JPH0220947B2 - - Google Patents
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- JPH0220947B2 JPH0220947B2 JP54074080A JP7408079A JPH0220947B2 JP H0220947 B2 JPH0220947 B2 JP H0220947B2 JP 54074080 A JP54074080 A JP 54074080A JP 7408079 A JP7408079 A JP 7408079A JP H0220947 B2 JPH0220947 B2 JP H0220947B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/08—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
- G01N35/085—Flow Injection Analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/27—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands using photo-electric detection ; circuits for computing concentration
- G01N21/272—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands using photo-electric detection ; circuits for computing concentration for following a reaction, e.g. for determining photometrically a reaction rate (photometric cinetic analysis)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/11—Automated chemical analysis
- Y10T436/117497—Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10T436/117497—Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream
- Y10T436/118339—Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream with formation of a segmented stream
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、連続的に流れる連続したキヤリア溶
液に試料を注入して分析を行う本発明者らの開発
した基本的なフローインジエクシヨン分析法のそ
の後の発展した分析法であるストツプトフローイ
ンジエクシヨン分析法に関する。
液に試料を注入して分析を行う本発明者らの開発
した基本的なフローインジエクシヨン分析法のそ
の後の発展した分析法であるストツプトフローイ
ンジエクシヨン分析法に関する。
従来の技術及び発明が解決しようとする問題点
本発明者らによるフローインジエクシヨン分析
法は種々の国において多くの特許及び特許出願に
よつて保護されており、その基本的原理は米国特
許第4022575号に記載されている。
法は種々の国において多くの特許及び特許出願に
よつて保護されており、その基本的原理は米国特
許第4022575号に記載されている。
フローインジエクシヨン分析法はサンプルの再
現性ある濃度勾配を試薬の流れの中につくり、こ
こに生成した濃度勾配曲線を例えば分光光度計や
電位差測定等により測定するように設計された分
析方法に基づく。
現性ある濃度勾配を試薬の流れの中につくり、こ
こに生成した濃度勾配曲線を例えば分光光度計や
電位差測定等により測定するように設計された分
析方法に基づく。
しかしながら、試料溶液中に含まれる分析すべ
き成分と試薬との間の化学反応が遅い場合には、
分析方法のより良い選択性及び感度は反応速度を
測定することによつて得ることができる。このよ
うな反応速度の測定は酵素の活性及び触媒活性を
測定するときに必要である。本発明の分析法の基
礎は化学反応速度の測定にある。反応の応答曲線
の直線部分を決定することによつて反応の応答曲
線の微分値即ち傾斜、換言すれば反応速度を確実
に測定するためには、各個々の分析に対して出来
るだけ多くの測定点を得ることが望ましい。しか
しこれを現在の連続流れ分析法で達成することは
困難である。というのは唯一の可能な分析方法は
同じ流れの中に数個の測定セル又は検出器を連続
して置かなければならないからであり、これは非
常に扱いにくい。個別の分析器、特に最も進歩し
た形態である遠心分析器、は酵素の分析に関して
市場で先導的な地位を占めている。信号は、試薬
と試料が一緒に混合された瞬間からこれらの分析
器によつて連続的に検出される。
き成分と試薬との間の化学反応が遅い場合には、
分析方法のより良い選択性及び感度は反応速度を
測定することによつて得ることができる。このよ
うな反応速度の測定は酵素の活性及び触媒活性を
測定するときに必要である。本発明の分析法の基
礎は化学反応速度の測定にある。反応の応答曲線
の直線部分を決定することによつて反応の応答曲
線の微分値即ち傾斜、換言すれば反応速度を確実
に測定するためには、各個々の分析に対して出来
るだけ多くの測定点を得ることが望ましい。しか
しこれを現在の連続流れ分析法で達成することは
困難である。というのは唯一の可能な分析方法は
同じ流れの中に数個の測定セル又は検出器を連続
して置かなければならないからであり、これは非
