JPS6030683A - 酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法 - Google Patents
酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法Info
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- JPS6030683A JPS6030683A JP58138774A JP13877483A JPS6030683A JP S6030683 A JPS6030683 A JP S6030683A JP 58138774 A JP58138774 A JP 58138774A JP 13877483 A JP13877483 A JP 13877483A JP S6030683 A JPS6030683 A JP S6030683A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生
法に関する。本発明の酵素固定樹脂組成物岐巨大網目構
造を有し、窒素を有するイオン交換基が活性水素を有し
ないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性イオン交換樹
脂のマクロポア内に多価アルデヒドでお互いに架橋され
た酵素を包含してなることを特徴とする。
法に関する。本発明の酵素固定樹脂組成物岐巨大網目構
造を有し、窒素を有するイオン交換基が活性水素を有し
ないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性イオン交換樹
脂のマクロポア内に多価アルデヒドでお互いに架橋され
た酵素を包含してなることを特徴とする。
従来吸着法による固定化酵素の製造に際してはマクロ多
孔型又は巨大網目構造の陰又は陽イオン交換樹脂が用い
られているが次のごとき問題点がある。
孔型又は巨大網目構造の陰又は陽イオン交換樹脂が用い
られているが次のごとき問題点がある。
例えばポリフェノール系の弱塩基性陰イオン交換樹脂で
あるデュオライ）Ａ７を用いる方法（％開昭４９−８０
１６０）では吸着が強いので溶出し難く再生が困難であ
る。このためさらに親水性基を導入して疎水性に基づく
吸着を弱める工夫がされているが（％開昭５３−８５８
９０）十分でない。
あるデュオライ）Ａ７を用いる方法（％開昭４９−８０
１６０）では吸着が強いので溶出し難く再生が困難であ
る。このためさらに親水性基を導入して疎水性に基づく
吸着を弱める工夫がされているが（％開昭５３−８５８
９０）十分でない。
一方、スチレン−ジビニルベンゼン系の弱塩基性陰イオ
ン交換樹脂であるアンバーライトＩＲＡ−９０４などを
用いる方法（特開昭５゜−５３５８４）では一般に酵素
の吸着がゆるく使用中に徐々に離脱し、又多糖類の優先
吸着が生ずる（特開昭５４−１４７９９２）。
ン交換樹脂であるアンバーライトＩＲＡ−９０４などを
用いる方法（特開昭５゜−５３５８４）では一般に酵素
の吸着がゆるく使用中に徐々に離脱し、又多糖類の優先
吸着が生ずる（特開昭５４−１４７９９２）。
又固定化酵素を用いる連続反応では反応槽での雑菌汚染
が問題となることが多く、この対策として高基質濃度、
中高温度の条件設定が行われる。しかしこの措置は同時
に樹脂の劣化（例えば不可逆的に吸着した多糖類等によ
る基質と酵素との接触の妨害等）をもたらすことが多い
。
が問題となることが多く、この対策として高基質濃度、
中高温度の条件設定が行われる。しかしこの措置は同時
に樹脂の劣化（例えば不可逆的に吸着した多糖類等によ
る基質と酵素との接触の妨害等）をもたらすことが多い
。
上記事情にかんがみ本発明者らは樹脂の劣化が少なく、
可逆的吸着の容易なスチレン−ジビニルベンゼン系の塩
基性陰イオン交換樹脂を選び、吸着の弱い欠点を多価ア
ルデヒドによる架橋でカバーすることによシ高基質濃度
、中高温での連続使用に耐え、かつ再生使用の可能な酵
素固定樹脂組成物を得ることができることを見い出し本
発明を完成した。多価アルデヒドは酵素中の官能基、特
にアミノ基と化学結合することによシ酵素を架橋する。
可逆的吸着の容易なスチレン−ジビニルベンゼン系の塩
基性陰イオン交換樹脂を選び、吸着の弱い欠点を多価ア
ルデヒドによる架橋でカバーすることによシ高基質濃度
、中高温での連続使用に耐え、かつ再生使用の可能な酵
素固定樹脂組成物を得ることができることを見い出し本
発明を完成した。多価アルデヒドは酵素中の官能基、特
にアミノ基と化学結合することによシ酵素を架橋する。
この観点から、樹脂中の窒素を有する官能基は活性水素
を有しないことが必要である。
を有しないことが必要である。
次に本発明をさらに詳しく説明する。
巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基が活性
水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性陰
イオン交換樹脂としてはアイマックＡ２０８．Ａ２０Ｒ
（デュオライトインターナショナル社（フランス）社の
商品名入デュオライトＡ３７８．Ａ３６９．Ａ３６８［
ダイヤモンドジャムロック社（アメリカ）社の商品名〕
、ＨＰＡ７５．ＨＰＡ２５ （三菱化成工業■の商品名
〕等が使用される。
水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性陰
イオン交換樹脂としてはアイマックＡ２０８．Ａ２０Ｒ
（デュオライトインターナショナル社（フランス）社の
商品名入デュオライトＡ３７８．Ａ３６９．Ａ３６８［
ダイヤモンドジャムロック社（アメリカ）社の商品名〕
、ＨＰＡ７５．ＨＰＡ２５ （三菱化成工業■の商品名
〕等が使用される。
多価アルデヒドとしては特に限定はないが、炭素数２〜
