JPS6163278A - ２，５−ジケト−ｄ−グルコン酸生産能を有する微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＤ−グルコースを２．５−ジケト−Ｄ−グルコ
ン酸に変換する能力を有する新たに分離きれた微生物に
係る。

２．５−ジケト−Ｄ−グルコン酸はアスコルビン酸製造
のための中間体として有用である。すなわち、２．５−
ジケト−Ｄ−グルフン酸はアスコルビン酸の前駆物質で
ある２−ケトーＬ−グロン酸に選択的に還元することが
できるからである。

（たとえば特公昭４７−３８１９３号、特開昭５４−１
４５２８３号公報参照） これまで、２，５−ジケト−Ｄ−グルコン酸は主として
、アセトバクター、アセトモナスおよびグルコノバクタ
−属に属する好気性菌株によるグルコースの選択的酸化
によって製造されて来たが、エルウィニア属に属する菌
株によって製造きれた例は報告きれていない。

本発明者らは後述のように、土壌および各種の果実から
分離した下記エルウィニア属菌株が本発明の目的に添う
Ｄ−グルコースから２．５−ジケト−Ｄ−グルコン酸へ
の選択的酸化を遂行することを発見し１本発明を完成し
た。

本発明は、Ｄ−グルコースを選択的に酸化して２．５−
ジケト−Ｄ−グルフン酸に変換する能力を有するすべて
の、エルウィニア属に属する菌株を含む、そのうち本発
明者らが新たに分離した新種を次頁の第−表に列挙する
。

列挙されたものはすべてこの３新種に属しこれらの変種
を構成するものとする。

また、これらの菌株の分類学的諸性質を第二表に記述す
る。

なお１本明細書を通じＳＨ３とは発明者等の整理上の記
号でありＳｈｉｏｎｉｇｉ　５ａｉｚ６ｂｕを表わし。

ＦＥＲＭ−Ｐは微工研菌寄託番号を表わす。

ＡＴＣＣはアメリカン参タイプ・カルチュア・コレクシ
ョン寄託番号を、それぞれ表わす。

（以下余白） なお、第−表に記載の各菌株は、第二表に示した各菌株
の分類学的諸性質をバージイズ・マニュアル・オブーデ
タミナティブ・バタテリオロジイ第８版（Ｂｅｒｇｅｙ
’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖ
ｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８ｔｈ　Ｅｄ、　１９７
４．以下単にマニュアルと記載する）の記載と対比する
ことによりそれぞれ同定した。

１）　科の同定： 上記全菌株がいずれもダラム陰性１通性嫌気性の短桿菌
であり、胞子を形成せず、オキシダーゼ陰性でカタラー
ゼ陽性であるところからエンテロバクテリア科（Ｅｎｔ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａａｅ　）と同定される。

２）　属の同定： β−メチルグルコシドおよびスクロースより土酸しく但
し、５Ｈ３−２００３株のみは例外的にスクロースより
土酸しない、しかしスクロースを単一炭素源として利用
できる。）、アドニトール。

ズルントール、メレチトースから土酸しないこと；安息
香酸１Ｍ酸、プロピオン酸を利用できないこと：澱粉を
加水分解しないこと；グルタミン酸。

アルギニン、リジンおよびオルニチンからの脱炭酸反応
が陰性であること（但し、５Ｍ５−２００４゜２００５
．２００６および２００７株はグルタミン酸を脱炭酸す
る）：およびウレアーゼおよびリパーゼを生成しないこ
とから、エルウィニア属（Ｇｅｎｕｓ　Ｅｒｗｉｎｉａ
）と同定される。

３）　種の同定： ５Ｈ５−２００３株 本菌株は鞭毛を有しないことからハービコラ群（ｇｒｏ
ｕｐ　ｈａｒｂｉｃｏｌａ　）中のエルウィニア・ステ
ユーワーティ（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｓｔｅｗａｒｉｉ　）
に近縁とみなされるが次の点でその性質を異にしてい名
。