常に扱いにくい。個別の分析器、特に最も進歩し
た形態である遠心分析器、は酵素の分析に関して
市場で先導的な地位を占めている。信号は、試薬
と試料が一緒に混合された瞬間からこれらの分析
器によつて連続的に検出される。
本発明の目的は、より簡単で同時により完全な
方法で緩慢な化学反応における分析を実施する方
法を提供することにある。
方法で緩慢な化学反応における分析を実施する方
法を提供することにある。
問題点を解決するための手段
本発明は、予め試薬を添加してある連続的に流
れるキヤリア溶液中に分析すべき成分を含む試料
溶液を注入してサンプル区域を生じさせ、サンプ
ル区域内に分析すべき成分と試薬との間の再現性
ある濃度勾配を生成させ、 該サンプル区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
でサンプル区域の流れを停止させて、分析すべき
成分と試薬との間の反応を測定セル中で進行させ
ながら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法にある。
れるキヤリア溶液中に分析すべき成分を含む試料
溶液を注入してサンプル区域を生じさせ、サンプ
ル区域内に分析すべき成分と試薬との間の再現性
ある濃度勾配を生成させ、 該サンプル区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
でサンプル区域の流れを停止させて、分析すべき
成分と試薬との間の反応を測定セル中で進行させ
ながら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法にある。
更に本発明は、連続的に流れる第１のキヤリア
溶液中に分析すべき成分を含む試料溶液を注入し
てサンプル区域を生じさせ、 連続的に流れる第２のキヤリア溶液中に試薬を
注入して試薬区域を生じさせ、 該サンプル区域と該試薬区域とを合流させて合
流区域を生じさせ、合流区域内に分析すべき成分
と試薬との間の再現性ある濃度勾配を生成させ、 該合流区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
で合流区域の流れを停止させて、分析すべき成分
と試薬との間の反応を測定セル中で進行させなが
ら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法にある。
溶液中に分析すべき成分を含む試料溶液を注入し
てサンプル区域を生じさせ、 連続的に流れる第２のキヤリア溶液中に試薬を
注入して試薬区域を生じさせ、 該サンプル区域と該試薬区域とを合流させて合
流区域を生じさせ、合流区域内に分析すべき成分
と試薬との間の再現性ある濃度勾配を生成させ、 該合流区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
で合流区域の流れを停止させて、分析すべき成分
と試薬との間の反応を測定セル中で進行させなが
ら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法にある。
本発明による所謂ストツプトフローインジエク
シヨン分析法では、分光光度計、電位差計のよう
な１つの分析機器が、試料溶液中に含まれる分析
すべき成分と試薬との間の化学反応を特徴づける
所望の測定値を検出するために使用され、試料溶
液をキヤリア溶液中に注入してから一定時間経過
後に測定セル中でサンプル区域の流れを停止させ
る。この場合流れは種々の方法で停止させること
ができる。例えば、キヤリア溶液用のポンプを止
めてもよいし、あるいは測定セルの前方に配置し
た弁で流れを止めてもよい。しかしながら、測定
セルをバイパスする分岐導管にキヤリア溶液を導
くことによつて、キヤリア溶液の流れを中断しな
いで続けて流すこともできる。
シヨン分析法では、分光光度計、電位差計のよう
な１つの分析機器が、試料溶液中に含まれる分析
すべき成分と試薬との間の化学反応を特徴づける
所望の測定値を検出するために使用され、試料溶
液をキヤリア溶液中に注入してから一定時間経過
後に測定セル中でサンプル区域の流れを停止させ
る。この場合流れは種々の方法で停止させること
ができる。例えば、キヤリア溶液用のポンプを止
めてもよいし、あるいは測定セルの前方に配置し
た弁で流れを止めてもよい。しかしながら、測定
セルをバイパスする分岐導管にキヤリア溶液を導
くことによつて、キヤリア溶液の流れを中断しな
いで続けて流すこともできる。
ストツプトフローインジエクシヨン分析法は、
その構成により、分析自身を種々の手段で実施す
ることを可能とする。このことは分析工程におい
て全く類例を見ないものである。
その構成により、分析自身を種々の手段で実施す
ることを可能とする。このことは分析工程におい
て全く類例を見ないものである。
通常の反応速度の測定においては、２種の試薬
の溶液を混合室を通過させてそれらの溶液を全体
的に且つ瞬間的に混ぜ合わせ、その結果、この瞬
間的に均質となつた混合物中の化学反応を数ミリ
秒以内に検出し始めることができる。
の溶液を混合室を通過させてそれらの溶液を全体
的に且つ瞬間的に混ぜ合わせ、その結果、この瞬
間的に均質となつた混合物中の化学反応を数ミリ
秒以内に検出し始めることができる。
しかしながら、このような迅速な混合は、多く
の場合、例えば全反応時間がしばしば数秒にもな
る酵素の分析の場合、好ましいものではない。本
発明によるストツプトフローインジエクシヨン分
析法では、まずサンプル区域は、管又はコイルを
通る間に予め試薬（例えば酵素溶液）を混合して
あるキヤリア溶液中において制御された分散を被
る。次に、サンプル区域の流れを測定セル中で停
止させ、サンプル区域中に形成された分析すべき
成分と試薬との再現性ある濃度勾配に基づいて、
化学反応を連続的に検出する。多くの場合、迅速
で効果的な混合によつて得られる均質な溶液の測
定の代わりに、サンプル区域の緩慢な分散の間に
