KR100942368B1 - 신규한 스트렙토마이세스 속 ｙａ1766 균주 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규의 미생물 스트렙토마이세스 YA1766 균주 및 그로부터 생산되는 화합물의 용도에 관한 것으로서, 본 발명의 신규의 미생물 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주는 캔디다 알비칸스(Candida albicans)의 이형전환(yeast-to-hypha morphological transition) 및 병원성(virulence)에 관련된 신규 타겟인 CaMob2p 단백질의 활성을 저해하는 물질을 생산한다.

캔디다 알비칸스, CaMOB2, 스트렙토마이세스, 항진균제

Description

신규한 스트렙토마이세스 속 ＹＡ1766 균주{Novel Streptomyces YA1766}

도 1은 자연계로부터 분리한 스트렙토마이세스 YA1766 균주를 ISP4 한천배지에 배양한 결과를 나타낸 것이다.

도 2는 스트렙토마이세스 YA1766 균주의 세포벽 추출물중 디아미노 페메린산을 박층크로마토그래피로 분석한 결과이다.

도 3는 스트렙토마이세스 YA1766 균주의 16S 리보좀 DNA 서열을 기초로 작성한 계통발생학적 분지도(phylogenetic tree)를 나타낸 것이다.

도 4는 스트렙토마이세스 YA1766 균주의 배양액으로부터 항진균 물질인 YA1766p를 분리 정제한 결과를 나타낸 것이다.

도 5은 정제된 YA1766p의 고속액체크로마토그래피 분석결과를 나타낸 것이다.

도 6은 YA1766p가 캔디다 알비칸스의 병원성에 관련된 이형전환을 억제함을 나타낸 결과이다.

도 7은 YA1766p의 적외부 흡수스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 8는 YA1766p의 질량분석 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 9은 YA1766p의 수소핵자기공명 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 10은 YA1766p의 탄소핵자기공명 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 11는 YA1766p의 COSY 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 12은 YA1766p의 HMQC 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 13는 YA1766p의 HMBC 스펙트럼을 나타낸 것이다.

본 발명은 신규의 미생물 스트렙토마이세스 YA1766(Streptomyces YA1766) 균주 및 그로부터 생산되는 화합물의 용도에 관한 것이다.

신규의 항진균제를 개발하기 위하여 미생물 대사산물을 탐색하는 연구는 오래전부터 이루어져 왔다. 1939년 Oxford 등은 곰팡이 일종인 페니실리움 그리세오풀범(Penicillium griseofulvum)으로부터 그리세오풀빈(Griseofulvin)을 분리하였고(Biochem. J. 33, 240-248, 1939), 이는 스퀴브사와 쉐링사에 의하여 그리풀빈(Grifulvin V^®)과 풀비신(Fulvicin^®)으로 각각 상품화되었다. 1959년 Dutcher 등은 토양 방선균인 스트렙토마이세스 노도서스(Streptomyces nodosus)로부터 암포테리신 비(Amphotericin B)를 발견하였으며(미합중국특허 2,908,611), 브리스톨마이어 사에 의하여 개발된 니스타틴(Nystatin)은 스트렙토마이세스 노르세이(Streptomyces noursei)로부터 분리되어, 푼지존(Fungizone^®)으로 상품화되었다. 이들은 진균 세포막에 특이적으로 존재하는 어고스테롤(Ergosterol) 합성을 저해하는 물질이며, 소다리아 아라네오사(Sodaria araneosa)로부터 분리된 소다린(Sordarin)은 단백질 합성저해제로서 다양한 유도체가 개발되고 있다(J. Antibiot. 55. 377, 2002).

최근에는 일본 후지사와에서 미생물로부터 분리된 몇 가지 항진균 후보물질들이 개발되고 있는데, 국소 치료제로 상품화된 파이롤니트린(Pyrrolnitrin)과, 우수한 용해도와 항진균 활성으로 전임상 연구단계에 있는 FR901469 등이 대표적이다(Biochimica et Biophysica Acta, 1587, 224-233, 2002).

