DE69118826T2 - Propenamidderivate, deren Polymere, Copolymere und deren Verwendung - Google Patents

Propenamidderivate, deren Polymere, Copolymere und deren Verwendung

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Description

    Hintergrund der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Propenamidderivat- Monomere mit einem Tripeptid, Arg-Gly-Asp, als wesentlicher Einheit, Polymere, Copolymere und Salze davon, wie auch auf eine zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion von tierischen Zellen und auf eine Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation und/oder Adhäsion von Blutplättchen. Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf vernetzte Polymere und vernetzte Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit einem Tripeptid, Arg- Gly-Asp, als wesentlicher Einheit und Salze davon, wie auch auf ein Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen.
  • Fibronectin ist ein Protein, das bei der extrazellulären Zellsubstratadhäsion und wahrscheinlich bei der Koagulation von Blutplättchen und der Krebsmetastasierung eine Rolle spielt. Diese Wechselwirkungen werden durch eine Reihe von Rezeptoren, die im Zelloberflächenbereich vorhanden sind, vermittelt; es ist bestätigt, daß diese Rezeptoren spezifisch die Aminosäuresequenz Arg-Gly-Asp des Fibronectins erkennen können, obwohl Fibronectin ein Makromolekül mit einem Molekulargewicht von ungefähr 250000 ist; es ist berichtet worden, daß die Sequenz eine wichtige Rolle bei der Wechselwirkung zwischen den Rezeptoren und Fibronectin spielt (Nature, 1984, 309, S. 30). Seit dieser Zeit sind viele Studien durchgeführt worden, in denen ein Oligopeptid oder Polypeptid mit der Aminosäuresequenz Arg- Gly-Asp verwendet wurde.
  • Es ist über verschiedene Studien berichtet worden, beispielsweise über ein Verfahren zum Hemmen der Koagulation von Blutplättchen unter Verwendung von verschiedenen linearen und zyklischen Oligopeptiden mit einer Arg-Gly-Asp-Sequenz (Polymer Prepints, Japan, 1989, 38, S. 3149; japanische ungeprüfte Patentveröffentlichung (nachstehend als "J.P. KOKAI" bezeichnet) Nr. Hei 2-174797), ein Verfahren, in dem ein Peptid mit einer Arg-Gly-Asp-Sequenz als Zellbewegungs-hemmendes Agens verwendet wird (J.P. KOKAI Nr. Hei 2-4716) und ein Verfahren unter Verwendung einer PMMA-Schicht als zelladhäsive Membran, auf der Arg-Gly-Asp-Sequenzen immobilisiert sind (Polymer Preprints, Japan, 1988, 37, S. 705). Weiterhin offenbaren J.P. KOKAI Nr. Hei-309682 und Hei 1-305960 ein Verfahren, welches Peptide mit Arg-Gly-Asp-Sequenzen als wesentliche Struktureinheiten umfaßt, die kovalent an ein Polymer gebunden sind, und das erzeugte Produkt wird als Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen oder für biologische, künstliche Verbundorgane verwendet; und J.P. KOKAI Nr. Sho 64-6217 offenbart ein Verfahren, in dem ein Polypeptid mit Arg-Gly-Asp-Ser-Sequenzen als Plättchen- Schutzagens für dem Körper entnommenes Blut verwendet wird. Ferner ist ein Verfahren bekannt, welches das Hemmen der Metastasierung von Krebs unter Verwendung eines Oligopeptids mit Arg-Gly-Asp-Sequenzen oder eines Polypeptids mit dieser Sequenz als Wiederholungseinheiten umfaßt (Int. J. Biol. Macromol., 1989, 11, S. 23; ibid, 1989, 11, S. 226; Jpn. J. Cancer Res., 1989, 60, S. 722).
  • WO-A-91/08242 (deren Inhalt als Stand der Technik gemäß Artikel 54(3) EPÜ anzusehen ist) offenbart bioaktive Copolymere, die durch radiochemisches, chemisches oder photochemisches Behandeln mindestens einer Verbindung A, ausgewählt aus einem Protein, einem Peptid, einem Protein- oder Peptidderivat, welches aus dem Tripeptid Arg-Gly-Asp bestehen oder dieses umfassen kann, und eines synthetischen oder natürlichen Materials B, wie ein Polyester, ein Polyurethan, Cellulose, Agarose etc. gleichzeitig in der Gegenwart eines oder mehrerer Vinylmonomere, mindestens eines Homopolymerisationsinhibitors und eines Vernetzungsagens hergestellt werden, um die Vinylketteneinheit auf A und B aufzupolymerisieren und eine kovalente Verbindung zwischen ihnen zu bilden.
  • EP-A-387975 offenbart ein Zellkultursubstrat, welches eine auf Temperatur reagierende Polymerverbindung, wie Poly-N- substituierte Acrylamidderivate, Poly-N-substituierte Methacrylamidderivate, Polyvinylmethylether etc., und Substanzen, die wirksam Zellfunktionen kontrollieren, wie Collagen, Fibronectin etc. umfaßt. Die Polymerverbindung und die Substanz, die wirksam Zellfunktionen kontrolliert, werden als homogene Mischung auf die Oberfläche eines Trägermaterials geschichtet.
  • Ein Polymer besitzt gewöhnlich verschiedene Eigenschaften und Funktionen, und daher sind Wechselwirkungen zwischen dem Polymer und lebender Materie wesentlich unterschiedlich von denjenigen zwischen einer Substanz mit niedrigem Molekulargewicht und einer lebenden Materie. Es sind viele Studien durchgeführt worden, um ein Mittel mit niedrigem Molekulargewicht oder ein biologisch aktives Peptid an ein Polymer zu binden und Wechselwirkungen zwischen dem Mittel oder Peptid und Zellen oder das Verhalten des Mittels oder des Peptids in lebender Materie zu kontrollieren. Solche Polymerapplikationen sind weit verbreitet auf dem Gebiet der Lebenswissenschaften versucht worden, wie medizinische Polymere, Polymerarzneimittel, Materialien für die Diagnose, Bioreaktoren, Bioaffinitätsmaterialien und ähnliches. Solche Polymere und deren Verwendung sind genau beschrieben von K. Takemoto et al. in "Polymers and medical treatment", veröffentlicht durch Mita Publishing, von I. Senhata in "Biotechnology Series, Immobilized Enzymes", veröffentlicht durch Kodansha und von M. Yamazaki et al. in "Affinity Chromatography", veröffentlicht durch Kodansha.
  • Propenamidderivate, die ausgehend von Propensäurederivaten hergestellt werden, besitzen Vinylqruppen und polymerisieren leicht oder copolymerisieren mit verschiedenen anionischen oder kationischen Vinylmonomeren, wodurch verschiedene Polymere oder Copolymere hergestellt werden können, die für viele Zwecke verwendbar sind. Es ist berichtet worden, daß ein Oligopeptid mit Arg-Gly-Asp als wesentlicher Einheit in ein wasserunlösliches Vinylpolymer eingebracht wurde. Jedoch ist niemals ein Propenamidderivat-Monomer, welches ein Oligopeptid mit Arg-Gly-Asp als wesentlicher Einheit in der Seitenkette besitzt, ein wasserlösliches Polymer davon, ein wasserlösliches anionisches oder kationisches Copolymer davon und ein Hydrogel davon bekannt geworden, von denen erwartet wird, daß sie eine erhöhte Bindungsfähigkeit an einen Rezeptor und eine erhöhte Stabilität im Blut aufweisen.
    • Zusammenfassung der Erfindung
  • Demnach ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein neues Propenamidderivat-Monomer mit einem Tripeptid, Arg-Gly-Asp, als wesentlicher Einheit, ein Polymer davon, ein Copolymer davon mit einem anionischen oder kationischen Monomer und ein Salz davon bereitzustellen.
  • Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion von tierischen Zellen bereitzustellen, welche das Propenamidderivat-Monomer, das Polymer, das Copolymer oder das Salz als wirksamen Bestandteil umfaßt.
  • Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation und/oder Adhäsion von Blutplättchen bereitzustellen, welche das Propenamidderivat- Monomer, das Polmer, das Copolymer oder das Salz als wirksamen Bestandteil umfaßt.
  • Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist, ein vernetztes Polymer des Propenamidderivat-Monomers, ein vernetztes Copolymer des Propenamidderivat-Monomers und eines anionischen oder kationischen Monomers und ein Salz davon bereitzustellen.
  • Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist, ein Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen bereitzustellen, welches das vernetzte Polymer, das vernetzte Copolymer oder das Salz davon als wirksamen Bestandteil umfaßt.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Propenamidderivat-Monomer der folgenden allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die folgenden allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentlicher Struktureinheit in der Seitenkette oder Salze davon bereit:
    • Formel (I):
  • R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
    • Formel (II-a):
  • -[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-(Y])n -[Z]-[H]; oder
    • Formel (II-b):
  • [H]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]--
  • worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet,
  • X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus zwei oder mehr Aminosäuren, bedeuten;
  • Z -O- oder -NH- bedeutet;
  • einer der Reste R&sup4; und R&sup5; ein Wasserstoffatom bedeutet und der andere eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Halogenatome, Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppen, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
  • n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist; und
  • [ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Polymer des Propenderivat- Monomers der allgemeinen Formel (I) bereit.
  • Die vorliegende Erfindung stellt auch ein Copolymer des Propenamidderivat-Monomers der allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid; dargestellt durch die allgemeine Formel (II-a) oder (II-b), als wesentlicher Struktureinheit in der Seitenkettte mit einem anionischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (III) und Salze davon bereit:
    • Formel (III):
  • H&sub2;C=CR&sup6;-[CO]-[W]-R&sup7;
  • worin R&sup6; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuet; W -O- oder -NH- bedeutet; und R&sup7; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Carboxyl-, Sulfo- und phosphorhaltigen Gruppen besitzen und weitere Substituenten besitzen können. [ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann.
  • Beispiele für Substituenten an dem Alkylrest, der durch R&sup6; dargestellt ist, oder an dem Alkyl- und Arylrest, der durch R&sup7; - dargestellt ist, umfassen ein Halogenatom, Carbonyl-, Carboxyl- Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- und Cyanogruppen und ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindungen, wobei zwei oder mehrere davon in derselben Kette vorhanden sein können. Weiterhin können eine oder mehrere Bindungen, wie eine Amidbindung, Esterbindung, Etherbindung, Harnstoffbindung, Carbamatesterbindung und Carbonatesterbindung, in derselben Kette vorhanden sein. Ferner kann ein Heteroring in derselben Kette vorhanden sein.
  • Die vorliegende Erfindung stellt auch ein Copolymer des Propenamidderivat-Monomers der allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die allgemeine Formel (II-a) oder (II-b), als wesentlicher Struktureinheit in der Seitenkette mit einem kationischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (IV) und Salze davon bereit:
    • Formel (IV):
  • H&sub2;C=CR&sup8;-[CO]-[W)-R&sup9;
  • worin R&sup8; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylgruppe durch ein oder mehrere Halogenatome, Carbonyl-, Amino-, Hydroxyl-, Nitro- und Cyanogruppen substituiert sein kann;
  • W -O- oder -NH- bedeutet; und R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amino-, Imino-, Nitrilo-, Amidino-, quartären Ammonium- und Ammoniumgruppen besitzen und weitere Substituenten besitzen können.
  • [ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann.
  • Beispiele für Substituenten an dem Alkylrest, der durch R&sup8; dargestellt ist, oder an dem Alkyl- und Arylrest, der durch R&sup9; dargestellt ist, umfassen ein Halogenatom, quartäre Ammonium-, Carbonyl-, Amino-, Imino-, Nitrilo-, Amidino-, Hydroxyl-, Aryl-,Nitro- und Cyanogruppen, und ungesättigte Doppel- und Dreifachbindungen, wobei zwei oder mehrere davon in derselben Kette vorhanden sein können. Weiterhin können eine oder mehrere Bindungen, wie eine Amidbindung, Esterbindung, Etherbindung, Harnstoffbindung, Carbamatesterbindung und Carbonatesterbindung in derselben Kette vorhanden sein. Ferner kann ein Heteroring, wie Pyridin und Imidazol, in derselben Kette vorhanden sein.
  • Die vorliegende Erfindung stellt eine Zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion von tierischen Zellen bereit, welche mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus dem Propenamidderivat-Monomeren, den Polymeren, den Copolymeren oder den Salzen, als wirksamen Bestandteil umfaßt.
  • Die vorliegende Erfindung stellt eine Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation und/oder Adhäsion von Blutplättchen bereit, welche mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Propenamidderivat-Monomeren, den Polymeren, den Copolymeren oder den Salzen, als wirksamen Bestandteil umfaßt.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein vernetztes Polymer des Propenamidderivat-Monomers, ein vernetztes Copolymer des Propenamidderivat-Monomers und des anionischen oder kationischen Monomers und ein Salz davon bereit.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen bereit, welches mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den vernetzten Polymeren, den vernetzten Copolymeren oder den Salzen davon, als wirksamen Bestandteil umfaßt.
    • Genaue Beschreibung der Erfindung (a) Propenamidderivate
  • Beispiele für ein Monomer, welches an das N-Ende des Peptidfragments mit Asp-Gly-Arg als wesentlicher Einheit gebunden werden soll, umfassen Propenamidderivat-Monomere mit α-, β-, γ- oder ω-Aminosäurerest, wie N-Methacryloylglycin, N- Methacryloyl-β-alanin, N-Methacryloylalanin, N-Methacryloyl-γ- aminobuttersäure, N-Methacryloylvalin, N-Methacryloylnorleucin, N-Methacryloylserin, N-Methacryloylthreonin, N- Methacryloylmethionin, N-Methacryloylphenylalanin, N- Methacryloyltyrosin, N-α-Methacryloyltryptophan, N- Methacryloylprolin, N-Methacryloylasparaginsäure, N- Methacryloylasparagin, N-Methacryloylglutaminsäure, N- Methacryloylglutamin, N-α-Methacryloylarginin und N-α- Methacryloylcitrullin.
