JPH04293499A - カタラーゼ活性測定法 - Google Patents

カタラーゼ活性測定法

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JPH04293499A JP3083520A JP8352091A JPH04293499A JP H04293499 A JPH04293499 A JP H04293499A JP 3083520 A JP3083520 A JP 3083520A JP 8352091 A JP8352091 A JP 8352091A JP H04293499 A JPH04293499 A JP H04293499A
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    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、カタラーゼ活性の正確
、迅速かつ簡便な測定法で、臨床検査等で用いられてい
る自動分析計への適用も容易な定量法に関する。
【0002】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】カタラー
ゼは、生体系においては酸素毒の解毒作用を司る酵素と
してよく知られている。特に、この酵素の活性値測定の
重要性は臨床検査で高く、血清中のカタラーゼ活性は急
性及び慢性肝炎、肝癌、腎う腎炎で高値を示し、特に急
性膵炎で高活性値を示す臨床病理、24、68(197
5)こと等から、これら疾患の診断において測定意義は
高い。現在知られているカタラーゼ活性測定法としては
、過酸化水素の減少を過酸化水素の紫外部吸収の減少と
して測定する方法[ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリー(J.Bilo.Chem.)、195
,133(1952)]、過酸化水素の分解による酸素
の生成量を酸素電極により測定する方法[臨床病理、2
2、807(1973)]、生成熱を測定する方法[プ
ロシーディングス・オブ・ザ・ソサイアティ・オブ・エ
クスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メディスン
(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.)、
84,74(1953)]、沈澱物を測定する方法[ジ
ャーナル・オブ・バイオケミストリー(J.Bioch
em.,Tokyo,49,707(1961)]、反
応後の残存過酸化水素を滴定する方法[アクタ・ケミカ
・スカンジナビカ(Acta  Chem.Scand
.)、1,236,(1947)]または硫酸チタンと
複合物を形成させて、その吸光度を測定する方法[ツァ
イトシュリフト・フェール・フィジオロジッシェ・ヘミ
ー(Z.physiol.Chem.)、335,14
6(1964)]などがある。これらの測定法は特殊な
装置を必要としたり、強酸を使用したり、操作性や正確
性の点で問題が多く、特に迅速性と正確性を重要視する
臨床検査の分野では用いにくい方法ばかりである。
【0003】
【課題を解決するための手段】本発明は上記事情に対処
するためになされたものである。本発明のカタラーゼ測
定法は、アルコールの存在下、過酸化物をカタラーゼの
基質として反応させ、生成するアルデヒド類をアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼの作用でNADH量に変換し、この
増加量をNADHの特性吸収帯の吸光度から求めカタラ
ーゼ活性値を測定するものである。すなわち、本発明は
、カタラーゼを含有する疑のある生物試料に、過酸化物
、アルコール類、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド(NAD)およびアルデヒドデヒドロゲナーゼを作用
させることにより、上記アルコール類から対応するアル
デヒド類を生成させると共にアルデヒド類と、アルデヒ
ドデヒドロゲナーゼの作用でNADをその還元型(NA
DH)に変換し、このNADHの特性吸収帯の吸光度か
らカタラーゼ活性を求めることを特徴とするカタラーゼ
活性の測定法、および、(イ)アルコール、NADおよ
びアルデヒドデヒドロゲナーゼを含む緩衝液、並びに(
ロ)過酸化物またはその溶液を組合わせてなる、カタラ
ーゼ活性測定用試薬セットを提供するものである。この
反応過程を図式に示すと次の通りである。