새로운 구조의 효과적 항진균제로서 최근 주목받고 있는 물질은 에키노칸딘 (echinocandin) 계열로서 반합성법에 의하여 새롭게 개발된 머크 사의 카스포푼진(Caspofungin), 푸지사와 사의 미카푼진(Micafungin), 버시코 사의 아니듈라푼진(Anidulafungin) 등이 있다. 이들 칸딘류의 항진균제는 진균 세포벽의 β-glucan 합성을 저해하는 것으로 밝혀졌으며, 현재 임상시험 단계에 있는 BAL8557, BAL4815, 아미노칸딘(Aminocandin) 등이 새로운 기대를 갖게 하고 있다.

그러나, 아졸(Azole)계열 항진균제들의 안정성 문제와 내성균 출현으로 새로운 항진균제의 개발 필요성이 증가되고 있고, 칸딘 계열 항진균제들의 제한적인 용법을 극복할 만한 대안은 신규 타겟에 작용하는 신규의 항진균제를 개발하는 것이라는데 많은 연구자들의 의견이 모아지고 있다.

본 발명자들은 토양으로부터 분리된 미생물 배양액 또는 유기용매 추출액으로부터 캔디다 알비칸스의 이형전환과 병원성에 관련된 신규의 타겟 CaMob2p 단백 질의 활성을 저해하는 항진균 물질을 생산하는 신규의 스트렙토마이세스 균주를 발견하였으며, 그로부터 생산되는 화합물의 항진균 활성을 측정하고 구조를 분석하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 캔디다 알비칸스의 이형전환과 병원성에 관련된 CaMob2p 단백질의 활성을 저해하는 항진균 물질을 생산하는 신규의 스트렙토마이세스 균주를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 스트렙토마이세스 균주를 배양하여 분리 정제한 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 스트렙토마이세스 균주로부터 생산되는 물질을 활성성분으로 함유하는 CaMob2p 단백질의 활성을 저해하는 항진균제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 병원성 진균인 캔디다 알비칸스의 이형전환(yeast-to-hypha morphological transition) 및 병원성(virulence)에 관련된 신규의 타겟 CaMob2p 단백질의 활성을 저해하는 물질을 생산하는 신규의 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주를 제공한다(기탁번호: KACC 91142).

또한, 본 발명은 상기 균주 스트렙토마이세스 속 YA1766 을 배양하여 분리 정제한 CaMob2p 단백질의 활성을 저해하는 하기 화학식 1의 화합물을 제공한다:

상기 식에서, R₁ 및 R₄는 메틸 또는 하이드록시이고; R₂ 및 R₃ 는 메틸 또는 메톡시이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

캔디다 알비칸스는 면역이 약화된 환자에 감염하여 캔디다증을 일으키는 주요한 병원성 균류이다. 이 균주는 이배수체로 존재하고, 단세포의 효모 형태에서 진균사를 형성할 수 있는 이형전환을 할 수 있다. 균사 형태는 효모 형태보다 감염체 조직에 더 쉽게 점착(adherence)과 침투(invasion)를 할 수 있는 것으로 생각된다. 따라서, 이형전환은 캔디다 알비칸스가 병원성을 나타내는데 중요한 역할을 하고 있을 것으로 생각되며, 실제로 이형전환에 관련된 많은 유전자들이 병원성에 관련되어 있다는 많은 보고가 있다(Lo 등, Cell, 90, 939-949, 1997; Fidel과 Sobel, Trends Microbiol., 2, 202-205, 1994).

본 발명자들은 캔디다 알비칸스의 이형전환과 병원성에 관련된 신규의 유전자 CaMOB2 (서열번호 1)를 발견하였고, 대립유전자가 파쇄(knock-out)된 캔디다 알 비칸스 균주(기탁번호: KCTC 10625BP)를 개발하였으며, 이 유전자 산물인 단백질 CaMob2p (서열번호 2)를 신규의 항진균 타겟으로 활용하는 것을 특허로 출원한 바 있다(대한민국 출원번호 10-2004-0028329, 출원일 2004년 4월 23일).