  • Bevorzugt sind N-Methacryloylglycin, N-Methacryloyl-β-alanin, N-Methacryloylalanin, N-Methacryloyl-β-aminopropionsäure, N- Methacryloyl-γ-aminobuttersäure, N-Methacryloylvalin, N- Methacryloylleucin, N-Methacryloylisoleucin, N- Methacryloylnorvalin und N-Methacryloylnorleucin.
  • Beispiele für ein Monomer, das an das C-Ende des Peptidfragments mit Asp-Gly-Arg als wesentlicher Einheit gebunden werden soll, umfassen Mono-methacrylamide von Alkylendiaminen und Arylendiaminen. Bevorzugt sind Ethylendiamin-mono-methacrylamid, 1,3-Diaminopropan-mono-methacrylamid, 1,4-Diaminobutan-monomethacrylamid und 1,6-Diaminohexan-mono-methacrylamid.
    • (b) Polymere der Propenamidderivate
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Polymer der Propenamidderivat-Monomere oder Salze davon bereit. Das Polymer kann durch radikalische oder ionische Polymerisation der Propenamidderivate oder Salze davon hergestellt werden. Das Polymer hat ein Molekulargewicht von vorzugsweise nicht mehr als 300000, bevorzugter 3000 bis 200000 und ist vorzugsweise bei Raumtemperatur in Wasser löslich.
    • (c) Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit anionischen oder kationischen Monomeren und Salze davon
  • Für die vorliegende Erfindung verwendbare anionische Monomere sind übliche, polymerisierbare Vinylmonomere, jedoch nicht auf spezifische davon beschränkt. Beispiele für anionische Monomere umfassen Vinylmonomere mit einer Carboxyl- oder Sulfonsäuregruppe, wie Acrylsäure, Methacrylsäure, Itaconsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Crotonsäure, 2-Acrylamidoglycolsäure, 2- Methacrylamidoglycolsäure, Styrolsulfonsäure, Vinylsulfonsäure, 2-Acrylamido-2-methylpropansulfonamid und 4-Vinylbenzoesäure; N-Methacryloyl- und N-Acryloylderivate von 5-Aminovaleriansäure, 6-Aminocapronsäure und 12-Aminolaurinsäure.
  • Weitere Beispiele umfassen Vinylmonomere mit Aminosäureresten, wie N-Methacryloylglycin, N-Methacryloyl-β-alanin, N- Methacryloylalanin, N-Methacryloyl-y-aminobuttersäure, N- Methacryloylvalin, N-Methacryloylleucin, N- Methacryloylisoleucin, N-Methacryloylnorvalin, N- Methacryloylnorleucin, N-Methacryloylserin, N-Methacryloylthreonin, N-Methacryloylmethionin, N-Methacryloylphenylalanin, N-Methacryloyltyrosin, N-α-Methacryloyltryptophan, N- Methacryloylprolin, N-Methacryloylhydroxyprolin, N- Methacryloylasparaginsäure, N-Methacryloylasparagin, N- Methacryloylglutaminsäure, N-Methacryloylglutamin, N-α- Methacryloylarginin, N-α-Methacryloylcitrullin, N- Acryloylglycin, N-Acryloyl-β-alanin, N-Acryloylalanin, N- Acryloyl-γ-aminobuttersäure, N-Acryloylvalin, N-Acryloylleucin, N-Acryloylisoleucin, N-Acryloylnorvalin, N-Acryloylnorleucin, N-Acryloylserin, N-Acryloylthreonin, N-Acryloylmethionin, N- Acryloylphenylalanin, N-Acryloyltyrosin, N-α- Acryloyltryptophan, N-Acryloylprolin, N-Acryoylhydroxyprolin, N-Acryloylasparaginsäure, N-Acryloasparagin, N- Acryloylglutaminsäure, N-Acryloylglutamin, N-α-Acryloylarginin und N-α-Acryloylcitrullin.
  • Weitere Beispiele umfassen Vinylmonomere mit einer phosphorhaltigen Gruppe in der Seitenkette, wie Methacryloyloxyethylphosphorsäure, Methacryloyloxyethylphenylphosphorsäure und Methacryloyloxydecanoylphosphorsäure.
  • Bevorzugt sind N-Methacryloylderivate und N-Acryloylderivate von Glycin, β-Alanin, 4-Aminobuttersäure, 5-Aminovaleriansäure, 6-Aminocapronsäure, 12-Aminolaurinsäure, 4-Aminobenzoesäure, Leucin und Glutaminsäure, Acrylsäure, Methacrylsäure, Itaconsäure und Maleinsäure.
  • Für die vorliegende Erfindung verwendbare kationische Monomere sind übliche, polymerisierbare Vinylmonomere, jedoch nicht auf spezifische davon beschränkt. Beispiele für kationische Monomere umfassen Vinylmonomere mit eine quartären Ammoniumgruppe, wie Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid, Sulfotrimethylammonioethylmethacrylat, Chlortrimethylammonioethylmethacrylat, Sulfoethyldimethylammonioethylmethacrylat, Chlorethyldimethylammonioethylmethacrylat, Diallyldimethylammoniumchlorid, Diallyldiethylammoniumchlorid, Chlortrimethylammoniopropylacrylamid, Chlorethyldimethylammoniopropylacrylamid, Trimethylammonioethylacrylamid, Sulfotrimethylammonioethylacrylat, Chlortrimethylammonioethylacrylat, Sulfoethyldimethylammonioethylacrylat, Chlorethyldimethylammonioethylacrylat, Chlortrimethylammoniopropylacrylamid und Chlorethyldimethylammoniopropylacrylamid.
  • Weiterhin können Vinylmonomere mit einem Heteroring in der Seitenkette, wie Vinylpyridine und Vinylimidazole, und Vinylmonomere mit einer Aminogruppe, wie Dimethylaminoethylmethacrylat, Diethylaminoethylmethacrylat, Dimethylaminopropylmethacrylat, Diethylaminopropylmethacrylat, Dimethylaminoethylmethacrylamid und Dimethylaminoethylacrylamid verwendet werden.
  • Bevorzugt sind Methacrylsäurederivate, wie Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid, Chlortrimethylammoniopropylmethacrylamid, Chlortrimethylammonioethylmethacrylat, Dimethylaminoethylmethacrylamid, Dimethylaminopropylmethacrylamid, Dimethylaminoethylmethacrylat und Dimethylaminopropylmethacrylat und Acrylsäurederivate mit ähnlichen Seitenkettengruppen.
  • Die Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit dem anionischen oder kationischen Monomer und Salze davon haben ein Molekulargewicht von vorzugsweise nicht mehr als 300000, bevorzugter 3000 bis 200000 und sind vorzugsweise bei Raumtemperatur in Wasser löslich.
  • Der Gehalt der vom Propenamidderivat-Monomer abgeleiteten Einheit in den Copolymeren ist vorzugsweise 0,1 bis 90 Mol-%, bevorzugter 0,5 bis 60 Mol-%.
    • (d) Vernetzte Polymere der Propenamidderivat-Monomere, vernetzte Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit anionischen oder kationischen Monomeren und Salze davon.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein vernetztes Polymer der vorstehend erwähnten Propenamidderivat-Monomere, ein vernetztes Copolymer der Propenamidderivat-Monomere mit dem anionischen oder kationischen Monomer und Salze davon bereit. Das vernetzte Polymer und das vernetzte Copolymer sind vorzugsweise in der Form eines Hydrogels in einer wäßrigen Lösung.
  • Wenn ein vernetztes Polymer oder Copolymer hergestellt wird, wird ein polyfunktionelles Monomer zusätzlich zu dem Propenamidderivat-Monomer und dem anionischen oder kationischen Monomer zugegeben. Beispiele für das polyfunktionelle Monomer umfassen Dimethacrylate, Diacrylate, Dimethacrylamide und Diacrylamide, wie Triethylenglycoldimethacrylat und Methylenbisacrylamid, solche mit aromatischen Ringen, wie Divinylbenzol und solche mit den zelladhäsiven Fragmenten.
  • Der Gehalt der von dem polyfunktionellen Monomer abgeleiteten Einheit in dem vernetzten Polymer oder dem vernetzten Copolymer ist vorzugsweise 0,1 bis 30 Mol-%, bevorzugter 0,5 bis 20 Mol-%.
  • Der Gehalt der von dem Propenamidderivat-Monomer abgeleiteten Einheit in dem vernetzten Copolymer ist vorzugsweise 0,1 bis 90 Mol-%, bevorzugter 0,5 bis 60 Mol-%. Der Gehalt der von dem polyfunktionellen Monomer abgeleiteten Einheit in dem vernetzten Copolymer ist vorzugsweise 0,1 bis 30 Mol-%, bevorzugter 0,5 bis 20 Mol-%.
  • Ein vernetztes Copolymer in der Form eines Hydrogels mit verschiedenem Wassergehalt oder verschiedener Gelstärke kann durch Verwendung verschiedener Mengen des polyfunktionellen Monomers hergestellt werden.
  • Die Aminosäuren, aus denen sich die erfindungsgemäßen, adhäsiven Peptide zusammensetzen, können vom L- oder D-Typ sein; sie sind jedoch vorzugsweise vom L-Typ.
  • Beispiele für Salze der Propenamidderivat-Monomere, der Polymere der Propenamidderivat-Monomere, der Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit einem anionischen Monomer, der Copolymere der Propenamidderivat-Monomere mit einem kationischen Monomer, der vernetzten Polymere und der vernetzten Copolymere der vorliegenden Erfindung umfassen anorganische Säuresalze, wie Hydrochloride, Sulfate, Nitrate, Phosphate und Borate, und organische Säuresalze, wie Acetate, Trifluoracetate, Trifluormethansulfonate, Lactate und Tartrate.
  • Verfahren zum Synthetisieren dieser Peptide sind nicht beschränkt auf spezifische Verfahren und können Flüssigphase- oder Festphaseverfahren sein und solche, in denen ein automatisches Synthesegerät verwendet wird. Diese Syntheseverfahren sind genau beschrieben in beispielsweise Lectures on Biochemical Experiments, "Chemistry of Proteins IV", S. 207-495, herausgegeben von Biochemical Society of Japan, veröffentlicht durch Tokyo Kagaku Dojin Publishing Company; Lectures on Biochemical Experiments, zweite Reihe, "Chemistry of Proteins (der letzte Band)", herausgegeben von Biochemical Society of Japan, veröffentlicht durch Tokyo Kagaku Dojin Publishing Company; und "Fundamental Knowledge and Experiments of Peptide Synthesis", herausgegeben von Izumiya et al., veröffentlicht durch Maruzen Publishing Company. Alternativ ist es auch möglich, kommerziell erhältliche, synthetische Peptide zu verwenden.
  • Um das Propenamidderivat mit einem zelladhäsiven Peptid zu verknüpfen oder das Propenamidderivat und eine Aminoalkylcarbonsäure mit einem zelladhäsiven Peptid zu verknüpfen, können Amidbindung-erzeugende Verfahren, wie ein Verfahren unter Verwendung eines aktiven Esters, ein Verfahren unter Verwendung gemischter Säureanhydride, ein Azid-Verfahren, ein Säurechlorid-Verfahren, ein Verfahren unter Verwendung eines symmetrischen Säureanhydrids, ein DCC-Verfahren, ein DCC-Additivverfahren oder ein Verfahren unter Verwendung von Carbonyldiimidazol angewendet werden. Die Polymere und die vernetzten Polymere der Propenamidderivate, und die Copolymere und vernetzten Copolymere der Propenamidderivate mit anionischen oder kationischen Monomeren können durch übliche Radikalpolymerisation oder ionische Polymerisation hergestellt werden. Wasserlösliche Polymere können durch Gelpermeationschromatographie oder Dialyse in Fraktionen mit verschiedenen Molkulargewichten aufgetrennt werden.
    • (e) Zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion tierischer Zellen und Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation und/oder Adhäsion von Blutplättchen
  • Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin eine Zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion von tierischen Zellen und eine Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation und/oder Adhäsion von Blutplättchen bereit, welche als wirksamen Bestandteil mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Propenamidderivat-Monomeren, den Polymeren davon, den Copolymeren der Propenamidderivat-Monomere und der anionischen Monomere, den Copolymeren der Propenamid-Monomere und der kationischen Monomere und Salze davon, umfaßt.
  • Die Propenamidderivat-Monomere, die Polymere davon, die Copolymere davon mit anionischen oder kationischen Monomeren oder Salze davon besitzen die Kernsequenz Arg-Gly-Asp eines zelladhäsiven Proteins und sind über die Kernsequenz gemäß einem Mechanismus, der ähnlich zu demjenigen zelladhäsiver Proteine ist, an Zellen angehaftet. Aus diesem Grund dienen sie als Agonisten oder Antagonisten eines zelladhäsiven Proteins, das verschiedene biologische Aktivitäten, wie eine immunregulierende Wirkung, eine Wundheilungswirkung, eine Wirkung zum Hemmen der in Blutgefäßen beobachteten Plättchenkoagulation und eine Nervenkrankheiten heilende Wirkung, ausübt.
  • Folglich kann mindestens eines der Propenamidderivat-Monomere, der Polymere davon, der Copolymere davon mit anionischen oder kationischen Monomeren oder Salze davon zusammen mit gewöhnlich verwendeten, wahlweisen Trägern oder pharmazeutischen Hilfsstoffen in der Form von Wundheilungsmitteln, immunregulatonschen Mitteln oder Plättchenkoagulations- und/oder Adhäsionshemmenden Mitteln an Patienten verabreicht werden. Insbesondere werden die Derivate vorzugsweise als Mittel, die die Adhäsion tierischer Zellen hemmen, oder als Mittel, die die Plättchenkoagulation und/oder -adhäsion hemmen, verwendet. Die Dosis davon variiert in Abhängigkeit von verschiedenen Faktoren, wie den zu behandelnden Zuständen, das Alter und das Gewicht der Patienten, und liegt gewöhnlich im Bereich von 0,2 µg/kg bis 400 mg/kg.
