JPH01174400A - ポリアミンの測定法 - Google Patents
ポリアミンの測定法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、生体試料中のポリアミン、特に、尿中のポリ
アミンを該妨害物質の影響を受けることな（精度良く測
定し得る方法に関する。
アミンを該妨害物質の影響を受けることな（精度良く測
定し得る方法に関する。
（従来の技術）
尿などの生体試料中に存在するポリアミン（ジアミンを
包含する）は、癌の発生や進行状態と密接な関係がある
ことが知られている。上記ポリアミンとしては、カダヘ
リン、プトレシン、スペルミジン、スペルミンをはじめ
とする１１種類のポリアミンが見い出されており２ さ
らに該ポリアミンのアシル体であるアシルポリアミンも
知られている。生体試料中の上記ポリアミン（アシルポ
リアミンを包含する）の総量または個々の量の測定は。
包含する）は、癌の発生や進行状態と密接な関係がある
ことが知られている。上記ポリアミンとしては、カダヘ
リン、プトレシン、スペルミジン、スペルミンをはじめ
とする１１種類のポリアミンが見い出されており２ さ
らに該ポリアミンのアシル体であるアシルポリアミンも
知られている。生体試料中の上記ポリアミン（アシルポ
リアミンを包含する）の総量または個々の量の測定は。
癌の診断に有用な情報を提供するため、臨床的意義が大
きい。そのため、高精度でポリアミンを測定し得る方法
の開発が望まれている。
きい。そのため、高精度でポリアミンを測定し得る方法
の開発が望まれている。
ポリアミン測定の従来法としては、液体クロマトグラフ
ィーや電気泳動法を用いて生体試料中からポリアミンを
分離し２次いで螢光法またはニンヒドリン比色法により
該ポリアミンを定量する方法がよく知られている。しか
し、これらの方法は。
ィーや電気泳動法を用いて生体試料中からポリアミンを
分離し２次いで螢光法またはニンヒドリン比色法により
該ポリアミンを定量する方法がよく知られている。しか
し、これらの方法は。
試料の前処理操作が煩雑であり、測定に長い時間を要す
る。そのため−度に多くの検体が処理できない。さらに
特殊な技術３機器および設備を必要とする方法であるの
で２例えば臨床検査の場合においては一般的な方法であ
るとはいえない。
る。そのため−度に多くの検体が処理できない。さらに
特殊な技術３機器および設備を必要とする方法であるの
で２例えば臨床検査の場合においては一般的な方法であ
るとはいえない。
上記方法に比べて比較的操作の簡単なポリアミンの測定
法としては、ポリアミンにアミンオキシダーゼを作用さ
せ、生成した過酸化水素を４−アミノアンチピリン−フ
ェノール−ペルオキシダーゼ反応系において反応させる
ことにより、生成した色素を比色定量する方法が開発さ
れている（特開昭５６−３６９１８号公報）。この方法
においては、上記液体クロマトグラフィーや電気泳動法
のように試料中からポリアミンを純粋に単離する必要は
ない。しかし、試料中の還元性物質により測定に誤差を
生じるため、これらの還元性物質の除去をあらかじめ行
う必要がある。例えば、試料をアニオン性の陽イオン交
換樹脂を充填したカラムにかけて該還元性物質を除去す
る必要がある。この前処理操作のため、試料を自動分析
機にかけて１段階で測定することができないという欠点
がある。
法としては、ポリアミンにアミンオキシダーゼを作用さ
せ、生成した過酸化水素を４−アミノアンチピリン−フ
ェノール−ペルオキシダーゼ反応系において反応させる
ことにより、生成した色素を比色定量する方法が開発さ
れている（特開昭５６−３６９１８号公報）。この方法
においては、上記液体クロマトグラフィーや電気泳動法
のように試料中からポリアミンを純粋に単離する必要は
ない。しかし、試料中の還元性物質により測定に誤差を
生じるため、これらの還元性物質の除去をあらかじめ行
う必要がある。例えば、試料をアニオン性の陽イオン交
換樹脂を充填したカラムにかけて該還元性物質を除去す
る必要がある。この前処理操作のため、試料を自動分析
機にかけて１段階で測定することができないという欠点
がある。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の問題を解決するものであり。