한국과 중국의 토양으로부터 분리된 약 5,000종 이상의 다양한 미생물들을 탐색하여 CaMob2p를 저해하는 균주를 분리하여 이를 동정한 결과 선별된 균주가 스트렙토마이세스 속 미생물임을 확인한다. 또한 상기 균주는 유사한 연구사례에서 보고된 적이 없는 신규의 미생물임을 확인하여, 이를 스트렙토마이세스 속 YA1766으로 명명한다(기탁번호: KACC 91142).

본 발명에 따른 스트렙토마이세스 속 YA1766 은 무기염류-전분 한천배지(ISP4)상에서 기균사의 왕성한 생장과 회색의 포자를 형성하는 전형적인 방선균의 생육형태를 보인다.

상기 균주를 포도당, 가용성 전분, 대두박, 효모 추출액, 펩톤, 무기염류 등이 함유된 배지에서 4 ~ 7일간 배양하고, 이로부터 미생물 균체를 별도로 분리한 다음, 분리된 균체를 유기용매로 추출하여 조물질을 얻을 수 있다. 회수된 조물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 실리카겔 박층 크로마토그래피(TLC) 및 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)를 수행하여 고순도로 정제한다.

상기 과정을 통하여 고순도로 정제된 활성물질을 캔디다 알비칸스 균주의 이형전환이 유도되는 환경에 처리한 결과 CaMob2p 단백질의 활성 및 캔디다 알비칸스의 이형전환이 저해됨을 확인할 수 있으며, 다양한 병원성 진균들에 대하여 항진균 활성을 나타냄을 확인할 수 있다.

또한, 상기 정제된 활성물질을 원소분석, 적외부흡수분광분석, 질량분석, 핵자기공명분광분석 등의 측정방법에 의해 화학구조를 분석한 결과 상기 화학식 1의 구조를 가진다는 것을 확인할 수 있다.

본 발명에서 분리 정제한 화학식 1의 화합물은 CaMob2p 단백질의 활성 및 캔디다 알비칸스의 이형전환을 저해하고 다양한 병원성 진균들에 대하여 항진균 활성을 가지므로 항진균제로서 유용하게 사용될 수 있다.

이러한 목적으로 상기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로서 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 항진균제 조성물을 제조할 수 있다.

본 발명의 항진균제 조성물은 약학적으로 허용되는 부형제, 담체, 희석제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 의약품의 투여에 유용한 제제형태, 예를들어 주사제와 같은 단위 투여형 또는 수회 투여형 제제로 제형화될 수 있다. 이러한 약학 조성물은 목적하는 바에 따라 다양한 투여 경로를 통해 투여할 수 있고, 통상적인 투여량 0.01 mg ~ 1000 mg으로 투여할 수 있으며 하루에 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여 용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 기간, 투여 방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 예시이며 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

실시예 1. 토양으로부터 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주의 분리

토양으로부터 분리된 다양한 미생물 5000종을 액체배지(50 ml; 포도당 2%, 대두분 1%, 수용성 전분 1%, 이인산칼륨 0.5%, 연화나트륨 0.5%, 황산마그네슘 0.1%)에서 30℃로 7 일간 배양하였다. 각 미생물 배양액을 원심분리하여 균체와 배양 상등액으로 나누고, 균체는 에틸아세테이트(5 ml)로 2시간 동안 추출하여 추출액을 회수하였다. 회수된 균체 추출액 또는 배양 상등액을 재조합 사카로마이세스 세레비지아(Sacharomyces cerevisiae EGY48[p8opLacZ & pLexA-CaMOB2 & pB42AD-CaCBK]; 입수처: 클론텍(Clonetek)) 균주와 함께 30℃에서 1 일간 배양하였다. 배양이 종료된 다음, 육안으로 판단하여 배양액이 청색을 나타내는 것은 제외시키고 백색을 나타내는 1종의 방선균을 선별하였다.

