JPH01277492A

JPH01277492A - 新規抗生物質シネラゾール

Info

Publication number: JPH01277492A
Application number: JP63104619A
Authority: JP
Inventors: Tatsuo Haishi; 羽石　達男; Mutsuo Nakajima; 睦男中島; Kohei Furuya; 古谷　航平; Takeshi Kinoshita; 武木下; Osamu Ando; 治安東; Takeshi Kagasaki; 加賀崎　武之
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1988-04-27
Filing date: 1988-04-27
Publication date: 1989-11-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔発明の目的〕本発明は新規抗生物質シネラゾール（Ｓｙｎ＠ｒａ−ｚ
ｏｌ　）およびその製造法に関する。

本発明者らは、土壌より分離したアス被ルギルス（Ａａ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属する５ＡＮＫ１０５８８株
の培養物から、酵母、カビに対して抗萌力を有する新規
抗生物質シネラゾールが生産されることを見出して本発
明を完成した。

〔発明の構成〕

本発明のシネラゾールは下記の理化学的性質を有する。

１）＠質の性状：脂溶性２）比旋光度：〔α）２５＝＋２２．９’　（Ｃ，０，
５５、クロロホルム）３）分子式：Ｃ２２Ｈ２３ＮＯ７（高分解能マススペク
トル法により測定）４）分子量：　４１３（ＦＡＢ−ＭＳにより測定した（
Ｍ＋Ｈ）＋＝４１４　）５）紫外線吸収ス被りトル：λｍａｘメタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図
に示す通り、２５１５−および２８５ｎｍに極大吸収を
示す。

液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に示す
通シである。

７）核磁気共鳴ス波りトル：δ：ｐ戸重りロロホルム中、内部基準にＴＭＳ　（テトラメチル
シラン）を使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（２
７０ＭＨｚ　）は第３図に示す通りである。

８）溶解性：メタノール、アセトン、クロロホルムに可溶。

ｎ−へキサン、水に不溶。

９）呈色反応：硫酸、過マンガン酸カリウムに陽性。

１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０３１吸着剤ニジリカダルグレートＡ３７１５（メルク社製）展開溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（１：１）シネラ
ゾールの生産菌である５ＡＮＫ１０５８８株の菌学的性
状は次の通シである。

１　形態学的特徴分生子頭は円柱形で緑色ないし暗緑色である。

分生子形成は菌糸から直接形成される。分生子柄は滑面
、淡緑色で隔壁はなく、長さ５０〜２００μｍ、直径３
．０〜４．０μｍである。頂嚢はフラスコ形、淡緑色で
直径４０〜１２．０μｍである。

メトレーは形成されず、フィアライドは頂嚢の約捧より
上部に直接形成さてし、淡緑色でその大きさは４．５〜
６．４　Ｘ　２．４〜３．６　Ａｍ　Ｔある。

分生子は球形ないし亜球形で粗面ないしイガグリ状で直
径２４〜３．２μｍであり、分生子の集塊は暗緑色であ
る。

テレオモルフは観察されない。

２　各種培地における性状各種培地上で２５℃、７日間培養後の性状は次の通りで
ある。

ツアペック寒天培地上におけるコロニーの直径は約５０
１１ＩＩ＋＋に達し、分生子を多数形成し、ビロード状
であり、色調は濃緑（Ｄｅｅｐ　Ｇｒｅｅｎ）　（２７
Ｄ　８　）である。中央部はやや隆起し、白色を帯び羊
毛状である。コロニーの裏面は入線（Ｇｒａｙｉａｈ　
Ｇｒｅｅｎ）（２７Ｄ５）である。

麦芽エキス寒天培地上でも生育、分生子形成はともに良
好である。コロニーの直径は約７０ｔｒａｎであシ、ビ
ロード状で暗緑色（Ｄａｒｋ　Ｇｒｅｅｎ）　（２７Ｆ
８）。

裏面は灰黄（Ｇｒａｙｉｓｈ　ｙｅｌｌｏｗ）　（２Ｂ
　５　）である。

３７℃で培養した場合、生育および分生子の形成はとも
に良好であり、ツアペック寒天培地および麦芽エキス寒
天培地上でコロニーの直径は約７０鴫に運する。

４５℃で培養した場合、コロニーはツアペック寒天培地
上で直径約３０咽、麦芽エキス寒天培地上で直径約１８
咽の生育を示すが、分生子の形成は非常に抑制される。

以上の結果を文献（Ｋ、Ｂ、ＲＣＬｐｅｒおよびり、１
．Ｆｅ−ｎｎｅｌｌ著、　　［Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ａ
ａｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　Ｊ　１９６５年。

Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｌｎａ社
発行）で検索した結果、本菌株をアスペルギルス・フミ
ガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ
　Ｆｒｅｓｅｎｉｕａ　）と同定し、５ＡＮＫ　１０５
８８　　（微工研菌寄第９９５６号）と命名した。

なお、色の表示ばＡ、ＫｏｒｎｅｒｕｐおよびＪ、Ｈ，
Ｗａｎ−ｇｃｈｅｒ著、　［Ｍｅｔｈｕｅｎ　ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｊ（１９７８年、　Ｅ
ｙｒｅ　Ｍｅｔｈｕｅｎ社発行）に従った。

以上、抗生物質シネラゾールの生産菌について説明した
が、カビの諸性質は一定したものではなく、自然的１人
工的に容易に変化することは周知のとおりであシ、本発
明で使用しうる菌株はアスペルギルス属に属する７、抗
生＠質ゾネラゾールを生産するすべての耐株を包含する
ものである。

本発明におけるアスペルギルス・フミガタス５ＡＮＫＩ
　Ｏ５８８株の培養は、一般微生物における培養方法に
準じて行なわれる。即ち、液体培地中での振盪培養捷た
は通気撹拌培養が好ましい。培地成分としては例えば炭
素源としてブドウ糖、グリセロール、マルトース、シュ
クロース、マンニット、糖蜜、デキストリン、澱粉、大
豆粉、綿実油、クエン酸、酒石酸などが、窒素源として
大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、ファーマミン。

魚粉、コーン・スチープ・リカー、ペプトン、肉エキス
、イースト、イーストｅエキス、マルツ拳エキス、硝酸
ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムなどが、
また無機塩として食塩、硫酸塩、炭酸塩、リン酸塩、塩
酸塩などが用いられる。

更に必要に応じてマグネシウム、カリウム、カルシウム
、鉄、亜鉛などの金蝿塩が適宜添加さｎる。

液体培養に際してはシリコン油、植物油、界面活性剤等
が消泡剤として適宜使用される。

培地のｐｌ−１は弱酸性ないし中性付近、培養温度は２
０℃乃至３０℃、特に２６℃前後が好ましい。

培養の経過に伴なって生産されるシネラゾールの力価の
経時的変化は被検菌カンシタ・アルビカンス５ＡＮＫ　
５０１５７の一夜培養液をサブロー寒天培地（Ｓａｂｏ
ｕｒａｕｄ　Ａｇａｒ：日永製薬■製）に０．３％イー
ストエキスを加えて調製した寒天平板でペーパーディス
ク検定法により測定される。

通常は１５０時間乃至２００時間の培養で、シネラゾー
ルの生産量は最高値に達する。

培養終了後、培養液中の液体部分および隋体内に存在す
るシネラゾールは、菌体その他の固型部分をけいそう土
を濾過助剤とする濾過操作または遠心分離によって除去
し、そのＥ液または上溝中および菌体中に存在するシネ
ラゾールをその物理化学的性状を利用することにエフ抽
出、精製することによって得ら扛る。Ｍ　’ｙＭ剤とし
ては例えば活性炭または吸着用樹脂であるアンバーライ
）　ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−７、ＸＡＤ−２
０００等（ローム・アンド・ハース社製）やダイヤイオ
ンＨＰ１０　、ＨＰ２０．ＣＨＰ　２０Ｐ、ＨＰ５０等
（三菱化成工業■社製）が便用される。シネラゾールを
含む液を上記の如き吸着剤のノーを通過させてシネラゾ
ールを含む液に含まｔＬる不純物を吸着させて取シ除く
か、またはシネラゾールを吸着させたのち、メタノール
水、アセトン水、ｎ−ブタノール水などを用いて浴出さ
せることによって得られる。あるいは水と混和しない有
Ｂ＆溶剤、例えばクロロホルム、メチレンクロライド、
酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどの単独またはそｔしら
の組み合せにより、培養炉液または水溶液から中性乃至
酸性条件下で抽出・精製することによっても得られる。

