JPH02211891A

JPH02211891A - メグスリノキの組織を利用したロドデンドロール配糖体の生産方法

Info

Publication number: JPH02211891A
Application number: JP1030995A
Authority: JP
Inventors: Takashi Fujita; 孝藤田; Hitoshi Hatamoto; 均畑本; Shinichi Takato; 高藤　愼一
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1989-02-13
Filing date: 1989-02-13
Publication date: 1990-08-23

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】童呈上皇肌■分団本発明は、薬用植物として有用なメグスリノキの生組織
から誘導して得られるカルスを利用してロドデンドロー
ルもしくはその前駆体をロドデンドロール配糖体に変換
して医薬としての利用が期待される該配糖体を大量に生
産するための方法に関する。

挟歪煎Ｕメグスリノキは、日本特産の落葉樹でカエデ科の植物で
あって、北海道と沖縄を除く日本全土に広く分布してい
るが、標高７００＋ｗ前後の山中に限定して自生しその
生育が遅いため、資源的に制限されている。

而して、メグスリノキの樹皮は、古くからそれを煎じて
洗眼剤として用いられているほか、メグスリノキ成分の
肝臓病に対する薬効が報告されている〔篠田氏等、「生
薬学雑誌」耕（２）、１７７〜１８１（１９８６）　）
。したがって、今後のメグスリノキ成分の肝障害に対す
る薬効についての研究進展に伴い、メグスリノキ及びそ
の成分に対する需要の増大が予想される。

しかしながら、前述したとおり、メグスリノキの生育環
境が限定されているため、それを大量に収集することは
実際上不可能である。また、その成分を大量に得ること
も不可能である。

如上の状況に鑑み、本発明者らは、さきにメグスリノキ
の生＆１）織から誘導されたカルスを培養して増殖する
ことによりメグスリノキを大量に生産する方法を開発し
た（特願昭６２−２５０７２４号）。

しかし、メグスリノキ樹皮抽出物中の主要成分であるロ
ドデンドロール配糖体については、通常のカルス培養で
大量に得るためには大量にカルスを培養し、大量のカル
スから分離精製しなければならない、このため通常のカ
ルスの培養によっては上記配糖体を大量に得ることは難
しいという問題がある。

が　°　しようとする課題本発明は、薬用植物として注目されてきているメグスリ
ノキの主要成分であるロドデンドロール配糖体をメグス
リノキの生組織から誘導されるカルスを利用してロドデ
ンドロールもしくはその前駆体からロドデンドロール配
糖体を効率的に生産するための方法を提供することを課
題とする。

以下本発明の詳細な説明する。

課　を”するための本発明の特徴は、メグスリノキの生組織からカルスを誘
導し、得られたカルスのロドデンドロール配糖体生産能
を利用してロドデンドロール或はその前駆体をロドデン
ドロール配糖体に変換することにある。

ここでいうロドデンドロールとは下記の構造式で示され
、メグスリノキ樹皮から四塩化炭素肝障害に対して防護
作用を有する成分として単離、同定された化合物である
。

因に、この化合物は合成により　（±）一体として得ら
れるが（＋）一体を分離するのが困難である。

また、ロドデンドロールの前駆体としては、４（ｐ−ヒ
ドロキシフェニル）−２−ブタノン、ｐ−フマル酸及び
ジヒドロ−ｐ−フマル酸等を例示し得る。

本発明では、これらの各化合物を、メグスリノキの生組
織から誘導して得られたカルスの培養、増殖液中に添加
してロドデンドロール配糖体に変換させる。

メグスリノキの生組織からカルスを誘導するには、茎、
葉の生組織、特に好ましくは葉柄の切片を、寒天或はジ
ェランガムを添加した固形培地上で培養して行う。

ここでカルスの誘導に用いる固形培地としては、植物の
組織培養に通常用いられるムラシゲ・スクーグ（Ｍｕｒ
ａｓｈｉｇｅ　＆　ＳｋｏｏｇＳ１９６２）培地、ホワ
イト（Ｗｈｉｔｅ、　１９６３）培地、リンスマイヤー
・スクーグ（Ｌｉｎｓ＋ｍａｉｅｒ　＆　Ｓｋｏｏｇ、
　１９６５）培地、ガンボルグ（Ｇａｎｂｏｒｇ、　１
９６８）培地等を例示できる。これらのうち、特にムラ
シゲ・スクーグ培地が好ましい。

