JPH03500419A - 多特異抗白血球結合体及び哺乳動物用非経口的注射剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 感染性及び炎症性病変の検出及び治療 発明の背景 本発明は、炎症性又は感染性病変に対する少なくとも１つの診断的又は治療的薬 剤を目的とする薬剤及び方法に関する。２以上の異なる白血球細胞型に特異的な 長持異（ｐｏ１７ｓｐｅｃｉｌｉｃ）抗体複合体は本発明において用いられる少 なくとも１つ以上の診断的又は治療的薬剤に結合される。

白血球は感染又は炎症の局所的部位に多数集積するので、血液から白血球を取り 出して適当な指示物質（１＋＋−１１１が都合よく用いられる）で白血球を標識 し、その後それを血液にもどすことにより、そのような部位の検出が可能である 。人体に標識化白血球が再分布するのに十分な一定時間の後、被験体を適切な装 置で走査し、標識化白血球の局在性を検出する。前記方法は有効ではあるが、白 血球の分離、標識化及び特に再注入後の人体への再分布に時間がかかるために多 くの時間が消費される。

参考として全体を本明細書に組み込まれる米国特許第４、６３４．５８６号［グ ツドウィン（Ｇｏｏｄｖｉｎ）等］には、杭内血球単特異抗体と７−線放射放射 性金属キレートとの反応性非殺白血球結合体を患者に注射し、前記結合体が白血 球に局在化するのを待って患者に前記結合体に対する抗体を注射してバックグラ ウンドの非局在化結合体の血液をクリアーし、シンチスキャンにより白血球を明 視化することによる、白血球の放射線免疫影像化が記載されている。

前記先行技術においては、バックグラウンドに対する目標物質の割合が不十分で あるので白血球影像化は非常に制限される。第２の抗体クリアランスを用いて局 在化割合を増加させ得ることが前記刊行物に記載されている。

しかし、各標的抗体は特異的白血球細胞型、顆粒性白血球、単核白血球、Ｂ−リ ンパ球又はＴ−リンパ球のいずれかにのみ結合するので、バックグラウンドに対 する標的割合はなお問題がある。従って、標的部位に結合されていないバックグ ラウンド中の特定の白血球細胞に対して非常に反応性であり特異的である多くの 抗体が存在する。なぜなら感染又は炎症部位において特定な白血球細胞型が測定 できる濃度存在しないからである。

従って病変の、より有効な検出及び／又は治療を行うために高度に有効なそして バックグラウンドに対する増大した標的割合を有する、炎症又は感染病変に対す る影像剤又は治療剤を標的にする方法の必要性が存在し続は本発明の目的は少な くとも１つの診断的又は治療的薬剤に結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）　した長持異 抗体を供給することであり、前記抗体は、２以上の異なった白血球細胞型に選択 的に結合する、バックグラウンドに対する標的（ｌｉｎｇｅｒ）の増大した割合 を有し、炎症性又は感染性病変の標的用である。

本発明の他の目的は少なくとも１つの診断的又は治療的薬剤に結合した長持異抗 体を感染性又は炎症性病変に対しての高度に効率の良いそしてバックグラウンド に対する標的の増大した割合を有する標的にする方法を与えることである。

本発明の他の目的は感染性又は炎症性病変の、より有効な検出及び／又は治療の 方法を与えることである。

本発明の他の目的は、下記の記載によって当業者には、より明らかになるであろ う。

発明の要旨 本発明のこれらの又は他の目的は、２以上の異なる実質的に単特異抗体又は抗体 フラグメントの免疫反応性長持異的複合体を含み、少なくとも１つの影像剤（ｉ ｍａｇｉｎｇａｇｅｎｔ）に結合（ｃｏｎｊｕｇｘｌｅ）　シた、白血球集積（ ａｃｃｒｅ日ｏｎ）の中心（ｆｏｃｕｓ）を標的にする長持異抗体−薬剤結合物 質を供給することにより達成され、２以上の前記抗体又は抗体フラグメントは異 なる白血球細胞型に特異的に結合する。

本発明は又、哺乳動物に非経口的に、長持異抗体−薬剤結合物質の標的に有効な 量を注射することを包含する、炎症性又は感染性病変の診断薬を標的にする方法 を提供する。

本発明は又、少なくとも１つの白血球細胞型に特異的に結合する少なくとも１つ の免疫反応性の実質的に単特異的抗体又は抗体フラグメントを含む、少なくとも １つの治療的抗微生物剤（ｘｎｌｉｍｉｃ＋ｏｂｉａｌ）及び／又は放射性同位 元素に結合させた、白血球集積の中心を含む感染病変を標的にし、処置するため の杭内血球抗体−薬剤結合体を供給する。

そのような病変を有する患者に前記結合体を治療的有効量非経口的に注射をする ことを包含する感染病変を処置する方法も又、与える。長持異杭内血球抗体／フ ラグメント混合物及び／又は複合体も又、本発明による治療用標的担体として用 いられる。

又、本発明は前記方法を実施するのに用いる無菌の注射製剤及びキットを与える 。

発明の詳細な記載 白血球集積の中心を標的にする長持異抗体−薬剤結合物質の使用に関する、グツ ドウィン（Ｇｏｏｄｖｉｎ）等の先行技術の影像法の改良を与える。感染性又は 炎症性病変の発生に伴われる、異なる白血球細胞型（例えば顆粒性白血球、単核 白血球、Ｔ−及びＢ−リンパ球）は病変の発生を起こす病原体の性質及び／又は 病変年齢によって、炎症性又は感染性病変において非常に異なる割合でしばしば 存在する。グツドウィンにより示されたように単特異抗体の使用は、病変部位で の白血球数の一部のみが標的抗体に結合するなら病変の非効率的な標的になり、 このことは標的のバックグラウンドに対する標的割合（局在化割合）を減少させ る。もし特異性の正しい割合を用いると、抗体及び異なる白血球特異性の混合物 の使用により標的部位に到達する注射用量の百分率を改良できるが、病変が主と して単一の白血球細胞型を含んでいると、さらに、非標的白血球への結合が増加 され得る。

本発明はこの矛盾を、２以上の異なる白血球細胞型に結合できる長持異的標的抗 体複合体を用いることによって解決した。白血球細胞型の混合であるにもかかわ らず、抗体−薬剤結合物質の影像剤はそれによって高効率で標的部位に局在化し バックグラウンドに対する標的割合を増加する。

長持異標的抗体は、以上の異なった実質的に単特異抗体又は抗体フラグメントを 含み、２以上の抗体又は抗体フラグメントは異なる白血球細胞型に特異的に結合 する。

従って、その複合体の少なくとも１つの抗原部位は第１の白血球細胞型に結合し 、一方、同じ標的複合体の少なくとも第２の抗原結合部位は異なる白血球細胞型 に結合する。そのような複合体を本明細書では「杭内血球複合体」と表す。抗体 複合体は、２以上の異なる抗原又は同じ白血球細胞型の同じ抗原のエピトープと 結合する抗体及び／又はフラグメントも含む。白血球細胞型は顆粒性白血球、単 核白血球、Ｂ−リンパ球及びＴ−リンパ球を含む。

実質的に単特異的な、好ましくはモノクローナルの本発明の複合体をつくるのに 用いられる抗体は感染性又は炎症性病変に最適な結合を、又、非標的部位には最 小の結合を保証するように調整される。試薬をつける診断的用途によって、白血 球細胞型特異性、抗原特異性及び特定の白血球型に存在する抗原のエピトープの 特異性の混合及び標的抗原及び／又は白血球型の結合定数すべてを本発明により 試薬の選択性及び標的効率をうまく合わせるのに用いられる。

本発明で用いられる影像剤は、二特異的、三特異的又はより一般的には子持異的 抗体／フラグメント複合体を含み得て、映像放射性同位元素又は常磁性種に結合 した。

本明細書で用いる「抗体」という用語は抗体フラグメントも含み、従ってこの議 論において互換的に用いられる「抗体／フラグメント」と同意味である。抗体は いずれかのクラスの完全な（ｗｈｏｌｅ）免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ、Ｉ ｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤＳＩｇＥ、キメラ抗体又は二元抗原又は多元抗原を有する ハイブリッド抗体又はエピトープ特異性、又はフラグメント、例えばＦ（Ｉｌｌ ’）２　、Ｆ　（ｌｂ）ｚ・、Ｆｌｂ′、Ｆｌｂ等であり得、ハイブリッドフラ グメントを含み、又、すべての免疫グロブリン又は、特異的抗原に結合して複合 体を形成することによって抗体のように作用する天然の、合成された又は一般的 に遺伝子操作されたたんばく質を含む。

抗体は、好ましくは、例えば、抗原をクロマトグラフィーカラム充填物質、例え ば、セファデックスに結合させ、その抗血清をカラムに通し、それによって特異 的な抗体を保有させ、他の免疫グロブリン及び汚染物質を分離して除き、次にカ オトロピック（ｃｈａｔ＋ｏｐｉｃ）剤で溶出させ純粋な抗体を回収させ、任意 にはさらに精製することによる従来技術の方法で好ましくは親和精製された抗血 清調製物質を含む。

