JPH0196107A

JPH0196107A - 皮膚化粧料

Info

Publication number: JPH0196107A
Application number: JP25323987A
Authority: JP
Inventors: Kenji Mori; 憲治森; Hiroshi Nakayama; 博中山
Original assignee: Kanebo Ltd; Unitika Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd; Unitika Ltd
Priority date: 1987-10-07
Filing date: 1987-10-07
Publication date: 1989-04-14

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、顔面等に塗布して用いることのできる皮膚
化粧料に関するものである。

〔従来の技術〕

スーパーオキシドジスムターゼは、動物、植物。

微生物等の生体内に広く分布する酵素であり、最近、こ
のスーパーオキシドジスムターゼの酵素作用を応用した
化粧料がいくつか提案されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、スーパーオキシドジスムターゼをそのま
ま化粧料に用いると、■化粧料の製造時に酵素活性が低
下しやすい、■酵素が原因となって化粧料の色や匂いが
経口的に変化しやすい、■酵素が原因となって皮膚に刺
激やアレルギーを与えやすい、等の問題があり、その解
決が望まれていた。

この発明は、このような事情に鑑みなされたもので、経
口的安定性と皮膚へのなじみ性が改善された修飾スーパ
ーオキシドジスムターゼ含有皮膚化粧料の提供をその目
的とする。

〔問題点を解決するための手段〕

上記の目的を達成するため、この発明の皮膚化粧料は、
微生物によって産生されるマンガン型スーパーオキシド
ジスムターゼにポリアルキレングリコールを結合させた
修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶性多価アルコ
ールとを必須成分とするという構成をとる。

つぎに、この発明の詳細な説明する。

この発明に用いるスーパーオキシドジスムターゼは、微
生物によって産生されるマンガン型スーパーオキシドジ
スムターゼで、経皮吸収されて真皮の線維芽細胞や表皮
の基底細胞に働きかけ優れた老化防止効果を発揮するも
のである。このようなスーパーオキシドジスムターゼと
しては、バチルス菌、特にバチルス・ステアロサーモフ
ィルス菌からのものが好ましい。

上記スーパーオキシドジスムターゼを修飾するために用
いるポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール、エチレンオキ
サイド−プロピレンオキサイド共重合体等があげられ、
単独で使用しても併用してもよい。なお、これらのポリ
アルキレングリコールには、その片末端がメチル基やエ
チル基で封鎖されているものも含まれる。これらはいず
れも親水疎水両親媒性を示す。上記ポリアルキレングリ
コールの分子量は特に限定されるものではないが、効果
の点から１０００〜２００００のものが好適である。

この発明の修飾スーパーオキシドジスムターゼは、上記
スーパーオキシドジスムターゼと上記ポリアルキレング
リコールとを用い、例えばつぎのようにして製造するこ
とができる。すなわち、まず上記ポリアルキレングリコ
ールを適当な結合剤との結合によって活性化する。そし
て、上記活性化ポリアルキレングリコールの活性部位と
スーパーオキシドジスムターゼのアミノ基とを結合させ
ることにより、スーパーオキシドジスムターゼの修飾を
行う。活性化ポリアルキレングリコールの過剰な活性基
は、上記修飾反応後、リジン、グリシン、アミノエタノ
ール等のアミノ基を有する化合物と反応させて後処理を
行う。また、残存している未反応の結合剤等は、限外濾
過等によって分離除去する。このようにして目的とする
修飾スーパーオキシドジスムターゼを製造することがで
きる。

上記製法において、ポリアルキレングリコールを活性化
する結合剤および結合方法は特に限定されるものではな
く、酵素を失活させるような反応条件によるものでなけ
ればどのようなものであってもよい。このような結合剤
としては、例えばｐ−ニトロフェニルクロロホルマート
、ｔ、１’　−カルボニルジイミダゾール等があげられ
る。修飾の方法としては、例えば、ポリアルキレングリ
コールの末端水酸基を二酸化マンガン等によりカルボニ
ル基に変換したのちこのカルボニル基と酵素のアミノ基
とをカルボジイミド等で結合させる方法や、Ｎ−ヒドロ
キシコハク酸イミド等でカルボキシル基を活性エステル
に変えたのちこのエステル基と酵素のアミノ基とを結合
させる方法等があげられる。

