JPH01256388A - 固定化酵素剤 - Google Patents
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- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12Y—ENZYMES
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- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、Ｄ Ｆ Ａ ＩＩＩ （ｄｉ −Ｄ−ｆｒｕ
ｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｅ２’、／ ： ２，３’ ｄｉ
ａｎｈｙｄｒｉｄｅ （ジーＤ−フラクトフラノース
２’、／ ： ２．３’ジアンハイドライド）の製造に
有利に用いることができる固定化酵素剤に関する。
ｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｅ２’、／ ： ２，３’ ｄｉ
ａｎｈｙｄｒｉｄｅ （ジーＤ−フラクトフラノース
２’、／ ： ２．３’ジアンハイドライド）の製造に
有利に用いることができる固定化酵素剤に関する。
〔従来の技術および発明が解決しようとする問題点〕イ
ヌリンーＤ−フラクトトランスフェラーゼ（イヌリナー
ゼＩｆ）（以下、「ＦＴＦ」と略す。）はイヌリンより
ＤＦＡＩｎを生産する酵素である。
ヌリンーＤ−フラクトトランスフェラーゼ（イヌリナー
ゼＩｆ）（以下、「ＦＴＦ」と略す。）はイヌリンより
ＤＦＡＩｎを生産する酵素である。
ＤＦＡＩ［Ｉはフラクトース２分子がｌ−２／、２−３
′の間で脱水縮合した構造をもつコ糖類であり、ジャク
スらによりｌり３１年に単離同定されている（ Ｂｕｒ
、 ５ｔａｎｄ、 Ｊ、 Ｒｅｓ、３ 、２７ 、
／ ９２り〕。
′の間で脱水縮合した構造をもつコ糖類であり、ジャク
スらによりｌり３１年に単離同定されている（ Ｂｕｒ
、 ５ｔａｎｄ、 Ｊ、 Ｒｅｓ、３ 、２７ 、
／ ９２り〕。
ＤＦＡＩＩ［は、動物体内では代謝されず、非発酵性の
糖であるため低カロリー甘味剤として着目されており、
今後美容食等多方面に利用されることが予想される。
糖であるため低カロリー甘味剤として着目されており、
今後美容食等多方面に利用されることが予想される。
従来、ＦＴＰ生産菌としては、例えば、アルスロバクタ
・ウレアファシェンス（Ａｒｔｈｒｏｂａ −ｃｔｅｒ
ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ ） ７ ／ ／ ６（微工
研菌寄第１９６り号）、アルスロバクタ・グロビフォル
ミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒ
ｍｉｓ ） Ｃ／ ／−／（ＦＥＢＭＰ−ざ７グｇ）、
アルスロバクタ・アアウレッセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ａｕｒｅｓｃｅｎｓ ）ＩＦＯ／２１３＆
（内山ら、／’？７３年 ≠ざ回生化学会大会） 、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ｕｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ） Ａり≠り（合本ら
、日本農芸化学大会 ６２年ｐ、＆ｊ≠、６３年ｐ、／
／２）などが知られている。
・ウレアファシェンス（Ａｒｔｈｒｏｂａ −ｃｔｅｒ
ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ ） ７ ／ ／ ６（微工
研菌寄第１９６り号）、アルスロバクタ・グロビフォル
ミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒ
ｍｉｓ ） Ｃ／ ／−／（ＦＥＢＭＰ−ざ７グｇ）、
アルスロバクタ・アアウレッセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ａｕｒｅｓｃｅｎｓ ）ＩＦＯ／２１３＆
（内山ら、／’？７３年 ≠ざ回生化学会大会） 、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ｕｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ） Ａり≠り（合本ら
