JPH05219991A - 酵素反応利用定量分析方法 - Google Patents
酵素反応利用定量分析方法Info
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- JPH05219991A JPH05219991A JP5903292A JP5903292A JPH05219991A JP H05219991 A JPH05219991 A JP H05219991A JP 5903292 A JP5903292 A JP 5903292A JP 5903292 A JP5903292 A JP 5903292A JP H05219991 A JPH05219991 A JP H05219991A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 定量測定系内で生じるＮＡＤＨの量を増加量
として直接測定することにより、試料中のＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を定量する定量
分析方法を提供する。 【構成】 還元型補酵素Ａ（ＣｏＡ−ＳＨ）と、ピルビ
ン酸又はα−ケトグルタル酸とを含有する試料に、ＮＡ
Ｄの存在下に、ＣｏＡ−ＳＨを基質としＮＡＤからＮＡ
ＤＨを生成し得る酵素を作用させ、生成するＮＡＤＨの
量を測定することにより、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピル
ビン酸又はα−ケトグルタル酸を定量する酵素反応利用
定量分析方法。
として直接測定することにより、試料中のＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を定量する定量
分析方法を提供する。 【構成】 還元型補酵素Ａ（ＣｏＡ−ＳＨ）と、ピルビ
ン酸又はα−ケトグルタル酸とを含有する試料に、ＮＡ
Ｄの存在下に、ＣｏＡ−ＳＨを基質としＮＡＤからＮＡ
ＤＨを生成し得る酵素を作用させ、生成するＮＡＤＨの
量を測定することにより、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピル
ビン酸又はα−ケトグルタル酸を定量する酵素反応利用
定量分析方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＣｏＡ−ＳＨを基質と
しＮＡＤからＮＡＤＨを生成し得る酵素を利用した、Ｃ
ｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の定量
分析方法に関する。
しＮＡＤからＮＡＤＨを生成し得る酵素を利用した、Ｃ
ｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の定量
分析方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、生体内の成分の定量分析方法のた
めに、ＮＡＤＨ［ＮＡＤ（ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド）の還元型］が利用されている。例えば、試
料中のピルビン酸（又はピルビン酸塩）を定量するため
に、ピルビン酸とＮＡＤＨとを乳酸デヒドロゲナーゼの
作用で乳酸とＮＡＤとに転化させ、分光光度計により３
４０ｎｍでの吸光度を測定することによりＮＡＤＨの減
少量を測定して、ピルビン酸を定量する方法がある。
めに、ＮＡＤＨ［ＮＡＤ（ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド）の還元型］が利用されている。例えば、試
料中のピルビン酸（又はピルビン酸塩）を定量するため
に、ピルビン酸とＮＡＤＨとを乳酸デヒドロゲナーゼの
作用で乳酸とＮＡＤとに転化させ、分光光度計により３
４０ｎｍでの吸光度を測定することによりＮＡＤＨの減
少量を測定して、ピルビン酸を定量する方法がある。
【０００３】しかしながら、上記のような従来のＮＡＤ
Ｈを利用する定量法に於ては、前以て所定量のＮＡＤＨ
を測定系内に存在させ、反応の完結後系内に残存するＮ
ＡＤＨの量を測定する減少法であるために、（１）測定
対象の成分の量が少ない場合には測定値が不正確であ
る、（２）測定できる成分の上限値が、定量前に系内に
存在させるＮＡＤＨの量により制限される、（３）ＮＡ
ＤＨの量の測定に使用する分光光度計の機種に応じて、
定量前に系内に存在させるＮＡＤＨの量を変える必要が
ある、（４）分析用試薬中に含有されているＮＡＤＨが
不安定である、等の問題点がある。
Ｈを利用する定量法に於ては、前以て所定量のＮＡＤＨ
を測定系内に存在させ、反応の完結後系内に残存するＮ
ＡＤＨの量を測定する減少法であるために、（１）測定
対象の成分の量が少ない場合には測定値が不正確であ
る、（２）測定できる成分の上限値が、定量前に系内に
存在させるＮＡＤＨの量により制限される、（３）ＮＡ
ＤＨの量の測定に使用する分光光度計の機種に応じて、
定量前に系内に存在させるＮＡＤＨの量を変える必要が
ある、（４）分析用試薬中に含有されているＮＡＤＨが
不安定である、等の問題点がある。
【０００４】上記の方法はこのような問題点を有するの
で、ピルビン酸にピルビン酸オキシダーゼを作用させて
発生した過酸化水素を発色指示薬系を使用して測定する
ピルビン酸の定量方法が利用されている。この方法は、
過酸化水素の増加量を測定する方法ではあるが、干渉物
質（還元物質）の影響を受けるので測定値の正確さに於
いて必ずしも十分満足できる方法とは言えない。
で、ピルビン酸にピルビン酸オキシダーゼを作用させて
発生した過酸化水素を発色指示薬系を使用して測定する
ピルビン酸の定量方法が利用されている。この方法は、
過酸化水素の増加量を測定する方法ではあるが、干渉物
質（還元物質）の影響を受けるので測定値の正確さに於
いて必ずしも十分満足できる方法とは言えない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、定量
測定系内で生じるＮＡＤＨの量を増加量として直接測定
することにより、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又
はα−ケトグルタル酸を定量する定量分析方法を提供す
ることにある。
測定系内で生じるＮＡＤＨの量を増加量として直接測定
することにより、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又
はα−ケトグルタル酸を定量する定量分析方法を提供す
ることにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、還元型補酵素
Ａ（ＣｏＡ−ＳＨ）と、ピルビン酸又はα−ケトグルタ
ル酸とを含有する試料に、ＮＡＤの存在下に、ＣｏＡ−