なお、上記スーパーオキシドジスムターゼとポリアルキ
レングリコールの修飾反応は、酵素の失活を防ぐために
、中性もしくは弱アルカリ溶液中において室温で行うこ
とが好適である。また、上記スーパーオキシドジスムタ
ーゼとポリアルキレングリコールの配合割合は、ポリア
ルキレングリコールの分子量や構造によって異なり、必
ずしも限定されるものではないが、皮膚とのなじみ性を
考慮すれば、ポリアルキレングリコール量が、スーパー
オキシドジスムターゼ量に対し、重量基準で０．５倍よ
りも多いことが好ましい。

このようにして得られる修飾スーパーオキシドジスムタ
ーゼは、高い活性を維持しており、しかも、抗原性が殆
どもしくは完全に抑制されている。

上記修飾スーパーオキシドジスムターゼとともにこの発
明に用いる水溶性多価アルコールは、上記修飾スーパー
オキシドジスムターゼの水溶液中での経口的劣化を抑制
する働きをするもので、例えばエチレングリコール、プ
ロピレングリコール。

１．３−ブチレングリコール、１．４−ブチレングリコ
ール、ジブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリ
ン、グルコース、マルトール、マルチトール、蔗糖、フ
ラクトール、キシリトール、ソルビトール、マレトリオ
ース、スレイトール、エリスリトールがあげられる。こ
れらは単独で用いても２種以上を併用してもよい。

この発明の皮膚化粧料は、上記修飾スーパーオキシドジ
スムターゼと、水溶性多価アルコールとを用い、通常の
化粧料と同様にして製造することができる。例えば精製
水に修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶性多価ア
ルコールとを均一に混合することによりスキンローショ
ンを得ることができる。また、油性物質や乳化剤を組み
合わせることにより化粧用乳液や化粧用クリーム等を得
ることができる。もちろん、上記各種化粧料には、必要
に応じて着色剤、防腐剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤等
の添加物を適宜配合することができる。

上記製法において、修飾スーパーオキシドジスムターゼ
の配合量は、その酵素量が全量に対して０、　ＯＯＯＯ
１〜０．１重量％（以下「％」と略す）となるように設
定することが好適である。すなわち、修飾スーパーオキ
シドジスムターゼが０．００００１％より少ないと得ら
れる皮膚化粧料における酵素の働きが充分でなく、０．
１％を超えると皮膚化粧料の肌への刺激が強くなる傾向
が見られるからである。

また、水溶性多価アルコールの配合量は、修飾スーパー
オキシドジスムターゼが含有する酵素量の５０〜５００
０倍（重量基準）となるように設定することが好適であ
る。５０倍より少ないと皮膚化粧料の経日安定性が低下
して変色や変臭を生起しやすくなり、５０００倍を超え
ると皮膚化粧料の感触がべたついて好ましくないからで
ある。

さらに、上記製法において用いる精製水は、通常化粧料
製造に用いられる、イオン交換樹脂で処理した脱イオン
精製水や蒸留水等が適用される。

そして、その配合量は、通常４０〜９９％程度である。

このようにして得られた皮膚化粧料を用いると、皮膚が
紫外線に晒されたり傷を受けたりしたときに多量に発生
するスーパーオキサイドを修飾スーパーオキシドジスム
ターゼの作用により不均化分化するため、スーパーオキ
サイドによる肌の乾燥化、老化を防ぐことができる。ま
た、スーパーオキシドジスムターゼがポリアルキレング
リコールによって修飾されているため、スーパーオキシ
ドジスムターゼ自体の抗原性が除去されており、肌荒れ
を起こすことがない。しかも、水溶性多価アルコールの
存在によって修飾スーパーオキシドジスムターゼが経日
的に劣化することがない。したがって、この発明の皮膚
化粧料は、長期間安心して使用することができ、その効
果も高い。