形成される濃度勾配から出発することが、より良
い結果を生じさせる。
の場合、例えば全反応時間がしばしば数秒にもな
る酵素の分析の場合、好ましいものではない。本
発明によるストツプトフローインジエクシヨン分
析法では、まずサンプル区域は、管又はコイルを
通る間に予め試薬（例えば酵素溶液）を混合して
あるキヤリア溶液中において制御された分散を被
る。次に、サンプル区域の流れを測定セル中で停
止させ、サンプル区域中に形成された分析すべき
成分と試薬との再現性ある濃度勾配に基づいて、
化学反応を連続的に検出する。多くの場合、迅速
で効果的な混合によつて得られる均質な溶液の測
定の代わりに、サンプル区域の緩慢な分散の間に
形成される濃度勾配から出発することが、より良
い結果を生じさせる。
以下に本発明を、実施例及び図面を参照して詳
しく説明する。ストツプトフローインジエクシヨ
ン分析法の原理の研究及び照明のために、グルコ
ースヒドロゲナーゼとβ―Ｄ―グルコースとの間
の反応をグルコースの反応速度の測定のために使
用した。
しく説明する。ストツプトフローインジエクシヨ
ン分析法の原理の研究及び照明のために、グルコ
ースヒドロゲナーゼとβ―Ｄ―グルコースとの間
の反応をグルコースの反応速度の測定のために使
用した。
メルク社の市販のグルコース―酵素系を使用し
補酵素（co―enzyme）のニコチンアミド―アデ
ニン―ジニクレチオド（NADH）を発色指示薬
（これは340nmで分光光度計により測定できる）
として使用した。アナリテイカル・シミカ・アク
タ（Analytical Chimica Acta）第89巻（1977
年）、241〜244頁には、この基礎化学事項及び試
薬の組成並びに１点及び２点での反応速度測定法
についての試験が記載されている。
補酵素（co―enzyme）のニコチンアミド―アデ
ニン―ジニクレチオド（NADH）を発色指示薬
（これは340nmで分光光度計により測定できる）
として使用した。アナリテイカル・シミカ・アク
タ（Analytical Chimica Acta）第89巻（1977
年）、241〜244頁には、この基礎化学事項及び試
薬の組成並びに１点及び２点での反応速度測定法
についての試験が記載されている。
本発明の方法で使用する装置の配置を第１図に
示す。酵素を含んだキヤリア溶液を2.5ml／分の
割合で蠕動ポンプ２を経て連続した流れとして導
管１中を連続的に流し、37℃に保つた恒温槽３内
の、直径0.75mm、長さ450mmの第１コイル４中で
キヤリア溶液の流れを一定温度にする。第１コイ
ル４の後で試料溶液はサンプル添加装置５、例え
ばスエーデン特許願第7610110―４に詳述された
サンプル添加装置に導かれ、キヤリア溶液及び試
料溶液の混合物は直径0.50mm、長さ300mmの第２
コイル６中を流れて分光光度計７に導かれ、こで
340nmの波長で測定が行われる。溶液は分光光度
計７から管（排出管）８を通じて排出される。コ
イル４，６及び分光光度計７を備えるこの場合に
は、これらは37℃に保たれた恒温槽３の中に設置
される。
示す。酵素を含んだキヤリア溶液を2.5ml／分の
割合で蠕動ポンプ２を経て連続した流れとして導
管１中を連続的に流し、37℃に保つた恒温槽３内
の、直径0.75mm、長さ450mmの第１コイル４中で
キヤリア溶液の流れを一定温度にする。第１コイ
ル４の後で試料溶液はサンプル添加装置５、例え
ばスエーデン特許願第7610110―４に詳述された
サンプル添加装置に導かれ、キヤリア溶液及び試
料溶液の混合物は直径0.50mm、長さ300mmの第２
コイル６中を流れて分光光度計７に導かれ、こで
340nmの波長で測定が行われる。溶液は分光光度
計７から管（排出管）８を通じて排出される。コ
イル４，６及び分光光度計７を備えるこの場合に
は、これらは37℃に保たれた恒温槽３の中に設置
される。
一連の試験のために、試料溶液を以下のとおり
調製した。グルコースの濃度を１ミリモルから20
ミリモルまで段々と増加させた。各試験におい
て、30マイクロリツトルの各試料溶液を、試薬と
して一定濃度の酵素を予め添加してあるキヤリア
溶液中にサンプル添加装置５を用いて注入した。
分光光度計７のチヤート上に記録された吸光度曲
線がピークに達した直後、サンプル区域の流れを
測定セル中で停止させた。サンプル区域の流れを
９秒間停止させた後、サンプル区域の流れを再開
させた。このようにして以下の３つの部分から成
る測定サイクルが得られた。
調製した。グルコースの濃度を１ミリモルから20
ミリモルまで段々と増加させた。各試験におい
て、30マイクロリツトルの各試料溶液を、試薬と
して一定濃度の酵素を予め添加してあるキヤリア
溶液中にサンプル添加装置５を用いて注入した。
分光光度計７のチヤート上に記録された吸光度曲
線がピークに達した直後、サンプル区域の流れを
測定セル中で停止させた。サンプル区域の流れを
９秒間停止させた後、サンプル区域の流れを再開
させた。このようにして以下の３つの部分から成
る測定サイクルが得られた。
(a) 試料溶液の注入、分散及び検出器（測定セ
ル）への搬送：4.5秒 (b) サンプル区域の流れを測定セル中で停止さ
せ、サンプル区域において生成したグルコース
と酵素の反応によつて生じた反応生成物の量の
測定を行う：この間９秒 (c) 洗浄期間：10秒 その後次の試料溶液を直ちに注入する。この測
定サイクルにおいては１時間当たりの試料測定回
数は150回である。
ル）への搬送：4.5秒 (b) サンプル区域の流れを測定セル中で停止さ
せ、サンプル区域において生成したグルコース
と酵素の反応によつて生じた反応生成物の量の
測定を行う：この間９秒 (c) 洗浄期間：10秒 その後次の試料溶液を直ちに注入する。この測
定サイクルにおいては１時間当たりの試料測定回
数は150回である。
第２図は、キヤリア溶液中の酵素の濃度を一定
として、試料溶液中のグルコースの濃度を変えて