ＳＨを基質としＮＡＤからＮＡＤＨを生成し得る酵素を
作用させ、生成するＮＡＤＨの量を測定することによ
り、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグ
ルタル酸を定量することを特徴とする、酵素反応利用定
量分析方法である。
Ａ（ＣｏＡ−ＳＨ）と、ピルビン酸又はα−ケトグルタ
ル酸とを含有する試料に、ＮＡＤの存在下に、ＣｏＡ−
ＳＨを基質としＮＡＤからＮＡＤＨを生成し得る酵素を
作用させ、生成するＮＡＤＨの量を測定することによ
り、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグ
ルタル酸を定量することを特徴とする、酵素反応利用定
量分析方法である。
【０００７】本発明の好適な態様は下記の通りである。 （１）上記の酵素が、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合
体又は２−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体で
あることを特徴とする上記の定量分析方法。
体又は２−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体で
あることを特徴とする上記の定量分析方法。
【０００８】（２）ＮＡＤＨの量の測定を、ＮＡＤＨの
紫外部に於ける吸収又は蛍光を測定することにより行う
ことを特徴とする上記の定量分析方法。
紫外部に於ける吸収又は蛍光を測定することにより行う
ことを特徴とする上記の定量分析方法。
【０００９】（３）ＮＡＤＨの量の測定を、ＮＡＤＨと
反応して検出可能な物質に変化できる指示薬組成物（呈
色試薬組成物、蛍光試薬組成物、発光試薬組成物等）を
使用して行うことを特徴とする上記の定量分析方法。
反応して検出可能な物質に変化できる指示薬組成物（呈
色試薬組成物、蛍光試薬組成物、発光試薬組成物等）を
使用して行うことを特徴とする上記の定量分析方法。
【００１０】本発明の定量分析方法は、原理的にピルビ
ン酸又はα−ケトグルタル酸と、ＣｏＡ−ＳＨとを、Ｎ
ＡＤの存在下に、ＣｏＡ−ＳＨを基質としＮＡＤからＮ
ＡＤＨを生成し得る酵素（以下、「ＣＮ酵素」と略称す
ることがある）を作用させて、ピルビン酸又はα−ケト
グルタル酸とＣｏＡ−ＳＨとを反応させ、ＣｏＡ−ＳＨ
の反応量（同時に、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
の反応量）に対応してＮＡＤＨを生成する反応を利用す
る方法である。なお、本明細書に於ては、ピルビン酸は
ピルビン酸塩をも含めて意味するものであり、α−ケト
グルタル酸はα−ケトグルタル酸塩をも含めて意味する
ものである。
ン酸又はα−ケトグルタル酸と、ＣｏＡ−ＳＨとを、Ｎ
ＡＤの存在下に、ＣｏＡ−ＳＨを基質としＮＡＤからＮ
ＡＤＨを生成し得る酵素（以下、「ＣＮ酵素」と略称す
ることがある）を作用させて、ピルビン酸又はα−ケト
グルタル酸とＣｏＡ−ＳＨとを反応させ、ＣｏＡ−ＳＨ
の反応量（同時に、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
の反応量）に対応してＮＡＤＨを生成する反応を利用す
る方法である。なお、本明細書に於ては、ピルビン酸は
ピルビン酸塩をも含めて意味するものであり、α−ケト
グルタル酸はα−ケトグルタル酸塩をも含めて意味する
ものである。
【００１１】上記の反応は、ピルビン酸を基質とする場
合は式（Ａ）により、α−ケトグルタル酸を基質とする
場合は式（Ｂ）により表される。
合は式（Ａ）により、α−ケトグルタル酸を基質とする
場合は式（Ｂ）により表される。
【００１２】
【化１】
【００１３】
【化２】
【００１４】即ち、式（Ａ）の反応に於ては、ピルビン
酸とＣｏＡ−ＳＨとがＣＮ酵素（例えば、ピルビン酸デ
ヒドロゲナーゼ複合体）の作用により反応して、アセチ
ルＣｏＡと二酸化炭素とを生成し、同時にＮＡＤが還元
されてＮＡＤＨが生成する。また、式（Ｂ）の反応に於
ては、α−ケトグルタル酸とＣｏ−ＳＨとがＣＮ酵素
（例えば、α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合
体）の作用により反応して、スクシニルＣｏＡと二酸化
炭素とを生成し、同時にＮＡＤが還元されてＮＡＤＨが
生成する。
酸とＣｏＡ−ＳＨとがＣＮ酵素（例えば、ピルビン酸デ
ヒドロゲナーゼ複合体）の作用により反応して、アセチ
ルＣｏＡと二酸化炭素とを生成し、同時にＮＡＤが還元
されてＮＡＤＨが生成する。また、式（Ｂ）の反応に於
ては、α−ケトグルタル酸とＣｏ−ＳＨとがＣＮ酵素
（例えば、α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合
体）の作用により反応して、スクシニルＣｏＡと二酸化
炭素とを生成し、同時にＮＡＤが還元されてＮＡＤＨが
生成する。
【００１５】式（Ａ）及び式（Ｂ）から明らかなよう
に、上記の反応ではＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−
ケトグルタル酸の存在量に応じてＮＡＤＨが生成するの
で、ＮＡＤＨの量を測定することにより、ＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の量を測定する
ことが可能になる。上記の反応を利用する本発明に於て
は、ＮＡＤＨは増加量として測定できるので、本発明の
定量分析方法は従来のＮＡＤＨの減少量を測定する方法
が有する問題点を全く有しない。更に、ＮＡＤＨの量を
測定するので、過酸化水素系に於けるような干渉物質の
影響を受けることも無い。
に、上記の反応ではＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−
ケトグルタル酸の存在量に応じてＮＡＤＨが生成するの
で、ＮＡＤＨの量を測定することにより、ＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の量を測定する
ことが可能になる。上記の反応を利用する本発明に於て
は、ＮＡＤＨは増加量として測定できるので、本発明の
定量分析方法は従来のＮＡＤＨの減少量を測定する方法
が有する問題点を全く有しない。更に、ＮＡＤＨの量を
測定するので、過酸化水素系に於けるような干渉物質の
影響を受けることも無い。
【００１６】本発明に於いて、前記式（Ａ）で表される
反応及び式（Ｂ）で表される反応は、特定のＣＮ酵素を
使用する場合にはそれ自体公知であり、本発明に於いて
も公知の反応条件を使用して、前記式（Ａ）で表される
反応及び式（Ｂ）で表される反応を行わせることができ
る。例えば、定量分析の対象となる試料中に含有させ