１０の飽和脂肪族ジアルデヒドが好適に用いられる。例
えばグリオキサール、マロンアルデヒド、スクシンアル
デヒド、グルタルアルデヒド、アジボアルデヒド等であ
る。
１０の飽和脂肪族ジアルデヒドが好適に用いられる。例
えばグリオキサール、マロンアルデヒド、スクシンアル
デヒド、グルタルアルデヒド、アジボアルデヒド等であ
る。
本発明で使用する酵素としては特に限定はなく、酸化還
元酵素、転移酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラ
ーゼ、リガーゼなどがあげられる。特にグルコースイソ
メラーゼ、グルコアミラーゼ、フマラーゼ、アスパルタ
ーゼ、リパーゼ、インベルターゼ、グロテアーゼ、ウレ
アーゼ、アミノ酸オキシダーゼ等が好適である。
元酵素、転移酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラ
ーゼ、リガーゼなどがあげられる。特にグルコースイソ
メラーゼ、グルコアミラーゼ、フマラーゼ、アスパルタ
ーゼ、リパーゼ、インベルターゼ、グロテアーゼ、ウレ
アーゼ、アミノ酸オキシダーゼ等が好適である。
次に本発明の酵素固定樹脂組成物の製造について述べる
。本酵素固定樹脂組成物は巨大網目構造を有し、窒素を
有するイオン交換基が活性水素を有りないスチレン−ジ
ビニルベンゼン系塩基性陰イオン交換樹脂を酵素含有液
に接触させて該樹脂に酵素を吸着させ、ついで該樹脂を
該酵素の基質溶液に接触させ、さらに該樹脂を多価アル
デヒド溶液に接触させることにより得ることができる。
。本酵素固定樹脂組成物は巨大網目構造を有し、窒素を
有するイオン交換基が活性水素を有りないスチレン−ジ
ビニルベンゼン系塩基性陰イオン交換樹脂を酵素含有液
に接触させて該樹脂に酵素を吸着させ、ついで該樹脂を
該酵素の基質溶液に接触させ、さらに該樹脂を多価アル
デヒド溶液に接触させることにより得ることができる。
酵素含有液としては菌体破砕液もしくけそのろ液、Ｆ液
の硫安沈殿、溶媒沈殿によシ得た粗酵素の水又は緩衝液
溶液、Ｊ［溶液をさらに透析したもの、精製酵素溶液な
どが用いられる。
の硫安沈殿、溶媒沈殿によシ得た粗酵素の水又は緩衝液
溶液、Ｊ［溶液をさらに透析したもの、精製酵素溶液な
どが用いられる。
酵素溶液の濃度は蛋白として０．０１〜２００ｍｙ／ｌ
の範囲が適尚である。
の範囲が適尚である。
樹脂の使用量は吸着させる酵素量として規定でき、通常
ｏ、 ｉ〜１００ｍｇ／ｄ樹脂の範囲が適当である。
ｏ、 ｉ〜１００ｍｇ／ｄ樹脂の範囲が適当である。
酵素の吸着は通常バッチ式で攪拌下０〜４０℃で３０分
〜７２時間行う。カラムに樹脂を充填して酵素溶液を通
塔して吸着させてもよい。
〜７２時間行う。カラムに樹脂を充填して酵素溶液を通
塔して吸着させてもよい。
ｐＨは酵素の安定ｐＨ域で行うが、ｐ Ｈ調整は緩衝液
によるのが好ましい。
によるのが好ましい。
ついで固液分離するか又はすることなく樹脂を該酵素の
基質溶液と接触させる。これは基質と活性中心とを一時
的に結合させて後の多価アルデヒド処理において活性中
心が影響を受けることを予防するためである。接触の方
式は酵素の吸着と同様バッチ式でもカラム式でもよい。
基質溶液と接触させる。これは基質と活性中心とを一時
的に結合させて後の多価アルデヒド処理において活性中
心が影響を受けることを予防するためである。接触の方
式は酵素の吸着と同様バッチ式でもカラム式でもよい。
基質としては各酵素の基質を用いればよく、例えばフマ
ラーゼではフマル酸、リンゴ酸、これらのナトリウム、
アンモニウム、カリウム塩等、グルブースイソメラーゼ
ではグルコース、７ラクトース等、グルコアミラーゼで
は可溶性殿粉、マルトース、グルコース、マル））ＩＪ
、ｔ −−Ｘ等力用いられる。基質溶液としては基質
の水溶液、緩衝溶液等を使用する。
ラーゼではフマル酸、リンゴ酸、これらのナトリウム、
アンモニウム、カリウム塩等、グルブースイソメラーゼ
ではグルコース、７ラクトース等、グルコアミラーゼで
は可溶性殿粉、マルトース、グルコース、マル））ＩＪ
、ｔ −−Ｘ等力用いられる。基質溶液としては基質
の水溶液、緩衝溶液等を使用する。
接触時の基質濃度は０．１ｍＭ〜１．０Ｍとし、基質が
電解質である場合はそれによる酵素の脱着を防ぐため０
．２Ｍ以下とするのが好ましい。
電解質である場合はそれによる酵素の脱着を防ぐため０
．２Ｍ以下とするのが好ましい。
基質の使用量は多価アルデヒドと競争して活性中心を保
護する目的に照らして多価アルデヒドを基準にその１０
〜１ｏｏｏ倍モル程度とするのが適邑である。
護する目的に照らして多価アルデヒドを基準にその１０
〜１ｏｏｏ倍モル程度とするのが適邑である。
処理温度、ｐＨは酵素の吸着の場合と同様でよく、時間
は基質および多価アルデヒドの量によ！７１０分〜１０
時間程度変わりうるが通常３０〜６０分である。
は基質および多価アルデヒドの量によ！７１０分〜１０
時間程度変わりうるが通常３０〜６０分である。
次に固液分離することなく混合物を多価アルデヒド溶液
と接触させる。接触方式は基質処理の場合と同様でよい
。多価アルデヒド溶液としては通常多価アルデヒドの水
溶液、水に難溶性の場合はメタノール、エタノール溶液
等を用い、接触時の濃度は１〜１００ｍＭとするのが適
当である。多価アルデヒドの使用量は酵素に対して酵素
蛋白１ ｍｇ当＃）０．００１ｍＭ〜１ｍＭの範囲で用
いる。
と接触させる。接触方式は基質処理の場合と同様でよい
。多価アルデヒド溶液としては通常多価アルデヒドの水
溶液、水に難溶性の場合はメタノール、エタノール溶液
等を用い、接触時の濃度は１〜１００ｍＭとするのが適
当である。多価アルデヒドの使用量は酵素に対して酵素
蛋白１ ｍｇ当＃）０．００１ｍＭ〜１ｍＭの範囲で用
いる。
多価アルデヒド処理は通常０〜４０℃で１分〜４８時間
行う。又ｐＨは緩衝液等を用いて酵素の安定領域で一定
にコントロールするのが好ましい。