行つた上記の試験結果を示す。第２図において、
横軸は試料溶液をキヤリア溶液中に注入してから
の経過時間を要し、縦軸はグルコースと酵素の反
応により生じた反応生成物の濃度を示し、この濃
度は分光光度計を用いて測定した吸光度で表し
た。第２図において、曲線S1はグルコース濃度１
ミリモル／リツトル、曲線S2はグルコース濃度４
ミリモル／リツトル、曲線S3はグルコース濃度８
ミリモル／リツトル、曲線S4はグルコース濃度12
ミリモル／リツトル、曲線S5はグルコース濃度16
ミリモル／リツトルの場合の吸光度曲線である。
として、試料溶液中のグルコースの濃度を変えて
行つた上記の試験結果を示す。第２図において、
横軸は試料溶液をキヤリア溶液中に注入してから
の経過時間を要し、縦軸はグルコースと酵素の反
応により生じた反応生成物の濃度を示し、この濃
度は分光光度計を用いて測定した吸光度で表し
た。第２図において、曲線S1はグルコース濃度１
ミリモル／リツトル、曲線S2はグルコース濃度４
ミリモル／リツトル、曲線S3はグルコース濃度８
ミリモル／リツトル、曲線S4はグルコース濃度12
ミリモル／リツトル、曲線S5はグルコース濃度16
ミリモル／リツトルの場合の吸光度曲線である。
第２図から理解できるように、試料溶液中のグ
ルコース濃度が高くなる程、サンプル区域の流れ
を停止させている間に生成する反応生成物の単位
時間当たりの生成量、即ち吸光度曲線の4.5秒か
ら13.5秒の間の直線部分の傾きは大きくなる。こ
の傾きは、グルコースと酵素の反応速度を表す。
従つてキヤリア溶液中の試薬即ち酵素の濃度を一
定とし、試料溶液中の分析すべき成分の濃度即ち
グルコース濃度と反応速度即ち上記直線部分の傾
きとの関係を予め求めておけば、吸光度曲線の直
線部分の傾きを測定することによつて、試料溶液
中のグルコース濃度、即ち分析すべき成分の量を
決定することができる。
ルコース濃度が高くなる程、サンプル区域の流れ
を停止させている間に生成する反応生成物の単位
時間当たりの生成量、即ち吸光度曲線の4.5秒か
ら13.5秒の間の直線部分の傾きは大きくなる。こ
の傾きは、グルコースと酵素の反応速度を表す。
従つてキヤリア溶液中の試薬即ち酵素の濃度を一
定とし、試料溶液中の分析すべき成分の濃度即ち
グルコース濃度と反応速度即ち上記直線部分の傾
きとの関係を予め求めておけば、吸光度曲線の直
線部分の傾きを測定することによつて、試料溶液
中のグルコース濃度、即ち分析すべき成分の量を
決定することができる。
第３図に上記とは別の反応速度の測定結果を示
す。第３図において、一定濃度の酵素を予め添加
したキヤリア溶液中に、15ミリモル／リツトルの
グルコースを含む試料溶液を30マイクロリツトル
注入した。第３図の横軸は試料溶液をキヤリア溶
液中に注入してからの経過時間を表し、縦軸はグ
ルコースと酵素の反応により生じた反応生成物の
濃度を示し、この濃度は分光光度計を用いて測定
した吸光度で表した。
す。第３図において、一定濃度の酵素を予め添加
したキヤリア溶液中に、15ミリモル／リツトルの
グルコースを含む試料溶液を30マイクロリツトル
注入した。第３図の横軸は試料溶液をキヤリア溶
液中に注入してからの経過時間を表し、縦軸はグ
ルコースと酵素の反応により生じた反応生成物の
濃度を示し、この濃度は分光光度計を用いて測定
した吸光度で表した。
第３図の実線S′0は、サンプル区域の流れを停
止させずに連続して測定セル中を通過させたとき
得られる吸光度曲線である。破線S′1〜S′7の各々
は、試料溶液をキヤリア溶液中に注入してから或
る時間経過後にサンプル区域を測定セル中で停止
させたとき得られた吸光度曲線である。破線S′1
〜S′7においては、試料溶液をキヤリア溶液中に
注入してから測定セル中でサンプル区域を停止さ
せる迄の時間を次第に長くしている。サンプル区
域が第２コイル６中を流れる間に、試料溶液中の
分析すべき成分と試薬との間の再現性ある濃度勾
配が形成される。即ち、サンプル区域内の分析す
べき成分と試薬との割合は、サンプル区域の流れ
の方向に沿つて変化する。従つて、分析すべき成
分と試薬との間の化学反応速度及び生成する反応
生成物の量は、サンプル区域の流れの方向に沿つ
て変化する。
止させずに連続して測定セル中を通過させたとき
得られる吸光度曲線である。破線S′1〜S′7の各々
は、試料溶液をキヤリア溶液中に注入してから或
る時間経過後にサンプル区域を測定セル中で停止
させたとき得られた吸光度曲線である。破線S′1
〜S′7においては、試料溶液をキヤリア溶液中に
注入してから測定セル中でサンプル区域を停止さ
せる迄の時間を次第に長くしている。サンプル区
域が第２コイル６中を流れる間に、試料溶液中の
分析すべき成分と試薬との間の再現性ある濃度勾
配が形成される。即ち、サンプル区域内の分析す
べき成分と試薬との割合は、サンプル区域の流れ
の方向に沿つて変化する。従つて、分析すべき成
分と試薬との間の化学反応速度及び生成する反応
生成物の量は、サンプル区域の流れの方向に沿つ
て変化する。
たとえ一定の酵素濃度及び一定のグルコース濃
度から得られたサンプル区域を用いても、濃度勾
配プロフイールの存在によつて、グルコースと酵
素との間の異なつた反応の段階を測定に利用でき
ることが、第３図から理解できよう。こうして記
録された吸光度曲線の傾きは異なるものをなる。
従つて、常にサンプル区域中の同じ部分中で反応
速度の測定を行うことが重要である。換言すれ
ば、試料溶液の注入からサンプル区域の停止まで
の時間は各試料毎に（あるいは標準試料と供試試
料との間で、あるいはその逆の場合も）完全に一
定に保たれなければならない。このタイプの分析
では、測定値が最高ピークに達した後の分散した
サンプル区域の任意の部分を再現性よく選択する
可能性を検出器は与える。分析すべき成分／試薬
の比を選択する融通性のあることが酵素の分析に
多くの有利な面を与える。