る、ＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸及びα−ケトグルタル酸
の濃度は、一般的に０．１〜２０ｍＭ、特に０．５〜５
ｍＭであることが好ましい。定量目的の物質がＣｏＡ−
ＳＨである場合は、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
をＣｏＡ−ＳＨの少なくとも等モル量、好ましくは、Ｃ
ｏＡ−ＳＨの２〜１０モル倍量ほど試料中に含有させる
ことが必要であり、定量目的の物質がピルビン酸又はα
−ケトグルタル酸である場合は、ＣｏＡ−ＳＨをピルビ
ン酸又はα−ケトグルタル酸の少なくとも等モル量、好
ましくは、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の２〜１
０モル倍量ほど試料中に含有させることが必要である。
反応及び式（Ｂ）で表される反応は、特定のＣＮ酵素を
使用する場合にはそれ自体公知であり、本発明に於いて
も公知の反応条件を使用して、前記式（Ａ）で表される
反応及び式（Ｂ）で表される反応を行わせることができ
る。例えば、定量分析の対象となる試料中に含有させ
る、ＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸及びα−ケトグルタル酸
の濃度は、一般的に０．１〜２０ｍＭ、特に０．５〜５
ｍＭであることが好ましい。定量目的の物質がＣｏＡ−
ＳＨである場合は、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
をＣｏＡ−ＳＨの少なくとも等モル量、好ましくは、Ｃ
ｏＡ−ＳＨの２〜１０モル倍量ほど試料中に含有させる
ことが必要であり、定量目的の物質がピルビン酸又はα
−ケトグルタル酸である場合は、ＣｏＡ−ＳＨをピルビ
ン酸又はα−ケトグルタル酸の少なくとも等モル量、好
ましくは、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸の２〜１
０モル倍量ほど試料中に含有させることが必要である。
【００１７】これらの反応系に存在させるＮＡＤの量
は、定量目的の物質と等モル量よりも多くすることが必
要であり、定量目的の物質の２〜１０モル倍であること
が好ましい。
は、定量目的の物質と等モル量よりも多くすることが必
要であり、定量目的の物質の２〜１０モル倍であること
が好ましい。
【００１８】これらの反応は、一般に、１５〜４０℃の
範囲内の温度、６．０〜８．０の範囲内のｐＨで行うこ
とができる。これらの反応系には、必要に応じて更に、
界面活性剤、キレ−ト剤、高分子化合物、各種塩類等を
存在させてもよい。
範囲内の温度、６．０〜８．０の範囲内のｐＨで行うこ
とができる。これらの反応系には、必要に応じて更に、
界面活性剤、キレ−ト剤、高分子化合物、各種塩類等を
存在させてもよい。
【００１９】上記の反応で生成するＮＡＤＨの定量方法
は、それ自体公知であり、本発明に於けるＮＡＤＨの量
の測定のために、全ての公知のＮＡＤＨの定量方法を使
用することができる。例えば、ＮＡＤＨの紫外部（例え
ば３４０ｎｍ）での吸光度を測定する方法、ＮＡＤＨに
紫外線を照射し発生する蛍光の強さを測定する方法、Ｎ
ＡＤＨと反応して検出可能な物質に変化できる指示薬組
成物（呈色試薬組成物、蛍光試薬組成物、発光試薬組成
物等）を使用してＮＡＤＨの量を測定する方法（例え
ば、ジアホラーゼ、フェナジン誘導体等の電子伝達剤の
存在下にテトラゾリウム塩を還元して、生成したホルマ
ザンを比色する）などが使用できる。
は、それ自体公知であり、本発明に於けるＮＡＤＨの量
の測定のために、全ての公知のＮＡＤＨの定量方法を使
用することができる。例えば、ＮＡＤＨの紫外部（例え
ば３４０ｎｍ）での吸光度を測定する方法、ＮＡＤＨに
紫外線を照射し発生する蛍光の強さを測定する方法、Ｎ
ＡＤＨと反応して検出可能な物質に変化できる指示薬組
成物（呈色試薬組成物、蛍光試薬組成物、発光試薬組成
物等）を使用してＮＡＤＨの量を測定する方法（例え
ば、ジアホラーゼ、フェナジン誘導体等の電子伝達剤の
存在下にテトラゾリウム塩を還元して、生成したホルマ
ザンを比色する）などが使用できる。
【００２０】本発明の定量分析方法は、試料中に含有さ
れるＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
を定量する方法であるが、本発明の定量分析方法によ
り、反応（好ましくは酵素反応）によりＣｏＡ−ＳＨ、
ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成するような原
料を対象として定量することも可能である。
れるＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸
を定量する方法であるが、本発明の定量分析方法によ
り、反応（好ましくは酵素反応）によりＣｏＡ−ＳＨ、
ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成するような原
料を対象として定量することも可能である。
【００２１】例えば、下記に示すような反応生成物とし
てＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を
生成する酵素反応と、前記式（Ａ）で表される反応又は
式（Ｂ）で表される反応とを組み合わせることにより、
下記の酵素反応の原料を定量することができる。
てＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を
生成する酵素反応と、前記式（Ａ）で表される反応又は
式（Ｂ）で表される反応とを組み合わせることにより、
下記の酵素反応の原料を定量することができる。
【００２２】
【化３】
【００２３】
【化４】
【００２４】
【化５】
【００２５】
【化６】
【００２６】
【化７】
【００２７】上記の酵素反応は、反応生成物としてＣｏ
Ａ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成す
る酵素反応の例であって、反応生成物としてＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成するもの
であれば、特に限定されることなく、どのような酵素反
応であってもよい。
Ａ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成す
る酵素反応の例であって、反応生成物としてＣｏＡ−Ｓ
Ｈ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生成するもの
であれば、特に限定されることなく、どのような酵素反
応であってもよい。
【００２８】これらの酵素反応は、本発明の定量分析方
