JPH01128911A - 皮膚化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、顔面等に塗布して用いることのできる皮膚
化粧料に関するものである。

〔従来の技術〕

スーパーオキシドジスムターゼは、動物、植物。

微生物等の生体内に広く分布する酵素であり、最近、こ
のスーパーオキシドジスムターゼの酵素作用を応用した
化粧料がいくつか提案されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、スーパーオキシドジスムターゼをそのま
ま化粧料に用いると、■化粧料の製造時に酵素活性が低
下しやすい、■酵素が原因となって化粧料の色や匂いが
経口的に変化しやすい、■酵素が原因となって皮膚に刺
激やアレルギーを与えやすい、等の問題があり、その解
決が望まれていた。

この発明は、このような事情に鑑みなされたもので、経
口的安定性と皮膚へのなじみ性が改善された修飾スーパ
ーオキシドジスムターゼ含有皮膚化粧料の提供をその目
的とする。

〔問題点を解決するための手段］ 上記の目的を達成するため、この発明の皮膚化粧料は、
銅２亜鉛型スーパーオキシドジスムターゼに多１１！類
を結合させた修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶
性多価アルコールとを必須成分とするという構成をとる
。

〔作用〕

すなわち、この発明の皮膚化粧料は、銅、亜鉛型スーパ
ーオキシドジスムターゼに多ＩＩＩを結合させた修飾ス
ーパーオキシドジスムターゼを含有するため、従来から
問題とされていた経口的安定性と皮膚へのなじみ性が改
善されているものである。

つぎに、この発明の詳細な説明する。

この発明に用いる銅、亜鉛型スーパーオキシドジスムタ
ーゼは公知の物質で、植物の葉や動物の血球、肝臓、胎
盤等から得られる。そして、この酵素は、経皮吸収され
て真皮の線維芽細胞や表皮の基底細胞に働きかけ優れた
老化防止効果を発揮する。

上記スーパーオキシドジスムターゼを修飾するために用
いる多ｔ、ｖ　類としては、デキストラン、澱粉、プル
ラン、イヌリン、キサンタンガム、キチン、マンナン、
セルロース、ペクチン、カラゲナン、アルギン酸等があ
げられ、単独で使用しても併用してもよい。これらの多
ｊａ類の種類および分子量は特に限定されないか、抗原
性抑制の観点から、分子ｆｆ１２０００以上のものが望
ましい。また、これらの多糖類のうち、特にデキストラ
ンは安全性が高く、水中での経口的安定性に優れている
ため、好適である。そして、その分子量は、効果の点か
ら１０００〜１０００００のもの、特に６００００〜９
００００のものが好適である。

この発明の修飾スーパーオキシドジスムターゼは、上記
スーパーオキシドジスムターゼと上記多ｌ！類とを用い
、例えばつぎのようにして製造することができる。すな
わち、まず上記多糖類を適当な結合剤との結合によって
活性化する。そして、上記活性北条ｔＪ！　Ｍの活性部
位とスーパーオキシドジスムターゼのアミノ基とを結合
させることにより、スーパーオキシドジスムターゼの修
飾を行う。