その目的とするところは、生体試料中のポリアミン、特
に尿中ポリアミンを精度良く簡便に測定し得る測定法を
提供することにある。本発明の他の目的は、自動分析機
への適用か可能である上記ポリアミン測定法を提供する
ことにある。
に尿中ポリアミンを精度良く簡便に測定し得る測定法を
提供することにある。本発明の他の目的は、自動分析機
への適用か可能である上記ポリアミン測定法を提供する
ことにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明のポリアミンの測定法は、ポリアミンを含む試料
にジアミンオキシダーゼおよび／またはポリアミンオキ
シダーゼを作用させて、該ポリアミンをアミノアルキル
アルデヒドに変換し、さらに該アミノアルキルアルデヒ
ド の存在下でアミノアルキルアルデヒドデヒドロゲナーゼ
を作用させて，生成するＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ 。
にジアミンオキシダーゼおよび／またはポリアミンオキ
シダーゼを作用させて、該ポリアミンをアミノアルキル
アルデヒドに変換し、さらに該アミノアルキルアルデヒ
ド の存在下でアミノアルキルアルデヒドデヒドロゲナーゼ
を作用させて，生成するＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ 。
もしくは該ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨが関与する反応に
より生じた生成物を測定する方法であって，反応系に酸
性芳香族化合物を共存させることを特徴とする。
より生じた生成物を測定する方法であって，反応系に酸
性芳香族化合物を共存させることを特徴とする。
本発明方法において測定されるべき生体由来の試料は特
に限定されないが，尿，血液，生体組織などが挙げられ
る。末法は特に尿中ポリアミンの測定に有効である。
に限定されないが，尿，血液，生体組織などが挙げられ
る。末法は特に尿中ポリアミンの測定に有効である。
本発明において用いられ得るジアミンオキシダーゼ（Ｄ
ＡＯ）は、プトレシン、カダベリンおよびスペルミジン
などに作用する酵素（ＥＣ １．４．３．６）であり、
特にプトレシンを基質とする酵素はプトレシンオキシダ
ーゼ（ＥＣ １．４．３．１０）とも呼ばれる。
ＡＯ）は、プトレシン、カダベリンおよびスペルミジン
などに作用する酵素（ＥＣ １．４．３．６）であり、
特にプトレシンを基質とする酵素はプトレシンオキシダ
ーゼ（ＥＣ １．４．３．１０）とも呼ばれる。
このＤＡＯはいかなる起源のものでもよいが，例えば、
発芽大豆または麦などの植物由来，ブタ腎臓などの動物
由来のＤＡＯ，またはミクロコツカス属。
発芽大豆または麦などの植物由来，ブタ腎臓などの動物
由来のＤＡＯ，またはミクロコツカス属。
カルブイア属またはアスペルギルス属などの微生物由来
のＤＡＯを用いることができる。ポリアミンオキシダー
ゼ（Ｐへ〇）は、スペルミンおよびスペルミジンに作用
する酵素である。このＰＡＯはいかなる起源のものでも
よいが，例えば、ウシ血漿などの動物由来のＰＡＯ，大
麦などの植物由来のＰＡＯ。
のＤＡＯを用いることができる。ポリアミンオキシダー
ゼ（Ｐへ〇）は、スペルミンおよびスペルミジンに作用
する酵素である。このＰＡＯはいかなる起源のものでも
よいが，例えば、ウシ血漿などの動物由来のＰＡＯ，大
麦などの植物由来のＰＡＯ。
またはペニシリウム属，アスペルギルス属またはストレ
プトミセス属などの微生物由来のＰ＾（１（Ｂｉｏ−ｃ
ｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ
７４３（１９８３）４３１−４３６；Ｂｉｏｃｈｉｍ
ｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ
７０５（１９Ｂ２）１３３−１３８： 八ｇｒｉ．
Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ４５（１２）（１９
８１）３９４３−２９４５）を用いることができる。