また、カルスの誘導を促進させるために、これらの培地
に植物ホルモンとしてオーキシン類並びにサイトカイニ
ン類等を添加してもよい。なお、オーキシン類としては
２．４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）　、イ
ンドール酢酸（ｒＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等
を例示し得、サイトカイニン類としてはカイネチン、ペ
ンデルアデニン（ＢＡ）等が挙げられる。

これらの植物ホルモンは、１０−７〜１０−’Ｈの濃度
で培地に添加するのがカルスの誘導促進上好適である。

カルスの誘導は、通常、暗所で１５〜２５℃の温度で３
０日前後培養することにより行い、この培養により組織
切断面にカルスが形成される。

なお、カルスの誘導に用いる組織切片としては、葉柄が
好ましく、葉柄を用いて上述のようにして培養して得ら
れるカルスの湿重量は、葉並びに茎由来のものに比し、
２〜４倍になる。

このようにして形成されたカルスは、ついで新鮮培地に
移植して培養し、増殖する。

このカルスの増殖培養は、固体培地に継代して行っても
よいが、大量生産には液体培養が好ましい、すなわち、
上記誘導により形成されたカルスを液体培養により振と
う或は撹拌しながら培養を行うと、カルスは１〜５ｍｍ
程度の塊りになって培養液中に分散して増殖する。この
ため、比較的大きさの揃ったカルスが得られ、培養液か
らの分離、その後の乾燥が容易となる利点がある。なお
、上記培養を大量方式で行うには、エアーリフトタイプ
のファーメンタ−を用いることもできる。

上述のごとくして固形培地上に生育したカルスを液体培
地に移植し、振とう或は攪拌しながら培養を行う。

次いで、３週間程度増殖させたカルスに、ロドデンドロ
ール或は前述したごときその前駆物質を培地当り２５〜
２００ｐｐｍ、好ましくは５０〜１００ｐｐ−添加し、
さらに１週間程度培養を継続して配糖化を行う。

このように培養して得られたカルスは、培地から分離し
て凍結乾燥などにより乾燥する。

得られたカルスの乾燥体にはロドデンドロール配糖体が
含まれているので、それをティーパンクの形態にして飲
用に供してもよく、また、上記乾燥体からロドデンドロ
ール配糖体を分離、精製した後単品として利用すること
もできる。

因に、ロドデンドロール配糖体は、（±）−ロドプント
ロールより安定であり、かつ水への溶解性も高いので医
薬として用いるのに有利である。また１、この配糖体は
体内において加水分解−されて（＋）−ロドプントロー
ルになることから生理活性についても変わらないと言え
る。

以下実施例により本発明を具体的に説明する。

実施例左止囚至誘専メグスリノキの若い葉柄を適当な大きさに切断し、これ
を７０％エタノール水溶液に３分間浸漬して殺菌処理を
行った。次いで、無菌水で３回洗浄後、この切断葉柄を
剥皮し、５ａ＋ｓ前後に輪切りして下記組成の培地に置
床し、２５℃の温度で、暗所にて２０日間培養を行った
。

培地としては、ムラシゲ・スクーグ培地（シュクロース
３ｗｔ％、寒天０．９ｗｔ％、ｐＦｌ　５．８〜５．９
）に植物ホルモンとしてα−ナフタレン酢酸とベンジル
アデニンを種々の量添加したものを用いた。

上記培養の結果得られたカルスのうち、α−ナフタレン
酢酸１０−’Ｍ　、ベンジルアデニン１０−５Ｍ　ヲそ
れぞれ添加した培地で形成されたカルスを以下に用いた
。

透Ｊプ」≦懐久ｌ及上記により形成されたカルスを上記同様な新鮮培地に移
植して同条件で培養して増殖させた。さらに、ムラシゲ
・スクーグ培地１００ｍを、５００ｍ容三角フラスコに
入れ、これに上記増殖させたカルス（乾燥重量として０
．３ｇ）を加え、２５℃の温度で暗所にて往復式振とう
培養（８０往復／分）を行った。培養後得られたカルス
を凍結乾燥した。