【化1】
【0004】本発明の方法によれば、過酸化物、NAD
、アルコールを含むpH6〜9の緩衝液を測定試薬とし
、これに測定試料を加え上記反応を生起させ、生成する
NADHの特性吸収における吸光度から試料中のカタラ
ーゼ活性が求められる。生物試料としては、血清および
その他の組織試料から得られる液体が含まれる。過酸化
物としては、例えば過酸化水素、クメンペルオキシドな
どが好ましく用いられる。アルコールとしては、例えば
メタノール、エタノール、ブタノール等の低級アルカノ
ール、ベンジルアルコールが好ましく用いられる。アル
デヒドデヒドロゲナーゼとしては、例えばホルムアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼ、アセトアルデヒドデヒドロゲナ
ーゼが好ましく用いられる。本発明に使用される測定試
薬を具体的に挙げると、例えば過酸化水素:90〜54
0ミリモル/l、メタノール:1〜7ミリモル/l、N
AD:0.01〜3ミリモル/l、ホルムアルデヒドデ
ヒドロゲナーゼ:10〜1000U/l、を含むpH6
〜9の緩衝液(リン酸緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩
衝液など)である。本発明によるカタラーゼ活性の定量
は、反応を停止させるエンドポイント法により、求める
こともできるし、単位時間当りの吸光度変化を用いるレ
イトアッセイ法によって求めることもできる。また、本
発明によるカタラーゼ活性の定量は一般的な臨床検査用
の自動分析装置に適用することも非常に簡単である。
【0005】以下、本発明を実施例により具体的に説明
する。 実施例1 (1)  試薬処方 1)  試薬1 メタノール:2.5ミリモル/l、ホルムアルデヒドデ
ヒドロゲナーゼ:850U/l、NAD:0.75ミリ
モル/l 上記を含むpH7.8のリン酸緩衝液。 2)  試薬2 過酸化水素:270ミリモル/l を含むpH7.8のリン酸緩衝液。 (2)  測定操作 試薬1の3mlにカタラーゼ測定試料0.1mlを加え
、37℃で1〜5分予備加温を行った後、試薬2を0.
1ml加えて0.1分間〜5分間のNADHの特性吸収
帯での吸光度変化を測定する。このとき、既知活性のカ
タラーゼ溶液から活性値を算出することもできるし、N
ADHのモル分子吸光度を用いて算出することもできる
。図1に既知の活性値を有するカタラーゼ標準液を用い
て作成した検量線を示してあるが1200U/lまで直
線的に測定可能であるのが分かる。 実施例2 一般的なカタラーゼ測定法であるチタン法と本発明によ
る血清カタラーゼ活性値との相関関係を図2に示す。但
し、γ=0.9846、n=30である。両測定値は良
好な相関を有することが分かる。
【0006】
【発明の効果】以上のように、本発明によれば、簡単な
測定法により、従来法と相関の高い活性値を求めること
ができ、カタラーゼ活性測定の必要性の高い臨床検査に
おいては、NADHの変化量による、この分野で最も馴
染みの深い測定系で定量することができる。特に、本発
明の測定法は2試薬系であり、37℃での測定が可能で
あり、従来法のような特殊な装置も必要とせず、また機
器類を腐食する試薬も用いないため汎用性のある測定法
である。
【図面の簡単な説明】
【図1】  本発明によるカタラーゼ活性測定結果(直
線性)を示すグラフである。
【図2】  本発明及び従来法(チタン法)によるカタ
ラーゼ活性の相関性を示すグラフである。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】  カタラーゼを含有する疑のある生物試
    料に、過酸化物、アルコール類、ニコチンアミドアデニ
    ンジヌクレオチド(NAD)およびアルデヒドデヒドロ
    ゲナーゼを作用させることにより、上記アルコール類か
    ら対応するアルデヒド類を生成させると共にアルデヒド
    類とアルデヒドデヒドロゲナーゼの作用でNADをその
    還元型(NADH)に変換し、このNADHの特性吸収
    帯の吸光度からカタラーゼ活性を求めることを特徴とす
    るカタラーゼ活性の測定法。
  2. 【請求項2】(イ)アルコール、NADおよびアルデヒ
    ドデヒドロゲナーゼを含む緩衝液、並びに(ロ)過酸化
    物またはその溶液を組合わせてなる、カタラーゼ活性測
    定用試薬セット。
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