  • Die Derivat-Monomere, die Polymere davon, die Copolymere davon mit anionischen oder kationischen Monomeren oder Salze davon können über verschiedene Wege verabreicht werden, die gewöhnlich für die Verabreichung Peptid-enthaltender Arzneimittel verwendet werden. Beispielsweise werden sie vorzugsweise parenteral, intravenös, intramuskulär und subkutan verabreicht. Für die Herstellung von injizierbaren, pharmazeutischen Zusammensetzungen werden die Derivat-Monomere, die Polymere davon, die Copolymere davon mit anionischen oder kationischen Monomeren oder Salze davon beispielsweise in PBS oder physiologischer Kochsalzlösung gelöst, um injizierbare Lösungen zu erzeugen. Diese pharmazeutischen Präparate können einen gewöhnlich verwendeten Stabilisator, wie Glycin und Albumin, umfassen. Weiterhin können die Derivat-Monomere, die Polymere davon, die Copolymere davon mit anionischen oder kationischen Monomeren oder Salze davon dadurch parenteral verabreicht werden, daß sie in Liposomen eingebettet werden, um Mikrokapseln zu erzeugen, oder daß sie in der Form von Mikrokugeln oder Hydrogel formuliert werden. Wenn sie weiterhin in der Form von beispielsweise Zäpfchen, sublinguale Tabletten und Nasensprays formuliert werden, können sie durch andere Schleimhäute als diejenigen des Verdauungstrakts absorbiert werden.
    • (f) Substrate zum Kultivieren von tierischen Zellen
  • Die vorliegende Erfindung stellt ein Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen bereit, welches als wirksamen Bestandteil mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den vernetzten Polymeren der Propenamidderivat-Monomere, den vernetzten Copolymeren der Derivat-Monomere und der anionischen Monomere, den vernetzten Copolymeren der Derivat-Monomere und der kationischen Monomere und den Salzen davon, umfaßt.
  • Die Verfahren für die Verwendung des Substrats zum Kultivieren von tierischen Zellen durch Kultivieren der tierischen Zellen sind übliche Verfahren, jedoch nicht auf spezifische beschränkt. Beispielsweise kann ein Verfahren zum Kultivieren von tierischen Zellen erwähnt werden, worin die tierischen Zellen in einer Kulturlösung suspendiert werden, welche Kügelchen enthält, an die ein adhäsives Peptid kovalent gebunden worden ist, und die Suspension wird bei einer niedrigen Geschwindigkeit gerührt, um die tierischen Zellen an die Oberfläche der Kügelchen oder Mikroträger anhaften zu lassen, auf denen die Zellen kultiviert werden; ein Verfahren zum Kultivieren von tierischen Zellen, worin die tierischen Zellen in einer Kulturschalen- Rollflasche kultiviert werden, an die ein adhäsives Peptid kovalent gebunden worden ist; ein Verfahren zum Kultivieren von tierischen Zellen, worin eine Kulturlösung durch Hohlfasern zirkuliert wird, an die ein adhäsives Peptid kovalent gebunden worden ist, um die Zellen an die innere Oberfläche der Hohlfasern anhaften zu lassen, auf der die Zellen kultiviert werden; und ein Verfahren zum Kultivieren von tierischen Zellen, worin eine mit Mikroträgern gepackte Sule verwendet wird, an die ein adhäsives Peptid kovalent gebunden worden ist.
  • Das erfindungsgemäße Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen kann für das Kultivieren verschiedener tierischer Zellen, wie Zellen, die von einem Lebewesen und von Hybridomas abstammen, verwendet werden.
  • Die vorliegende Erfindung wird nachstehend genauer mit Bezug auf die folgenden, nicht beschränkenden Arbeitsbeispiele und Herstellungsbeispiele erklärt, jedoch ist die vorliegende Erfindung keineswegs auf diese spezifischen Beispiele beschränkt.
  • In der vorliegenden Beschreibung wird Arg als R, Gly als G, Asp als D, Ser als S und Pro als P bezeichnet. Verwendete Schutzgruppen und Mittel werden wie folgt abgekürzt.
  • Boc :t-Butoxycarbonyl
  • OBzl :Benzylester
  • HOBt :Hydroxybenzotriazol
  • Osu :N-Hydroxysuccinimid
  • ONb :Nitrobenzylester
  • TFA :Trifluoressigsäure
  • DCC :Dicyclohexylcarbodiimid
  • DCurea :Cyclohexylharnstoff
  • Mts :Mesitylensulfonyl
  • DMF :Dimethylformamid
  • 4Abu :4-Aminobuttersäure
    • Herstellungsbeispiel 1
  • Carboxyethylmethacrylacrylamid wurde folgendermaßen durch die Schotten-Baumann-Reaktion hergestellt. 20,9 g (0,2 mol) Methacrylchlorid wurden tropfenweise zu einer Natriumhydroxidlösung von 17,8 g (0,2 mol) Alanin unter Eiskühlung zugegeben, für 4 Stunden gerührt und mit Salzsäure neutralisiert. Die Mischung wurde unter reduziertem Druck konzentriert und präzipitiertes Natriumchlorid durch Futration abgetrennt. Das Konzentrat wurde mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wurde getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert, um Chloroform abzudampfen. Der Rückstand wurde mit Ether gewaschen, um das Herstellungsprodukt 1 als weißes Pulver (17,6 g, Ausbeute: 56%) zu erzeugen.
    • Herstellungsprodukt 1
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-COOH
    • Herstellungsbeispiele 2 bis 8
  • Auf dieselbe Art und Weise wie im Herstellungsbeispiel 1 wurde Acrylsäurechlorid, Methacrylsäurechlorid oder Ethacrylsäurechlorid mit 4-Aminobuttersäure, 5-Aminovaleriansäure, 6- Aminocapronsäure, 12-Aminolaurinsäure, Leucin, Glutamin oder p- Aminobenzoesäure reagierengelassen, um die folgenden Propensäurederivate zu erzeugen.
    • Herstellungsprodukt 2
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-(CH&sub2;)&sub3;-COOH (Ausbeute: 52%)
    • Herstellungsprodukt 3
  • CH&sub2;=CC&sub2;H&sub5;-CO-NH-(CH&sub2;)&sub4;-COOH (Ausbeute: 61%)
    • Herstellungsprodukt 4
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-(CH&sub2;)&sub5;-COOH (Ausbeute: 69%)
    • Herstellungsprodukt 5
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-(CH&sub2;)&sub1;&sub1;-COOH (Ausbeute: 71%)
    • Herstellungsprodukt 6
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-CH(CH&sub2;CH(CH&sub3;)&sub2;)-COOH (Ausbeute: 64%)
    • Herstellungsprodukkt 7
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-CH(C&sub2;H&sub4;CONH&sub2;)-COOH (Ausbeute: 59%)
    • Herstellungsprodukt 8
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-p-C&sub6;H&sub4;-COOH (Ausbeute 68%)
    • Herstellungsprodukt 9
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-CH&sub2;-COOH (Ausbeute: 63%)
    • Herstellungsprodukt 10
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-CH(C&sub2;H&sub4;COOH)-COOH (Ausbeute: 57%)
    • Herstellungsbeispiel 11
  • Aminoethylmethacrylamid wurde folgendermaßen durch die Schotten-Baumann-Reaktion hergestellt. 20,9 g (0,2 mol) Methacrylsaurechlond wurden tropfenweise zu 400 ml einer Chloroformlösung von 120 g (2 mol) Methylendiamin unter Eiskühlung zugegeben und für 4 Stunden gerührt. Die Mischung wurde unter reduziertem Druck konzentriert, und 50 ml einer 5%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung wurden zugegeben. Die Mischung wurde mit 50 ml Chloroform extrahiert. Der Extrakt wurde über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Der Rückstand wurde durch Aluminiumoxid-Säulenchromatographie (Elutionsmittel: Chloroform/Methanol = 7/3) gereinigt, um die gewünschte Verbindung zu erzeugen.
    • Herstellungsprodukt 11
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-NH&sub2;
  • Ausbeute: 14,8 g (57,8%, 0,116 mol)
    • Herstellungsbeispiel 12
  • Das im Herstellungsbeispiel 1 hergestellte Carboxyethylmethacrylamid wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert.
  • Carboxyethylmethacrylamid (2 g) wurde in 20 ml DMF gelöst. Ein Radikalpolymerisationsinitiator V65 (2,2-Azobis(2,4- dimethylvaleronitril)) (10 mg, erhältlich von WAKO PURE CHEMICALS) wurde zugegeben und die Polymerisation bei 65ºC für 4 Stunden unter Stickstoffatmosphäre durchgeführt. Das Polymer wurde durch Ethylacetat präzipitiert und durch Spectrapore 7 (Trennmolekulargewicht: 3000) gegen reines Wasser dialysiert, um Fraktionen niedrigen Molekulargewichts zu entfernen, worauf eine Lyophilisation folgte, um das Herstellungsprodukt 12 (Ausbeute: 1,24 g) zu erzeugen.
  • Das Molekulargewicht wurde bestimmt mittels einer TSK-Gel G3000 SW-Säule (erhältlich von TOSO Co., Ltd.) (mobile Phase: 0,2 M Phosphatpuffer pH 7,4, Fließrate: 1,0 ml/min). PEG-reduziertes Molekulargewicht des Produkts war 30000.
    • Herstellungsbeispiel 13
  • Das im Herstellungsbeispiel 1 hergestellte Carboxyethylmethacrylamid wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert, um ein Hydrogel zu erzeugen.
  • Ein Paar von Silan-behandelten Glasplatten (5 cm x 6 cm x 1 cm) und eine Dichtung wurden bereitgestellt. Carboxyethylmethacrylamid (2 g) und Methylenbisacrylamid (100 mg: 5 Gew.-%) wurden in 12 ml destilliertem Wasser gelöst und durch 1N NAOH auf pH 7,4 eingestellt. Ammoniumpersulfat (10 mg) wurde zugegeben und Stickstoffgas durch die Mischung geleitet, um die darin vorhandene Luft zu entfernen. Die Mischung wurde zwischen die Glasplatten injiziert, die danach versiegelt wurden. Die Polymerisation wurde bei 60ºC für 20 Stunden durchgeführt. Das hergestellte Hydrogel wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, um nicht-reagierte Monomere zu entfernen. Das Gel (Herstellungsprodukt 13) wurde mittels einer Ultraviolettlampe sterilisiert, bevor es für die Kultivierung von tierischen Zellen verwendet wurde.
    • Herstellungsbeispiel 14 Synthese von Trimethylammonioethylmethacrylamid
  • Dimethylethylendiamin (20,2 g, 0,23 mol) wurde in 100 ml Chloroform gelöst. Methacryloylchlorid (24 g, 0,23 mol) wurde unter Eiskühlung tropfenweise zugegeben und für 4 Stunden gerührt, und danach wurde das Chloroform abgedampft. Eine Methanol-Lösung von 0,23 mol Natriumhydroxid wurde zugegeben, gerührt und filtriert. Das Präzipitat wurde durch Futration abgetrennt, und eine Methanol-Lösung (10 ml) von Methyljodid (42,6 g, 0,3 mol) wurde zu dem Filtrat zugegeben und bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Die Mischung wurde unter reduziertem Druck konzentriert und zu einem Chlorid in einer verdünnten Salzsäurelösung umgewandelt. Das Hydrochlond wurde aus Wasser-Methanol umkristallisiert, um Trimethylammonioethylmethacrylamid, Herstellungsprodukt 14 (31, 3 g, Ausbeute: 66%) zu erzeugen.
    • Herstellungsbeispiel 15 Herstellungsprodukt 15
  • BocArg(Mts) (45,6 g, 0,1 mol) wurde in einem Liter DMF gelöst. DCC (20,6 g, 0,1 mol) und HOBt (15 g, 0,11 mol) wurden unter Eiskühlung zugegeben. Das im Herstellungsbeispiel 11 hergestellte Aminoethylmethacrylamid (12,8 g, 0,1 mol) wurde zugegeben und bei 5ºC über Nacht gerührt. DCurea wurde durch Filtration entfernt und die Mischung unter reduziertem Druck konzentriert, um DMF zu entfernen. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst. Die Lösung wurde mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;- Lösung, 1 M Zitronensäurelösung und Wasser gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und bis zur vollständigen Trockenheit eingedampft. Das Produkt wurde in einer 1 M Trifluormethansulfonsäure-Thioanisol-m-Cresol-Lösung in TFA unter Eiskühlung für eine Stunde reagierengelassen und in Ether gegossen. Das ölige Produkt wurde in destilliertem Wasser gelöst, mit Ethylacetat gewaschen, durch eine Anionaustauschharzsäule (Amberlite IRA-400; C1-Typ) geschickt, um es in ein Hydrochlorid umzuwandeln, und lyophilisiert, um das Herstellungsprodukt 15 als weißen Feststoff (14,3 g, Ausbeute: 40%) zu erzeugen.
    • Herstellungsbeispiel 16
  • Das im Herstellungbeispiel 14 hergestellte Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert.
  • Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid (2 g) wurde in 20 ml DMF gelöst. Der Radikalpolymerisationsinitiator V65 (2,2- Azobis(2,4-dimethylvaleronitril)) (10 mg, erhältlich von WAKO PURE CHEMICALS) wurde zugegeben, und die Polymerisation wurde bei 65ºC für 4 Stunden unter Stickstoffatmosphäre durchgeführt.