、日本農芸化学大会 ６２年ｐ、＆ｊ≠、６３年ｐ、／
／２）などが知られている。
また、さらに本発明者らは、先にアルスロバフタ・イリ
シス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ １ｌｉｃｉｓ ）
ＭＣＩ−２２７７（ＦＥＲＭＰ−７ｇ７３）によっても
ＦＴＰが生産されることを見出している（特願昭ａ３−
５：３７ｂ４− 号：自由ら、日本農芸化学大会６３年
ｐ、２り６）。
シス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ １ｌｉｃｉｓ ）
ＭＣＩ−２２７７（ＦＥＲＭＰ−７ｇ７３）によっても
ＦＴＰが生産されることを見出している（特願昭ａ３−
５：３７ｂ４− 号：自由ら、日本農芸化学大会６３年
ｐ、２り６）。
従来、この種の酵素を利用して酵素反応を行う場合、酵
素を水に溶解した状態で使用すると、反応終了後、工業
的に反応生成物を取得するためには、酵素を変性除去等
をせざるを得ない。
素を水に溶解した状態で使用すると、反応終了後、工業
的に反応生成物を取得するためには、酵素を変性除去等
をせざるを得ない。
従って、酵素が未だ活性を有していても、７回の反応毎
にこれを廃棄しなければならず、経済的に不利である。
にこれを廃棄しなければならず、経済的に不利である。
又、あえて酵素を回収しようとした場合、限外濾過膜等
による処理が必要となり、酵素の分離に多大の設備と時
間を要し、やはり経済的に不利でちる。
による処理が必要となり、酵素の分離に多大の設備と時
間を要し、やはり経済的に不利でちる。
本発明者らは、上記の如き欠点を克服し、工業的有利な
種々の方法について鋭意研究した結果、酵素を前もって
特定の陰イオン交換樹脂に担持した固定化酵素剤（固定
化ＦＴＦ剤）は再利用等経済的に有利に利用できるばか
りでなく、酵素吸着量、酵素活性あるいは酵素と担体と
の結合力などの点において優れており、且つ担持された
酵素の活性が非常に高くて安定であるという驚くべき現
象を見出し、本発明を完成するに至った。
種々の方法について鋭意研究した結果、酵素を前もって
特定の陰イオン交換樹脂に担持した固定化酵素剤（固定
化ＦＴＦ剤）は再利用等経済的に有利に利用できるばか
りでなく、酵素吸着量、酵素活性あるいは酵素と担体と
の結合力などの点において優れており、且つ担持された
酵素の活性が非常に高くて安定であるという驚くべき現
象を見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明の目的は、吸着酵素量が多く、且つ酵素活
性の高い固定化ＦＴＦ剤を提供することに存し、この目
的は本発明に従って、最頻度半径が７３−２００ＯＡの
細孔を有する陰イオン交換樹脂にＦＴＰを担持して成る
固定化酵素剤によって達成される。
性の高い固定化ＦＴＦ剤を提供することに存し、この目
的は本発明に従って、最頻度半径が７３−２００ＯＡの
細孔を有する陰イオン交換樹脂にＦＴＰを担持して成る
固定化酵素剤によって達成される。
次に、本発明の詳細な説明するに、本発明において前記
の陰イオン交換樹脂に担持される酵素ＦＴＰは、イヌリ
ンからＤＦＡＩ［Ｉを生成させ得るものであればいずれ
のものでも使用できる。
の陰イオン交換樹脂に担持される酵素ＦＴＰは、イヌリ
ンからＤＦＡＩ［Ｉを生成させ得るものであればいずれ
のものでも使用できる。
かかる酵素を生産する菌としては、例えば、アルスロバ
クタ・ウレアファシェンス（Ａｒｔｈｒｏ −ビフォル
ミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍ
ｉｓ ）、アルスロバクタ・アウレッセンス（Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃ −属に属する菌、シュードモナス・フルオ
レッセドモナス属に属する菌等種々のものが挙げられる
。具体的には、例えばアルスロバクタ・ウレア／／乙（
微工研菌寄第１りｔり号）、アルスロアルスロバクタ・
アウレッセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｕｒｅｓ
ｃｅｎｓ ） ＩＦＯ／ −２／ ｊ Ａ 、 アル
スロバクタ・イリシス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ
１ｌｉｃｉｓ ） ＭＣＩ −２２７７（ＦＥＲＭＰ−
タ♂り３）、シュードモナｃｅｎｓ ） Ａり≠り（合
本ら、日本農芸化学大会６２年ｐ、、４ｊ≠、６３年ｐ
、／／２）等が挙げられる。
クタ・ウレアファシェンス（Ａｒｔｈｒｏ −ビフォル
ミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍ
ｉｓ ）、アルスロバクタ・アウレッセンス（Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃ −属に属する菌、シュードモナス・フルオ
レッセドモナス属に属する菌等種々のものが挙げられる
。具体的には、例えばアルスロバクタ・ウレア／／乙（
微工研菌寄第１りｔり号）、アルスロアルスロバクタ・
アウレッセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｕｒｅｓ
ｃｅｎｓ ） ＩＦＯ／ −２／ ｊ Ａ 、 アル
スロバクタ・イリシス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ
１ｌｉｃｉｓ ） ＭＣＩ −２２７７（ＦＥＲＭＰ−
タ♂り３）、シュードモナｃｅｎｓ ） Ａり≠り（合
本ら、日本農芸化学大会６２年ｐ、、４ｊ≠、６３年ｐ
、／／２）等が挙げられる。
上記ＦＴＰ生産菌は、夫々常法に従い培養することがで
きる。そして培養液からＦＴＰを得るためには、培養液
中の菌体外に酵素が生産される場合は、遠心分離、フィ
ルタープレス等により菌体を分離除去すれば良く、又菌
体内に酵素が存在する場合は、上記菌体内から超音波処
理、加圧処理などの機械的方法または菌体の自己消化作
用を利用する方法（菌体自身が保有する細胞溶解酵素に
よって菌体を溶解する）などの公知の方法によりＦＴＰ
を得ることができる。
きる。そして培養液からＦＴＰを得るためには、培養液
中の菌体外に酵素が生産される場合は、遠心分離、フィ
ルタープレス等により菌体を分離除去すれば良く、又菌
体内に酵素が存在する場合は、上記菌体内から超音波処
理、加圧処理などの機械的方法または菌体の自己消化作
用を利用する方法（菌体自身が保有する細胞溶解酵素に
よって菌体を溶解する）などの公知の方法によりＦＴＰ
を得ることができる。
本発明において使用される陰イオン交換樹脂は、細孔の
最頻度半径が７５〜ｘｏｏｏＡであることが必要であり
、好ましくは７５ｒ〜１０００Ａの範囲のものである。
最頻度半径が７５〜ｘｏｏｏＡであることが必要であり
、好ましくは７５ｒ〜１０００Ａの範囲のものである。
更に本発明の陰イオン交換樹脂は、細孔半径が７ｊ〜３
０００Ａの細孔容積が０．／ｍｌ／？以上、特に０．３
〜２．！、１７？であり、また比表面積がｏ、ｔ、７，
２／を以上、特に／ ０〜／ ００ｍ”／？の多孔性の
ものがＦＴＰを良好に吸着し、担持させることができる
ので有利に使用できる。
０００Ａの細孔容積が０．／ｍｌ／？以上、特に０．３
〜２．！、１７？であり、また比表面積がｏ、ｔ、７，
２／を以上、特に／ ０〜／ ００ｍ”／？の多孔性の
ものがＦＴＰを良好に吸着し、担持させることができる
ので有利に使用できる。
なお、本発明のＦＴＦ剤の製造に使用される陰イオン交
換樹脂の物理的特性である比表面積および細孔容積は１
．３′θ℃でＩＯ時間数ｒａｎＨｙ下で真空乾燥した多
孔性陰イオン交換樹脂を試料とし、それぞれＢ、 Ｅ、
Ｔ法および水銀圧入法（マイクロメトリック社製オー
トポア２００で測定）により測定される。
換樹脂の物理的特性である比表面積および細孔容積は１
．３′θ℃でＩＯ時間数ｒａｎＨｙ下で真空乾燥した多
孔性陰イオン交換樹脂を試料とし、それぞれＢ、 Ｅ、
Ｔ法および水銀圧入法（マイクロメトリック社製オー
トポア２００で測定）により測定される。
本発明で使用する上記の多孔性陰イオン交換樹脂は公知
の各種方法により製造することができる。一般にイオン
交換樹脂の母体は、モノビニル学量体とポリビニル単量
体を共重合させることにより製造され、モノビニル単量
体としては、スチレンの如き芳香族モノビニル化合物、
アクリル酸又はメタクリル酸もしくはそのエステルの如
き脂肪族モノマー等が、またポリビニル単量体としては
ジビニルベンゼンの如き芳香族ジビニル化合物、エチレ
ングリコールジメタクリレートの如き脂肪族化合物等が
好適に使用されている。樹脂母体を多孔質にするには、