실시예 2. 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주의 동정

상기 실시예 1에서 선별된 균주의 형태적, 배양학적 및 생리적 특성을 조사한 결과, 상기 균주는 일반적인 방선균 배양용 배지에서 정상적인 성장형태를 보였고, 오트밀 한천과 무기염 전분 한천배지, 짜펙(Czapek) 한천배지 상에서 양호하게 성장하였다. 몇 종의 한천배지에서 흰색, 또는 회색의 포자를 형성하였고, 오트밀 한천배지에서 군청색의 색소를, 펩톤-효모추출물 철(Fe) 한천배지에서 적갈색의 색소를 형성하였다. 또한, 포도당, 전분 등의 탄소원은 왕성하게 이용하였으나, 아라비노즈, 락토스, 라피노즈 등의 탄소원의 이용은 상대적으로 미약하였다. 각각의 특성을 표 1, 표 2 및 도 1에 나타내었다.

스트렙토마이세스 속 YA1766의 배양학적 특성

배지의 종류	생육정도	기균사 색	배후면 색	포자	수용성색소
트립톤 효모 추출물 한천(ISP1)	불량	미황색	노란색	-	-
효모 맥아 추출물 한천(ISP2)	불량	미황색	갈색	흰색	-
오트밀 한천(ISP3)	양호	연한 갈색	갈색	-	군청색
무기염 전분 한천(ISP4)	양호	연한 갈색	황갈색	회색	-
글리세롤 아스파라긴 한천(ISP5)	보통	황갈색	갈색	-	-
펩톤-효모 추출물 철 한천(ISP6)	불량	노란색	진한노란색	-	적갈색
티로신 한천(ISP7)	보통	미황색	갈색	-	-
영양 한천	양호	흰색	노란색	흰색	-
글루코스 펩톤 한천	보통	흰색	진한노란색	-	-
짜펙 한천	양호	흰색	미황색	흰색	-
베넷 한천	보통	미황색	갈색	회색	-

스트렙토마이세스 속 YA1766의 탄소원 이용성

탄 소 원	이 용 성
포도당	++++
프록토오스	++++
자이로스	+++
아라비노즈	+
람노스	+++
락토스	++
라피노즈	++
마니톨	++++
메리비오스	+++
수크로오스	+++
전분	++++
셀룰로오스	+++

실시예 1에서 선별된 균주의 세포벽에 함유된 디아미노피메린산(diaminopimellic acid)의 종류를 확인하기 위하여 Yamada 등의 방법에 따라 조사하였다(J. Gen. Appl. Microbiol. 16, 103-113, 1970). 그 결과, 선별된 균주는 L- 형태의 디아미노피메린산을 갖는 것으로 밝혀졌으며(도 2 참조), 이러한 결과로부터 상기의 균주가 스트렙토마이세스에 속한다는 것을 확인하였다(Bergey's manual of systematic bacteriology, vol. 4, 2333-2347, 1989). 보다 정확한 동정을 위하여 상기 균주로부터 진화적으로 보존되는 리보좀 DNA를 분리하여 그 서열을 규명하였으며(서열번호 3), 국제 생명공학정보센터(NCBI)의 스트렙토마이세스 유전자 정보와 비교함으로써 계통발생학적 분지도(phylogenetic tree)를 완성하였다(도 3 참조).

상기의 유전자 서열정보를 이용하여 상동성을 검색한 결과, 상기 균주는 스트렙토마이세스 카주가엔시스(Streptomyces Kasugaensis)와 99%의 상동성을 보였으며, 스트렙토마이세스 시아네오그리세우스(Streptomyces cyaneogriseus) 및 스트렙토마이세스 그리세오카메우스(Streptomyces griseocameus)와는 98%의 상동성을 보였다. 따라서, 상기 균주는 진화적으로 스트렙토마이세스 카주가엔시스와 상당히 근접한 균주인 것으로 보이며, 그 외의 미생물과는 거리가 있는 것으로 판단되었다. 그러나 스트렙토마이세스 카주가엔시스는 카주가마이신(kasugamycin)이라는 아미노글리코사이드(aminoglycoside) 계열 항균물질을 생산하는 균주(J Antibiot. 21, 567, 1968)로서 본 발명에 속하는 균주와는 균학적인 특성 및 생산물질이 상이한 것으로 확인되었다.

