JPS62232400A - オルニチンカルバモイルトランスフエラ−ゼまたはシトルリンの測定法 - Google Patents
オルニチンカルバモイルトランスフエラ−ゼまたはシトルリンの測定法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の目的〕
産業上の利用分野
本発明はオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼま
たはシトルリンの測定法に関する。オルニチンカルバモ
イルトランスフェラーゼ（ＥＣ２，１，３，３、以下ｒ
ｏＣＴｊという）およびシトルリンは肝臓の尿素量イク
ルに関与している物質であり、ＯＣＴはオルニチンとカ
ルバモイルリン酸よりシトルリンとリン酸を生成する反
応を触媒する。従って、本発明法は肝機能検査およびシ
トルリン血症の検査に用いることができる。
たはシトルリンの測定法に関する。オルニチンカルバモ
イルトランスフェラーゼ（ＥＣ２，１，３，３、以下ｒ
ｏＣＴｊという）およびシトルリンは肝臓の尿素量イク
ルに関与している物質であり、ＯＣＴはオルニチンとカ
ルバモイルリン酸よりシトルリンとリン酸を生成する反
応を触媒する。従って、本発明法は肝機能検査およびシ
トルリン血症の検査に用いることができる。
従来の技術
従来ＯＣＴまたはシトルリンの測定は以下に述べる方法
で行われてきた。Ｒｅ１ｃｈａｒｄらは、ＯＣＴがヒ酸
塩存在下でシトルリンよりカルハモイルヒ酸とオルニチ
ンを生成する反応を利用して、放射能ラベルした基質を
用いる方法、またはカルハミルヒ酸の非酵素的分解で生
じたアンモニアをＪ１１定する方法を報告している（Ｊ
、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、。
で行われてきた。Ｒｅ１ｃｈａｒｄらは、ＯＣＴがヒ酸
塩存在下でシトルリンよりカルハモイルヒ酸とオルニチ
ンを生成する反応を利用して、放射能ラベルした基質を
用いる方法、またはカルハミルヒ酸の非酵素的分解で生
じたアンモニアをＪ１１定する方法を報告している（Ｊ
、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、。
第５２巻、 ７０９−７１７頁、 １９５８年） ｏ
Ｂｒｏｗｎらおよび浜中らは、オルニチンにＯＣＴが作
用して生成したシトルリンをジアセチルモノオキシムで
比色定量する方法を報告している（Ｊ、 Ｌａｂ、 Ｃ
ｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、。
Ｂｒｏｗｎらおよび浜中らは、オルニチンにＯＣＴが作
用して生成したシトルリンをジアセチルモノオキシムで
比色定量する方法を報告している（Ｊ、 Ｌａｂ、 Ｃ
ｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、。
第５４巻、 ６１７−６２０頁、 １９５９年；特公昭
５６−３６９１９）。上記の各々の先行技術は、放射性
元素を用いるため安全性に問題があり、また測定時間が
長い、除蛋白の操作が必要、用いる試薬が不安定、血清
試料中に共存する尿素による妨害うけるなどの欠点があ
る。
５６−３６９１９）。上記の各々の先行技術は、放射性
元素を用いるため安全性に問題があり、また測定時間が
長い、除蛋白の操作が必要、用いる試薬が不安定、血清
試料中に共存する尿素による妨害うけるなどの欠点があ
る。
発明が解決しようとする問題点
本発明は全酵素法によるＯＣＴまたはシトルリンの測定
法を提供することを目的とする。本発明の別の目的は、
大量の試料を迅速、簡単に測定処理する方法を提供する
ことを目的とする。
法を提供することを目的とする。本発明の別の目的は、
大量の試料を迅速、簡単に測定処理する方法を提供する
ことを目的とする。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、肝機能検査および新生児の代謝異常疾患
の診断のためのマススクリーニングに利用することを目
的としてＯＣＴまたはシトルリンの測定法を鋭意検討し
たところ、オルニチン−ケト酸アミノトランスフェラー
ゼ（ＥＣ２，６，１，１３、以下「○ＫＡＴＪという）
、ピロリン−５−カルボン酸リダクターゼ（ＥＣ１，５