度から得られたサンプル区域を用いても、濃度勾
配プロフイールの存在によつて、グルコースと酵
素との間の異なつた反応の段階を測定に利用でき
ることが、第３図から理解できよう。こうして記
録された吸光度曲線の傾きは異なるものをなる。
従つて、常にサンプル区域中の同じ部分中で反応
速度の測定を行うことが重要である。換言すれ
ば、試料溶液の注入からサンプル区域の停止まで
の時間は各試料毎に（あるいは標準試料と供試試
料との間で、あるいはその逆の場合も）完全に一
定に保たれなければならない。このタイプの分析
では、測定値が最高ピークに達した後の分散した
サンプル区域の任意の部分を再現性よく選択する
可能性を検出器は与える。分析すべき成分／試薬
の比を選択する融通性のあることが酵素の分析に
多くの有利な面を与える。
上述の原理に基づいてグルコースの多数の分析
を行つた。各種濃度のグルコース標準溶液の試料
溶液を用いて検量線を作成した。キヤリア溶液中
に添加された酵素濃度を一定に保ち、既知の濃度
の各種グルコース標準溶液の試料溶液30マイクロ
リツトルをキヤリア溶液中に注入した。試料溶液
の注入からサンプル区域を測定セル中で停止する
までの時間を８秒とした。グルコースと酵素の反
応生成物であるNADHの濃度を分光光度計を用
いて波長340nmにて測定した。測定は37℃に保つ
た恒温槽内で行つた。反応生成物の濃度は、分光
光度計に接続された記録計のチヤート上の吸光度
曲線で表される。サンプル区域を測定セル中で停
止させた後に得られる吸光度曲線の直線部分の傾
きを求めた。直線部分の傾きを表示する方法は各
種あるが、ここでは吸光度曲線の直線部分におい
て４秒間に変化する吸光度チヤート上の変化量を
ミリメートルで表示した。
を行つた。各種濃度のグルコース標準溶液の試料
溶液を用いて検量線を作成した。キヤリア溶液中
に添加された酵素濃度を一定に保ち、既知の濃度
の各種グルコース標準溶液の試料溶液30マイクロ
リツトルをキヤリア溶液中に注入した。試料溶液
の注入からサンプル区域を測定セル中で停止する
までの時間を８秒とした。グルコースと酵素の反
応生成物であるNADHの濃度を分光光度計を用
いて波長340nmにて測定した。測定は37℃に保つ
た恒温槽内で行つた。反応生成物の濃度は、分光
光度計に接続された記録計のチヤート上の吸光度
曲線で表される。サンプル区域を測定セル中で停
止させた後に得られる吸光度曲線の直線部分の傾
きを求めた。直線部分の傾きを表示する方法は各
種あるが、ここでは吸光度曲線の直線部分におい
て４秒間に変化する吸光度チヤート上の変化量を
ミリメートルで表示した。
こうして得られた検量線を第４図に示す。第４
図において、横軸は試料溶液１リツトル当たりに
含まれるグルコースのミリモル数であり、縦軸は
逆光度曲線の直線部分の傾きを、直線部分におけ
る４秒間に変化する吸光度のチヤート上の変化量
（単位はミリメートルである）で表したものであ
る。第４図において、○ぐ
図において、横軸は試料溶液１リツトル当たりに
含まれるグルコースのミリモル数であり、縦軸は
逆光度曲線の直線部分の傾きを、直線部分におけ
る４秒間に変化する吸光度のチヤート上の変化量
（単位はミリメートルである）で表したものであ
る。第４図において、○ぐ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 予め試薬を添加してある連続的に流れるキヤ
リア溶液中に分析すべき成分を含む試料溶液を注
入してサンプル区域を生じさせ、サンプル区域内
に分析すべき成分と試薬との間の再現性ある濃度
勾配を生成させ、 該サンプル区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
でサンプル区域の流れを停止させて、分析すべき
成分と試薬との間の反応を測定セル中で進行させ
ながら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法。 ２ 前記試薬が酵素であり、前記分析すべき成分
が基質であり、該酵素の選択的触媒作用を用いて
基質の量を決定する特許請求の範囲第１項記載の
ストツプトフローインジエクシヨン分析法。 ３ 前記試薬が基質であり、前記分析すべき成分
が酵素であり、過剰の基質を用いて酵素活性又は
触媒活性を決定する特許請求の範囲第１項記載の
ストツプトフローインジエクシヨン分析法。 ４ 連続的に流れる第１のキヤリア溶液中に分析
すべき成分を含む試料溶液を注入してサンプル区
域を生じさせ、 連続的に流れる第２のキヤリア溶液中に試薬を
注入して試薬区域を生じさせ、 該サンプル区域と該試薬区域とを合流させて合
流区域を生じさせ、合流区域内に分析すべき成分
と試薬との間の再現性ある濃度勾配を生成させ、 該合流区域を測定セルに導き、 試料溶液注入から一定時間経過後、測定セル中
で合流区域の流れを停止させて、分析すべき成分
と試薬との間の反応を測定セル中で進行させなが
ら、該反応を特徴づける測定値を記録し、 該記録された値から分析すべき成分と試薬との
反応速度を決定し、 該反応速度から試料溶液中の分析すべき成分の
量を決定することを特徴とするストツプトフロー
インジエクシヨン分析法。 ５ 前記試薬が酵素であり、前記分析すべき成分
が基質であり、該酵素の選択的触媒作用を用いて
基質の量を決定する特許請求の範囲第４項記載の
ストツプトフローインジエクシヨン分析法。 ６ 前記試薬が基質であり、前記分析すべき成分
が酵素であり、過剰の基質を用いて酵素活性又は
触媒活性を決定する特許請求の範囲第４項記載の
ストツプトフローインジエクシヨン分析法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7806853A SE418017B (sv) | 1978-06-14 | 1978-06-14 | Sett att kontinuerligt bestemma olika langsamt reagerande substanser kvantitativt med anvendning av en enda metcell |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5529791A JPS5529791A (en) | 1980-03-03 |