活性化ポリアルキレングリコールの過剰な活性基は、上
記修飾反応後、リジン、グリシン、アミノエタノール等
のアミン基を存する化合物と反応させて後処理を行う。

また、残存している未反応の結合剤等は、限外濾過等に
よって分離除去する。

このようにして目的とする修飾スーパーオキシドジスム
ターゼを製造することができる。

上記製法比おいて、多ＩＪ！類を活性化する結合剤およ
び結合方法は特に限定されるものではなく、酵素を失活
させるような反応条件によるものでなければどのような
ものであってもよい。例えば、臭化シアン等の試薬を用
いて活性化した多糖類を酵素のアミノ基と反応させて結
合させる方法や、多糖類を過ヨウ素酸等で酸化してアル
デヒド基をつくったのち酵素のアミノ基に結合させる方
法、塩化シアヌルを結合剤としてシアヌル化多糖類とし
てから酵素のアミノ基に結合させる方法、多糖類（アミ
ノ基がないものについてはアミノ基を導入したもの）を
ブロモアセチルプロミド等と反応させてブロモアセチル
化したりグルタルアルデヒド等を用いたりして酵素のア
ミノ基に結合させる方法、多Ｗ類にカルボキシメチル基
やアルデヒド基を経由してカルボキシル基を導入したの
ち酵素のアミノ基に結合させま方法等があげられる。ま
た、上記カルボキシル基導入多糖類（カルボキシル基を
有する多Ｉ！類はそのままのもの）と酵素のアミノ基と
の結合を、カルボジイミド等の結合剤を用いて結合する
ようにしたり、カルボキシル基をＮ−ヒドロキシコハク
酸イミド等でさらに活性エステル化したのち結合するよ
うにしてもよい。

なお、上記スーパーオキシドジスムターゼと多糖類の修
飾反応は、酵素の失活を防ぐために、中性もしくは弱ア
ルカリ溶液中において室温で行うことが好適である。ま
た、上記スーパーオキシドジスムターゼと多糖類の配合
割合は、用いる多糖類の分子量や構造によって異なり、
必ずしも限定されるものではないが、皮膚とのなじみ性
を考慮すれば、多ｔＪ３ｉ　！　ｆｆｉが、スーパーオ
キシドジスムターゼ量に対し、重量基準で０．５倍より
も多いことが好ましい。

このようにして得られる修飾スーパーオキシドジスムタ
ーゼは、高い活性を維持しており、しかも、抗原性が殆
どもしくは完全に抑制されている。

上記修飾スーパーオキシドジスムターゼとともにこの発
明に用いる水溶性多価アルコールは、上記修飾スーパー
オキシドジスムターゼの水溶液中での経口的劣化を抑制
する働きをするもので、例えばエチレングリコール、プ
ロピレングリコール。

１．３−ブチレングリコール、１．４−ブチレングリコ
ール、ジブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリ
ン、グルコース、マルトール、マルチトール、蔗糖、フ
ラクトール、キシリトール、ソルビトール、マレトリオ
ース、スレイトール、エリスリトールがあげられる。こ
れらは単独で用いても２種以上を併用してもよい。

この発明の皮膚化粧料は、上記修飾スーパーオキシドジ
スムターゼと、水溶性多価アルコールとを用い、通常の
化粧料と同様にして製造することができる。例えば精製
水に修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶性多価ア
ルコールとを均一に混合することによりスキンローショ
ンを得ることができる。また、油性物質や乳化剤を組み
合わせることにより化粧用乳液や化粧用クリーム等を得
ることができる。もちろん、上記各種化粧料には、必要
に応じて着色剤、防腐剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤等
の添加物を適宜配合することができる。

上記製法において、修飾スーパーオキシドジスムターゼ
の配合量は、その酵素量が全量に対して０．００００１
〜１重景％（以下「％」と略す）となるように設定する
ことが好適である。すなわち、修飾スーパーオキシドジ
スムターゼがｏ、　ｏ　ｏ　ｏ　。