（１）ＳＨＳ−２００３株は生育にニコチン酸またはニ
コチンアミドを要求する。

（１）システィンから硫化水素を生成する。

（ｊ）硝酸塩還元能を有する。

（１ν）スクロース×、アラビノース、ラフィノース、
およびソルビトールから生成しない。

（Ｖ）サリシン、セロビオース、およびグリセロールか
ら生成する。

（Ｖ（〉酒石酸を単一炭素源として利用できない。

マニュアル中には他に該当する菌種を見出せないことか
ら１来園株は新種を構成するものと判定し、エルウィニ
ア　シトレウス（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃｉｔｒｅｕｓ）と
命名した。

（※　スクロースから生成はしないが単一炭素源として
利用する。） ＳＨ３−２００４，２００５，２００６および２００７
株： これらの菌株も硬毛を有せず、エルウィニア・スチュワ
ーテイに近縁の菌株とみなしうるが、エルウィニア・ス
チュワーテイに属する菌とは共通して次の性質を異にす
る。

（１）生育にニコチン酸またはニコチンアミドを要求す
る。

（ｉ）システィンから硫化水素を生成する。

（ｉ）硫酸塩還元能を有する。

（ｉｖ）グルタミン酸脱炭酸反応が陽性である。

（Ｖ）アテビノース、マンニトール、ラクトースおよび
ソルビトールから生成しない。

（ｖｉ）サリシンおよびセロビオースから生成する。

（■）酒石酸を単一炭素源として利用出来ない。

また、これらの菌株は前記５Ｈ８−２００３とはグルタ
ミン酸を脱炭酸する点、マンニトール、乳糖から生成し
ない点、乳糖、酢酸及び乳酸を単一炭素源としてほとん
ど利用しない点、ならびにリドマスミルクに対してほと
んど作用しない点において相違している。マニュアル中
には本菌株群を配すべき種を見出すことができないので
、これらの菌株群は一新種を構成するものとみなし、エ
ルウィニア・ブンクタータ（Ｅｒｗｉｎｉａ　四匹胚印
）と命名した。

これらのうち５Ｈ８−２００４と５Ｈ３−２００６とは
。

（１）ラフィノースからも生成しない、またぐ−）マン
ニトール、酢酸および乳酸を単一炭素源としてほとんど
利用できない。

点において共通するが、５Ｈ３−２００４は５Ｈ５−２
００６と対比して。

（１）グルコースからアセトインを生成する。

（ｉ）硝酸塩を窒素源として利用できる。

（ｉ）グリセロールから生成する。また（ｉｖ）ギ酸を
単一炭素源として利用する。

点において相違を認める。

一方５Ｈ５−２００５もマンニトール、酢酸および乳酸
を単一炭素源としてほとんど利用できない点で５ＨＳ−
２００６と共通するが。

（ｉ＞グリセロールからも生成する。

（ｉ）グルコースからアセトインを生成する。

（ｉ）キング（Ｋｉｎｇ）Ｂ培地で螢光色素を生成する
。

（ｉｖ）ラフィノースからも僅かに生成する。また（ｖ
）ギ酸を単一炭素源として利用する。

点において相違を認める。

きらに５Ｈ３−２００７も同様にマンニトール、酢酸お
よび乳酸を単一炭素源としてほとんど利用できない点に
おいて５Ｈ３−２００６と共通するが。

い）ラフィノースからも生成する。

（Ｎ）グルコースからアセトインを生成する。

（Ｉｌ）キ酸を単一炭素源として利用できる。

また （１ｖ）生育温度が４０〜４７．５℃と幅が広い。

点において相違を認める。

上記により、これらの菌株群５Ｈ５−２００４゜５Ｈ５
−２００５，５ＭＳ−２００６および５ＭＳ−２００７
は、それぞれ上記エルウィニア・ブンクタータに属し、
互いにその変種を構成する。

５ＭＳ−２００８および５Ｈ３−２０１０：これらの菌
株は側鞭毛を有し、エルウィニア・トラへイフイラ（Ｅ
ｒ讐１ｎｉａ江五匝並唇（）また］士エルウィニア・フ
ェルシナ（Ｅ、　姐肛■懸）　１．：　近縁とみなされ
るが、これらの性質をマニュアルに記載のエルウィニア
・トラへイフイラの性質と対比すると次の点で相違して
いる。