이에 상기 균주를 스트렙토마이세스 속 YA1766 이라고 명명하고, 이를 2004년 11월 9일자로 농업생명공학연구원 한국농용미생물보존센터(Korean Agricultural Culture Collection)에 기탁번호 KACC 91142로 기탁하였다.

실시예 3. 스트렙토마이세스 속 YA1766의 배양

실시예 1에서 선별한 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주를 무기염 전분 한천배지(ISP4: International Streptomyces Project 4)에 접종하고, 30℃에서 7 일간 배양하여 충분한 포자형성이 이루어지도록 한 다음, 백금이로 상기의 포자를 적정량을 취하여 종균 배지(1 L; 포도당 10 g, 펩톤 5 g, 효모추출물 3 g, 가용성 전분 10 g, 황산마그네슘 0.1 g, 이인산칼륨 3 g, 증류수)에 접종하였다. 균주가 접종된 종균 배지를 28℃ ~ 30℃에서 1 ~ 2 일간 진탕 배양하였다. 상기의 종균 배양액(500 ml)을 생산배지(1 L; 포도당 10 g, 가용성 전분 40 g, 대두분 20 g, 효모추출물 3 g, 탄산칼슘 1 g, 인산칼륨 3 g, 황산마그네슘 0.5 g, 증류수)에 접종하고 28℃ ~ 30℃에서 300 ~ 350 RPM으로 6 ~ 8 일간 배양하였다.

실시예 4. YA1766p의 분리 및 정제

상기 실시예 3에서 배양한 배양액(4 L)을 5,000 RPM으로 원심분리하여 균체만을 회수한 다음, 에틸아세테이트(1 L)를 넣고 5시간 동안 교반하여 활성 조물질을 추출하였다. 추출액을 여과하여 균체를 제거한 다음, 여액을 50℃에서 감압농축하고 최종 농축물(5 g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(메틸렌클로라이드/헥산=3/2)를 통과시켜 6 ~ 8 ml씩 분리 회수하였다(도 4 참조). 분리 회수된 용출액을 실리카겔 박층 크로마토그래피(TLC) 및 고속 액체크로마토그래피로 분석하여 활성물질을 포함하는 용출액을 50℃에서 감압농축 하였다. 이때 고속 액체크로마토그래 피 조건은 다음과 같다.

장치 : 히타치(HITACHI) 모델 D-7000, L-7100, 7200, 7300, 7400

컬럼 : 코스모실(COSMOSIL) 5C18-AR-Ⅱ, 4.6× 250 mm (30 ℃)

이동상 : 아세토니트릴 + 메탄올 + 증류수 (4 : 1 : 5)

유속 : 분당 1 ml

주입량 : 20 μl

검출 : 245 nm

상기에서 얻어진 농축물을 최소량의 메틸렌클로라이드와 헥산(1:1) 혼합액에 용해시키고, 상온에서 서서히 감압 농축하여 결정화하여, 소량의 헥산으로 세척한 다음, 40℃에서 건조하여 고순도의 활성물질(500 mg)을 회수하였다. 이를 YA1766p 라고 명명하였다.

상기의 방법에 의하여 정제된 YA1766p는 고속 액체크로마토그래피 분석에 의하여 98% 이상의 순도를 갖는 것으로 확인되었고(도 5 참조), 기본적인 물리화학적 특성을 표 3에 나타내었다

YA1766p의 특성

구 분	특     성
성상	미황색 분말
순도	> 98% by HPLC
용해도	물, 에탄올 등에 녹지 않음
	메탄올에 소량 녹음
	에틸아세테이트, 클로로포름 등에 잘 녹음
자외선 흡수대	223, 245, 289 nm
박층크로마토그래피	전개용매	Rf
	헥산 : 메틸렌클로라이드 (1:2) 헥산 : 에틸아세테이트   (2:1)	0.4 0.54
항균활성	캔디다 알비칸스의 이형전환 단백질(CaMob2p) 저해 캔디다 알비칸스, 크립토코쿠스 네오포르만스, 트리코파 이톤 멘타그로 파이테스 성장저해