１％より少ないと得られる皮膚化粧料における酵素の働
きが充分でなく、１％を超えると皮膚化粧料の肌への刺
激が強くなる傾向が見られるからである。

また、水溶性多価アルコールの配合量は、全量に対し０
．５〜５０％となるように設定することが好適である。

０．５％より少ないと皮膚化粧料の経口安定性が低下し
て変色や変臭を生起しやすくなり、５０％を超えると皮
膚化粧料の感触がべたついて好ましくないからである。

さらに、上記製法において用いる精製水は、通常化粧料
製造に用いられる、イオン交換樹脂で処理した脱イオン
精製水や蒸留水等が適用される。

そして、その配合量は、通常４０〜９９％程度である。

このようにして得られた皮膚化粧料を用いると、皮膚が
紫外線に晒されたり傷を受けたりしたときに多量に発生
するスーパーオキサイドを修飾スーパーオキシドジスム
ターゼの作用により不均化分化するため、スーパーオキ
サイドによる肌の乾燥化、老化を防ぐことができる。ま
た、スーパーオキシドジスムターゼが多糖類によって修
飾されているため、スーパーオキシドジスムターゼ自体
の抗原性が除去されており、肌荒れを起こすことがない
。しかも、水溶性多価アルコールの存在によって修飾ス
ーパーオキシドジスムターゼが経口的に劣化することが
ない。したがって、この発明の皮膚化粧料は、長期間安
心して使用することができ、その効果も高い。

つぎに、この発明を実施例にもとづいて説明する。

なお、実施例に示す酵素活性の測定と、荒肌改善効果試
験、角質改善効果試験、実用試験、酵素活性の経日安定
試験の各種試験は、つぎのようにして行った。

く活性の測定〉 キサンチン−キサンチンオキシダーゼによるスーパーオ
キシド生成系にチトクロームＣと酵素または修飾酵素を
共存させチトクロームＣの還元速度を低下させる量を指
標として酵素の活性を測定した。

〈荒肌改善効果試験〉 下ｍに荒れ肌を有する中高年被験者２０名を対象として
４週間連続塗布効果を調べた。被験者の左側下脚試験部
位に１日１回約１ｇの試料を塗布し、試験開始前および
終了後の皮膚の状態を下記の判定基準により判定した。

右側下脚は試料を塗布せず対照とした。

＊皮膚乾燥度の判定基準＊ −二正常 ±　　：やや乾燥、落屑なし ＋　　：乾燥、落屑軽度 ＋十二乾燥、落屑中程度 ＋十十：乾燥、落屑顕著 そして、試験前後の試験部位と対照部位の判定結果を比
較し、皮膚乾燥度が２段階以上改善された場合（例えば
、＋→−１＋＋→±）を有効、１段階改善された場合を
やや有効、変化がなかった場合を無効とした。試験結果
は、有効、やや有効となった被験者の人数で示した。

〈角質、改善効果試験〉 前述の荒肌改善効果試験開始前後の被験者皮膚にメンデ
ィングテープにチバン社製）を接着し、これを剥離した
ときテープに付着した角質細胞の状態を走査型電子顕微
鏡によって詳細に調べた。

そして、下記の基準によって皮膚角質細胞抗剥離性を解
析し、角質改善効果を求めた。

＊角質改善効果（角細胞抗剥離性増大）の判定基準＊ 評価点１ニスケールを認めず ２：小スケール点在 ３：小〜中スケール顕著 ４：大スケール顕著 評価は、４週間連続塗布後の試験部位の評価点と対照点
のそれとの差が２点以上の場合を有効、１点の場合をや
や有効、０点の場合を無効とした。

判定結果は、有効、やや有効となった被験者の人数で示
した。

〈実用試験〉 荒れ肌、小皺、乾燥肌等を訴える女子被験者（３５〜５
５才）２０人に試料を１日朝夕２回、連続３力月塗布し
、その直後に下記項目について評価した。

＊評価項目＊ 皮膚の湿潤性：皮膚に潤いが生じたと答えた人数 べたつき感　：試料にべたつきを感じたと答えた人数 皮膚の平滑性：皮膚が滑らかになったと答えた人数 弾力性　　　：皮膚に張りが生じたと答えた人数 刺激性　　　：塗布時に刺激を感じたと答えた人数 かぶれ　　　二使用朋間中に肌がかぶれたと答えた人数 く経日安定性試験〉 試料を密封、遮光の条件下、４５°Ｃの恒温槽に３力月
放置したのち、色と匂いの変化の有無を観察した。