モノクローナル抗体も本発明において用いるのに適しており、モノクローナル抗 体は高特異性なため好ましい。

モノクローナル抗体は、哺乳動物を免疫遺伝的抗原製剤で免疫化、免疫リンパ又 は膵臓細胞と不死の骨髄腫セルラインとの融合及び特異的ハイブリドーマクロー ンの単離のための、現在では一般に従来方法と考えられる方法によって容易に製 造される。本発明における有用性に影響を与えるのは主に抗体の抗原特異性であ るので、モノクローナル抗体を製造する、異種間の融合、高変異的領域の遺伝子 操作のような、より非通常的な方法は除かれない。

本発明は子持異抗体−薬剤結合体を形成する抗原特異性フラグメントの使用も構 想するものである。抗体フラグメントは従来方法で完全（ｗｈｏｌｅ）免疫グロ ブリンをペプシン又はパパイン消化によりてつくることができる。

抗体フラグメントは抗体をペプシンでの酵素分割によってＦ　（ｘｂ’）、で表 される５Ｓフラグメントを与えることによって生成される。このフラグメントは チオール還元剤、任意にはジスルフィド結合を開裂することによって生じるメル カプト基の遮断基を用いてさらに分割されて３．５Ｓ　Ｆ２ｂ−一価フラグメン トが生成される。それに代わり、ペプシンを用いての酵素分解で２つの一価Ｆａ ｂフラグメント及びＦｃフラグメントを直接生成する。これらの方法は特にゴー ルデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅ＋ｇ）による米国特許第４．０３６．９４５及 び４．３３１．６４７号及びそれらに含まれている引例文献に記載されている。

前記米国特許、ニソノフ（旧５ｏｎｏＨ）等のＡｔｃｈ、　Ｂｉｏｔｂｔｍ、Ｂ ｉｏｐｂｙｓ第８９巻、第２３０頁（１９６０年）、ポーターＢｉｏｃｈｅｍ、 　Ｊ、第７３巻、第１１９頁（１９５９年）及びニブルマン（Ｅｄｅｌｍａｎ） 等の「メソッズ・イン・イムノロシイ・アンド争イムノケミストリーＪ　（Ｍｅ ｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ７　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｃｂｔｍｉｔ ｌｒ７）、第１巻、第４２２頁［アカデミ−・プレス（＾ｃｓ＋Ｌ　Ｐ＋ｔｓｓ ）］（１１９６７年及び公知技術は本明細書に参考として組み込まれる。

フラグメントの親杭体（ｐａｒｅｎｔ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）を生じさせた白 血球に対して特異性を維持する限り、重鎮を分離して一価の軽−重鎮フラグメン トを形成させ、さらにフラグメントを分解させるような抗体を分解する他の方法 又は他の酵素的、化学的又は遺伝子的操作も用いられる。

白血球抗原に対する抗体は患者からの白血球を宿主に接種させることによって生 成させる。例えば、ヒトに用いる抗体はマウス又は他の哺乳動物にヒト白血球を 免疫化させることによってつくられる。抗ヒト白血球血清は宿主から回収され、 親和精製されて、複合体をつくるポリクローナル抗体が与えられる。その代わり に、膵臓細胞は免疫化された宿主から摂取され体細胞ハイブリッド化技術を用い て、適した腫瘍セルラインと融合させ杭内血球抗体を生成するハイブリドーマを 製造する。これらのハイブリドーマを単離し、サブクローニングし、培養してモ ノクローナル抗体を生成させる。

白血球抗原を認識し、白血球抗原に結合するモノクローナル抗体又はフラグメン トは市販されており、又は最初にケフラー（Ｋｅｈｌｅ＋）、　Ｂ及びミルステ ィン（Ｍｔｌｓｆｅｉｎ）Ｃによってネーチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　（１９７ ５年）第２５６巻、第４９５−４９７頁に記載され、及びケネット（Ｋｅｎｎｅ Ｌｌ）、　Ｔ、　Ｊ。

等編集によるプレナム（Ｐｌｅｎｕｍ）　（１９８０年）、「モノクローナル抗 体」に詳細に記載された体細胞ハイブリッド化技術によって製造される。市販さ れている、白血球抗原に対するモノクローナル抗体は、正常Ｔ−リンパ球に結合 するＯＫＴ抗Ｔモノクローナル抗体［オルソ・ファーマシューティカル・カンパ ニー　（Ｏｒｔｈｏ　ＰｈａｎｎａｃｕｌｉｕｌＣｏｍｐｉｎ７）により市販］ 、ＡＴＣＣ託番号ＨＢ４４、ＨＩ５５、ＨＢＩ２、ＨＩ３［１及びＨＩ２を有す るハイブリドーマにより生産されるモノクローナル抗体、Ｇ７Ｅ１１、Ｗ８Ｅ７ 、ＮＫＰ１５及びＣＤ２２［ベクトン・デイツキンソン（Ｂｅｃｋｏｎ　Ｄｉｃ ｋｉｎｓｏｎ）　；ＮＥＮ９．４　［二ニー・イングランド・ニューフレアー（ Ｎ！ｖＥ＋＋ｇｌｘｎｄ　Ｎｕｃｌｅｘｒ）］　；及びＦＭＣＩＩ　［セラ・ラ ボラトリーズ（Ｓｅｒ＊　Ｌｘｂｓ）］　で表される。

イムノチック（Ｉｍｍｕｎｏｊｅｃｋ）　［マルセイユ、フランスにあり、ベル ・フリーズ（Ｐｅｌ　Ｆｒｅｅｚｅ）　、ブラウン・ディーア（Ｂｒｏｗｎ　Ｄ ｅｅｄ）ウィスコンシン州（Ｗ＋）　、米国を含む世界的に販売をしている］の カタログに、市販のモノクローナル抗白血球抗体−それらの多くは本発明の複合 体又は治療薬剤を製造するのに適している−が載っている。これらはＴ細胞、活 性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、単核白血球及び顆粒性白血球に特異的に結合する抗体を含 み、それらの部分母集団も含む。一定の抗体は１より多い型の白血球、例えば、 単核白血球及び顆粒性白血球、Ｂ細胞及び顆粒性白血球、Ｔ細胞及びＢ細胞、Ｔ 細胞及び顆粒性白血球、Ｔ細胞及び単核白血球、及び顆粒性白血球及びＢ細胞等 に共通した抗原に結合する。イムノチックにより製造され、販売された抗体は他 の市販されているクローンからの他の抗体と同様である。

適する抗Ｔ細胞抗体は、ＣＤＩ　、ＣＤ２　、ＣＤ４　、ＣＤ６、ＣＤ？又はＣ Ｄ８抗原に結合する抗体を含む。好ましい抗Ｔ細胞抗体はＣＤ３抗原及びＣＤ５ 抗原に結合するものである。

単核白血球及び顆粒性白血球の両方に結合する好ましい抗体は特にＣＤＷ＋　４ 抗原に特別に結合するモノクローナルである。Ｂ細胞に結合する好ましい抗体は ＣＤｌ９又はＣＤ２＋抗原に結合する抗体を含む。活性化Ｔ細胞に結合する抗体 はＣＤ２５又はＣＤ２６抗原に結合するモノクローナルを含む。

そのＣＤ抗原は特別な白血球特異性を有する抗体を決定する白血球決定子である 。同じＣＤ抗原上の同じエピトープに結合する１対の抗体は同じ白血球細胞型に 交叉遮断結合する。単核白血球、１３　＋）ンバ球及び活性化Ｔ　−ＩＪンパ球 に共通のＩａ　（ＨＬＡ−ＤＲ）　組織適合抗原に特異的に結合する抗体は抗１ （ＬＡ−ＤＲクラスＩＩ抗体と分類され、一定の用途にと（に有用である。

白血球抗原に対する市販のモノクローナル抗体は、本発明の複合体を製造するの に用いられる適した抗体が、種又は１ｇクラスに関して限定されることを意図し ていないにもかかわらず、一般的にはハッカネズミ又はラット由来のものであり 、一般的にはＩｇＧｓ又はＩＢＭ＠である。一般的に、抗体は、当技術分野おい て公知の多くの従来技術を用いて、はとんどの抗原に対して生成される。哺乳動 物の体での炎症又は感染部位において十分の濃度見出だされる白血球抗原に結合 する抗体は本発明において用いられる標的多特異抗体をつくるのに用いることが できる。

比較的高免疫活性の、すなわち、結合定数が約１０５１１モル以上、好ましくは 約１０’以上で、白血球抗原に対して高免疫特異性、すなわち、約４０％以上、 好まし゛くは約６０％以上、より好ましくは約７０−９５％を有する抗体を用い るのが一般的に好ましい。

本発明においていくらか低い結合定数を有する抗体を使用することも一定の用途 には好ましい。高結合定数を有する抗体は炎症又は感染部位の白血球に強固に結 合するだけでなく、循環系、骨髄又は正常組織に存在する白血球にも結合する。

一方、より低い結合対数を有する抗体は、質量作用効果の型によって、主に、病 変部位での濃縮された白血球中心に結合する傾向を有する。このことは、時期尚 早のクリアランス及び影像標識の非標的集積又は、下記の治療用の治療薬剤を減 らし、従って病変を標的にするための有効量を増加させる。

