JPH01250304A - 皮膚化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、顔面等に塗布して用いることのできる皮膚
化粧料に関するものである。

〔従来の技術〕

スーパーオキシドジスムターゼは、動物、植物。

微生物等の生体内に広く分布する酵素であり、最近、こ
のスーパーオキシドジスムターゼの酵素作用を応用した
化粧料がいくつか提案されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、スーパーオキシドジスムターゼをそのま
ま化粧料に用いると、■化粧料の製造時に酵素活性が低
下しやすい、■酵素が原因となつて化粧料の色や匂いが
経口的に変化しやすい、■酵素が原因となって皮膚に刺
激やアレルギーを与えやすい、等の問題があり、その解
決が望まれていた。

この発明は、このような事情に鑑みなされたもので、経
口的安定性と皮膚へのなじみ性が改善された修飾スーパ
ーオキシドジスムターゼ含有皮膚化粧料の提供をその目
的とする。

（問題点を解決するための手段〕 上記の目的を達成するため、この発明の皮膚化粧料は、
微生物によって産生されるマンガン型スーパーオキシド
ジスムターゼに多Ｐｉ類を結合させた修飾スーパーオキ
シドジスムターゼと水溶性多価アルコールとを必須成分
とするという構成をとる。

〔作用］ すなわち、この発明の皮膚化粧料は、微生物によって産
生されるマンガン型スーパーオキシドジスムターゼに多
糖類を結合させた修飾スーパーオキシドジスムターゼを
含有するため、従来から問題とされていた経口的安定性
と皮膚へのなじみ性が改善されているものである。

つぎに、この発明の詳細な説明する。

この発明に用いるスーパーオキシドジスムターゼは、微
生物によって産生されるマンガン型スーパーオキシドジ
スムターゼで、経皮吸収されて真皮の線維芽細胞や表皮
の基底細胞に働きかけ優れた老化防止効果を発揮するも
のである。このようなスーパーオキシドジスムターゼと
しては、バチルス菌、特にバチルス・ステアロサーモフ
ィルス菌からのものが好ましい。

上記スーパーオキシドジスムターゼを修飾するために用
いる多糖類としては、デキストラン、澱粉、プルラン、
イヌリン、キサンタンガム、キチン、マンナン、セルロ
ース、ペクチン、カラゲナン、アルギン酸等があげられ
、単独で使用しても併用してもよい。これらの多糖類の
種類および分子量は特に限定されないが、抗原性抑制の
観点から、゛分子３１２０００以上のものが望ましい。

また、これらの多糖類のうち、特にデキストランは安全
性が高（、水中での経日的安定性に優れているため、好
適である。そして、その分子量は、効果の点から１ｏｏ
ｏ〜１０００００のもの、特に６００００〜９００００
のものが好適である。

この発明の修飾スーパーオキシドジスムターゼは、上記
スーパーオキシドジスムターゼと上記多＃Ｍ類とを用い
、例えばつぎのようにして製造することができる。すな
わち、まず上記多糖類を適当な結合剤との結合によって
活性化する。そして、上記活性化多糖類の活性部位とス
ーパーオキシドジスムターゼのアミノ基とを結合させる
ことにより、スーパーオキシドジスムターゼの修飾を行
う。

活性化多糖類の過剰な活性基は、上記修飾反応後、リジ
ン、グリシン、アミノエタノール等のアミノ基を有する
化合物と反応）せて後処理を行う。また、残存している
未反応の結合剤等は、限外濾過等によって分離除去する
。このようにして目的とする修飾スーパーオキシドジス
ムターゼを製造することができる。