〔実施例１〕 ■修飾スーパーオキシドジスムターゼの調製デキストラ
ン（平均分子量６００００〜９００００）２．０ｇを４
０ｍｆｌの水に溶解したのち、ｌＮ−ＮａＯＨを加えて
ｐ　Ｈ１０，４とした。そして。

臭化シアン５００■を６ｄの水に溶解した臭化シアン水
溶液に、上記デキストラン水溶液を室温２５°Ｃで徐々
に加えると同時にｌＮ−ＮａＯＨを加えて反応系のＰＨ
が１０前後になるように注意した。この操作を約１５分
で終了したのち、約１０分間撹拌し、ついで４％ＮａＨ
ＣＯ，水溶液を加えてｐＨ９とした。このようにして臭
化シアンで活性化された活性化デキストラン溶液を得た
。

一方、生存血球から得られた銅、亜鉛型スーパーオキシ
ドジスムターゼ（シグマ社製、２３５０Ｕ／ｍｇ）４０
０■を水２０ｄに溶解し、上記活性化デキストラン溶液
中に加えて室温２５℃で一昼夜撹拌した。得られた反応
液にグリシン３．７、ｇを加え２時間処理反応を行った
のち、溶液を限外濾過により精製、ｉｌａ縮し、凍結乾
燥して修飾スーパーオキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は８０％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾スーパーオキシドジスムターゼ（以下「修飾５
ＯＤＪと略す）を用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾ＳＯＤ　　　　　０．０１％ グリセリン　　　ｌ　Ｏ，ＯＯ〃 精製水　　　　　８９．９９　〃 〔実施例２〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストラン（平均分子量６００００〜９００００）　
　ｌｏＯｍｇをＯ，１Ｍ−Ｎａ　　１０．　　？容ン夜
　１０ｍ１に溶解し、室温で１６時間撹拌したのち、得
られた反応液を限外濾過によって精製、濃縮した。これ
に０．０７５　Ｍ〜リン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，８）を加
えて全量を５　ａｌｌとしたのち、銅、亜鉛型スーパー
オキシドジスムターゼ（シグマ社製、２３５００／Ｉｌ
１ｇ）２０ｍｇを上記と同様のリン酸緩衝液５ｄに溶解
したものを加えて室温で１６時間反応させた。

ついで、Ｎ　ａ　Ｂ　Ｈ４０，ＯＯＯ５モルを加えて還
元処理を行い、この処理液を限外濾過により精製、濃縮
して修飾スーパーオキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は６５％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾ＳＯＤ　　　　　　　　０．０００１％ジプロピレ
ングリコール　１．００００　〃精製水　　　　　　　
　９８．９９９９　〃〔実施例３〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランとして平均分子量１７９００のものを用い
た。それ以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤを得た
。

この修飾酵素の活性保持率は７７％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にし°ζ
これらを均一に混合することによりスキンローションを
得た。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　１０．０〃精製水　　　　　　　
　　　　８９．９　〃〔実施例４〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランに代えてイヌリン（平均分子量５０００）
を用いた。それ以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤ
を得た。

この修飾酵素の活性保持率は８０％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成ニジてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　　５．０〃精製水　　　　　　　
　　　　９４．９　〃［実施例５］ ■修飾ＳＯＤの調製 カルボキシメチルセルロース２００■ヲ２０　ｔａｉｌ
の水に溶解し、これにｌＮ−ＨＣｌ！、を加えてｐ　Ｈ
４，７５としたのち、■−エチルー３−（３−ジメチル
アミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩３８０■と。ス
ーパーオキシドジスムターゼ（シグマ社製、２３５００
７■）２０■を加え、室温２５°Ｃで２時間撹拌した。

この反応液に酢酸１２０μｌとモノエタノールアミン１
２０μｌを加えて２０分間撹拌して、得られた溶液を限
外濾過により精製、ｌ縮し、凍結乾燥して修飾スーパー
オキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は７０％であった。

■スキンミルクの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０°Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンミルクを得た。

