KR20020029769A - 신규 화합물 에프-15078 - Google Patents

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KR20020029769A
KR20020029769A KR1020027002761A KR20027002761A KR20020029769A KR 20020029769 A KR20020029769 A KR 20020029769A KR 1020027002761 A KR1020027002761 A KR 1020027002761A KR 20027002761 A KR20027002761 A KR 20027002761A KR 20020029769 A KR20020029769 A KR 20020029769A
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salt
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야노다쯔야
이누까이마사또시
다까쯔도시오
다나까잇신
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가와무라 요시부미
상꾜 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 하기 식 (Ⅰ) 로 표시되는 신규 화합물 등을 제공한다:
상기 식 (Ⅰ) 로 표시되는 화합물은 항진균활성을 가지며, 진균감염증의 치료 또는 예방에 유용하다.

Description

신규 화합물 에프-15078 {NOVEL COMPOUND F-15078}
현재 임상에 사용되고 있는 항진균 화합물로서는 암포테리신B, 플루시토신, 아졸계 화합물 등을 들 수 있다. 이들 화합물에는 세포독성이나 내성균의 출현이 문제가 되고 있는 것이 많다.
미생물이 생산하는 항진균 화합물로서는 잘레리온 (Zalerion) 속 등이 생산하는 뉴모칸딘 (pneumocandin) 류 (Schmatz, D. M., et al., J. Antibiotics 45, 1886 (1992)), 아스페르길루스 (Aspergillus) 속 등이 생산하는 에키노칸딘 (echinocandin) 류 (Nyfeler, R. and Keller-Schierlein, W., Helv. Chim. Acta 57, 2459 (1974)), 또 오레오바시디움 (Aureobasidium) 속이 생산하는 오레오바시딘 (aureobasidin) 류 (Ikai, K., et al., J. Antibiotics 44, 925 (1991)) 등이보고되어 있지만, 이들은 임상으로의 적용에 이르지 못하고 있다.
발명의 개시
본 발명자들은 도쿄도 오가사와라무라 찌찌지마에서 채집한 토양으로부터 채취된 포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 주의 배양물 중에서 신규 화합물을 발견하여 이 화합물이 항진균활성을 갖는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 항진균활성을 갖는 신규 화합물, 이 화합물의 제조방법, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 의약, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 진균감염증의 치료제 및 예방제, 이 화합물의 생산균, 이 화합물의 사용, 이 화합물의 약리적인 유효량을 동물에게 투여하는 진균감염증의 치료방법 및 예방방법등을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.
본 발명의 신규 항진균 화합물은,
(1)
하기식 (Ⅰ) 로 표시되는 화합물 또는 그 염:
(2)
하기의 이화학적 성상을 갖는 화합물 또는 그 염 :
1) 물질의 성상 : 염기성 지용성 분말
2) 분자식 : C55H98N8014
3) 분자량 : 1094 (FAB-MS 법)
4) 고분해능 FAB-MS [M + H]+(C55H99N8014로서) :
실측값 : 1095.7365
계산값 : 1095.7281
5) 자외선흡수 스펙트럼 : 말단흡수
6) 적외선흡수 스펙트럼 (브롬화칼륨 정제 중, cm-1) :
3434, 3335, 2962, 2937, 2875, 2806, 1750, 1684, 1641, 1509, 1469, 1412, 1371, 1314, 1294, 1271, 1204, 1156, 1128, 1074, 1020
7) 선광도 : [α]D 25- 120°(c 1.0, 메탄올)
8)1H-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명 스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
9)13C-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
10) 고속액체 크로마토그래피 :
칼럼 : Shodex Asahipak C8P 50 4E
(직경 4.6 ㎜ ×길이 250 ㎜ : 쇼와덴꼬 (주) 제조)
이동상 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 13 : 7
유속 : 0.7 ㎖/분
검출파장 : λ210 nm
유지시간 : 10.20 분
11) 용해성 : 디메틸술폭시드, 메탄올, 클로로포름에 가용.
12) 아미노산 분석 : 가수분해물로서 트레오닌, 알라닌, 이소류신이 확인되었다,
(3)
하기 식 (Ⅱ) 로 표시되는 화합물:
및
(4)
하기의 이화학적 성상을 갖는 화합물 :
1) 물질의 성상 : 중성 지용성 무색분말
2) 분자식 : C57H100N8015
3) 분자량 : 1136 (FAB-MS 법)
4) 고분해능 FAB-MS [M + H]+(C57H101N8015로서) :
실측값 : 1137.7410
계산값 : 1137.7387
5) 자외선흡수 스펙트럼 : 말단흡수
6) 적외선흡수 스펙트럼 (브롬화칼륨 정제 중, cm-1) :
3433, 3333, 2963, 2937, 2875, 1751, 1686, 1642, 1516, 1469, 1409, 1388, 1372, 1311, 1292, 1272, 1201, 1156, 1128, 1074, 1017
7) 선광도 : [α]D 25- 131°(c 1.0, 메탄올)
8)1H-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명 스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
9)13C-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
10) 고속액체 크로마토그래피 :
칼럼 : Shodex Asahipak C8P 50 4E
(직경 4.6 ㎜ ×길이 250 ㎜ : 쇼와덴꼬 (주) 제조)
이동상 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 13 : 7
유속 : 0.7 ㎖/분
검출파장 : λ210 nm
유지시간 : 9.05 분
11) 용해성 : 디메틸술폭시드, 메탄올, 클로로포름에 가용.
12) 아미노산 분석 : 가수분해물로서 트레오닌, 알라닌, 이소류신이 확인되었다,
이다.
또한, 본 발명의 신규 항진균 화합물의 제조방법은,
(5)
포마 (Phoma) 속에 속하는 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물의 생산균을 배양하고, 그 배양물로부터 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물의 제조방법,
및
(6)
포마 (Phoma) 속에 속하는 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물의 생산균이 포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 (FERM BP-6851) 주인 (5) 에 기재된 제조방법이다.
또한, 본 발명의 의약은,
(7)
(1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 의약이다.
또한, 본 발명의 진균감염증의 치료제 또는 예방제는,
(8)
(1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 진균감염증의 치료제 또는 예방제이다.
또한, 본 발명의 미생물은,
(9)
포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 (FERM BP-6851) 주이다.
또한, 본 발명의 신규 항진균 화합물의 사용은,
(10)
(1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용이다.
또한, 본 발명의 진균감염증의 치료방법 또는 예방방법은,
(11)
(1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그 염의 약리적인 유효량을 동물에게 투여하는 진균감염증의 치료방법 또는 예방방법이다.
또한, 본 발명의 의약조성물은,
(1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물이다.