行う。又ｐＨは緩衝液等を用いて酵素の安定領域で一定
にコントロールするのが好ましい。
多価アルデヒド処理後、緩衝液又は水、メタノール、エ
タノール等にて洗浄して未反応の多価アルデヒド、未反
応の蛋白等を除き酵素固定樹脂組成物を得る。
タノール等にて洗浄して未反応の多価アルデヒド、未反
応の蛋白等を除き酵素固定樹脂組成物を得る。
本酵素固定樹脂組成物は活性発現が良好で副反応を実際
上伴わない。また耐熱性の向上が認められ、例えば４０
〜７０℃での長期連続使用でも活性を維持し得る。
上伴わない。また耐熱性の向上が認められ、例えば４０
〜７０℃での長期連続使用でも活性を維持し得る。
又一定期間使用し劣化した酵素固定樹脂組成物を０．２
〜５Ｍの塩を含有する鉱酸水溶液に接触させることによ
ｐ１多価アルデヒドによる架橋を切り離し酵素を脱着し
て樹脂を再生することができる。
〜５Ｍの塩を含有する鉱酸水溶液に接触させることによ
ｐ１多価アルデヒドによる架橋を切り離し酵素を脱着し
て樹脂を再生することができる。
塩としては強酸の強アルカリ塩もしくは弱アルカリ塩、
特に強アルカリ塩が好ましい。例えば硫酸、塩酸、す／
酸等のアルカリ金属塩（塩化ナトリウム、硫酸ナトリウ
ム等）、アルカリ土金属塩（塩化カルシウム等）、アン
モニウム塩（塩化アンモニウム等）が用いられる０鉱酸
としては硫酸、塩酸、リン酸等が用いられる０ 接触の態様としてはバッチ式で攪拌する、カラムに充填
した樹脂組成物に再生液を通塔する等が適用される。
特に強アルカリ塩が好ましい。例えば硫酸、塩酸、す／
酸等のアルカリ金属塩（塩化ナトリウム、硫酸ナトリウ
ム等）、アルカリ土金属塩（塩化カルシウム等）、アン
モニウム塩（塩化アンモニウム等）が用いられる０鉱酸
としては硫酸、塩酸、リン酸等が用いられる０ 接触の態様としてはバッチ式で攪拌する、カラムに充填
した樹脂組成物に再生液を通塔する等が適用される。
接触時の操作条件は鉱酸濃度０，５〜６規定、４０〜９
５℃が適当である。
５℃が適当である。
再生樹脂に再び前記と同様の酵素固定化操作を施すこと
により酵素固定樹脂組成物を得ることができ、このもの
の活性、特性は新樹脂使用の場合とはは同様の水準を維
持している。
により酵素固定樹脂組成物を得ることができ、このもの
の活性、特性は新樹脂使用の場合とはは同様の水準を維
持している。
さらに２回、３回の再生、再使用についても同様の特性
を維持できる。
を維持できる。
担体の再生、再使用については電解質塩水溶液処理及び
酸処理による方法があるが（特開昭５ｌ−７０８７１）
、架橋を切りて再生するには塩含有鉱酸水溶液によるこ
とを要し、本発明の再生方法は上記特開昭の方法とは根
本的に相違する。
酸処理による方法があるが（特開昭５ｌ−７０８７１）
、架橋を切りて再生するには塩含有鉱酸水溶液によるこ
とを要し、本発明の再生方法は上記特開昭の方法とは根
本的に相違する。
以下実施例をもって本発明を説明する。
実施例１゜
グルコース１０％、リン酸−カリウム０，５チ、尿素０
．６チ、硫酸マグネシウム（７水塩）０．０５チ、ペプ
トン２ｑ６、肉エキス０．０５％、ビオチン５０γ／ｌ
を含む培地３００ｄを２００ Ｑ＠／容三角フラスコに
入れ７マラーゼ産生菌コリネバクテリウムグルタミカム
ＡＴＣＣ２１５１３を接種して培養温度３０℃で４８時
時間表り培養を行う。培養液から菌体を集菌、洗浄し、
凍結乾燥後９Ｉｉの菌体を得る。菌体を５ｏｙ７ｔの濃
度に０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）Ｋ分散し、
超音波処理を行う０ 担体としては、本発明にかかる担体としてアイマックＡ
２０８（デュオライト・インターナショナル社フランス
）、対照としてデュオライトＡ６（ダイヤモンドジャム
ロック社アメリカ）を用いる。いずれの担体についても
レジン水にて充分洗浄後、０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液
（ｐＨ６，０）で緩衝化する０次に上記で調製した粗酵
素懸濁液を活性値として２００Ｕ／Ｍｌ樹脂の割合で室
温にて１６時間接触させる。蛋白の吸着量はいずれも９
０チ以上である。その後、酵素の安定化剤として０．１
Ｍフマール酸ナナトリウム水溶液樹脂と同量加える。上
清液を抜き取った後樹脂と同量の０．２４グルタルアル
デヒド水溶液を樹脂に加え室温３０分間反応させる。
．６チ、硫酸マグネシウム（７水塩）０．０５チ、ペプ
トン２ｑ６、肉エキス０．０５％、ビオチン５０γ／ｌ
を含む培地３００ｄを２００ Ｑ＠／容三角フラスコに
入れ７マラーゼ産生菌コリネバクテリウムグルタミカム
ＡＴＣＣ２１５１３を接種して培養温度３０℃で４８時
時間表り培養を行う。培養液から菌体を集菌、洗浄し、
凍結乾燥後９Ｉｉの菌体を得る。菌体を５ｏｙ７ｔの濃
度に０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）Ｋ分散し、
超音波処理を行う０ 担体としては、本発明にかかる担体としてアイマックＡ
２０８（デュオライト・インターナショナル社フランス
）、対照としてデュオライトＡ６（ダイヤモンドジャム
ロック社アメリカ）を用いる。いずれの担体についても
レジン水にて充分洗浄後、０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液
（ｐＨ６，０）で緩衝化する０次に上記で調製した粗酵
素懸濁液を活性値として２００Ｕ／Ｍｌ樹脂の割合で室
温にて１６時間接触させる。蛋白の吸着量はいずれも９
０チ以上である。その後、酵素の安定化剤として０．１
Ｍフマール酸ナナトリウム水溶液樹脂と同量加える。上
清液を抜き取った後樹脂と同量の０．２４グルタルアル
デヒド水溶液を樹脂に加え室温３０分間反応させる。
樹脂を十分洗浄後固定化酵素担体Ａ（アイマックＡ２０
８）、Ｂ（デュオライトＡ６）を得る。
