JPH0746990B2 - 固定化酵素剤 - Google Patents
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- JPH0746990B2 JPH0746990B2 JP63084833A JP8483388A JPH0746990B2 JP H0746990 B2 JPH0746990 B2 JP H0746990B2 JP 63084833 A JP63084833 A JP 63084833A JP 8483388 A JP8483388 A JP 8483388A JP H0746990 B2 JPH0746990 B2 JP H0746990B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、DFAIII（di−Ｄ−fructofuranose2′,1:2,
3′dianhydride（ジ−Ｄ−フラクトフラノース２′,1:
2,3′ジアンハイドライド）の製造に有利に用いること
ができる固定化酵素剤に関する。
3′dianhydride（ジ−Ｄ−フラクトフラノース２′,1:
2,3′ジアンハイドライド）の製造に有利に用いること
ができる固定化酵素剤に関する。
イヌリン−Ｄ−フラクトトランスフェラーゼ（イヌリナ
ーゼII）（以下、「FTF」と略す。）はイヌリンよりDFA
IIIを生産する酵素である。
ーゼII）（以下、「FTF」と略す。）はイヌリンよりDFA
IIIを生産する酵素である。
DFAIIIはフラクトース２分子が１−２′、２−３′の間
で脱水縮合した構造をもつ２糖類であり、ジャクスらに
より1931年に単離同定されている〔Bur.stand.J.Res.3,
27,1929〕。DFAIIIは、動物体内では代謝されず、非発
酵性の糖であるため低カロリー甘味剤として着目されて
おり、今後美容食等多方面に利用されることが予想され
る。
で脱水縮合した構造をもつ２糖類であり、ジャクスらに
より1931年に単離同定されている〔Bur.stand.J.Res.3,
27,1929〕。DFAIIIは、動物体内では代謝されず、非発
酵性の糖であるため低カロリー甘味剤として着目されて
おり、今後美容食等多方面に利用されることが予想され
る。
従来、FTF生産菌としては、例えば、アルスロバクタ・
ウレアファシエンス（Arthrobacter ureafaciens）7116
（微工研菌寄第1969号）、アルスロバクタ・グロビフォ
ルミス（Arthrobacter globiformis）C11−１（FERM P
−8748）、アルスロバクタ・アアウレッセンス（Arthro
bacter aurescens）IFO12136（内山ら、1975年48回生化
学会大会）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseu
domonus fluorescens）No.949（倉本ら、日本農芸化学
大会62年p.654、63年p.112）などが知られている。
ウレアファシエンス（Arthrobacter ureafaciens）7116
（微工研菌寄第1969号）、アルスロバクタ・グロビフォ
ルミス（Arthrobacter globiformis）C11−１（FERM P
−8748）、アルスロバクタ・アアウレッセンス（Arthro
bacter aurescens）IFO12136（内山ら、1975年48回生化
学会大会）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseu
domonus fluorescens）No.949（倉本ら、日本農芸化学
大会62年p.654、63年p.112）などが知られている。
また、さらに本発明者らは、先にアルスロバクタ・イリ
シス（Arthrobacter ilicis）MCI−2297（FERMBP−227
9）によってもFTFが生産されることを見出している（特
願昭63−53164号：内山ら、日本農芸化学大会63年p.29
6）。
シス（Arthrobacter ilicis）MCI−2297（FERMBP−227
9）によってもFTFが生産されることを見出している（特
願昭63−53164号：内山ら、日本農芸化学大会63年p.29
6）。
従来、この種の酵素を利用して酵素反応を行う場合、酵
素を水に溶解した状態で使用すると、反応終了後、工業
的に反応生成物を取得するためには、酵素を変性除去等