（ｉ　）ＳＨ３−２００８および５Ｈ３−２０１０は３
６°Ｃ以上でも生育する。

（−）肉汁寒天培地での生育が良好である。

（１１）粘液状の生育（ｍｕｃｏｉｄ　ｇｒｏｗｔｈ　
）をする。

（ｉｖ）硝酸還元能を有する。

（Ｖ）ケリシン。キシロース、メリビオースおよびマン
ノースから生成する。

（■）乳酸を単一炭素源として利用できる。

またエルウィニア・フェルシナの性質と対比しても次の
点で異っている。

（１）グルコン酸の酸化能を有する。

（ｉ）硝酸の還元能を有する。

（ｉ）メリピオース・セロビオースから生成する。

（■）マンニトール、α−メチルグルフシド、エスタリ
ンおよびソルビトールから生成しない。

（Ｖ）グルコース・ペプトン培地からガスを生成しない
。

マニュアル中にはこれらの菌株を配すべき種を見出すこ
とができないので新種を構成するものとみなし、エルウ
イニア・テリウス（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｔｅｒｒｅｕｓ）
と命名した。

なお、５ＭＳ−２０１０株は５Ｈ８−２００８株と対比
して （１）グリセロールから生成しない。

（ｉ　）ＳＨ３−２００８がリボースから生成するのに
対し５Ｈ５−２０１０は僅かしか生成しない。

（ｉ＞メチル・レッド・テストが微弱陽性であるまた。

（ｉｖ）キングＢ培地で螢光色素を生成する。

点で相違が認められるが他の性質においてはほぼ一致す
る。

５Ｈ９−２００９： 本菌株は側鞭毛を有しエルウィニア・トラへイフイラ、
エルウィニア・フェルシナ、またはエルウィニア・ハー
ピコラ・バリアント・ハービコラ（Ｅ　、　ｈｅｒｂｉ
ｃｏｌａ　ｖａｒ、　ｈａｒｂｉｃｏｌａ）に近縁とみ
なされる。