法とは別個に行ってもよいが、一般に、これらの酵素反
応と前記式（Ａ）で表される反応又は式（Ｂ）で表され
る反応とを一緒に行うことが好ましい。例えば、上記
（１）式の酵素反応と前記式（Ａ）で表される反応とを
一緒に行う場合は、アセチルＣｏＡを含む試料に、無機
燐酸（Ｐｉ）、ピルビン酸、ＮＡＤ、ホスフェートアセ
チルトランスフェラーゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ
複合体を添加し、生成するＮＡＤＨの量を測定すること
により、試料中のアセチルＣｏＡの量を測定することが
できる。
法とは別個に行ってもよいが、一般に、これらの酵素反
応と前記式（Ａ）で表される反応又は式（Ｂ）で表され
る反応とを一緒に行うことが好ましい。例えば、上記
（１）式の酵素反応と前記式（Ａ）で表される反応とを
一緒に行う場合は、アセチルＣｏＡを含む試料に、無機
燐酸（Ｐｉ）、ピルビン酸、ＮＡＤ、ホスフェートアセ
チルトランスフェラーゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ
複合体を添加し、生成するＮＡＤＨの量を測定すること
により、試料中のアセチルＣｏＡの量を測定することが
できる。
【００２９】更に、上記の酵素反応は、一段の反応に限
られることなく、他の酵素反応と組み合わされたもので
あってもよい。
られることなく、他の酵素反応と組み合わされたもので
あってもよい。
【００３０】例えば、下記の測定原理（１）［実施例１
に於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定す
ることによって試料中の尿素を定量することができる。
に於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定す
ることによって試料中の尿素を定量することができる。
【００３１】
【化８】
【００３２】また、下記の測定原理（２）［実施例２に
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のコレステロールを定量することが
できる。
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のコレステロールを定量することが
できる。
【００３３】
【化９】
【００３４】また、下記の測定原理（３）［実施例３に
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のリン脂質を定量することができ
る。
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のリン脂質を定量することができ
る。
【００３５】
【化１０】
【００３６】また、下記の測定原理（４）［実施例４に
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のクレアチニンを定量することがで
きる。
於ける測定原理］により、ＮＡＤＨの増加量を測定する
ことによって試料中のクレアチニンを定量することがで
きる。
【００３７】
【化１１】
【００３８】本発明の定量分析方法に於ては、個々の試
薬を使用して反応液を調製してもよく、また、酵素反応
の常法に従って、予め二個又は三個以上の試薬系を調製
しておき、定量分析に際してこれらの試薬系を適宜使用
するようにしてもよい。
薬を使用して反応液を調製してもよく、また、酵素反応
の常法に従って、予め二個又は三個以上の試薬系を調製
しておき、定量分析に際してこれらの試薬系を適宜使用
するようにしてもよい。
【００３９】
【実施例】次に、実施例及び比較例により本発明を更に
詳細に説明する。
詳細に説明する。
【００４０】［実施例１］本発明による尿素の定量分析
方法を示す。
方法を示す。
【００４１】下記の組成を有する反応液を調製した。 （反応液組成） ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １ｍＭ ＡＴＰ １ｍＭ ＴＰＰ １ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 １ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ０．５単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ） ２単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ２単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体 １０ｍＭ ＫＨＣＯ3
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １ｍＭ ＡＴＰ １ｍＭ ＴＰＰ １ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 １ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ０．５単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ） ２単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ２単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体 １０ｍＭ ＫＨＣＯ3
【００４２】上記の反応液１ｍｌに、定量用試料とし
て、それぞれ尿素を窒素量換算で２０、４０、６０、８
０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、又は２
００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液を５μ
ｌ添加し、得られた混合液を３７℃で５分間インキュベ
ートした。その後分光光度計により、この混合液の波長
３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。なお、試薬ブランク用として精製水を試料として添
加した。得られた３４０ｎｍに於ける吸光度と尿素濃度
（窒素量換算）との関係をプロットした図を図１に示
す。
て、それぞれ尿素を窒素量換算で２０、４０、６０、８
０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、又は２
００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液を５μ
ｌ添加し、得られた混合液を３７℃で５分間インキュベ
ートした。その後分光光度計により、この混合液の波長