プトミセス属などの微生物由来のＰ＾（１（Ｂｉｏ−ｃ
ｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ
７４３（１９８３）４３１−４３６；Ｂｉｏｃｈｉｍ
ｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ
７０５（１９Ｂ２）１３３−１３８： 八ｇｒｉ．
Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ４５（１２）（１９
８１）３９４３−２９４５）を用いることができる。
アミノアルキルアルデヒドデヒドロゲナーゼの種類は，
特に制限されないが，特にアミノブチルアルデヒドデヒ
ドロゲナーゼ（八ＢＡＬ−ＤＨ．ＥＣ １．２．１。
特に制限されないが，特にアミノブチルアルデヒドデヒ
ドロゲナーゼ（八ＢＡＬ−ＤＨ．ＥＣ １．２．１。
１９）が好適である。ＡＢＡＬ−ＤＨの起源は特に限定
されない。例えば、シュウトモナス属などの微生物由来
の八ＢＡＬ−ＤＨ （Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．
２３４ （８） （１９５９）２１４５−２１５０；Ａ
ｇｒｉ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ５０（８）（１９
８６）２００９−２０１６）を用いることができる。
されない。例えば、シュウトモナス属などの微生物由来
の八ＢＡＬ−ＤＨ （Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．
２３４ （８） （１９５９）２１４５−２１５０；Ａ
ｇｒｉ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ５０（８）（１９
８６）２００９−２０１６）を用いることができる。
本発明において用いられる酸性芳香族化合物としては，
安息香酸，ナフタレンスルホン酸，ベンゼンスルホネー
ト、ベンゼンサルフェート これら化合物のハロゲン誘
導体またはヒドロキシ誘導体などが用いられる。これら
の酸性芳香族化合物はポリアミン測定の反応系に添加す
ることにより。
安息香酸，ナフタレンスルホン酸，ベンゼンスルホネー
ト、ベンゼンサルフェート これら化合物のハロゲン誘
導体またはヒドロキシ誘導体などが用いられる。これら
の酸性芳香族化合物はポリアミン測定の反応系に添加す
ることにより。
還元性物質（例えば、尿中に存在する）の測定系への影
響が抑制される。
響が抑制される。
本発明方法による尿などの試料中のポリアミンの測定は
，例えば、次のようにして行われる。試料中のアシルポ
リアミンをも含めて測定する場合には、まず、試料をア
シルポリアミンアミドヒドロラーゼ（ＡＰＡＨ）で処理
し、該アシルポリアミンを脱アシル化し、遊離ポリアミ
ンに変換する。このＡＰＡＨの起源は特に限定されない
。次に、この試料に、上記ＤＡＯおよび／またはＰＡＯ
を含む試薬を作用させ、ポリアミンをアミノアルキルア
ルデヒドに変化させる。これにアミノアルキルアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼ、 ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ” （
以下、 ＮＡＤ（Ｐ）”とする）、および酸性芳香族化
合物を含む試薬を加えて、試料中のアミノアルキルアル
デヒドをアミノカルボン酸に変化させる。このときＮＡ
Ｄ”はＮＡＤ）Ｉに、そしてＮＡＤＰ＋はＮＡＤＰＨに
変化させる。
，例えば、次のようにして行われる。試料中のアシルポ
リアミンをも含めて測定する場合には、まず、試料をア
シルポリアミンアミドヒドロラーゼ（ＡＰＡＨ）で処理
し、該アシルポリアミンを脱アシル化し、遊離ポリアミ
ンに変換する。このＡＰＡＨの起源は特に限定されない
。次に、この試料に、上記ＤＡＯおよび／またはＰＡＯ
を含む試薬を作用させ、ポリアミンをアミノアルキルア
ルデヒドに変化させる。これにアミノアルキルアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼ、 ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ” （