上記製法において、多糖類を活性化するための試薬およ
び酵素との結合方法は特に限定されるものではなく、酵
素を失活させるような反応条件によるものでなければど
のようなものであってもよい。例えば、臭化シアン等の
試薬を用いて活性化した多糖類を酵素のアミノ基と反応
させて結合させる方法や、多ｔＩ！類を過ヨウ素酸等で
酸化してアルデヒド基をつくったのち酵素のアミノ基に
結合させる方法、塩化シアヌルを結合剤としてシアヌル
化多糖類としてから酵素のアミノ基に結合させる方法、
多糖類（アミノ基がないものについてはアミノ基を導入
したもの）をブロモアセチルプロミド等と反応させてブ
ロモアセチル化したりグルタルアルデヒド等を用いたり
して酵素のアミノ基に結合させる方法、多′Ｐ！Ｗにカ
ルボキシメチル基やアルデヒド基を経由してカルボキシ
ル基を導入したのち酵素のアミノ基に結合させる方法等
があげられる。また、上記カルボキシル基導入多糖類（
カルボキシル基を有する多ＩＩはそのままのもの）と酵
素のアミノ基との結合を、カルボジイミド等の結合剤を
用いて結合するようにしたり、カルボキシル基をＮ−ヒ
ドロキシコハク酸イミド等でさらに活性エステル化した
のち結合するようにしてもよい。

なお、上記スーパーオキシドジスムターゼと多糖類の修
飾反応は、酵素の失活を防ぐために、中性もしくは弱ア
ルカリ溶液中において室温で行うことが好適である。ま
た、上記スーパーオキシドジスムターゼと多糖類の配合
割合は、用いる多糖類の分子量や構造によって異なり、
必ずしも限定されるものではない。

このようにして得られる修飾スーパーオキシドジスムタ
ーゼは、高い活性を維持しており、しかも、抗原性が殆
どもしくは完全に抑制されている。

上記修飾スーパーオキシドジスムターゼとともにこの発
明に用いる水溶性多価アルコールは、上記修飾スーパー
オキシドジスムターゼの水溶液中での経口的劣化を抑制
する働きをするもので、例エバエチレングリコール、プ
ロピレングリコール。

１．３−７’チレングリコール、１．４−ブチレングリ
コール、ジブチレングリコール、グリセリン、ジグリセ
リン、グルコース、マルトール、マルチ）、−／ｌ／、
ＷｊｌＮ、フラクトール、キシリトール、ソルビトール
、マレトリオース、スレイトール、エリスリトールがあ
げられる。これらは単独で用いても２種以上を併用して
もよい。

この発明の皮膚化粧料は、上記修飾スーパーオキシドジ
スムターゼと、水溶性多価アルコールとを用い、通常の
化粧料と同様にして製造することができる。例えば精製
水に修飾スーパーオキシドジスムターゼと水溶性多価ア
ルコールとを均一に混合することによりスキンローショ
ンを得るコトができる。また、油性物質や乳化剤を組み
合わせることにより化粧用乳液や化粧用クリーム等を得
ることができる。もちろん、上記各種化粧料には、必要
に応じて着色剤、防腐剤１紫外線吸収剤、酸化防止剤等
の添加物を適宜配合することができる。

上記製法において、修飾スーパーオキシドジスムターゼ
の配合量は、その酵素量が全量に対して０．００００１
〜０．１重量％（以下「％」と略す）となるように設定
することが好適である。すなわち、修飾スーパーオキシ
ドジスムターゼが０．００００１％より少ないと得られ
る皮膚化粧料における酵素の働きが充分でなく、０．１
％を超えると皮膚化粧料の肌への刺激が強くなる傾向が
見られるからである。

また、水溶性多価アルコールの配合量は、修飾スーパー
オキシドジスムターゼが含有する酵素量の５０〜５００
０倍（重！基準）となるように設定することが好適であ
る。５０倍より少ないと皮膚化粧料の経口安定性が低下
して変色や変臭を生起しやすくなり、５０００倍を超え
ると皮膚化粧料の感触がべたついて好ましくないからで
ある。

さらに、上記製法において用いる精製水は、通常化粧料
製造に用いられる、イオン交換樹脂で処理した脱イオン
精製水ダ蒸留水等が適用される。

そして、その配合量は、通常４０〜９９％程度である。

このようにして得られた皮膚化粧料を用いると、皮膚が
紫外線に晒されたり傷を受けたりしたときに多量に発生
するスーパーオキサイドを修飾スーパーオキシドジスム
ターゼの作用により不均化分化するため、スーパーオキ
サイドによる肌の乾燥化、老化を防ぐことができる。ま
た、スーパーオキシドジスムターゼが多糖類によって修
飾されているため、スーパーオキシドジスムターゼ自体
の抗原性が除去されており、肌荒れを起こすことがない
。しかも、水溶性多価アルコールの存在によって修飾ス
ーパーオキシドジスムターゼが経口的に劣化することが
ない。したがって、この発明の皮膚化粧料は、長期間安
心して使用することができ、その効果も高い。