本菌株の性質をマニュアルに記載のエルウィニア・トラ
へイフイラの性質と対比すると。

（＋　）ＳＨＳ−２００９は肉汁寒天培地での生育が良
好。

（関）３６°Ｃ以上でも生育する。

（ｉ）粘液状の生育をする。

（ｉｖ）硝酸還元能を有する。また （Ｖ）ケリシン。キシロース、メリピオース、セロビオ
ース、グリセロールおよびマンノースから生成する。

点において顕著な相違が認められる。

さらにエルウィニア・フェルシナの性質と比較すると。

（１）グルコン酸を酸化できる。

（ｉ）硝酸塩還元能を有する。

（ｊ）グルコースからのアセトインの生成力が弱い。

（■）キシロース、メリビオースおよびセロビオースか
ら生成する。

（Ｖ）マンニトール、α−メチルグルフシド、エスタリ
ン、リポースおよびソルビトールから生成しない。

（ｖｉ）酒石酸を単一炭素源として利用できない。

また。

（ｖｊ）グルコース・ペプトン培地からガスを生成しな
い。

点において顕著な相違が認められる。

さらにエルウィニア・ハービフラ・バリアント・ハービ
コラの性質と比較すると。

い）生育にニコチン酸またはニコチンアミドを要求する
。

（關）グルコースからのアセトインの生成力が弱い。

（Ｉｌ〉ゼラチンの液化能がない。

（ｉｖ）メリビ才一ス、セロビオースおよびグリセロー
ルから生成する。また （Ｖ）アラビノース、マンニトール、マルトース。

デキストリン、ラムノース、リボースおよびソルビトー
ルから生成しない。

点において顕著な相違が認められる。

一方１本菌株を前記５Ｈ５−２００８株と対比すると。

い）グルコースからのアセトインの生成力が弱い、また Ｎ）リボースから生成しない。

点における相違が認められるが他の諸性質においてほぼ
一致しているので１来園株も上記エルウイニア・テリウ
スに属し、その−変種を構成する。

５Ｈ８−２０１１： 本菌株は側鞭毛を有しエルウィニア・トラへイフイラま
たはエルウィニア・アミロボラ（Ｅ。

＄）に近縁とみなきれる。

本菌株の性質をマニュアルに記載のエルウィニア・トラ
へイフイラの性質と対比すると。

い）ＳＨ３−２０１１は肉汁寒天培地での生育が中等度
。

（ｉ）３６℃以上でも生育する。

（ｉ）粘液状の生育をする。

（ｉｖ）硝酸塩還元能を有する。

（Ｖ）サリシン、キシロース、メリビ才一ス、セロビオ
ースおよびマンノースから生成する。

また。

（■）乳酸を単一炭素源として利用できる。

点において顕著な相違が認められる。

さらにエルウィニア・アミロボラの性質と対比すると。

い）ンステインから硫化水素を生成する。

（ｉ）３６℃以上でも生育する。

（ｉ）硝酸塩還元能を有する。

（ｉｖ）ゼラチン液化能がない。

（Ｖ）サリシン、キシロース、メリビ才一ス、セロビオ
ースおよびマンノースから生成する。

また。

（ｖｉ）リボースから生成しない。

点において顕著な相違を有する。

一方１来園株を前記５Ｈ５−２００８株と対比すると。

リボースおよびグリセロールから生成しない。

点に相違が認められるが、他の諸性質においてほぼ一致
しているので９来園株は上記エルウイニア・テリウスの
一変種を構成する。

きらに、これらの分離株の自然変異株も２．５−ノケト
ーＤ−グルコン酸産生能を有する限り本発明の微生物に
包含されるものであり、これらの分離株を所望に応じ１
人工的に誘導して得た変異菌株も１分離株と同様に本発
明に含まれ、所望により適応（馴致）させて用いること
ができることは勿論である。

上記菌株はいずれもＤ−グルコースを主炭素源とし窒素
源としてのフーン・ステイープ・リッカーおよび少量の
無機塩類を含む培地中でよく生育する。好気的に醗酵き
せるときは、従来使用されていた菌株に比し、きわめて
高いＤ−グルコース仕込み濃度で安定に醗酵し２．５−
ジケト−Ｄ−グルフン酸を好収率で産生する。

培地中のＤ−グルコース濃度は、とくに望むならば４０
Ｗ／Ｖ％もの高濃度とすることができるが。

通常１５〜２５Ｗ／Ｖ％好マ１．．＜ハ、ホ１Ｚ２０Ｗ
／Ｖ％程度の濃度が２．５−ジケト−Ｄ−グルコン酸の
経済的な生産にとって都合がよい。

発酵温度は１５〜３５°Ｃ２好ましくは２０〜３０℃、
ｆ＋も好ましくは約２８°Ｃが良い。培地の初期ｐＨは
５．５〜７５の範囲、好ましくはｐＨ６，０〜７．０の
範囲にあることがよい。またこのｐＨ値は当初より緩衝
用の無機塩類を添加しておくか。

発酵途中に塩基類を投入することによって所望の値ｐＨ
４，０〜５．５に維持する。塩および塩基の例は炭酸カ
ルシウムまたは水酸化ナトリウムである。

また、接種後の培地は、攪拌機（約１７５０ｒ、　ｐ、
　ｍ　）によって攪拌し、約６００　Ｎｍ１７分の割合
で通気する。

発酵は２．５−ジケト−Ｄ〜グルフン酸の収率が約９０
％（Ｄ−グルコース基準）となるまで行う。所要時間は
約１７〜３１時間である。

また本発酵終了液は、要すればｐＨ調整その他の処理を
経たのも、２．５−ジケト−Ｄ−グルコン酸またはその
塩の結晶が得られるが、これを分離することなく、その
まま次段用発酵液として利用できる。たとえば２−ケト
ーＬ−グロン酸の製造への直接利用が可能であり、従来
法に比較して収率良く目的を達成することが出来る。

本発明の微生物は１通常の菌体の他にたとえば体止菌、
または固定化菌体、または菌体破砕物もしくはその処理
物（たとえば産生酵素）として使用することも出来る。

以下実施例によって本発明をより詳細に説明する。

実施例１ （１）　　種培地 Ｄ−グルコース （含水、含量９１％、以下同じ）　　　１．０％コーン
・ステイープ・リッカー（Ｃ３Ｌ）５．０％りん酸二水
素カリウム（ＫＨ，ＰＯ，）０．１％硫酸マグネシウム
（ＭｇＳＯ，・ ７ＨｊＯ）０．０２％ 炭酸力ルンウム（ＣａＣＯｓ）　　　　　０．５％を含
む水溶液を、ｐＨ値（１０％ＮａＯＨにより調節）６．
８〜７．０に調整し。