影像用抗体複合体は単純なグルタルアルデヒド結合から、より科学的精密であり 簡潔さを備えた、官能基間の特異的結合までの種々の従来方法により製造される 。抗体及び／又は抗体フラグメントは好ましくは相互に直接、又は短い又は長い リンカー一部分を通して、抗体／フラグメントの１以上の官能基、例えばアミン 、カルボキシル、フェニル、チオール又は水酸基を通して共有結合する。グルタ ルアルデヒドの他に種々の従来のリンカ−１例えばジイソシアネート、ジイソチ オシアネート、ビス（ヒドロキシスクシンイミド）エステル、カルボジイミド、 マレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステル等が用いられる。

簡単な方法は、グルタルアルデヒドの存在下で抗体／フラグメントを混合し、抗 体複合体を生成させる方法である。初期のシッフ塩基結合は、例えば硼化水素に よって第二アミンに還元されて安定化される。この方法は、たんばく質の他の複 合体、例えば、免疫組織化学上の用途又は免疫学的検定上の用途のためのペルオ キシダーゼ−抗体複合体を製造するのに通常用いられている。ジイソシアネート 又はカルボジイミドはグルタルアルデヒドの代わりに非部位特異的リンカ−とし て用いられる。

二特異抗体は、従来の種々の方法、例えばジスルフィド開裂及び完全１ｇＧの混 合物又は、好ましくはＦ（ｘｂ’）２フラグメントリ再生成、１以上のクローン を融合して１より多い特異性を有する免疫グロブリンを生成するポリオーマウィ ルス（ｐｏ１７ｏｍｍｓ）を生成させる１より多いクローンの融合及び遺伝子操 作によりつくられる。二特異抗体は１以上の白血球細胞型に結合できる。二特異 （ハイブリッド）抗体フラグメントは、異なる抗体の還元的開裂により生じるＦ ｘｂ’フラグメントの酸化的結合によって製造される。これらの一部は、原抗体 が生じる両方の抗原に特異的なフラグメントを含む。このことは、２つの異なる 抗体のペプシン消化により生じる２つの異なるＦ（ｘｂ’）２フラグメントを混 合し、Ｆ！ｂ”フラグメントの混合物をつくるための還元的開裂、次に原抗原の それぞれに特異的なＦａｂ’部分を含むハイブリッドフラグメントを含有するＦ （ａｂ’）、フラグメントの混合物を生成するためのジスルフィド結合の酸化的 再生成によって生産される２つの異なるＦ（ｇｂ’）２フラグメントを混合する ことにより都合よく行われる。そのようなハイブリッド抗体フラグメントを製造 する方法は、フェテアヌ（Ｆｅｌｅａｎｕ）、［ラベルド・アンチボディース・ イン・バイオロジイ・アンド・メディスン（Ｌｘｂｅｌｌｅｄ　Ａｎｔｉｂｏｄ ｉｅｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇ７ｓｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　Ｊ　、第３２１− ３２３頁［マクグロウヒル・インターナショナル・ブック・カンパニー（ＭｃＧ ＋ｘｗ−ＨｉｌｌＩｎｊ、Ｂｋ、　Ｃｏ、）　、＝ニーヨーク等、１９７８年］ ；ニソノフ等、アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィ ジックス（Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｂｙｓ、）、第９３巻、第４７ ０頁（１９６１年）；ハンメルリング等、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタ ル・メディスン（１，Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、）　、第１２８巻、第１４６１頁（１９６８年）及び米国特許第４、３ ３１．６４７号に記載されている。

より選択的な結合は、マレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステルのような 異種二官能価のリンカ−を用いて達成される。後者の抗体／フラグメントとの反 応は抗体／フラグメントのアミン基を誘導し、その誘導体は次に、遊離のメルカ プト基を有する抗体Ｆｊｂフラグメント［又は、より大きなフラグメント又は、 例えばツラウツ試薬（丁ｒｘｎｌ’ｓ　Ｒｅｘｇ２ｎｌ）によりここに付着され たメルカプトを有する完全な免疫グロブリン］と反応される。

そのようなリンカ−は同じ抗体中の基に交叉結合はよりしにくく、結合の選択性 を改善する。

抗原結合部位から離れた部位で抗体／フラグメントを結合させるのは都合がよい 。これは、例えば前記のように、開裂した鏡開メルカプト基への結合によって達 成される。

他の方法は、その炭水化物部分が、酸化されている抗体を少なくとも１つの遊離 アミン基を有する他の抗体で反応させることを包含する。原シッフ塩基（イミン ）結合を生じる。その結合は、第二アミンへの還元、例えば硼化水素還元によっ て好ましくは安定化され、最終複合体を生成する。そのような部位特異性結合は 小分子又はポリペプチドについて、又はポリマー支持体についての米国特許第４ ．６７１．９５８号に、より大きなアデンド（ａｄｄｅｎｄ）についての米国特 許第４．６９９．７８４号に記載されている。

本発明の二特異抗体の種々の型に含まれるのは下記のものであり、それらは一定 の用途に特異に有用である：例えば骨髄炎の検出及び治療用の、単核白血球及び 顆粒性白血球に特異的な抗体／フラグメントの複合体；例えばクローン病の検出 及び治療用の、Ｂ細胞及び単核白血球に特異的な抗体／フラグメントの複合体； 例えばサルコイド−シスの検出及び治療用の、Ｔ細胞及びＢ細胞に特異的な抗体 ／フラグメントの複合体；例えば結核性病変の検出及び治療用の、単核白血球及 びリンパ球に特異的な抗体／フラグメントの複合体及びわからない起因による発 熱に関係する感染、例えば肉芽種感染、結核性病変、細菌感染等の検出及び治療 用のＩａ（ＤＲ）組織適合抗原及び顆粒性白血球に特異的な抗体／フラグメント の複合体。

同様の反応が、複数の抗体及び／又は抗体フラグメント、例えば種Ｆｅｂ又はＦ （ａｂ’）２フラグメントを互いに結合させて多特異複合体又は白血球細胞型に 対して１つより多いエピトープ特異性を有する多特異複合体又は複合体を生成す るのに用いられ、標的病変に対して結合親和力又は効率を増加させる。二特異複 合体は例えば異種三官能性マレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステルリン カ−を用いて、第３．４又はそれ以上の白血球細胞型に特異的な抗体／フラグメ ントに結合され、アミン基を誘導させ、次にその誘導体を遊離のメルカプト基を 有するフラグメントで反応させ、適宜、２−イミノチオラン（２−ｉｍｔｎｏｊ ｈｉｏｌｍｎｅ）のような試薬を導入される。他の結合方法は二特異複合体形成 の記載を基に当業者には容易に明白になるものであり、少しの変更とそのような 方法の適用を必要とするのみである。

本発明の三特異又は子持異抗体複合物の種々の型のなかで包含されるものは下記 のものであり、それらは一定の用途には特異に有用である：例えば拒絶反応浸潤 の検出及び治療用の、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び単核白血球に特異的な抗体／フラグメ ントの複合体；例えば慢性感染の検出及び治療用の、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単核白血 球及び顆粒性白血球に特異的な抗体／フラグメントの複合体；例えば甲状腺炎、 拒絶反応浸潤及び結核病変の治療用の１８（ＤＲ）抗原、顆粒性白血球及びＴ− １抗原に特異的な抗体／フラグメントの複合体。

抗体複合体は、診断用影像剤としての用途のために、シンチグラム造影用放射性 同位元素又は磁気共鳴影像増強剤で標識するか又は、結合させるか又は結合用に 適用される。生体内用の、たんばく質を標識するのに適する、放射性同位元素を 使って識別する従来の方法は、複合体を標識するのに一般的に適している。この 方法は、例えば、従来技術を用いるか又はより精巧な方法学を用いて、か又は放 射性金属又は常磁性イオン用のキレート化剤を付着させることによって達成され る。そのようなキレート化剤及びそれらを抗体に付着する方法は当業者によく知 られた方法であり、とりわけ、チルズ（Ｃｂｉｌｄｓ）等のＪ。

Ｎｕｃ、　Ｍｅｄ、、第２６＠、第２９３頁（１９８５年）及びゴールデンバー グによる米国特許第４．３３１６４７号、第４．３４１１．３７６号、第４．３ ６１．５４４号、第４．４６８．４５７号、第４．４４４．７４４号及び第４． ６２４．８４６号に記載されている。典型的には、エチレンジアミン四酢酸（Ｅ ＤＴＡ）　、ジエチレントリアミン四酢酸（ＤＰＴＡ）の誘導体である。これら は一般的には、側鎖にキレート化剤がそれによって抗体に結合できる基を有する 。代わりには、キレート他剤上のカルボキシル又はアミン基が活性化され得て、 次に公知の方法で抗体複合体にカップリングする。例えば、Ｇａ−６７のキレー ト化剤であるデフェロキサミン（ｄｅｌｅｒｏｘａｍｉｎｅ）は、適したリンカ −で活性化され活性化カルボキシル、イソチオシアネート等の基を含み、次に抗 体複合体のアミンと結合できる遊離のアミンを有している。

キレート化剤は直接、又は短又は長鎖リンカ一部分によって、抗体上の１以上の 官能基、例えばアミン、カルボキシル、フェニル、チオール又は水酸基により抗 体複合体に結合される。例えば、ジイソシアネート、ジイソチオシアネート、カ ルボジイミド、ビスヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミドヒドロキシ スクシンイミドエステル、グルタルアルデヒド等の種々の従来のリンカ−を用い ることができ、好ましくは、米国特許第４．６８０．３３８号に記載の無水イソ チオシアネートリンカ−のような選択性逐次的リンカ−である。