このようにして得られたシネラゾールは更にシリカケ゛
ル、フロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマ
トグラフィー、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシ
ア社製）などを用いた分配カラムクロマトグラフィーお
よび順相、逆相カラムを用いた液体クロマトグラフィー
等で精製することができる。

以上の分離、精製の手段を単独または適宜組み合せ、反
復用いることによりシネラゾールを分離。

精ｍすることができる。

次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説明する。

実施例１アスペルギルス・フミがタフ５ＡＮＫ１０５８８株を下
記の培地組成で示さしる培地８０ｍ１を宮む５００ｎｄ
；容バッフルつきの三角フラスコ９０本にそれぞれ一白
金耳接種し、２００　ｒ、ｐ、ｍ、の回転振盪培養機に
より２６℃で１９２時間培養した。

培地組成グリセリン　　　　　５０．！９生ジャガイモ　　　　　５０ｇイースト・エキス　　　　５Ｉ麦芽エキス　　　　　　　５Ｉ（ｐＨ６，０）得られた培養液７．２１Ｋ濾過助剤としてセライト５４
５（米国ジョンズ・マンビル・プロダクト・コーポレー
ション製）５００．Ｐを加えて濾過すると、培養炉液６
１（ｐＨ５，４）および陶体のケーキが得られた。

得られた培養炉液のｐｉ−１はそのままで酢酸エチル３
１を加えて２回抽出した。得られた抽出液６１を飽和食
塩水３１で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで脱水後
、減圧下で濃縮乾固すると油状物４．６７ｇが得られた
。得られた油状物をシリカゲル２５０．？（＋−メチレ
ンクロリド：ｎ−ヘキサン（２：１）溶媒で充填したカ
ラムに、同溶媒に溶解して吸着させた。次いで同一溶媒
で展開溶出した。溶出液を１７麻ずつ分画し、シネラゾ
ールを含むフラクションＡ１５３〜１９４を集め、減圧
下で濃縮乾固すると部分精製品である油状物２２３１ダ
が得られた。

次に、前述の菌体のケーキに８０％アセトン水１．８／
を加えて３０分間撹拌抽出した。抽出液を濾過し、得ら
れた炉液を減圧下で濃縮すると、濃縮液９００ｍＡ！が
得られた。得られた濃縮液９００−に酢酸エチル６００
ｍ／を加えて２回抽出した。

抽出液を飽和食塩水６００ｄで洗浄し、次いで無水硫酸
ナトリウムで脱水後、減圧下で湊縮乾固すると油状物３
．５２．９が得られた。得られた油状物をシリカゲル１
２８１Ｉｆ：メチレンクロリド：ｎ−ヘキサン（２：１
）溶媒で充填したカラムに、同溶媒に溶解して吸着させ
た。次いで同一溶媒で展開溶出した。溶出液を１３廐ず
つ分画し、シネラゾールを含むフラクション煮１５３〜
１７０を集め、減圧下で濃縮乾固すると部分精製品であ
る油状物１９１〜が得られた。

培養炉液から得られた部分精製品である油状物２２３ｍ
ｇおよび菌体のケーキから得られた部分精↓品である油
状物１９１ｍ９を合わせた４１４′／ｎ９をアセトニト
リル１４ｍＡに溶解し、次いで逆相液体クロマトグラフ
ィーに付して精製した。即ち、逆相カラムのセンシュー
ノやツク０ＤＳＨ−５２５１〔２０φＸ　２５０　閣、
センシュー化学■製〕に上記アセトニ）ＩＪル溶液１ｒ
Ｌｌヲ注入後、紫外部吸収２１０　ｎｍでモニターしな
がら４５％アセトニトリル水を用いて流速１５ｍ１／分
で展開溶出した。シネラゾールは試料注入後、１４分か
ら１６分の間に溶出された。同様の操作を１４回くり返
し活性分画として２８０ｍ１が得られた。得られた活性
分画を減圧下で濃縮しアセトニトリルを留去した後、得
られた残留物に酢酸エチル１００解’ｉｚ加えて抽出し
た。抽出液を飽和食塩水５０ｍ１で洗浄後、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、１縮乾固すると粗シネラゾール２０
．２〜が得ら扛た。