８）、Ｂ（デュオライトＡ６）を得る。
この固定化酵素を１０ｍ容量のジャケット付カラムに充
填し５０℃流速８Ｖ＝０．３で１Ｍ７マール酸ナトリウ
ム水溶液を通塔する。担体Ａで約８０％、担体Ｂで約７
８チのリンゴ酸への転換率が２０日間にわたって得られ
、連続生産が可能である。
填し５０℃流速８Ｖ＝０．３で１Ｍ７マール酸ナトリウ
ム水溶液を通塔する。担体Ａで約８０％、担体Ｂで約７
８チのリンゴ酸への転換率が２０日間にわたって得られ
、連続生産が可能である。
実施例２゜
実施例１の担体を更に１次月運転を続けると転換率は担
体Ａで約７８％、同Ｂで約７５チに低下するが、雑菌の
汚染は全くない。更に、樹脂をカラムよシ抜き取ｊ）
０．５ Ｍの塩化ナトリウムを含む０．５Ｎ硫酸を加え
７０℃に加熱し、２時間保持する。樹脂をレジン水で洗
浄後、再び実施例１と同じ方法で酵素固定化を試みる。
体Ａで約７８％、同Ｂで約７５チに低下するが、雑菌の
汚染は全くない。更に、樹脂をカラムよシ抜き取ｊ）
０．５ Ｍの塩化ナトリウムを含む０．５Ｎ硫酸を加え
７０℃に加熱し、２時間保持する。樹脂をレジン水で洗
浄後、再び実施例１と同じ方法で酵素固定化を試みる。
粗酵素懸濁液を実施例１と同様に調製し、２００’［Ｊ
／ ｗ＋ｌ樹脂の割合で酵素液と吸着させる。蛋白の
吸着量はＡ担体で９０％、Ｂ担体で４０％である。同様
にフマール酸ナトリウム溶液を加え実施例１と同様にグ
ルタルアルデヒドを用いて架橋固定化する。十分洗浄し
た固定化酵素担体Ａ及びＢをそれぞれ１Ｑｓｌカラムに
充填し、Ｓ Ｖ ＝ ０．３でＩＭフマール酸ナナトリ
ウム水溶液通塔する。流出液のリンゴ酸への転換率は担
体Ａで２０日間８０％が維持でき、担体Ｂでは１白目２
５チ、１０日口重５％、２０日０で１１チと急速に低下
する。
／ ｗ＋ｌ樹脂の割合で酵素液と吸着させる。蛋白の
吸着量はＡ担体で９０％、Ｂ担体で４０％である。同様
にフマール酸ナトリウム溶液を加え実施例１と同様にグ
ルタルアルデヒドを用いて架橋固定化する。十分洗浄し
た固定化酵素担体Ａ及びＢをそれぞれ１Ｑｓｌカラムに
充填し、Ｓ Ｖ ＝ ０．３でＩＭフマール酸ナナトリ
ウム水溶液通塔する。流出液のリンゴ酸への転換率は担
体Ａで２０日間８０％が維持でき、担体Ｂでは１白目２
５チ、１０日口重５％、２０日０で１１チと急速に低下
する。
実施例３゜
ストレプトマイセス・フェオクロモゲネス（ａｔ ｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇａｎｅｓ
） ＩＦｏ ３１０５含水菌体２５．９をｐＨ８０，
０２Ｍリン酸緩衝液中で自己消化させたのち、濾過して
グルコースイソメラーゼ酵素液を得る。
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇａｎｅｓ
） ＩＦｏ ３１０５含水菌体２５．９をｐＨ８０，
０２Ｍリン酸緩衝液中で自己消化させたのち、濾過して
グルコースイソメラーゼ酵素液を得る。
ｐＨ８に緩衝化したデュオライ）Ａ３７８（ダイヤモン
ド・ジャムロック社アメリカ）を酵素液に懸濁させｐＨ
８，２に調整したのち、約１６時間室温でゆるやかに攪
拌する。
ド・ジャムロック社アメリカ）を酵素液に懸濁させｐＨ
８，２に調整したのち、約１６時間室温でゆるやかに攪
拌する。
ついで上清を除きグルコース１％水溶液を５゜ｄ加え１
０分ゆるく攪拌後上清を抜き去９．０．２％グルタルア
ルデヒド水溶液５９ｍを加え室温にて３０分間ゆるく攪
拌し、架橋を行う。
０分ゆるく攪拌後上清を抜き去９．０．２％グルタルア
ルデヒド水溶液５９ｍを加え室温にて３０分間ゆるく攪
拌し、架橋を行う。
樹脂をカラムに移してよく水洗した後、この不溶性酵素
カラムにＭｌ１８０４ ０．０５Ｍ、 ＣＯＣ／２５Ｘ
１０−’Ｍ含んだぶどう糖０．５Ｍ液を６０℃で１時間
に５０ Ｑａｄ （５ｖ＝ｔｏ ）の速度で通液する。
カラムにＭｌ１８０４ ０．０５Ｍ、 ＣＯＣ／２５Ｘ
１０−’Ｍ含んだぶどう糖０．５Ｍ液を６０℃で１時間
に５０ Ｑａｄ （５ｖ＝ｔｏ ）の速度で通液する。
流出液の果糖（システィンカルバゾール法）は３０ ｙ
ｎｇ ／ ｄである。
ｎｇ ／ ｄである。
８Ｖ＝４にて通塔した場合は果糖は４６■／ ｍ／ ｓ
ぶどう糖（グルコースオキシダーゼ法）は４４ｍｇ ／
ｍと５１チの異性化率が得られる。更に糖液を５Ｖ＝
４にて２０日間連続通塔する。
ぶどう糖（グルコースオキシダーゼ法）は４４ｍｇ ／
ｍと５１チの異性化率が得られる。更に糖液を５Ｖ＝
４にて２０日間連続通塔する。
異性化率は２０日後で４９チである。ここで樹脂をカラ
ムより抜き出し、よく水洗した後０．５Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．５ Ｎ硫酸を加え７０℃に加熱し、２時間
保持する。樹脂を洗浄後、最初の固定化と同様に再固定
化を試みた。同様に固定化した担体に８Ｖ＝１０で通塔
した流出液の果糖は３１℃ｇ／ｍであシ新しい樹脂と同
等の活性発現が認められる。
ムより抜き出し、よく水洗した後０．５Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．５ Ｎ硫酸を加え７０℃に加熱し、２時間
保持する。樹脂を洗浄後、最初の固定化と同様に再固定
化を試みた。同様に固定化した担体に８Ｖ＝１０で通塔
した流出液の果糖は３１℃ｇ／ｍであシ新しい樹脂と同
等の活性発現が認められる。
実施例４゜
グルコアミラーゼ（長潮産業■製）をｐＨ４４５の０．
１Ｍ酢酸紛衝液に溶解して１，１耐あたシ酵素を蛋白と
して１４票９含有する溶液を調製する。膣液ｉｏｙをＨ
ＰＡ７５樹脂（三菱化成工業■）５ｙに加えて３７℃の
恒温槽で１６時時間表うすると樹脂１１Ｌｌｆｉす２２
■の蛋白が吸着される。
１Ｍ酢酸紛衝液に溶解して１，１耐あたシ酵素を蛋白と
して１４票９含有する溶液を調製する。膣液ｉｏｙをＨ
ＰＡ７５樹脂（三菱化成工業■）５ｙに加えて３７℃の
