラペプチドスペーサーである、請求の範囲第４項に記載の 式１１で示される化合物。
9. ９．（ｉ）パクリタキセルの２′−ヒドロキシ基を保護もしくはブロッキングし 、７位のヒドロキシルをエステル化し、次いで、２′保護もしくはブロッキング 基を除去すること、または（ｉｉ）パクリタキセルを２〜３ｍｏｌの所望のＮ− 保護アミノ酸と反応させて２′，７−二置換型タキソールを生成させ、２′位の アミノ酸を開製し、次いで７位のアミノ酸を脱保護することを含む、請求の範囲 第８項に記載の式ＩＩで示される化合物の製造方法。
10. １０．有効成分として、請求の範囲第１項、６項または８項のいずれか１項に記 載のポリマー複合体、および薬学的に許容し得る希釈剤または担体を含む医薬組 成物。