つぎに、この発明を実施例にもとづいて説明する。

なお、実施例に示す酵素活性の測定と、荒肌改善効果試
験、角質改善効果試験、実用試験、酵素活性の経日安定
試験の各種試験は、つぎのようにして行った。

く活性の測定〉キサンチン−キサンチンオキシダーゼによるスーパーオ
キシド生成系にチトクロームＣと酵素または修飾酵素を
共存させチトクロームＣの還元速度を低下させる量を指
標として酵素の活性を測定した。

〈荒肌改善効果試験〉下脚に荒れ肌を有する中高年被験者２０名を対象として
４週間連続塗布効果を調べた。被験者の左側下脚試験部
位に１日１回約１ｇの試料を塗布し、試験開始前および
終了後の皮膚の状態を下記の判定基準により判定した。

右側下脚は試料を塗布せず対照とした。

＊皮膚乾燥度の判定基準＊ −二正常 ±　　：やや乾燥、落屑なし＋　　：乾燥、落屑軽度十＋：乾燥、落屑中程度＋＋＋：乾燥、落屑顕著そして、試験前後の試験部位と対照部位の判定結果を比
較し、皮膚乾燥度が２段階以上改善された場合（例えば
、＋→−３十十→±）を有効、１段階改善された場合を
やや有効、変化がなかった場合を無効とした。試験結果
は、有効、やや有効となった被験者の人数で示した。

く角質改善効果試験〉前述の荒肌改善効果試験開始前後の被験者皮膚にメンデ
ィングテープにチバン社製）を接着し、これを剥離した
ときテープに付着した角質細胞の状態を走査型電子顕微
鏡によって詳細に調べた。

そして、下記の基準によって皮膚角質細胞抗剥離性を解
析し、角質改善効果を求めた。

＊角質改善効果（角細胞抗剥離性増大）の判定基準＊評価点１ニスケールを認めず２：小スケール点在３：小〜中スケール顕著４：大スケール顕著評価は、４週間連続塗布後の試験部位の評価点と対照点
のそれとの差が２点以上の場合を有効、１点の場合をや
や有効、０点の場合を無効とした。

判定結果は、有効、やや有効となった被験者の人数で示
した。

く実用試験〉荒れ肌、小皺、乾燥肌等を訴える女子被験者（３５〜５
５才）２０人に試料を１日朝夕２回、連続３力月塗布し
、その直後に下記項目について評価した。

＊評価項目＊皮膚の湿潤性：皮膚に潤いが生じたと答えた人数べたつき感　：試料にべたつきを惑じたと答えた人数皮膚の平滑性：皮膚が滑らかになったと答えた人数弾力性　　　：皮膚に張りが生じたと答えた人数刺激性　　　：塗布時に刺激を惑じたと答えた人数かぶれ　　　二使用期間中に肌がかぶれたと答えた人数〈経日安定性試験〉試料を密封、遮光の条件下、４５℃の恒温槽に３力月放
置したのち、色と匂いの変化の有無を観察した。

〔実施例１〕 ■修飾スーパーオキシドジスムターゼの調製ポリエチレ
ングリコール（平均分子１１９００）５．０ｇ、ｐ−ニ
トロフェニルクロロホルマート０．６ｇを無水アセトニ
トリル３０ＩＩ１１に溶解したのちこれにトリエチルア
ミン０．３ｇを加えた。この溶液を室温２５℃で一昼夜
撹拌したのちジエチルエーテル２００−を加え４　”Ｃ
で一昼夜静置して結晶を析出させた。この結晶を濾別し
たのちジエチルエーテル−アセトニトリル混合溶媒を用
いて再結晶を行い、ジエチルエーテルでよく洗浄してか
ら乾燥し、活性化ポリエチレングリコールの白色結晶４
．５ｇを得た。

一方、バチルス・ステアロサーモフイラス菌から産生さ
れたマンガン型スーパーオキシドジスムターゼ（ユニチ
カ社製、８２００Ｕ／ｍｇ）５０ｍｇを０．０７５Ｍ−
リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，８）２０１１Ｉｌに溶
解し、上記活性化ポリエチレングリコール１００■を室
温２５゛Ｃで一昼夜撹拌した。得られた反応液にグリシ
ン０．１ｇを加え５時間処理反応を行ったのち溶液を限
外濾過により精製、濃縮し、凍結乾燥して修飾スーパー
オキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は７８％であった。