恒温槽で１６時時間表うすると樹脂１１Ｌｌｆｉす２２
■の蛋白が吸着される。
更に、樹脂を洗浄後、上清を除き可溶性デンプン１ｑ６
水溶液５ｄを加えゆるく攪拌後上清を抜き取り、ついで
０．２％グルタルアルデヒド水溶液５ ｗ＋ｌを加え室
温にて３０分間ゆるく攪拌し架橋を行う。
水溶液５ｄを加えゆるく攪拌後上清を抜き取り、ついで
０．２％グルタルアルデヒド水溶液５ ｗ＋ｌを加え室
温にて３０分間ゆるく攪拌し架橋を行う。
樹脂をカラムに移してよく水洗した後、この不溶性酵素
カラムに可溶性デンプン１０ｑ６水溶液を５Ｖ＝１．０
．５０℃にて通塔する。通塔液のグルコース濃度は３１
目８５．！ｉ’／ｊ、１０日目８３ ！／ｌである。
カラムに可溶性デンプン１０ｑ６水溶液を５Ｖ＝１．０
．５０℃にて通塔する。通塔液のグルコース濃度は３１
目８５．！ｉ’／ｊ、１０日目８３ ！／ｌである。
更に５０日通塔するとグルコース濃度は８０Ｅ／ｌと若
干低下するが雑菌汚染は顕著には認められない。更にこ
の樹脂をぬきと９、水洗した後０．５−Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．５Ｎ硫酸を加え７０℃に加熱し、２時間保
持する。樹脂を洗浄後、新樹脂と同様に扱い再固定化を
行う。
干低下するが雑菌汚染は顕著には認められない。更にこ
の樹脂をぬきと９、水洗した後０．５−Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．５Ｎ硫酸を加え７０℃に加熱し、２時間保
持する。樹脂を洗浄後、新樹脂と同様に扱い再固定化を
行う。
得られる樹脂をカラムに移してこの不溶性酵素カラムに
可溶性デンプン１０チ水溶液をＳ■−１，０，５０℃に
て通塔する。通塔液のグルコース濃度は３日目８５ Ｆ
ｌ／ｌ、１０日口重 ３ ｇ／ｌである。
可溶性デンプン１０チ水溶液をＳ■−１，０，５０℃に
て通塔する。通塔液のグルコース濃度は３日目８５ Ｆ
ｌ／ｌ、１０日口重 ３ ｇ／ｌである。
対照としてデュオライト人７樹脂を用いて前述の固定化
を試みる。得られる酵素固定樹脂をカラムにつめ可溶性
デンプン１０％水溶液を５Ｖ＝１．０．５０℃にて通塔
する。通塔液のグルコース濃度は３日月Ｂｏｇ／ｌ、ｌ
Ｏ日口重 ８１１／ｌである。更に２０日後には４０１
！／１までに低下する。ついで前述の実施例と同様に再
生、再固定化を行う。再固定化担体を用いた通塔液のグ
ルコース濃度は３日目３０ｇ／ｌ、１０日口重５Ｉｉ／
ｌと再生使用には充分な結果が得られない。また新たに
デュオライトＡ７酵素固定化樹脂を上と同様に調製し、
可溶性デンプン１０ｑ６水溶液を５Ｖ＝１．０．４０℃
にて通塔する。この場合には雑菌汚染が徐々に進行し、
グルコース濃度は３日月にて７５ｆ／ｌ、１０日月には
ｅ ｏ ｙ／ｌと低下する。これはアイマックＡ２０Ｓ
Ｕ樹脂でも全く同様である。、。
を試みる。得られる酵素固定樹脂をカラムにつめ可溶性
デンプン１０％水溶液を５Ｖ＝１．０．５０℃にて通塔
する。通塔液のグルコース濃度は３日月Ｂｏｇ／ｌ、ｌ
Ｏ日口重 ８１１／ｌである。更に２０日後には４０１
！／１までに低下する。ついで前述の実施例と同様に再
生、再固定化を行う。再固定化担体を用いた通塔液のグ
ルコース濃度は３日目３０ｇ／ｌ、１０日口重５Ｉｉ／
ｌと再生使用には充分な結果が得られない。また新たに
デュオライトＡ７酵素固定化樹脂を上と同様に調製し、
可溶性デンプン１０ｑ６水溶液を５Ｖ＝１．０．４０℃
にて通塔する。この場合には雑菌汚染が徐々に進行し、
グルコース濃度は３日月にて７５ｆ／ｌ、１０日月には
ｅ ｏ ｙ／ｌと低下する。これはアイマックＡ２０Ｓ
Ｕ樹脂でも全く同様である。、。
更にデ鼻オライドＡ７樹脂を用いるグルタルアルデヒド
を用いない固定化法と比較する。デエオライ）Ａ７樹脂
１０ａ＋／をグルコアミラーゼ溶液（前述の蛋白として
１４■／ＩＩＬｌ濃度にｏ、 ｉＭ ｐ Ｈ４，５酢酸
緩衝液を用いて調製したもの）２０ｒｒｔｌｊと混合し
、３７℃に１６時時間表う固定化する。蛋白は２３■が
吸着される。樹脂を各５ｒｔｔｌずつ２本のカラムにつ
め洗浄後、この不溶性酵素カラムに可溶性デンプン１０
％水溶液をＳ Ｖ ＝ １．０にて通塔する。１本のカ
ラムでは温度を５０℃（実験Ａ）に、他方は４０℃（実
験Ｂ）に保持する。実験Ａでは流出液のグルコース濃度
は３日月’１８ｆ／ＩＩ、１０日目６５ ｆ／１１と活
性低下が大きい。実験Ｂでの流出液のグルコース濃度は
３日月７３ｆ／ｌ、１０日日５ｓｙ／ｌと低下し雑菌汚
染が認められる。
を用いない固定化法と比較する。デエオライ）Ａ７樹脂
１０ａ＋／をグルコアミラーゼ溶液（前述の蛋白として
１４■／ＩＩＬｌ濃度にｏ、 ｉＭ ｐ Ｈ４，５酢酸
緩衝液を用いて調製したもの）２０ｒｒｔｌｊと混合し
、３７℃に１６時時間表う固定化する。蛋白は２３■が
吸着される。樹脂を各５ｒｔｔｌずつ２本のカラムにつ
め洗浄後、この不溶性酵素カラムに可溶性デンプン１０
％水溶液をＳ Ｖ ＝ １．０にて通塔する。１本のカ
ラムでは温度を５０℃（実験Ａ）に、他方は４０℃（実
験Ｂ）に保持する。実験Ａでは流出液のグルコース濃度
は３日月’１８ｆ／ＩＩ、１０日目６５ ｆ／１１と活
性低下が大きい。実験Ｂでの流出液のグルコース濃度は
３日月７３ｆ／ｌ、１０日日５ｓｙ／ｌと低下し雑菌汚
染が認められる。
いずれの担体（実験Ａ及びＢ）についても再生再固定化
を試みる。再生条件は０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む０
．５Ｎ硫酸中で７０℃に加熱する方法（実験Ａ−１，Ｂ
−１）４Ｎ苛性ソーダを用い６０℃に加熱する方法（実
験Ａ−２，Ｂ−２）を比較する。再生した樹脂を用い最
初の固定化と同様に行う。蛋白の吸着量はＡ−１１０１
１１ｇ、Ｂ−１１０■ｔＡ−２：１５■、Ｂ−２１３〜
と初回に比べて吸着能は低下し、樹脂をカラムに充填し