ヨウ素−１３１（Ｉ−１３１）又はヨウ素−１２３ＣＩ　−１２３）のどちらか を用いる標識化が、例えばグリーンウッド（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ）等によるバイ オケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、）　、第８９＠、第１１４頁 （１９６３年）に報告されているように、そしてマツコナヘイ（ＭｃＣｏｎｎｂ ｅ７７等によるＩｎ！、人ｒｃｈ、　Ａｌｌｅｒｇ７　Ａｐｐｌ、　１ｍｍｕｎ ｏ１．　、第２９＠、第１８５頁（１９６９年）での改変によって、放射活性ヨ ウ化カリウム又はヨウ化ナトリウムの混合物及び抗体の混合物をクロラミンＴで 処理する酸化的方法を用いて容易に達成させる。この方法は、試薬の割合及び反 応条件により、チロシン残基上にありそうな、あるいはトリプトファン及びフェ ニルアラニン残基上にでさえありそうな抗体分子上の水素原子をヨウ素原子に直 接置換する。その代わりとして、前記のフェテアヌ、第３０３頁及びその中の引 例に記載されているようように、ラクトペルオキシダーゼヨウ素化を用いること ができる。

より進歩させた標識化の方法は、係属中の出願、米国シリアル・ナンバー第７４ ２．４３６号（６−７−８５）　、０８４，５４４号（８−１２−１１７１及び １７６、４２１号（４−１−８８１に開示されている。上記の特許及び出願のす べての記載を本明細書に参考として組み込む。広範囲の標識化技術が、フエテナ ウ、「ラベルド・アンチボディース・イン・バイオロジー・アンド・メディスン （Ｌａｂｅｌｅ＋ｊ　Ａｎｌｉｂｏｄｉｅｉ　ｉｎ　ＢｉｏｌｏＨａｎｄ　Ｍｅ ｄｉｃｉｎｅ）　Ｊ　、第２１４−３０９頁（マクグロウヒル・インターナショ ナル・ブック−カンパニー、ニューヨーク等、１９７８年）に記載されている。

種々の金属放射性同位元素の導入は、ワーグナー（ｗＨｎｅｒ）等によるＪ。

Ｎ＋ｌＣ１，Ｍｅｄ、第２０＠、４２８頁（１９７９年）、サンバーブ等による Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、、第１７＠、第１３０４頁（１９７４年）及びサバ （ｓａｈｍ）等によるＩ、　ｈｃｌ、　Ｍｅｄ、、第６＠、第５４２頁に記載さ れている方法によって達成される。前記は当業者に公知の、たんばく質を放射性 物質で標識する多くの方法を単に例示したにすぎない。

ＭＲＩ影像強化に有用な化合物の例として、常磁性イオン、例えば、Ｇｄ（ＩＩ Ｉ）　、ＥＣ（ＩＩＩ）　、Ｄｙ（ＩＩＩ）　、Ｐｒ（ＩＩＩ）、ＰＩ（ＩＶ） 　、Ｍｎ（ＩＩＩ）　、Ｃ＋（Ｉｌｌ）　、Ｃｏ（ＩＩＩ）　、Ｆｅ（１！ｌ） 、Ｃａ　（Ｉ　ｌ）、Ｉｆｉ（ＩＩ）、７ｉ（ＩＩＩ）　、及びＶ（■）イオン 又は基、例えばニトロキサイドを包含し、これらは、常磁性イオンキレート化剤 又はイオンに対しての露出した例えば、ＳＨ，ＮＨ２、Ｃ０ＯＨのキレート化官 能基を担持する支持体、又はラジカルアデンド用のリンカ−に結合する。そのＭ ＪＩＩ強化剤は、適度に達成でき、患者の安全性及び器械的設計と矛盾しない磁 場強さを用いて、外部カメラによって検出が可能になるような十分な量を存在さ せなければならない。そのような強化剤の要件は、媒体中の水分子に効果を有す るようなものとして当業者に公知であり、それらは、とりわけ、例えば、ピケッ ト（ＰｙｋｅＮ）による「サイエンティフィック・アメリカン（Ｓｉｅｎｔｉｌ ｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ）　、第２４６巻、第７８頁（１９８２年）及びランデ（ Ｒｕｎｇｓ）等によるアメリカン・ジャーナル・オブ・ラジオロジイ（Ａｍ、Ｊ 、　Ｒａｄｉｏｌ、）第１４１巻、第１２０９頁（１９８７年）記載されている 。

金属を直接又はキレートの形態で、抗体に導入する多くの同じ方法は、ＭＲＩ剤 を本発明の抗体複合体に導入し、感染病変に対する影像剤を形成させるのに適し ていることがよく理解できるであろう。ＭＲＩ剤は、多くの常磁性イオン又は影 像強化用の基を都合よく有する。複数のそのようなイオンを導入する１つの方法 は、キレートを担体ポリマーに載せ、その担体を抗体複合体に、好ましくは、前 記複合体の抗原結合部位から離れた部位で部位特異的に連結させる方法である。

この方法は、多くのキレート化剤が抗体のより少ない部位において抗体に結合で き、免疫反応性がひどく譲歩されないという長所を有する。抗体にキレート化剤 を載せるのに有用なポリマーの例として例えば、ポリオール、多糖類、ポリペプ チド等があげられる［米国特許第４．６９９．７８４号（シフ（Ｓｈｉｈ）等） 及び第４，０４６，７２２号（ロウランド（Ｒｏｗｌａｎｄ）ｌ　を参照コ。

多糖類の１つの型はデキストランである。キレート化剤は、より機能的にされ、 デキストランヒドロキシルの方に反応基、たとえば無水物、イソシアネート又は インチオシアネート等を含有する。その代わりに、デキストランは、多くの方法 、例えばアミノデキストランへの変換により誘導される。下記でより詳しく述べ るように、同様な方法が、複数の薬物分子を抗体又は抗体複合体に載せるのに有 用であることが正しく認識されるであろう。

アミノデキストラン（ＡＤ）担体と抗体結合体を製造する方法は、通常、デキス トランポリマー、都合よくは、平均分子量（ＭＷ）が約１０．０００−１００． ０００、好ましくは約１０、０００−４０．０００　、より好ましくは約１５． ０００のデキストランから出発する。デキストランを次に酸化剤と反応させ、そ のカルボキシレート環の一部の制御された酸化をもたらし、アルデヒド基を発生 させる。その酸化は、従来の方法によって糖分解的化学的作用剤、例えばＮｌｌ ０．で都合よく達成される。

約４０，０００の平均分子量を有するデキストランには約５０−１５０、好まし くは１００アルデヒド基が生じるように、他の平均分子量を有するデキストラン にはおおよそ同じ割合のアルデヒド基が生じるように、酸化剤の量を調整するの が都合が良い。より多くのアルデヒド基、そして次に生じるアミン基は、そのポ リマーがつぎに、よりポリリジンのように挙動する。より少ない数では、キレー ト化剤又は硼素アデンドのより望ましくない積み込みになり、不利益をもたらす 。

酸化デキストランは次にポリアミン、好ましくは、ジアミン、より好ましくは、 モノ、ポリヒドロキシジアミンと反応させる。適したアミンは、例えばエチレン ジアミン、プロピレンジアミン又は同様のポリメチレンジアミン、ジエチレント リアミン又は同様のポリアミン、１、・３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン 又は他の同様のヒドロキシル化ジアミン又はポリアミン等を含む。アルデヒド官 能基のシッフ塩基（イミン）基への、実質的に完全な変換を確保するためにアル デヒド基に比較して過剰のアミンが用いられ得る。

生成中間体の還元的安定はシップ塩基中間体に還元剤、例えば、ＮａＢＨ４、Ｎ ａＢＨ，ＣＮ等を反応させることによって達成される。イミン基の第２アミン基 への実質的に完全な還元を、そして非反応アルデヒド基のヒドロキシル基への還 元を確保するために過剰の還元剤が用いられる。

生成した不加物をさらに、従来の大きさのカラムに通して、交叉デキストランを 除去することによってさらに精製できる。ＡＤ上の利用できるアミノ基のおおよ その最初の数は、秤量された試料のトリニトロベンゼンスルホン酸との反応及び ４２ｈｍでの光学濃度の標準との相関により達成される。この方法は通常、計算 された数のアルデヒド基のＡＤ上の初期アミン基への本質的に完全な変換を生じ る。

その代わりに、アミン官能基に導入する従来の方法、例えば、臭化シアンとの反 応、次にジアミンとの反応によってデキストランが誘導される。そのＡＤは、特 定の薬剤又はキレート化剤の誘導体を活性な形態で、好ましくは、ジシクロへキ シルカルボジイミド又はその水溶性変形物質を用いて製造されるカルボキシル活 性化誘導体と反応させるべきである。

上記の方法は又、治療薬剤と放射性核種の両者に結合した抗体を製造するのに用 いることができる。この態様において、抗体／抗微生物結合体は、先の段落で詳 述した方法によって最初に製造される。はとんどの放射性核種が比較的短い半減 期を有するために、抗体／抗微生物／放射性核種結合体は、通常投与直前に製造 される。