，１，２、以下ｒＰ５ＣＲ」という）、α−ケトグルタ
ル酸（以下「α−ＫＧＪという）、リン酸、還元型ピリ
ジンヌクレオチド補酵素およびシトルリンまたはＯＣＴ
のいずれか一方を含む試薬組成物を被検試料に作用せし
め還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の変化を測定する
方法を見出した。
の診断のためのマススクリーニングに利用することを目
的としてＯＣＴまたはシトルリンの測定法を鋭意検討し
たところ、オルニチン−ケト酸アミノトランスフェラー
ゼ（ＥＣ２，６，１，１３、以下「○ＫＡＴＪという）
、ピロリン−５−カルボン酸リダクターゼ（ＥＣ１，５
，１，２、以下ｒＰ５ＣＲ」という）、α−ケトグルタ
ル酸（以下「α−ＫＧＪという）、リン酸、還元型ピリ
ジンヌクレオチド補酵素およびシトルリンまたはＯＣＴ
のいずれか一方を含む試薬組成物を被検試料に作用せし
め還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の変化を測定する
方法を見出した。
本発明は、前述のようにＯＣＴの触媒する反応の平衡が
シトルリンの生成に傾いているところ、その逆反応を利
用するものであるが、本発明に開示した試薬組成物を用
いることにより反応の平衡が逆方向に移動することは全
く意想外なことであった。
シトルリンの生成に傾いているところ、その逆反応を利
用するものであるが、本発明に開示した試薬組成物を用
いることにより反応の平衡が逆方向に移動することは全
く意想外なことであった。
本発明法の反応系について詳細に説明すると、まずシト
ルリンはリン酸の存在下ＯＣＴの作用によりオルニチン
とカルバモイルリン酸に変化する。
ルリンはリン酸の存在下ＯＣＴの作用によりオルニチン
とカルバモイルリン酸に変化する。
オルニチンはα−ケトグルタル酸の存在下０ＫＡＴの作
用によりピロリン−５−カルボン酸に変化する。ピロリ
ン−５−カルボン酸は還元型ピリジンヌクレオチド褌酵
素の存在下Ｐ５ＣＲの作用のもとにプロリンを生成し、
同時に還元型ピリジンヌクレオチド補酵素は酸化型にな
る。このときの還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の変
化、すなわちその減少または酸化型補酵素の増加を測定
することによりＯＣＴまたはシトルリンが測定される。
用によりピロリン−５−カルボン酸に変化する。ピロリ
ン−５−カルボン酸は還元型ピリジンヌクレオチド褌酵
素の存在下Ｐ５ＣＲの作用のもとにプロリンを生成し、
同時に還元型ピリジンヌクレオチド補酵素は酸化型にな
る。このときの還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の変
化、すなわちその減少または酸化型補酵素の増加を測定
することによりＯＣＴまたはシトルリンが測定される。
還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の例としては還元型
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下ｒ Ｎ
Ａ Ｄ ＨＪという）または還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸（以下ｒ Ｎ Ａ Ｄ Ｐ
ＨＪという）が挙げられる。これら補酵素の測定は、好
ましくは還元型どりジンヌクレオチド補酵素の有する紫
外部における吸収または螢光強度の測定、ジアホラーゼ
の存在下テトラゾリウム化合物などの色原体を作用せし
めてホルマザン色素に導き、その可視部における吸収の
測定、または触媒の存在下レサズリンを作用せしめ生成
したレゾルフィンの螢光若しくは可視部における吸収の
測定により行われる。
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下ｒ Ｎ
Ａ Ｄ ＨＪという）または還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸（以下ｒ Ｎ Ａ Ｄ Ｐ
ＨＪという）が挙げられる。これら補酵素の測定は、好
ましくは還元型どりジンヌクレオチド補酵素の有する紫