つぎに、この発明を実施例にもとづいて説明する。

なお、実施例に示す酵素活性の測定と、荒肌改善効果試
験、角質改善効果試験、実用試験、酵素活性の経口安定
試験の各種試験は、つぎのようにして行った。

く活性の測定〉 キサンチン−キサンチンオキシダーゼによるスーパーオ
キシド生成系にチトクロームＣと酵素または修飾酵素を
共存させチトクロームＣの還元速度を低下させる量を指
標として酵素の活性を測定した。

〈荒肌改善効果試験〉 下脚に荒れ肌を有する中高年被験者２０名を対象として
４週間連続塗布効果を調べた。被験者の左側下脚試験部
位に１日１回約１ｇの試料を塗布し、試験開始前および
終了後の皮膚の状態を下記の判定基準により判定した。

右側下脚は試料を塗布せず対照とした。

＊皮膚乾燥度の判定基準＊ −：正常 ±　　：やや乾燥、落屑なし ＋　　：乾燥、落屑軽度 ＋＋：乾燥、落屑中程度 十＋＋：乾燥、落屑顕著 そして、試験前後の試験部位と対照部位の判定結果を比
較し、皮膚乾燥度が２段階以上改善された場合（例えば
、＋→−１＋＋→±）を有効、１段階改善された場合を
やや有効、変化がなかった場合を無効とした。試験結果
は、有効、やや有効となった被験者の人数で示した。

〈角質改善効果試験〉 前述の荒肌改善効果試験開始前後の被験者皮膚にメンデ
ィングテープにチバン社製）を接着し、これを剥離した
ときテープに付着した角質細胞の状態を走査型電子顕微
鏡によって詳細に調べた。

そして、下記の基準によって皮膚角質細胞抗剥離性を解
析し、角質改善効果を求めた。

＊角質改善効果（角細胞抗剥離性増大）の判定基準＊ 評価点１ニスケールを認めず ２：小スケール点在 ３：小〜中スケール顕著 ４：大スケール顕著 評価は、４週間連続塗布後の試験部位の評価点と対照点
のそれとの差が２点以上の場合を有効、１点の場合をや
や有効、０点の場合を無効とした。

判定結果は、有効、やや有効となった被験者の人数で示
した。

〈実用試験〉 荒れ肌、小皺、乾燥肌等を訴える女子被験者（３５〜５
５才）２０人に試料を１日朝夕２回、連続３力月塗布し
、その直後に下記項目について評価した。

＊評価項目＊ 皮膚の湿潤性：皮膚に潤いが生じたと答えた人数 べたつき惑　：試料にべたつきを感じたと答えた人数 皮膚の平滑性：皮膚が滑らかになったと答えた人数 弾力性　　　：皮膚に張りが生じたと答えた人数 刺激性　　　：塗１時に刺激を感じたと答えた人数 かぶれ　　　二使用期間中に肌がかぶれたと答えた人数 〈経日安定性試験〉 試料を密封、遮光の条件下、４５°Ｃの恒温槽に３力月
放置したのち、色と匂いの変化の有無を観察した。

〔実施例１］ ■修飾スーパーオキシドジスムターゼの調製デキストラ
ン（平均分子１６００００〜９００００）２．０ｇを４
０−の水に溶解したのち、ｌＮ−ＮａＯＨを加えてｐ　
Ｈ１０，４とした。そして。