  • Das Polymer wurde durch Ethylacetat präzipitiert und durch Spectrapore 7 (Trennmolekulargewicht: 3000) gegen reines Wasser dialysiert, um Fraktionen niedrigen Molekulargewichts zu entfernen, worauf eine Lyophilisation folgte, um das Herstellungsprodukt 16 (Ausbeute: 1,08 g) zu erzeugen.
  • Das Molekulargewicht wurde mittels einer TSK-Gel G3000SW-Säule (erhältlich von TOSO Co., Ltd.) (mobile Phase: 0,2 M Phosphatpuffer pH 7,4, Fließrate: 1,0 ml/min) bestimmt. Das PEGreduzierte Molekulargewicht des Produkts war 28000.
    • Herstellungsbeispiel 17
  • Das im Herstellungsbeispiel 14 hergestellte Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert, um ein Hydrogel zu erzeugen.
  • Ein Paar von Silan-behandelten Glasplatten (5 cm x 6 cm x 1 cm) und eine Dichtung wurden bereitgestellt. Chlortrimethylammonioethylmethacrylamid (2 g) und Methylenbisacrylamid (100 mg: 5 Gew.-%) wurden in 12 ml destilliertem Wasser gelöst und durch 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt. Ammoniumpersulfat (10 mg) wurde zugegeben und Stickstoffgas durch die Mischung geleitet, um die darin vorhandene Luft zu entfernen. Die Mischung wurde zwischen die Glasplatten injiziert, die danach versiegelt wurden. Die Polymerisation wurde bei 60ºC für 20 Stunden durchgeführt. Das hergestellte Hydrogel wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, um nicht-reagierte Monomere zu entfernen. Das Gel (Herstellungsprodukt 17) wurde mittels einer Ultraviolettlampe sterilisiert, bevor es für die Kultivierung von tierischen Zellen verwendet wurde.
    • Synthesebeispiele 1 bis 14 Synthese des adhasiven Peptids durch ein Festphasenverfahren
  • Die Synthese dieses Peptids wurde unter Verwendung eines Peptid-Synthesegeräts gemäß dem Merrifield-System durchgeführt.
  • α-Aminogruppen wurden mit Boc geschützt, um ein Oligopeptid mit Arg-Gly-Asp als wesentlicher Einheit zu erzeugen. An das N- Ende des Peptids wurden durch eine Kondensationsreaktion die in den Herstellungsbeispielen 1 bis 10 hergestellten Propensäurederivate, Arcrylsäure, Methacrylsäure oder Ethacrylsäure gebunden. Trifluormethansulfonsäure wurde verwendet, um die gewünschten Produkte von dem Harz zu abzuspalten und um die Schutzgruppen in der Seitenkette zu entfernen. Die Produkte wurden durch präparative Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) gereinigt, um die Propenamidderivate zu erzeugen, die einen einzelnen Peak zeigen, welche danach durch eine Anionenaustauschsäule (Amberlite IRA-400; Cl-Typ) geschickt wurden, um sie in Hydrochloride umzuwandeln.
    • Syntheseprodukt 1
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-(CH&sub2;)&sub3;-CO-RGD (SEQ ID NO:1)
    • Ausbeute 35%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9982
  • G: 1,0319
  • D: 0,9971
  • 4 Abu: 1,0240
  • Massenspektrum M&spplus; : 486
    • Syntheseprodukt 2
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-(RGD)&sub2;
  • (SEQ ID NO:2)
  • Ausbeute 24%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 1,9568
  • G: 2,1004
  • D: 1,9673
  • β-Alanin: 1,0257
  • Massenspektrum M&spplus; : 815
    • Syntheseprodukt 3
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-(RGD)&sub3;
  • (SEQ ID NO:3)
  • Ausbeute 17%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50µl)
  • R: 2,8382
  • G: 3,1121
  • D: 2,9451
  • β-Alanin: 1,0287
  • Massenspektrum M&spplus; : 1144
    • Syntheseprodukt 4
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-(RGD)&sub5;
  • (SEQ ID NO:4)
  • Ausbeute 10%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 4,8664
  • G: 5,1965
  • D: 4,9033
  • β-Alanin: 1,0449
  • Massenspektrum M&spplus;: 1802
    • Syntheseprodukt 5
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-(CH&sub2;)&sub3;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO:5)
  • Ausbeute 33%
  • Aminosäureanalysis (nmol/50 µl)
  • R: 0,9989
  • G: 1,1008
  • D: 0,9596
  • S: 0,8991
  • 4abu: 1,0054
  • Massenspektrum M&spplus;: 573
    • Syntheseprodukt 6
  • CH&sub2;=CC&sub2;H&sub5;-CO-NH-(CH&sub2;)&sub4;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO:6)
  • Ausbeute 31%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9874
  • G: 0,9927
  • D: 0,9935
  • S: 0,8869
  • Massenspektrum M&spplus;: 615
    • Syntheseprodukt 7
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-(CH&sub2;)&sub5;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO:7)
  • Ausbeute 30%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9755
  • G: 1,0361
  • D: 0,9671
  • S: 0,8943
  • Massenspektrum M&spplus;: 615
    • Syntheseprodukt 8
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-(CH&sub2;)&sub1;&sub1;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO:8)
  • Ausbeute 27%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50µl)
  • R: 0,9647
  • G: 1,0570
  • D: 0,9884
  • S: 0,8603
  • Massenspektrum M&spplus;: 686
    • Syntheseprodukt 9
  • CH&sub2;=CH-CO-NH-CH(CH&sub2;CH(CH&sub3;)&sub2;)-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO: 9)
  • Ausbeute 31%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9814
  • G: 1,0519
  • D: 0,9731
  • S: 0,8989
  • Leucin : 0,9853
  • Massenspektrum M&spplus;: 601
    • Syntheseprodukt 10
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-CH(C&sub2;H&sub4;CONH&sub2;)-CO- RGDS
  • (SEQ ID NO: 10)
  • Ausbeute: 33%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9771
  • G: 1,0501
  • D: 0,9651
  • S: 0,8969
  • Glutaminsäure: 0,9587
  • Massenspektrum M&spplus;: 630
    • Syntheseprodukt 11
  • CH&sub2;= CH-CO-NH-p-C&sub6;H&sub4;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO:11)
  • Ausbeute 31%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9845
  • G: 1,0361
  • D: 0,9554
  • S: 0,8879
  • Massenspektrum M&spplus;: 595
    • Syntheseprodukt 12
  • CH&sub2;=CC&sub2;H&sub5;-CO-NH-(CH&sub2;)&sub4;-CO-GRGDS
  • (SEQ ID NO: 12)
  • Ausbeute 35%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50µl)
  • R: 0,9582
  • G: 2,0371
  • D: 0,9874
  • S: 0,8733
  • Massenspektrum M&spplus;: 672
    • Syntheseprodukt 13
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-GRGDSP
  • (SEQ ID NO:13)
  • Ausbeute 26%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9669
  • G: 2,0552
  • D: 0,9809
  • S: 0,8677
  • P: 0,9546
  • Massenspektrum M&spplus;: 656
    • Syntheseprodukt 14
  • CH&sub2;=CH-CO-GGGRGDS
  • (SEQ ID NO:14)
  • Ausbeute 30%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9554
  • G: 4,0011
  • D: 0,9380
  • S: 0,8518
  • Massenspektrum M&spplus;: 659
    • Synthesebeispiel 15 Syntheseprodukt 15
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-RGDS
  • (SEQ ID NO: 15)
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde durch ein Flüssigphasenverfahren gemäß einem sequenziellen Extensionsverfahren synthetisiert.
    • (1) Synthese von BocSer(Bzl)OBzl
  • 60 g (0,2 mol) BocSer(Bzl) wurde zu 400 ml Ethylacetat zugegeben, zu welchem 21 g (0,2 mol) Triethylamin und 35,4 g (0,2 mol) Benzylbromid zugegeben wurden, und unter Rückflußbedingungen für 4 Stunden reagierengelassen. Nach Abkühlen wurde das hergestellte Salz durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wurde mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung und einer wäßrigen NaCl- Lösung gewaschen, danach über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und bis zur Trockenheit konzentriert, um 54 g weißes Pulver (Ausbeute: 68%) zu erzeugen.
    • (2) Synthese von BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)OBzl
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; = 1/1 (200 ml) wurde zu 30 g (78 mmol) BocSer(Bzl)OBzl zugegeben und bei Raumtemperatur für eine Stunde gerührt. Die Mischung wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um TFA und CH&sub2;Cl&sub2; zu entfernen. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung neutralisiert, mit einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingedampft, um Ethylacetat zu entfernen.
  • Das erhaltene Produkt und 32,8 g (78 mmol) BocAsp(OBzl)OSu wurden in 500 ml CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und über Nacht gerührt. Die Mischung wurde eingedampft, um CH&sub2;Cl&sub2; zu entfernen, und in Ethylacetat gelöst. Das Produkt wurde mit einer wäßrigen NaH- CO&sub3;-Lösung, 1 M Zitronensäure-Lösung und einer wäßrigen NaCl- Lösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und unter reduziertem Druck bis zur Trockenheit konzentriert, um 41 g weißes Pulver (Ausbeute: 89%) zu erzeugen.
    • (3) Synthese von BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)Obzl
  • TFA:CH&sub2;Cl&sub2;=1:1 (200 ml) wurde zu 35 g (59 mmol) BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)OBzl zugegeben und die Mischung bei Raumtemperatur für eine Stunde gerührt, und danach wurden TFA und CH&sub2;Cl&sub2; unter reduziertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung neutralisiert und mit einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen. Die Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingedampft, um Ethylacetat zu entfernen.
  • Das erhaltene Produkt und 9,8 g (59 mmol) BocGly wurden in CH&sub2;Cl&sub2; gelöst, zu welchem 12,2 g (59 mmol) DCC unter Eiskühlung zugegeben wurden, für 3 Stunden gerührt und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Mischung wurde filtriert, um DCurea zu entfernen, und unter reduziertem Druck konzentriert. Der Reststoff wurde in Ethylacetat gelöst und mit einer wäßrigen NaH- CO&sub3;-Lösung, 1M Zitronensäure-Lösung und einer wäßrigen NaCl- Lösung gewaschen. Die Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft, um 30,5 g weißes Pulver (Auseute: 75%) zu erzeugen.
    • (4) Synthese von BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)OBzl
  • TFA:CH&sub2;Cl&sub2;=1:1 (200 ml) wurde zu BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)OBzl (25 g, 39 mmol) gegeben und die Mischung für eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, und danach wurden TFA und CH&sub2;Cl&sub2; unter reduziertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung neutralisiert und mit einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen. Die Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingedampft, um Ethylacetat zu entfernen.
  • Das erhaltene Produkt und 17,8 g (39 mmol) BocArg(Mts) wurden in 400 ml DMF gelöst, zu welchem 8,0 g (39 mmol) DCC und 6,8 g (45 mmol) HOBt unter Eiskühlung zugegeben wurden , für 3 Stunden gerührt und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Mischung wurde filtriert, um DCurea zu entfernen und unter reduziertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst und mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung, 1M Zitronensäure-Lösung und einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen. Die Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und unter reduziertem Druck eingedampft, um 19,5 g weißes Pulver (Ausbeute: 50%) zu erzeugen.
    • (5) Synthese des Syntheseprodukts 15
  • TFA: CH&sub2;Cl&sub2; = 1:1 (100 ml) wurde zu BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)OBzl (15,0 g, 15 mmol) zugegeben, die Mischung wurde für eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, und danach wurden TFA und CH&sub2;Cl&sub2; unter reduziertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung neutralisiert und mit einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen. Die Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingedampft, um Ethylacetat zu entfernen.
  • Das erhaltene Produkt und Carboxyethylmethacrylamid (2,4 g, 15 mmol) wurden in 200 ml CH&sub2;Cl&sub2; gelöst, zu welchem 3,1 g (15 mmol) DCC unter Eiskühlung zugegeben wurden, für 3 Stunden gerührt und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck konzentriert. Aceton wurde zu dem Rückstand zugegeben. Die Mischung wurde filtriert, um DCurea zu entfernen, präzipitiert und unter reduziertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde mit Ethylacetat und danach mit Ether gewaschen. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck eingedampft, um 10,0 g weißes Pulver (Ausbeute: 65%) zu erzeugen.
  • Eine TFA-Lösung von 1M Trifluormethansulfonsäure-Thioanisol-m- Cresol wurde zu einer TFA-Lösung des erhaltenen Produkts (10 g, 9,8 mmol) unter Eiskühlung zugegeben und für eine Stunde reagierengelassen, um die Schutzgruppen in den Seitenketten und den Enden zu entfernen. Die Mischung wurde in Ether eingegossen. Das ölige Präzipitat wurde in destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung wurde mit Ethylacetat gewaschen, durch eine Anionenaustauschsäule (Amberlite IRA-400; C1-Typ) geschickt, um die gewünschte Verbindung zu einem Hydrochlond umzuwandeln, und lyophilisiert, um ein weißes Pulver (4,8 g, Ausbeute: 80%) zu erzeugen.