例えば前記モノマーの重合系に、溶媒による抽出除去が
可能で、且つ重合反応に関与しない材料、例えばポリス
チレンなどを共存させながら重合反応を行ない、反応終
了後、得られた樹脂を溶媒で処理してポリスチレンを抽
出除去することにより行なうことができる。
の各種方法により製造することができる。一般にイオン
交換樹脂の母体は、モノビニル学量体とポリビニル単量
体を共重合させることにより製造され、モノビニル単量
体としては、スチレンの如き芳香族モノビニル化合物、
アクリル酸又はメタクリル酸もしくはそのエステルの如
き脂肪族モノマー等が、またポリビニル単量体としては
ジビニルベンゼンの如き芳香族ジビニル化合物、エチレ
ングリコールジメタクリレートの如き脂肪族化合物等が
好適に使用されている。樹脂母体を多孔質にするには、
例えば前記モノマーの重合系に、溶媒による抽出除去が
可能で、且つ重合反応に関与しない材料、例えばポリス
チレンなどを共存させながら重合反応を行ない、反応終
了後、得られた樹脂を溶媒で処理してポリスチレンを抽
出除去することにより行なうことができる。
多孔性樹脂の比表面積、細孔の大きさ、半径７Ｊ−１以
上の細孔容積などに関する物理的特性は、樹脂の製造条
件を種々選択することにより変更することができる。物
理的諸特性と樹脂の製造条件との関係は一義的には定め
難いが、例えば上記樹脂の製造方法において、樹脂母体
原料としてスチレンとジビニルベンゼンヲ使用するとき
、ポリビニル単量体のジビニルベンゼンの量が多いほど
一般に多孔性の程度が犬となり、すなわち、比表面積、
細孔容積あるいは細孔の半径が大となる傾向が゛あシ、
またポリスチレン量を多くすると細孔容積あるいは細孔
径が犬となる傾向がある。
上の細孔容積などに関する物理的特性は、樹脂の製造条
件を種々選択することにより変更することができる。物
理的諸特性と樹脂の製造条件との関係は一義的には定め
難いが、例えば上記樹脂の製造方法において、樹脂母体
原料としてスチレンとジビニルベンゼンヲ使用するとき
、ポリビニル単量体のジビニルベンゼンの量が多いほど
一般に多孔性の程度が犬となり、すなわち、比表面積、
細孔容積あるいは細孔の半径が大となる傾向が゛あシ、
またポリスチレン量を多くすると細孔容積あるいは細孔
径が犬となる傾向がある。
陰イオン交換基の導入方法としては、樹脂母体にクロル
メチル基を導入した後、トリメチルアミン、ジメチルエ
タノールアミン、エチレンジアミン、ジエチレントリア
ミン、トリエチレンテトラミン等の脂肪族アミンあるい
はピロリジン、モルホリン、ピペリジン等の環状アミン
等の各種アミン、好ましくは脂肪族アミンで処理する方
法や、あらかじめ反応性の高い官能基をもつビニル単量
体、例えばグリシジル（メタ）アクリレートやビニルベ
ンジルグリシジルエーテル等を共重合体の成分として樹
脂母体を合成し、そのグリシジル基に塩基性下で各種ア
ミンを開環付加する方法などが適当であり、前記樹脂母
体の特性とこれらアミンの種類を選択することにより、
酵素を吸着した際に好適な活性を発揮せしめる陰イオン
交換樹脂とすることができる。
メチル基を導入した後、トリメチルアミン、ジメチルエ
タノールアミン、エチレンジアミン、ジエチレントリア
ミン、トリエチレンテトラミン等の脂肪族アミンあるい
はピロリジン、モルホリン、ピペリジン等の環状アミン
等の各種アミン、好ましくは脂肪族アミンで処理する方
法や、あらかじめ反応性の高い官能基をもつビニル単量
体、例えばグリシジル（メタ）アクリレートやビニルベ
ンジルグリシジルエーテル等を共重合体の成分として樹
脂母体を合成し、そのグリシジル基に塩基性下で各種ア
ミンを開環付加する方法などが適当であり、前記樹脂母
体の特性とこれらアミンの種類を選択することにより、
酵素を吸着した際に好適な活性を発揮せしめる陰イオン
交換樹脂とすることができる。
樹脂母体の架橋度も余り高くなると酵素の吸着率も十分
でなく、さらに吸着した酵素の活性も減少する傾向がみ
られるので、前記樹脂の細孔特性や陰イオン交換基の種
類等の要因と組み合わせて適当な値を選択することが好
ましい。
でなく、さらに吸着した酵素の活性も減少する傾向がみ
られるので、前記樹脂の細孔特性や陰イオン交換基の種
類等の要因と組み合わせて適当な値を選択することが好
ましい。
例えば樹脂がスチレンとジビニルベンゼン等の架橋性モ
ノマーとの共重合で製造される場合、架橋性モノマーの
使用量は通常ｊθモルチ以下、好ましくは、２３モルチ