본 발명의 화합물은 상기 (1) 내지 (4) 에 기재되어 있다. 이 중, 상기(1) 및 (3) 에 기재된 화합물은 하기 일반식 (Ⅲ) 에 의해 나타낼 수 있고:
(식 중, R 은 수소원자 또는 COCH3을 나타냄), 본 발명에 있어서는 상기 화학식 (Ⅲ) 으로 표시되는 화합물을 총칭하여 F-15078 이라 한다.
상기 (1) 에 기재된 화합물은 R 이 수소원자인 상기 일반식 (Ⅲ) 으로 표시되는 화합물이다. 본 발명에 있어서는 상기 (1) 에 기재된 화합물 또는 상기 (2) 에 기재된 물리화학적 성상을 갖는 화합물을 F-15078A 라 한다.
상기 (3) 에 기재된 화합물은 상기 일반식 (Ⅲ) 으로 표시되고, 또한 R = COCH3을 나타내는 화합물이다. 본 발명에 있어서는 상기 (3) 에 기재된 화합물 또는 상기 (4) 에 기재된 물리화학적 성상을 갖는 화합물을 F-15078B 라 한다.
F-15078A 는 통상의 방법에 따라 염으로 할 수 있다. F-15078A 의 염은 의학용도, 수의학용도 및 그 이외의 용도 중 어느 것에도 적용될 수 있다.
F-15078A 의 염이 의학용도 및/또는 수의학용도에 적용되는 경우, 이 화합물의 염으로서는 약리상 허용되는 것이라면 특별히 한정되는 것은 아니며, 예를 들어 염산염과 같은 무기염, 파모산염과 같은 유기산염 등을 들 수 있다.
F-15078A 의 염이 의학용도 및 수의학용도 이외의 용도, 예를 들어 합성중간체로서 사용되는 경우에는 특별히 한정은 없다. 이같은 염으로서는 예를 들어 아세트산염, 브롬화물염, 염화물염, 염산염, 브롬산염, 요오드화물염, 황산염, 인산염, 2인산염과 같은 무기염 ; 시트르산염, 말레산염, 파모산염, 타르타르산염과 같은 유기산염 등을 들 수 있다.
또, 본 발명의 F-15078 은 각종 이성체를 갖는다. 본 발명에 있어서는 이들 이성체가 모두 단일식으로 표시되어 있다. 따라서, 본 발명은 이들 이성체 및 이들 이성체의 혼합물도 모두 포함하는 것이다.
또한, 본 발명은 F-15078 이 용제화물 (예를 들어 수화물) 을 형성하는 경우에는 이들도 모두 포함하는 것이다.
예를 들어, 본 발명의 F-15078 이 대기 중에 방치되거나, 또는 재결정을 함으로써 수분을 흡수하여 흡착수가 부착되거나, 수화물을 형성하는 경우가 있다. 본 발명에는 이같은 용제화물도 포함된다.
또, 본 발명은 생체내에서 대사되어 F-15078 로 변환되는 화합물, 소위 프로드러그도 모두 포함하는 것이다.
[생산균]
F-15078 은 이 화합물을 생산하는 진균의 배양물로부터 얻을 수 있다.F-15078 의 생산균으로서는 예를 들어 포마 (Phoma) 속에 속하는 진균주 등을 들 수 있고, 바람직하게는 포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 주 (이하, 단순히 「SANK 13899 주」라 함) 이다. SANK 13899 주는 도쿄도 오가사와라무라 찌찌지마에서 채집한 토양으로부터 단리되었다.
본 균의 균학적 성상을 관찰하기 위하여 다음의 각 배지상에서 배양을 실시하였다.
사용된 각 배지의 조성을 이하에 기재한다.
PDA 배지 {포테이토 덱스트로오스 한천 (Potato Dextrose Agar) 배지}
닛스이 포테이토 덱스트로오스 한천배지 (닛스이세이야꾸 (주) 제조)39 g
증류수 1000 ㎖
CMA 배지 {콘 밀 한천 (Corn Meal Agar) 배지}
콘 밀 아가 (닛스이세이야꾸 (주) 제조)17 g
증류수 1000 ㎖
WSH 배지
퀘이커 오트밀 (Quaker oatmeal)10 g
황산마그네슘 7수화물 1 g
인산 2수소칼륨 1 g
질산나트륨 1 g
한천20 g
증류수 1000 ㎖
미우라 배지
글루코오스 1 g
인산 2수소칼륨 1 g
황산마그네슘 7수화물 0.2 g
염화칼륨 0.2 g
이스트 엑기스 0.2 g
질산나트륨 2 g
한천20 g
증류수 1000 ㎖
CYA 배지 {자펙크 이스트 엑기스 한천 (Czapek Yeast Extract Agar) 배지}
인산 수소2칼륨 1.0 g
자펙크 농축액*10 ㎖
이스트 엑기스 5 g
수크로오스30 g
한천15 g
증류수 1000 ㎖
MEA 배지 {몰트 엑기스 한천 (Malt Extract Agar) 배지}
몰트 엑기스20 g
펩톤 1 g
글루코오스20 g
한천20 g
증류수 1000 ㎖
G25N 배지 {25 % 글리세롤질산 한천 (25 % Glycerol Nitrate Agar) 배지}
인산 수소2칼륨 0.75 g
자펙크 농축액* 7.5 ㎖
이스트 엑기스 3.7 g
글리세롤 250 g
한천12 g
증류수 750 ㎖
* 자벡크 농축액이란 이하의 조성용액을 나타낸다.
질산나트륨30 g
염화칼륨 5 g
황산마그네슘 7수화물 5 g
황산철(Ⅱ) 7수화물 0.1 g
황산아연 7수화물 0.1 g
황산구리 5수화물 0.05 g
증류수 100 ㎖
색조의 표시는 「메츄엔 핸드북 오브 칼러」(Kornerup, A. and Wanscher, J. H. (1978) Methuen handbook of colour (3rd. edition). Erye Methuen, London.) 에 따랐다.
SANK 13899 주의 배양 하에서의 균학적 성상은 다음과 같다.
PDA 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 13 내지 17 ㎜ 이다. 콜로니는 면모형, 중앙부에서 양모형으로 융기하여 콜로니의 연변 (緣邊: edge) 부는 조금 톱니바퀴형이다. 콜로니 표면은 회색 (3B1) 내지 백색이다. 이면은 갈색 (6E5 내지 4) 이다.
CMA 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 15 내지 17 ㎜ 이다. 콜로니는 분말형이고, 콜로니의 연변부는 톱니바퀴형이다. 콜로니 표면은 회색톤의 녹색 (grayish green) (27E5) 내지 흐린 녹색 (dull green) (27E4)이다. 이면은 진녹색 (dark green) (27F4) 이다.
미우라 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 22 내지 33 ㎜ 이다. 콜로니는 평평하게되고, 콜로니의 연변부는 전연이다. 콜로니 표면은 백색이다. 이면은 노랑톤의 백색 (yellowish white) (3A2) 내지 백색이다.