■スキンローションの調製上記修飾スーパーオキシドジスムターゼ（以下「修飾５
ＯＤＪと略す）を用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾ＳＯＤ　　　　　０．０１％グリセリン　　　１０．　ＯＯ〃精製水　　　　　８９．９９〃〔実施例２〕 ■修飾ＳＯＤの調製ポリエチレングリコールに代えてモノメトキシポリエチ
レングリコール（平均分子量５０００）を用いた。それ
以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤを得た。

この修飾酵素の活性保持率は７６％であった。

■スキンローションの調製上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾ＳＯＤ　　　　　　　　０．０００１％ジプロピレ
ングリコール　１．　ＯＯＯＯ〃精製水　　　　　　　
　９　Ｂ、　９９９９　〃〔実施例３〕 ■修飾ＳＯＤの調製ポリエチレングリコールに代えてオキシエチレン−オキ
シプロピレンランダム共重合体（平均分子量３７５０、
三洋化成社製、ニューポール５０ＨＢ５１００）を用い
た。それ以外は実施例１ど同様にして修飾ＳＯＤを得た
。

この修飾酵素の活性保持率は９４％であった。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　１０．　Ｏ〃精製水　　　　　　
　　　　　８９．９　〃〔実施例４〕 ■修飾ＳＯＤの調製ポリエチレングリコールに代えてオキシエチレン−オキ
シプロピレンブロック共重合体（平均分子量７５００〜
９０００、旭電化工業社製、プルロニックＦ−６８）を
用いた。それ以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤを
得た。

この修飾酵素の活性保持率は８０％であった。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　　５．０〃精製水　　　　　　　
　　　　９４．９　〃〔実施例５〕 ■修飾ＳＯＤの調製モノメトキシポリエチレングリコール（平均分子量５０
００）１０．０ｇと塩化シアヌル１．１　ｇとを無水ベ
ンゼン８０１ｄに溶解し、これに無水炭酸ナトリウム２
．０ｇを加えた。この溶液を室温２５°Ｃで４８時間撹
拌して反応させたのち反応残留物を濾別した。そして、
濾液に石油工°−チル１００戚を徐々に滴下して白色沈
澱物を得た。この沈澱物を再び無水ベンゼン７０ｍに溶
解し、石油エーテルを徐々に滴下して再沈澱を行い、石
油エーテルでよ（洗浄したのち乾燥して２−０−メトキ
シポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ−Ｓ−ト
リアジンを得た。

一方、バチルス・ステアロサーモフイラス菌から産生さ
れたマンガン型スーパーオキシドジスムターゼ（ユニチ
カ社製、８２００Ｕ／■）２５■を０．１Ｍホウ砂水溶
液（ｐＨ９，５）に溶解し、上記活性化ポリエチレング
リコール４００■を加えて室温２５℃で１時間撹拌し反
応させた。この反応液を限外濾過により精製、濃縮し、
凍結乾燥して修飾ＳＯＤを得た。

この修飾酵素の活性保持率は７９％であった。

■スキンミルクの調製上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０゛Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンミルクを得た。

油相流動パラフィン　　　　　２０．００％セチルアルコー
ル　　　　　５．　ＯＯ〃ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノオレ−ト　　　　　　　　　　　　　５．００％
水相修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　０．０１％ジグリセリン
　　　　　　　５．００〃メチルパラベン　　　　　　
０．１０　〃精製水　　　　　　　　　６４．８９　〃
〔実施例６〕 ■修飾ＳＯＤの調製ポリエチレングリコール（平均分子ｆｉ５０００）５．
０ｇを無水ベンゼン５０ｄに溶解し、無水炭酸ナトリウ
ム２．５ｇを加えて８０°Ｃで３０分間加熱還流した。