５００ｍ１三角フラスコ（滅菌）に５０ｍ１宛分注して
種培地とする。

（り　種培養 上記フラスコに第三表に示した各菌株を一白金耳ずつ植
菌し、２８℃に保ちながら約８−１１時間振盪培養（振
巾７１ｍｍ、回転数２７　Ｏｒ、ｐ、ｍ）した、光学濃
度（ＯＤ）が約８となる時をもって種培養の終点とした
。

０）　発酵培地 Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　２０　　％Ｃ５Ｌ
　　　　　　　　　　　　　　　　３　　　％ＫＨ，Ｐ
０．　　　　　　　　　　　　０．１％ＣａＣ０，６，
３％ を含む水溶液を上記と同様にｐＨ調節、１β発酵檀に４
５５ｍ１宛分注し、上記種培養液４５ｍ１をそれぞれに
加えた。

（４）　　本培養 温度　　　　　　　　　　　　　　　２８℃撹拌　　　
　　　　　　　　　１７４０　ｒ、ｐ、ｍ通気　　　　
　　　　　　　　６００　Ｎｍｌ／分時間　　　　　　
　　　　　　１７〜３１時間（５）　　定量法 下記要目による上昇法ペーパー・クロマトグラフィーで
分離し、デンシトメトリーにより定量した。

い）担体：　東洋濾紙Ｎｏ、　５０ （ｉ）展開溶媒： フェノール：蟻酸：水−７５：４：２５（ｉ）発色： ＡＨＦ溶液（アニリン０．９３　ｇとフタール酸１．６
６　ｇを水飽和ｎ−ブタノール１００ｍ１に溶解したも
の）噴霧、１００°Ｃで２分間処理して発色させる。

（ｉｖ）色調およびＲｆ値： ２．５−ジケト−Ｄ−グルフン酸：褐色０．１６−０．
１８ ２−ケトーＤ−グルコン酸：ピンク色：０．２７−０．
２９ Ｄ−グ）Ｉ、ツース：褐色　０．４８−０．５０このほ
か、担体として’　ＴＬＣアルミシートセルローズＪ（
メルク商品名）を用い上記した展開溶媒および発色法に
よる薄層クロマトグラフィーを併用した。この場合定量
は標準試料との比較によった。

（６）終了点： 本培養は上記薄層クロマトグラフにおいて２−ケトーＤ
−グルコン酸のピンク色のスボ７トが消失する時点を以
て終点とした。

（以下余白） 実施例２および３ （菌体懸濁液および粗酵素抽出液による生産）（１）菌
体採取用培地 Ｄグルコース　　　　　　　　　２．０％ポリペプトン
（大入栄養薬品製）０．２％酵母エキス（大玉栄養薬品
製）　０．１％ＫＨ，Ｐ０．　　　　　　　　　　０．
１％Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ・７Ｈ，ＯＯ，０２％ＣａＣ０，
０，６％ を含む水溶液のｐＨ値を７．０に調整し、５００ｍ１三
角フラスコに８０ｍ１宛分注した。

（２）培賽、集菌、粗酵素分離 上記培地に実施例１の種培養と同様に植菌し。

２８°Ｃに保ちながら１６時間振盪培養（２７Ｏｒ。

ｐ、　ｍ、振巾７１ｍｍ）した。

培養終了後、菌体を遠心分離して集め、生理食塩水にて
２度洗浄した。このうち一部を生理食塩水中の懸濁液と
し、一部は１１５０モル−トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７
，５）に懸濁きせ、超音波処理して菌体を破砕し、遠心
分離により不溶性残渣を除去し、上澄液を粗酵素液とし
た。

上記懸濁液および粗酵素液とＤ−グルコースとの接触反
応とその結果を次に示す。

■）菌体懸濁液との接触 反応液は、１／１ｏモルー３．３−ジメチルゲルタール
［ｊＨＴｉ液（ＰＨ５、０）中で、グルコース濃度が５
　Ｗ／Ｖ％、ｖＭ体濃度が６６０ｍμにおけるＯＤで測
定して約１０となるように調製した。この反応液を２３
ｍｍ（直径）Ｘ１９６ｍｍ（長さ）の試験管に１０ｍ１
づつ分注したのち、２８℃で３時間振盪反応させた。