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 0,9877
  • G: 0,9916
  • D: 0,9899
  • S: 0,8891
  • β-Alanin : 1,0115
  • Massenspektrum M&spplus;: 573
    • Synthesebeispiel 16 Syntheseprodukt 16
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-RGDSGNH&sub2;
  • (SEQ ID NO:16)
  • Auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 15 wurde die Peptidkette, wie nachstehend zusammengefaßt, verlängert
    • (1) Synthese von BocSer(Bzl)GlyNH&sub2;
  • BocSer(Bzl) : 59 g (0,2 mol)
  • GlyNH&sub2; HCl : 22,1 g (0,2 mol)
  • N-Methylmorpholin : 20,2 g (0,2 mol)
  • CH&sub2;Cl&sub2; : 800 ml
  • DCC : 41,2 g (0,2 mol)
  • Ausbeute von (1) : 58,3 g (Ausbeute: 83%)
    • (2) Synthese von BocAsp(OBzl)Ser(Bzl)GlyNH&sub2;
  • Produkt von (1) : 56,2 g (0,16 mol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BocAsp(Obzl) : 51,7 g (0,16 mol)
  • CH&sub2;Cl&sub2; : 800 ml
  • DCC : 33 g (0,16 mol)
  • Ausbeute von (2) : 71,2 g (Ausbeute: 80%)
    • (3) Synthese von BocGlyAsp(OBzl)Ser(Bzl)GLyNH&sub2;
  • Produkt von (2) : 66,7 g (0,12 mol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BocGly : 51,7 g (0,12 mol)
  • CH&sub2;Cl&sub2; : 700 ml
  • DCC : 24,7 (0,12 mol)
  • Ausbeute von (3) : 61,8 g (Ausbeute: 84%)
    • (4) Synthese von BocArg(Mts)GlyAsp(Obzl)Ser(Bzl)GlyNH&sub2;
  • Produkt von 839 : 61,3 g (0,1 mol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BocArg(Mts) : 45,6 g (0,1 mol)
  • DMF : 800 ml
  • DCC : 22,5 (0,1 mol)
  • HOBt : 14 g (0,1 mol)
  • Ausbeute von (4) : 42,8 g (Ausbeute: 45%)
    • (5) Synthese von Syntheseprodukt 16
  • Produkt von (4) : 5,0 g (5,3 mmol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 50 ml/50 ml
  • Carboxyethylmethacrylamid: 0,83 g (5,3 mmol)
  • DMF : 50 ml
  • DCC : 1,1 g (5,3 mmol)
  • HOBt : 0,72 g (5,3 mmol)
  • TFA-Lösung von 1M Trifluormethansulfonsäure- Thioanisol-m-Cresol: 250 ml
  • Behandlung mit Amberlite IRA-400; Cl-Typ
  • Syntheseprodukt 16 : 2,29 g (Ausbeute: 65%)
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 0,9517
  • G : 2,1004
  • D : 0,9753
  • S : 0,8926
  • β-Alanin : 1,0143
  • Massenspektrum M&spplus; : 629
    • Synthesebeispiel 17 Syntheseprodukt 17
  • RGDG-NH-C&sub2;H&sub4;-NH-CO-CCH&sub2; = CH&sub2;
  • (SEQ ID NO:17)
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde durch ein Flüssigphasenverfahren gemäß einem sequenziellen Extensionsverfahren synthetisiert.
    • (1) Synthese von BocGlyONb
  • 60 g (0,2 mol) BocSer(Bzl) wurden zu 400 ml Ethylacetat zugegeben, zu welchem 21 g (0,2 mol) Triethylamin und 35,4 g (0,2 mol) Benzylbromid zugegeben und unter Rückflußbedingungen für 4 Stunden reagierengelassen wurden. Nach Abkühlung wurde das hergestellte Salz durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wurde mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung und einer wäßrigen NaCl-Lösung gewaschen, danach über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und bis zur Trockenheit konzentriert, um 54 g eines weißen Pulvers (Ausbeute: 68%) zu erzeugen.
  • 35 g (0,2 mol) BocGly, Triethylamin (28 ml, 0,2 mol) und p- Nitrobenzylbromid (43,2 g, 0,2 mol) wurden zu 400 ml Ethylacetat zugegeben, und die Mischung wurde für 4 Stunden unter Rückflußbedingungen belassen und bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen. Die Mischung wurde filtriert, das Filtrat mit einer wäßrigen NaHCO&sub3;-Lösung und Wasser gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert. Das erhaltene Produkt wurde aus Ethylacetat-Hexan umkristallisiert (Ausbeute: 52,7 g, 85%).
  • Auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 15 wurde die Peptidkette, wie nachstehend zusammengefaßt, verlängert.
    • (2) Synthese von BocAsp(OBzl)GlyONb
  • Produkt von (1) : 46,5 g (0,15 mol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BosAsp(OBzl) : 48,5 g (0,15 mol)
  • CH2CL2 : 750 ml
  • DCC: : 30,9 g (0,15 mol)
  • Ausbeute von (2) : 64,0 g (Ausbeute: 80%)
    • (3) Synthese von BocGlyAsp(Obzl)GlyONb
  • Produkt von (2) : 64,0 g (0,12 mol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BocGly : 21 g (0,12 mol)
  • CH&sub2;Cl&sub2; : 750 ml
  • DCC : 24,7 g (0,12 mol)
  • Ausbeute von (3) : 58,9 g (Ausbeute: 83 %)
    • (4) Synthese von BocArg(Mts)GlyAsp(OBzl)GlyONb
  • Produkt von (3) : 53,7 g (91 mmol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 200 ml/200 ml
  • BocArg(Mts) : 41,5 g (91 mmol)
  • DMF : 800 ml
  • DCC : 18,7 g (91 mmol)
  • HOBt : 13,5 g (0,1 mol)
  • Ausbeute von (4) : 46,5 g (Ausbeute: 55%)
    • (5) Synthese von BocArg(Mts)GlyAsp(Obzl)Gly
  • Das Produkt von (4) (9,29 g, 10 mmol) wurde in 300 ml 90%-ige Essigsäure gelöst, zu welcher 32,7 g (0,5 mol) Zn-Pulver zugegeben und für 3 Stunden bei 0 ºC gerührt wurden. Das Zn-Pulver wurde filtriert und das Filtrat unter reduziertem Druck konzentriert. Zitronensäure wurde zugegeben, um die Lösung sauer zu machen, und die Lösung wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die extrahierte Lösung wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert. Ether wurde zu dem Rückstand zugegeben, um ein weißes Pulver zu erzeugen (6,26 g, Ausbeute: 79%).
    • (6) Synthese von Syntheseprodukt 17
  • Produkt von (5) : 5,31 g (6,7 mmol)
  • Aminoethylmethacrylamid : 0,86 g (6,7 mmol)
  • DMF : 60 ml
  • DCC : 1,4 g (6,7 mmol)
  • HOBt : 0,95 g (7 mmol)
  • TFA-Lösung von 1M Trifluormethansulfonsäure-Thioanisol-m--
  • Cresol : 250 ml
  • Behandlung mit Amberlite IRA-400; Cl-Form
  • Syntheseprodukt 17 : 2,9 g (Ausbeute: 75%)
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 4,5915
  • G : 9,4324
  • D : 4,6618
  • Massenspektrum M&spplus; : 514
    • Synthesebeispiel 18 Syntheseprodukt 18
  • CH&sub2;=CCH&sub3;-CO-NH-C&sub2;H&sub4;-CO-RGDG-NH-C&sub2;H&sub4;-NH-CO-CCH&sub3;=CH&sub2;
  • (SEQ ID NO:18)
  • Dasselbe Verfahren wie in (1) bis (5) des Synthesebeispiels 17 und die folgenden Verfahren wurden durchgeführt, um das Syntheseprodukt 18 zu erzeugen.
  • (1) BocArg(Mts)GlyAsp(Obzl)Gly-NH-C&sub2;H&sub4;-NH-CO-CCH&sub3;=CH&sub2;
  • BocArg(Mts)GlyAsp(Obzl)Gly : 5,19 g (6,7 mmol)
  • Aminoethylmethacrylamid : 0,86 g (6,7 mmol)
  • DMF : 60 ml
  • DCC : 1,4 g (6,7 mmol)
  • HOBt : 0,95 g (7 mmol)
  • Ausbeute von (1) : 4,7 g (Ausbeute: 80%)
  • Massenspektrum M&spplus; : 885
    • (2) Synthese von Syntheseprodukt 18
  • Produkt von (1) : 4,4 g (5 mmol)
  • TFA/CH&sub2;Cl&sub2; : 50 ml/50 ml
  • Carboxyethylmethacrylamid : 0,79 g (5 mmol)
  • DMF : 50 ml
  • DCC : 1,03 g (5 mmol)
  • HOBt : 0,68 g (5 mmol)
  • TFA-Lösung von 1M Trifluormethansulfonsäure-Thioanisol-m- Cresol : 250 ml
  • Behandlung mit Amberlite IRA-400; Cl-Form
  • Syntheseprodukt 18 : 2,41 g (Ausbeute: 70%)
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 8,8963
  • G : 17,9746
  • D : 8,7531
  • β-Alanin : 8,8330
  • Massenspektrum M&spplus; : 653
    • Synthesebeispiel 19
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert.
  • Das Syntheseprodukt 15 (500 mg) wurde in 5 ml Wasser gelöst und mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt. Ein Initiator, Kaliumpersulfat (2,5 mg) und Natriumhydrogensulfit (1,0 mg) wurden zugegeben, und die Polymerisation wurde bei 20ºC für 20 Stunden unter Stickstoffatmosphäre durchgeführt. Das Polymer wurde mittels Ethylacetat präzipitiert und durch Spectra/por 7 (Trennmolekulargewicht: 3000) (erhältlich von Spectrum Medical Industries, Inc.) gegen reines Wasser dialysiert, um Fraktionen niedrigen Molekulargewichts zu entfernen, worauf eine Lyophilisation folgte, um das Syntheseprodukt 19 (Ausbeute: 240 mg) zu erzeugen.
  • Das Syntheseprodukt 19 wurde einer Molekulargewichtsfraktionierung durch Gelchromatographie ausgesetzt. Das Molekulargewicht wurde auf dieselbe Weise wie im Herstellungsbeispiel 12 bestimmt.
  • Fraktion 1 M.G.: ungefähr 48000 (Syntheseprodukt 19-1)
  • Fraktion 2 M.G.: ungefähr 21000 (Syntheseprodukt 19-2)
  • Fraktion 3 M.G.: ungefähr 12000 (Syntheseprodukt 19-3)
    • Synthesebeispiel 20
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 19 polymerisiert, außer daß die Menge des Initiators wie folgt verändert wurde.
  • Initiator : 10 mg Kaliumpersulfat
  • 4 mg Natriumhydrogensulfit
  • Ausbeute: : 180 mg (Syntheseprodukt 20)
  • M.G. : 5000
    • Synthesebeispiele 21 bis 36
  • Die Syntheseprodukte 1 bis 14, 16 und 17 wurden auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 19 polymerisiert. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle gezeigt. Synthesebeispiel (Syntheseprodukt Nr.) Monomer Polymerausbeute (mg)) Molekulargewicht Syntheseprodukt Syntheseprodukt
  • Für das Syntheseprodukt 8 wurde Wasser/Methanol (1/1) als Lösungsmittel für die Polymerisation und für die Dialyse verwendet.
    • Synthesebeispiel 37
  • Das im Synthesebeispiel 18 hergestellte Syntheseprodukt 18 wurde durch Radikalpolymerisation polymerisiert, um ein Hydrogel zu erzeugen.
  • Ein Paar von Silan-behandelten Glasplatten (5 cm x 6 cm x 1 cm) und eine Dichtung wurden bereitgestellt. Das Syntheseprodukt 15 (2 g, 3,2 mmol) und das Syntheseprodukt 18 (0,21 g, 0,3 mmol) wurden in 15 ml destilliertem Wasser gelöst und mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt. Ammoniumpersulfat (11 mg) wurde zugegeben und Stickstoffgas durch die Mischung geleitet, um darin befindliche Luft zu entfernen. Die Mischung wurde zwischen die Glasplatten injiziert, welche danach versiegelt wurden. Die Polymerisation wurde für 40 Stunden bei 60ºC durchgeführt. Das hergestellte Hydrogel wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, um nicht-reagiertes Monomer zu entfernen. Das Gel (Syntheseprodukt 37) wurde mittels einer Ultraviolettlampe sterilisiert, bevor es für die Kultivierung von tierischen Zellen verwendet wurde.
    • Synthesebeispiel 38
  • Das Syntheseprodukt 15 und das im Herstellungsbeispiel 1 hergestellte Monomer (677 mg, 3,28 mmol) wurden durch Radikalpolymerisation copolymerisiert.
  • Das Syntheseprodukt 15 (500 mg, 0,82 mmol) und das im Herstellungsbeispiel 1 hergestellte Monomer (677 mg, 3,28 mmol) wurden in 10 ml Wasser gelöst und mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt. Ein Initiator, Kaliumpersulfat (5,1 mg) und Natriumhydrogensulfit (2,0 mg) wurden zugegeben, und die Polymerisation wurde für 20 Stunden bei 20ºC unter Stickstoffatmosphäre durchgeführt. Das Polymer wurde mittels Ethylacetat präzipitiert und durch Spectra/por 7 (Trennmolekulargewicht: 3000) gegen reines Wasser dialysiert, um Fraktionen niedrigen Molekulargewichts zu entfernen, worauf eine Lyophilisation folgte, um das Syntheseprodukt 38 (Ausbeute: 490 mg) zu erzeugen.
  • Eine Aminosäureanalyse des Copolmyers zeigte, daß das Syntheseprodukt 15 in einer Menge von 19% (welches ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly errechnet wurde) in das Copolymer eingebracht wurde.
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R: 410835
  • G: 4,2832
  • D: 4,1692
  • S: 3,9211
  • β-Alanin : 22,1927
  • Das Syntheseprodukt 38 wurde einer Molekulargewichtsfraktionierung durch Gelchromatographie ausgesetzt. Das Molekulargewicht wurde auf dieselbe Weise wie im Herstellungsbeispiel 12 bestimmt.
  • Fraktion 1 M.G.: ungefähr 53000 (Syntheseprodukt 38-1)
  • Fraktion 2 M.G.: ungefähr 21000 (Syntheseprodukt 38-2)
  • Fraktion 3 M.G.: ungefähr 8000 (Syntheseprodukt 38-3)
    • Synthesebeispiel 39
  • Das Syntheseprodukt 15 und das im Herstellungsbeispiel 1 hergestellte Monomer wurde auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 38 copolymerisiert, außer daß die Menge des Initiators wie folgt verändert wurde.