WSH 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 33 내지 34 ㎜ 이다. 콜로니는 평평하게 되고, 콜로니의 연변부는 전연이다. 콜로니 표면은 담황색 (pale yellow) (3A3) 내지 노랑톤의 백색 (3A2) 이다. 이면은 콜로니 표면과 동일한 색이다.
CYA 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 34 내지 35 ㎜ 이다. 콜로니는 면모형이고, 중앙부에서 양모형으로 융기하여 약한 가용성 색소를 분비한다. 콜로니의 연변부는 평평하게되고 전연이다. 콜로니 표면은 회색톤의 오렌지 (grayish orange) (6B3) 이다. 이면은 갈색톤의 오렌지 (6C8)내지 갈색 (6D8) 이다.
MEA 배지상에서의 성장은 23 ℃, 2 주간의 배양에서 직경 15 내지 23 ㎜ 이다. 콜로니는 면모형, 중앙부에서 양모형으로 융기한다. 콜로니의 연변부는 평평하거나 전연 내지 조금 톱니바퀴형이다. 콜로니 표면은 백색 내지 회색 (3B1) 이다. 이면은 진녹색 (28F4 내지 3) 이다.
G25N 배지상에서는 생육하지 않는다.
균가닥은 직경 0.5 내지 3 ㎛ 이고, 종종 묶음형이 되어 박벽 내지 후벽이고, 활면 내지 조면이고, 무색 내지 갈색이다.
SANK 13899 주는 ODA 배지나 미우라 배지 등에서 1 개월 이상 배양을 계속함으로써 섹터를 형성하고, 그 부분의 한천 배지내에 매몰된 분생자각 (分生子殼: pycnidia)을 형성하였다. 그 균학적 성상은 다음과 같다.
분생자각은 직경 100 내지 200 ㎛, 한천 배지에 모두 매몰 내지 일부 매몰되고, 구형 내지 아구형이며 갈색 내지 흑색이다. 개구부는 관찰되지 않았다. 분생자 생성세포는 7.5 내지 9 ㎛ ×1.3 내지 1.8 ㎛ 이고, 구형의 분생자각 내층세포 위에 형성되고, 단세포이고 원통형 내지 펜촉형이며 무색이다. 피알로형 분생자는 3.5 내지 4.7 ㎛ ×1.3 내지 1.8 ㎛ 이고, 원통형, 단세포이며 무색이다. 균가닥은 직경 0.5 내지 3 ㎛ 이고, 종종 묶음형이 되어 박벽 내지 후벽이고, 활면 내지 조면이고, 무색 내지 갈색이다. 고바야시의 문헌 (Kobayashi, M., J. Antibact. Antifung. Agents, 22, 757 (1994)) 등을 참조로 한 결과, SANK 13899 주를 포마 에스피.이라고 확인하였다.
또한, SANK 13899 주는 1999 년 8 월 20 일에 일본국 이바라기껭 쓰꾸바시 히가시 1-1-3 의 통상산업성 공업기술원 생명공학 공업기술연구소에 국제기탁되어 수탁번호 FERM BP-6851 을 부여받았다.
주지된 바와 같이, 진균류는 자연계에서 또는 인공적인 조작 (예를 들어 자외선조사, 방사선조사, 화학약품처리 등) 에 의해 변이를 일으키기 쉬우며, 본 발명의 SANK 13899 주도 마찬가지이다. 본 발명에 있어서 SANK 13899 주는 그 모든 변이체를 포함한다. 또, 이들 변이주 중에는 유전적 방법, 예를 들어 재조합, 형질도입, 형질전환 등에 의해 얻어진 것도 포함된다. 즉, F-15078 을 생산하는 SANK 13899 주, 이들 변이주 및 이들과 명확하게 구별되지 않는 균주는 모두 SANK 13899 주에 포함된다.
[배양법 및 정제법]
상술한 바와 같이 F-15078 생산균의 배양은 일반적으로 발효생성물을 생산하기 위하여 사용되는 배지 중에서 실시된다. 이같은 배지는 미생물을 자화시킬 수 있는 탄소원, 질소원, 무기염, 미량의 생육인자, 미량금속 등을 함유한다.
탄소원으로서는 예를 들어 글루코오스, 프럭토오스, 말토오스, 수크로오스, 만니톨, 글리세린, 덱스트린, 귀리가루, 호밀가루, 옥수수전분, 감자, 옥수수분말, 대두유, 면실유, 당밀, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다. 이들 탄소원은 단독으로 또는 2 개 이상의 탄소원을 조합하여 사용할 수 있다.
배지에 사용하는 탄소원의 양은 배지 중의 다른 성분 등에 의존하지만 통상 1 내지 10 중량% 이다.
질소원으로서는 예를 들어 대두분말, 밀기울, 낙화생분말, 면실분말, 카세인 가수분해물, 팜아민, 옥수수침지액, 펩톤, 육즙, 이스트, 이스트 엑기스, 몰트 엑기스, 질산나트륨, 질산암모늄, 황산암모늄 등을 들 수 있다. 이들 질소원은 단독으로 또는 2 개 이상의 질소원을 조합하여 사용할 수 있다.
배지에 사용하는 질소원의 양은 배지 중의 다른 성분 등에 의존하지만 통상 0.2 내지 6 중량% 이다.
탄소원 및 질소원은 순도가 높은 것일 필요는 없으며 미량의 생육인자, 비타민, 무기영양소 등을 함유하는 보다 순도가 낮은 것이라도 된다.
또, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 암모늄, 칼슘, 인산, 황산, 염산, 탄산 등의 이온을 얻을 수 있는 염류를 배지 중에 첨가해도 된다.
또한, 균을 자화시킬 수 있는 비타민 B1, 비오틴과 같은 비타민류, 티아민과 같은 균체증식 촉진물질, 망간, 몰리브덴과 같은 금속의 염을 배지에 첨가해도 된다.
또, 액체 배지의 경우, 배지에 기포발생을 막기 위하여 실리콘오일, 폴리알킬렌글리콜에테르, 식물유, 동물유, 계면활성제와 같은 소포제를 배지에 첨가해도 된다.
F-15078 생산균의 배양에 사용하는 액체 배지의 pH 는 균주, F-15078 의 pH 안정성 등에 의존하지만, 이 생산균이 SANK 13899 인 경우, 액체 배지의 pH 를 pH 5.0 내지 pH 7.0 으로 조정한다.
F-15078 생산균의 배양온도는 균주, F-15078 의 열안정성 등에 의존하지만,이 생산균이 SANK 13899 인 경우, 15 내지 37 ℃ 이고, 바람직하게는 22 내지 35 ℃ 이다. F-15078 을 제조하기 위한 SANK 13899 주의 배양온도는 바람직하게는 22 내지 26℃ 이고, 보다 바람직하게는 23 ℃ 이다.