| JPH0220947B2 true JPH0220947B2 (ja) | 1990-05-11 |
Family
ID=20335201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7408079A Granted JPS5529791A (en) | 1978-06-14 | 1979-06-14 | Method of continuous measuring |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4399225A (ja) |
| JP (1) | JPS5529791A (ja) |
| DE (1) | DE2923970A1 (ja) |
| FR (1) | FR2432173A1 (ja) |
| GB (1) | GB2023286B (ja) |
| SE (1) | SE418017B (ja) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4315754A (en) * | 1979-08-28 | 1982-02-16 | Bifok Ab | Flow injection analysis with intermittent flow |
| SE450531B (sv) * | 1981-05-26 | 1987-06-29 | Bifok Ab | Sett och apparat for kvantitativ bestemning av emnen som kan bilda flyktiga hydrider |
| JPS5847261A (ja) * | 1981-09-08 | 1983-03-18 | イ− アイ デユポン ドウ ヌム−ル アンド カンパニ− | 液体見本の分析方法及びその装置 |
| US4486097A (en) * | 1981-09-09 | 1984-12-04 | E. I. Du Pont De Nemours & Company, Inc. | Flow analysis |
| US4610544A (en) * | 1981-09-09 | 1986-09-09 | Clifford Riley | Flow analysis |
| DK160268C (da) * | 1981-11-20 | 1991-07-22 | Bifok Ab | Anordning for tilfoersel af proeveoploesning til et analyseapparatur for usegmenteret vaeskegennemstroemningsanalyse samt fremgangsmaader til at tilfoere proeveoploesning til analyseapparaturet |
| JPS5887464A (ja) * | 1981-11-20 | 1983-05-25 | Hitachi Ltd | 連続流れ方式自動分析方法 |
| JPS6049262A (ja) * | 1983-08-30 | 1985-03-18 | Japan Spectroscopic Co | アデニン自動分析装置 |
| SE455537B (sv) * | 1985-01-31 | 1988-07-18 | Bifok Ab | Sett for kemisk analys vid vilken provet och/eller dess reaktionsprodukter bringas att passera en genomstromningscell, samt en apparatur for utovande av settet |
| US4798803A (en) * | 1985-07-10 | 1989-01-17 | The Dow Chemical Company | Method for titration flow injection analysis |
| GB8600679D0 (en) * | 1986-01-13 | 1986-02-19 | Imp Group Plc | Chemical analysis of tobacco/smoking-related products |
| EP0243310A3 (de) * | 1986-04-18 | 1989-10-18 | Ciba-Geigy Ag | Verfahren zur Steuerung und Optimierung industrieller Prozesse |
| US4958295A (en) * | 1986-05-21 | 1990-09-18 | Hercules Incorporated | Analyzing apparatus and method for analysis of liquid samples |
| JPH0672845B2 (ja) * | 1986-09-01 | 1994-09-14 | 富士写真フイルム株式会社 | 分析方法 |
| FI80800C (fi) * | 1986-10-03 | 1990-07-10 | Kone Oy | Foerfarande foer bestaemning av den totala karbonathalten speciellt i en biologisk vaetska. |
| US4859422A (en) * | 1987-07-17 | 1989-08-22 | Fisher Scientific Company | Analysis system |