、１０％可溶性デンプン水溶液を４０℃、８ Ｖ ＝
１．０にて通塔すると流出液のグルコース濃度は３８目
にてＡ−１２０屏９／Ｉｋｌ、 Ｂ−１１８Ｑ／ｓｕ、
Ａ−２２５調ｇ／−１Ｂ−２２０ｗｇ／−にすぎない
。
を試みる。再生条件は０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む０
．５Ｎ硫酸中で７０℃に加熱する方法（実験Ａ−１，Ｂ
−１）４Ｎ苛性ソーダを用い６０℃に加熱する方法（実
験Ａ−２，Ｂ−２）を比較する。再生した樹脂を用い最
初の固定化と同様に行う。蛋白の吸着量はＡ−１１０１
１１ｇ、Ｂ−１１０■ｔＡ−２：１５■、Ｂ−２１３〜
と初回に比べて吸着能は低下し、樹脂をカラムに充填し
、１０％可溶性デンプン水溶液を４０℃、８ Ｖ ＝
１．０にて通塔すると流出液のグルコース濃度は３８目
にてＡ−１２０屏９／Ｉｋｌ、 Ｂ−１１８Ｑ／ｓｕ、
Ａ−２２５調ｇ／−１Ｂ−２２０ｗｇ／−にすぎない
。
昭和５９年７月ｑ日
特許庁長官 殿
１、事件の表示
昭和５８年特許願第１３８７７４号
２、発明の名称
酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法３、補
正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名 称
（１０２＞協和醗酵工業株式会社明細書の特許請求の範
囲の欄及び発明の詳細な人の平均マクロポア半径及び０
．１ｍＩ／ｇ以上、特許０．２〜１．Ｏｍｌ／ｇのマク
ロポア容量を有するもの、例えばアイマックＡ２Ｏ３，
Ａ２ＯＲ〔デュオライトインターナショナル社（フラン
ス）の商品名〕、レバチッ）ＭＰ５００Ａ（バイエル社
（西ドイツ）の商品名〕、デュオライ）Ａ３７８．Ａ３
６’９．Ａ３６８１：ダイヤモンドシャムロック社（ア
メリカ）の商品名〕、ＨＰＡ７５．、ＨＰＡ２５ （三
菱化成工業■の商品名〕等が好ましく使用される。」 （３）６頁下１行の「ｍｇ／ｍ＋樹脂」をｒｍｇ−蛋白
／ｍ１−樹脂」に訂正する。
正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名 称
（１０２＞協和醗酵工業株式会社明細書の特許請求の範
囲の欄及び発明の詳細な人の平均マクロポア半径及び０
．１ｍＩ／ｇ以上、特許０．２〜１．Ｏｍｌ／ｇのマク
ロポア容量を有するもの、例えばアイマックＡ２Ｏ３，
Ａ２ＯＲ〔デュオライトインターナショナル社（フラン
ス）の商品名〕、レバチッ）ＭＰ５００Ａ（バイエル社
（西ドイツ）の商品名〕、デュオライ）Ａ３７８．Ａ３
６’９．Ａ３６８１：ダイヤモンドシャムロック社（ア
メリカ）の商品名〕、ＨＰＡ７５．、ＨＰＡ２５ （三
菱化成工業■の商品名〕等が好ましく使用される。」 （３）６頁下１行の「ｍｇ／ｍ＋樹脂」をｒｍｇ−蛋白
／ｍ１−樹脂」に訂正する。
（４）８頁下２行の「酵素蛋白」を「蛋白」に副圧する
。
。
（５）１２２頁下８のｒｓＶ−０，３ｊをｒ Ｓ Ｖ
＝ ０．３（供給容量／担体容量・ｈｒ）Ｊに゛訂正す
る。
＝ ０．３（供給容量／担体容量・ｈｒ）Ｊに゛訂正す
る。
（６）１３３頁下４と３行の間に次の文を加入する。
［さらに、固定化酵素担体Δの再生・再使用を（り返す
場合、２回目、３回目の再使用においても流出液のリン
ゴ酸への転化率は２０日間８０％を維持できる。」 （７）１９頁５行のあとに次の実施例を加入する。
場合、２回目、３回目の再使用においても流出液のリン
ゴ酸への転化率は２０日間８０％を維持できる。」 （７）１９頁５行のあとに次の実施例を加入する。
「実施例５゜
アイマックＡ２Ｏ５の代わりにレバチットＭＰ５００Ａ
を用いて実施例１と同様の操作をくり返す場合、同様の
結果が得られる。」特許請求の範囲 （１）巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂のマクロポア内に多価アルデヒド
でお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹脂
組成物。
を用いて実施例１と同様の操作をくり返す場合、同様の
結果が得られる。」特許請求の範囲 （１）巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂のマクロポア内に多価アルデヒド
でお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹脂
組成物。
（４）該樹脂がアイマックＡ２Ｏ３，Ａ２ＯＲ，デュオ
ライトＡ３７８．’Ａ３６９’、Ａ３６８．上バチット
ＭＰ５００Δ、ダイアイオンＨＰＡ７５゜ＨＰΔ２５よ
り選ばれる特許請求の範囲第１項記載の酵素固定樹脂組
成物。
ライトＡ３７８．’Ａ３６９’、Ａ３６８．上バチット
ＭＰ５００Δ、ダイアイオンＨＰＡ７５゜ＨＰΔ２５よ
り選ばれる特許請求の範囲第１項記載の酵素固定樹脂組
成物。
垣 多価アルデヒドが炭素数２〜１０の飽和脂肪族ジア
ルデヒドである特許請求の範囲第１項記載の酵素固定樹
脂組成物。
ルデヒドである特許請求の範囲第１項記載の酵素固定樹
脂組成物。
（６） 該酵素が酸化還−酵素 転移酵素、加水分解酵
素、リアーゼ、イソメラーゼ及びリガ一二５よ囮 巨大
網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基が活性水素
を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性陰イオ
ン交換樹脂を酵素含有液に接触させて該樹脂に酵素を吸
着させ、ついで該樹脂を該酵素の基質溶液に接触させ、
さらに該樹脂を多価アルデヒド溶液に接触させることを
特徴とする酵素固定樹脂組成物°の製造法。
素、リアーゼ、イソメラーゼ及びリガ一二５よ囮 巨大
網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基が活性水素