F-15078 생산균의 배양방법으로서는 특별히 한정은 없으며, 예를 들어 고형 배지를 사용한 배양법, 교반배양법, 진탕배양법, 통기배양법, 통기교반배양법 등을 들 수 있고, 바람직하게는 교반배양법, 진탕배양법, 통기배양법, 통기교반배양법 이고, 보다 바람직하게는 진탕배양법이다. 공업적 규모로 배양하기에는 통기교반배양법이 보다 바람직하다.
F-15078 을 생산하기 위한 이 화합물 생산균의 배양은, 통상 이 균을 자라게 한 슬란트 (slant) 를 소량의 배지에 접종한 종배양으로부터 시작되어 필요에 따라 보다 큰 규모로 종배양을 다시 실시한 후, 최종단계로서 보다 큰 규모에서의 본배양을 실시함으로써 이루어진다.
F-15078 생산균의 소규모 배양을 실시하는 경우, 삼각플라스크 등을 사용하여 종배양을 실시하고, 필요에 따라 보다 큰 규모의 종배양을 다시 실시한 후, 삼각플라스크 등을 사용하여 본배양을 실시한다.
F-15078 생산균의 대규모 배양을 실시하는 경우, 교반장치 및 통기장치를 장착한 자퍼멘터 (jar-fermenter) 또는 탱크를 사용하는 것이 바람직하다. 이같은 장치를 사용하면 배지를 자퍼멘터 또는 탱크 중에서 조제 및 멸균할 수 있다. 이 방법은 F-15078 의 대규모 제조에 적합하다.
F-15078 의 SANK 13899 주에 의한 생산은 통상 144 내지 192 시간의 배양에서 최고값에 달한다.
배양물 중에 존재하는 F-15078 은 배양물, 배양물을 규조토 등을 과조제로 하는 여과조작에 사용함으로써 얻어지는 배양상청, 배양물을 원심분리조작에 사용함으로써 얻어지는 배양여과액 및/또는 균체로부터 F-15078 의 물리화학적 성상을 이용하여 추출정제할 수 있다.
배양여과액 또는 배양상청 중에 존재하는 F-15078 은 중성 pH 조건 하에서 물과 혼화하지 않는 유기용제, 예를 들어 아세트산에틸, 클로로포름, 염화에틸렌, 염화메틸렌, 부탄올 등 단독으로 또는 2 개 이상의 혼합용매에 의해 추출할 수 있다. 또, 배양여과액 또는 배양상청을 흡착제, 예를 들어 활성탄, 암버라이트 XAD-2, 암버라이트 XAD-4 (이상, Rohm and Haas 사 제조), 다이아 이온 HP-10, 다이아 이온 HP-20, 다이아 이온 CHP-20P, 다이아 이온 HP-50, 세파비즈 SP-207 (이상, 미쯔비시가가꾸 (주) 제조) 등에 접촉시켜 협잡물을 흡찹시켜 제거하거나 또는 F-15078 을 흡착시켜 협잡물과 분리한 후, 메탄올수, 아세톤수, 부탄올수 등을 사용하여 F-15078 을 용출시킬 수 있다.
균체 중에 존재하는 F-15078 은 50 내지 90 % 함수아세톤 또는 함수메탄올에 의해 추출하고, 규조토 등을 과조제로 하는 여과조작을 실시하여 얻어진 여과액으로부터 유기용제를 제거한 후, 배양여과액 또는 배양상청의 경우와 동일한 추출정제조작을 실시함으로써 얻을 수 있다.
배양물 중에 존재하는 F-15078 은 배양종료 후, 적당량, 바람직하게는 최종농도 50 % (용적/용적) 의 아세톤 또는 메탄올을 첨가하여 추출할 수 있다. 추출종료 후, 규조토를 여과조제로 하는 여과조작을 실시하여 얻어진 여과액에 대하여 배양여과액 또는 배양상청의 경우와 동일한 추출정제조작에 사용할 수 있다.
이같이 하여 얻어진 F-15078 조분획은 TSK 겔토요펄 HW-40F (도소 (주) 제조), 세파덱스 LH-20 (Amersham Pharmacia 사 제조) 등을 사용한 분배 칼럼 크로마토그래피, 코스모 실 140C18 (나까라이테스크 (주) 제조) 등을 사용한 역층 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다. 필요에 따라, 이같이 하여 정제된 F-15078 함유 분획을 Shodex Asahipak C8P50-4E (쇼와덴꼬 (주) 제조), YMC 팩 ODS-AM (와이엠씨 (주) 제조), 캡슐팩 UG 120 (시세이도 (주) 제조) 등의 역층 칼럼을 사용한 고속액체 크로마토그래피 등 (high performance liquid chromatography : 이하, 「HPLC」 라 함) 에 의해 추가로 정제할 수 있다.
이들 추출수단 및 단리수단은 단독으로 또는 적절히 조합하여 필요하다면 동일한 수단을 반복하여 F-15078 의 단리에 사용할 수 있다.
상술한 F-15078 생산균의 배양공정 및 F-15078A 또는 B 의 정제공정에 있어서의 F-15078A 또는 B 의 거동은 다음에 나타내는 1) 또는 2) 의 방법에 의해 추적할 수 있다.
1) HPLC 분석에 의한 방법 : HPLC 를 사용한 방법이라면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 하기의 HPLC 조건을 적용할 수 있다.
칼럼 : Shodex Asahipak C8P 50 4E
(직경 4.6 ㎜ ×길이 250 ㎜ : 쇼와덴꼬 (주) 제조)
이동상 : 아세토니트릴:10 mM 탄산수소암모늄수 = 13:7
유속 : 0.7 ㎖/분
검출파장 : λ210 nm
F-15078A 의 유지시간 : 10.20 분
F-15078B 의 유지시간 : 9.05 분
2) 항진균활성을 측정하는 것에 의한 방법 : 항진균활성을 측정하는 방법이라면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 야마구찌 들의 브로스 희석법 (Yamaguchi, H., et al., J. Med. Mycol. 36, 61 (1995)) 을 적용할 수 있다.
발명의 효과
본 발명의 (1) 내지 (4) 에 기재된 화합물은 항진균활성을 가지며, 인간 또는 동물의 진균감염증의 치료제 또는 예방제로서 유용하다.
발명을 실시하기 위한 최량의 형태
이하에 실시예, 시험예 및 제제예를 들어서 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되지 않는다.