  • Initiator : 20,3 mg Kaliumpersulfat
  • 8,1 mg Natriumhydrogensulfit
  • Ausbeute: : 315 mg (Syntheseprodukt 39)
  • M.G.. : 4000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 19%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 5.8235
  • G: 6,0821
  • D: 5,9632
  • S : 5,3185
  • β-Alanin : 30,4105
    • Synthesebeispiele 40 und 41
  • Die Copolymerisation wurde auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 19 durchgeführt, außer daß die Monomerzusamensetzung verändert wurde.
    • Synthesebeispiel 21
  • Monomer Syntheseprodukt 15 500 mg (0.82 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 129 mg (0,82 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,1 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,3 mg
  • Ausbeute 273 mg (Syntheseprodukt 21)
  • M.G. 18000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 48%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 6,2135
  • G : 6,5521
  • D : 6,3896
  • S : 5,9892
  • β-Alanin : 13,7939
    • Synthesebeispiel 22
  • Monomer Syntheseprodukt 15 500 mg (0.82 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 2,45 g (15,58 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 14,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 5,9 mg
  • Ausbeute 1,62 g (Syntheseprodukt 41)
  • M.G. 42000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15 (errechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 4%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 0,9631
  • G : 1,0878
  • D : 0,9821
  • S : 0,8922
  • β-Alanin : 28,6251
    • Synthesebeispiele 42 bis 57
  • Die Syntheseprodukte 1 bis 14, 16 und 17 wurden mit verschiedenen anionischen Monomeren auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 19 copolymerisiert.
    • Synthesebeispiel 42
  • Monomer Syntheseprodukt 1 500 mg (0.96 mmol)
  • Herstellungsprodukt 11 601 mg (3,82 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,6 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,2 mg
  • Ausbeute 513 mg (Syntheseprodukt 21)
  • M.G. 16000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 1 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 17%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 3,0916
  • G : 3,2654
  • D : 3,1262
  • Abu : 18,8751
    • Synthesebeispiel 43
  • Monomer Syntheseprodukt 2 500 mg (0.56 mmol)
  • Herstellungsprodukt 9 323 mg (3,83 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 8,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 3,3 mg
  • Ausbeute 495 mg (Syntheseprodukt 43)
  • M.G. 17000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 2 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 21% Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R 2,6911
  • G : 8,1692
  • D : 2,7816
  • β-Alanin : 1,4023
    • Synthesebeispiel 44
  • Monomer Syntheseprodukt 3 500 mg (0.4 mmol)
  • Acrylamidoglycolsäure 232 mg (1,6 mmol)
  • (erhältlich von Aldrich)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,5 mg
  • Ausbeute 324 mg (Syntheseprodukt 44)
  • M.G. 9000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 3 (berechnet ausgehend von dem N-Wert der Elementaranalyse): 19%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 17,43%
    • Synthesebeispiel 45
  • Monomer Syntheseprodukt 4 500 mg (0,25 mmol)
  • Herstellungsprodukt 9 143 mg (1,0 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,3 mg
  • Ausbeute 232 mg (Syntheseprodukt 45)
  • M.G. 11000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 4 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 16%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 4,7623
  • G : 24,9472
  • D : 4,8513
  • β-Alanin 2,4615
    • Synthesebeispiel 46
  • Monomer Syntheseprodukt 5 500 mg (0,82 mmol)
  • Itaconsäure 429 mg (3,28 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,6 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 372 mg (Syntheseprodukt 46)
  • M.G. 16000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 5 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 24%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 10,98%
    • Synthesebeispiel 47
  • Monomer Syntheseprodukt 6 500 mg (0,77 mmol)
  • Herstellungsprodukt 10 667 mg (3,08 mmol)
  • Initiatur Kaliumpersulfat 5,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,3 mg
  • Ausbeute 427 mg (Syntheseprodukt 47)
  • M.G. 12000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 6 (berechnet ausgehend von den Werten für Glu und Gly) : 19%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 2,9158
  • G : 3,2965
  • D : 3,1106
  • S : 2,8765
  • Glutaminsäure : 14,0535
    • Synthesebeispiel 48
  • Monomer Syntheseprodukt 7 500 mg (0,77 mmol)
  • Methacrylsäure 267 mg (3,08 mmol)
  • (erhältlich von Tokyo Kasei)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,5 mg
  • Ausbeute 287 mg (Syntheseprodukt 48)
  • M.G. 90000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 7 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 17%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 10,46%
    • Synthesebeispiel 49
  • Monomer Syntheseprodukt 8 500 mg (0,69 mmol)
  • Acrylsäure 202 mg (2,76 mmol)
  • (erhältlich von Tokyo Kasei)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,5 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,4 mg
  • Ausbeute 233 mg (Syntheseprodukt 49)
  • M.G. 10000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 8 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse 14%
  • N-Wert der Elementaranaylase: 9,62%
  • Wasser/Methanol (1/1) wurde als Polymerisationslösungsmittel und Dialyselösungsmittel verwendet.
    • Synthesebeispiel 50
  • Monomer Syntheseprodukt 9 500 mg (0,79 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 487 mg (3,16 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,9 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,0 mg
  • Ausbeute 411 mg (Syntheseprodukt 50)
  • M.G. 12000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 9 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 18%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 4,2569
  • G : 4,3812
  • D : 4,2115
  • S : 3,9364
  • β-Alanin : 20,0948
  • Leucin : 4,0255
    • Synthesebeispiel 51
  • Monomer Syntheseprodukt 10 500 mg (0,75 mmol)
  • Herstellungsprodukt 9 429 mg (3,0 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,6 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 362 mg (Syntheseprodukt 51)
  • M.G. 14000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 10 (berechnet ausgehend von den Werten für Glu und Asp) : 17%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 3,7622
  • G : 22,8479
  • D : 3,8613
  • S : 3,5926
  • Glutaminsäure : 3,7239
    • Synthesebeispiel 52
  • Monomer Syntheseprodukt 11 500 mg (0,79 mmol)
  • Herstellungsprodukt 9 458 mg (3,16 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 362 mg (Syntheseprodukt 52)
  • M.G. 13000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 10 (berechnet ausgehend von den Werten für Asp und Gly) : 20% Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 4,6511
  • G : 23,7362
  • D : 4,7235
  • S : 4,4052
    • Synthesebeispiel 53
  • Monomer Syntheseprodukt 12 500 mg (0,71 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 440 mg (2,84 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 395 mg (Syntheseprodukt 53)
  • M.G. 15000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 12 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 17%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 2,9615
  • G : 6,3044
  • D : 3,0888
  • S : 2,7812
  • β-Alaninsäure : 12,1295
    • Synthesebeispiel 54
  • Monomer Syntheseprodukt 13 500 mg (0,72 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 455 mg (2,88 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 343 mg (Syntheseprodukt 54)
  • M.G. 13000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 13 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 20%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 3,2611
  • G : 6,8312
  • D : 3,3626
  • S : 3,0022
  • P : 3,1263
  • β-Alaninsäure : 10,2468
    • Synthesebeispiel 55
  • Monomer Syntheseprodukt 14 500 mg (0,72 mmol)
  • Herstellungsprodukt 2 455 mg (2,88 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,8 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 401 mg (Syntheseprodukt 55)
  • M.G. 11000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 14 (berechnet ausgehend von den Werten für 4abu und Gly) : 22%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 2,5536
  • G : 10,8612
  • D : 2,6211
  • S : 2,3628
  • 4abu : 9,7976
    • Synthesebeispiel 56
  • Monomer Syntheseprodukt 16 500 mg (0,75 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 471 mg (3,00 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,9 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute: 388 mg (Syntheseprodukt 56)
  • M.G. 15000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 16 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 19%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 3,5287
  • G : 7,5128
  • D : 3,6633
  • S: 3,3151
  • β-Alanin : 23,8441
    • Synthesebeispiel 57
  • Monomer Syntheseprodukt 17 500 mg (0,85 mmol)
  • Herstellungsprodukt 1 534 mg (3,40 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,1 mg
  • Ausbeute 341 mg (Syntheseprodukt 57)
  • M.G. 11000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 17 (berechnet ausgehend von den Werten für β-Alanin und Gly) : 16%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R 4,5531
  • G : 9,3384
  • D : 4,5938
  • β-Alanin 24,5133
    • Synthesebeispiel 58
  • Die Syntheseprodukte 15 und 18 wurden mit dem Herstellungsprodukt 1 durch Radikalpolymerisation copolymerisiert, um ein Hydrogel zu erzeugen.
  • Ein Paar Silan-behandelter Glasplatten (5 cm x 6 cm x 1 cm) und eine Dichtung wurden bereitgestellt. Das Syntheseprodukt 15 (0,23 g, 0,4 mmol), das Syntheseprodukt 18 (0,28 g, 0,4 mmol) und das Herstellungsprodukt 1 (1,49 g, 9,4 mmol) wurden in destilliertem Wasser gelöst, um eine 10 Gew.-%-ige Monomerlösung zu erzeugen, die danach mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt wurde. Ammoniumpersulfat (10,4 mg) wurde zugegeben und Stickstoffgas durch die Mischung geleitet, um darin befindliche Luft zu entfernen. Die Mischung wurde zwischen die Glasplatten injiziert, welche danach versiegelt wurden. Die Polymerisation wurde für 40 Stunden bei 60ºC durchgeführt. Das hergestellte Hydrogel wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, um nichtreagierte Monomere zu entfernen. Die Menge des in das Syntheseprodukt 58 eingebrachte Monomers (Syntheseprodukte 15 und 18) betrug ungefähr 8%, berechnet ausgehend vom N-Wert (12,07%) der Elementaranalyse. Das Gel (Syntheseprodukt 58) wurde mittels einer Ultraviolettlampe sterilisiert, bevor es für die Kultivierung von tierischen Zellen verwendet wurde.
    • Synthesebeispiel 59
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde mit dem Herstellungsprodukt 14 durch Radikalpolymerisation copolymerisiert.
  • Das Syntheseprodukt 15 (500 mg, 0,82 mmol) und das im Herstellungsbeispiel 14 hergestellte Monomer (677 mg, 3,3 mmol) wurden in 10 ml Wasser gelöst und mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt. Ein Initiator, Kaliumpersulfat (6,0 mg) und Natriumhydrogensulfit (2,4 mg) wurden zugefügt und die Polymerisation für 20 Stunden bei 20ºC unter Stickstoffatmosphäre durchgeführt. Das Polymer wurde mittels Ethylacetat präzipitiert und durch Spectra/por7 (Trennmolekulargewicht: 3000) gegen reines Wasser dialysiert, um Fraktionen niedrigen Molekulargewichts zu entfernen, worauf eine Lyophilisation folgte, um das Syntheseprodukt 59 (Ausbeute: 243 mg) zu erzeugen.
  • Die Menge des in das Copolymer 59 eingebrachten Syntheseprodukts 15 betrug 18% ausgehend vom N-Wert der Elementaralyse.
  • Das Synthesprodukt 59 wurde einer Molekulargewichtsfraktionierung durch Gelchromatographie ausgesetzt. Das Molekulargewicht wurde auf dieselbe Weise wie im Herstellungsbeispiel 16 bestimmt.
  • Fraktion 1 M.G.: ungefähr 50000 (Syntheseprodukt 59-1)
  • Fraktion 2 M.G.: ungefähr 23000 (Syntheseprodukt 59-2)
  • Fraktion 3 M.G.: ungefähr 11000 (Syntheseprodukt 59-3)
    • Synthesebeispiel 60
  • Das Syntheseprodukt 15 wurde mit dem Herstellungsprodukt 14 auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 59 polymerisiert, außer daß die Menge des Initiators wie folgt verändert wurde.
  • Initiator: 23,8 mg Kaliumpersulfat
  • 9,4 mg Natriumhydrogensulfit
  • Ausbeute: 165 mg (Syntheseprodukt 60)
  • M.G. : 4500
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15: 19%
  • N-Wert der Elementaranalyse 15,54%
    • Synthesebeispiele 61 und 62
  • Die Copolymerisation wurde auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 59 durchgeführt, außer daß die Monomerzusammensetzung verändert wurde.
    • Synthesebeispiel 61
  • Monomer Syntheseprodukt 15 500 mg (0,82 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 169 mg (0,82 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,3 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,3 mg
  • Ausbeute 134 mg (Syntheseprodukt 61)
  • M.G. 15000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15: 45%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 16,99%
    • Synthesebeispiel 62
  • Monomer Syntheseprodukt 15 500 mg (0,82 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 322 mg (15,58 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 18,6 mg
  • Natriumhydrogensulfit 7,5 mg
  • Ausbeute 1,52 g (Syntheseprodukt 62)
  • M.G. 35000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 15: 4%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 14,09%
    • Synthesebeispiel 63 bis 78
  • Die Syntheseprodukte 1 bis 14, 16 und 17 wurden mit verschiedenen kationischen Monomeren auf dieselbe Weise wie im Synthesebeispiel 59 copolymerisiert.