をせざるを得ない。従って、酵素が未だ活性を有してい
ても、１回の反応毎にこれを廃棄しなければならず、経
済的に不利である。
素を水に溶解した状態で使用すると、反応終了後、工業
的に反応生成物を取得するためには、酵素を変性除去等
をせざるを得ない。従って、酵素が未だ活性を有してい
ても、１回の反応毎にこれを廃棄しなければならず、経
済的に不利である。
又、あえて酵素を回収しようとした場合、限外過膜等
による処理が必要となり、酵素の分離に多大の設備と時
間を要し、やはり経済的に不利である。
による処理が必要となり、酵素の分離に多大の設備と時
間を要し、やはり経済的に不利である。
本発明者らは、上記の如き欠点を克服し、工業的有利な
種々の方法について鋭意研究した結果、酵素を前もって
特定の陰イオン交換樹脂に担持した固定化酵素剤（固定
化FTF剤）は再利用等経済的に有利に利用できるばかり
でなく、酵素吸着量、酵素活性あるいは酵素と担体との
結合力などの点において優れており、且つ担持された酵
素の活性が非常に高くて安定であるという驚くべき現象
を見出し、本発明を完成するに至った。
種々の方法について鋭意研究した結果、酵素を前もって
特定の陰イオン交換樹脂に担持した固定化酵素剤（固定
化FTF剤）は再利用等経済的に有利に利用できるばかり
でなく、酵素吸着量、酵素活性あるいは酵素と担体との
結合力などの点において優れており、且つ担持された酵
素の活性が非常に高くて安定であるという驚くべき現象
を見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明の目的は、吸着酵素量が多く、且つ酵素活
性の高い固定化FTF剤を提供することに存し、この目的
は本発明に従って、最頻度半径が75〜2000Åの細孔を有
する陰イオン交換樹脂にFTFを担持して成る固定化酵素
剤によって達成される。
性の高い固定化FTF剤を提供することに存し、この目的
は本発明に従って、最頻度半径が75〜2000Åの細孔を有
する陰イオン交換樹脂にFTFを担持して成る固定化酵素
剤によって達成される。
次に、本発明を詳細に説明するに、本発明において前記
の陰イオン交換樹脂に担持される酵素FTFは、イヌリン
からDFAIIIを生成させ得るものであればいずれのもので
も使用できる。
の陰イオン交換樹脂に担持される酵素FTFは、イヌリン
からDFAIIIを生成させ得るものであればいずれのもので
も使用できる。
かかる酵素を生産する菌としては、例えば、アルスロバ
クタ・ウレアファシエンス（Arthro-bacter ureafacien
s）、アルスロバクタ・グロビフォルミス（Arthrobacte
r globiformis）、アルスロバクタ・アウレッセンス（A
rthrobac-ter aurescens）、アルスロバクタ・イリシス
（Arthrobacter ilicis）等のアルスロバクタ属に属す
る菌、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomona
s fluorescens）等のシュードモナス属に属する菌等種
々のものか挙げられる。具体的には、例えばアルスロバ
クタ・ウレアファシエンス（Arthrobacter ureafacien
s）7116（微工研菌寄第1969号）、アルスロバクタ・グ
ロビフォルミス（Arthrobacter globiformis）C11−１
（FERM P−8748）、アルスロバクタ・アウレッセンス
（Arthrobacter aurescens）IFO12136、アルスロバクタ
・イリシス（Arthrobacter ilicis）MCI−2297（FERM P
−9893）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudo
monus fluores-cens）No.949（倉本ら、日本農芸化学大
会62年p.654、63年p.112）等が挙げられる。
クタ・ウレアファシエンス（Arthro-bacter ureafacien
s）、アルスロバクタ・グロビフォルミス（Arthrobacte
r globiformis）、アルスロバクタ・アウレッセンス（A
rthrobac-ter aurescens）、アルスロバクタ・イリシス
（Arthrobacter ilicis）等のアルスロバクタ属に属す
る菌、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomona
s fluorescens）等のシュードモナス属に属する菌等種
々のものか挙げられる。具体的には、例えばアルスロバ
クタ・ウレアファシエンス（Arthrobacter ureafacien
s）7116（微工研菌寄第1969号）、アルスロバクタ・グ
ロビフォルミス（Arthrobacter globiformis）C11−１
（FERM P−8748）、アルスロバクタ・アウレッセンス
（Arthrobacter aurescens）IFO12136、アルスロバクタ
・イリシス（Arthrobacter ilicis）MCI−2297（FERM P
−9893）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudo
monus fluores-cens）No.949（倉本ら、日本農芸化学大
会62年p.654、63年p.112）等が挙げられる。
上記FTF生産菌は、夫々常法に従い培養することができ
る。そして培養液からFTFを得るためには、培養液中の
菌体外に酵素が生産される場合は、遠心分離、フィルタ
ープレス等により菌体を分離除去すれば良く、又菌体内
に酵素が存在する場合は、上記菌体内から超音波処理、
加圧処理などの機械的方法または菌体の自己消化作用を
利用する方法（菌体自身が保有する細胞溶解酵素によっ
て菌体を溶解する）などの公知の方法によりFTFを得る
ことができる。
る。そして培養液からFTFを得るためには、培養液中の
菌体外に酵素が生産される場合は、遠心分離、フィルタ
ープレス等により菌体を分離除去すれば良く、又菌体内
に酵素が存在する場合は、上記菌体内から超音波処理、
加圧処理などの機械的方法または菌体の自己消化作用を
利用する方法（菌体自身が保有する細胞溶解酵素によっ
て菌体を溶解する）などの公知の方法によりFTFを得る
ことができる。
本発明において使用される陰イオン交換樹脂は、細孔の
最頻度半径が75〜2000Åであることが必要であり、好ま
しくは75〜1000Åの範囲のものである。
最頻度半径が75〜2000Åであることが必要であり、好ま
しくは75〜1000Åの範囲のものである。
更に本発明の陰イオン交換樹脂は、細孔半径が75〜3000
Åの細孔容積が0.1ml/g以上、特に0.3〜2.5ml/gであ
り、また比表面積が0.1m2/g以上、特に10〜100m2/gの多
孔性のものがFTFを良好に吸着し、担持させることがで
きるので有利に使用できる。
Åの細孔容積が0.1ml/g以上、特に0.3〜2.5ml/gであ
り、また比表面積が0.1m2/g以上、特に10〜100m2/gの多
孔性のものがFTFを良好に吸着し、担持させることがで
きるので有利に使用できる。
なお、本発明のFTF剤の製造に使用される陰イオン交換
樹脂の物理的特性である比表面積および細孔容積は、50
℃で10時間数mmHg下で真空乾燥した多孔性陰イオン交換
樹脂を試料とし、それぞれB.E.T法および水銀圧入法
（マイクロメトリック社製オートポア200で測定）によ
り測定される。
樹脂の物理的特性である比表面積および細孔容積は、50
℃で10時間数mmHg下で真空乾燥した多孔性陰イオン交換
樹脂を試料とし、それぞれB.E.T法および水銀圧入法
（マイクロメトリック社製オートポア200で測定）によ
り測定される。
本発明で使用する上記の多孔性陰イオン交換樹脂は公知
の各種方法により製造することができる。一般に陰イオ
ン交換樹脂の母体は、モノビニル単量体とポリビニル単
量体を共重合させることにより製造され、モノビニル単
量体としては、スチレンの如き芳香族モノビニル化合
物、アクリル酸又はメタクリル酸もしくはそのエステル
の如き脂肪族モノマー等が、またポリビニル単量体とし
てはジビニルベンゼンの如き芳香族ジビニル化合物、エ
チレングリコールジメタクリレートの如き脂肪族化合物
等が好適に使用されている。樹脂母体を多孔質にするに
は、例えば前記モノマーの重合系に、溶媒による抽出除
去が可能で、且つ重合反応に関与しない材料、例えばポ
リスチレンなどを共存させながら重合反応を行ない、反
応終了後、得られた樹脂を溶媒で処理してポリスチレン
を抽出除去することにより行なうことができる。
の各種方法により製造することができる。一般に陰イオ
ン交換樹脂の母体は、モノビニル単量体とポリビニル単
量体を共重合させることにより製造され、モノビニル単
量体としては、スチレンの如き芳香族モノビニル化合
物、アクリル酸又はメタクリル酸もしくはそのエステル
の如き脂肪族モノマー等が、またポリビニル単量体とし