| US4974592A (en) * | 1988-11-14 | 1990-12-04 | American Sensor Systems Corporation | Continuous on-line blood monitoring system |
| DE3908040A1 (de) * | 1989-03-13 | 1990-09-20 | Kernforschungsz Karlsruhe | Verfahren zur probennahme und zur probenvorbereitung von geloesten stoffen fuer deren spektrometrischen nachweis |
| EP0405583A1 (en) * | 1989-06-30 | 1991-01-02 | Kanzaki Paper Manufacturing Co., Ltd. | Method and apparatus for flow analysis with enzyme electrode |
| DE4007246C2 (de) * | 1990-03-08 | 1994-06-01 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Durchfluß-Analysenverfahren und -vorrichtung |
| DE4018928C2 (de) * | 1990-06-13 | 1996-03-28 | Bodenseewerk Perkin Elmer Co | Vorrichtung zur Eingabe von flüssigen Proben in einen Trägerflüssigkeitsstrom |
| US5221521A (en) * | 1990-07-26 | 1993-06-22 | Kanzaki Paper Mfg. Co., Ltd. | Sample liquid dilution system for analytical measurements |
| IT1244608B (it) * | 1990-09-14 | 1994-08-08 | Instrumentation Lab Spa | Procedimento ed apparecchiatura per la determinazione elettrochimica di o2 in un emogasanalizzatore. |
| US5284773A (en) * | 1992-08-28 | 1994-02-08 | The Uab Research Foundation | Determination of lipoprotein concentration in blood by controlled dispersion flow analysis |
| DE4411269C2 (de) * | 1994-03-31 | 1997-12-11 | Danfoss As | Vorrichtung und Verfahren zum Einspeisen einer Probe in einen Probenkanal |
| DE19622847A1 (de) * | 1996-06-07 | 1997-12-11 | Danfoss As | Analysevorrichtung und Analyseverfahren |
| US5958584A (en) * | 1996-07-22 | 1999-09-28 | Dsm Nv | Radiation-curable, optical glass fiber coating composition and optical glass fiber drawing method |
| US6720186B1 (en) * | 1998-04-03 | 2004-04-13 | Symyx Technologies, Inc. | Method of research for creating and testing novel catalysts, reactions and polymers |
| US6632619B1 (en) | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| WO1998052691A1 (en) | 1997-05-16 | 1998-11-26 | Alberta Research Council | Microfluidic system and methods of use |
| DK174082B1 (da) * | 1997-07-04 | 2002-05-27 | Foss Electric As | Fremgangsmåde til bestemmelse af indholdet af en komponent i en væskeprøve |
| US6175409B1 (en) | 1999-04-02 | 2001-01-16 | Symyx Technologies, Inc. | Flow-injection analysis and variable-flow light-scattering methods and apparatus for characterizing polymers |
| EP1310791A3 (en) * | 1998-04-03 | 2004-08-04 | Symyx Technologies, Inc. | Rapid characterization of polymers with a high-aspect ratio column |