３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。なお、試薬ブランク用として精製水を試料として添
加した。得られた３４０ｎｍに於ける吸光度と尿素濃度
（窒素量換算）との関係をプロットした図を図１に示
す。
【００４３】また、同時再現性を確認するために、上記
の反応液１ｍｌに、尿素を窒素量換算で５ｍｇ／ｄｌの
濃度で含有する尿素標準水溶液を５μｌ添加した混合液
を１０例作成し、得られた混合液を３７℃で５分間イン
キュベートし、この混合液の波長３４０ｎｍに於ける吸
光度を測定した。尿素を窒素量換算で１０又は５０ｍｇ
／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液についても同様
にして、それぞれ１０例の混合液を作成し、同様にして
吸光度を測定した。これらの測定値から得られた吸光度
の最小値、最大値、平均値、ＣＶ値（＝標準偏差／平均
値、同時再現性を表す）を表１に示す。
の反応液１ｍｌに、尿素を窒素量換算で５ｍｇ／ｄｌの
濃度で含有する尿素標準水溶液を５μｌ添加した混合液
を１０例作成し、得られた混合液を３７℃で５分間イン
キュベートし、この混合液の波長３４０ｎｍに於ける吸
光度を測定した。尿素を窒素量換算で１０又は５０ｍｇ
／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液についても同様
にして、それぞれ１０例の混合液を作成し、同様にして
吸光度を測定した。これらの測定値から得られた吸光度
の最小値、最大値、平均値、ＣＶ値（＝標準偏差／平均
値、同時再現性を表す）を表１に示す。
【００４４】［比較例１］従来の減少法による尿素の定
量分析方法を示す。
量分析方法を示す。
【００４５】下記の組成を有する反応液を調製した。 （反応液組成） ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １ｍＭ ＡＴＰ １０ｍＭ ＫＨＣＯ3 ０．２ｍＭ ＮＡＤＨ・Ｎａ2 １ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ０．５単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ） ２単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ １０単位／ｍｌ ラクテートデヒドロゲナーゼ複合体
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １ｍＭ ＡＴＰ １０ｍＭ ＫＨＣＯ3 ０．２ｍＭ ＮＡＤＨ・Ｎａ2 １ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ０．５単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ） ２単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ １０単位／ｍｌ ラクテートデヒドロゲナーゼ複合体
【００４６】上記の反応液１ｍｌに、定量用試料とし
て、それぞれ尿素を窒素量換算で２０、４０、６０、８
０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、又は２
００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液を５μ
ｌ添加し、得られた混合液を３７℃で５分間インキュベ
ートした。その後分光光度計により、この混合液の波長
３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。なお、試薬ブランク用として精製水を試料として添
加した。本例に於ては減少法であるために、試薬ブラン
クの吸光度から、尿素標準液を添加したものについての
吸光度を差し引いて、尿素量に対応する吸光度とした。
得られた吸光度と尿素濃度（窒素量換算）との関係をプ
ロットした図を図１に示す。
て、それぞれ尿素を窒素量換算で２０、４０、６０、８
０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、又は２
００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液を５μ
ｌ添加し、得られた混合液を３７℃で５分間インキュベ
ートした。その後分光光度計により、この混合液の波長
３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。なお、試薬ブランク用として精製水を試料として添
加した。本例に於ては減少法であるために、試薬ブラン
クの吸光度から、尿素標準液を添加したものについての
吸光度を差し引いて、尿素量に対応する吸光度とした。
得られた吸光度と尿素濃度（窒素量換算）との関係をプ
ロットした図を図１に示す。
【００４７】また、同時再現性を確認するために、上記
の反応液１ｍｌに、尿素を窒素量換算で５ｍｇ／ｄｌの
濃度で含有する尿素標準水溶液を５μｌ添加した混合液
を１０例作成し、得られた混合液を３７℃で５分間イン
キュベートし、この混合液の波長３４０ｎｍに於ける吸
光度を測定した。尿素を窒素量換算で１０又は５０ｍｇ
／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液についても同様
にして、それぞれ１０例の混合液を作成し、同様にして
吸光度を測定した。これらの測定値から得られた吸光度
（試薬ブランクの吸光度から、尿素標準液を添加したも
のについての吸光度を差し引いた値）の最小値、最大
値、平均値、ＣＶを表１に示す。
の反応液１ｍｌに、尿素を窒素量換算で５ｍｇ／ｄｌの
濃度で含有する尿素標準水溶液を５μｌ添加した混合液
を１０例作成し、得られた混合液を３７℃で５分間イン
キュベートし、この混合液の波長３４０ｎｍに於ける吸
光度を測定した。尿素を窒素量換算で１０又は５０ｍｇ
／ｄｌの濃度で含有する尿素標準水溶液についても同様
にして、それぞれ１０例の混合液を作成し、同様にして
吸光度を測定した。これらの測定値から得られた吸光度
（試薬ブランクの吸光度から、尿素標準液を添加したも
のについての吸光度を差し引いた値）の最小値、最大
値、平均値、ＣＶを表１に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】図１から明らかなように、実施例１に於て
は吸光度と尿素濃度との関係は広範囲の尿素濃度に亙っ
て原点を通る直線性を示しており、本発明の定量分析方
法が優れた効果を奏するのに対して、比較例１に於ては
吸光度と尿素濃度とが、尿素濃度（窒素量換算）８０ｍ
ｇ／ｄｌ以上では直線から外れ、測定できる尿素濃度の
範囲が狭くなっている。