실시예 5. YA1766p의 CaMob2p 단백질 저해효과 및 항진균 활성

야생형의 캔디다 알비칸스 SC5314와 CaMOB2 대립유전자가 결손된 변이주(KCTC 10625BP) 및 YA1766p(25 uM)을 혼합한 캔디다 알비칸스 SC5314로 나누어 균사형성을 유도하는 액체배지(펩톤 2 g, 효모추출물 1 g, 증류수 90 ml, 혈청 10 ml)에서 37℃로 4시간 동안 진탕배양 하였다. 그 결과, 도 6 에서와 같이 캔디다 알비칸스 SC5314는 효모세포에서 균사체가 형성되지만(도 6A), YA1766p와 함께 배양한 경우는 균사체 형성을 하지 못하고 효모형태로 남아있는 것을 확인할 수 있었다(도 6C). 이러한 이형전환의 억제효과는 CaMOB2 대립유전자가 결손된 변이주의 형태적 특성과 유사하였다(도 6B). 따라서, YA1766p가 캔디다 알비칸스의 이형전환에 매우 중요한 역할을 하고 있는 CaMOB2 유전자를 효과적으로 저해함으로써 캔디다 알비칸스의 병원성을 저해할 수 있음을 확인할 수 있었다.

또한, 미세 희석(micro-dilution)법을 사용하여 항균력을 조사한 결과, YA1766p는 대표적인 병원성 진균인 캔디다 알비칸스와 수막염과 폐렴의 원인이 되 는 크립토코쿠스 네오포르만스, 무좀균인 트리코파이톤 멘타그로파이테스 등에 항균력을 나타내었다. 박테리아 중에서는 바실러스 종에서만 약간의 항균력을 보였고 나머지 균들에서는 항균력을 나타내지 않았다. 이를 표 4에 나타냈었다.

다양한 미생물에 대한 YA1766p의 in vitro 항균력

미 생 물	항 균 력 (ug/ml)
Candida albicans B02630	50
Candida albicans SC5314	50
Candida krusei KCCM11655	> 200
Candida glabrata	> 200
Cryptococcus neoformans B19119	25
Aspergillus fumigatus	> 200
Trichophyton mentagrophytes B32663	25
Esherichia coliATCC25922	> 200
Staphylococcus aureus ATCC6538p	200
Bacillus subtilis ATCC6633	100
Bacillus cereus ATCC7064	100
Pseudomonas aeruginosa ATCC9017	> 200
Proteus vulgaris ATCC6059	> 200
Krebsiella pneumonia ATCC10031	> 200
Streptococcus faecalis IFO12580	> 200
Enterobacter cloacae ATCC13047	> 200

실시예 6. YA1766p의 구조분석

원소분석, 적외부흡수분광분석, 질량분석, 핵자기공명분광분석 등의 기기분석을 통하여 YA1766p에 대한 화학구조를 분석하였다. YA1766p에 대한 원소분석을 통하여 CHNS 원소의 절대함유량을 측정한 결과, C₁₅H₁₅N의 기본화학식을 가지는 것을 알 수 있었다. YA1766p에 대한 적외부흡수스펙트럼을 측정한 결과, 1820-1660 cm-1의 영역에서 강한 흡수를 나타내는 카보닐기는 관측되지 않았으며, 3355 cm-1에서 OH기의 수소결합의 넓은 흡수를 나타내는 피크와, 1241 cm-1에서 C-O 피크가 관측되었다. 또한 3418 cm-1에서 NH에 해당하는 피크와 1455-1636 cm-1에서 방향족 고리의 특징적인 피크가 관측되었다(도 7 참조). YA1766p의 질량스펙트럼을 측정한 결과, YA1766p의 분자량이 241임을 알 수 있었고, 원소분석 결과로부터 화학식은 C₁₅H₁₅NO₂임을 알 수 있었다(도 8 참조). 수소핵자기공명스펙트럼 측정 결과, CH₃ 피크가 세 개, 방향족 고리 영역에서 CH 피크가 4개, 그리고 NH 및 OH로 예상되는 피크가 각각 한 개씩 관측되었다(도 9 참조). 탄소핵자기공명스펙트럼에서 총 15개의 피크가 관측되어 원소분석 및 질량분석 결과와 일치하는 C₁₅H₁₅NO₂ 의 화학식을 가지고 있음을 알 수 있었다(도 10 참조). 또한, COSY 분석(도 11 참조), HMQC 분석(도 12 참조). HMBC 분석 결과(도 13 참조), YA1766p이 하기 화학식 1의 구조임을 규명하였다.