실시예 1. F-15078A 의 제조 (1)
[SANK 13899 주의 배양 (1)]
SANK 13899 주를 121 ℃, 30 분간 멸균한 표 1 에 기재된 조성을 갖는 종배양 배지 100 ㎖ 를 함유하는 500 ㎖ 용기 삼각플라스크 3 개에 1 백금이 접종하고, 23 ℃, 210 rpm (회전반경 7 ㎝) 의 조건 하에서 5 일간 배양하였다. 얻어진 배양액을 동일한 조성의 배지 400 ㎖ 를 함유하는 2 L 용기 삼각플라스크 9 개에 5 % 접종하고, 23 ℃, 210 rpm (회전반경 7 ㎝) 의 조건 하에서 2 일간 배양하였다.얻어진 종배양액을 121 ℃, 30 분간 멸균한 표 2 에 기재된 조성을 갖는 본배양 배지 (1) 15 L 를 함유하는 30 L 용기 자 (jar) 배양기 4 기에 5 % 를 식균하고, 23 ℃, 통기량 1 vvm, 100 내지 420 rpm, 용존산소량 5.0 ppm 의 조건 하에서 7 일간 배양하였다.
종배양 배지의 배지조성
글리세린 30 g글루코오스 30 g가용성전분 20 g대두분말 10 g젤라틴 2.5 g이스트 엑기스 (Difco) 2.5 gNH4NO32.5 g소포제* 0.1 ㎖수도물 1000 ㎖(pH 는 조정하지 않음)
*닛산 디스폼 CB-442 (니혼유시 (주) 제조)
본배양 배지 (1) 의 배지조성
덱스트린 (Difco) 10 g글리세린 20 g글루코오스 30 g몰트 엑기스 (Difco) 10 g이스트 엑기스 (Difco) 2 g트립톤 (Difco) 1 gNH4NO31 gNaNO31 gKH2PO41 gMgSO4ㆍ7H20 1 g소포제* 0.1 ㎖수도물 1000 ㎖(pH 는 조정하지 않음)
*닛산 디스폼 CB-442 (니혼유시 (주) 제조)
[F-15078A 의 단리 (1)]
얻어진 배양물 60 L 에 아세톤 60 L 를 첨가하여 40 분간 교반하고, 이 추출액에 여과조제 (셀라이트 545 : 셀라이트 코포레이션사 제조) 를 3 kg 첨가하여 필터프레스 (filter-press) 여과를 실시하였다. 추가로 여과액에 아세트산에틸 50 L 를 첨가하여 추출을 실시하고, 얻어진 유기층 49 L 를 50 L 의 포화식염수 및 50 L 의 정제수로 세정한 후, 5 kg 의 무수황산나트륨을 첨가하여 1 시간 탈수하였다. 필터프레스 여과에 의해 황산나트륨을 제거한 후, 여과액을 감압농축 건조시켰다 (유상물질 95.9 g). 이 농축물을 메탄올 : 0.04 % 트리플루오로아세트산수 = 8 : 2 100 ㎖ 에 용해시켜 동일한 용매로 미리 평형화한 22 L 용기의 토요펄 HW-40F (도소 (주) 제조) 칼럼에 충진 하였다. 이 칼럼을 동일한 용매로 전개하고, 용출액을 500 ㎖ 씩 분취하여 분획 번호 13 내지 25 (합계 6.5 L) 중에 F-15078A 가 회수되었다. 얻어진 분획을 2 L 까지 감압농축한 후, 6.25 규정의 수산화나트륨으로 pH 7 로 조정하였다. 이 농축액에 아세트산에틸 3.1 L 를 첨가하여 활성물질을 추출하였다. 추출액을 3 L 의 포화식염수로 세정하고, 무수황산나트륨에 의한 탈수를 실시한 후, 감압농축 건조를 실시하여 66. 5 g 의 유상물질을 얻었다. 이 유상물질을 메탄올 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 8 : 2 160 ㎖ 에 용해시켜, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로 아세트산수 = 4 : 6 으로 미리 평형화한 3 L 용기의 코스모 실 140C18 (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 충진하였다. 이 칼럼을 10 L 의 동일한 용매로 세정하고, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 로 전개하였다. 용출액을 2 L 씩 분취하여 분획 번호 2 (2 L) 중에 F-15078A 가 회수되었다. 얻어진 분획을 800 ㎖ 까지 감압농축한 후, 6.25 규정의 수산화나트륨으로 pH 7 로 조정하고, 아세트산에틸 1 L 를 첨가하여 활성물질을 추출하고, 세정, 탈수, 감압농축 건조하여 조정제물을 234.3 ㎎ 얻었다. 이 조정제물을 4 ㎖ 의 메탄올에 용해시킨 후, 이하에 나타내는 HPLC 의 조건 (1) 에 따라 HPLC 를 실시하여 F-15078A 를 함유하는 분획이 얻어졌다.
HPLC 의 조건 (1)
칼럼 : YMC 팩 ODS-AM
직경 30 ㎜ ×길이 300 ㎜ (와이엠씨 (주) 제조)
용매 : 아세토니트릴:1 % 트리에틸아민인산수 (pH 6.0) = 3:1
검출파장 : UV 210 nm
유속 : 10.4 ㎖/분
온도 : 실온
유지시간 : 77 내지 98 분
얻어진 F-15078A 함유 분획을 상술한 바와 같이 아세트산에틸을 사용하여 탈염하여 감압농축 건조함으로써, F-15078A 가 34.1 ㎎ 얻어졌다.
실시예 2. F-15078A 의 제조 (2)
[SANK 13899 주의 배양 (2)]
SANK 13899 주를 121 ℃, 30 분간 멸균한 실시예 1 의 표 1 에 기재된 조성을 갖는 종배양 배지 500 ㎖ 를 함유하는 2 L 용기 삼각플라스크 6 개에 1 백금이 접종하고, 23 ℃, 210 rpm (회전반경 7 ㎝) 의 조건 하에서 6 일간 배양하였다. 얻어진 종배양액을 동일한 조성의 배지 30 L 를 함유하는 60 L 용기 탱크 배양기 2 기에 5 % 식균하고, 23 ℃, 통기량 1 vvm, 100 rpm, 용존산소량 5.0 ppm 의 조건하에서 2 일간 배양하였다. 얻어진 배양액을 121 ℃, 30 분간 멸균한 표 3 에 기재된 조성을 갖는 본배양 배지 (2) 300 L 를 함유하는 600 L 용기 탱크 배양기 1 기에 5 % 를 식균하고, 23 ℃, 통기량 1 vvm, 83 내지 240 rpm, 용존산소량 5.0 ppm 의 조건 하에서 7 일간 배양하였다.
표 3
본배양 배지 (2) 의 배지조성
글루코오스 80 g몰트 엑기스 (Difco) 20 g이스트 엑기스 (Difco) 2 g트립톤 (Difco) 10 gNH4NO31 gNaNO31 gKH2PO41 gMgSO4ㆍ7H2O 1 g소포제* 0.1 ㎖수도물 1000 ㎖(pH 는 조정하지 않음)
*닛산 디스폼 CB-442 (니혼유시 (주) 제조)
[F-15078A 의 단리 (2)]
얻어진 배양물 370 L 에 여과조제 (셀라이트 545 : 셀라이트 코포레이션사 제조) 를 15 kg 첨가하여, 필터프레스 여과를 실시하였다. 얻어진 균체에 메탄올 : 물 = 1 : 1 400 L 를 첨가하여 교반한 후, 얻어진 추출액에 6 규정의 염산을 첨가하여 pH 2 로 조정하였다. 이 추출액을 필터프레스 여과하였다.