治療用放射性核種の例として、αエミッター、例えばビスマス−２１２及びアス クチン−２１１、βエミッター、例えばイツトリウム−９０、レニウム−１８６ 、レニウム−１８８、銅−６７及びヨウ素−１３１；及びその代わりに、ヨウ素 ＋２５のような電子捕獲核種があげられる。本発明のシンチグラム造影法は哺乳 動物に、好ましくはヒトに非経口的に放射性元素で標識した子持異抗体複合体を シンチグラム造影に有効な量注射することによって行われる。非経口的にとは、 例えば静脈内、動脈内、鞘内内（ｉｎｌ＋Ｎｂｅｃｘｌ１７）　、組織間腔内（ ｉｎｌｅ＋５ｌｉｊｉａｌｌｙ）又は体腔内にということを意味する。患者は、 放射性同位元素で標識された結合体を約１ｍＣｌｍＣ１−５Ｏの量受ける。

その量は特定の放射性核種及び投与の形態の関数である。

静脈内注射ではその量は、通常、約２−１２−１Ｏ，好ましくは約２−５ｍＣ１ の＋−１３１、約５−１５−１Ｏ、好ましくは約８ｍＣ１の１−１２３　、約１ ０−１０−４Ｏ，好ましくは約２０ｍＣ１のＴｃ−９９ｍ５約２　５　ｍ　ＣＩ 　、好ましくは約４ｍＣ１のＩｎ−ｌ１ｌ又はＧａ−６７である。

放射性同位元素で標識した子持異抗白血球抗体複合体は、シンチグラム造影法影 像剤を白血球を含む感染性又は炎症性病変への標的にするための、哺乳動物用の 注射製剤として、好ましくは、ヒト用の無菌の注射製剤として、都合よく供給さ れ、前記注射製剤は、生理的ｐＨ及び濃度で、薬学的に許容できる無菌の注射用 賦形剤、好ましくはリン酸緩衝塩水溶液（ＰＢＳＪ中に有効量の放射性同位元素 で標識された複合体を含有する無菌の注射溶液から成る。非経口投与の部位のた めに必要とする、他の従来の薬学的に許容できる賦形剤を用いることができる。

本発明によって非経口投与される代表的な製剤は、通常、例えば、０．９％塩化 ナトリウムを含む０．０４Ｍリン酸緩衝溶液［ｐＨ７，４、バイオウェア（Ｂｉ ｏｗａ＋ｃ）コｍｌ当たり約１０■のヒトを血清アルブミン［１％米国薬局方、 パークデービス（Ｐｏｋｅ−Ｄａｖｉｔ）］　も有利に含む無菌溶液中に放射性 同位元素で標識した子持異抗体複合体を約０．１−２０■、好ましくは約２■含 有する。

一端、十分な同位元素が標的部位に付着したら、従来のブレイナー（ｐｌａｎａ ｒ）及び５ＰＥＣＴγ線カメラを使用することによって、又は炎症又は病変の起 源を突き止めるために外部的に又は内部的に用いる手で支えるガンマプローブ（ ｇｏｎｍｎ　ｐｒｏｂｅ）スキャニングが達成される。シンチグラムは、通常、 ５０−５００　ＫｅＶの範囲のエネルギーを探知する１以上の窓を有するγ線影 像カメラにより撮られる。標的部位は、比較的濃厚な病巣に存在する白血球を有 する感染病変、炎症性堆積物又は肉眼で見えない病変のいずれかになり得る。白 血球を含有する病変の局部限定は、病変への標識化白血球の侵入と同様に非経口 投与時に子持異抗体−作用物質複合体と病変に存在する白血球との反応性によっ て直接起きる。

磁気共鳴影像（ＭＨＩ）影像剤が放射性同位元素でなくＭＲＩ強化物質を含有す る以外はシンチグラフィー影像と類似の方法で達成されるとよい。磁気共鳴現象 をシンチグラフィーと異なる原則で達成させてもよい。通常は、発生する信号は 、像形成される病変の水分子の水素原子の核中の陽子の磁気モーメントの緩和回 数と相関する。

磁気共鳴影像増強剤は緩和割合を増加させることによって作用し、それによって 影像剤が付着した病変中の水分子と体の他の場所の水分子とのコントラストを増 す。しかし、その作用剤の効果は、Ｔ、及びＴ２の両方を増加させる。前者はよ り大きなコントラストになり、後者はより小さなコントラストになる。よって、 その現象は、濃度に依存し、通常最大の効力に対する常磁性物質の最適濃度があ る。最適濃度は用いる特定の作用剤、影像の中心、影像の形態、例えば、スピン エコー、飽和回復（■＋ｔ＋ｒｘｔｉｏｎ−ｒｅｃｏｙｅｒ７）、反転回復（ｉ ＢＢｓｉｏｎ−ｒｔｃａｖｅｌｌ）及び種々の他の強いＴ、依存又はＴ２依存影 像技術によって、そしてその作用剤を溶解させる又は懸濁させる媒体によって異 なる。それらの因子及び相関的重要性は当技術分野において公知である（例えば 、ピケットによる前記文献及びラング等による前記文献）。

本発明のＭＨＩ法は、哺乳動物、好ましくはヒトに非経口的に子持異抗白血球抗 体複合体とＭＨＩ増強剤をの、本発明による複合体の磁気共鳴影像用の有効量注 射することによって行う。患者（被験者）は、標識した複合体を、病変部位での ＭＨＩ信号を少なくとも２０％、好ましくは５〇−５００％増強させるのに十分 な量投与される。その量は、特定の常磁性物質及び投与形態の相関関係である。

放射性同位元素で標識した子持異抗白血球抗体複合体は、白血球を含む感染性又 は炎症性病変対するＭＨＩ剤を標識するための、哺乳動物用の注射製剤として、 好ましくは、ヒト用の無菌の注射製剤として、都合よく供給され、無菌注射溶液 は、生理的ｐＨ及び濃度で、薬学的に許容できる無菌の注射用賦形剤、好ましく はリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中に有効量の放射性同位元素で標識された複合体を 含有する無菌の注射溶液から成る。非経口投与の部位のために必要とする、他の 従来の薬学的に許容できる賦形剤を用いることができる。

本発明によって非経口投与される代表的な製剤は、通常、例えば、０．９％塩化 ナトリウムを含む０．０４Ｍリン酸緩衝溶液［ｐＨ７，４、バイオウェア（Ｂｉ ｏｖｓｒｅ）］　ｍｌ当たり約１０■のヒト血清アルブミン１１％米国薬局方、 パークデービス（Ｐｉｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）］　を又有利に含む無菌溶液中に標 識した子持異抗体複合体を約０．１−２（１■、好ましくは約２■含有する。一 端、十分なＭＲＩ剤が標的部位に付着したら、病変を影像するのにスキャンは従 来のＭＲＩカメラを用いて達成される。

本発明の好ましい態様は、初期の標識した子持異抗体−作用剤複合体は、ゴール デンバーグによる米国特許第４、６２４．８４６号に関連影像剤について記載さ れているように、標識されていない循環複合体を除去し、そのクリアランスを促 進する。前記米国特許の全記載を本明細書に参考として組み込む。この技術は同 様に、下記のように治療薬剤と結合した子持異抗白血球抗体複合体に適用できる 。「局在化割合」という用語は、従来の意味、非標的抗体複合体に対する標的抗 体複合体の割合という意味に用いられる。一般に、第２の抗体は第１の抗体複合 体の局在化割合を少なくとも約２０％、一般的には５０％以上高めるような量で 用いられる。

第１の抗体複合体自体より速く循環及び非標的区域から除去（ｃｌｅｕ）される 複合体を形成するために第２抗体が第１抗体結合体と結合できる限り、第２の抗 体は、完全１ｇＧ又はＩｇＭ　、又はＩｇＧ又はＩｇＭのフラグメントでよい。

好ましくは、第２の抗体は完全１ｇＧ又はＩｇＭである。

第１の抗体力月ｇＧ又はＩｇＭのフラグメントである場合、第２の抗体は、第１ ／第２複合体が補体力スケ−ドラ活性化する能力を維持するように完全１ｇＧ又 はＩｇＭであるのが好ましい。逆に、第１の抗体が完全１ｇＧである場合、もし 複合体が補体結合能力をなお維持するなら第２の抗体はフラグメントであり得る 。少なくとも１つの第１／第２の一対は完全１ｇＧ又はＩｇＭであるのが好まし い。

ＩｇＭを用いる１つの長所は、ＩｇＭが第１の抗体又は分離した結合体、すなわ ち、薬剤、キレート化剤、放射性核種等のような診断及び／又は治療主成分と高 分子量複合体を形成することである。このことは、特に血液からの、非標的第１ 抗体及び／又は主成分のクリアランスの割合及び効率を増加させる。第２の抗体 は前記のゴールデンバーグの米国特許第４．６２４．８４６号に記載の方法によ って製造される。モノクローナル抗種１ｇＧも又、本方法における第２抗体とし て都合よく用いられる。非金属性結合体、例えば、放射性ヨウ化結合基又はニト ロキサイド（ｎｉｆｒｏｗｉｄｅ）のような有機常磁性物質も又、第２抗体が特 異的なヘプテンになり得る。

第１多特異抗体−作用剤結合体の非経口投与し十分な時間が経過して白血球によ るその取り込みを最大にした後、一般的には、第１投与後約２−７２時間、好ま しくは、約２４−４８時時間段与で第２抗体を患者に注射する。第１抗体が静注 投与されなければ、第２抗体の少なくとも一部は、同じ非経口投与によって投与 するのが有利である。