外部における吸収または螢光強度の測定、ジアホラーゼ
の存在下テトラゾリウム化合物などの色原体を作用せし
めてホルマザン色素に導き、その可視部における吸収の
測定、または触媒の存在下レサズリンを作用せしめ生成
したレゾルフィンの螢光若しくは可視部における吸収の
測定により行われる。
以上の、本発明法の反応式を示せば次のとおりである。
本発明において、反応の条件は幅広く変えて行うことが
できる。例えば、温度は２５〜５０℃、好ましくは３０
〜４５℃、ｐＨは６．５〜８．５が好ましい。
できる。例えば、温度は２５〜５０℃、好ましくは３０
〜４５℃、ｐＨは６．５〜８．５が好ましい。
被検試料としては全血、血清、血漿、尿および組織抽出
物などが用いられる。マススクリーニングの場合は、血
液を濾紙にしみこませて乾燥したのち血色素を固定化し
たいわゆる血液ろ紙を用いるのがよい。
物などが用いられる。マススクリーニングの場合は、血
液を濾紙にしみこませて乾燥したのち血色素を固定化し
たいわゆる血液ろ紙を用いるのがよい。
以上述べた如く、本発明法は■０ＫＡＴ、Ｐ５ＣＲ，α
−ＫＧ、リン酸、還元型ピリジンヌクレオチド補酵素お
よびシトルリンを必須として用いるＯＣＴの測定法、お
よび■０ＫＡＴ、Ｐ５ＣＲ。
−ＫＧ、リン酸、還元型ピリジンヌクレオチド補酵素お
よびシトルリンを必須として用いるＯＣＴの測定法、お
よび■０ＫＡＴ、Ｐ５ＣＲ。
α−ＫＧ、リン酸、還元型ピリジンヌクレオチド補酵素
およびＯＣＴを必須として用いるシトルリンの測定法を
包含する。
およびＯＣＴを必須として用いるシトルリンの測定法を
包含する。
本発明において、ＯＣＴ、０ＫＡＴおよびＰ５ＣＲのそ
れぞれの酵素活性は、３７℃において１分間あたり１μ
ｍｏｌの基質を変化せしめる酵素量を１単位とした。
れぞれの酵素活性は、３７℃において１分間あたり１μ
ｍｏｌの基質を変化せしめる酵素量を１単位とした。
以下実施例をもって本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） ０．３ ｍｌ、
１ｍＭＮＡＤＨ０，２ｍｅ、０．ＩＭα−ＫＧｏ、１５
ｍ、３８０Ｕ／ｍ０ＫＡＴ Ｏ，０１１ｎ！、５０Ｕ
／ｍｌ’ Ｐ ５ ＣＲ０，０１−１水２．０３ｍ１’
、および血清試料０．２ｍｌ！を混合し、３７℃におい
て４０分間インキュベートした。次いで、０．３ Ｍシ
トルリン０．１−を加えさらに２０分間インキュベート
した。反応液の３４０ｎｍにおける吸収の減少を測定し
、試料のＯＣＴ活性を算出した。
１ｍＭＮＡＤＨ０，２ｍｅ、０．ＩＭα−ＫＧｏ、１５
ｍ、３８０Ｕ／ｍ０ＫＡＴ Ｏ，０１１ｎ！、５０Ｕ
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、および血清試料０．２ｍｌ！を混合し、３７℃におい
て４０分間インキュベートした。次いで、０．３ Ｍシ
トルリン０．１−を加えさらに２０分間インキュベート
した。反応液の３４０ｎｍにおける吸収の減少を測定し
、試料のＯＣＴ活性を算出した。
参考のため、市販のＯＣＴ活性測定用の試薬組成物（商
標名： ０ＣＴ−ＴＥＳＴ ｗａｋｏ 、和光純薬社製
）により同じ血清試料を測定した。
標名： ０ＣＴ−ＴＥＳＴ ｗａｋｏ 、和光純薬社製
）により同じ血清試料を測定した。
本発明法と公知の市販の試薬組成物による測定値の相関
関係は０．９７４で極めてよく一致した（第１図に示す
）。
関係は０．９７４で極めてよく一致した（第１図に示す
）。
実施例２
０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５＞ ０．３ ｍ、１
ｍＭＮＡＤＨ０，２ｍ、０．１Ｍα−ＫＧ０．１５ｍ、
３８０Ｕ／ｄＯＫＡＴ Ｏ，０１ｍｌ’、５０Ｕ／ｄ
Ｐ ５ ＣＲＯ，０１−１水２．０３１ｄ！、および血
清試料０．２ｒ！１１を混合し、３７℃において４０分
間インキュベートした。次いで、３００ Ｕ／ｍＺＯｃ
Ｔ Ｏ，１−を加えさらに２０分間インキュベートした
。反応液の３４０ｎｍにおける吸収の減少を測定し、試
料中のシトルリン量を算出した。
ｍＭＮＡＤＨ０，２ｍ、０．１Ｍα−ＫＧ０．１５ｍ、
３８０Ｕ／ｄＯＫＡＴ Ｏ，０１ｍｌ’、５０Ｕ／ｄ
Ｐ ５ ＣＲＯ，０１−１水２．０３１ｄ！、および血
清試料０．２ｒ！１１を混合し、３７℃において４０分