てはジビニルベンゼンの如き芳香族ジビニル化合物、エ
チレングリコールジメタクリレートの如き脂肪族化合物
等が好適に使用されている。樹脂母体を多孔質にするに
は、例えば前記モノマーの重合系に、溶媒による抽出除
去が可能で、且つ重合反応に関与しない材料、例えばポ
リスチレンなどを共存させながら重合反応を行ない、反
応終了後、得られた樹脂を溶媒で処理してポリスチレン
を抽出除去することにより行なうことができる。
多孔性樹脂の比表面積、細孔の大きさ、半径75Å以上の
細孔容積などに関する物理的特性は、樹脂の製造条件を
種々選択することにより変更することができる。物理的
諸特性と樹脂の製造条件との関係は一義的には定め難い
が、例えば上記樹脂の製造方法において、樹脂母体原料
としてスチレンとジビニルベンゼンを使用するとき、ポ
リビニル単量体のジビニルベンゼンの量が多いほど一般
に多孔性の程度が大となり、すなわち、比表面積、細孔
容積あるいは細孔の半径が大となる傾向があり、またポ
リスチレン量を多くすると細孔容積あるいは細孔径が大
となる傾向がある。
細孔容積などに関する物理的特性は、樹脂の製造条件を
種々選択することにより変更することができる。物理的
諸特性と樹脂の製造条件との関係は一義的には定め難い
が、例えば上記樹脂の製造方法において、樹脂母体原料
としてスチレンとジビニルベンゼンを使用するとき、ポ
リビニル単量体のジビニルベンゼンの量が多いほど一般
に多孔性の程度が大となり、すなわち、比表面積、細孔
容積あるいは細孔の半径が大となる傾向があり、またポ
リスチレン量を多くすると細孔容積あるいは細孔径が大
となる傾向がある。
陰イオン交換基の導入方法としては、樹脂母体にクロル
メチル基を導入した後、トリメチルアミン、ジメチルエ
タノールアミン、エチレンジアミン、ジエチレントリア
ミン、トリエチレンテトラミン等の脂肪族アミンあるい
はピロリジン、モルホリン、ピペリジン等の環状アミン
等の各種アミン、好ましくは脂肪族アミンで処理する方
法や、あらかじめ反応性の高い官能基をもつビニル単量
体、例えばグリシジル（メタ）アクリレートやビニルベ
ンジルグリシジルエーテル等を共重合体の成分として樹
脂母体を合成し、そのグリシジル基に塩基性下で各種ア
ミンを開還付加する方法などが適当であり、前記樹脂母
体の特性とこれらアミンの種類を選択することにより、
酵素を吸着した際に好適な活性を発揮せしめる陰イオン
交換樹脂とすることができる。
メチル基を導入した後、トリメチルアミン、ジメチルエ
タノールアミン、エチレンジアミン、ジエチレントリア
ミン、トリエチレンテトラミン等の脂肪族アミンあるい
はピロリジン、モルホリン、ピペリジン等の環状アミン
等の各種アミン、好ましくは脂肪族アミンで処理する方
法や、あらかじめ反応性の高い官能基をもつビニル単量
体、例えばグリシジル（メタ）アクリレートやビニルベ
ンジルグリシジルエーテル等を共重合体の成分として樹
脂母体を合成し、そのグリシジル基に塩基性下で各種ア
ミンを開還付加する方法などが適当であり、前記樹脂母
体の特性とこれらアミンの種類を選択することにより、
酵素を吸着した際に好適な活性を発揮せしめる陰イオン
交換樹脂とすることができる。
樹脂母体の架橋度も余り高くなると酵素の吸着率も十分
でなく、さらに吸着した酵素の活性も減少する傾向がみ
られるので、前記樹脂の細孔特性や陰イオン交換基の種
類等の要因と組み合わせて適当な値を選択することが好
ましい。例えば樹脂がスチレンとジビニルベンゼン等の
架橋性モノマーとの共重合で製造される場合、架橋性モ
ノマーの使用量は通常50モル％以下、好ましくは25モル
％以下である。
でなく、さらに吸着した酵素の活性も減少する傾向がみ
られるので、前記樹脂の細孔特性や陰イオン交換基の種
類等の要因と組み合わせて適当な値を選択することが好
ましい。例えば樹脂がスチレンとジビニルベンゼン等の
架橋性モノマーとの共重合で製造される場合、架橋性モ
ノマーの使用量は通常50モル％以下、好ましくは25モル
％以下である。
なお、多孔性樹脂の基体としては、常法によって製造さ
れるポリ（メタ）アクリル酸を主体とするアクリル系の
ものも好適に使用される。
れるポリ（メタ）アクリル酸を主体とするアクリル系の
ものも好適に使用される。
本発明においては、上記の多孔性陰イオン交換樹脂とし
ては、通常20〜400メッシュ程度の粒径のものが使用さ
れるが、粒径が小さいほど活性発現率が若干向上する傾
向がみられる。
ては、通常20〜400メッシュ程度の粒径のものが使用さ