しかし、循環系に拡散した第１抗体のクリアランスを促進するために第２抗体の 少なくとも一部は静注投与されるのが有利である。

循環している標識された第１抗体をダリア−し、第１抗体の局在化割合を増加さ せるための抗体の使用は、前記ゴールデンバーグの特許及びそれに記載されてい る引用文献に記載された画像強調サブトラクション技術の利用によりさらに増大 される。これは、放射性核種を標識した、無作用の（ｉｎｄｉ目ｃｒｅｎｔ）抗 体又はフラグメントが独立した検出の可能な、当技術分野で認められている技術 である。その抗体は、画像化に要する時間の間、第１抗体と実質的に同じ、分布 及び代謝の動態を有する。そのような抗体の注射は、バックグラウンドを補正す ることによって画像処理を増大させるのに用いるのにとりわけ適した、Ｔｃ−９ ９ｍ−標識化血清アルブミンのようなサブトラクション剤と比較して好ましい。

サブトラクシジン剤としての、放射性元素で標識した無作用の抗体の使用は、循 環系からの抗体のクリアランスを有効にする臓器からの非標的バックグラウンド 放射のためのコンピューター補正をさせる。第２抗体が第１モノクローナル抗体 及び非標的区域からの無作用の抗体免疫グロブリンを同じ割合で消去するように 第１モノクローナル抗体及びサブトラクション剤として用いられる無作用の抗体 は、好ましくは同じ種または骨髄腫／ハイブリドーマからのものであることは当 業者に正しく認識されるであろう。

第２抗体は第１のそして無作用の免疫グロブリン種の一定の領域に特異的である ことがさらに好ましい。

導入された第２抗体量は一般的に、循環する第１の抗体を、２−７２時間の間に １０−８５％減らすことができる量である。クリアランスに影響を与える第１抗 体に対する第２抗体の割合は、第１及び第２抗体の一対の結合特性による。適し た割合の初期段階的推定を行うために患者の血液の試験管内の予備的なスクリー ニングを用いることができる。例えばゲル拡散試験での沈降素バンドを得るのに 必要な、第１抗体に対する第２抗体の割合を決定するのに、そのスクリーンは用 いられる。それは、生体内投与は、試験管内試験のようなもので示されるよりも 第１抗体に対する第２抗体のより高い割合を必要とするので第１抗体に対する第 ２抗体のモル比の一般的な割合を示し、その割合の低い限界の測定として役に立 つ実際には、第１抗体に対する第２抗体のモル比の範囲は臨界的ではないが一般 的には５−５０である。第１抗体に対する第２抗体の、＋５−２５の、好ましく は２０−２５０モル比は第１及び第２抗体の両方が完全１１Ｇである場合有利で あるということが見出だされた。

ヒトに感染したり病変を起こす、細胞や微生物に細胞毒性を与える多くの薬剤が 知られている。それらはメルク・インデックス等の薬や毒素の容易に入手できる 、技術分野で認められた大要のいずれかにおいて見出だされる。

そのような抗生物質薬剤は杭内血球抗体又は抗体複合体と結合され、本発明によ る治療剤を形成し、そしてその部位での濃度を増加させるように感染病変への抗 生物質薬剤の標的を改良するそのような結合体の使用は本発明の一部である。１ 以上の抗生物質は、治療用に、ポリマー担体に結合され、その担体は次に抗体又 は抗体複合体に結合される。ある場合において、抗体の結合体の部分としての薬 剤を一部又は完全に非毒性化することが可能であり、一方、体に循環していると きに薬剤の組織的副作用を減らし、そしてその薬剤の組織的投与が容認できない ときにその使用を可能にすることができる。ポリマーに結合し、そのポリマーが さらに抗体に結合した薬剤のより多い分子の投与は組織的毒性を移動させながら 治療を可能にする。本発明の方法体系は、第１抗体又は抗体複合体を抗生物質薬 剤に結合することによって感染病変の治療処置に適用できる。抗生物質薬剤を免 疫グロブリンに結合する、当技術分野で認められた方法は、例えば当技術分野で 公知の、ドラッグ・キャリアース・イン・バイオロジイ・アンド・メディスン（ Ｄｒｕｇ　Ｃａ＋＋ｉｅｒ＋ｉｎ　ＢｉｏｌｏＢ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ）中の「ザ・ユース・オブ・アンティボディース・アズ・ドラッグ・キャリアー ス（Ｔｈｅ　ｔｌ＠ｃ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｓ　ＤＡＢ　Ｃａｕｉ ｕｓ）Ｊ　［ジーｅグレゴリアゾイス（Ｇ、　Ｇｒｅｇｏ＋１ｘｄｉｓ）等編集 、アカデミツク・プレス・ロンドン（１９７９年）］という標題のオニール（０ ’Ｎｅ１ｌ）による章；アーノン（Ａｒｎｏｎ）等のり一セント・リザルツ・イ ン・キャンサー・リサーチ（Ｒｅｃｅｒ＋ｉ　Ｒｅｓ＋＋Ｉｌｓ　ｉｎ　Ｃａｎ ｃｅｒ　Ｒｃｓ、）、第７５巻、第２３６頁（１９８０年）；モールトン等のイ ムノロジカル・リサーチ（Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇ、　Ｒｅｄ、）、第６２巻、第４ ７頁（１９８２年）に記載されている。これらの方法は、細菌、ウィルス、糸状 菌及び種々の寄生体のような種々の病気を起こす微生物に有効な薬剤を、それら の微生物、それらの生成物又はそれらの病変に関連した抗原に対して生じた抗体 に結合するのに用いられる方法にまったくよく類似している。

そのような抗菌、抗ウィルス、抗寄生虫、抗糸状菌及び関連薬剤、例えばスルホ ンアミド類、ペニシリン類及びセファ０スポリン類、アミノグリコシド類、テト ラサイクリン類、クロラムフェニコール、ピペラジン、クロロキン、ジアミノピ リジン類、メトロニアジッド、イソニアジッド、リフアンピン類、ストレプトマ イシン類、スルホン類、エリスロマイシン類、ポリミキシン類、ナイスクチン、 アンフォテリシン類、５−フルオロサイトシン、５−ヨード−２′−デオキシウ リジン、１−アダマンタンアミン、アデニンアラビノジッド、アマニチン類及び アジドデミディン（Ａ２Ｔ）が、適した特異抗体／フラグメント複合体及び抗体 ／フラグメント複合体に結合させるのに好ましい。本発明に用いる種々の他の可 能な抗微生物剤は、当技術分野において公知のグツドマン（Ｇｏｏｄｍｍｎ）等 の「ザ・ファーマコロジカル・ベーシス書オブ・セラボイテイックス（Ｔｈｅ　 ＰｈａｒｍｉｃｏｌｏｇｉｃｘｌＢａｓｉｓ　ｏｌ　Ｔｈｅ＋１ｐｅｕｊｉｃｓ ）Ｊ　［第６版、ニー・ジー・ギルマン（Ａ、Ｇ、　Ｇｉｌｍａｎ）等編集、マ クミラン・パブリッシング・カンパニー　（Ｍａｃｍｉｌｌａｎ　Ｐｕｂｌｉｓ ｈｉｎｇ　Ｃｏ、）ニューヨーク、１０９８年コに載っている。特定の標的部位 に対しての標的薬剤のための種々の適したそして所望の条件は例えば、そのよう な標的がいかに感染病変疾患の患者に利益を与えるかという臨床的知見を記載し たトロウェッ（丁＋ｏｕｅ＋）等１こよるターゲツティング・オブ・ドラッグス （Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｄｒｕｇｓ）　［ジー・グレゴリアゾイス等編集 、プレナム・プレス（Ｐｌｕｎｍ　Ｐ「ｅｓｓ）　、ニューヨーク及びロンドン 、１９８２年］第１９−３０頁に記載されている。

放射性療法は病理学的病変を処置する方法としてよく知られている。治療的放射 性核種は、前記の係属中の米国特許シリアル・ナンバー第７４２．４３６．０８ ４．５４４及び１７６、４２１　と同様にグリーンウッド等による前記の方法及 びマツコナヘイ（ＭｃＣｏｎｘｈｅ７）等により変更された方法を用いて免疫グ ロブリンに結合される。

それに加え、腫瘍及び病理学的病変の中性子活性化放射療法については、ハウソ ーン（Ｈｏｗｔｈｏｒｎｅ）による米国特許第４．８２４．６５９号に記載され ており、その全記載を本明細書に参考として組み込む。多くのホウ素含有基が結 合した子持異抗白血球抗体を病理学的病変への標的にし、その後、非標的結合体 の適切なりリアランスのための十分な時間の後にその非標的病変に熱的中性子照 射を行い、それによってα−粒子の治療量を周囲の組織に与えることにより達成 される。

