JPH01112994A - インドール酢酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、インドール酢酸の製造方法に関する。

更に詳しくは、トリプトファンに微生物を作用させてイ
ンドール酢酸を製造する方法に関する。

〔従来の技術〕

トリプトファンに土壌微生物または植物細胞を作用させ
、インドール酢酸を製造する方法が従来から知られてい
る。

例えば、　Ｐｌａｎｔ　ａｎｄ　５ｏｉｌ第８１巻第１
８５〜１９４頁（１９８４）には、トリプトファンに土
壌微生物を作用させ、インドール酢酸を製造する方法が
記載されている。この先行文献には、インドール酢酸を
生産する菌であるＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐを用
いる方法が記載されているが、インドール酢酸の生産量
は培養液ＩＩＩＱ当り０．３４８μｇときわめて低い水
準に止まっている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者は、トリプトファンに土壌微生物を作用させ、
インドール酢酸を製造するに際し、−層効率の良いイン
ドール酢酸生産微生物を得る目的で、一連のスクリーニ
ングを行なった。

その結果、従来インドール酢酸生産菌としては知られて
いなかったエンターバクター属に属する微生物を見出す
ことができ、しかもそれのインドール酢酸生産能力は従
来公知の微生物の約５００〜１０００倍径度ときわめて
効率的なものであることを先に確認した（特願昭６１−
１８６，２２８号）。

ここで使用される微生物Ｅｎｔａｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓ
ｐ　Ｎｏ。

１１１−５（ＦＥＲＰ−８８８４）は、本発明者によっ
て兵庫県城崎郡竹野町の土壌から、昭和６１年１月後記
の方法により分離されたものである。

Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ　Ｎｏ、１１−５は、
下記の菌学的性質を有する。

Ａ、形態 （１）細胞の形、大きさニゲラム陰性杆菌、１．５〜２
μｍＸ１μｍ （２）細胞の多形性：なし く３）運動性：なし く４）胞子：なし く５）ダラム染色性：陰性 （６）抗菌性：不明 Ｂ、培地における成育状態 （１）肉汁寒天平板培養：茶色、光沢あり、拡散性なし く２）肉汁寒天斜面培養：茶色、光沢あり、拡散性なし く３）肉汁液体培養：茶色、光沢あり、拡散性なしＣ０
生理学的性質 （１）硝酸塩の還元：陽性 （２）脱窒反応：不明 （３）　ＭＲテスト：陰性 （４）　ＶＰテスト：陽性 （５）インドールの生成：陰性 （６）硫化水素の生成：陰性 （７）でん粉の加水分解：陰性 （８）クエン酸の利用：陽性 （９）無機窒素源の利用：陽性 （１０）色素の生成：陰性 （１１）ウレアーゼ：陽性 （１２）オキシダーゼ：陰性 （１３）カタラーゼ：不明 （１４）生育の範囲：　ｐＨ４〜１０、温度１５〜４５
℃（１５）酸素に対する態度二通性嫌気性（１６）０−
Ｆテスト：発酵 （１７）糖類からの酸の生成 培地：ペプトン２ｇ、　ＮａＣＱ　５ｇ、　Ｋ、）ＩＰ
Ｏ４０，３ｇ。

炭水化物１０ｇ、ブロムチモールブルー０．０８ｇ、寒
天１５ｇ、蒸留水１０００ｍ　ｍ　（ｐＨ７，１）添加
濃度＝１％ Ｌ−アラビノース　　　− Ｄ−キシロース　　　（不明） Ｄ−グルコース　　　　＋ Ｄ−マンノース　　　（不明） Ｄ−フラクトース　　（不明） Ｄ−ガラクトース　　（不明） 麦芽糖　　　　　　　十 しよ糖　　　　　　　　十 乳糖　　　　　　　　十 トレハロース　　　（不明） Ｄ−ソルビット　　　　＋ Ｄ−マンニット　　　　− イノシット　　　　　＋ グリセリン　　　　（不明） でん粉　　　　　　　− 以上の菌学的性質に基いて１本菌をＢａｒｇｅｙ″ＳＭ
ａｎｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第８版およびその他の文献によ
り検索した結果、エンターバクター属に属する菌である
ことが確認された。

本菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔａｒ　ｓｐ　Ｎｏ、１１−５
の培養は、任意の培地を用い、振とう条件下で３７℃で
約７２〜９０時間程度行われる。

本菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ　Ｎｏ、ＬＬ−５
（ＦＥＲＮ　Ｐ−８８８４）は、トリプトファンを基質
としてこれに作用させると、インドール酢酸を生成させ
る。インドール酢酸の生成は、前記培養液を１００万倍
に希釈し、この希釈液に１．５％寒天および最終濃度が
１０ｒｎｇ／ｍ　Ｑになる量の基質トリプトファンを加
え、３７℃で２４時間静誼培養し、次いで生育菌を５ｍ
ｇ／ｍ　Ｑのトリプトファンを含むＬ−ブイヨン液体培
地を用い、３７℃で７２時間振どう培養することにより
行われる。

この結果、し−ブイヨン液体培地に５ｍｇ／ｍ　ｎのト
リプトファンを加えた培養液１■Ｑ当り約２００〜２５
０μｇの生産量でインドール酢酸が生産される。

本発明者は、引続いてこのインドール酢酸製造法につい
ての検討を行なった結果、培地中にアンピシリンを共存
させておくことにより、最少のトリプトファン基質濃度
においても、効率良くインドール酢酸の生産が行ない得
ることを新たに見出した。

〔問題点を解決するための手段〕

従って、本発明はインドール酢酸の製造方法に係り、イ
ンドール酢酸の製造は、トリプトファンからインドール
酢酸を生成せしめる能力を有するエンターバクター属に
属する微生物を、約５００μｇ／ｍＱ以上のアンピシリ
ンを共存させた培地中でトリプトファンに作用させてイ
ンドール酢酸を生成蓄積せしめ、これを採取することに
より行われる。

本発明で用いられるＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ　
Ｎｏ、１１−５は、菌体内に約２４Ｋｂ’のプラスミド
を保有しており、このプラスミド上にアンピシリン耐性
遺伝子とインドール酢酸の生産に関与すると思われる遺
伝子が共に存在することが判明した。

そこで、半合成の抗生物質であり、ある種のダラム陰性
菌に対する活性のあることが知られているアンピシリン
（６−（Ｄ−α−アミノフェニル−アセトアミド）ペニ
シリン酸］を培地に添加することで、このプラスミドの
菌体内での増加を図ることができ、それに伴ってインド
ール酢酸の生産量を増加させることができた。

Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ　Ｎｏ、１１−５を用
いてのインドール酢酸の製造は、従来法にならって行わ
れるが、その培地中に添加されるアンピシリンは、約３
００μｇ／＋＊Ω以上、好ましくは約５００μｇ／ｍ　
２以上の割合で用いられる。

これらの一連の操作を行なった後、培養液からジエチル
エーテルを用いてインドール酢酸を抽出し、液体クロマ
トグラフィーおよび薄層クロマトグラフィーによる定性
の後、サルコツスキー比色法により、インドール酢酸生
産量の定量が行われる。

〔発明の効果〕

本発明方法によれば、エンターバクター属に属する微生
物を用い、これを基質であるトリプトファンに作用させ
る際、そこにアンピシリンを添加しておくと、１ｍｇ／
ｍ　Ｑのトリプトファンを含む最少培地でも変換効率が
高められ、効率的なインドール酢酸の生産を行なうこと
ができる。

〔実施例〕

次に、実施例について本発明を説明する。

実施例 Ｌ−ブイーヨン（トリプトン１％、酵母エキス０．５％
、ＮａＣＱ　Ｏ，５％、殺菌前のｐＨ７，２）　５ｍＡ
を試験管に入れ、これに前記土壌１ｇを添加して、３７
℃で２４時時間上う培養した。

この培養液を１００万倍に希釈し、この希釈液に１．５
％寒天および最終濃度が１０ＩＩＩｇ／ＩＩＱになる量
の基質トリプトファンを加え、３７℃で２４時間静置培
養した。

次いで、生育菌をＩ　ｌｌ１ｇ／ｍ　Ｑのトリプトファ
ンを含むし一ブイヨン液体最少培地を用い、そこにアン
ピシリンを最終濃度として５０または５００μｇ／ｍ　
Ｑ共存させながら、３０℃で４８時間振どう（１００ｒ
ｐｍ）培養させた。

所定時間後、培養液にＩＮ　ＨＣΩを１００μｇ添加し
、公知のサルコツスキー反応により比色定量し、インド
ール酢酸の生産量（単位：μｇｅｒｍ　Ｑ　）を定量し
た。得られた結果は、次の表に示される。

表

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、トリプトファンからインドール酢酸を生成せしめる
   能力を有するエンターバクター属に属する微生物を、約
   ３００μｇ／ｍｌ以上のアンピシリンを共存させた培地
   中でトリプトファンに作用させてインドール酢酸を生成
   蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするインドー
   ル酢酸の製造方法。