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| US6890487B1 (en) | 1999-09-30 | 2005-05-10 | Science & Technology Corporation ©UNM | Flow cytometry for high throughput screening |
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| DE10318956A1 (de) * | 2003-04-26 | 2004-11-11 | Kanesho Soil Treatment Bvba | Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis von flüchtigen Analyten in Luftproben |
| US7476360B2 (en) | 2003-12-09 | 2009-01-13 | Genefluidics, Inc. | Cartridge for use with electrochemical sensor |
| FR2864246B1 (fr) * | 2003-12-17 | 2007-01-26 | Commissariat Energie Atomique | Procede et systeme d'analyse d'un echantillon liquide. |
| WO2006029017A1 (en) * | 2004-09-03 | 2006-03-16 | Symyx Technologies, Inc. | System and method for rapid chromatography with fluid temperature and mobile phase composition control |
| US8143070B2 (en) | 2007-06-05 | 2012-03-27 | Ecolab Usa Inc. | Optical cell |
| WO2010135627A1 (en) | 2009-05-21 | 2010-11-25 | Intellicyt | System and method for separating samples in a continuous flow |
| US9752964B1 (en) | 2009-06-22 | 2017-09-05 | Stc.Unm | Flow cytometry apparatus pulling sample stream through observation chamber |
| US8748191B2 (en) * | 2010-08-02 | 2014-06-10 | Ecolab Usa Inc. | Stop-flow analytical systems and methods |
| WO2020129223A1 (ja) * | 2018-12-20 | 2020-06-25 | 株式会社島津製作所 | 分析制御装置、液体クロマトグラフ分析システムおよび分析方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US3690833A (en) * | 1970-05-04 | 1972-09-12 | Damon Corp | Automated fluids analyzer having selectively interrupted flow |
| NL7304229A (ja) * | 1973-03-27 | 1974-10-01 | ||
| DK150802C (da) * | 1974-09-16 | 1988-02-01 | Bifok Ab | Fremgangsmaade og apparat til kontinuerlig hoejhastighedsanalyse af en vaeskeproeve i en baererstroem |
| SE414554B (sv) * | 1977-02-16 | 1980-08-04 | Bifok Ab | Sett vid kontinuerlig genomstromningsanalys, der en oavbruten, laminer berarstromning, icke segmenterad av luftblasor, genom en huvudledning transporterar en provplugg till en genomstromningsdetektor samt anordning ... |
| US4315754A (en) * | 1979-08-28 | 1982-02-16 | Bifok Ab | Flow injection analysis with intermittent flow |
| CA1174833A (en) * | 1980-06-10 | 1984-09-25 | Alan Queen | Stopped-flow apparatus |
-
1978
- 1978-06-14 SE SE7806853A patent/SE418017B/sv not_active IP Right Cessation
-
1979
- 1979-06-13 GB GB7920567A patent/GB2023286B/en not_active Expired
- 1979-06-13 DE DE19792923970 patent/DE2923970A1/de active Granted
- 1979-06-13 FR FR7915103A patent/FR2432173A1/fr active Granted
- 1979-06-14 JP JP7408079A patent/JPS5529791A/ja active Granted
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