ロドデンドロールの量ロドデンドロールは、以下の方法で合成して用いた。

メタノール１０Ｈ１に熔解した４−（ｐ−ヒドロキシフ
ェニル）−２−ブタノン（４−（ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙ　
ｐｈｅｎｙｌ）−２−ｂｕｔａｎｏｎｅ）　（東京化成
■製）２．０ｇに、メタノール３−に懸濁したＮａＢＩ
Ｉ４（和光純薬■製）０．４６ｇを添加し、室温で２４
時間反応させた。得られた反応物に水を加えて反応を止
めた後、ＩＮ塩酸を加えてｐｔ＋　６付近にした後、ジ
エチルエーテル（１００ｄ　Ｘ　３回）で抽出した。ジ
エチルエーテル抽出液は一晩無水硫酸ナトリウムで乾燥
した後、ロータリーエバポレーター中、減圧下でジエチ
ルエーテルを除去し、粗ロドデンドロール１．８２ｇを
得た。その後、メタノール中で再結晶し、針状結晶１．
６５ｇを得た。

この結晶についてＭＳ、ＩＲ，ＵＶスペクトルを測定し
、これら測定値と文献値〔薬学雑誌■（１）４１〜４６
　（１９７８）　）とを照合した結果、ロドデンドロー
ルであると同定した。

■町止二■亥員上記により誘導したカルスをムラシゲ・スクダ液体培地
中に移植して培養し、その３週間目にロドデンドロール
を培地あたり５０ｐｐｍとなるように、少量のエタノー
ルに溶解して無菌的に、上記カルスの細胞懸濁液に添加
した。さらに、１週間培養を継続し、培地ｌｊ！当り１
３．８ｇ（乾燥重量）のカルスを得た。

次いで、このにうにして得られたカルス中のロドデンド
ロール配糖体を下記により測定した。

カルス　のロドデンドロール配　　のカルス乾燥物３．６５ｇをメタノール中で３時間ずつ３
回温浸した。得られた抽出液から減圧下でメタノールを
除去し、１．１）ｇの抽出物を得た。これを水に懸濁し
た後、ジエチルエーテル、酢酸エチル、ｎ−ブタノール
で順次抽出を行い、いずれも減圧下で各溶媒を除去して
、ジエチルエーテル可溶部９２．４＋ｓｇ、酢酸エチル
可溶部２３．０ｍｇ、　ｎ−ブタツル可溶部１２０．７
ｍｇを得た。

ｎ−ブタノール可溶部をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（Ｉｌａｋｏｇｅｌ　Ｃ−２００和光純薬製）で
分画し、クロロホルム−メタノール（９：　１）溶出よ
りロドデンドリンを含む百分を、クロロホルム−メタノ
ール（４：　１）溶出よりアピオシルロドデンドリンを
含む画分をそれぞれ得た。

次に、それぞれの両分をクロロホルム−メタノール−水
（１０：　５　：　０．３５）酢酸エチル−アセトン−
ギ酸−水（５：　３　：　１　：　１）の分取Ｔ　Ｌ　
Ｃ（Ｋｉｅｓｅ１ｇｅ１６０Ｆ２５ｄ　Ｍｅｒｃｋ製）
で精製しロドデンドリン１０．５ｍｇアビオシルロドデ
ンドリン５．４ｍｇを得た。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）メグスリノキの生組織から誘導して得られたカル
スを利用してロドデンドロールもしくはその前駆体をロ
ドデンドロール配糖体に変換することを特徴とするロド
デンドロール配糖体の生産方法。
（２）カルスを培養し、増殖させたものの懸濁液にロド
デンドロールもしくはその前駆体を添加し培養すること
によりロドデンドロール配糖体に変換する請求項（１）
に記載のロドデンドロール配糖体の生産方法。