そして、塩化シアヌル１８０■を加えて一昼夜８０°Ｃ
で還流上反応を行ったのち反応残留物を濾別した。そし
て、濾液に石油エーテルを徐々に滴下して沈澱を生じさ
せ、この沈澱物を石油エーテルでよく洗浄したのち乾燥
して２．４−ビス（０−メトキシポリエチレングリコー
ル）−６−クロロ−Ｓ−トリアジンを得た。

以下の操作は上記実施例５と同様であるが、２−０−メ
トキシポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ−５
−）リアジンに代えて上記２．４−ビス（０−メトキシ
ポリエチレングリコール）−６−クロロ−３−トリアジ
ンを用いた。このようにして修飾ＳＯＤを得た。

この修飾酵素の活性保持率は８１％であった。

■スキンクリームの調製上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０°Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンクリームを得た。

油相ミリスチン酸オクチルドデシル −３５，００％セチルアルコール　　　　　５．　ＯＯ〃セチルパルミ
テート　　　　２．　ＯＯ〃セスキステアリン酸ソルビ
タン３、　ＯＯ〃水相修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　０．０１％グリセリン　
　　　　　１５．　Ｏ０％ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノオレエート（２０Ｂ、０．）　　　　　　　５．
　Ｏ０％メチルパラベン　　　　　　０．１０　〃精製
水　　　　　　　　　３４．８９　〃〔比較例１〕修飾ＳＯＤに代えてバチルス・ステアロサーモフイラス
菌由来のマンガン型スーパーオキシドジスムターゼ（Ｓ
ＯＤ）を用い、下記のような原料組成にしてこれらを均
一に混合することによりスキンローションを得た。

Ｓ　ＯＤ　　　　　　　Ｏ，ＯＯ３％グリセリン　　　１０．　ＯＯＯ〃精製水　　　　　８９．９９７　＃〔比較例２〕修飾ＳＯＤとして実施例１と同様のものを用い、下記の
ような原料組成にしてこれらを均一に混合することによ
りスキンローションを得た。

修飾ＳＯＤ　　　　　Ｏ，０１％精製水　　　　　９９．９９　〃上記のようにして得られた６種類の実施測量および２種
類の比較測量について、前記の手順に従って各試験を行
い評価した。その結果を下記の表に示す。

（以下余白）この表かられかるように、実施例品はいずれも肌の改善
に優れた効果を示している。そして、未修飾のスーパー
オキシドジスムターゼを用いた比較例１品のような皮膚
への刺激やかぶれもない。

また、比較例２品で問題となる経口安定性も、実施例品
では全く問題がない。

〔発明の効果〕

以上のように、この発明の皮膚化粧料は、ポリアルキレ
ングリコールによって修飾されたスーパーオキシドジス
ムターゼと水溶性多価アルコールとが含有されているた
め、これを用いると、肌荒れを起こすことなく肌の乾燥
化、老化を防止することができる。しかも、この化粧料
は、色や匂いが経口的に変化することがなく、長期間安
心して使用することができるという利点を有する。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）微生物によつて産生されるマンガン型スーパーオ
キシドジスムターゼにポリアルキレングリコールを結合
させた修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶性多価
アルコールとを必須成分とすることを特徴とする皮膚化
粧料。
（２）微生物がバチルス・ステアロサーモフイラス菌で
ある特許請求の範囲第１項記載の皮膚化粧料。
（３）修飾スーパーオキシドジスムターゼの含有量が、
酵素量として０．００００１〜０．１重量％に設定され
ている特許請求の範囲第１項または第２項記載の皮膚化
粧料。
（４）ポリアルキレングリコールが、ポリエチレングリ
コール、ポリプロピレングリコールおよびエチレンオキ
サイド−プロピレンオキサイド共重合体からなる群から
選ばれた少なくとも一つのポリアルキレングリコールで
ある特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記
載の皮膚化粧料。
（５）水溶性多価アルコールの含有量が、修飾スーパー
オキシドジスムターゼにおける酵素に対し、重量基準で
５０〜５０００倍に設定されている特許請求の範囲第１
項ないし第４項のいずれかに記載の皮膚化粧料。