遠心分離後の上澄液をペーパー・クロマトグラフィにて
分析し１次の第四表に総括した結果を得た。（振盪開始
前のグルコース濃度も示す）（以下余白） 第　四　表（３時間後の濃度） （４）粗酵素液との接触 反応液は、１／１０モルー３．３−ジメチルゲルタール
酸緩衝液中でグルツース濃度が５讐／Ｖ％。

祖酵素濃度がタンパク量［）オーリン（Ｆｏｌｉｎ）法
にて測定］として０　、２５　ｍｇ／ｍｌとなるように
調製した。これを上記と同様に振盪したのち、１０Ｗ／
Ｖ％トリクロル酢酸２滴を加え、除タンパク済の上澄液
をペーパークロマトグラフィにて分析し次の第五表に示
す結果を得た。

第　五　表（３時間後の濃度）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）エルウイニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属に属し、Ｄ−グ
   ルコースを２，５−ジケト−Ｄ−グルコン酸に変換する
   能力を有する微生物。 ２）エルウイニア・シトレウス（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥￥
   ｃｉｔｒｅｕｓ￥）種に属する特許請求の範囲第１項に
   記載の微生物。 ３）エルウイニア・シトレウス（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥￥
   ｃｉｔｒｅｕｓ￥）ＳＨＳ−２００３株（ＦＥＲＭ−Ｐ
   ５４４９、ＡＴＣＣ３１６２３）である特許請求の範囲
   第２項に記載の微生物。 ４）エルウイニア・プンクタータ（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥
   ￥ｐｕｎｃｔａｔａ￥）種に属する特許請求の範囲第１
   項に記載の微生物。 ５）エルウイニア・プンクタータ（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥
   ￥ｐｕｎｃｔａｔａ￥）ＳＨＳ−２００６株（ＦＥＲＭ
   −Ｐ５４５２、ＡＴＣＣ３１６２６）である特許請求の
   範囲第４項に記載の微生物。 ６）エルウイニア・プンクタータ・バリ （￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥　￥ｐｕｎｃｔａｔａ￥　￥ｖａ
   ｒ．￥）ＳＨＳ−２００４株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５０、
   ＡＴＣＣ３１ ６２４）である特許請求の範囲第４項に記載の微生物。 ７）エルウイニア・プンクタータ・バリ （￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥　￥ｐｕｎｃｔａｔａ￥　￥ｖａ
   ｒ．￥）ＳＨＳ−２００５株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５１、
   ＡＴＣＣ３１ ６２Ｓ）である特許請求の範囲第４項に記載の微生物。 ８）エルウイニア・プンクタータ・バリ （￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥　￥ｐｕｎｃｔａｔａ￥　￥ｖａ
   ｒ．￥）ＳＨＳ−２００７株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５３、
   ＡＴＣＣ３１ ６２７）である特許請求の範囲第４項に記載の微生物。 ９）エルウイニア・テリウス（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥￥ｔ
   ｅｒｒｅｕｓ￥）種に属する特許請求の範囲第１項に記
   載の微生物。 １０）エルウイニア・テリウス（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥￥
   ｔｅｒｒｅｕｓ￥）ＳＨＳ−２００８株（ＦＥＲＭ−Ｐ
   ５４５４、ＡＴＣＣ３１６２８）である特許請求の範囲
   第９項に記載の微生物。 １１）エルウイニア・テリウス・バリ（￥Ｅｒｗｉｎｉ
   ａ￥￥ｔｅｒｒｅｕｓ￥　￥ｖａｒ．￥）ＳＨＳ−２０
   ０９株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５５、ＡＴＣＣ３１６２９）
   であ る特許請求の範囲第９項に記載の微生物。 １２）エルウイニア・テリウス・バリ（￥Ｅｒｗｉｎｉ
   ａ￥￥ｔｅｒｒｅｕｓ￥　￥ｖａｒ．￥）ＳＨＳ−２０
   １０株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５６、ＡＴＣＣ３１６３０）
   であ る特許請求の範囲第９項に記載の微生物。 １３）エルウイニア・テリウス・バリ（￥Ｅｒｗｉｎｉ
   ａ￥￥ｔｅｒｒｅｕｓ￥　￥ｖａｒ．￥）ＳＨＳ−２０
   １１株（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５７、ＡＴＣＣ３１６３１）
   であ る特許請求の範囲第９項に記載の微生物。