얻어진 여과액 465 L 중, 270 L 를 메탄올 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 1 : 1 로 미리 평형화한 30 L 용기의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 충진하였다. 이 칼럼을 동일한 용매 270 L 로 세정하고, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 4 : 6 100 L 로 세정한 후, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 로 전개하였다. 최초의 용출액 15 L 를 분획 번호 1 로서 분취하고, 이어서 용출액을 10 L 씩 5 분획 (분획 번호 2 내지 6) 분취한 바, 분획 번호 2 내지 4 (합계 30 L) 중에 F-15078A 가 회수되었다.
상술한 여과액의 나머지 195 L 를 메탄올 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 1 : 1 로 미리 평형화한 30 L 용기의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 충진하고, 이 칼럼을 동일한 용매 200 L 로 세정하고, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 4 : 6 100 L 로 세정한 후, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 로 전개하였다. 최초의 용출액 10 L 를 분획 번호 1 로서 분취하고, 이어서 용출액 5 L 를 분획 번호 2 로서 분취하고, 이어서 용출액을 15 L 씩 2 분획 (분획 번호 3 및 4) 분취하고, 이어서 용출액 10 L 를 분획 번호 5 로서 분취한 바, 분획 번호 3 내지 5 (합계 40 L) 중에 F-15078A 가 회수되었다.
2 회의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼 분획에 의해 얻어진 합계 70 L 의 F-15078A 함유 분획을 6 규정의 수산화나트륨으로 pH 7 로 조정하고, 추가로 아세트산에틸 50 L 를 첨가하여 활성물질을 추출하였다. 추출액을 50 L 의 포화식염수로 세정하고, 무수황산나트륨에 의한 탈수를 실시한 후, 감압농축 건조를 실시하여 32.3 g 의 유상물질이 얻어졌다. 이 유상물질을 메탄올 200 ㎖ 에 용해시켜 얻어진 용액 중 50 ㎖ 를 이하에 나타내는 HPLC 의 조건 (2) 에 따라 HPLC 에서 수행하였다. 이 용액의 나머지 150 ㎖ 에 대해서도 30㎖ 씩 5 회로 나누어 동일한 조건의 HPLC 에서 수행하였다. 그 결과, F-15078A 를 함유하는 분획 26 L 가 얻어졌다. 이 분획에 10 L 의 물을 첨가하고, 추가로 10 L 의 아세트산에틸을 첨가하여 활성물질을 추출하였다. 추출액을 세정, 탈수, 감압농축 건조하여 조정제물이 7.78 g 얻어졌다. 이 조정제물 중 326 ㎎ 을 2 ㎖ 의 메탄올에 용해시켰다. 이 용액을 200 ㎕ 씩 10 회로 나누어 이하에 나타내는 HPLC 의 조건 (3) 에 따라 HPLC 에서 수행하였다. 얻어진 분획을 농축, 동결건조함으로써 F-15078A 가 275 ㎎ 얻어졌다.
HPLC 의 조건 (2)
칼럼 : YMC 팩 ODS-AM
직경 100 ㎜ ×길이 500 ㎜ (와이엠씨 (주) 제조)
용매 : 아세토니트릴 : 1 % 트리에틸아민인산수 (pH 6.0) = 3 : 1
검출파장 : UV 210 nm
유속 : 240 ㎖/분
온도 : 실온
유지시간 : 64 분
HPLC 의 조건 (3)
칼럼 : Shodex Asahipak C8P 90 2F
직경 20 ㎜ ×길이 250 ㎜ (쇼와덴꼬 (주) 제조)
용매 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 6 : 4
검출파장 : UV 210 nm
유속 : 14 ㎖/분
온도 : 실온
유지시간 : 19.2 분
실시예 3 F-15078B 의 제조
[SANK 13899 주의 배양 (3)]
SANK 13899 주를 121 ℃, 30 분간 멸균한 실시예 1 의 표 1 에 기재된 조성을 갖는 종배양 배지 500 ㎖ 를 함유하는 2 L 용기 삼각플라스크 6 개에 1 백금이 접종하고, 23 ℃, 210 rpm (회전반경 7 ㎝) 의 조건 하에서 6 일간 배양하였다. 얻어진 종배양액을 동일한 조성의 배지 30 L 를 함유하는 60 L 용기 탱크 배양기 2 기에 5 % 식균하고, 23 ℃, 통기량 1 vvm, 100 rpm, 용존산소량 5.0 ppm 의 조건 하에서 2 일간 배양하였다. 얻어진 배양액을 121 ℃, 30 분간 멸균한 실시예 2 의 표 3 에 기재된 조성을 갖는 본배양 배지 (2) 300 L 를 함유하는 600 L 용기 탱크 배양기 1 기에 5 % 를 식균하고, 23 ℃, 통기량 1 vvm, 83 내지 240 rpm, 용존산소량 5.0 ppm 의 조건 하에서 7 일간 배양하였다.
[F-15078B 의 단리]
얻어진 배양물 370 L 에 여과조제 (셀라이트 545 : 셀라이트 코포레이션사 제조) 를 15 kg 첨가하여, 필터프레스 여과를 실시하였다. 얻어진 균체에 메탄올 : 물 = 1 : 1 400 L 를 첨가하여 교반한 후, 얻어진 추출액에 6 규정의 염산을 첨가하여 pH 2 로 조정하였다. 이 추출액을 필터프레스 여과하였다.
얻어진 여과액 465 L 중 270 L 를 메탄올 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수= 1 : 1 로 미리 평형화한 30 L 용기의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 충진하였다. 이 칼럼을 동일한 용매 270 L 로 세정하고, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 4 : 6 100 L 로 세정한 후, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 로 전개하였다. 최초의 용출액 15 L 를 분획 번호 1 로서 분취하고, 이어서 용출액을 10 L 씩 5 분획 (분획 번호 2 내지 6) 분취한 바, 분획 번호 2 내지 4 (합계 30 L) 중에 F-15078B 가 회수되었다.
상술한 여과액의 나머지 195 L 를 메탄올 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 1 : 1 로 미리 평형화한 30 L 용기의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 충진하고, 이 칼럼을 동일한 용매 200 L 로 세정하고, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 4 : 6 100 L 로 세정한 후, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 로 전개하였다. 최초의 용출액 10 L 를 분획 번호 1 로서 분취하고, 이어서 용출액을 5 L 를 분획 번호 2 로서 분취하고, 이어서 용출액을 15 L 씩 2 분획 (분획 번호 3 및 4) 분취하고, 이어서 용출액 10 L 를 분획 번호 5 로서 분취한 바, 분획 번호 3 내지 5 (합계 40 L) 중에 F-15078B 가 회수되었다.