は吸光度と尿素濃度との関係は広範囲の尿素濃度に亙っ
て原点を通る直線性を示しており、本発明の定量分析方
法が優れた効果を奏するのに対して、比較例１に於ては
吸光度と尿素濃度とが、尿素濃度（窒素量換算）８０ｍ
ｇ／ｄｌ以上では直線から外れ、測定できる尿素濃度の
範囲が狭くなっている。
【００５０】また、表１のデータから、実施例１で得ら
れたデータは、比較例１に比べて同時再現性が極めて優
れていることが明らかである。
れたデータは、比較例１に比べて同時再現性が極めて優
れていることが明らかである。
【００５１】［実施例２］本発明による尿素の定量分析
方法を示す。
方法を示す。
【００５２】下記の組成を有する測定試薬（Ｒ−１）及
び測定試薬（Ｒ−２）を調製した。 測定試薬（Ｒ−１）組成 ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ２ｍＭ ＡＴＰ ２ｍＭ ＴＰＰ ２ｍＭ ＮＡＤ ４ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 ２ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ４単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ４単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体
び測定試薬（Ｒ−２）を調製した。 測定試薬（Ｒ−１）組成 ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ２ｍＭ ＡＴＰ ２ｍＭ ＴＰＰ ２ｍＭ ＮＡＤ ４ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 ２ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ４単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ４単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体
【００５３】測定試薬（Ｒ−２）組成 ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） ２０ｍＭ ＫＨＣＯ3 １単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ）
Ｈ７．０） ２０ｍＭ ＫＨＣＯ3 １単位／ｍｌ ウレアーゼ（ATP-hydrolysing ）
【００５４】測定試薬（Ｒ−１）０．５ｍｌに実施例１
で使用した尿素標準水溶液５μｌを添加し、３７℃で５
分間インキュベートし、次いで測定試薬（Ｒ−２）を
０．５μｌ添加して更に３７℃で５分間インキュベート
した後、実施例１に於けると同様にしてこの混合液の波
長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。得られた吸光度と尿素濃度との関係は広範囲の尿素
濃度に亙って原点を通る直線性を示していた。
で使用した尿素標準水溶液５μｌを添加し、３７℃で５
分間インキュベートし、次いで測定試薬（Ｒ−２）を
０．５μｌ添加して更に３７℃で５分間インキュベート
した後、実施例１に於けると同様にしてこの混合液の波
長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度を測定し
た。得られた吸光度と尿素濃度との関係は広範囲の尿素
濃度に亙って原点を通る直線性を示していた。
【００５５】［実施例３］本発明によるコレステロール
の定量分析方法を示す。
の定量分析方法を示す。
【００５６】下記の組成を有する反応液を調製した。 （反応液組成） ５０ｍＭ ＰＩＰＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液
（ｐＨ６．２） １ｍＭ パルミトイルＣｏＡ １ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ピルビン酸カリウム １ｍＭ ＴＰＰ ２単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体 ２単位／ｍｌ コレステロールアシルトランスフェラ
ーゼ
（ｐＨ６．２） １ｍＭ パルミトイルＣｏＡ １ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ピルビン酸カリウム １ｍＭ ＴＰＰ ２単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体 ２単位／ｍｌ コレステロールアシルトランスフェラ
ーゼ
【００５７】上記の反応液１ｍｌに、定量用試料とし
て、それぞれコレステロールを３００、６００、９０
０、１２００、又は１５００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有す
るコレステロール標準水溶液を１０μｌ添加し、得られ
た混合液を３７℃で５分間インキュベートした。その後
分光光度計により、この混合液の波長３４０ｎｍに於け
るＮＡＤＨに基づく吸光度を測定した。なお、試薬ブラ
ンク用として精製水を試料として添加した。得られた３
４０ｎｍに於ける吸光度とコレステロール濃度との関係
をプロットした図を図２に示す。
て、それぞれコレステロールを３００、６００、９０
０、１２００、又は１５００ｍｇ／ｄｌの濃度で含有す
るコレステロール標準水溶液を１０μｌ添加し、得られ
た混合液を３７℃で５分間インキュベートした。その後
分光光度計により、この混合液の波長３４０ｎｍに於け
るＮＡＤＨに基づく吸光度を測定した。なお、試薬ブラ
ンク用として精製水を試料として添加した。得られた３
４０ｎｍに於ける吸光度とコレステロール濃度との関係
をプロットした図を図２に示す。
【００５８】図２から明らかなように、実施例３に於て
は吸光度とコレステロール濃度との関係は広範囲のコレ
ステロール濃度に亙って原点を通る直線性を示してい
る。
は吸光度とコレステロール濃度との関係は広範囲のコレ
ステロール濃度に亙って原点を通る直線性を示してい
る。
【００５９】［実施例４］本発明による血清中のリン脂
質の定量分析方法を示す。
質の定量分析方法を示す。
【００６０】下記の組成を有する反応液を調製した。 （反応液組成） ５０ｍＭ ＢＥＳを緩衝剤とするグッドの緩衝液（ｐ
Ｈ７．０） １ｍＭ ＣａＣｌ2 １ｍＭ ＴＰＰ ０．０１％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ５ｍＭ α−ケトグルタレート １ｍＭ ＮＡＤ ２単位／ｍｌ ２−オキソグルタレートデヒドロゲナ