以下である。
ノマーとの共重合で製造される場合、架橋性モノマーの
使用量は通常ｊθモルチ以下、好ましくは、２３モルチ
以下である。
なお、多孔性樹脂の基体としては、常法によって製造さ
れるポリ（メタ）アクリル酸を主体とするアクリル系の
ものも好適に使用される。
れるポリ（メタ）アクリル酸を主体とするアクリル系の
ものも好適に使用される。
本発明においては、上記の多孔性陰イオン交換樹脂とし
ては、通常２０−≠００メツシュ程度の粒径のものが使
用されるが、粒径が小さいほど活性発現率が若干向上す
る傾向がみられる。
ては、通常２０−≠００メツシュ程度の粒径のものが使
用されるが、粒径が小さいほど活性発現率が若干向上す
る傾向がみられる。
上記の陰イオン交換樹脂にＦＴＰを吸着させるには、イ
オン交換樹脂処理において一般に知られた種々の方法を
採用することができ、最も簡便には、培養液中から菌体
を除去したＦＴＰの水溶液にイオン交換樹脂を浸漬し、
必要に応じて攪拌し、適当な吸着時間の経過後、樹脂を
取り出して水洗すればよい。
オン交換樹脂処理において一般に知られた種々の方法を
採用することができ、最も簡便には、培養液中から菌体
を除去したＦＴＰの水溶液にイオン交換樹脂を浸漬し、
必要に応じて攪拌し、適当な吸着時間の経過後、樹脂を
取り出して水洗すればよい。
このとき、ＦＴＰ水溶液のｐＨ値は通常３．０〜／ ０
．０の範囲内であり、吸着温度はＯ〜４ｏ℃、吸着に要
する時間は／〜２０時間程度である。
．０の範囲内であり、吸着温度はＯ〜４ｏ℃、吸着に要
する時間は／〜２０時間程度である。
担体である上記の陰イオン交換樹脂は種々の塩形で用い
ることができ、例えば上記のイオン交換樹脂を硫酸、塩
酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸などの水溶液で処
理して、それぞれＨ３ＯＬＳＯ２−１Ｃ１−１０■（−
１ＨＰＯ−１ＰＯ：′−１ＣＨ３ＣＯＯ−などの塩形、
好ましくはＳＯ４，Ｃｌ−１ＯＨ−１ＰＯ４などの塩形
とすることにより有効に担体にＦＴＰを吸着させること
ができる。
ることができ、例えば上記のイオン交換樹脂を硫酸、塩
酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸などの水溶液で処
理して、それぞれＨ３ＯＬＳＯ２−１Ｃ１−１０■（−
１ＨＰＯ−１ＰＯ：′−１ＣＨ３ＣＯＯ−などの塩形、
好ましくはＳＯ４，Ｃｌ−１ＯＨ−１ＰＯ４などの塩形
とすることにより有効に担体にＦＴＰを吸着させること
ができる。
担体に対する酵素の吸着量としては、／ゴの樹脂（湿潤
状態で）当り０．０ｊ〜３０ｍ７の蛋白量が適当である
が、好ましくはθ、／〜１０７ｎ９が適当である。
状態で）当り０．０ｊ〜３０ｍ７の蛋白量が適当である
が、好ましくはθ、／〜１０７ｎ９が適当である。
なお、本発明におけるＦＴＰの上記陰イオン交換樹脂へ
の吸着およびＦＴＰの活性発現の作用機構の詳細につい
ては未だ明らかではないが、樹脂の細孔における物理的
吸着および陰イオン交換基とＦＴＰとの何らかの化学的
結合力が相乗的に関与しているものと推察される。この
ことは、比表面積および半径７ｊＡ以上の細孔容積の小
さい通常のゲル状イオン交換樹脂はＦＴＰをほとんど吸
着せず、一方、比表面積および半径７ｊＡ以上の細孔容
積の値が大きい多孔性樹脂でも、陰イオン交換基を導入
していない樹脂は同様にＦＴＰ吸着量が少なく、ＦＴＰ
の活性も低いことからも推認される。
の吸着およびＦＴＰの活性発現の作用機構の詳細につい
ては未だ明らかではないが、樹脂の細孔における物理的
吸着および陰イオン交換基とＦＴＰとの何らかの化学的
結合力が相乗的に関与しているものと推察される。この
ことは、比表面積および半径７ｊＡ以上の細孔容積の小
さい通常のゲル状イオン交換樹脂はＦＴＰをほとんど吸
着せず、一方、比表面積および半径７ｊＡ以上の細孔容
積の値が大きい多孔性樹脂でも、陰イオン交換基を導入
していない樹脂は同様にＦＴＰ吸着量が少なく、ＦＴＰ
の活性も低いことからも推認される。
本発明において使用される陰イオン交換樹脂は水溶液中
で膨潤して、乾燥状態よりもさらに巨大な網目構造を形
成すると考えられるが、乾燥状態において細孔半径が大
きく、その細孔容積が大きいものは、ＦＴＰ吸着率およ
び活性発現率が良好である。
で膨潤して、乾燥状態よりもさらに巨大な網目構造を形
成すると考えられるが、乾燥状態において細孔半径が大