    • Synthesebeispiel 63
  • Monomer Syntheseprodukt 1 500 mg (0,96 mmol)
  • Herstellungsprodukt 15 1370 mg (3,83 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 9,4 mg
  • Natriumhydrogensulfit 3,8 mg
  • Ausbeute 564 mg (Syntheseprodukt 63)
  • M.G. 9000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 1 (berechnet ausgehend von den Werten für Arg/Gly) : 22%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 29,8842
  • G : 6,4251
  • D : 6,1233
    • Synthesebeispiel 64
  • Monomer Syntheseprodukt 2 500 mg (0,56 mmol)
  • Chlortrimethylammoniopropylmethacrylamid
  • (erhältlich von Aldrich) 498 mg (2,26 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,0 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,0 mg
  • Ausbeute 320 mg (Syntheseprodukt 64)
  • M.G. 12000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 2 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 19%
  • N-Wert der Elementaranalyse 16,50%
    • Synthesebeispiel 65
  • Monomer Syntheseprodukt 3 500 mg (0,40 mmol)
  • Chlortrimethylammoniopropylmethacrylamid
  • (erhältlich von Aldrich) 353 mg (1,60 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,3 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,7 mg
  • Ausbeute 262 mg (Syntheseprodukt 65)
  • M.G. 13000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 3 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 18%
  • N-Wert der Elementaranalyse 17,45%
    • Synthesebeispiel 66
  • Monomer Syntheseprodukt 4 500 mg (0,25 mmol)
  • Dimethylaminoethylmeth acrylat (erhältlich von Aldrich) 144 mg (1,00 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,3 mg
  • Ausbeute 186 mg (Syntheseprodukt 66)
  • M.G. 10000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 4 (berechnet ausgehend vom N-Wert für die Elementaranalyse): 23% N-Wert der Elementaranalyse 19,56%
    • Synthesebeispiel 67
  • Monomer Syntheseprodukt 5 500 mg (0,82 mmol)
  • Herstellungsprodukt 15 1170 mg (3,28 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 8,4 mg
  • Natriumhydrogensulfit 3,4 mg
  • Ausbeute : 415 mg (Syntheseprodukt 67)
  • M.G. 8000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 5 (berechnet ausgehend von den Werten für Arg/Gly) : 20%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 16,8729
  • G 3,4252
  • D : 3,3812
  • S : 3,0216
  • β-Alanin : 3,3846
    • Synthesebeispiel 68
  • Monomer Syntheseprodukt 6 500 mg (0,77 mmol)
  • Dimethylaminoethylmethacrylat
  • (erhältlich von Aldrich) 440 mg (3,08 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,9 mg
  • Ausbeute 353 mg (Syntheseprodukt 68)
  • M.G. 9000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 6 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 21%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 13,86%
    • Synthesebeispiel 69
  • Monomer Syntheseprodukt 7 500 mg (0,77 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 635 mg (3,08 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 3,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,3 mg
  • Ausbeute : 183 mg (Syntheseprodukt 69)
  • M.G. 12000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 7 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 24%
  • N-Wert der Elementaranalyse 15,38%
    • Synthesebeispiel 70
  • Monomer Syntheseprodukt 8 500 mg (0,69 mmol)
  • Dimethylaminoethylmethacrylat 396 mg (2,76 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,5 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,8 mg
  • Ausbeute 215 mg (Syntheseprodukt 70)
  • M.G. 8000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 8 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 21%
  • N-Wert der Elementaranalyse 13,07%
  • Wasser/Methanol (1/1) wurde als Polymerisationsläsungsmittel und als Dialyselösungsmittel verwendet.
    • Synthesebeispiel 71
  • Monomer Syntheseprodukt 9 500 mg (0,79 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 430 mg (3,16 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,3 mg
  • Ausbeute 284 mg (Syntheseprodukt 71)
  • M.G. 9000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 9 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 17%
  • N-Wert der Elementaranalyse 15,12%
    • Synthesebeispiel 72
  • Monomer Syntheseprodukt 10 500 mg (0,75 mmol)
  • Dimethylaminoethylmethacrylat
  • 430 mg (3,0 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 4,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 1,7 mg
  • Ausbeute 176 mg (Syntheseprodukt 72)
  • M.G. 8000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 10 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 17%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 14,26
    • Synthesebeispiel 73
  • Monomer Syntheseprodukt 11 500 mg (0,79 mmol)
  • Herstellungsprodukt 15 1132 mg (3,16 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 8,2 mg
  • Natriumhydrogensulfit 3,3 mg
  • Ausbeute 510 mg (Syntheseprodukt 73)
  • M.G. 12000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 11 (berechnet ausgehend von den N-Werten für Arg und Gly): 18%
  • Aminosäureanalyse (nmol/50 µl)
  • R : 17,8246
  • G : 3,2619
  • D : 3,0611
  • S : 2,8926
    • Synthesebeispiel 74
  • Monomer Syntheseprodukt 12 500 mg (0,71 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 584 mg (2,84 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,4 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,2 mg
  • Ausbeute 265 mg (Syntheseprodukt 74)
  • M.G. 10000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 12 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 20%
  • N-Wert der Elementaranalyse 15,52%
    • Synthesebeispiel 75
  • Monomer Syntheseprodukt 13 500 mg (0,72 mmol)
  • Chlortrimethylammoniopropylmethacrylamid 638 mg (2,88 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,3 mg
  • Ausbeute 322 mg (Syntheseprodukt 75)
  • M.G. 13000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 13 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 22%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 15,28%
    • Synthesebeispiel 76
  • Monomer Syntheseprodukt 14 500 mg (0,72 mmol)
  • Chlortrimethylammoniopropylmethacrylamid 638 mg (2,88 mmol)
  • Initiator Kallumpersulfat 5,7 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,3 mg
  • Ausbeute 361 mg (Syntheseprodukt 76)
  • M.G. 11000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 14 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 20%
  • N-Wert der Elementaranalyse 16,69%
    • Synthesebeispiel 77
  • Monomer Syntheseprodukt 16 500 mg (0,75 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 621 mg (3,00 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 5,6 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,2 mg
  • Ausbeute 330 mg (Syntheseprodukt 77)
  • M.G. 13000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 16 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 19%
  • N-Wert der Elementaranalyse: 16,79%
    • Synthesebeispiel 78
  • Monomer Syntheseprodukt 17 500 mg (0,85 mmol)
  • Herstellungsprodukt 14 702 mg (3,40 mmol)
  • Initiator Kaliumpersulfat 6,0 mg
  • Natriumhydrogensulfit 2,4 mg
  • Ausbeute 326 mg (Syntheseprodukt 78)
  • M.G. 9000
  • Die Menge des eingebrachten Syntheseprodukts 17 (berechnet ausgehend vom N-Wert der Elementaranalyse): 20%
  • N-Wert der Elementaranalyse 16,87%
    • Synthesebeispiel 79
  • Die Syntheseprodukte 15 und 18 wurden mit dem Herstellungsprodukt 14 durch Radikalpolymerisation copolymerisiert, um ein Hydrogel zu erzeugen.
  • Ein Paar Silan-behandelter Glasplatten (5 cm x 6 cm x 1 cm) und eine Dichtung wurden bereitgestellt. Das Syntheseprodukt 15 (0,23 g, 0,4 mmol), das Syntheseprodukt 18 (0,28 g, 0,4 mmol) und das Herstellungsprodukt 14 (1,49 g, 7,2 mmol) wurden in destilliertem Wasser gelöst, um eine 10 Gew.-%-ige Monomerlösung zu erzeugen, die danach mit 1N NaOH auf pH 7,4 eingestellt wurde. Ammoniumpersulfat (11 mg) wurde zugegeben und Stickstoffgas durch die Mischung geleitet, um darin befindliche Luft zu entfernen. Die Mischung wurde zwischen die Glasplatten injiziert, welche danach versiegelt wurden. Die Polymerisation wurde für 40 Stunden bei 60ºC durchgeführt. Das hergestellte Hydrogel wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, um nicht-reagierte Monomere zu entfernen. Die Menge des in das Syntheseprodukt 58 eingebrachte Monomers (Syntheseprodukte 15 und 18) betrug ungefähr 12%, berechnet ausgehend vom N-Wert (15,68%) der Elementaranalyse. Das Gel (Syntheseprodukt 79) wurde mittels einer Ultraviolettlampe sterilisiert, bevor es für die Kultivierung von tierischen Zellen verwendet wurde.
    • Testbeispiel 1: Bestimmung der Zelladhäsion-inhibierenden Aktivität
  • Die erfindungsgemäßen Propenamidderivate, die Polymere davon, die Copolymere davon und Salze davon besitzen die Aktivität zum Hemmen der Adhäsion von Zellen an Fibronectin oder Vitronectin. Ein Verfahren zum Bestimmen der Aktivität wird nachstehend beschrieben. Der hierin verwendete Kompetitionsassay ist im Gebiet der Biochemie oft angewendet worden und beispielsweise beschrieben in "Method in Enzymology", 1981, 82, Seiten 803-831; und J.P. KOKAI Nr. Hei 1-309682 und Hei 2-174797.
    • Experimentelles Verfahren 1. Herstellung von Fibronectin- oder Vitronectionbeschichteten Platten
  • Kommerziell erhältliches Fibronectin (vom Menschen stammend; gekauft von Seikagaku Kogyo K.K.) und Vitronectin (vom Menschen stammen; gekauft von Funakoshi Pharmaceuticals) wurden jeweils zu 1,0 µl/ml und 2,0 µl/ml mit PBS (NaH&sub2;PO&sub4;, 0,005 M + NaCl 0,07 M) verdünnt, 0,5 ml der erhaltenen, verdünnten Lösung wurde in eine Plastikplatte mit 24 Vertiefungen verteilt und bei 37ºC über Nacht inkubiert, um die Beschichtung der Platte durchzuführen. Danach wurde Rinderserumalbumin (BSA 1%) zugegeben, worauf eine Inkubation für eine Stunde bei 37ºC zum Hemmen einer nicht-spezifischen Adsorption, danach ein Waschschritt mit PBS auf die gewöhnliche Weise und eine ausreichende Entwässerung folgte, um eine Platte mit adsorbiertem Fibronectin oder Vitronectin zu erzeugen.
    • 2. Adhäsions-Inhibitionstest
  • Die durch Lyophilisation erhaltenen Propenamidderivate, die Polymere davon, die Copolymere davon oder Salze davon wurden mit Dulbecco's modifiziertem Eagles-Medium (nachstehend als "DMEM" bezeichnet) verdünnt, um Lösungen der Verbindungen mit Konzentrationen von 0, 0,25, 0,5, 1,0 bzw. 1,5 mg/ml zu erzeugen. Jede der Lösungen (0,25 ml) wurde auf die vorstehend hergestellte Platte verteilt, 0,25 ml einer Suspension von Blutgefäßendothelzellen (4 x 10&sup6; Zellen/ml) wurde zu der Platte zugegeben und für eine Stunde bei 37ºC inkubiert, um auf diese Weise die Adhäsion der Zellen zu verursachen. Die Platte wurde dreimal mit DMEM-Medium gewaschen, um nicht-adhärierte Zellen zu entfernen, danach wurden die adhärierten Zellen mit einer 0,025% EDTA-Trypsin-Lösung abgelöst und mit einer 2%-igen Trypanblau- Lösung gefärbt, um die Zahl der adhärierten Zellen zu zählen. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen 1 und 2 zusammengefaßt. Tabelle 1: Zelladhäsions-inhibierende Wirkung bezüglich Fibronectin (Zellen/Vertiefung) Verbindung Konzentration (mg/ml) zugegeben Syntheseprodukt Syntheseprodukt Syntheseprodukt Herstellungsprodukt (Zellen/Vertiefung; A: nicht mehr als 50 B: 51 bis 99 C: nicht weniger als 100) Tabelle 2: Zelladhäsions-inhibierende Wirkung bezüglich Vitrenectin (Zellen/Vertiefung) Verbindung Konzentration (mg/ml) zugegeben Syntheseprodukt Syntheseprodukt Herstellungsprodukt 16 Syntheseprodukt 15 (Zellen/Vertiefung; A: nicht mehr als 100 B: 101 bis 199 C: nicht weniger als 200
    • Testbeispiel 2: Bestimmung der Plättchenkoagulationsinhibierenden Aktivität
  • Die Plättchenkoagulations-inhibierende Wirkung der erfindungsgemäßen Verb£ndungen wurde in vitro unter Verwendung von plättchenreichem, humanen Plasma untersucht. Das experimentelle Verfahren wird nachstehend beschrieben.
    • Experimentelles Verfahren
  • Zu frischem, humanen Blut wurde 1/9 Volumen einer 3,8%-igen Natriumcitratlösung zugegeben, die erhaltene Mischung wurde zentrifugiert (1000 Upm; für 10 Minuten) und die obere Schicht als plättchenreiches Plasma abgetrennt. Die durch Lyophilisation erhaltenen Propenamidderivate, die Polymere davon, die Copolymere davon oder Salze davon wurden in physiologischer Kochsalzlösung gelöst, um mehrere Lösungen mit verschiedenen Konzentrationen im Bereich von 0 bis 1,5 mg/ml zu erzeugen. Jede der Lösungen (25 µl) wurde zu 200 µl Plasma zugegeben, für 3 Minuten bei 37 ºC inkubiert, danach wurde eine 50 µM ADP (Adenosindiphosphat)-Lösung oder eine 200 µg/ml Collagenlösung zugegeben, um das Ausmaß der Koagulation als durch ein Aggregometer bestimmten Transmissionsgrad zu bestimmen. Die so erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle 3 aufgelistet.
  • Rate der Koagulationsinhibition = (1-T/To) x 100%
  • To: Beobachtete Durchlässigkeit, wenn die Propenamidderivate, die Polymere davon, die Copolymere davon oder Salze davon nicht zugegeben wurden.