れるが、粒径が小さいほど活性発現率が若干向上する傾
向がみられる。
上記の陰イオン交換樹脂にFTFを吸着させるには、イオ
ン交換樹脂処理において一般に知られた種々の方法を採
用することができ、最も簡便には、培養液中から菌体を
除去したFTFの水溶液にイオン交換樹脂を浸漬し、必要
に応じて攪拌し、適当な吸着時間の経過後、樹脂を取り
出して水洗すればよい。
ン交換樹脂処理において一般に知られた種々の方法を採
用することができ、最も簡便には、培養液中から菌体を
除去したFTFの水溶液にイオン交換樹脂を浸漬し、必要
に応じて攪拌し、適当な吸着時間の経過後、樹脂を取り
出して水洗すればよい。
このとき、FTF水溶液のpH値は通常3.0〜10.0の範囲内で
あり、吸着温度は０〜60℃、吸着に要する時間は１〜20
時間程度である。
あり、吸着温度は０〜60℃、吸着に要する時間は１〜20
時間程度である。
担体である上記の陰イオン交換樹脂は種々の塩形で用い
ることができ、例えば上記のイオン交換樹脂を硫酸、塩
酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸などの水溶液で処
理して、それぞれ▲HSO- 4▼、▲SO2- 4▼、Cl-、OH-、▲
HPO- 4▼、▲PO2- 4▼、CH3COO-などの塩形、好ましくは
▲SO2- 4▼、Cl-、OH-、▲PO2- 4▼などの塩形とすること
により有効に担体にFTFを吸着させることができる。
ることができ、例えば上記のイオン交換樹脂を硫酸、塩
酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸などの水溶液で処
理して、それぞれ▲HSO- 4▼、▲SO2- 4▼、Cl-、OH-、▲
HPO- 4▼、▲PO2- 4▼、CH3COO-などの塩形、好ましくは
▲SO2- 4▼、Cl-、OH-、▲PO2- 4▼などの塩形とすること
により有効に担体にFTFを吸着させることができる。
担体に対する酵素の吸着量としては、1mlの樹脂（湿潤
状態で）当り0.05〜30mgの蛋白量が適当であるが、好ま
しくは0.1〜10mgが適当である。
状態で）当り0.05〜30mgの蛋白量が適当であるが、好ま
しくは0.1〜10mgが適当である。
なお、本発明におけるFTFの上記陰イオン交換樹脂への
吸着およびFTFの活性発現の作用機構の詳細については
未だ明らかではないが、樹脂の細孔における物理的吸着
および陰イオン交換基とFTFとの何らかの化学的結合力
が相乗的に関与しているものと推察される。このこと
は、比表面積および半径75Å以上の細孔容積の小さい通
常のゲル状イオン交換樹脂はFTFをほとんど吸着せず、
一方、比表面積および半径75Å以上の細孔容積の値が大
きい多孔性樹脂でも、陰イオン交換基を導入していない
樹脂は同様にFTF吸着量が少なく、FTFの活性も低いこと
からも推認される。
吸着およびFTFの活性発現の作用機構の詳細については
未だ明らかではないが、樹脂の細孔における物理的吸着
および陰イオン交換基とFTFとの何らかの化学的結合力
が相乗的に関与しているものと推察される。このこと
は、比表面積および半径75Å以上の細孔容積の小さい通
常のゲル状イオン交換樹脂はFTFをほとんど吸着せず、
一方、比表面積および半径75Å以上の細孔容積の値が大
きい多孔性樹脂でも、陰イオン交換基を導入していない
樹脂は同様にFTF吸着量が少なく、FTFの活性も低いこと
からも推認される。
本発明において使用される陰イオン交換樹脂は水溶液中
で膨潤して、乾燥状態よりもさらに巨大な網目構造を形
成すると考えられるが、乾燥状態において細孔半径が大
きく、その細孔容積が大きいものは、FTF吸着率および
活性発現率が良好である。
で膨潤して、乾燥状態よりもさらに巨大な網目構造を形
成すると考えられるが、乾燥状態において細孔半径が大
きく、その細孔容積が大きいものは、FTF吸着率および
活性発現率が良好である。
かくして得られた不溶化FTF剤は高いFTF活性を保持す
る。また、本発明の固定化FTF剤は長時間に亘る使用に
も活性の低下が少なく、反応中、酵素が担体から溶離す
ることもないので、工業的有利に反応を行なうことが可
能である。工業的に固定化FTF剤を使用する場合は、充
填塔及び攪拌槽等のいずれの形式の反応器においても利
用できる。
る。また、本発明の固定化FTF剤は長時間に亘る使用に
も活性の低下が少なく、反応中、酵素が担体から溶離す
ることもないので、工業的有利に反応を行なうことが可