臭化シアン５００■を６蔵の水に溶解した臭化シアン水
溶液に、上記デキストラン水溶液を室温２５°Ｃで徐々
に加えると同時にｌＮ−ＮａＯＨを加えて反応系のｐＨ
が１０前後になるように注意した。この操作を約１５分
で終了したのち、約１０分間撹拌し、ついで４％ＮａＨ
ＣＯ，水溶液を加えてｐＨ９とした。このようにして臭
化シアンで活性化された活性化デキストラン溶液を得た
。

一方、バチルス・ステアロサーモフイラス菌から産生さ
れたマンガン型スーパーオキシドジスムターゼ（ユニチ
カ社製、８２００Ｕ／■）４００■を水２０ｄに溶解し
、上記活性化デキストラン溶液中に加えて室温２５°Ｃ
で一昼夜撹拌した。得られた反応液にグリシン３．７ｇ
を加え２時間処理反応を行ったのち、溶液を限外濾過に
より精製、濃縮し、凍結乾燥して修飾スーパーオキシド
ジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は８０％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾スーパーオキシドジスムターゼ（以下「修飾５
ＯＤＪと略す）を用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションヲ得
り。

修飾ＳＯＤ　　　　　０．０１％ グリセリン　　　１０．　ＯＯ〃 精製水　　　　　８９．９９　〃 〔実施例２〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストラン（平均分子１６００００〜９００００）１
００ｍｇを０．１　Ｍ　　Ｎ　ａ　Ｉ　Ｏａ溶液１０ｄ
に溶解し、室温で１６時間撹拌したのち、得られた反応
液を限外濾過によって精製、濃縮した。これに０．０７
５　Ｍ−リン酸緩衝液（ｐＨ７，８）を加えて全量を５
　ｒｎｌとしたのち、スーパーオキシドジスムターゼ（
ユニチカ社製、８２００Ｕ／■）２０■を上記と同様の
リン酸緩衝液５Ｉｒｔ１．に溶解したものを加えて室温
で１６時間反応させた。ついで、Ｎａ　ＢＩ３０．００
０５モルを加えて還元処理を行い、この処理液を限外濾
過により精製、濃縮して修飾スーパーオキシドジスムタ
ーゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は６５％であった。

■スキンローションの８周製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾ＳＯＤ　　　　　　　　０．０００１％ジプロピレ
ングリコール　１．００００　〃精製水　　　　　　　
　９　Ｂ、　９９９９　〃〔実施例３〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランとして平均分子量１７９００のものを用い
た。それ以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤを得た
。

この修飾酵素の活性保持率は７７％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　１０．０〃精製水　　　　　　　
　　　　８９．９　〃〔実施例４〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランに代えてイヌリン（平均分子量５０００）
を用いた。それ以外は実施例１と同様にして修飾ＳＯＤ
を得た。

この修飾酵素の活性保持率は８０％であった。

■スキンローションの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にしてこ
れらを均一に混合することによりスキンローションを得
た。

修飾Ｓ　ＯＤ　　　　　　　　　　　０．１％１．３−
ブチレングリコール　　５．０〃精製水　　　　　　　
　　　　９４．９　〃〔実施例５〕 ■修飾ＳＯＤの調製 カルボキシメチルセルロース２００■を２０ｄの水に溶
解し、これにｌＮ−ＨＣｌを加えてｐＨ４，７５とした
のち、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）カルボジイミド塩酸塩３８０■とスーパーオキシドジ
スムターゼ（ユニチカ社製、８２００Ｕ／■）２０■を
加え、室温２５°Ｃで２時間撹拌した。この反応液に酢
酸１２０μ２とモノエタノールアミン１２０μ２を加え
て２０分間撹拌して、得られた溶液を限外濾過により精
製、ｆＡ縮し、凍結乾燥して修飾スーパーオキシドジス
ムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は７０％であった。

■スキンミルクの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０°Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンミルクを得た。

油相 流動パラフィン　　　　　２０．　Ｏ０％セチルアルコ
ール　　　　　５．　ＯＯ〃ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレート　　　　　　　　　　　　　５．ＯＯ
〃水相 修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　Ｏ，０１％ジグリセリン
　　　　　　　５．　ＯＯ〃メチルパラベン　　　　　
　０．１０　〃精製水　　　　　　　　　６４．８９　
〃〔実施例６〕 ■修飾ＳＯＤの調製 デキストランに代えてプルラン（平均分子量５００００
）を用いた。それ以外は実施例１と同様にして修飾スー
パーオキシドジスムターゼを得た。