  • T: Beobachtete Durchlässigkeit, wenn die Propenamidderivate, die Polymere davon, die Copolymere davon oder Salze davon zugegeben wurden. Tabelle 3: Plättchenkoagulations-inhibierende Aktivität Verbindung zugefügt IC&sub5; o ADP-Stimulation (µg/ml) Collagen-Stimulation Syntheseprodukt Syntheseprodukt Syntheseprodukt Herstellungsprodukt IC&sub5; o (µg/ml): A: weniger als 10 B: 40 bis 80 C: mehr als 80
    • Testbeispiel 3: Bewertung der Vermehrung tierischer Zellen
  • Die in den Arbeitsbeispielen und den Vergleichsbeispielen hergestellten Substrate zum Kultivieren von tierischen Zellen wurden verwendet, um tierische Zellen zu kultivieren. Blutgefäßendothelzellen wurden in DMEM oder 10% fötales Kälberserum (FCS)-enthaltendem DMEM kultiviert. Die tierischen Zellen (1 x 10&sup4; Zellen/ml) wurden im Kulturmedium suspendiert. Die Suspension wurde zu einer Laborplastikschale zugegeben, zu welcher zuvor das vernetzte Polymer oder Copolymer zugegeben worden war, so daß die Konzentration der Zellen 1 x 10&sup4; Zellen/cm² war. Die Kultivierung wurde unter 5%-iger CO&sub2;-Atmosphäre bei 37ºC durchgeführt. Nach der Kultivierung wurde die Adhäsion und Vermehrung unter einem Phasenkontrastmikroskop beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt. Tabelle 4: Bewertung der Vermehrung tierischer Zellen Adhäsion Vermehrung Arbeitsbeispiel Syntheseprodukt Vergleichsbeispiel Herstellungsprodukt Adhäsion A: gut B: nicht gut C: schlecht Vermehrung A: gut B: nicht gut C: schlecht
  • Die Substrate unter Verwendung der Herstellungsprodukte 13 und 17 waren schlechter als diejenigen unter Verwendung der Syntheseprodukte 37, 58 und 79 sowohl hinsichlich der Adhäsion als auch Vermehrung in DMEM, welches kein FCS enthält.
    • Sequenzprotokoll
  • SEQ ID NO: 1
  • SEQUENZLÄNGE: 4
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch 4Abu
  • SEQUENZ:
  • Xaa Arg Gly Asp
  • 1
  • SEQ ID NO: 2
  • SEQUENZLÄNGE: 7
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 3
  • SEQUENZLÄNGE: 10
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKULS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 4
  • SEQUENZLÄNGE: 16
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 5
  • SEQUENZLÄNGE: 5 SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch 4Abu
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 6
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch Nva
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 7
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch Acp
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 8
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch 12- Aminolaurinsäure
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 9
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 10
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 11
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch p- Aminobenzoesäure
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 12
  • SEQUENZLÄNGE: 6
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKULS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Xaa ist substituiert durch Nva
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 13
  • SEQUENZLÄNGE: 6
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 14
  • SEQUENZLÄNGE: 7
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 15
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 16
  • SEQUENZLÄNGE: 6
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 17
  • SEQUENZLANGE: 4
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: C-terminales Fragment
  • SEQUENZ:
  • SEQ ID NO: 18
  • SEQUENZLÄNGE: 5
  • SEQUENZART: Aminosäure
  • TOPOLOGIE: linear
  • ART DES MOLEKÜLS: PEPTID
  • ART DES FRAGMENTS: internes Fragment
  • MERKMALE:
  • MERKMALSSCHLÜSSEL: modifizierte Position
  • LAGE: 1
  • ERMITTLUNGSMETHODE: E
  • SONSTIGE ANGABEN: Ala ist substituiert durch bAla
  • SEQUENZ:

Claims (19)

1. Propenamidderivat-Monomer der folgenden allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die folgenden allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentlicher Struktureinheit in der Seitenkette oder Salze davon:
Formel (I):
R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
Formel (II-a):
-[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n-[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H)-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y))n -[Z]-[R&sup5;]--
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gyl, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amine-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann.
2. Polymer, im wesentlichen bestehend aus dem Propenamidderivat-Monomer nach Anspruch 1 oder Salze davon, worin das Molekulargewicht des besagten Polymers 3000 bis 300000 ist.
3. Polymer nach Anspruch 2, worin das Molekulargewicht im Bereich von ungefähr 3000 bis 200000 liegt.
4. Vernetztes Polymer des Propenamidderivat-Monomers nach Anspruch 1 oder Salze davon, welches durch Copolymerisieren des Propenamidderivat-Monomers mit einem polyfunktionellen Monomer, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Dimethylacrylaten, Diacrylaten, Dimethacrylamiden, Diacrylamiden und Divinylbenzol, erhalten wird.
5. Vernetztes Polymer oder Salze davon nach Anspruch 4, worin die von dem polyfunktionellen Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 30 mol-% enthalten ist.
6. Copolymer eines Propenamidderivat-Monomers der allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentliche Struktureinheit in der Seitenkette mit einem anionischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (III) oder Salze davon:
Formel (I):
R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
Formel (II-a):
-[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]--
Formel (III):
H&sub2;C=CR&sup6;-[CO]-[W]-R7
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeuten, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
R&sup6; ein Wasserstoffatom oder eine substitutierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet;
W -O- oder -NH- bedeutet;
R&sup7; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Carboxyl-, Sulfo- und phosphorhaltigen Gruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann; und
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist.
7. Copolymer nach Anspruch 6, worin das Molekulargewicht im Bereich von ungefähr 3000 bis 200000 liegt.
8. Copolymer nach Anspruch 6, worin die von dem Propenamidderivat-Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 90 mol-% enthalten ist.
9. Vernetztes Polymer des Propenamidderivat-Monomers nach Anspruch 6 oder Salze davon, welches durch Copolymerisieren des Propenamidderivat-Monomers und des anionischen Monomers mit einem polyfunktionellen Monomer, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Dimethyacrylaten, Diacrylaten, Dimethacrylamiden, Diacrylamiden und Divinylbenzol, erhalten wird.
10. Vernetztes Copolymer oder Salze davon nach Anspruch 9, worin die von dem Propenamidderivat-Monomer stammende Einheit in einer Menge von ungefähr 0,1 bis 90 mol-% und die von dem polyfunktionellen Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 30 mol-% enthalten ist.
11. Copolymer eines Propenamidderivat-Monomers der allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die allgemeine Formel (II-a) oder (II-b), als wesentliche Struktureinheit in der Seitenkette mit einem kationischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (IV) oder Salze davon: Formel (I): R¹R²C=CR³-CO-(NH]--
Formel (II-a):
-[R&sub4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-(Y])n -[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H]-[CO)-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]--
Formel (IV):
H&sub2;C=CR&sup8;-[CO]-[W]-R&sup9;
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeuten, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
R&sup6; ein Wasserstoffatom oder eine substitutierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet; W -O- oder -NH- bedeutet;
R&sup8; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylgruppe durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, Carbonyl-, Amino-, Hydroxyl-, Nitro- und Cyanogruppen, substituiert sein kann;
R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amino-, Imino-, Nitrilo-, Amidino-, quartären Ammonium- und Ammoniumgruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann; und
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist.
12. Copolymer nach Anspruch 11, worin das Molekulargewicht im Bereich von ungefähr 3000 bis 200000 liegt.
13. Copolymer nach Anspruch 11, worin die von dem Propenamidderivat-Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 90 mol-% enthalten ist.
14. Vernetztes Polymer des Propenamidderivat-Monomers nach Anspruch 11 oder Salze davon, welches durch Copolymerisieren des Propenamidderivat-Monomers und des kationischen Monomers mit einem polyfunktionellen Monomer, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Dimethacrylaten, Diacrylaten, Dimethacrylamiden, Diacrylamiden und Divinylbenzol, erhalten wird.
15. Vernetztes Copolymer oder Salze davon nach Anspruch 14, worin die von dem Propenamidderivat-Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 90 mol-% und die von dem polyfunktionellen Monomer stammende Einheit in einer Menge von 0,1 bis 30 mol-% enthalten ist.
16. Zusammensetzung zum Hemmen der Adhäsion von tierischen Zellen, welche umfaßt:
(A) eine pharmazeutisch wirksame Menge mindestens eines Mitglieds, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:
(1) einem Propenamidderivat-Monomer der folgenden allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die folgenden allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentliche Struktureinheit in der Seitenkette oder Salze davon:
Formel (I):
R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
Formel (II-a)
-[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]--
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeuten, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
2) einem Polymer des Propenamidderivats der Formel (I), worin das Molekulargewicht des besagten Polymers 3000 bis 30000 ist,
(3) einem Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem anionischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (III) oder Salze davon:
Formel (III)
H&sub2;C=CR&sup6;-[CO]-[W]-R&sup7;
worin R&sup7; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- oder Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Carboxyl-, Sulfo- und phosphorhaltigen Gruppen, substituiert sein können.
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist, und
(4) einem Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem kationischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (IV) oder Salze davon:
Formel IV:
H&sub2;C=CR&sup8;-[CO]-[W]-R&sup9;
worin R&sup8; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylgruppe durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, Carbonyl-, Amino-, Hydroxyl-, Nitro- und Cyanogruppen, substituiert sein können;
W -O- oder -NH- bedeutet;
R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amino-, Imino-, Nitrilo-, Amidino-, quartären Ammonium- und Ammoniumgruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist; und
(B) mindestens ein Mitglied aus der Gruppe, bestehend aus pharmazeutisch annehmbaren Bindemitteln, Trägern und Verdünnungsmitteln.
17. Zusammensetzung zum Hemmen der Koagulation von Blutplättchen, welche umfaßt:
(A) eine pharmazeutisch wirksame Menge mindestens eines Mitglieds, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:
(1) einem Propenamidderivat-Monomer der folgenden allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid, dargestellt durch die folgenden allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentliche Struktureinheit in der Seitenkette oder Salze davon:
Formel (I):
R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
Formel (II-a):
-[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H)-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]-
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeuten, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder einer ungesättigten Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann.
(2) einem Polymer des Propenamidderivats der Formel (I), worin das Molekulargewicht des besagten Polymers 3000 bis 300000 ist,
(3) einem Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem anionischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (III) oder Salze davon:
Formel (III)
H&sub2;C=CR&sup6;-[CO]-(W)-R&sup7;
worin R&sup7; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- oder Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Carboxyl-, Sulfe- und phosphorhaltigen Gruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist, und
(4) einem Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem kationischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (IV) oder Salze davon:
Formel IV:
H&sub2;C=CR&sup8;-[CO]-[W]-R&sup9;
worin R&sup8; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylgruppe durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, Carbonyl-, Amino-, Hydroxyl-, Nitro- und Cyanogruppen, substituiert sein kann;
W -O- oder -NH- bedeutet;
R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amino-, Imino-, Nitrile-, Amidino-, quartären Ammonium- und Ammoniumgruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist; und
(B) mindestens ein Mitglied aus der Gruppe, bestehend aus pharmazeutisch annehmbaren Bindemitteln, Trägern und Verdünnungsmitteln.
18. Substrat zum Kultivieren von tierischen Zellen, welches als wirksamen Bestandteil mindestens ein Mitglied umfaßt, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:
(1) einem vernetzten Polymer eines Propenamidderivat-Monomers der folgenden allgemeinen Formel (I) mit einem adhäsiven Peptid dargestellt durch die folgenden allgemeinen Formeln (II-a) oder (II-b), als wesentliche Struktureinheit in der Seitenkette oder Salze davon, welches durch Copolymerisieren des Propenamidderivats mit einem polyfunktionellen Monomer erhalten wird:
Formel (I):
R¹R²C=CR³-CO-[NH]--
Formel (II-a):
-[R&sup4;]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[H]; oder
Formel (II-b):
[H]-[CO]-([X]-Arg-Gly-Asp-[Y])n -[Z]-[R&sup5;]--
worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoff- oder Halogenatom, eine Methyl-, Ethyl- oder Carboxymethylgruppe bedeutet;
X und Y jeweils einen Aminosäurerest, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Cly, Val, Asn und Pro, oder ein Polypeptid, bestehend aus mindestens zwei Aminosäureresten, bedeuten, worin die besagten Aminosäurereste ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ser, Gly, Val, Asn und Pro;
Z -O- oder -NH- bedeutet;
worin sowohl R&sup4; als auch R&sup5; eine lineare oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 11 Kohlenstoffatomen oder eine Arylengruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeuten, worin die Alkylen- und Arylengruppen durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, einer Carbonyl-, Carboxyl-, Amino-, Hydroxyl-, Sulfo-, Aryl-, Nitro- oder Cyanogruppe, oder eine ungesättigte Doppel- oder Dreifachbindung substituiert sein können;
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann,
worin das Molekulargewicht des besagten Polymers 3000 bis 300000 ist,
(2) einem Polymer des Propenamidderivats der Formel (I), worin das Molekulargewicht des besagten Polymers von 3000 bis 300000 ist,
(3) einem vernetzten Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem anionischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (III) oder Salze davon:
Formel (III)
H&sub2;C=CR&sup6;-[CO]-[W]-R&sup7;
worin R&sup7; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 11 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- oder Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Carboxyl-, Sulfo- und phosphorhaltigen Gruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist, und
(4) einem vernetzten Copolymer des Propenamidderivats der Formel (I) mit einem kationischen Monomer, dargestellt durch die folgende allgemeine Formel (IV) oder Salze davon mit einem funktionellen Monomer:
Formel IV:
H&sub2;C=CR&sup8;-[CO]-[W]-R&sup9;
worin R&sup8; ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkylgruppe durch ein oder mehrere Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Halogenatom, Carbonyl-, Amino-, Hydroxyl-, Nitro- und Cyanogruppen, substituiert sein kann;
W -O- oder -NH- bedeutet;
R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 12 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, worin die Alkyl- und Arylgruppen durch mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amino-, Imine-, Nitrilo-, Amidino-, quartären Ammonium- und Ammoniumgruppen, substituiert sein können;
[ ] bedeutet, daß jede entsprechende Gruppe oder jeder entsprechende Rest dazwischen vorhanden oder abwesend sein kann;
worin das Molekulargewicht des besagten Copolymers 3000 bis 300000 ist.
19. Substrat nach Anspruch 18, worin das vernetzte Polymer oder vernetzte Copolymer in der Form eines Hydrogeis in einer wäßrigen Lösung vorliegt.
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