間インキュベートした。次いで、３００ Ｕ／ｍＺＯｃ
Ｔ Ｏ，１−を加えさらに２０分間インキュベートした
。反応液の３４０ｎｍにおける吸収の減少を測定し、試
料中のシトルリン量を算出した。
本発明はＯＣＴおよびシトルリンの酵素的測定法を提供
するものである。本発明によれば、大量の試料を迅速、
簡単に測定することができる。
するものである。本発明によれば、大量の試料を迅速、
簡単に測定することができる。
第１図は、本発明法と公知法により血清試料のＯＣＴ活
性を測定したときの相関関係を表す図である。
性を測定したときの相関関係を表す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ オルニチン−ケト酸アミノトランスフエラーゼ、ピ
ロリン−５−カルボン酸リダクターゼ、α−ケトグルタ
ル酸、リン酸、還元型ピリジンヌクレオチド補酵素およ
びシトルリンまたはオルニチンカルバモイルトランスフ
エラーゼのいずれか一方を含む試薬組成物を被検試料に
作用せしめ還元型ピリジンヌクレオチド補酵素の変化を
測定することを特徴とするオルニチンカルバモイルトラ
ンスフエラーゼまたはシトルリンの測定法。 ２ 還元型ピリジンヌクレオチド補酵素が還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチドである特許請求の範囲
第１項記載のオルニチンカルバモイルトランスフエラー
ゼまたはシトルリンの測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7344286A JPS62232400A (ja) | 1986-03-31 | 1986-03-31 | オルニチンカルバモイルトランスフエラ−ゼまたはシトルリンの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7344286A JPS62232400A (ja) | 1986-03-31 | 1986-03-31 | オルニチンカルバモイルトランスフエラ−ゼまたはシトルリンの測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62232400A true JPS62232400A (ja) | 1987-10-12 |
Family
ID=13518352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7344286A Pending JPS62232400A (ja) | 1986-03-31 | 1986-03-31 | オルニチンカルバモイルトランスフエラ−ゼまたはシトルリンの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62232400A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001048168A1 (fr) * | 1999-12-27 | 2001-07-05 | Shanghai Biowindow Gene Development Inc. | Nouveau polypeptide, gamma1-pyroline-5-hydroxy reductase 14, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
-
1986
- 1986-03-31 JP JP7344286A patent/JPS62232400A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001048168A1 (fr) * | 1999-12-27 | 2001-07-05 | Shanghai Biowindow Gene Development Inc. | Nouveau polypeptide, gamma1-pyroline-5-hydroxy reductase 14, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
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