以下、 ＮＡＤ（Ｐ）”とする）、および酸性芳香族化
合物を含む試薬を加えて、試料中のアミノアルキルアル
デヒドをアミノカルボン酸に変化させる。このときＮＡ
Ｄ”はＮＡＤ）Ｉに、そしてＮＡＤＰ＋はＮＡＤＰＨに
変化させる。
このような反応系において使用する各酵素の濃度は特に
制限されず、使用する反応条件や測定装置を考慮して適
宜法められる。酸性芳香族化合物の反応液中の濃度は、
測定すべき試料の種類などにより異なるが１通常、１０
〜５００ｍＭ 、好ましくは５０〜２００＋ｎＭである
。過少であると試料中の還元性物質によりポリアミンの
測定に誤差を生じる。例えば、後述のホルマザン色素に
よる発色を測定する系においては２発色がより強くなり
、正確なポリアミンの測定がなされ得ない。逆に過剰で
あると酵素反応が阻害される。反応系のｐＨは１通常約
４〜１０であり、 ＮＡＤ（Ｐ）＋の濃度につし）では
、アミノアルキルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（例えば
。
制限されず、使用する反応条件や測定装置を考慮して適
宜法められる。酸性芳香族化合物の反応液中の濃度は、
測定すべき試料の種類などにより異なるが１通常、１０
〜５００ｍＭ 、好ましくは５０〜２００＋ｎＭである
。過少であると試料中の還元性物質によりポリアミンの
測定に誤差を生じる。例えば、後述のホルマザン色素に
よる発色を測定する系においては２発色がより強くなり
、正確なポリアミンの測定がなされ得ない。逆に過剰で
あると酵素反応が阻害される。反応系のｐＨは１通常約
４〜１０であり、 ＮＡＤ（Ｐ）＋の濃度につし）では
、アミノアルキルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（例えば
。
ＡＢＡＬ−ＤＨ）の反応を最高に行うことができ、しか
も反応系の他の酵素を阻害しない程度の濃度であればい
かなる濃度でもよい。好ましくは０．１〜２０ｍＭが適
当である。通常、適当な緩衝液を用いて反応が行われる
。反応温度は酵素の至適温度などを考慮して選択され３
通常、２０〜４０°Ｃ程度に設定される。
も反応系の他の酵素を阻害しない程度の濃度であればい
かなる濃度でもよい。好ましくは０．１〜２０ｍＭが適
当である。通常、適当な緩衝液を用いて反応が行われる
。反応温度は酵素の至適温度などを考慮して選択され３
通常、２０〜４０°Ｃ程度に設定される。
上記反応により生じたＮＡＤＩ＋またはＮＡＤＰ）＋
（以下。
（以下。
ＮＡＤ （Ｐ） Ｈとする）は２例えば３４０ｎｍの吸
収を直接比色測定することにより測定され、試料中のポ
リアミン量が算出される。あるいは、 ＮＡＤ（Ｐ）＋
１が関与する反応に導き、その生成物を測定することに
よりＮＡＤ （Ｐ） Ｈが間接的に測定され、ポリアミ
ンの量が算出される。
収を直接比色測定することにより測定され、試料中のポ
リアミン量が算出される。あるいは、 ＮＡＤ（Ｐ）＋
１が関与する反応に導き、その生成物を測定することに
よりＮＡＤ （Ｐ） Ｈが間接的に測定され、ポリアミ
ンの量が算出される。
ＮＡＤ （Ｐ） Ｈを間接的に測定する方法のひとつに
ホルマザン色素を測定する方法がある。これは、電子伝
達体の存在下にホルマザン試薬を作用させる方法である
。上記電子伝達体としては２例えば。
ホルマザン色素を測定する方法がある。これは、電子伝
達体の存在下にホルマザン試薬を作用させる方法である
。上記電子伝達体としては２例えば。
フェナジンメトサルフェート、１−メトキシフェナジン
メトサルフェート ジアホラーゼが用いられる。これら
の濃度については特に制限はないが。
メトサルフェート ジアホラーゼが用いられる。これら
の濃度については特に制限はないが。
反応系内に０．１ｍＭ以上の割合で含有されることが好
ましい。ジアホラーゼを用いる場合には、０．１１Ｊ／
ｍ１以上あれば十分である。
ましい。ジアホラーゼを用いる場合には、０．１１Ｊ／
ｍ１以上あれば十分である。
上記ホルマザン試薬としては２例えば、ニトロテトラゾ
リウムブルー（ＮＴＢ）、 ３− （ｐ−ヨードフェニ