きく、その細孔容積が大きいものは、ＦＴＰ吸着率およ
び活性発現率が良好である。
かくして得られた不溶化ＦＴＦ剤は高いＦＴＦ活性を保
持する。また、本発明の固定化ＦＴＦ剤は長時間に亘る
使用にも活性の低下が少なく、反応中、酵素が担体から
溶離することもないので、工業的有利に反応を行なうこ
とが可能である。工業的に固定化ＦＴＦ剤を使用する場
合は、充填塔及び攪拌槽等のいずれの形式の反応器にお
いても利用できる。
持する。また、本発明の固定化ＦＴＦ剤は長時間に亘る
使用にも活性の低下が少なく、反応中、酵素が担体から
溶離することもないので、工業的有利に反応を行なうこ
とが可能である。工業的に固定化ＦＴＦ剤を使用する場
合は、充填塔及び攪拌槽等のいずれの形式の反応器にお
いても利用できる。
さらに、本発明の固定化ＦＴＦ剤の利点の一つは、長期
間使用後の活性が低下したＦＴＦ剤を塩化ナトリウムあ
るいは塩化カリウムなどの水溶液で処理することにより
、ＦＴＰが容易に溶離するので簡単に再生することがで
きるということである。
間使用後の活性が低下したＦＴＦ剤を塩化ナトリウムあ
るいは塩化カリウムなどの水溶液で処理することにより
、ＦＴＰが容易に溶離するので簡単に再生することがで
きるということである。
再生後、ＦＴＰが溶離した樹脂は再び新しいＦＴＰを吸
着担持させることにより、活性の高い固定化ＦＴＦ剤と
して使用することができる。
着担持させることにより、活性の高い固定化ＦＴＦ剤と
して使用することができる。
次に、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが
、本発明はその要旨を超えない限り、下記実施例によっ
て限定されるものではない。
、本発明はその要旨を超えない限り、下記実施例によっ
て限定されるものではない。
実施例／
下記組成の培地３００ｍ１の入った！を坂ロフシ
ラスコを用いて、アルスロバクタ・イリｌスＭＣＩ ２
２り７号菌（ＦＥＲＭＰ−タｇり３） を３０℃で２≠
時間培養した。
２り７号菌（ＦＥＲＭＰ−タｇり３） を３０℃で２≠
時間培養した。
培地：イヌリン ｔｏｙ硝酸ナトリウム
２デ 硫酸マグネシウム＠７水塩 ０．ｊ？塩化カジカリウ
ム ＯｏＳ ｔ リン酸二水素カリウム ｏ、ｓ ｙ塩化鉄（■）
ｏ、ｏｏｉｔ酵母エキス
０．２１ 水 ／ を培養後、
遠心分離により除菌し、ＦＴＰ（酵素液）を得た（この
時の酵素液の活性は２／Ｕ）。
２デ 硫酸マグネシウム＠７水塩 ０．ｊ？塩化カジカリウ
ム ＯｏＳ ｔ リン酸二水素カリウム ｏ、ｓ ｙ塩化鉄（■）
ｏ、ｏｏｉｔ酵母エキス
０．２１ 水 ／ を培養後、
遠心分離により除菌し、ＦＴＰ（酵素液）を得た（この
時の酵素液の活性は２／Ｕ）。
次いでこの酵素液／ｊＯ，ｌを採取し、これを第１表に
示す物性を有するイオン交換樹脂／ Ｔｔｌ（湿潤状態
）に添加し、３０℃で７０時間振盪攪拌し、酵素を樹脂
に吸着させて、固定化ＦＴＦ剤を得た。
示す物性を有するイオン交換樹脂／ Ｔｔｌ（湿潤状態
）に添加し、３０℃で７０時間振盪攪拌し、酵素を樹脂
に吸着させて、固定化ＦＴＦ剤を得た。
次に得られた固定化ＦＴＦ剤を水洗後反応液（ｌＯ％イ
ヌリン／ ０．Ｏｊ Ｍ ＰＨ乙、Ｏリン酸緩衝液）
１０．、ｌで２回洗浄後、１００ｍ１の反応液を加え、
３０℃で１時間振盪攪拌して反応させた。
ヌリン／ ０．Ｏｊ Ｍ ＰＨ乙、Ｏリン酸緩衝液）
１０．、ｌで２回洗浄後、１００ｍ１の反応液を加え、
３０℃で１時間振盪攪拌して反応させた。
固定化ＦＴＦ剤の活性を第１表に示す（高速液クロで測
定）。第１表に示す様に１反応液中に３．λり２のＤＦ
ＡＩＩＩが生産されていた。
定）。第１表に示す様に１反応液中に３．λり２のＤＦ
ＡＩＩＩが生産されていた。
次に新しい反応液１０ｍ１で２回洗浄後、再び新しい反
応液１００ｍ１を加えて同様に１時間反応させたところ
、液中に３．０ ／ ｔのＤＦＡＩ［Ｉが生産されてい
た。同様に３回目の反応を行なったところ、３．００９
のＤＦＡＩＩＩが生産されていた。
応液１００ｍ１を加えて同様に１時間反応させたところ
、液中に３．０ ／ ｔのＤＦＡＩ［Ｉが生産されてい
た。同様に３回目の反応を行なったところ、３．００９
のＤＦＡＩＩＩが生産されていた。
なお、これらの酵素活性、及び反応における分析は以下
の方法に従った。
の方法に従った。
■ 酵素液の活性力価
ｏ、ｏ ｊＭ ｐＨ６，０リン酸緩衝液りＯｍｌに１
０ｆのイヌリンを溶解させ、溶解後１００ｍｅとしたイ
ヌリン溶液−Ｚ ｍｌに酵素液／ ｒｕｇを加え、７時
間３０℃で振盪反応させた。反応後メタノールを３ ｍ
ｌ加えた抜水を加えて３０．１としたのち、生成したＤ
ＦＡＩ［ｌを高速液体クロマトグラフィーにより分析し
た。酵素活性力価／’［Ｊは酵素液を当り、７時間当り
のＤＦＡｎｔを７１生産するものとした。
０ｆのイヌリンを溶解させ、溶解後１００ｍｅとしたイ
ヌリン溶液−Ｚ ｍｌに酵素液／ ｒｕｇを加え、７時
間３０℃で振盪反応させた。反応後メタノールを３ ｍ
ｌ加えた抜水を加えて３０．１としたのち、生成したＤ
ＦＡＩ［ｌを高速液体クロマトグラフィーにより分析し
た。酵素活性力価／’［Ｊは酵素液を当り、７時間当り
のＤＦＡｎｔを７１生産するものとした。
■ 生成されたＤＦＡＩ［Ｉの分析
分析は高速液体クロマトグラフィーにより行った。
カ ラ ム：三菱化成製ＣＫＯざＳ
溶離液：水
溶出速度：１ｍ６７分
検 出：示差屈折計
実施例２〜り及び比較例／〜ｊ
第１表に示す様に、樹脂の種類及びイオン型を替える以
外は、実施例１に記載したと同様に吸着させて固定化Ｆ
ＴＦ剤を得た。
外は、実施例１に記載したと同様に吸着させて固定化Ｆ
ＴＦ剤を得た。
得られた固定化ＦＴＦ剤の活性を第１表に示す。
実施例１０
使用する菌株をアルスロバクタ・アラレノセンスＩＦＯ
／２／３１．に変えた以外は実施例／と同様にして酵素
を吸着させて、固定化ＦＴＦ剤を得た。得られた固定化
ＦＴＦ剤の活性を第２表に示す（この時の酵素液の活性
は７．Ｆ Ｕ ）。
／２／３１．に変えた以外は実施例／と同様にして酵素
を吸着させて、固定化ＦＴＦ剤を得た。得られた固定化
ＦＴＦ剤の活性を第２表に示す（この時の酵素液の活性
は７．Ｆ Ｕ ）。
実施例／ｌ及び比較例６
下記第１表に示す表に、樹脂の種類及びイオン交換基を
変える以外は実施例ＩＯと同様に吸着させて固定化Ｆ’
ＴＦ剤を得た。
変える以外は実施例ＩＯと同様に吸着させて固定化Ｆ’
ＴＦ剤を得た。
得られた固定化ＦＴＦ剤の活性を第２表に示す。
本発明の固定化酵素剤によれば、担持された酵素がその
活性を十分に発現することがらＤＦＡｍの生産能が高く
、また繰り返して使用することができるので、工業的に
有利である。
活性を十分に発現することがらＤＦＡｍの生産能が高く
、また繰り返して使用することができるので、工業的に
有利である。
出 願 人 三菱化成工業株式会社
代 理 人 弁理士 長谷用 −ほか１名
手続主甫正書（自発）
昭和６３年５月、？／日
１ 事件の表示
昭和６３年特許願第８４８３３号
２ 発明の名称
固定化酵素剤
３ 補正をする者
Claims (1)
- （１）最頻度半径が７５〜２０００Åの細孔を有する陰
イオン交換樹脂にイヌリン−Ｄ−フラクトトランスフェ
ラーゼを担持して成る固定化酵素剤。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63084833A JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
| US07/330,694 US5094948A (en) | 1988-04-06 | 1989-03-30 | Immobilized ftf enzymes |
| EP89105903A EP0336376B1 (en) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobilized FTF enzymes |
| DE68916301T DE68916301T2 (de) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobilisierte FTF Enzyme. |
| DK162289A DK162289A (da) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobiliserede enzymer |
| CA000595812A CA1315724C (en) | 1988-04-06 | 1989-04-05 | Immobilized ftf enzymes |
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63084833A JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01256388A true JPH01256388A (ja) | 1989-10-12 |