能である。工業的に固定化FTF剤を使用する場合は、充
填塔及び攪拌槽等のいずれの形式の反応器においても利
用できる。
さらに、本発明の固定化FTF剤の利点の一つは、長期間
使用後の活性が低下したFTF剤を塩化ナトリウムあるい
は塩化カリウムなどの水溶液で処理することにより、FT
Fが容易に溶離するので簡単に再生することができると
いうことである。
使用後の活性が低下したFTF剤を塩化ナトリウムあるい
は塩化カリウムなどの水溶液で処理することにより、FT
Fが容易に溶離するので簡単に再生することができると
いうことである。
再生後、FTFが溶離した樹脂は再び新しいFTFを吸着担持
させることにより、活性の高い固定化FTF剤として使用
することができる。
させることにより、活性の高い固定化FTF剤として使用
することができる。
次に、本発明を実施例によってさらに詳細に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り、下記実施例によ
って限定されるものではない。
が、本発明はその要旨を超えない限り、下記実施例によ
って限定されるものではない。
実施例１ 下記組成の培地500mlの入った5l坂口フラスコを用い
て、アルスロバクタ・イリシスMCI2297号菌（FERM P−9
893）を30℃で24時間培養した。
て、アルスロバクタ・イリシスMCI2297号菌（FERM P−9
893）を30℃で24時間培養した。
培地：イヌリン 50g 硝酸ナトリウム 2g 硝酸マグネシウム・７水塩 0.5g 塩化カリウム 0.5g リン酸二水素カリウム 0.5g 塩化鉄（III） 0.001g 酵母エキス 0.2g 水 １ 培養後、遠心分離により除菌し、FTF（酵素液）を得た
（この時の酵素液の活性は21U）。
（この時の酵素液の活性は21U）。
次いでこの酵素液150mlを採取し、これを第１表に示す
物性を有するイオン交換樹脂1ml（湿潤状態）に添加
し、30℃で10時間振盪攪拌し、酵素を樹脂に吸着させ
て、固定化FTF剤を得た。
物性を有するイオン交換樹脂1ml（湿潤状態）に添加
し、30℃で10時間振盪攪拌し、酵素を樹脂に吸着させ
て、固定化FTF剤を得た。
次に得られた固定化FTF剤を水洗後反応液（10％イヌリ
ン/0.05M pH6.0リン酸緩衝液）10mlで２回洗浄後、100m
lの反応液を加え、30℃で１時間振盪攪拌して反応させ
た。
ン/0.05M pH6.0リン酸緩衝液）10mlで２回洗浄後、100m
lの反応液を加え、30℃で１時間振盪攪拌して反応させ
た。
固定化FTF剤の活性を第１表に示す（高速液クロで測
定）。第１表に示す様に、反応液中に3.29gのDFAIIIが
生産されていた。
定）。第１表に示す様に、反応液中に3.29gのDFAIIIが
生産されていた。
次に新しい反応後10mlで２回洗浄後、再び新しい反応液
100mlを加えて同様に１時間反応させたところ、液中に
3.01gのDFAIIIが生産されていた。同様に３回目の反応
を行なったところ、3.00gのDFAIIIが生産されていた。
100mlを加えて同様に１時間反応させたところ、液中に
3.01gのDFAIIIが生産されていた。同様に３回目の反応
を行なったところ、3.00gのDFAIIIが生産されていた。
なお、これらの酵素活性、及び反応における分析は以下
の方法に従った。
の方法に従った。
酵素液の活性力価 0.05M pH6.0リン酸緩衝液90mlに10gのイヌリンを溶解さ
せ、溶解後100mlとしたイヌリン溶液2mlに酵素液1mlを
加え、１時間30℃で振盪反応させた。反応後メタノール
を3ml加えた後水を加えて30mlとしたのち、生成したDFA
IIIを高速液体クロマトグラフィーにより分析した。酵
素活性力価1Uは酵素液ｌ当り、１時間当りのDFAIII1gを
生産するものとした。
せ、溶解後100mlとしたイヌリン溶液2mlに酵素液1mlを
加え、１時間30℃で振盪反応させた。反応後メタノール
を3ml加えた後水を加えて30mlとしたのち、生成したDFA
IIIを高速液体クロマトグラフィーにより分析した。酵
素活性力価1Uは酵素液ｌ当り、１時間当りのDFAIII1gを
生産するものとした。
生成されたDFAIIIの分析 分析は高速液体クロマトグラフィーにより行った。
カラム ：三菱化成製CK08S 溶離液 ：水 溶出速度:1ml/分 検 出：示差屈折計 実施例２〜９及び比較例１〜７ 第１表に示す様に、樹脂の種類及びイオン型を替える以
外は、実施例１に記載したと同様に吸着させて固定化FT