ル）−２−（ｐ−ニトロフェニル）−５ニフエニルテト
ラゾリウム（ＩＮＴ）または（３−（４，５−ジメチル
チアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾ
リウムプロミド（ＭＴＴ ）などが挙げられる。これら
の濃度についても特に制限はないが。
リウムブルー（ＮＴＢ）、 ３− （ｐ−ヨードフェニ
ル）−２−（ｐ−ニトロフェニル）−５ニフエニルテト
ラゾリウム（ＩＮＴ）または（３−（４，５−ジメチル
チアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾ
リウムプロミド（ＭＴＴ ）などが挙げられる。これら
の濃度についても特に制限はないが。
反応系内にＱ、０５ｍＭ〜５ｍＭの割合で含有されるこ
とが好ましい。ホルマザン試薬（テトラゾリウム塩）を
用いる測定系においては、 ＮＡＤ（Ｐ））ｌからの電
子が電子伝達体を介してホルマザン試薬に供与され。
とが好ましい。ホルマザン試薬（テトラゾリウム塩）を
用いる測定系においては、 ＮＡＤ（Ｐ））ｌからの電
子が電子伝達体を介してホルマザン試薬に供与され。
ホルマザン試薬はこれにより発色する。生じたホルマザ
ン色素はＮＡＤ （Ｐ） Ｈよりも分子吸光係数が高い
ため高感度に吸光度測定が行われる。
ン色素はＮＡＤ （Ｐ） Ｈよりも分子吸光係数が高い
ため高感度に吸光度測定が行われる。
別法としては、電子伝達体の存在下でレサズリンを作用
させ、生じたレゾルフィンの螢光を測定する方法が挙げ
られる。さらに別法として、フラビンモノヌクレオチド
（ＦＭＮ）の存在下にフラビンレダクターゼ（ＦＲ）を
作用させ、生じた還元型ＦＭＮに発光細菌のルシフェラ
ーゼ（ＬＣＦ）を作用させて生じる発光を測定する方法
もまた利用され得る。
させ、生じたレゾルフィンの螢光を測定する方法が挙げ
られる。さらに別法として、フラビンモノヌクレオチド
（ＦＭＮ）の存在下にフラビンレダクターゼ（ＦＲ）を
作用させ、生じた還元型ＦＭＮに発光細菌のルシフェラ
ーゼ（ＬＣＦ）を作用させて生じる発光を測定する方法
もまた利用され得る。
ＰＲおよびＬＣＦとしては発光細菌由来の酵素が用いら
れる。
れる。
本発明の測定法においては、上記のように、ポリアミン
からアミノアルキルアルデヒドを生じる反応；およびこ
れに、 ＮＡＤ（Ｐ）＋の存在下にアミノアルキルアル
デヒドデヒドロゲナーゼを作用させてＮＡＤ （Ｐ）
ｌ（を生じる反応；を別々に行う代わりに。
からアミノアルキルアルデヒドを生じる反応；およびこ
れに、 ＮＡＤ（Ｐ）＋の存在下にアミノアルキルアル
デヒドデヒドロゲナーゼを作用させてＮＡＤ （Ｐ）
ｌ（を生じる反応；を別々に行う代わりに。
上記反応に使用する酵素および試薬（酸性芳香族化合物
を包含する）を同時に試料に加えて、−段階で上記反応
を行ってもよい。さらにＮＡＤ （Ｐ） Ｈを。
を包含する）を同時に試料に加えて、−段階で上記反応
を行ってもよい。さらにＮＡＤ （Ｐ） Ｈを。
上記発色反応、螢光反応または発光反応により測定する
場合においては、これに使用する酵素や試薬は上記反応
においてＮＡＤ （Ｐ） Ｈを生成した後に反応系に加
えられてもよ（５あるいは、測定の当初からＤＡＯなど
と同時に試料に加えられてもよい。
場合においては、これに使用する酵素や試薬は上記反応
においてＮＡＤ （Ｐ） Ｈを生成した後に反応系に加
えられてもよ（５あるいは、測定の当初からＤＡＯなど
と同時に試料に加えられてもよい。
（作用）
本発明方法によれば２上記ポリアミンを測定する反応系
において、該反応系に酸性芳香族化合物を存在させるこ
とにより、試料中に存在する還元性物質の影響を受ける
ことな（高精度でポリアミンが測定され得る。そのため
、従来法のように。
において、該反応系に酸性芳香族化合物を存在させるこ
とにより、試料中に存在する還元性物質の影響を受ける
ことな（高精度でポリアミンが測定され得る。そのため
、従来法のように。
例えば陽イオン交換カラムを用いてこれら還元性物質を
カラム外へ除去する工程を必要としない。
カラム外へ除去する工程を必要としない。
このように−段階で反応を行うことが可能であるため１
本法は自動分析機のポリアミンの測定に利用され得る。