| JPH0746990B2 JPH0746990B2 (ja) | 1995-05-24 |
Family
ID=13841782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63084833A Expired - Lifetime JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
Country Status (7)
| Country | Link |
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| EP (1) | EP0336376B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0746990B2 (ja) |
| KR (1) | KR890016168A (ja) |
| CA (1) | CA1315724C (ja) |
| DE (1) | DE68916301T2 (ja) |
| DK (1) | DK162289A (ja) |
Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
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| JPS5736986A (en) * | 1980-08-13 | 1982-02-27 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Immobilized aminoacylase agent and its preparation |
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-
1988
- 1988-04-06 JP JP63084833A patent/JPH0746990B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
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- 1989-04-04 EP EP89105903A patent/EP0336376B1/en not_active Expired - Lifetime
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- 1989-04-04 DK DK162289A patent/DK162289A/da not_active Application Discontinuation
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- 1989-04-06 KR KR1019890004511A patent/KR890016168A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
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| JPH0746990B2 (ja) | 1995-05-24 |
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| DE68916301T2 (de) | 1995-01-26 |
| DK162289A (da) | 1989-10-07 |
| EP0336376B1 (en) | 1994-06-22 |
| EP0336376A2 (en) | 1989-10-11 |
| KR890016168A (ko) | 1989-11-28 |
| DE68916301D1 (de) | 1994-07-28 |
| US5094948A (en) | 1992-03-10 |
| CA1315724C (en) | 1993-04-06 |
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|---|---|---|---|
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