ーゼ複合体 ２単位／ｍｌ フォスフォリパーゼＤ ５単位／ｍｌ コリンアセチルトランスフェラーゼ １ｍＭ アセチルＣｏＡ
Ｈ７．０） １ｍＭ ＣａＣｌ2 １ｍＭ ＴＰＰ ０．０１％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ５ｍＭ α−ケトグルタレート １ｍＭ ＮＡＤ ２単位／ｍｌ ２−オキソグルタレートデヒドロゲナ
ーゼ複合体 ２単位／ｍｌ フォスフォリパーゼＤ ５単位／ｍｌ コリンアセチルトランスフェラーゼ １ｍＭ アセチルＣｏＡ
【００６１】上記の反応液１ｍｌに、定量用試料とし
て、それぞれ健康人の血清を５、１０、２０、４０、６
０、８０、又は１００μｌ添加し、得られた混合液を３
７℃で５分間インキュベートした。その後分光光度計に
より、この混合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに
基づく吸光度を測定した。なお、試薬ブランク用として
精製水を試料として添加した。得られた３４０ｎｍに於
ける吸光度と血清の添加量との関係をプロットした図を
図３に示す。
て、それぞれ健康人の血清を５、１０、２０、４０、６
０、８０、又は１００μｌ添加し、得られた混合液を３
７℃で５分間インキュベートした。その後分光光度計に
より、この混合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに
基づく吸光度を測定した。なお、試薬ブランク用として
精製水を試料として添加した。得られた３４０ｎｍに於
ける吸光度と血清の添加量との関係をプロットした図を
図３に示す。
【００６２】図３から明らかなように、実施例４に於て
は吸光度と血清の添加量との関係は広範囲の血清の添加
量に亙って原点を通る直線性を示している。
は吸光度と血清の添加量との関係は広範囲の血清の添加
量に亙って原点を通る直線性を示している。
【００６３】［実施例５］本発明によるクレアチニンの
定量分析方法を示す。
定量分析方法を示す。
【００６４】下記の組成を有する反応液を調製した。 （反応液組成） ５０ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ4 ｐＨ７．５ １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ５ｍＭ Ｌ−グルタミン酸ナトリウム ２ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ２ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ＴＰＰ １ｍＭ ＡＴＰ ２ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 １０単位／ｍｌ クレアチニンデイミナーゼ ２単位／ｍｌ グルタミンシンセターゼ ２単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ２単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体
【００６５】上記の反応液１ｍｌに、定量用試料とし
て、それぞれクレアチニンを５、１０、２０、３０、４
０、又は５０ｍｇ／ｄｌの濃度で含有するクレアチニン
標準水溶液を５０μｌ添加し、得られた混合液を３７℃
で５分間インキュベートした。その後分光光度計によ
り、この混合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基
づく吸光度を測定した。なお、試薬ブランク用として精
製水を試料として添加した。得られた３４０ｎｍに於け
る吸光度とクレアチニン濃度との関係をプロットした図
を図４に示す。
て、それぞれクレアチニンを５、１０、２０、３０、４
０、又は５０ｍｇ／ｄｌの濃度で含有するクレアチニン
標準水溶液を５０μｌ添加し、得られた混合液を３７℃
で５分間インキュベートした。その後分光光度計によ
り、この混合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基
づく吸光度を測定した。なお、試薬ブランク用として精
製水を試料として添加した。得られた３４０ｎｍに於け
る吸光度とクレアチニン濃度との関係をプロットした図
を図４に示す。
【００６６】図４から明らかなように、実施例５に於て
は吸光度とクレアチニン濃度との関係は広範囲のクレア
チニン濃度に亙って原点を通る直線性を示している。
は吸光度とクレアチニン濃度との関係は広範囲のクレア
チニン濃度に亙って原点を通る直線性を示している。
【００６７】［実施例６］本発明によるクレアチニンの
定量分析方法を示す。
定量分析方法を示す。
【００６８】下記の組成を有する測定試薬（Ｒ−１）及
び測定試薬（Ｒ−２）を調製した。 測定試薬（Ｒ−１）組成 ５０ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ4 ｐＨ７．５ １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ５ｍＭ Ｌ−グルタミン酸ナトリウム ２ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ２ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ＴＰＰ ２ｍＭ ＡＴＰ ４ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 ４単位／ｍｌ グルタミンシンセターゼ ４単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ４単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体
び測定試薬（Ｒ−２）を調製した。 測定試薬（Ｒ−１）組成 ５０ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ4 ｐＨ７．５ １０ｍＭ ＭｇＣｌ2 ５ｍＭ Ｌ−グルタミン酸ナトリウム ２ｍＭ フォスフォエノールピルビン酸ナトリウム ２ｍＭ ＮＡＤ ２ｍＭ ＴＰＰ ２ｍＭ ＡＴＰ ４ｍＭ ＣｏＡＬｉ3 ４単位／ｍｌ グルタミンシンセターゼ ４単位／ｍｌ ピルベートキナーゼ ４単位／ｍｌ ピルベートデヒドロゲナーゼ複合体
【００６９】測定試薬（Ｒ−２）組成 ５０ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ4 ｐＨ７．５ ２０単位／ｍｌ クレアチニンデイミナーゼ
【００７０】測定試薬（Ｒ−１）０．５ｍｌに実施例５
で使用したクレアチニン標準水溶液５０μｌを添加し、
３７℃で５分間インキュベートし、次いで測定試薬（Ｒ
−２）を０．５μｌ添加して更に３７℃で５分間インキ