本発明の治療方法は、哺乳動物、好ましくはヒトに放射性同位元素で標識した子 持異抗白血球抗体複合体を非経口的に治療有効量注射することによって実施され る。

放射性同位元素で標識した結合体の企図する量は、使用する特定の同位元素、投 与回数及び患者の血液生成状態により変化する。通常、５−２５０　ｍＣｉの放 射性核種量が示されれる。とくに、イツトリウム−９０の通常量は１投与量２０ 　３０　ｍｃｉであり、一方、ヨウ素−１３１は４０−１００ｍＣｉ投与される 。他の放射性元素及びホウ素結合体の用量は、熟練した臨床医により慣習的に決 定される。放射性同位元素で標識した多特異抗白血球複合体は、好ましくは、薬 学的に認容される無菌の注射賦形剤、好ましくは、生理的ｐｉｔ及び濃度でのリ ン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中に放射性同位元素で標識した複合体の有効量を含有す る無菌の注射用溶液を含む、白血球を含む感染性又は炎症性病変への治療的放射 性核種を標的にする哺乳動物用の注射人製剤、好ましくは、ヒト用の無菌注入製 剤として都合よく供給される。非経口投与部位に必要な他の従来の薬学的に認容 される賦形剤を用いることができる。

発明により非経口的に投与される代表的な製剤は、約５．０−１５０■、好まし くは１５−５０■、より好ましくは１５−２５■の放射性同位元素で標識し子持 異抗体複合体を無菌溶液中に含有する。

標識された多特異抗白血球複合体の最適な局在化に十分な時間の後に、影像剤お よびＭＲＡ剤に関して前に記載したように、非標識化第２抗体の使用によって放 射性核種の有害な効果を最小にし、非標的な循環している結合体を除去し、その クリアランスを促進する。

本発明の好ましい態様において、抗微生物剤及び治療的放射性核種と結合した抗 白血球抗体は、本明細書中に記載された影像剤及び薬剤との結合体を製造するた めに記載された方法によって製造される。両治療剤の子持異抗体複合体への結合 は、単独で投与されるときの治療剤の通常用量の５Ｏ−ＩＨ％の用量にする付加 的なそして相乗的な効果を生じる。イオン化放射物は遠距離において、炎症性及 び感染性病変及びそれらの原因物質、例えば細菌、糸状菌及びウィルスの「パイ スタングー（ｂ７ｓ！ｇｎｄｅｒ）　Ｊ放射物を備えることによって効果的であ ることが示されてきた。

上記の第２抗体の使用は診断的影像結合体に対するのと同様に治療剤の有効性を 増加する。治療剤の有効性はその治療係数という言葉で表され、それは従来の意 味で用いられ、望ましくない副作用に対する治療効果の割合として定義されてい る。しばしば、効力対毒性の量的測定、例えば５０％致死量（ＬＤｓｏ）対５０ ％有効量（ＥＤｓｏ）の割合という言葉で表される。本明細書に記載されている 第２抗体の使用は非標的第１抗体及び／又は分離した治療的主成分を除去するこ とによって抗白血球抗体及び抗体複合体結合体の治療係数を増加させる。治療製 剤の場合に、上記ように、第１モノクローナル抗体に特異的であるのに加え、第 ２抗体は治療薬剤に特異的でありえる。

ここで企図する治療製剤は、先に定義し、非経口投与用の適した賦形剤中の治療 的有効薬剤に結合した単特異杭内血球抗体／フラグメントを含む。同様に、治療 的製剤は抗生物質に結合した子持異杭内血球抗体／フラグメント複合体を含む。

他の治療的製剤は非経口投与用の適した賦形剤中の単特異抗体／フラグメントに 結合した治療的に有効な放射性核種を含み得る。さらに他の治療的製剤は治療的 放射性核種に結合した子持異抗体／フラグメントを含み得る。他に、治療的製剤 は、非経口投与用の適した賦形剤中の、治療的抗微生物剤及び治療的放射性核種 に結合した単特異杭内血球抗体／／フラグメントを含み得る。又、他の治療的製 剤は抗微生物剤及び治療的に有効な放射性核種に結合した子持異杭内血球抗体／ フラグメント複合体を含み得る。治療的製剤は又、上記のような別に充填された 第２抗体も含み得る。適した賦形剤とは、当技術分野においてよく知られており 、例えば先に述べたように、診断的影像剤の投与用に用いられる無菌ＰＢＳ溶液 の類似物を包含する。

本発明による、杭内血球多特異影像結合物質及び単特異又は子持異治療結合物質 は、白血球の中心を含む感染性又は炎症性病変に対する標的となる抗体用の治療 的又は診断的キットにおいて都合よく提供される。典型的にはそのようなキット は、凍結乾燥した製剤として又は注射用賦形剤中の本発明の抗体結合体を含有す るガラス瓶から成り、その結合体がシンチグラフィ影像用に用いられるなら冷結 合体として、及び放射性元素使用標識用試薬及び付属物質とともに別々の容器で 一般的に供給される。一方、ＭＲＩ剤及び治療的結合剤は、すでに抗体／フラグ メント複合体又は単特異抗体／またはフラグメントと結合させた抗生物質ととも に一般に供給される。抗微生物剤及び放射性核種から成る治療的結合体は一般に 、抗体／フラグメント複合体又は単特異抗体／フラグメントにすでに結合させた 抗微生物剤として、放射性同位元素使用標識用試薬及び付属物質とともに別々の 容器で供給される。そのキットはさらに、第２の別々に包装された標識されてい ない、抗体又は抗体フラグメント又は治療薬剤に特異的な抗体又は抗体フラグメ ント、そのための担体又は放射性核種又は常磁性イオン用のキレート化剤を含有 する。影像製剤及び本発明の方法は、少な（ともＩｎ−ＩＩＩで標識した白血球 を用いる消失膿瘍の決定用の従来の物質と同様に効果があり、コスト、試薬の潜 在的毒性及び最も重要な使用容易さに関しては明らかにより有利である。治療的 薬剤及び本発明の方法は、抗生物質試薬及び／又は放射性核種を用いて炎症及び 微生物感染の部位を標的にする手段を与え、薬剤及び放射性核種の治療係数を改 良し、組織的副作用を減らし効力を高める。

さらに詳述しなくても、当業者は先の記載を用いて本発明を完全に用いることが できると考える。従って、下記の好ましい特定な態様は単なる例示的なものと解 釈されるべきであり、他の記載を何ら制限するものではない。

下記の実施例において、すべての温度は他に示されなければ℃で、訂正されない で示され、すべての部及び百分率は重量によって示される。

実施例　に 特異抗白血球複合体 二特異抗体複合体は顆粒性白血球に高度に特異的なモノクローナル抗体の（Ｆｍ ｂ’）　２フラグメントから製造された。軽−重鎖開裂を避けるように注意して 、鏡開ジスルフィド結合をシスティンを用いて注意深く還元しくｒｅｄｕｃｅ） 　、Ｆ１ｂ’−ＳＲフラグメントを形成させた。ＳＲ基を過剰のビスマレイミド ・リンカ−［（１，１’−メチレンジー４．１−〕二ニレし）ビスマレイミド、 アルドリッヒ・ケミカル・カンパニー（＾１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃｘｌ　Ｃ ｏ、）、ミルウォーキー、ウィスコンシン州］を用いて活性化した。

Ｂ−リンパ球細胞及び大食細胞（抗−１１）と共通の抗原に高度に特異的な第２ モノクローナル抗体をＦ−ｘｂ’　−３Ｈに変換し、次に活性化抗顆粒性白血球 フラグメントと反応させ、二特異複合体を得た。その複合体は２−イミノチオラ ン（’２−１ｍ１ｎｏｔｂｉｏｌｘｎｅ）と反応させ、複合体を上記のビスマレ イミド活性化処理を用いて第３抗体／フラグメントに結合させるのに用いるか又 は例えば還元した（例えば５ｎＣＩ２を用いて）パーテクネタート（ｐｅｔｆｅ ｃｈｎｃｆａｆｅ）から丁ｃ−９！１ｍを用いて直接金属化（ｍｅｌａｌｌｘｊ ｉｏｎ　）に用いるために１以上のメルカプト基を導入した。

実施例　２ 多特異抗白血球複合体 Ｆｘｂ’−３Ｒフラグメントに変換させ、ビスマレイミド・リンカ−を用いて活 性化し、次に、２−イミノチオランを用いてＳＲ基を結合することによって活性 化された上記の二特異フラグメントに結合したＴ−リンパ球（抗Ｔ−１）から子 持異抗体複合体を製造した。その子持異複合体をＲＡＩＤによって感染性病変又 は炎症性堆積物を検出するのに用いる影像用に有用ないくつかの放射性核種（Ｔ ｃ−９９ｍ。

１−１２３　、Ｇａ−６７、Ｉｎ−ｌ１ｌ）の１つで標識した。

実施例　３ シンチグラフィー影像キット ゴムの隔壁（ｓｅｐ＋ｕｍ）を取り付けた、実施例２のチオール活性化身特異複 合体を凍結乾燥の形で含有する第１無菌ガラス瓶、ｐＨ７，４のリン酸緩衝塩水 を含有する第２無菌［隔壁密封（ｓｅｐｌｕｍ−ｓｅａｌｅｄ）］ガラス瓶、９ ９ｍ−パーテクネタートの還元のためのスズのグルコヘプトナート（ｇｌｕｃｏ ｈｅｐｊｏ−ｎｍｊｅ）の溶液を含有する第３無菌（隔壁密閉）ガラス瓶、及び 付加的な隔壁密閉無菌ガラス瓶及び製剤の標識及び注射用の無菌注射器を含む。