本法は自動分析機のポリアミンの測定に利用され得る。
本発明方法は、特に還元性物質を多量に含有する尿中の
ポリアミンの測定に有利に用いられる。
ポリアミンの測定に有利に用いられる。
（実施例）
以下に本発明を実施例について説明する。
実尤讃１−
尿中ポリアミンの測定を、ホルマザン発色系を用い、自
動分析機により行った。
動分析機により行った。
この測定に用いた自動分析機は日立７０５自動分析機（
日立製作断裂）であり、測定時の吸光度変化を、接続し
たコンピューターによりモニターした。自動分析機の測
定モードはＮ−Ｎ法であり６検体ブランク値は自動補正
されている。この測定に用いる試薬を次の組成により調
製した。
日立製作断裂）であり、測定時の吸光度変化を、接続し
たコンピューターによりモニターした。自動分析機の測
定モードはＮ−Ｎ法であり６検体ブランク値は自動補正
されている。この測定に用いる試薬を次の組成により調
製した。
試薬組成
（ａ）第一試薬；
（終濃度）
グツドバッファー、 ｐＨ７，００，２ＭトリトンＸ−
１００１，０％ アスコルビン酸オキシダーゼ ３．３Ｕ／ｍｆｌ八
ＰＡＨ５Ｕ／雌 ＭＴＴ ２０ μｇ／ｍ
１ジアホラーゼ ３１１／戚プト
レシンオキシダーゼ １５Ｕ／ｍＲベンゼンス
ルホン酸 ０．１Ｍ（ｂ）第二試薬； （終濃度） グツドバッファー、 ｐｌ＋７．０ ０．２Ｍ
トリトンＸ−１００１，０％ ＡＢＡＬ−ＤＨ０，５Ｕ／ｍＲ ＮＡＤ” １ ｍＭ上
記試薬を自動分析機にセットし、尿検体を該分析機にか
けた。自動分析に用いた試薬量および検体量は次のとお
りである：第二試薬５０μ！。
１００１，０％ アスコルビン酸オキシダーゼ ３．３Ｕ／ｍｆｌ八
ＰＡＨ５Ｕ／雌 ＭＴＴ ２０ μｇ／ｍ
１ジアホラーゼ ３１１／戚プト
レシンオキシダーゼ １５Ｕ／ｍＲベンゼンス
ルホン酸 ０．１Ｍ（ｂ）第二試薬； （終濃度） グツドバッファー、 ｐｌ＋７．０ ０．２Ｍ
トリトンＸ−１００１，０％ ＡＢＡＬ−ＤＨ０，５Ｕ／ｍＲ ＮＡＤ” １ ｍＭ上
記試薬を自動分析機にセットし、尿検体を該分析機にか
けた。自動分析に用いた試薬量および検体量は次のとお
りである：第二試薬５０μ！。
第二試薬５０μ！、および尿検体２０μ！。ここで用い
られた尿検体量２０μｉは、この自動分析機で最大の感
度（相対感度）が得られる量である。その他のの測定条
件は９反応温度３７°Ｃ１反応時間１０分。
られた尿検体量２０μｉは、この自動分析機で最大の感
度（相対感度）が得られる量である。その他のの測定条
件は９反応温度３７°Ｃ１反応時間１０分。
および測定波長５７０ｎｍ （比較波長５７０ｎｍ）で
ある。
ある。
２種の検体（Ａ、Ｂ）を用いて測定した結果を第１図に
示す。別に第一試薬にベンゼンスルホン酸（酸性芳香族
化合物）を含有しない試薬を調製し、これを用いて検体
Ａの測定を行った。その結果を曲線Ｃとして第１図に示
す。第１図から、酸性芳香族化合物であるヘンゼンスル
ホン酸を含有する上記第一試薬を用いた場合には、上記
還元性物質の影響による吸光度の上昇が抑えられるため
。
示す。別に第一試薬にベンゼンスルホン酸（酸性芳香族
化合物）を含有しない試薬を調製し、これを用いて検体
Ａの測定を行った。その結果を曲線Ｃとして第１図に示
す。第１図から、酸性芳香族化合物であるヘンゼンスル
ホン酸を含有する上記第一試薬を用いた場合には、上記
還元性物質の影響による吸光度の上昇が抑えられるため
。
検体ブランクの吸光度は上昇しないことがわかる。
つまり、尿中のポリアミンが還元性物質の影響を受ける
ことなく、正確に測定されることがわかる。
ことなく、正確に測定されることがわかる。
尖施開（
本発明実施例１において、ポリアミン含有濃度の異なる
検体（尿）７種についてそれぞれ測定を行った。別に従
来法としてポリアミンテスト−エンザイム（徳山曹達社
製；市販のポリアミン測定キット）を用いて、上記と同
一の７種の尿から分取した検体を測定した。測定は１検
体につき同時に２木ずつで行い、平均値をグラフにプロ
ットした。これらの測定値の相関関係を第２図に示す。
検体（尿）７種についてそれぞれ測定を行った。別に従
来法としてポリアミンテスト−エンザイム（徳山曹達社
製；市販のポリアミン測定キット）を用いて、上記と同