2 회의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼 분획에 의해 얻어진 합계 70 L 의 F-15078B 함유 분획을 6 규정의 수산화나트륨으로 pH 7 로 조정하고, 추가로 아세트산에틸 50 L 를 첨가하여 활성물질을 추출하였다. 추출액을 50 L 의 포화식염수로 세정하고, 무수황산나트륨에 의한 탈수를 실시한 후,감압농축 건조를 실시하여 32.3 g 의 유상물질이 얻어졌다. 이 유상물질을 메탄올 200 ㎖ 에 용해시켜 얻어진 용액 중 50 ㎖ 를 실시예 2 에 기재된 HPLC 의 조건 (2) 에 따라 HPLC 에서 수행 하였다. 이 용액의 나머지 150 ㎖ 에 대해서도 30 ㎖ 씩 5 회로 나누어 동일한 조건의 HPLC 에서 수행하였다. 그 결과, F-15078B 를 함유하는 분획 26 L 가 얻어졌다. 이 분획에 10 L 의 물을 첨가하고, 추가로 10 L 의 아세트산에틸을 첨가하여 활성물질을 추출하였다. 추출액을 세정, 탈수, 감압농축 건조하여 조정제물이 7.78 g 얻어졌다. 이 조정제물 중 2.10 g 을 메탄올 5 ㎖ 에 용해시켜 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 5 g 을 첨가하였다. 용매를 증류제거한 후, 남은 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 을 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 4 : 6 으로 미리 평형화한 170 ㎖ 용기의 코스모 실 140 C18-OPN (나까라이테스크 (주) 제조) 칼럼에 중층시켰다. 이 칼럼을 동일한 용매 300 ㎖ 로 세정한 후, 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 6 : 4 300 ㎖ 및 아세토니트릴 : 0.05 % 트리플루오로아세트산수 = 9 : 1 20 ㎖ 로 전개하여 10 ㎖ 씩 분취한 바, 분획 번호분획 번호 (합계 90 ㎖) 중에 F-15078B 가 회수되었다. 얻어진 분획을 감압농축한 후, 동결건조하여 109 ㎎ 의 황백색분말이 얻어졌다. 이 분말 100 ㎎ 을 1 ㎖ 의 메탄올에 용해시키고, 이 용액을 200 ㎕ 씩 5 회로 나누어 이하에 나타내는 HPLC 의 조건 (4) 에 따라 HPLC 에서 수행하였다. 얻어진 분획을 감압농축, 동결건조함으로써 F-15078B 의 백색분말이 69.5 ㎎ 얻어졌다.
HPLC 의 조건 (4)
칼럼 : Shodex Asahipak C8P 90 2F
직경 20 ㎜ ×길이 250 ㎜ (쇼와덴꼬 (주) 제조)
용매 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 6 : 4
검출파장 : UV 210 nm
유속 : 14 ㎖/분
온도 : 실온
유지시간 : 17.8 분
시험예 1. F-15078A 및 B 의 항진균활성
F-15078A 및 B 의 항진균활성, 즉 피검균에 대한 최소생육 저지농도 측정은 0.165M 3-[N-모르폴리노]프로판술폰산 (시그마사 제조) 완충액을 함유하는 RPMI 1640 배지를 사용한 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 의한 브로스 희석법 (Yamaguchi, H., et al., J. Med. Mycol. 36, 61 (1995)) 에 의해 실시하였다. 측정결과를 표 4 에 나타낸다.
F-15078A 및 B 의 항진균활성
피검균 최소생육 저지농도 (㎍/㎖)
F-15078A F-15078B
칸디다 알비칸스 (Candida albicans) ATCC90028 2.5 >50
아스페르길루스 푸미가투스 (Aspergillus fumigatus) IAM2034 1.3 >50
크립토코쿠스 네오포르만스 (Cryptococcus neoformans) IAM4772 0.31 1.56
표 4 에 나타내는 바와 같이, F-15078A 및 B 는 항진균활성을 나타냈다.
제제예 1. 경구용캡슐제
F-15078A30 ㎎
락토오스 170 ㎎
옥수수전분 150 ㎎
스테아르산마그네슘 2 ㎎
합계 352 ㎎
상기 처방의 분말을 혼합하여 30 메쉬의 체를 통과시킨 후, 이 분말을 젤라틴 캡슐에 넣어 캡슐제로 한다.
본 발명은 항진균활성을 갖는 신규 화합물, 이 화합물 생산균의 배양물로부터 이 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 이 화합물의 제조법, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 의약, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물, 이 화합물을 유효성분으로서 함유하는 진균감염증의 치료제 및 예방제, 이 화합물의 생산균, 이 화합물의 사용, 이 화합물의 약리적인 유효량을 동물에게 투여하는 진균감염증의 치료방법 및 예방방법 등에 관한 것이다.
본 발명의 화합물은 항진균활성를 갖고 있으며, 진균감염증의 치료 및 예방에 유용하다.
본 발명의 화합물은 진균감염증의 예방약 또는 치료약으로서 사용하는 경우, 그 투여형태는 특별히 한정되는 것은 아니며, 제제, 연령, 성별, 질환의 종류, 질환의 정도 등에 따라 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 정제, 환제, 산제, 과립제, 시럽제, 액제, 현탁제, 유제, 캡슐제 등은 경구투여될 수 있다. 주사제는 단독으로 또는 글루코오스, 아미노산 등의 보액과의 혼합액으로 하여, 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산에스테르류 등과 혼화한 에멀젼으로 하여, 정맥내투여, 근육내투여, 피내투여, 피하투여 및/또는 복강내투여될 수 있다. 좌제는 직장내투여될 수 있다.
이들 각종 제제는 주약에 첨가하여 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 용해제, 교미교취제, 코팅제 등 당해 분야에서 공지의 보조제를 사용하여 제조할 수 있다.
정제의 성형시에는 담체로서 당해 분야에서 공지의 것, 예를 들어 락토오스, 수크로오스, 염화나트륨, 글루코오스, 요소, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 결정셀룰로오스, 규산 등의 부형제, 물, 에탄올, 프로판올, 단순 시럽, 글루코오스액, 전분액, 젤라틴용액, 카르복시메틸셀룰로오스, 셸락, 메틸셀룰로오스, 인산칼륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제, 건조전분, 알긴산나트륨, 한천분말, 라미나란분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산에스테르류, 라우릴황산나트륨, 스테아르산모노글리세리드, 전분, 락토오스 등의 붕괴제, 수크로오스, 스테아린, 카카오버터, 수소첨가유 등의 붕괴억제제, 제 4 급 암모늄염기, 라우릴황산나트륨 등의 흡수촉진제, 글리세린, 전분 등의 보습제, 전분, 락토오스, 카올린, 벤토나이트, 콜로이드형 규산 등의 흡착제, 정제 탈크, 스테아르산염, 붕산분말, 폴리에틸렌글리콜 등의 활택제 등을 사용할 수 있다. 정제의 경우, 필요에 따라 통상의 제피를 실시한 정제, 예를 들어 당의정, 젤라틴 피포정, 장용피정, 필름코팅정, 이중 코팅정, 다중 코팅정 등으로 할 수 있다.
환제의 성형시에는 담체로서 당해 분야에서 공지의 것, 예를 들어 글루코오스, 락토오스, 전분, 카카오버터, 경화식물유, 카올린, 탈크 등의 부형제, 아라비아고무분말, 트라간트분말, 젤라틴, 에탄올 등의 결합제, 라미나란, 한천 등의 붕괴제를 사용할 수 있다.
좌제의 성형시에는 담체로서 당해 분야에서 공지의 것, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜, 카카오버터, 고급알코올, 고급알코올의 에스테르류, 젤라틴, 반합성글리세리드 등을 사용할 수 있다.
주사제가 액제, 유제 또는 현탁제인 경우, 멸균되며 또한 혈액과 등장인 것이 바람직하고, 이들 액제, 유제 및 현탁제의 성형시에는 희석제로서 당해 분야에서 공지의 것, 예를 들어 물, 에틸알코올, 프로필렌글리콜, 에폭시화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산에스테르류 등을 사용할 수 있다. 주사제를 혈액과 등장으로 하기 위하여 충분한 양의 식염, 글루코오스, 글리세린 등을 함유시켜도 되고, 통상의 용해보조제, 완충제, 무통화제당을 함유시켜도 된다.
이들 각종 제제에는 필요에 따라 착색제, 보존제, 향료, 풍미제, 감미제, 다른 약제 등을 함유시켜도 된다.
이들 각종 제제 중에 함유되는 본 발명의 화합물의 양은 제형, 투여방법 등에 의존하지만, 통상 1 내지 70 중량% 이고, 바람직하게는 1 내지 30 중량% 이다.
본 발명의 화합물의 투여량은 질환의 종류, 질환의 정도, 연령, 체중, 투여방법, 제형 등에 의존하지만, 성인에 대해서는 1 일에 투여하는 양의 상한이 20 내지 2000 ㎎, 하한이 0.001 내지 0.1 ㎎ 이고, 바람직한 범위는 0.01 내지 200 ㎎, 보다 바람직한 범위는 0.1 내지 20 ㎎ 이다.
본 발명의 화합물을 함유하는 의약의 투여횟수는 제형, 질환의 종류, 질환의 정도, 체중 등에 의존하지만, 특별히 한정되는 것은 아니며, 수일에 1 회, 1 일 1 회 또는 1 일 수회이다.

Claims (12)

  1. 하기 식 (Ⅰ) 로 표시되는 화합물 또는 그 염:
  2. 하기의 이화학적 성상을 갖는 화합물 또는 그 염 :
    1) 물질의 성상 : 염기성 지용성 분말
    2) 분자식 : C55H98N8014
    3) 분자량 : 1094 (FAB-MS 법)
    4) 고분해능 FAB-MS [M + H]+(C55H99N8014로서) :
    실측값 : 1095.7365
    계산값 : 1095.7281
    5) 자외선흡수 스펙트럼 : 말단흡수
    6) 적외선흡수 스펙트럼 (브롬화칼륨 정제 중, cm-1) :
    3434, 3335, 2962, 2937, 2875, 2806, 1750, 1684, 1641, 1509, 1469, 1412, 1371, 1314, 1294, 1271, 1204, 1156, 1128, 1074, 1020
    7) 선광도 : [α]D 25- 120°(c 1.0, 메탄올)
    8)1H-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
    중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명 스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
    9)13C-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
    중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
    10) 고속액체 크로마토그래피 :
    칼럼 : Shodex Asahipak C8P 50 4E
    (직경 4.6 ㎜ ×길이 250 ㎜ : 쇼와덴꼬 (주) 제조)
    이동상 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 13 : 7
    유속 : 0.7 ㎖/분
    검출파장 : λ210 nm
    유지시간 : 10.20 분
    11) 용해성 : 디메틸술폭시드, 메탄올, 클로로포름에 가용.
    12) 아미노산 분석 : 가수분해물로서 트레오닌, 알라닌, 이소류신이 확인되었다.
  3. 하기 식 (Ⅱ) 로 표시되는 화합물:
  4. 하기의 이화학적 성상을 갖는 화합물 :
    1) 물질의 성상 : 중성 지용성 무색분말
    2) 분자식 : C57H100N8015
    3) 분자량 : 1136 (FAB-MS 법)
    4) 고분해능 FAB-MS [M + H]+(C57H101N8015로서) :
    실측값 : 1137.7410
    계산값 : 1137.7387
    5) 자외선흡수 스펙트럼 : 말단흡수
    6) 적외선흡수 스펙트럼 (브롬화칼륨 정제 중, cm-1) :
    3433, 3333, 2963, 2937, 2875, 1751, 1686, 1642, 1516, 1469, 1409, 1388, 1372, 1311, 1292, 1272, 1201, 1156, 1128, 1074, 1017
    7) 선광도 : [α]D 25- 131°(c 1.0, 메탄올)
    8)1H-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
    중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명 스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
    9)13C-핵자기공명 스펙트럼 : (δ, ppm)
    중클로로포름 중, 테트라메틸실란을 내부표준으로 하여 측정한 핵자기공명스펙트럼 (500 MHz) 은 다음에 나타내는 바와 같다.
    10) 고속액체 크로마토그래피 :
    칼럼 : Shodex Asahipak C8P 50 4E
    (직경 4.6 ㎜ ×길이 250 ㎜ : 쇼와덴꼬 (주) 제조)
    이동상 : 아세토니트릴 : 10 mM 탄산수소암모늄수 = 13 : 7
    유속 : 0.7 ㎖/분
    검출파장 : λ210 nm
    유지시간 : 9.05 분
    11) 용해성 : 디메틸술폭시드, 메탄올, 클로로포름에 가용.
    12) 아미노산 분석 : 가수분해물로서 트레오닌, 알라닌, 이소류신이 확인되었다.
  5. 포마 (Phoma) 속에 속하는 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 생산균을 배양하고, 그 배양물로부터 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 제조방법.
  6. 제 5 항에 있어서, 포마 (Phoma) 속에 속하는 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 생산균이 포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 (FERM BP-6851) 주인 제조방법.
  7. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 의약.
  8. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 진균감염증의 치료제 또는 예방제.
  9. 포마 에스피. (Phoma sp.) SANK 13899 (FERM BP-6851) 주.
  10. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.
  11. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 약리적인 유효량을 동물에게 투여하는 진균감염증의 치료방법 또는 예방방법.
  12. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물.
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