得られた粗シネラゾール２０．２■をアセトニトリル２
０威に溶解し、再度逆相液体クロマトグラフィーに付し
て精製した。

上記の逆相カラムのセンシューパックＯＤＳ　Ｈ−５２
５１［２０φ×２５０１＋１Ｉ１１、センシュー化学■
裏〕にアセトニトリル溶液Ｉ　ＩＬｌを注入後、紫外部
吸収２１０　ｎｍでモニターしなからアセトニトリル：
メタノール：水（５：６：９）を用いて流速１５Ｉｎｌ
／分で展開溶出した。

シネラゾールは試料注入後１５．２分から１８４分の間
に溶出された。同様の操作を２回くり返し活性分画とし
て９６祷が得られた。その分画を減圧下で濃縮しアセト
ニトリルおよびメタノールを留去した後、得られた残留
物に酢酸エチル１００Ｍを加えて抽出した。抽出物を飽
和食塩水５０ｍ１で洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し
濃縮乾固するとシネラゾール１１．８１ηが得らｒした
。

〔発明の効果〕

本発明の抗生物質シネラゾールは下記の生物学的性状を
示す。

１）抗隋カニカビおよび酵母に対する抗生吻貿シネラゾールの最小阻
止濃度（ＭＩＣ）はサブロー寒天培地＋０．３％イース
ト・エキスを用いた寒天培地希釈法によ以上から、抗生
物質シネラゾールはカビおよび酵母に対し強い抗菌力を
示す。

２）他の抗真醒剤との併用による相乗作用：シネラゾー
ルは他の抗真直剤、例えばクロ）ＩＪマゾール、ミコナ
ゾール、エコナゾールなどのアゾール系、ナフティフィ
ンなどのアリールアミン系など、と併用すると相乗作用
を示す。

例えばクロトリマゾールとの相乗効果は次の通りであっ
た。即ち、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ）　５ＡＮＫ　５０１５７株を被検菌
とし、培地としてサブロー寒天培地（白水製薬■製）＋
０３％イースト・エキスを用いてチエッカ−ポード法（
ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄ　ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によ
り測定すると、シネラゾールおよびクロトリマゾールの
単独でのＭＩＣはそれぞ７１−１０　ａｇ７Ｗおよび０
．７８　ｔｔ＆／酩であったが、ＦＩＣ（ｆｒａｃｔｉ
ｏｎａｌ　ｔｎｈｔｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ
ｉｏｎ　）　１ｎｄｅｘは０．０７８でアシ、非常に強
い相乗作用を示した。

従って、本発明のシネラゾールは各種真函感染性疾患を
対照とする抗菌剤゛として使用される。その投与形態と
しては皮下注射、静脈内注射、筋肉注射、坐剤などによ
る非経口投与法あるいは錠剤。

カブセル剤、散剤、顆粒剤などによる経口投与法があげ
られる。投与量は対象疾患、投与経路および投与回数な
どによって異なるが、例えば成人に対しては通常１日１
００ｍ９〜５０００１ｎｇを１回または数回に分けて投
与するのが好ましい。

【図面の簡単な説明】

第１図はシネラゾールの紫外線吸収スペクトルを示し、第２図はシネラゾールの赤外線吸収スペクトルを示し、第３図はシネラゾールの核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１、下記の理化学的性質を有するシネラゾール。１）物質の性状：脂溶性２）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝＋２２．９゜（Ｃ
、０．５５、クロロホルム）３）分子式：Ｃ＿２＿２Ｈ＿２＿３ＮＯ＿７（高分解能
マススペクトル法により測定）４）分子量：４１３（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（
Ｍ＋Ｈ）＾＋＝４１４）５）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘメタノール
中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図に示す通り、２５１．５ｎｍおよび２８５
ｎｍに極大吸収を示す。６）赤外線吸収スペクトル：▲数式、化学式、表等があ
ります▼ 液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に示す通りである。７）核磁気共鳴スペクトル：δ：ｐｐｍ重クロロホルム中、内部基準にＴＭＳ（テトラメチルシ
ラン）を使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（２７
０ＭＨｚ）は第３図に示す通りである。８）溶解性：メタノール、アセトン、クロロホルムに可溶、ｎ−ヘキサン、水に不溶。９）呈色反応：硫酸、過マンガン酸カリウムに陽性。１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．３１吸着剤：シリカゲルプレートＮｏ．５７１５（メルク社
製）展開溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（１：１）２、アスペルギルス属に属するシネラゾール生産菌を培
養し、その培養物よりシネラゾールを採取することを特
徴とするシネラゾールの製造法。