F剤を得た。
外は、実施例１に記載したと同様に吸着させて固定化FT
F剤を得た。
得られた固定化FTF剤の活性を第１表に示す。
実施例10 使用する菌株をアルスロバクタ・アウレッセンスIFO121
36に変えた以外は実施例１と同様にして酵素を吸着させ
て、固定化FTF剤を得た。得られた固定化FTF剤の活性を
第２表に示す（この時の酵素液の活性は7.4U）。
36に変えた以外は実施例１と同様にして酵素を吸着させ
て、固定化FTF剤を得た。得られた固定化FTF剤の活性を
第２表に示す（この時の酵素液の活性は7.4U）。
実施例11及び比較例８〜９ 下記第１表に示す表に、樹脂の種類及びイオン交換基を
変える以外は実施例10と同様に吸着させて固定化FTF剤
を得た。
変える以外は実施例10と同様に吸着させて固定化FTF剤
を得た。
得られた固定化FTF剤の活性を第２表に示す。
〔発明の効果〕 本発明の固定化酵素剤によれば、担持された酵素がその
活性を十分に発現することからDFAIIIの生産能が高く、
また繰り返して使用することができるので、工業的に有
利である。
活性を十分に発現することからDFAIIIの生産能が高く、
また繰り返して使用することができるので、工業的に有
利である。
Claims (1)
- 【請求項１】最頻度半径が75〜2000Åの細孔を有する陰
イオン交換樹脂にイヌリン−Ｄ−フラクトトランスフェ
ラーゼを担持して成る固定化酵素剤。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63084833A JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
| US07/330,694 US5094948A (en) | 1988-04-06 | 1989-03-30 | Immobilized ftf enzymes |
| EP89105903A EP0336376B1 (en) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobilized FTF enzymes |
| DE68916301T DE68916301T2 (de) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobilisierte FTF Enzyme. |
| DK162289A DK162289A (da) | 1988-04-06 | 1989-04-04 | Immobiliserede enzymer |
| CA000595812A CA1315724C (en) | 1988-04-06 | 1989-04-05 | Immobilized ftf enzymes |
| KR1019890004511A KR890016168A (ko) | 1988-04-06 | 1989-04-06 | 고정화 ftf 효소 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63084833A JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01256388A JPH01256388A (ja) | 1989-10-12 |
| JPH0746990B2 true JPH0746990B2 (ja) | 1995-05-24 |
Family
ID=13841782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63084833A Expired - Lifetime JPH0746990B2 (ja) | 1988-04-06 | 1988-04-06 | 固定化酵素剤 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5094948A (ja) |
| EP (1) | EP0336376B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0746990B2 (ja) |
| KR (1) | KR890016168A (ja) |
| CA (1) | CA1315724C (ja) |
| DE (1) | DE68916301T2 (ja) |