を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩基性陰イオ
ン交換樹脂を酵素含有液に接触させて該樹脂に酵素を吸
着させ、ついで該樹脂を該酵素の基質溶液に接触させ、
さらに該樹脂を多価アルデヒド溶液に接触させることを
特徴とする酵素固定樹脂組成物°の製造法。
−■ 巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂のマクロポア内に多価アルデヒド
でお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹脂
組成物を一定期間使用後０２〜５Ｍの塩を含有する鉱酸
水溶液に接触させることを特徴とする酵素固定樹脂組成
物の再生法。
が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂のマクロポア内に多価アルデヒド
でお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹脂
組成物を一定期間使用後０２〜５Ｍの塩を含有する鉱酸
水溶液に接触させることを特徴とする酵素固定樹脂組成
物の再生法。
Claims (5)
- （１） 巨大網目構造を有し、窒素を有す石イオン交換
基が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系
塩基性陰イオン交換樹脂のマクｐボア内に多価アルデヒ
ドでお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹
脂組成物。 - （２）巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有しないスチレ／−ジビニルベンゼン系塩
基性イオン交換樹脂がアイマックＡ２Ｏ８，Ａ２ＯＲ，
デュオライトＡ３７８．Ａ３６９．Ａ３６８．ダイアイ
オンＨＰＡ７５．ＨＰＡ２５よシ選ばれる特許請求の範
囲第１項記載の酵素固定樹脂組成物。 - （３）多価アルデヒドが炭素数２−１０の飽和脂肪族ジ
アルデヒドである特許請求の範囲第１項記載の酵素固定
樹脂組成物。 - （４）巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有したいスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂を酵素含有液に接触させて該樹脂
に酵素を吸着させ、ついで該樹脂を該酵素の基質溶液に
接触させ、さらに該樹脂を多価アルデヒド溶液に接触さ
せることを特徴とする酵素固定樹脂組成物の製造法。 - （５）巨大網目構造を有し、窒素を有するイオン交換基
が活性水素を有しないスチレン−ジビニルベンゼン系塩
基性陰イオン交換樹脂のｉクロポア内に多価アルデヒド
でお互いに架橋された酵素を包含してなる酵素固定樹脂
組成物を一定期間使用後０．２−５ Ｍの塩を含有する
鉱酸水溶液に接触させることを特徴とする酵素固定樹脂
組成物の再生法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58138774A JPS6030683A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法 |
| EP84304959A EP0132998B1 (en) | 1983-07-29 | 1984-07-20 | A process for the production of enzyme fixed resin material and a method for the regeneration thereof |
| DE8484304959T DE3462270D1 (en) | 1983-07-29 | 1984-07-20 | A process for the production of enzyme fixed resin material and a method for the regeneration thereof |
| BE0/214025A BE901085A (fr) | 1983-07-29 | 1984-11-19 | Matiere resineuse a enzymes fixees; sa preparation et sa regeneration . |
| CH5559/84A CH666905A5 (de) | 1983-07-29 | 1984-11-21 | Traegergebundenes enzym, verfahren zu seiner herstellung und verfahren fuer seine regeneration. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58138774A JPS6030683A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6030683A true JPS6030683A (ja) | 1985-02-16 |
Family
ID=15229878
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58138774A Pending JPS6030683A (ja) | 1983-07-29 | 1983-07-29 | 酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0132998B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6030683A (ja) |
| BE (1) | BE901085A (ja) |
| CH (1) | CH666905A5 (ja) |