ュベートした後、実施例５に於けると同様にしてこの混
合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度
を測定した。得られた吸光度とクレアチニン濃度との関
係は広範囲のクレアチニン濃度に亙って原点を通る直線
性を示していた。
で使用したクレアチニン標準水溶液５０μｌを添加し、
３７℃で５分間インキュベートし、次いで測定試薬（Ｒ
−２）を０．５μｌ添加して更に３７℃で５分間インキ
ュベートした後、実施例５に於けると同様にしてこの混
合液の波長３４０ｎｍに於けるＮＡＤＨに基づく吸光度
を測定した。得られた吸光度とクレアチニン濃度との関
係は広範囲のクレアチニン濃度に亙って原点を通る直線
性を示していた。
【００７１】
【発明の効果】本発明の定量分析方法は、定量測定系内
で生じるＮＡＤＨの量を増加量として直接測定すること
により、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケ
トグルタル酸を、広い濃度範囲に亙って同時再現性よく
定量することができると言う顕著に優れた効果を奏する
ものである。本発明の定量分析方法は、酵素反応により
ＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生
成する反応と組み合わせることにより、その原料を定量
することが可能であり、極めて広範囲の物質の定量分析
に利用することができるものである。
で生じるＮＡＤＨの量を増加量として直接測定すること
により、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケ
トグルタル酸を、広い濃度範囲に亙って同時再現性よく
定量することができると言う顕著に優れた効果を奏する
ものである。本発明の定量分析方法は、酵素反応により
ＣｏＡ−ＳＨ、ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を生
成する反応と組み合わせることにより、その原料を定量
することが可能であり、極めて広範囲の物質の定量分析
に利用することができるものである。
【図１】実施例１及び比較例１に於いて得られた、３４
０ｎｍに於ける吸光度と尿素濃度（窒素量換算）との関
係をプロットした図である。
０ｎｍに於ける吸光度と尿素濃度（窒素量換算）との関
係をプロットした図である。
【図２】実施例３に於いて得られた、３４０ｎｍに於け
る吸光度とコレステロール濃度との関係をプロットした
図である。
る吸光度とコレステロール濃度との関係をプロットした
図である。
【図３】実施例４に於いて得られた、３４０ｎｍに於け
る吸光度と血清の添加量との関係をプロットした図であ
る。
る吸光度と血清の添加量との関係をプロットした図であ
る。
【図４】実施例５に於いて得られた、３４０ｎｍに於け
る吸光度とクレアチニン濃度との関係をプロットした図
である。
る吸光度とクレアチニン濃度との関係をプロットした図
である。
Claims (1)
- 【請求項１】 還元型補酵素Ａ（ＣｏＡ−ＳＨ）と、ピ
ルビン酸又はα−ケトグルタル酸とを含有する試料に、
ＮＡＤの存在下に、ＣｏＡ−ＳＨを基質としＮＡＤから
ＮＡＤＨを生成し得る酵素を作用させ、生成するＮＡＤ
Ｈの量を測定することにより、試料中のＣｏＡ−ＳＨ、
ピルビン酸又はα−ケトグルタル酸を定量することを特
徴とする、酵素反応利用定量分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5903292A JPH05219991A (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 酵素反応利用定量分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5903292A JPH05219991A (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 酵素反応利用定量分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05219991A true JPH05219991A (ja) | 1993-08-31 |
Family
ID=13101547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5903292A Withdrawn JPH05219991A (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 酵素反応利用定量分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05219991A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008047802A1 (en) | 2006-10-18 | 2008-04-24 | National University Corporation Nagoya University | D-serine dehydratase and use thereof |
| CN113075139A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-06 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种稳定的双试剂血氨测定试剂盒 |
-
1992
- 1992-02-10 JP JP5903292A patent/JPH05219991A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008047802A1 (en) | 2006-10-18 | 2008-04-24 | National University Corporation Nagoya University | D-serine dehydratase and use thereof |
| CN113075139A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-06 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种稳定的双试剂血氨测定试剂盒 |
| CN113075139B (zh) * | 2021-03-29 | 2022-10-11 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种稳定的双试剂血氨测定试剂盒 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19990518 |