この修飾酵素の活性保持率は８２％であった。

■スキンクリームの調製 上記修飾ＳＯＤを用い、下記のような原料組成にして油
相と水相をつくった。そして、８０°Ｃに加熱した油相
に同じく８０°Ｃに加熱した水相を加えて均一に撹拌し
ながら速やかに冷却しスキンクリームを得た。

油相 ミリスチン酸オクチルドデシル ３５、　Ｏ０％ セチルアルコール　　　　　５．００　〃セチルパルミ
テート　　　　２．　ＯＯ〃セスキステアリン酸ソルビ
タン ３、　ＯＯ〃 水相 修飾ＳＯＤ　　　　　　　　　０．０１％グリセリン　
　　　　　１５．００　〃ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノオレエート（２０Ｅ、０．）　　　　　　　５．
　ＯＯ〃メチルパラベン　　　　　　０．１０〃精製水
　　　　　　　　　３４．８９　〃〔比較例１〕 修飾ｓＯＤに代えてバチルス・ステアロサーモフイラス
菌由来のマンガン型スーパーオキシドジスムターゼ（Ｓ
ＯＤ）を用い、下記のような原料組成にしてこれらを均
一に混合することによりスキンローションを得た。

ＳＯＤ　　　　　　　Ｏ，００３％ グリセリン　　　１０．０００　〃 精製水　　　　　８９．９９７　〃 〔比較例２］ 修飾ＳＯＤとして実施例１と同様のものを用い、下記の
ような原料組成にしてこれらを均一に混合することによ
りスキンローションを得た。

修飾ＳＯＤ　　　　　Ｏ，０１％ 精製水　　　　　９９．９９　〃 上記のようにして得られた６種類の実施測高および２種
類の比較測高について、前記の手順に従って各試験を行
い評価した。その結果を下記の表に示す。

（以下余白） この表かられかるように、実施測高はいずれも肌の改善
に優れた効果を示している。そして、未修飾のスーパー
オキシドジスムターゼを用いた比較例１品のような皮膚
への刺激やかぶれもない。

また、比較例２品で問題となる経口安定性も、実施測高
では全く問題がない。

［発明の効果］ 以上のように、この発明の皮膚化粧料は、多糖類によっ
て修飾されたスーパーオキシドジスムターゼと水溶性多
価アルコールとが含有されているため、これを用いると
、肌荒れを起こすことなく肌の乾燥化、老化を防止する
ことができる。しかも、この化粧料は、色や匂いが経口
的に変化することがなく、長期間安心して使用すること
ができるという利点を有する。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）微生物によつて産生されるマンガン型スーパーオ
   キシドジスムターゼに多糖類を結合させた修飾スーパー
   オキシドジスムターゼと水溶性多価アルコールとを必須
   成分とすることを特徴とする皮膚化粧料。
2. （２）微生物がバチルス・ステアロサーモフイラス菌で
   ある請求項（１）記載の皮膚化粧料。
3. （３）修飾スーパーオキシドジスムターゼの含有量が、
   酵素量として０．００００１〜０．１重量％に設定され
   ている請求項（１）または（２）記載の皮膚化粧料。
4. （４）多糖類が、デキストラン、澱粉、プルラン、イヌ
   リン、キサンタンガム、キチン、マンナン、セルロース
   、ペクチン、カラゲナン、アルギン酸からなる群から選
   ばれた少なくとも一つの多糖類である請求項（１）ない
   し（３）のいずれかに記載の皮膚化粧料。
5. （５）多糖類が、分子量１０００〜１０００００のデキ
   ストランである請求項（４）記載の皮膚化粧料。
6. （６）水溶性多価アルコールの含有量が、修飾スーパー
   オキシドジスムターゼにおける酵素に対し、重量基準で
   ５０〜５０００倍に設定されている請求項（１）ないし
   （５）のいずれかに記載の皮膚化粧料。