一の７種の尿から分取した検体を測定した。測定は１検
体につき同時に２木ずつで行い、平均値をグラフにプロ
ットした。これらの測定値の相関関係を第２図に示す。
第２図に示される直線は、 ｒ ＝０．９９７． Ｙ
＝１．０５９Ｘ−１，４７であり、良好な相関を示し
た。
＝１．０５９Ｘ−１，４７であり、良好な相関を示し
た。
（発明の効果）
本発明の測定法に従って尿中のポリアミンを測定すると
、ポリアミンを共存物質から分離する煩雑な操作を必要
とせず、特殊な技術、設備、および機器を必要とせず、
迅速、簡便、しかも正確に尿中ポリアミンを測定するこ
とができる。さらに。
、ポリアミンを共存物質から分離する煩雑な操作を必要
とせず、特殊な技術、設備、および機器を必要とせず、
迅速、簡便、しかも正確に尿中ポリアミンを測定するこ
とができる。さらに。
この測定法は自動分析への適用も可能であるので。
広く日常の臨床検査法として用いることができる。
このように９本発明のポリアミン測定法は、臨床検査の
分野で癌の発見１診断および治療に大きく貢献するもの
である。
分野で癌の発見１診断および治療に大きく貢献するもの
である。
４、パ の“ なＵ
第１図は本発明の測定法および従来の測定法により尿中
ポリアミンを自動分析機で測定した場合の反応時間と吸
光度との関係を示すグラフ、そして、第２図は本発明の
測定法と従来法であるカラム法との相関を示すグラフで
ある。
ポリアミンを自動分析機で測定した場合の反応時間と吸
光度との関係を示すグラフ、そして、第２図は本発明の
測定法と従来法であるカラム法との相関を示すグラフで
ある。
以上
Claims (1)
- １、ポリアミンを含む試料にジアミンオキシダーゼおよ
び／またはポリアミンオキシダーゼを作用させて、該ポ
リアミンをアミノアルキルアルデヒドに変換し、さらに
該アミノアルキルアルデヒドにＮＡＤ＾＋またはＮＡＤ
Ｐ＾＋の存在下でアミノアルキルアルデヒドデヒドロゲ
ナーゼを作用させて、生成するＮＡＤＨまたはＮＡＤＰ
Ｈ、もしくは該ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨが関与する反
応により生じた生成物を測定するポリアミンの測定方法
であって、反応系に酸性芳香族化合物を共存させること
を特徴とするポリアミンの測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62335805A JPH0698026B2 (ja) | 1987-12-28 | 1987-12-28 | ポリアミンの測定法 |
| EP88121718A EP0322858B1 (en) | 1987-12-28 | 1988-12-27 | A method for measuring the amount of polyamines in a biological sample |
| DE3851316T DE3851316T2 (de) | 1987-12-28 | 1988-12-27 | Verfahren zur Messung der Menge der Polyamine in einer biologischen Probe. |
| US07/291,141 US5081016A (en) | 1987-12-28 | 1988-12-28 | Method for measuring the amount of polyamines in a biological sample |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62335805A JPH0698026B2 (ja) | 1987-12-28 | 1987-12-28 | ポリアミンの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01174400A true JPH01174400A (ja) | 1989-07-10 |
| JPH0698026B2 JPH0698026B2 (ja) | 1994-12-07 |
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