[화학식 1]

상기 식에서, R₁ 및 R₄는 메틸 또는 하이드록시이고; R₂ 및 R₃ 는 메틸 또는 메톡시이다.

본 발명에 따른 신규의 미생물 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주는 캔디다 알비칸스(Candida albicans)의 이형전환(the yeast-to-hypha morphological transition) 및 병원성(virulence)에 관련된 신규 타겟인 CaMop2p 단백질의 활성을 저해하는 물질을 생산하며, 본 발명에서 분리 정제한 화학식 1의 화합물은 CaMob2p 단백질의 활성 및 캔디다 알비칸스의 이형전환을 저해하고 다양한 병원성 진균들에 대하여 항진균 활성을 가지므로 항진균제로서 유용하게 사용될 수 있다.

<110> Yuhan Corporation <120> Novel Streptomyces YA1766 and use of compounds produced therefrom <130> 0017 <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 942 <212> DNA <213> Candida albicans <400> 1 atgtcttttt taaatactat acgtggactt gggagagggt ccaagaagaa caagaaggat 60 ttagaaccgt caaataacgc catatattct cattcaaatc tatctggcaa tggtttgaga 120 cgaacacaat cacctaccaa gttttcccct tcaaaattat cttcaaaagg tgcacaaggc 180 tcagctgcat acacgtcttc tcctacaaag cgtagcagaa caggacaatc tttacaacac 240 caagatctgc aactgctgct tcaatatcaa caacagctgg gaagtgtact gccgctgaag 300 cgttcttcca tacagactac caaaagcaca actgtgaatg ctgatccgcc tttgttttta 360 tgtgaacctt atgtgaaaac tgctttggtc aagggatctt tcaagactat tgtccagctt 420 ccgaaatatg tggattattg tgaatggttg gcgttaaaca tctttgaact tttcaatcat 480 ttaaaccggt tctatggagt tatccaagaa tacgctactc ctgaagcata tccaacaatg 540 aatgcgggac caaacacaaa ctatttatgg gttaactctt ctggtcaagc tgttaactta 600 ccggcatgcc agtatattga gtatgttatt acctgggtca ccaacaagtt gaatgatcaa 660 agcgtattcc ctaccaagaa tggcggagca tttccaccca attttataaa agactgcaag 720 aacattagca gacaaatgtt tagaattttt gctcatatat accacaatca tttcgacaag 780 ataatccatt tatctttgga ggcacactgg aactcttttt tcgcccattt tatatctttt 840 gtcaaagagt tcaatttgat tgatagaact gaaatggaac cgttgttacc tttgatagag 900 aattttgaac aacaaggaaa aatcacccaa gcaagcaaat ag 942 <210> 2 <211> 313 <212> PRT <213> Candida albicans <400> 2 Met Ser Phe Leu Asn Thr Ile Arg Gly Leu Gly Arg Gly Ser Lys Lys 1 5 10 15 Asn Lys Lys Asp Leu Glu Pro Ser Asn Asn Ala Ile Tyr Ser His Ser 20 25 30 Asn Leu Ser Gly Asn Gly Leu Arg Arg Thr Gln Ser Pro Thr Lys Phe 35 40 45 Ser Pro Ser Lys Leu Ser Ser Lys Gly Ala Gln Gly Ser Ala Ala Tyr 50 55 60 Thr Ser Ser Pro Thr Lys Arg Ser Arg Thr Gly Gln Ser Leu Gln His 65 70 75 80 Gln Asp Leu Gln Leu Leu Leu Gln Tyr Gln Gln Gln Leu Gly Ser Val 85 90 95 Leu Pro Leu Lys Arg Ser Ser Ile Gln Thr Thr Lys Ser Thr Thr Val 100 105 110 Asn Ala Asp Pro Pro Leu