油相 流動パラフィン　　　　　２０．００％セチルアルコー
ル　　　　　５．ＯＯ〃ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレ−ト　　　　　　　　　　　　　５．　ＯＯ〃
水相 修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　０．０１％ジグリセリン
　　　　　　　５．　ＯＯ〃メチルパラベン　　　　　
　０．１０〃精製水　　　　　　　　　６４．８９　〃
〔実施例６］ ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランに代えてプルラン（平均分子量５００００
）を用いた。それ以外は実施例１と同様にして修飾スー
パーオキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は８２％であった。

■スキンクリームの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０°Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンクリームを得た。

油相 ミリスチン酸オクチルドデシル ３５、００％ セチルアルコール　　　　　５．００　〃セチルパルミ
テート　　　　２．００〃セスキステアリ゛ン酸ソルビ
タン ３、　ＯＯ〃 水相 修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　０．０１％グリセリン　
　　　　　ｌ　５．　ＯＯ〃ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレエート（２０Ｅ、Ｏ，）　　　　　　　５
．　ＯＯ。

メチルパラベン　　　　　　０．１０　〃精製水　　　
　　　　　　３４．８９〃〔比較例１〕 修飾ＳＯＤに代えて生存血球から得られる銅。

亜鉛型スーパーオキシドジスムターゼ（シグマ社製、２
３５０Ｕ／■）をそのまま用い、下記のような原料組成
にしてこれらを均一に混合することによりスキンローシ
ョンを得た。

ＳＯＤ　　　　　　　Ｏ，００３％ グリセリン　　　１０．０００　〃 精製水　　　　　８９．９９７　〃 〔比較例２〕 修飾ＳＯＤとして実施例１と同様のものを用い、下記の
ような原料組成にしてこれらを均一に混合することによ
りスキンローションを得た。

修飾ＳＯＤ　　　　　Ｏ，０１％ 精製水　　　　　９９．９９　〃 上記のようにして得られた６種類の実施測高および２種
類の比較測高について、前記の手順に従って各試験を行
い評価した。その結果を下記の表に示す。

（以下余白） この表かられかるように、実施測高はいずれも肌の改善
に優れた効果を示している。そして、未修飾のスーパー
オキシドジスムターゼを用いた比較例１品のような皮Ｊ
ｆへの刺激やかぶれもない。

また、比較例２品で問題となる経口安定性も、実施測高
では全く問題がない。

〔発明の効果〕

以上のように、この発明の皮膚化粧料は、多糖類によっ
て修飾されたスーパーオキシドジスムターゼと水溶性多
価アルコールとが含有されているため、これを用いると
、肌荒れを起こすことなく肌の乾燥化、老化を防止する
ことができる。しかも、この化粧料は、色や匂いが経口
的に変化することがなく、長期間安心して使用すること
ができるという利点を有する。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）銅、亜鉛型スーパーオキシドジスムターゼに多糖
   類を結合させた修飾スーパーオキシドジスムターゼと水
   溶性多価アルコールとを必須成分とすることを特徴とす
   る皮膚化粧料。
2. （２）修飾スーパーオキシドジスムターゼの含有量が、
   酵素量として０．００００１〜１重量％に設定されてい
   る特許請求の範囲第１項記載の皮膚化粧料。
3. （３）多糖類が、デキストラン、澱粉、プルラン、イヌ
   リン、キサンタンガム、キチン、マンナン、セルロース
   、ペクチン、カラゲナン、アルギン酸からなる群から選
   ばれた少なくとも一つの多糖類である特許請求の範囲第
   １項または第２項記載の皮膚化粧料。
4. （４）多糖類が、分子量１０００〜１０００００のデキ
   ストランである特許請求の範囲第３項記載の皮膚化粧料
   。
5. （５）水溶性多価アルコールの含有量が、０．５〜５０
   重量％に設定されている特許請求の範囲第１項ないし第
   ４項のいずれかに記載の皮膚化粧料。