任意に、そのキットは局在化後、循環標識化複合体を迅速に除去するための第２ 抗体、例えば親和性精製ウサギ抗マウス抗体を含有する別の無菌ガラス瓶を含み 得る。

実施例　４ 診断的影像 ２４才の女性患者が帝王切開によって男児を出産後１週間で発熱及び異常な痛み を生じた。その患者は２週間抗生物質静注治療を行ったが熱と異常な熱が続いた 。ＣＡＴスキャンは、何ら異常な集団を示さなかった。実施例３のキット成分及 び発生剤生成（ｇｅｎｅｒａｔｏ「−ｐｒｏｄｕｃｅｄ）ナトリウムパーテクネ タート（ｓｏｄｉｕｍ　ｐｅ＋＋ｅｃｈｎｅｊａｌｅ）を用いてＴｃ−９９ｍ放 射性同位元素で直接標識した、実施例２の多特異抗白血球複合体を用いて、免疫 シンチグラフィー検査を行った。２０ｍＣ１の放射性同位元素で標識した複合体 の注射を用いて、患者を５ＰＥＣＴモードでγカメラを用いてスキャンした。患 者の腹部の走査でＴｃ−９９ｍの集積の中心が示された。手術が行われ、Ｔｃ− ９９ｍ活性の部位に膿瘍が見出だされた。その膿瘍は排膿しており、病理は単核 白血球、Ｂ−リンパ球及び活性化Ｔ−リンパ球と同様に膜状物質に存在する多く の顆粒性白血球を示した。

２日後、患者の熱及び痛みはなくなった。

実施例　５ 診断的影像 腎孟腎炎のため処置されていた５８才の老女性患者が熱と鋭いを椎圧痛を生じた 。椎骨骨髄炎が疑われたがを椎の放射性写真は正常だった。実施例３のキット成 分及び発生剤生成ナトリウムパーテクネタートを用いて直接Ｔｃ−９９ｍ放射性 同位元素で標識した実施例２の多特異抗白血球複合体を用いて免疫シンチグラフ ィー検査を行った。

２０ｍＣ１の放射性同位元素で標識した複合体の注射を用い、標識した複合体を 投与して２４時間後２次元影像モードでγカメラを用いて患者を、スキャンした 。そのスキャンはを髄の末端のちょうど上にＴｃ−９９ｍの強度の中心を示した 。椎骨弓切除術および硬膜外空間（ｅｐｉｄｕ＋ａｌ　５ｐｘｃｔｓ）の排膿法 を標的部位で行った。排膿流体中の膜状物質の病理は第１に、少数の顆粒性白血 球とともに多くの単核リンパ様細胞を含有する肉芽賀生組織を示した。

実施例　６ 治療 ４２才のエイズにかかった男性は通常の広範囲スペクトル抗生物質の治療に反応 しなかった両側性（ｂｉｌａｊｅｒｇｌ）肺炎が現れた。臨床的所見及び痰細胞 学では進行しそして深刻な呼吸困難を起こしているニューモサイスチス（Ｐｎｅ ｕｍｏｃ７ｓ目りカリニイ肺炎であることを示唆した。

顆粒性白血球と単核白血球抗原に結合するモノクローナル抗体の混合物は、約１ ５．０００分子量（ＭＹ）であり、平均約２５分子のトリメトプリム（ウェルカ ム社製）を有する平均１つのアミノデキストラン担体にそれぞれ部位特異的に結 合され、メソトレキセート誘導体がその担体にシッフ等の前期特許の方法学を適 用することによってその担体に結合された。抗体複合体混合物の約２５■のゆっ くりの静脈内点滴により肺病変に治療用量の抗生物質が運ばれ３日毎日続けて繰 り返した。２日後、患者は改善を示し始め、熱は低くなり、このことは３日後に 胸のＸ線像に改善により確認された。肺炎のほとんどが抗体−薬剤結合体処置の ２週間以内に消失した。患者はこの間、一般の、体力を持たせるのに有効な処置 を受けていた。

ホウ素結合体を含有する治療的放射性同位元素及び／又は放射性同位元素及び薬 剤の組み合わせがトリメトプリムの代わりに又はそれに加えてこの患者の治療及 び類似の条件のために用いられた。

前記実施例において用いられたものに関して、本発明の一般に又は特定に記載さ れた反応物質及び／又は操作条件を置き換えることによって前記実施例を同様に 成功して繰り返すことができる。

上記記載から当業者は本発明の本質的な特徴を容易に確認できそして本発明の範 囲を離れることなく種々の使用および条件を適用するために本発明の種々の変更 を行うことができる。

Ｉ際調査報告 １Ｒ１１４Ｈ１ｌ−ｅＲＩｌ＾Ｂ’４１ａＴｈｅＰＣ丁／ｌ二”５８９１０３１ ’ｉ’０

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも１つの免疫反応性の、少なくとも１つの白血球細胞型に特異的 に結合する実質的に単特異抗体又は抗体フラグメントを含有し、治療的抗菌性薬 剤、ホウ素含有アデンド（ａｄｄｅｎｄ）の又は放射性核種に結合された、白血 球集積（ａｃｃｒｅｔｉｏｎ）の中心を標的にするための治療的抗白血球結合体 。
2. （２）少なくとも２つ異なる実質的に単特異抗体又は抗体フラグメントの免疫反 応性多特異的複合体を含有し、影像剤、又は治療的抗微生物剤、ホウ素含有アデ ンド又は放射性核種に結合し、少なくとも２つの前記抗体又は抗体フラグメント が異なつた白血球細胞型に特異的に結合する、白血球集積の中心を標的にするた めの多特異抗白血球結合体
3. （３）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異的 複合体が影像剤に結合され、前記影像剤が５０−５００ＫｅＶの範囲のγ線放射 をする放射性同位元素又は各磁気共鳴影像増強剤である、請求項２に記載の抗白 血球結合剤。
4. （４）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異的 複合体が、抗微生物剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤および駆虫剤からなる群から選 択される治療的抗微生物剤に結合された、請求項１又は２に記載の抗白血球結合 剤。
5. （５）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異的 複合体が治療的放射性核種に結合された、請求項１又は２に記載の抗白血球結合 剤。
6. （６）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異的 複合体が複数のホウ素−１０原子を含むアデンドに結合された、請求項１又は２ に記載の抗白血球結合剤。
7. （７）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異的 複合体が治療的抗微生物剤及び治療的放射性核種又はホウ素含有アデンドに結合 させた、請求項１又は２に記載の抗白血球結合剤。
8. （８）前記白血球細胞型の各々が顆粒性白血球、単核白血球、Ｂ−リンパ球又は Ｔ−リンパ球から成る群から選択される、請求項１−７のいずれか１請求項に記 載の抗白血球結合剤。
9. （９）前記抗体又は抗体フラグメントの各々がモノクローナル抗体又は抗体フラ グメントである、請求項１−８のいずれか１請求項に記載の抗白血球結合剤。
10. （１０）別々の製剤として、 （ａ）標的用としての有効量の請求項１−９のいずれか１請求項に記載の抗白血 球結合体、及び（ｂ）前記抗白血球結合剤の局在化割合を少なくとも約２０％増 加させ、又は治療的結合体の場合はその治療係数を２−７２時間以内に少なくと も約１０％増加させるのに十分な量の、前記抗白血球結合体に特異的に結合する 第２の標識されない抗体又は抗体フラグメント を含む薬剤。
11. （１１）少なくとも２以上の異なった、実質的に単特異抗体又は抗体フラグメン トの免疫反応性の多特異的複合体を含み、影像剤に結合され、少なくとも２つの 前記抗体又は抗体フラグメントは異なった白血球細胞型に特異的に結合し、影像 剤を炎症性又は感染性病変に対する標的にする方法に用いるための作用剤を製造 するための多特異抗白血球抗体結合体の使用であり、哺乳動物に前記白血球結合 体の標的用に有効な量を非経口的に注入することを含む使用。
12. （１２）（ａ）前記影像剤が放射性同位元素であり、そして前記方法はさらに、 抗白血球結合体が前記病変部位で局在化するのに十分な時間の後に前記病変のシ ンチグラフィー影像を得ることを含み又は （ｂ）前記影像剤が核磁気共鳴影像増強剤であり、前記方法はさらに、抗白血球 結合体が前記病変部位で局在化するのに十分な時間の後に前記病変の核磁気共鳴 共鳴影像を得ることを含む、請求項１１に記載の使用。
13. （１３）前記免疫反応性の実質的に単特異抗体又は抗体フラグメント又は多特異 的複合体が炎症性又は感染性病変の治療方法において用いるための作用剤の製造 において、治療的抗微生物剤、ホウ素含有アデンド又は放射性核種に結合された 、治療量の、請求項１、２又は４−９のいずれか１請求項に記載の抗白血球結合 体の使用であり、そのような病変を患っている哺乳動物に非経口的に治療に有効 量の前記抗白血球結合体を注入することを含む使用。
14. （１４）前記作用剤が別の製剤として、前記抗白血球結合体に特異的に結合する 第２の標識されていない抗体又は抗体フラグメントを抗白血球結合体の局在化を 少なくとも約２０％増加させるのに十分な量又は、治療的結合体の場合は２−７ ２時間以内にその治療係数を少なくとも約１０％増加させるのに十分な量、付加 的に含む、そして前記方法は、前記抗白血球結合体の投与によって前記病変部位 での白血球によるその選択的取り込みを最大にするのに十分な時間の後に前記量 の前記第２の標識されていない抗体又は抗体フラグメントを患者に非経口投与す る工程を付加的に含む請求項１１−１３のいずれか１請求項に記載の使用。