Phe Leu Cys Glu Pro Tyr Val Lys Thr Ala 115 120 125 Leu Val Lys Gly Ser Phe Lys Thr Ile Val Gln Leu Pro Lys Tyr Val 130 135 140 Asp Tyr Cys Glu Trp Leu Ala Leu Asn Ile Phe Glu Leu Phe Asn His 145 150 155 160 Leu Asn Arg Phe Tyr Gly Val Ile Gln Glu Tyr Ala Thr Pro Glu Ala 165 170 175 Tyr Pro Thr Met Asn Ala Gly Pro Asn Thr Asn Tyr Leu Trp Val Asn 180 185 190 Ser Ser Gly Gln Ala Val Asn Leu Pro Ala Cys Gln Tyr Ile Glu Tyr 195 200 205 Val Ile Thr Trp Val Thr Asn Lys Leu Asn Asp Gln Ser Val Phe Pro 210 215 220 Thr Lys Asn Gly Gly Ala Phe Pro Pro Asn Phe Ile Lys Asp Cys Lys 225 230 235 240 Asn Ile Ser Arg Gln Met Phe Arg Ile Phe Ala His Ile Tyr His Asn 245 250 255 His Phe Asp Lys Ile Ile His Leu Ser Leu Glu Ala His Trp Asn Ser 260 265 270 Phe Phe Ala His Phe Ile Ser Phe Val Lys Glu Phe Asn Leu Ile Asp 275 280 285 Arg Thr Glu Met Glu Pro Leu Leu Pro Leu Ile Glu Asn Phe Glu Gln 290 295 300 Gln Gly Lys Ile Thr Gln Ala Ser Lys 305 310 <210> 3 <211> 912 <212> DNA <213> Streptomyces <400> 3 gtaaagagct ngtaggcggc ttgtcgcgtc ggatgtgaaa gcccggggct taaccccggg 60 tctgcattcg atacgggcag gctagagttc ggtaggggag atcggaattc ctggtgtagc 120 ggtgaaatgc gcagatatca ggaggaacac cggtggcgaa ggcggatctc tgggccgata 180 ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg 240 ccgtaaacgt tgggaactag gtgtgggcga cattccacgt cgtccgtgcc gcagctaacg 300 cattaagttc cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaagg aattgacggg 360 ggcccgcaca agcagcggag catgtggctt aattcgacgc aacgcgaaga accttaccaa 420 ggcttgacat acaccggaaa cggccagaga tggtcgcccc cttgtggtcg gtgtacaggt 480 ggtgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 540 aacccttgtc ctgtgttgcc agcatgccct tcggggtgat ggggactcac aggagactgc 600 cggggtcaac tcggaggaag gtggggacga cgtcaagtca tcatgcccct tatgtcttgg 660 gctgcacacg tgctacaatg gccggtacaa tgagctgcga tgccgtgagg tggagcgaat 720 ctcaaaaagc cggtctcagt tcggattggg gtctgcaact cgaccccatg aagttggagt 780 tgctagtaat cgcagatcag cattgctgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc 840 gcccgtcacg tcacgaaagt cggtaacacc cgaagccggt ggcccaaccc ttgtgaggag 900 cctcaagtga ac 912

Claims (4)

1. CaMob2p 단백질의 활성과 캔디다 알비칸스(Candida albicans)의 이형전환을 저해하는 물질을 생산하며, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 스트렙토마이세스 속 YA1766 균주(기탁번호: KACC 91142).
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