| DK (1) | DK162289A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19547059C2 (de) * | 1995-12-18 | 1998-11-05 | Zuckerverbund Nord Ag | Verfahren zur Herstellung von Difructosedianhydrid III |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5467091A (en) * | 1977-11-05 | 1979-05-30 | Sumitomo Chem Co Ltd | Carrier for immobilized enzyme and its preparation |
| US4239854A (en) * | 1978-04-24 | 1980-12-16 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Enzyme-immobilization carriers and preparation thereof |
| NL8003723A (nl) * | 1980-06-27 | 1982-01-18 | Stamicarbon | Inulinase. |
| JPS5736986A (en) * | 1980-08-13 | 1982-02-27 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Immobilized aminoacylase agent and its preparation |
| JPS6030683A (ja) * | 1983-07-29 | 1985-02-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 酵素固定樹脂組成物並びにその製造法及び再生法 |
| JPH01225492A (ja) * | 1988-03-07 | 1989-09-08 | Mitsubishi Kasei Corp | ジフルクトース・ジアンヒドリド３の製造法 |
-
1988
- 1988-04-06 JP JP63084833A patent/JPH0746990B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-03-30 US US07/330,694 patent/US5094948A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-04 DE DE68916301T patent/DE68916301T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-04 EP EP89105903A patent/EP0336376B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-04 DK DK162289A patent/DK162289A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-04-05 CA CA000595812A patent/CA1315724C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-06 KR KR1019890004511A patent/KR890016168A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890016168A (ko) | 1989-11-28 |
| DK162289A (da) | 1989-10-07 |
| DK162289D0 (da) | 1989-04-04 |
| DE68916301T2 (de) | 1995-01-26 |
| CA1315724C (en) | 1993-04-06 |
| JPH01256388A (ja) | 1989-10-12 |
| EP0336376A2 (en) | 1989-10-11 |
| DE68916301D1 (de) | 1994-07-28 |
| EP0336376B1 (en) | 1994-06-22 |
| EP0336376A3 (en) | 1990-06-20 |
| US5094948A (en) | 1992-03-10 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |