JPH076966B2 - 糖類の分析法及びその装置 - Google Patents
糖類の分析法及びその装置Info
- Publication number
- JPH076966B2 JPH076966B2 JP59146341A JP14634184A JPH076966B2 JP H076966 B2 JPH076966 B2 JP H076966B2 JP 59146341 A JP59146341 A JP 59146341A JP 14634184 A JP14634184 A JP 14634184A JP H076966 B2 JPH076966 B2 JP H076966B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- mobile phase
- saccharide
- saccharides
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Description
【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は糖類の分析法及び装置に関する。
（ロ）従来技術 この発明の発明者は、すでに糖類の分析法及び装置を特
開昭58-216953号公報に開示している。すなわち、糖類
を含有する試料を液体クロマトグラフイに付して得たカ
ラム溶離液に塩基性アミノ酸を含有するホウ酸水溶液か
らなる反応試薬を加え、加熱反応を行つた後冷却し、励
起光をあてて蛍光光度を測定するか及び／又は紫外線を
あてて吸光度を測定することにより糖類を分析する方法
と、液体クロマトグラフ装置本体に、そのカラム溶離液
流路から反応液流路を延設し、この流路に塩基性アミノ
酸添加のホウ酸水溶液の供給流路を接続し、次いで加熱
部と冷却部と蛍光光度測定部及び／又は紫外線吸光光度
測定部とをこの順で付設した糖類分析装置である。
開昭58-216953号公報に開示している。すなわち、糖類
を含有する試料を液体クロマトグラフイに付して得たカ
ラム溶離液に塩基性アミノ酸を含有するホウ酸水溶液か
らなる反応試薬を加え、加熱反応を行つた後冷却し、励
起光をあてて蛍光光度を測定するか及び／又は紫外線を
あてて吸光度を測定することにより糖類を分析する方法
と、液体クロマトグラフ装置本体に、そのカラム溶離液
流路から反応液流路を延設し、この流路に塩基性アミノ
酸添加のホウ酸水溶液の供給流路を接続し、次いで加熱
部と冷却部と蛍光光度測定部及び／又は紫外線吸光光度
測定部とをこの順で付設した糖類分析装置である。
上記分析技術では、塩基性アミノ酸を含有するホウ酸水
溶液からなる反応試薬は、糖類含有試料を液体クロマト
グラフイに付して得られた溶離液に加えて反応させてい
るので、上記反応試薬を溶離液に添加するための供給流
路を設ける必要があり、しかも反応試薬と溶離液との混
合が不充分なことが原因で得られたクロマトグラムにノ
イズやドリフトが生ずる場合がある。
溶液からなる反応試薬は、糖類含有試料を液体クロマト
グラフイに付して得られた溶離液に加えて反応させてい
るので、上記反応試薬を溶離液に添加するための供給流
路を設ける必要があり、しかも反応試薬と溶離液との混
合が不充分なことが原因で得られたクロマトグラムにノ
イズやドリフトが生ずる場合がある。
（ハ）発明の目的 この発明の目的は、前記従来技術の分析法とその装置と
の改良に関するもので、従来技術の分析法とその装置を
より簡略化し、しかも高精度で再現性良好な分析を行え
る糖類の分析法及びその装置を提供するにある。
の改良に関するもので、従来技術の分析法とその装置を
より簡略化し、しかも高精度で再現性良好な分析を行え
る糖類の分析法及びその装置を提供するにある。
（ニ）発明の構成 この発明は、糖類含有の試料を、反応試薬のアルギニ
ン、リジン、ヒスチジンから選択される0.01〜５％濃度
のアミノ酸と0.05〜0.5M濃度のホウ酸とを含有するpH7
〜10の移動相を用いる液体クロマトグラフイに付して溶
離し、得られた溶離液を加熱して反応試薬と糖類との反
応を行つた後冷却し、生成した反応液に励起光をあてて
蛍光光度を測定するか及び／又は紫外線をあてて吸光度
を測定することにより糖類を分析することとからなる糖
類の分析法と、この分析法の実施に直接使用する分析装
置である、反応試薬であるアミノ酸とホウ酸とを含有す
る移動相容器、移動相送液ポンプ、試料注入部及び分離
カラムとからなる液体クロマトグラフ装置、加熱槽を具
備する反応部、冷却部並びに蛍光光度測定部及び／又は
紫外線吸光光度測定部とをこの順路で連結してなる糖類
の分析装置を提供するものである。
ン、リジン、ヒスチジンから選択される0.01〜５％濃度
のアミノ酸と0.05〜0.5M濃度のホウ酸とを含有するpH7
〜10の移動相を用いる液体クロマトグラフイに付して溶
離し、得られた溶離液を加熱して反応試薬と糖類との反
応を行つた後冷却し、生成した反応液に励起光をあてて
蛍光光度を測定するか及び／又は紫外線をあてて吸光度
を測定することにより糖類を分析することとからなる糖
類の分析法と、この分析法の実施に直接使用する分析装
置である、反応試薬であるアミノ酸とホウ酸とを含有す
る移動相容器、移動相送液ポンプ、試料注入部及び分離
カラムとからなる液体クロマトグラフ装置、加熱槽を具
備する反応部、冷却部並びに蛍光光度測定部及び／又は
紫外線吸光光度測定部とをこの順路で連結してなる糖類
の分析装置を提供するものである。
この発明の発明者は、移動相中に反応試薬を混合してお
いても、分離カラムにおける糖類の分離に悪影響が認め
られないことを見出してこの発明の分析法に到達したも
のであつて、移動相中に反応試薬が混合されていること
から、前記従来技術のように溶離液と反応試薬との混合
が原因で起こるクロマトグラムのノイズやドリツプが起
らずまた反応試薬を供給する流路を設けなくてもよいと
いう利点を有する。
いても、分離カラムにおける糖類の分離に悪影響が認め
られないことを見出してこの発明の分析法に到達したも
のであつて、移動相中に反応試薬が混合されていること
から、前記従来技術のように溶離液と反応試薬との混合
が原因で起こるクロマトグラムのノイズやドリツプが起
らずまた反応試薬を供給する流路を設けなくてもよいと
いう利点を有する。
この発明に用いられるアミノ酸としては、アルギニン、
リジン、ヒスチジンなどが挙げられる。移動相として
は、0.01〜５％の濃度のアミノ酸と0.05〜0.5Mのホウ酸
を含有する水溶液で、水酸化カリウムなどのアルカリで
pHをほぼ７〜10に調整されたものが用いられる。
リジン、ヒスチジンなどが挙げられる。移動相として
は、0.01〜５％の濃度のアミノ酸と0.05〜0.5Mのホウ酸
を含有する水溶液で、水酸化カリウムなどのアルカリで
pHをほぼ７〜10に調整されたものが用いられる。
糖類含有試料は上記移動相を用い、Shim−packISA−07/
S2504（島津製）などの通常用いられる分離カラムで溶
離される。などこの溶離は室温〜70℃の温度で行われ
る。次いで得られた溶離液は加熱されて糖類と前記反応
試薬との反応が行われる。この反応は140〜180℃で３〜
５分間行うのが好ましい。生成した反応液は室温まで冷
却してこれを蛍光光度計及び／又は紫外吸光光度計に導
いて蛍光光度及び／又は吸光光度を測定することにより
糖類を定性及び／又は定量分析される。
S2504（島津製）などの通常用いられる分離カラムで溶
離される。などこの溶離は室温〜70℃の温度で行われ
る。次いで得られた溶離液は加熱されて糖類と前記反応
試薬との反応が行われる。この反応は140〜180℃で３〜
５分間行うのが好ましい。生成した反応液は室温まで冷
却してこれを蛍光光度計及び／又は紫外吸光光度計に導
いて蛍光光度及び／又は吸光光度を測定することにより
糖類を定性及び／又は定量分析される。
一方この発明の分析装置の主要な構成上の特徴は、前記
のように反応試薬が移動相中に含有されているので、前
記従来技術の装置と比べると、別個に反応試薬の供給流
路を設ける必要がなく著しく簡略になつていることであ
る。そしてこの発明は連続的でかつ一過式であるので、
高速分析が可能でかつ完全に自動化することができる。
のように反応試薬が移動相中に含有されているので、前
記従来技術の装置と比べると、別個に反応試薬の供給流
路を設ける必要がなく著しく簡略になつていることであ
る。そしてこの発明は連続的でかつ一過式であるので、
高速分析が可能でかつ完全に自動化することができる。
この発明に係る分析法およびその装置で分析できる糖類
としては、例えばグルコース、マンノース、ガラクトー
ス、果糖、ラムノース等の単糖、マルトース、ラクトー
ス、マルトトリオース等のオリゴ多糖、グルコサミン、
ガラクトサミン等のアミノ糖、グルクロン酸、ガラクツ
ロン酸等のウロン酸が挙げられ、あらゆる糖類に応用す
ることができる。特に生体試料のように、これらの糖類
を微量に及び／又は多成分含んでいるものの分析に好適
である。
としては、例えばグルコース、マンノース、ガラクトー
ス、果糖、ラムノース等の単糖、マルトース、ラクトー
ス、マルトトリオース等のオリゴ多糖、グルコサミン、
ガラクトサミン等のアミノ糖、グルクロン酸、ガラクツ
ロン酸等のウロン酸が挙げられ、あらゆる糖類に応用す
ることができる。特に生体試料のように、これらの糖類
を微量に及び／又は多成分含んでいるものの分析に好適
である。
（ホ）実施例 以下図に示す実施例に基づいてこの発明を説明するが、
これによつてこの発明が限定されるものではない。
これによつてこの発明が限定されるものではない。
第１図にこの発明の分析装置の一実施例の構成説明図を
示した。この分析装置は、液体クロマトグラフ（１）、
反応部（２）、冷却管（20）を具備する冷却部（３）並
びに蛍光光度測定部及び／又は紫外線吸光光度測定部
（４）が順に流路で連結されている。
示した。この分析装置は、液体クロマトグラフ（１）、
反応部（２）、冷却管（20）を具備する冷却部（３）並
びに蛍光光度測定部及び／又は紫外線吸光光度測定部
（４）が順に流路で連結されている。
液体クロマトグラフ（１）は反応試薬のアミノ酸とホウ
酸含有の移動相（５）の入つた移動相容器（６）、移動
相送液ポンプ（７）、試料注入部（８）及び恒温槽付き
分離カラム（９）で構成されている。
酸含有の移動相（５）の入つた移動相容器（６）、移動
相送液ポンプ（７）、試料注入部（８）及び恒温槽付き
分離カラム（９）で構成されている。
反応部（２）は、反応管（10）、熱源の電気ヒーター
（11）及び温度制御用感熱体（12）を熱媒体（13）と共
に収納した内槽（14）とこれを断熱材（15）を介して収
納する外槽（16）とで構成されている。
（11）及び温度制御用感熱体（12）を熱媒体（13）と共
に収納した内槽（14）とこれを断熱材（15）を介して収
納する外槽（16）とで構成されている。
また測定部（４）は、蛍光光度計及び／又は紫外線吸光
光度計（17）とこれに付設された記録計（18）及び反応
液排出管路（19）で構成されている。
光度計（17）とこれに付設された記録計（18）及び反応
液排出管路（19）で構成されている。
次に上記の装置を用いた糖類の分析法を説明する。
まず分離カラム（９）と反応管（10）と冷却管（20）の
温度を所定の温度に保持しておいて、移動相（６）をポ
ンプ（７）によつて、分離カラム（９）、反応管（1
0）、冷却管（20）及び光度計（17）を経由して反応液
排出管（19）から排出させて定常状態とする。次いで試
料注入部（８）から糖類含有試料を注入し、試料中の糖
類が分離カラム（９）を通過する間に分離され、次いで
反応管（10）中で分離された糖類と前記反応試薬とを例
えば150℃で５分間反応させ、糖類が紫外線吸収性でか
つ蛍光性の物質に変換され、蛍光光度計及び／又は紫外
線吸収光度計（17）で濃度が検出される。
温度を所定の温度に保持しておいて、移動相（６）をポ
ンプ（７）によつて、分離カラム（９）、反応管（1
0）、冷却管（20）及び光度計（17）を経由して反応液
排出管（19）から排出させて定常状態とする。次いで試
料注入部（８）から糖類含有試料を注入し、試料中の糖
類が分離カラム（９）を通過する間に分離され、次いで
反応管（10）中で分離された糖類と前記反応試薬とを例
えば150℃で５分間反応させ、糖類が紫外線吸収性でか
つ蛍光性の物質に変換され、蛍光光度計及び／又は紫外
線吸収光度計（17）で濃度が検出される。
次に上記装置によつて糖類を分析した分析例を示す。
分析条件 液体クロマトグラフ装置：島津高速液体クロマトグラフ
LC−3A 分離カラム:Shim−pack ISA−07/S2504 移動相:0.35Mホウ酸と0.1％Ｌ−アルギニン含有水溶液
（水酸化カリウムでpH＝8.5に調整） 移動相流量:1.0ml/min 分離カラム温度:65℃ 反応管温度:150℃ 検出器：蛍光光度計（島津RF−530,励起波長320nm,蛍光
波長430nm） 試料：マルトース、マンノース、ガラクトース、キシロ
ース及びグルコース混合の水溶液（各糖類の量はそれぞ
れ1n mol） 上記分析の結果得られたクロマトグラムを第２図に示し
た。第２図から明らかなようにノイズやドリフトがなく
高精度で分析ができた。またこの分析を繰返したところ
その再現性は極めて良好であつた。
LC−3A 分離カラム:Shim−pack ISA−07/S2504 移動相:0.35Mホウ酸と0.1％Ｌ−アルギニン含有水溶液
（水酸化カリウムでpH＝8.5に調整） 移動相流量:1.0ml/min 分離カラム温度:65℃ 反応管温度:150℃ 検出器：蛍光光度計（島津RF−530,励起波長320nm,蛍光
波長430nm） 試料：マルトース、マンノース、ガラクトース、キシロ
ース及びグルコース混合の水溶液（各糖類の量はそれぞ
れ1n mol） 上記分析の結果得られたクロマトグラムを第２図に示し
た。第２図から明らかなようにノイズやドリフトがなく
高精度で分析ができた。またこの分析を繰返したところ
その再現性は極めて良好であつた。
（ヘ）発明の効果 この発明によれば、前記従来の分析技術にくらべて簡便
に低コストで高精度と高い再現性で糖類の分析を行うこ
とができる。
に低コストで高精度と高い再現性で糖類の分析を行うこ
とができる。
第１図はこの発明の分析装置の一実施例の構成説明図、
第２図はこの発明の一分析例によつて得られたクロマト
グラムである。 （１）……液体クロマトグラフ、（２）……反応部、
（３）……冷却部、（４）……蛍光光度測定部及び／又
は紫外線吸光度測定部、（５）……反応試薬含有移動
相、（６）……移動相容器、（７）……移動相送液ポン
プ、（８）……試料注入部、（９）……恒温槽付分離カ
ラム、（10）……反応管、（11）……電気ヒーター、
（14）……内槽、（16）……外槽、（17）……蛍光光度
計及び／又は紫外線吸光光度計、（18）……記録計、
（19）……反応液排出管路、（20）……冷却管。
第２図はこの発明の一分析例によつて得られたクロマト
グラムである。 （１）……液体クロマトグラフ、（２）……反応部、
（３）……冷却部、（４）……蛍光光度測定部及び／又
は紫外線吸光度測定部、（５）……反応試薬含有移動