| DE (1) | DE3462270D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998006829A1 (fr) * | 1996-08-12 | 1998-02-19 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Procedes pour preparer des bioreacteurs |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8725333D0 (en) * | 1987-10-29 | 1987-12-02 | Monsanto Europe Sa | Immobilised enzymes |
| JPH0746990B2 (ja) * | 1988-04-06 | 1995-05-24 | 三菱化学株式会社 | 固定化酵素剤 |
| US5215905A (en) * | 1989-12-29 | 1993-06-01 | Miwon Co., Ltd. | Immobilization of fructosyltransferase on a basic, porous anion-exchange resin |
| CA2735452C (en) | 2008-09-30 | 2022-02-01 | Fresenius Medical Care Holdings, Inc. | Covalently immobilized enzyme and method to make the same |
| ITFI20120139A1 (it) * | 2012-07-06 | 2014-01-07 | Inalco S A S Di Giovanni Cipollett I & C | Enzimi immobilizzati su matrici polimeriche di stirene-divinil benzene e loro impiego in produzioni industriali. |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5094187A (ja) * | 1973-12-25 | 1975-07-26 | ||
| JPS5325029A (en) * | 1976-08-19 | 1978-03-08 | Takashi Miura | Veranda |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1492937A (en) * | 1973-12-28 | 1977-11-23 | Beecham Group Ltd | Enzyme complexes and their use |
| JPS574313B2 (ja) * | 1974-12-23 | 1982-01-25 | ||
| JPS5736986A (en) * | 1980-08-13 | 1982-02-27 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Immobilized aminoacylase agent and its preparation |
| DD153130A1 (de) * | 1980-09-12 | 1981-12-23 | Wolfgang Hettwer | Verfahren zum regenerieren von organischen enzymtraegermaterialien |
-
1983
- 1983-07-29 JP JP58138774A patent/JPS6030683A/ja active Pending
-
1984
- 1984-07-20 EP EP84304959A patent/EP0132998B1/en not_active Expired
- 1984-07-20 DE DE8484304959T patent/DE3462270D1/de not_active Expired
- 1984-11-19 BE BE0/214025A patent/BE901085A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-11-21 CH CH5559/84A patent/CH666905A5/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5094187A (ja) * | 1973-12-25 | 1975-07-26 | ||
| JPS5325029A (en) * | 1976-08-19 | 1978-03-08 | Takashi Miura | Veranda |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998006829A1 (fr) * | 1996-08-12 | 1998-02-19 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Procedes pour preparer des bioreacteurs |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3462270D1 (en) | 1987-03-05 |
| EP0132998A1 (en) | 1985-02-13 |
| BE901085A (fr) | 1985-03-15 |
| CH666905A5 (de) | 1988-08-31 |
| EP0132998B1 (en) | 1987-01-28 |
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