相、（６）……移動相容器、（７）……移動相送液ポン
プ、（８）……試料注入部、（９）……恒温槽付分離カ
ラム、（10）……反応管、（11）……電気ヒーター、
（14）……内槽、（16）……外槽、（17）……蛍光光度
計及び／又は紫外線吸光光度計、（18）……記録計、
（19）……反応液排出管路、（20）……冷却管。
Claims (2)
- 【請求項１】糖類含有の試料を、反応試薬のアルギニ
ン、リジン、ヒスチジンから選択される0.01〜５％濃度
のアミノ酸と0.05〜0.5M濃度のホウ酸とを含有するpH7
〜10の移動相を用いる液体クロマトグラフィに付して溶
離し、得られた溶離液を加熱して反応試薬と糖類との反
応を行った後冷却し、生成した反応液に励起光をあてて
蛍光光度を測定するか及び／又は紫外線をあてて吸光度
を測定することにより糖類を分析することからなる糖類
の分析法。 - 【請求項２】反応試薬であるアルギニン、リジン、ヒス
チジンから選択される0.01〜５％濃度のアミノ酸と0.05
〜0.5M濃度のホウ酸とを含有するpH7〜10の移動相容
器、移動相送液ポンプ、試料注入部及び分離カラムとか
らなる液体クロマトグラフ装置、加熱槽を具備する反応
部、冷却部並びに蛍光光度測定部及び／又は紫外線吸光
光度即底部とをこの順で連結してなる糖類の分析装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59146341A JPH076966B2 (ja) | 1984-07-14 | 1984-07-14 | 糖類の分析法及びその装置 |
| CN 85101147 CN1010984B (zh) | 1984-07-14 | 1985-04-01 | 糖类的分析法及其装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59146341A JPH076966B2 (ja) | 1984-07-14 | 1984-07-14 | 糖類の分析法及びその装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6125059A JPS6125059A (ja) | 1986-02-03 |
| JPH076966B2 true JPH076966B2 (ja) | 1995-01-30 |
Family
ID=15405505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59146341A Expired - Lifetime JPH076966B2 (ja) | 1984-07-14 | 1984-07-14 | 糖類の分析法及びその装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH076966B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58130929A (ja) * | 1982-01-29 | 1983-08-04 | Mitsubishi Electric Corp | 貯湯式温水器 |
| JP5685381B2 (ja) * | 2009-03-13 | 2015-03-18 | Ｊｃｒファーマ株式会社 | 糖類の分析方法 |
| US8673648B2 (en) | 2010-04-28 | 2014-03-18 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Sugar analysis device and analysis method |
| US8906692B2 (en) | 2011-03-29 | 2014-12-09 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Instrument and method for analysis of mannose 6-phosphate |
| CN106679812A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-05-17 | 云南中医学院 | 一种中药注射剂颜色定量检测方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50124693A (ja) * | 1974-03-18 | 1975-09-30 | ||
| JPS58216953A (ja) * | 1982-06-10 | 1983-12-16 | Shimadzu Corp | 糖類の分析法及びその装置 |
-
1984
- 1984-07-14 JP JP59146341A patent/JPH076966B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6125059A (ja) | 1986-02-03 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |