JP7544322B2 - 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 - Google Patents
麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7544322B2 JP7544322B2 JP2022211572A JP2022211572A JP7544322B2 JP 7544322 B2 JP7544322 B2 JP 7544322B2 JP 2022211572 A JP2022211572 A JP 2022211572A JP 2022211572 A JP2022211572 A JP 2022211572A JP 7544322 B2 JP7544322 B2 JP 7544322B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- extract
- fraction
- meoh
- ephedra
- molecular weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 158
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 title claims description 81
- 241000218671 Ephedra Species 0.000 title claims description 80
- KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N (-)-ephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N 0.000 title claims description 33
- KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N d-ephedrine Natural products CNC(C)C(O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 13
- 229960002179 ephedrine Drugs 0.000 title claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 11
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 claims description 153
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 132
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 81
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 38
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 24
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N (2R,2'R,3R,3'R,4R)-3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavan(48)-3,3',4',5,7-pentahydroxyflavan Natural products C=12OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=1C(C1=C(O)C=C(O)C=C1O1)C(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 13
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 claims description 13
- JPFCOVZKLAXXOE-NFJBMHMQSA-N (2r,3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1[C@@H]1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-NFJBMHMQSA-N 0.000 claims description 12
- 229920002330 B type proanthocyanidin Polymers 0.000 claims description 12
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 11
- OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N Favan-3-ol Chemical compound OC1CC2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 claims description 10
- 229930182497 flavan-3-ol Natural products 0.000 claims description 10
- 229940124393 anti-influenza virus drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 5
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 67
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 47
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 24
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 17
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 12
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N (3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1C1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920001991 Proanthocyanidin Polymers 0.000 description 9
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 229960001553 phloroglucinol Drugs 0.000 description 8
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 7
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 7
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 6
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 6
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- -1 Herbacetin glycoside Chemical class 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 5
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 5
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 5
- NTOABOYFEFSHCA-UHFFFAOYSA-N Herbacetin Natural products Cc1ccc(cc1)-c1oc2c(O)c(O)cc(O)c2c(=O)c1O NTOABOYFEFSHCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 244000078534 Vaccinium myrtillus Species 0.000 description 4
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 150000002206 flavan-3-ols Chemical class 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000002035 hexane extract Substances 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XIMADJWJJOMVID-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-3,4-dihydro-2h-chromene-3,4-diol Chemical compound OC1C(O)C2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 XIMADJWJJOMVID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465251 Ephedra sinica Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 229920000124 Prodelphinidin Polymers 0.000 description 3
- 229930182448 Prodelphinidin Natural products 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 3
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013365 molecular weight analysis method Methods 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 3
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N (+)-Epigallocatechin Natural products C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 241000218670 Ephedraceae Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 2
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010033557 Palpitations Diseases 0.000 description 2
- JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N Phloroglucinol Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCCC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N Procyanidin Natural products OC1C(OC2C(O)C(Oc3c2c(O)cc(O)c3C4C(O)C(Oc5cc(O)cc(O)c45)c6ccc(O)c(O)c6)c7ccc(O)c(O)c7)c8c(O)cc(O)cc8OC1c9ccc(O)c(O)c9 CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N Procyanidin C2 Natural products O[C@@H]1[C@@H](c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c([C@H]3[C@H](O)[C@@H](c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c3c(O)cc(O)c4)c(O)cc(O)c2[C@@H]1c1c(O)cc(O)c2c1O[C@@H]([C@H](O)C2)c1cc(O)c(O)cc1 MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N 0.000 description 2
- 244000281247 Ribes rubrum Species 0.000 description 2
- 235000016911 Ribes sativum Nutrition 0.000 description 2
- 235000002355 Ribes spicatum Nutrition 0.000 description 2
- 235000016897 Ribes triste Nutrition 0.000 description 2
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 description 2
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 description 2
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical group 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- ZDOTZEDNGNPOEW-UHFFFAOYSA-N herbacetin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C(O)=C2O1 ZDOTZEDNGNPOEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 2
- 229920001461 hydrolysable tannin Polymers 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N phloroglucinol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1 QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002414 procyanidin Polymers 0.000 description 2
- HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N procyanidin Chemical compound O1C2=CC(O)=CC(O)=C2C(O)C(O)C1(C=1C=C(O)C(O)=CC=1)OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecan-1-ol Chemical class CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCO WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXLFUHUBGBCKNS-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3,4-dihydro-2H-chromen-3-yl]oxy]-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydrochromene-3,4,5,7-tetrol Chemical compound OC1C(O)C(OC2Cc3c(O)cc(O)cc3OC2c2ccc(O)c(O)c2)(Oc2cc(O)cc(O)c12)c1ccc(O)cc1 TXLFUHUBGBCKNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001722 A-type proanthocyanidin Polymers 0.000 description 1
- 241000157282 Aesculus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- MQIUGAXCHLFZKX-UHFFFAOYSA-N Di-n-octyl phthalate Natural products CCCCCCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCCCCCC MQIUGAXCHLFZKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011511 Diospyros Nutrition 0.000 description 1
- 241000723267 Diospyros Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000723281 Ephedra equisetina Species 0.000 description 1
- 241000723237 Ephedra intermedia Species 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 235000004101 Gaylussacia dumosa Nutrition 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 description 1
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 description 1
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001091440 Grossulariaceae Species 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 235000016357 Mirtillo rosso Nutrition 0.000 description 1
- 241000218231 Moraceae Species 0.000 description 1
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 1
- 108091008604 NGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000001294 Nociceptive Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000006089 Phaseolus angularis Nutrition 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 229920000385 Procyanidin B1 Polymers 0.000 description 1
- 229920001019 Profisetinidin Polymers 0.000 description 1
- 229920002510 Proguibourtinidin Polymers 0.000 description 1
- 229920002783 Propelargonidin Polymers 0.000 description 1
- 229920001826 Prorobinetidin Polymers 0.000 description 1
- 241001631271 Prunus fasciculata Species 0.000 description 1
- 244000305267 Quercus macrolepis Species 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 244000299790 Rheum rhabarbarum Species 0.000 description 1
- 235000009411 Rheum rhabarbarum Nutrition 0.000 description 1
- 235000002357 Ribes grossularia Nutrition 0.000 description 1
- 235000016954 Ribes hudsonianum Nutrition 0.000 description 1
- 240000001890 Ribes hudsonianum Species 0.000 description 1
- 235000001466 Ribes nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 235000016554 Rubus chamaemorus Nutrition 0.000 description 1
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 1
- 235000010781 Rubus parviflorus Nutrition 0.000 description 1
- 240000001934 Rubus spectabilis Species 0.000 description 1
- 235000011666 Rubus spectabilis var. franciscanus Nutrition 0.000 description 1
- 235000011672 Rubus spectabilis var. spectabilis Nutrition 0.000 description 1
- 235000018735 Sambucus canadensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000151637 Sambucus canadensis Species 0.000 description 1
- 241000612118 Samolus valerandi Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 1
- 229940090496 Urease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 235000003095 Vaccinium corymbosum Nutrition 0.000 description 1
- 240000001717 Vaccinium macrocarpon Species 0.000 description 1
- 244000077923 Vaccinium vitis idaea Species 0.000 description 1
- 235000017606 Vaccinium vitis idaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000010711 Vigna angularis Nutrition 0.000 description 1
- 240000007098 Vigna angularis Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229930014669 anthocyanidin Natural products 0.000 description 1
- 235000008758 anthocyanidins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003908 antipruritic agent Substances 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- BJQHLKABXJIVAM-UHFFFAOYSA-N bis(2-ethylhexyl) phthalate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCC(CC)CCCC BJQHLKABXJIVAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021029 blackberry Nutrition 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 235000007123 blue elder Nutrition 0.000 description 1
- 235000021014 blueberries Nutrition 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCO KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940084030 carboxymethylcellulose calcium Drugs 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 235000021019 cranberries Nutrition 0.000 description 1
- 235000020237 cranberry extract Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002905 effect on arthritis Effects 0.000 description 1
- 235000007124 elderberry Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- QOLIPNRNLBQTAU-UHFFFAOYSA-N flavan Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 QOLIPNRNLBQTAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- NWKFECICNXDNOQ-UHFFFAOYSA-N flavylium Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=C(C=CC=C2)C2=[O+]1 NWKFECICNXDNOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 238000009775 high-speed stirring Methods 0.000 description 1
- 235000010181 horse chestnut Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002700 inhibitory effect on cancer Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229940037627 magnesium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L magnesium;dodecyl sulfate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000011242 molecular targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 229940124303 multikinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229940124595 oriental medicine Drugs 0.000 description 1
- 238000002103 osmometry Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000008023 pharmaceutical filler Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 1
- 238000012643 polycondensation polymerization Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- XFZJEEAOWLFHDH-UKWJTHFESA-N procyanidin B1 Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](O)[C@H](C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)C=2C(O)=CC(O)=C3C[C@@H]([C@H](OC3=2)C=2C=C(O)C(O)=CC=2)O)=CC=C(O)C(O)=C1 XFZJEEAOWLFHDH-UKWJTHFESA-N 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- KNAPHRIACIMBNT-UHFFFAOYSA-N profisetinidin Natural products Oc1ccc2C3OC4C(Oc5cc(O)ccc5C4OC3C(Oc2c1)c1ccc(O)c(O)c1)c1ccc(O)c(O)c1 KNAPHRIACIMBNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-WCBMZHEXSA-N pseudoephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WCBMZHEXSA-N 0.000 description 1
- 229960003908 pseudoephedrine Drugs 0.000 description 1
- 235000021013 raspberries Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940037001 sodium edetate Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 210000002820 sympathetic nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 239000002601 urease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical class [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/17—Gnetophyta, e.g. Ephedraceae (Mormon-tea family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（ephedrine alkaloids-free Ephedra Herb extract: EFE）由来の重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物及びその製造方法、並びに該抽出分画物を含む医薬組成物に関する。本発明の医薬組成物は抗がん薬、抗転移薬、疼痛抑制薬、並びに抗インフルエンザウイルス薬として有用である。
タンニンは、植物の幹、皮、葉、実等から抽出される天然物で、タンパク質や塩基性化合物等と結合して難溶性にする性質をもつポリフェノールをいう。身近な食品、嗜好品、工業用等に使われる植物に含まれている。タンニンには、酸や酵素が存在するとき加水分解されやすい加水分解型タンニンと、縮合が進む縮合型タンニンがある。加水分解型タンニンは比較的低分子であることも手伝って、生薬等多くの植物材料から単離、構造決定が進み、様々なタイプのものが明らかにされている。一方、縮合型タンニンは明確には同定されていなかった。1989年、Weingesは無色の植物抽出物を酸で加熱した際にアントシア
ニジンを生じる物質をプロアントシアニジンと名づけた。そして構成成分がフラバン 3-
オール又はフラバン 3,4-ジオールで複数の連結したフラボノイド単位からなることを明
らかにした。従来、縮合型タンニンと呼ばれていた多くの果実成分の実体がプロアントシアニジンであることが明らかにされており、プロアントシアニジンに関する研究が多くなされ、プロペラルゴニジン（Propelargonidin）、プロシアニジン（Procyanidin）、プロデルフィニジン（Prodelphinidin）、プロギボルチニジン（Proguibourtinidin）、プロ
フィセチニジン（Profisetinidin）、プロロビネチニジン（Prorobinetinidin）、プロテラカシジン（Proteracacidin）、プロメラカシジン（Promelacacidin）、プロアピゲニニジン（Proapigeninidin）、プロルテオリニジン（Proluteolinidin）等の化学構造及び薬理作用が明らかになっている。すなわち、プロアントシアニジンは、各種植物中に存在する縮合又は重合したタンニンであり、フラバン 3-オール又はフラバン 3,4-ジオールを構成単位として縮重合した化合物群である。
ニジンを生じる物質をプロアントシアニジンと名づけた。そして構成成分がフラバン 3-
オール又はフラバン 3,4-ジオールで複数の連結したフラボノイド単位からなることを明
らかにした。従来、縮合型タンニンと呼ばれていた多くの果実成分の実体がプロアントシアニジンであることが明らかにされており、プロアントシアニジンに関する研究が多くなされ、プロペラルゴニジン（Propelargonidin）、プロシアニジン（Procyanidin）、プロデルフィニジン（Prodelphinidin）、プロギボルチニジン（Proguibourtinidin）、プロ
フィセチニジン（Profisetinidin）、プロロビネチニジン（Prorobinetinidin）、プロテラカシジン（Proteracacidin）、プロメラカシジン（Promelacacidin）、プロアピゲニニジン（Proapigeninidin）、プロルテオリニジン（Proluteolinidin）等の化学構造及び薬理作用が明らかになっている。すなわち、プロアントシアニジンは、各種植物中に存在する縮合又は重合したタンニンであり、フラバン 3-オール又はフラバン 3,4-ジオールを構成単位として縮重合した化合物群である。
プロアントシアニジンの化学構造は、一般に、フラバン 3-オール又はフラバン 3,4-ジオールを構成ユニットとして4β位→6位、4β位→8位、4β位→8位・2β位→Ｏ→７位等
の結合様式によって重合した二量体以上の重合体である（非特許文献1,2）。結合様式の
違いから数種類に分類されている。その１つは、２つ以上のフラバン 3-オール構造が4β位→8位又は4β位→6位を介して結合しているプロアントシアニジンBタイプ、もう１つはフラバン 3-オール構造が4β位→8位及び2β位→Ｏ→７位又は4β位→6位及び2β位→Ｏ
→７位の結合が少なくとも１箇所に存在するプロアントシアニジンAタイプである（図１
参照）。
の結合様式によって重合した二量体以上の重合体である（非特許文献1,2）。結合様式の
違いから数種類に分類されている。その１つは、２つ以上のフラバン 3-オール構造が4β位→8位又は4β位→6位を介して結合しているプロアントシアニジンBタイプ、もう１つはフラバン 3-オール構造が4β位→8位及び2β位→Ｏ→７位又は4β位→6位及び2β位→Ｏ
→７位の結合が少なくとも１箇所に存在するプロアントシアニジンAタイプである（図１
参照）。
縮合型タンニンは加水分解型タンニンに比べて分子量の幅が広く、分子量の大きいものでは約20,000に達する（非特許文献3）。
プロアントシアニジンは多様な生理活性を示すことが知られており、抗腫瘍、抗炎症、抗老化、抗酸化、抗アレルギー、抗菌、育毛等の活性が報告されているが（非特許文献4,5）、これらの生理活性とプロアントシアニジンの重合度数との構造活性相関に関しては
、全て明確にされているわけではない（特許文献1）。特許文献2では、プロシアニジンA
タイプ及びプロシアニジンBタイプ（カテコールタイプのみ）の単量体単位の結合がC-4、C-8位で生じる構造式が示されている。特許文献3では、プロアントシアニジンAタイプの
重合体、並びにプロアントシアニジンBタイプ（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ
、単量体単位の結合がC-4、C-8位で生じる）の縮合体・重合体の肝線維化抑制効果が示されている。特許文献4では、プロアントシアニジンB（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ）単量体単位の結合がC-4、C-6、C-8位で生じ、プロアントシアニジンを形成し、こ
れがウレアーゼ阻害作用を有することを報告している。
、全て明確にされているわけではない（特許文献1）。特許文献2では、プロシアニジンA
タイプ及びプロシアニジンBタイプ（カテコールタイプのみ）の単量体単位の結合がC-4、C-8位で生じる構造式が示されている。特許文献3では、プロアントシアニジンAタイプの
重合体、並びにプロアントシアニジンBタイプ（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ
、単量体単位の結合がC-4、C-8位で生じる）の縮合体・重合体の肝線維化抑制効果が示されている。特許文献4では、プロアントシアニジンB（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ）単量体単位の結合がC-4、C-6、C-8位で生じ、プロアントシアニジンを形成し、こ
れがウレアーゼ阻害作用を有することを報告している。
プロアントシアニジンを含む植物には、例えば、リンゴ、ブルーベリー、エルダーベリー、ブドウ、ストロベリー、レッドカーラント、カウベリー、グースベリー、クランベリー、サーモンベリー、ビルベリー、カシス、チェリー、ハクルベリー、ブラックベリー、プラム、ホワートルベリー、ボイセンベリー、マルベリー、ラズベリー、レッドカーラント、ローガンベリー、柿、松、樫、山桃、麦、小麦、大豆、黒大豆、カカオ、小豆、トチ、ピーナッツ、イチョウ葉、緑茶、大黄、麻黄、楊梅皮等が知られている（特許文献5,6
）。
）。
麻黄はマオウ科植物Ephedra sinica Stapf、Ephedra intermedia Schrenk et C. A. Meyer又はEphedra equisetina Bunge （Ephedraceae）の地上茎である。麻黄は古来より使
われてきた最重要の生薬である。麻黄は日本薬局方によって総アルカロイド（エフェドリン及びプソイドエフェドリン）を0.7%以上含むと規定され、麻黄の薬理作用のほとんどはエフェドリンアルカロイドに由来すると考えられてきた（非特許文献6）。一方、麻黄の
副作用である動悸、血圧上昇、不眠、排尿障害等は、エフェドリンアルカロイドの中枢神経及び交感神経刺激作用によって生じるが、麻黄の主作用と副作用を分離することは困難であると考えられ、麻黄の副作用を除くために、麻黄からエフェドリンアルカロイドを除去するという発想は、これまでなかった。
われてきた最重要の生薬である。麻黄は日本薬局方によって総アルカロイド（エフェドリン及びプソイドエフェドリン）を0.7%以上含むと規定され、麻黄の薬理作用のほとんどはエフェドリンアルカロイドに由来すると考えられてきた（非特許文献6）。一方、麻黄の
副作用である動悸、血圧上昇、不眠、排尿障害等は、エフェドリンアルカロイドの中枢神経及び交感神経刺激作用によって生じるが、麻黄の主作用と副作用を分離することは困難であると考えられ、麻黄の副作用を除くために、麻黄からエフェドリンアルカロイドを除去するという発想は、これまでなかった。
本発明者らは、これまでの研究から、麻黄の非アルカロイド画分に肝細胞増殖因子(HGF)受容体c-Met キナーゼ阻害作用を介した抗がん抗転移作用があることを突き止め、さら
に麻黄の非アルカロイド画分からHerbacetin 配糖体を分離し、非糖部分のHerbacetin にc-Met キナーゼ阻害作用を含むマルチキナーゼ阻害作用があることを明らかにした。その中でも、Herbacetin のTrkA(NGF 受容体)阻害作用は強く、NGF-TrkA シグナル阻害を介した疼痛抑制作用を有することも見出した (特許文献7,8)。これらの結果から、麻黄の薬理作用の一部はエフェドリンアルカロイドに依存せず、したがって麻黄から副作用成分を除去できることが示唆された。そこで麻黄エキスからエフェドリンアルカロイドを除去したEFEを作製したところ（非特許文献7）（特許文献9）、疼痛抑制作用、抗インフルエンザ
ウイルス作用を含むいくつかの薬理作用を有することや(特許文献9)（非特許文献8）、不眠、動悸、興奮等の副作用が消失していることが明らかになった（非特許文献9）。しか
し、麻黄エキスはもとより、EFEは様々な成分を含んでいるため、通常服用可能な嵩が制
限要因となるため、より有効性が期待される高力価の投与ができなかった。
に麻黄の非アルカロイド画分からHerbacetin 配糖体を分離し、非糖部分のHerbacetin にc-Met キナーゼ阻害作用を含むマルチキナーゼ阻害作用があることを明らかにした。その中でも、Herbacetin のTrkA(NGF 受容体)阻害作用は強く、NGF-TrkA シグナル阻害を介した疼痛抑制作用を有することも見出した (特許文献7,8)。これらの結果から、麻黄の薬理作用の一部はエフェドリンアルカロイドに依存せず、したがって麻黄から副作用成分を除去できることが示唆された。そこで麻黄エキスからエフェドリンアルカロイドを除去したEFEを作製したところ（非特許文献7）（特許文献9）、疼痛抑制作用、抗インフルエンザ
ウイルス作用を含むいくつかの薬理作用を有することや(特許文献9)（非特許文献8）、不眠、動悸、興奮等の副作用が消失していることが明らかになった（非特許文献9）。しか
し、麻黄エキスはもとより、EFEは様々な成分を含んでいるため、通常服用可能な嵩が制
限要因となるため、より有効性が期待される高力価の投与ができなかった。
一方、麻黄由来の低分子のプロアントシアニジンAタイプあるいはプロアントシアニジ
ンBタイプ（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ）の重合したプロアントシアニジン
は既に報告されている（非特許文献10,11,12）。さらに最近、麻黄の70%アセトン抽出液
から、プロアントシアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの両方が重合したオリゴマーが単離された（非特許文献13）。
ンBタイプ（ピロガロールタイプ、カテコールタイプ）の重合したプロアントシアニジン
は既に報告されている（非特許文献10,11,12）。さらに最近、麻黄の70%アセトン抽出液
から、プロアントシアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの両方が重合したオリゴマーが単離された（非特許文献13）。
麻黄由来のプロアントシアニジン含有液を、分画分子量が5000以下の限外濾過膜及び／又は食塩排除率が30%以下の逆浸透膜で処理した後、分画分子量が500～5000の画分を分取することを特徴とするプロアントシアニジンの製造法が知られている（特許文献6）。
しかしこれまでに、重量平均分子量が20,000を超える高分子タンニンに関する報告はない。
「スタインエッガー・ヘンゼル 生薬学［上］ 化学・薬理学へのアプローチ」（糸川秀治他訳、（株）廣川書店発行）204～208頁（1977年）
Porter L．J．，Flavans and proanthocyanidins，In：Harborne Ｊ．B．（ed．），"The Flavonoids，Advances in Research Science 1986"，Chapman & Hall，1994，pp．23-55）
大原誠資、「熱帯樹林の成分と利用（２）タンニン」、熱帯林業、39, 56-60、1997
バート・シュビッタース／ジャック・マスケリエ著、「２１世紀の生体防御物質OPC」（佐々木瞭訳、フレグレンスジャーナル社発行、1997年）50-135頁
Tomoya Takahashi，et al．，Journal of Investigative Dermatology，112，310－316，1999
原田正敏, 麻黄の薬理学,現代東洋医学, 1(2), 34-39, 1980
Oshima, N., et al., J Nat Med, 70, 554-562, 2016
Hyuga, S., et al., J Nat Med, 70, 571-583, 2016
竹元裕明ら、第33回和漢医薬学会学術大会要旨集、ポスターP4-5, p87, 2016
Molecules. 2013 May 6;18(5):5172-89. A-type proanthocyanidins from the stems of Ephedra sinica (Ephedraceae) and their antimicrobial activities. Zang X1, Shang M, Xu F, Liang J, Wang X, Mikage M, Cai S.
Molecules. 2013 May 10;18(5):5326-34. Characterization of phenolic constituents from ephedra herb extract. Amakura Y1, Yoshimura M, Yamakami S, Yoshida T, Wakana D, Hyuga M, Hyuga S, Hanawa T, Goda Y.
タンニンに関する最近の研究 藥學雜誌 103(2), 125-142, 1983
Molecules. 2017 August 6;22(8):1308 Characterization of proanthocyanidin oligomers of Ephedra sinica. Orejola J, Matsuo Y, Saito Y, Tanaka T.
Kennedy, J.A., et al., J. Chromatogr. A 995, 99-107, 2003
麻黄エキスからエフェドリンアルカロイドを除去したEFEの製造方法が確立され、c-Met
キナーゼ阻害作用を介する抗がん作用・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエ
ンザウイルス作用を有し、エフェドリンアルカロイドによる副作用を排除した医薬品が提
供できるようになった。しかし、麻黄エキスはもとより、EFEは様々な成分を含んでいる
ため、通常服用可能な嵩が制限要因となるため、より有効性が期待される高力価の投与ができなかった。麻黄エキスあるいはEFE中のc-Met キナーゼ阻害作用を介する抗がん作用
・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエンザウイルス作用を有する活性成分を精査した結果、麻黄の有効性成分の1つとしてHerbacetin 配糖体が見出されているが、薬効が高くないことから、医薬品として最適でなかった。
キナーゼ阻害作用を介する抗がん作用・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエ
ンザウイルス作用を有し、エフェドリンアルカロイドによる副作用を排除した医薬品が提
供できるようになった。しかし、麻黄エキスはもとより、EFEは様々な成分を含んでいる
ため、通常服用可能な嵩が制限要因となるため、より有効性が期待される高力価の投与ができなかった。麻黄エキスあるいはEFE中のc-Met キナーゼ阻害作用を介する抗がん作用
・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエンザウイルス作用を有する活性成分を精査した結果、麻黄の有効性成分の1つとしてHerbacetin 配糖体が見出されているが、薬効が高くないことから、医薬品として最適でなかった。
本発明は、麻黄エキスあるいはEFEから、c-Met キナーゼ阻害作用を介する抗がん作用
・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエンザウイルス作用を持つ新規活性成分を明らかにし、その成分の製造方法を確立することにより、高力価の投与が可能で、かつ、活性成分以外の成分による副作用発現リスクが排除された医薬品を提供することを目的とする。さらに、本発明に関する研究過程で、活性成分の新規効能効果（c-Met発現量の低
下作用及び、上皮成長因子受容体(EGFR)リン酸化阻害作用とEGFR発現量の低下作用を介する抗がん作用）を見出したので、本活性成分の用途として提供することを目的とする。
・抗転移作用、疼痛抑制作用、及び抗インフルエンザウイルス作用を持つ新規活性成分を明らかにし、その成分の製造方法を確立することにより、高力価の投与が可能で、かつ、活性成分以外の成分による副作用発現リスクが排除された医薬品を提供することを目的とする。さらに、本発明に関する研究過程で、活性成分の新規効能効果（c-Met発現量の低
下作用及び、上皮成長因子受容体(EGFR)リン酸化阻害作用とEGFR発現量の低下作用を介する抗がん作用）を見出したので、本活性成分の用途として提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、麻黄エキスあるいはEFE
を水／n-ブタノールで抽出した水可溶部を、芳香族系合成吸着剤Diaion HP-20カラムを用いて水、20%～100%メタノール（MeOH）で溶出させて分画し、20%メタノール以上の溶出部について分析したところ、この化学構造がプロシアニジンAタイプ、及びプロシアニジンBタイプ（ピロガロールタイプ及びカテコールタイプ）のC-4、C-6、C-8位で重合する重量
平均分子量45，000以上の高分子であることを見出した。
を水／n-ブタノールで抽出した水可溶部を、芳香族系合成吸着剤Diaion HP-20カラムを用いて水、20%～100%メタノール（MeOH）で溶出させて分画し、20%メタノール以上の溶出部について分析したところ、この化学構造がプロシアニジンAタイプ、及びプロシアニジンBタイプ（ピロガロールタイプ及びカテコールタイプ）のC-4、C-6、C-8位で重合する重量
平均分子量45，000以上の高分子であることを見出した。
さらに、得られる成分群の構造を明らかにし、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物にc-Metキナーゼ阻害作用、c-Metリン酸化阻害作用、c-Met
発現量の低下作用を介する抗がん・抗転移作用、疼痛抑制作用、EGFRのリン酸化阻害作用及びEGFR発現量の低下作用を介する抗がん作用、並びに抗インフルエンザウイルス作用が存在することを発見して、本願発明を完成した。
発現量の低下作用を介する抗がん・抗転移作用、疼痛抑制作用、EGFRのリン酸化阻害作用及びEGFR発現量の低下作用を介する抗がん作用、並びに抗インフルエンザウイルス作用が存在することを発見して、本願発明を完成した。
すなわち、本願発明は以下のものを提供するものである。
［請求項１］
麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）由来の重量平
均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物であって、前記重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを30%以上含む抽出分画物。
［請求項２］
高分子縮合型タンニンが、エクステンションユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールが主にプロアントシアニジンBタイプで縮合し、その一部にプロアントシアニジンAタイプの縮合型タンニンユニットを含み、さらにターミ
ナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを
主に含み、ピロガロールタイプとカテコールタイプを約5:1で含む、請求項１記載の抽出
分画物。
［請求項３］
麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）の水溶性画分
をカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又はエタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得ることからなる、請求項１記載の抽出分画物の製造方法。
［請求項４］
請求項１又は２に記載の抽出分画物を含む医薬組成物。
［請求項５］
疼痛抑制薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
［請求項６］
c-Metを発現するがんに対する抗がん・抗転移薬である、請求項４に記載の医薬組成
物。
［請求項７］
EGFRを発現するがんに対する抗がん薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
「請求項８」
抗インフルエンザウイルス薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
［請求項９］
請求項１に記載の抽出分画物を用いる、高分子縮合型タンニンを活性成分として含有する医薬組成物の含量測定法。
［請求項１］
麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）由来の重量平
均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物であって、前記重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを30%以上含む抽出分画物。
［請求項２］
高分子縮合型タンニンが、エクステンションユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールが主にプロアントシアニジンBタイプで縮合し、その一部にプロアントシアニジンAタイプの縮合型タンニンユニットを含み、さらにターミ
ナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを
主に含み、ピロガロールタイプとカテコールタイプを約5:1で含む、請求項１記載の抽出
分画物。
［請求項３］
麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）の水溶性画分
をカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又はエタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得ることからなる、請求項１記載の抽出分画物の製造方法。
［請求項４］
請求項１又は２に記載の抽出分画物を含む医薬組成物。
［請求項５］
疼痛抑制薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
［請求項６］
c-Metを発現するがんに対する抗がん・抗転移薬である、請求項４に記載の医薬組成
物。
［請求項７］
EGFRを発現するがんに対する抗がん薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
「請求項８」
抗インフルエンザウイルス薬である、請求項４に記載の医薬組成物。
［請求項９］
請求項１に記載の抽出分画物を用いる、高分子縮合型タンニンを活性成分として含有する医薬組成物の含量測定法。
本発明により、麻黄エキス由来、又はEFE由来の重量平均分子量45,000以上の高分子縮
合型タンニンを含む抽出分画物を有効成分として含む医薬組成物を提供することが可能となり、疼痛抑制作用、c-Metを発現するがんの抗がん・抗転移薬、EGFRを発現するがんの
抗がん薬、及び抗インフルエンザウイルス作用を有する高力価で投与可能な医薬品を提供することができる。本発明の抽出分画物は、高分子画分（重量平均分子量45，000以上）
のプロアントシアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの重合したプロアントシアニジン（縮合型タンニン、高分子ポリフェノール）である。
合型タンニンを含む抽出分画物を有効成分として含む医薬組成物を提供することが可能となり、疼痛抑制作用、c-Metを発現するがんの抗がん・抗転移薬、EGFRを発現するがんの
抗がん薬、及び抗インフルエンザウイルス作用を有する高力価で投与可能な医薬品を提供することができる。本発明の抽出分画物は、高分子画分（重量平均分子量45，000以上）
のプロアントシアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの重合したプロアントシアニジン（縮合型タンニン、高分子ポリフェノール）である。
本発明によって、高力価の投与が可能で、かつ、活性成分以外の成分による副作用発現リスクが排除された医薬品を提供することが可能となる。
本発明は一態様として、麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）由来の重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を
提供する。
提供する。
本発明の抽出分画物を得るための原料として用いられる麻黄エキスは、日本薬局方の麻黄の熱水抽出物である。または、麻黄エキスからエフェドリンアルカロイドを除去したEFEである（特許文献9）。EFEは、麻黄エキスから陽イオン交換クロマトグラフィーによっ
てエフェドリンを除去し、濃縮乾燥を経ることによって得ることができる。後述する実施例に示すように、麻黄エキスを原料として用いた場合も、EFEを原料として用いた場合も
、同様に本発明の抽出分画物を得ることができる。
てエフェドリンを除去し、濃縮乾燥を経ることによって得ることができる。後述する実施例に示すように、麻黄エキスを原料として用いた場合も、EFEを原料として用いた場合も
、同様に本発明の抽出分画物を得ることができる。
本発明の抽出分画物は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含むことを特徴とする。重量平均分子量はGPC用標準ポリスチレンを標準物質として換算した重量
平均分子量である。本発明の抽出分画物は、重量平均分子量45，000以上の、プロアント
シアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの重合したプロアントシアニジン（縮合型タンニン、高分子ポリフェノール）である。
平均分子量である。本発明の抽出分画物は、重量平均分子量45，000以上の、プロアント
シアニジンAタイプ及びプロアントシアニジンBタイプの重合したプロアントシアニジン（縮合型タンニン、高分子ポリフェノール）である。
本発明の抽出分画物は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを30%以上
、より好ましくは40%以上含む。
、より好ましくは40%以上含む。
本発明の抽出分画物に含まれる高分子縮合型タンニンは、エクステンションユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールが主にプロアント
シアニジンBタイプで縮合し、その一部にプロアントシアニジンAタイプの縮合型タンニンユニットを含み、さらにターミナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを主に含み、ピロガロールタイプとカテコールタイプを約5:1で含む（図１参照）。
シアニジンBタイプで縮合し、その一部にプロアントシアニジンAタイプの縮合型タンニンユニットを含み、さらにターミナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを主に含み、ピロガロールタイプとカテコールタイプを約5:1で含む（図１参照）。
本発明は別の一態様として、麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）の水溶性画分をカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又は
エタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得ることからなる、本発明の抽出分画物の製造方法を提供する。
エタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得ることからなる、本発明の抽出分画物の製造方法を提供する。
具体的には、麻黄エキス由来、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）
を水に溶解したものを、極性の低い有機溶媒から極性の高い有機溶媒を用いて順次分配し、得られる水エキスをカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又はエタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得る。
を水に溶解したものを、極性の低い有機溶媒から極性の高い有機溶媒を用いて順次分配し、得られる水エキスをカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又はエタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を得る。
極性の低い有機溶媒の例としては、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル等が挙げられ、極性の高い有機溶媒の例としては、n-ブタノール、エタノール、メタノール、水等が挙げられる。分画に用いるカラムクロマトグラフィーでは、Diaion HP-20等のスチレン－ジビニルベンゼン系合成吸着剤あるいはその他の芳香族系合成吸着剤を用いることができる。各分画の分子量測定は、粘度法、ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC）、質量分析
法、浸透圧法等を用いることができる。本願実施例では、GPC用標準ポリスチレンを標準
物質とするGPCにより重量平均分子量を求めた。
法、浸透圧法等を用いることができる。本願実施例では、GPC用標準ポリスチレンを標準
物質とするGPCにより重量平均分子量を求めた。
具体的には、麻黄エキス又はEFEを水で溶解したものを、酢酸エチル、水飽和n-ブタノ
ールで順次分配し、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、及び水エキスの各分配エキスを得る。得られた各分配エキスのうち、水エキスに活性が認められたので、活性の認められた水エキスについて、さらにDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー（5.5 x 40 cm
、三菱化学）を用いて、H2O→20%MeOH→40%MeOH→MeOHの順で順次溶出して分画し、H2O分画物、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物の各分画物を得る。各分画物の活性を測定した結果、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物にc-Metキナーゼ阻害作用、
リン酸化阻害作用、発現量の低下作用、がん細胞の運動能抑制作用、EGFRのリン酸化阻害作用、発現量の低下作用、疼痛抑制作用、抗インフルエンザウイルス作用のあることがわかった。また、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンであった。
ールで順次分配し、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、及び水エキスの各分配エキスを得る。得られた各分配エキスのうち、水エキスに活性が認められたので、活性の認められた水エキスについて、さらにDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー（5.5 x 40 cm
、三菱化学）を用いて、H2O→20%MeOH→40%MeOH→MeOHの順で順次溶出して分画し、H2O分画物、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物の各分画物を得る。各分画物の活性を測定した結果、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物にc-Metキナーゼ阻害作用、
リン酸化阻害作用、発現量の低下作用、がん細胞の運動能抑制作用、EGFRのリン酸化阻害作用、発現量の低下作用、疼痛抑制作用、抗インフルエンザウイルス作用のあることがわかった。また、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンであった。
したがって、本願発明の抽出分画物は、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物を単独で、又は任意の組合せで用いることにより調製できることが明らかとなった。これらの結果から、効率のよい調製方法としては、上述する水エキスを100%MeOHで抽出して、100%MeOH分画物をさらにSephadex LH-20カラム等にかけて高分子画分を得ることで調製することも可能である。
本発明は別の一態様として、上記高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、後述する実施例に示すように、疼痛抑制薬、抗がん・抗転移薬、及び抗インフルエンザウイルス薬として有用である。また、本発明の医薬組成物は、麻黄エキスを原料として用いた場合も、EFEを原料として用いた場合も
、同様に有効な薬理作用を示す。
、同様に有効な薬理作用を示す。
本発明にかかる疼痛抑制薬、抗がん・抗転移薬、抗インフルエンザウイルス薬は、例えば、錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤等のような経口投与の製剤、経口投与に適した様々な液体製剤、又は注射剤のような非経口投与用製剤とすることが可能である。経口投与が好ましい。
経口投与の製剤の場合、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出
分画物を製剤担体と共に錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤等の形態で製剤化して得られる。
分画物を製剤担体と共に錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤等の形態で製剤化して得られる。
製剤担体としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、及び可塑剤等を使用できる。賦形剤としては、例えば、白糖、塩化ナトリウム、マンニトール、乳糖、ブドウ糖、でんぷん、炭酸カルシウム等を使用できる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、等を使用できる。崩壊剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、乾燥デンプン、炭酸水素ナトリウム、等を使用できる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等を使用できる。可塑剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ジオクチルフタレート、ジブチルフタレート、ヒマシ油等を使用できる。
上記の経口投与の製剤化の場合、水溶性高分子及び界面活性剤等の分散剤を使用することも可能である。水溶性高分子としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等を使用できる。界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等を使用できる。
錠剤を調製するには、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を、上記製剤担体を用いて常法により錠剤とする。顆粒剤又は細粒剤は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物に上記製剤担体を添加し、流動層造粒、高速攪拌造粒、攪拌流動層造粒、遠心流動造粒、押し出し造粒等で顆粒化することにより調製できる。カプセル剤は、不活性な医薬充填剤又は希釈剤と共に混合して調製し、硬ゼラチンカプセル又は軟カプセルに詰める。
経口液体製剤は、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物と、甘味料（例えば、ショ糖）、保存剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、着色料、香料等とを混合して調製する。
注射用製剤は、例えば、液剤、乳濁液、又は懸濁液の形態で調製され、血液に対して等張にされる。液体、乳濁液又は懸濁液の形態の製剤は、例えば、水性媒体、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール等を用いて調製される。
注射用製剤において、当技術分野で通常使用されている添加剤を適宜用いることができ、例えば、等張化剤、安定化剤、緩衝剤、保存剤、キレート剤、抗酸化剤等を使用できる。等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、ソルビトール、マンニトール等が挙げられる。安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム等が挙げられる。緩衝剤としては、例えば、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤等が挙げられる。保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル、ベンジルアルコール等が挙げられる。キレート剤としては、例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等が挙げられる。
本発明の疼痛抑制薬、抗がん・抗転移薬、抗インフルエンザウイルス薬の投与量としては、例えば、重量平均分子量45,000以上の高分子縮合型タンニンを含む抽出分画物を、一回の投与につき体重1 kgあたり0.5mgから500mg、好ましくは10mgから200 mgの範囲で投与量が選択できる。しかしながら、本発明の医薬組成物はこれらの投与量に制限されるものではない。
さらに本発明は別の一態様として、本発明の抽出分画物を用いる、高分子縮合型タンニンを活性成分とする医薬組成物の管理方法のひとつとして含量測定法を提供する。具体的
には、本発明で示した高分子縮合型タンニンの分子量の解析に用いたGPC分析を用いて、
含量未知の試料及び高分子縮合型タンニン標準物質について、それぞれ高分子縮合型タンニンのピーク面積を求め、ピーク面積の相対値から試料中の高分子縮合型タンニン含量を算出することができる。また、この含量測定法は、麻黄エキスやEFE中の高分子縮合型タ
ンニン含量を測定することも可能で、高分子縮合型タンニンが活性成分とする薬効、すなわち、疼痛抑制薬、抗がん・抗転移薬、及び抗インフルエンザウイルス薬として製造する際の管理方法のひとつとして用いることができる。
には、本発明で示した高分子縮合型タンニンの分子量の解析に用いたGPC分析を用いて、
含量未知の試料及び高分子縮合型タンニン標準物質について、それぞれ高分子縮合型タンニンのピーク面積を求め、ピーク面積の相対値から試料中の高分子縮合型タンニン含量を算出することができる。また、この含量測定法は、麻黄エキスやEFE中の高分子縮合型タ
ンニン含量を測定することも可能で、高分子縮合型タンニンが活性成分とする薬効、すなわち、疼痛抑制薬、抗がん・抗転移薬、及び抗インフルエンザウイルス薬として製造する際の管理方法のひとつとして用いることができる。
本発明を実施例によりさらに詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。種々の変更、修飾が当業者には可能であり、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。
（実施例１）麻黄エキス又はEFEの分画、分析
麻黄エキス（300 g）を水（5 L）で溶解したものを、n-ヘキサン（4 L）、酢酸エチル
（12 L）、水飽和n-ブタノール（12 L）で順次分配し、n-ヘキサンエキス（92.3 mg）、
酢酸エチルエキス（13.2 g）、n-ブタノールエキス（65.7 g）、水エキス（161.1 g）を
得た。麻黄エキス由来の得られた各分配エキスにつき、c-Metキナーゼ阻害活性、がん細
胞の運動抑制活性を求めた。その結果、n-ブタノール及び水エキスに活性が認められた。
（実施例１）麻黄エキス又はEFEの分画、分析
麻黄エキス（300 g）を水（5 L）で溶解したものを、n-ヘキサン（4 L）、酢酸エチル
（12 L）、水飽和n-ブタノール（12 L）で順次分配し、n-ヘキサンエキス（92.3 mg）、
酢酸エチルエキス（13.2 g）、n-ブタノールエキス（65.7 g）、水エキス（161.1 g）を
得た。麻黄エキス由来の得られた各分配エキスにつき、c-Metキナーゼ阻害活性、がん細
胞の運動抑制活性を求めた。その結果、n-ブタノール及び水エキスに活性が認められた。
収量が多く、活性の認められた水エキス（90 g）について、さらにDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー（5.5 x 40 cm、三菱化学）を用いて、H2O→10%MeOH→20%MeOH→30%MeOH→40%MeOH→50%MeOH→MeOHの順で順次溶出して分画し、H2O分画物（47.9 g）、10%MeOH分画物（2.5 g）、20%MeOH分画物（2.6 g）、30%MeOH分画物（7.0 g）、40%MeOH分画物
（11.5 g）、50%MeOH分画物（5.1 g）、MeOH分画物（2.6 g）の各分画物を得た。得られ
た各分画物について、c-Metキナーゼ阻害活性、がん細胞の運動抑制活性試験を行った結
果、特に30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、次いで50%MeOH分画物に強い活性が認められた
。
（11.5 g）、50%MeOH分画物（5.1 g）、MeOH分画物（2.6 g）の各分画物を得た。得られ
た各分画物について、c-Metキナーゼ阻害活性、がん細胞の運動抑制活性試験を行った結
果、特に30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、次いで50%MeOH分画物に強い活性が認められた
。
そこで、水エキスの各分画物の含有成分について比較する目的で、HPLC分析を行った。HPLC条件は以下の通りである。
カラム：L-column ODS（2.1 I.D. x 150 mm）（化学物質評価研究機構）、
カラム温度：40℃、
流速：0.3 mL/min、
測定波長：200-400 nm、
移動相：（A）0.1%ギ酸‐蒸留水及び（B）0.1%ギ酸‐アセトニトリル〔濃度勾配条件（B in A）：0→30 min（0→50%）、30→35 min（50→85%）、35→40 min（85%）、40→50 min（85→90%）、50→55 min（90→100%）、55→60 min（100%）〕。
カラム温度：40℃、
流速：0.3 mL/min、
測定波長：200-400 nm、
移動相：（A）0.1%ギ酸‐蒸留水及び（B）0.1%ギ酸‐アセトニトリル〔濃度勾配条件（B in A）：0→30 min（0→50%）、30→35 min（50→85%）、35→40 min（85%）、40→50 min（85→90%）、50→55 min（90→100%）、55→60 min（100%）〕。
その結果、H2O分画物及び10%MeOH分画物以外の画分に縮合型タンニンオリゴマーに特徴的なブロードピークが観察された(図２)。
また、各分画物について13C-NMRによる構造解析を行った。NMRの条件は、測定溶媒としてMeOH-d4:D2O(1:1)を用い、装置はBrucker AVANCE500 (Bruker BioSpin)を用いた。その結果、H2O分画物及び10%MeOH分画物以外の画分にフラバン 3-オール骨格に対応するシグ
ナルが共通して観察され、活性に寄与している画分は縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認された。強い活性を示した30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、50%MeOH分画物は特に強いシグナルを認めた。また、いずれの分画物も、スペ
クトル解析に基づき、プロアントシアニジンAタイプを含む構造を有すること、さらにカ
テコールタイプのシグナル強度が小さいことから、ピロガロールタイプが多いことが示唆された(図３)。
ナルが共通して観察され、活性に寄与している画分は縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認された。強い活性を示した30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、50%MeOH分画物は特に強いシグナルを認めた。また、いずれの分画物も、スペ
クトル解析に基づき、プロアントシアニジンAタイプを含む構造を有すること、さらにカ
テコールタイプのシグナル強度が小さいことから、ピロガロールタイプが多いことが示唆された(図３)。
同様に、EFE（400 g）を水（5 L）で溶解したものを、酢酸エチル（10 L）、水飽和n-
ブタノール（10 L）で順次分配し、酢酸エチルエキス（7.3 g）、n-ブタノールエキス（85.0 g）、水エキス（311.0 g）を得た。EFE由来の得られた各分配エキスにつき、疼痛試
験を行った。その結果、水エキスに活性が認められた。活性の認められた水エキス（290 g）について、さらにDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー（5.5 x 40 cm、三菱化学）を用いて、H2O→20%MeOH→40%MeOH→MeOHの順で順次溶出して分画し、H2O分画物（190.6 g）、20%MeOH分画物（35.9 g）、40%MeOH分画物（41.7 g）、MeOH分画物（13.9 g）の各
分画物を得た。得られた各分画物について、疼痛試験を行った結果、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物，MeOH分画物に活性が認められた。
ブタノール（10 L）で順次分配し、酢酸エチルエキス（7.3 g）、n-ブタノールエキス（85.0 g）、水エキス（311.0 g）を得た。EFE由来の得られた各分配エキスにつき、疼痛試
験を行った。その結果、水エキスに活性が認められた。活性の認められた水エキス（290 g）について、さらにDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー（5.5 x 40 cm、三菱化学）を用いて、H2O→20%MeOH→40%MeOH→MeOHの順で順次溶出して分画し、H2O分画物（190.6 g）、20%MeOH分画物（35.9 g）、40%MeOH分画物（41.7 g）、MeOH分画物（13.9 g）の各
分画物を得た。得られた各分画物について、疼痛試験を行った結果、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物，MeOH分画物に活性が認められた。
そこで、水エキスの各分画物の含有成分について比較する目的で、同様にHPLC分析を行った。その結果、活性の認められた20%MeOH分画物、40%MeOH分画物，MeOH分画物に縮合型タンニンオリゴマーに特徴的なブロードピークが観察された(図４)。
また、各分画物について13C-NMRによる構造解析を行った結果、活性の認められた20%MeOH分画物、40%MeOH分画物，MeOH分画物にフラバン 3-オール骨格に対応するシグナルが共通して観察され、麻黄エキス由来の活性画分と同様の縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認された（図５）。
なお、本実施例におけるc-Metキナーゼ阻害活性は実施例5及び7に記載の方法、がん細
胞の運動抑制活性は実施例6及び8に記載の方法、疼痛試験は実施例9に記載の方法に準じ
て行った。
（実施例２）活性画分の分子量分析
活性に寄与している画分が縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認されたため、さらに活性画分を限外濾過により分子量による分画を行った。麻黄エキス由来の水エキス-40%MeOH分画物の20%MeOH不溶部を、Vivaspin 500 (GE Healthcare: 3、5、10、30、50、100 KDa)を用いて、11400 x g、10分間遠心分離し、7画分〔<3 KDa (収量約10%)、3～5 KDa（約4%）、5～10 KDa（約5%）、10～30 KDa（約6%）、30
～50 KDa（約2%）、50～100 KDa（約3%）、>100 KDa（約70%）〕を得た。各画分について、c-Metキナーゼ阻害作用の試験を行った結果、>100 KDaの高分子画分（麻黄エキス高分
子画分）に活性が認められた。この高分子画分について13C-NMRによる構造解析を行った
結果、同様の縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認された。なお、水エキス-30%MeOH分画物の>100 KDaの高分子画分についても13C-NMR（測
定溶媒としてacetone-d6:D2O(1:1)）による構造解析を行った結果、同様のスペクトルが
観察された（図６）。
胞の運動抑制活性は実施例6及び8に記載の方法、疼痛試験は実施例9に記載の方法に準じ
て行った。
（実施例２）活性画分の分子量分析
活性に寄与している画分が縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認されたため、さらに活性画分を限外濾過により分子量による分画を行った。麻黄エキス由来の水エキス-40%MeOH分画物の20%MeOH不溶部を、Vivaspin 500 (GE Healthcare: 3、5、10、30、50、100 KDa)を用いて、11400 x g、10分間遠心分離し、7画分〔<3 KDa (収量約10%)、3～5 KDa（約4%）、5～10 KDa（約5%）、10～30 KDa（約6%）、30
～50 KDa（約2%）、50～100 KDa（約3%）、>100 KDa（約70%）〕を得た。各画分について、c-Metキナーゼ阻害作用の試験を行った結果、>100 KDaの高分子画分（麻黄エキス高分
子画分）に活性が認められた。この高分子画分について13C-NMRによる構造解析を行った
結果、同様の縮合型タンニン（プロアントシアニジン）オリゴマー画分であることが確認された。なお、水エキス-30%MeOH分画物の>100 KDaの高分子画分についても13C-NMR（測
定溶媒としてacetone-d6:D2O(1:1)）による構造解析を行った結果、同様のスペクトルが
観察された（図６）。
活性画分（麻黄エキス高分子画分、EFE由来水エキス-20%MeOH、40%MeOH、MeOH分画物）についてGPC分析を行った。GPC用標準ポリスチレンを標準物質として、以下の条件で分析した。
カラム：TSK-gel Super AW4000（6.0 I.D. x 150 mm）（東ソー）、
カラム温度：30℃、
流速：0.3 mL/min、
測定波長：280 nm、
移動相：N,N-ジメチルホルムアミド+3M ギ酸アンモニウム（0.5%）
分析した結果、いずれの分画物においても、保持時間7.5～8.5分にピークトップを示す高分子領域のピークが観察された（図７）。Chromato-PRO-GPCを使用してデータ処理を行い、各分画物の重量平均分子量を算出した結果、麻黄エキス高分子画分：94372、20%MeOH分画物：113279、40%MeOH分画物：59042、MeOH分画物：45004（GPC用標準ポリスチレンを
標準物質として換算した重量平均分子量で、いずれも3回測定した値の平均値）であった
。
（実施例３）部分構造の解析
活性画分の一つである麻黄エキス由来水エキス-40%MeOH分画物について、フロログルシノール分解を行った。その結果、catechin、epicatechin、gallocatechin、epicatechin-(4→2)-phloroglucinol、gallocatechin-(4→2)-phloroglucinol、prodelphinidin A-type-(4′→2)-phloroglucinolを分解生成物として確認した（図8）。
カラム温度：30℃、
流速：0.3 mL/min、
測定波長：280 nm、
移動相：N,N-ジメチルホルムアミド+3M ギ酸アンモニウム（0.5%）
分析した結果、いずれの分画物においても、保持時間7.5～8.5分にピークトップを示す高分子領域のピークが観察された（図７）。Chromato-PRO-GPCを使用してデータ処理を行い、各分画物の重量平均分子量を算出した結果、麻黄エキス高分子画分：94372、20%MeOH分画物：113279、40%MeOH分画物：59042、MeOH分画物：45004（GPC用標準ポリスチレンを
標準物質として換算した重量平均分子量で、いずれも3回測定した値の平均値）であった
。
（実施例３）部分構造の解析
活性画分の一つである麻黄エキス由来水エキス-40%MeOH分画物について、フロログルシノール分解を行った。その結果、catechin、epicatechin、gallocatechin、epicatechin-(4→2)-phloroglucinol、gallocatechin-(4→2)-phloroglucinol、prodelphinidin A-type-(4′→2)-phloroglucinolを分解生成物として確認した（図8）。
よって、エクステンションユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールが主にBタイプで縮合し、その一部にAタイプの縮合型タンニンユニ
ットを含み、さらにターミナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを主に含むことが明らかとなった。また、ピロガロールタイプと
カテコールタイプのおおよそ存在比をチオール分解したユニットをHPLC分析で算出した結果、おおよそ5:1であった。（図１参照）
（実施例４）EFE由来の抽出分画物中の高分子縮合型タンニンの含有量
縮合型タンニンオリゴマー画分は、Sephadex LH-20カラムクロマトグラフィーで含水アセトン（アセトン-水（7:3））溶出により分画される報告がある（非特許文献14）。本方法に従い、70%アセトン（アセトン-水（7:3））溶出部を高分子縮合型タンニン画分とし
、活性画分（EFE由来水エキス-20%MeOH、40%MeOH、MeOH分画物）中の高分子縮合型タンニン量を見積もった。その結果、20%MeOH分画物に約32%、40%MeOH分画物に約45%、MeOH分画物に約43%であった。
ットを含み、さらにターミナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを主に含むことが明らかとなった。また、ピロガロールタイプと
カテコールタイプのおおよそ存在比をチオール分解したユニットをHPLC分析で算出した結果、おおよそ5:1であった。（図１参照）
（実施例４）EFE由来の抽出分画物中の高分子縮合型タンニンの含有量
縮合型タンニンオリゴマー画分は、Sephadex LH-20カラムクロマトグラフィーで含水アセトン（アセトン-水（7:3））溶出により分画される報告がある（非特許文献14）。本方法に従い、70%アセトン（アセトン-水（7:3））溶出部を高分子縮合型タンニン画分とし
、活性画分（EFE由来水エキス-20%MeOH、40%MeOH、MeOH分画物）中の高分子縮合型タンニン量を見積もった。その結果、20%MeOH分画物に約32%、40%MeOH分画物に約45%、MeOH分画物に約43%であった。
(実施例５) 麻黄エキス分配エキスのc-Metキナーゼ阻害作用
麻黄エキスを水で溶解したものをn-ヘキサン、酢酸エチル、水飽和n-ブタノールで順次分配し、得られた各分画物（n-ヘキサンエキス、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、水エキス）のc-Metキナーゼ阻害作用をc-Metのキナーゼドメインの組換えタンパク質と合成基質ペプチドを用いたインビトロアッセイにより調べた。
麻黄エキスを水で溶解したものをn-ヘキサン、酢酸エチル、水飽和n-ブタノールで順次分配し、得られた各分画物（n-ヘキサンエキス、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、水エキス）のc-Metキナーゼ阻害作用をc-Metのキナーゼドメインの組換えタンパク質と合成基質ペプチドを用いたインビトロアッセイにより調べた。
アッセイ条件は、以下の通りである。40 mM Tris-HCl pH7.5、2 mM DTT、7 mM MgCl2、10 μM ATP に4 nM 組換えc-Metキナーゼドメイン、0.2 μg/mL Poly (Glu4,Tyr1)及び各分画を5 μg/mLとなる溶液を調製し、室温で1時間インキュベートした。反応停止後、ADP-Glo試薬を用いてADP量に依存したルミノール発光強度をルミノメーター (パーキンエル
マー社、EnSpire)で測定し、c-Metキナーゼ活性を算出した。その結果、n-ブタノールエ
キス及び水エキスにキナーゼ阻害作用があることが明らかになった（図９）。
マー社、EnSpire)で測定し、c-Metキナーゼ活性を算出した。その結果、n-ブタノールエ
キス及び水エキスにキナーゼ阻害作用があることが明らかになった（図９）。
(実施例６) 麻黄エキスの分配エキスのがん細胞の運動能阻害作用
麻黄エキスを水に溶解したものをn-ヘキサン、酢酸エチル、水飽和n-ブタノールで順次分配し、得られた各分画物（n-ヘキサンエキス、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、水エキス）、がん細胞の運動能阻害作用を、トランスウエルを用いた試験により評価した。アッセイには、c-Metを発現しており、HGFによって運動能が誘導される高転移性ヒト乳がん細胞株MDA-MB-231細胞を用いた。
麻黄エキスを水に溶解したものをn-ヘキサン、酢酸エチル、水飽和n-ブタノールで順次分配し、得られた各分画物（n-ヘキサンエキス、酢酸エチルエキス、n-ブタノールエキス、水エキス）、がん細胞の運動能阻害作用を、トランスウエルを用いた試験により評価した。アッセイには、c-Metを発現しており、HGFによって運動能が誘導される高転移性ヒト乳がん細胞株MDA-MB-231細胞を用いた。
アッセイ条件は、以下の通りである。MDA-MB-231細胞（5x104細胞/ウエル）をVehicle (2.5%EtOH-DMEM)あるいは、25 μg/mLの各分配エキスを溶解した2.5%EtOH-DMEMに懸濁し
、上部ウエルに添加した。下部ウエルはコラーゲンコートした24ウエルプレートを用いた。下部ウエルには、50 ng/mL HGF-DMEMを600 μL添加した。24時間培養後に、下部ウエルに移動した細胞数を顕微鏡下に測定して、運動能の指標とした。その結果、n-ブタノールエキス、水エキスにがん細胞の運動能抑制作用があることが明らかになった（図１０）。（実施例７）水エキスのDiaion HP-20カラム分画物のc-Metキナーゼ阻害作用
実施例９の疼痛試験の結果から、経口投与により薬理作用を示す分配エキスは水エキス
であり、n-ブタノールエキスの経口投与は薬理作用を示さないことがわかった。そこで、麻黄エキスの分配で得られた水エキスをDiaion HP-20カラムに添加し、H2O、10%MeOH、20%MeOH、30%MeOH、40%MeOH、50%MeOH、MeOHで順次溶出した分画物を得た。各分画物についてc-Metのキナーゼドメインの組換えタンパク質と合成基質ペプチドを用いたインビトロ
アッセイにより調べた。
、上部ウエルに添加した。下部ウエルはコラーゲンコートした24ウエルプレートを用いた。下部ウエルには、50 ng/mL HGF-DMEMを600 μL添加した。24時間培養後に、下部ウエルに移動した細胞数を顕微鏡下に測定して、運動能の指標とした。その結果、n-ブタノールエキス、水エキスにがん細胞の運動能抑制作用があることが明らかになった（図１０）。（実施例７）水エキスのDiaion HP-20カラム分画物のc-Metキナーゼ阻害作用
実施例９の疼痛試験の結果から、経口投与により薬理作用を示す分配エキスは水エキス
であり、n-ブタノールエキスの経口投与は薬理作用を示さないことがわかった。そこで、麻黄エキスの分配で得られた水エキスをDiaion HP-20カラムに添加し、H2O、10%MeOH、20%MeOH、30%MeOH、40%MeOH、50%MeOH、MeOHで順次溶出した分画物を得た。各分画物についてc-Metのキナーゼドメインの組換えタンパク質と合成基質ペプチドを用いたインビトロ
アッセイにより調べた。
アッセイ条件は、以下の通りである。40 mM Tris-HCl pH7.5、2 mM DTT、7 mM MgCl2、10 μM ATP に4 nM 組換えc-Metキナーゼドメイン、0.2 μg/mL Poly (Glu4,Tyr1)及び各分画を5 μg/mLとなる溶液を調製し、室温で1時間インキュベートした。反応停止後、ADP-Glo試薬を用いてADP量に依存したルミノール発光強度をルミノメーター (パーキンエル
マー社、EnSpire)で測定し、c-Metキナーゼ活性を算出した。その結果、Diaion HP-20カ
ラムの20%MeOH分画物、30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、50%MeOH分画物及びMeOH分画物にc-Metキナーゼ阻害作用があることが明らかになった（図１１）。
（実施例８）水エキスのDiaion HP-20カラム分画物のがん細胞の運動能抑制作用
実施例９の疼痛試験の結果から、経口投与により薬理作用を示す分配エキスは水エキスであり、n-ブタノールエキスの経口投与は薬理作用を示さないことがわかった。そこで、麻黄エキスの分配で得られた水エキスをDiaion HP-20カラムに添加し、H2O、10%MeOH、20%MeOH、30%MeOH、40%MeOH、50%MeOH、MeOHで順次溶出した画分を得た。各画分についてHGFによって誘導されるがん細胞の運動能の抑制作用を解析した。
マー社、EnSpire)で測定し、c-Metキナーゼ活性を算出した。その結果、Diaion HP-20カ
ラムの20%MeOH分画物、30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、50%MeOH分画物及びMeOH分画物にc-Metキナーゼ阻害作用があることが明らかになった（図１１）。
（実施例８）水エキスのDiaion HP-20カラム分画物のがん細胞の運動能抑制作用
実施例９の疼痛試験の結果から、経口投与により薬理作用を示す分配エキスは水エキスであり、n-ブタノールエキスの経口投与は薬理作用を示さないことがわかった。そこで、麻黄エキスの分配で得られた水エキスをDiaion HP-20カラムに添加し、H2O、10%MeOH、20%MeOH、30%MeOH、40%MeOH、50%MeOH、MeOHで順次溶出した画分を得た。各画分についてHGFによって誘導されるがん細胞の運動能の抑制作用を解析した。
アッセイ条件は、以下の通りである。MDA-MB-231細胞（5x104細胞/ウエル）をVehicle (DMEM)あるいは、10 μg/mLの各画分を溶解したDMEMに懸濁し、上部ウエルに添加した。
下部ウエルはコラーゲンコートした24ウエルプレートを用いた。下部ウエルには、50 ng/mL HGF-DMEMを600 μL添加した。24時間培養後に、下部ウエルに移動した細胞数を顕微鏡下に測定して、運動能の指標とした。その結果、30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、及び、50%MeOH分画物は、HGFにより誘導される運動能を強く抑制することが明らかになった（図１２）。
（実施例９）マウスを用いたホルマリン誘発疼痛に対する抑制作用（ホルマリン試験）
EFEの各分配エキス及び水エキスのDiaion HP-20カラム分画物について、ホルマリン誘
発疼痛に対する抑制作用を調べた。
下部ウエルはコラーゲンコートした24ウエルプレートを用いた。下部ウエルには、50 ng/mL HGF-DMEMを600 μL添加した。24時間培養後に、下部ウエルに移動した細胞数を顕微鏡下に測定して、運動能の指標とした。その結果、30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、及び、50%MeOH分画物は、HGFにより誘導される運動能を強く抑制することが明らかになった（図１２）。
（実施例９）マウスを用いたホルマリン誘発疼痛に対する抑制作用（ホルマリン試験）
EFEの各分配エキス及び水エキスのDiaion HP-20カラム分画物について、ホルマリン誘
発疼痛に対する抑制作用を調べた。
4週齢の雄性ddYマウスを搬入後、1週間以上馴化したものを1群4～8匹用いた。実験開始日に体重測定を行い、各群でほぼ同じになるようにコントロール群、EFE投与群、各画分
投与群(7群)に分けた。EFE及び各画分は10% DMSO (DMSO:Saline = 1:9)を加え、超音波で溶解した。コントロール群は10%DMSOを経口投与した。EFE群は700 mg/kgEFEを経口投与した。各画分群は、EFE 700 mg/kgに対する各画分の重量収率から算出した量を経口投与し
た。各試料投与６時間後に2.5%ホルマリン溶液10μLを左後足底部に皮内投与した。投与
後速やかにマウスを円柱アクリルケージ（高さ20 cm x 直径10 cm）に入れ、45分間ビデ
オ撮影した。疼痛関連行動は投与直後から5分後までに生じる第１相と10分後から45分後
まで生じる第２相を対象とし、処置した足を舐める行動時間を計測した。統計学的解析はコントロール群と被験物質投与群の疼痛行動時間をDunnett’s testsにて行い、有意水準は５%とした。
投与群(7群)に分けた。EFE及び各画分は10% DMSO (DMSO:Saline = 1:9)を加え、超音波で溶解した。コントロール群は10%DMSOを経口投与した。EFE群は700 mg/kgEFEを経口投与した。各画分群は、EFE 700 mg/kgに対する各画分の重量収率から算出した量を経口投与し
た。各試料投与６時間後に2.5%ホルマリン溶液10μLを左後足底部に皮内投与した。投与
後速やかにマウスを円柱アクリルケージ（高さ20 cm x 直径10 cm）に入れ、45分間ビデ
オ撮影した。疼痛関連行動は投与直後から5分後までに生じる第１相と10分後から45分後
まで生じる第２相を対象とし、処置した足を舐める行動時間を計測した。統計学的解析はコントロール群と被験物質投与群の疼痛行動時間をDunnett’s testsにて行い、有意水準は５%とした。
結果を図１３に示す。第1相については、試料投与群は疼痛関連行動に影響を与えなか
ったことから、侵害受容性疼痛に対する疼痛抑制作用はないものと考えられた。一方、第2相については、EFE群、水エキス群、20%MeOH分画物群、40%MeOH分画物群、MeOH分画物群において、コントロール群よりも疼痛関連行動が減少し、炎症性疼痛に対する抑制作用を有することがわかった。水エキス群はEFE群よりも少ない投与量で強い疼痛抑制作用を示
したことから、疼痛抑制作用は水エキスに濃縮していること、すなわち、比活性が格段に高くなっていることが明らかになった。一方、in vitro の活性評価で薬効のあったn-ブ
タノールエキスは、in vivoでは薬効を示さなかった。
ったことから、侵害受容性疼痛に対する疼痛抑制作用はないものと考えられた。一方、第2相については、EFE群、水エキス群、20%MeOH分画物群、40%MeOH分画物群、MeOH分画物群において、コントロール群よりも疼痛関連行動が減少し、炎症性疼痛に対する抑制作用を有することがわかった。水エキス群はEFE群よりも少ない投与量で強い疼痛抑制作用を示
したことから、疼痛抑制作用は水エキスに濃縮していること、すなわち、比活性が格段に高くなっていることが明らかになった。一方、in vitro の活性評価で薬効のあったn-ブ
タノールエキスは、in vivoでは薬効を示さなかった。
次にこの水エキスをDiaionHP-20カラムで分画した。実施例７及び８より、20%MeOH分画物、30%MeOH分画物、40%MeOH分画物、50%MeOH分画物、及び、MeOH分画物にc-Metキナーゼ阻害作用及び運動能抑制作用があることが明らかになった。そこで、動物試験用に各画分の回収量を上げるために、水エキスをDiaionHP-20によって、H2O分画物、20%MeOH分画物
、40%MeOH分画物、MeOH分画物に分離した。その結果、H2O分画物には疼痛抑制作用はなく、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物に活性があることが明らかになった。以上より、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、炎症性疼痛に対する鎮痛作用を有することがわかった。
（実施例１０）c-Metの発現とc-Metチロシンリン酸化、及びEGFRの発現とEGFRチロシンリン酸化に対する作用
EFE由来の水エキスのDiaion HP-20カラム分画物について、c-Met及びEGFRを過剰発現しているヒト非小細胞肺がん由来H1993細胞を用いて、c-Met及びEGFRに対する作用を解析した。
、40%MeOH分画物、MeOH分画物に分離した。その結果、H2O分画物には疼痛抑制作用はなく、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物に活性があることが明らかになった。以上より、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、炎症性疼痛に対する鎮痛作用を有することがわかった。
（実施例１０）c-Metの発現とc-Metチロシンリン酸化、及びEGFRの発現とEGFRチロシンリン酸化に対する作用
EFE由来の水エキスのDiaion HP-20カラム分画物について、c-Met及びEGFRを過剰発現しているヒト非小細胞肺がん由来H1993細胞を用いて、c-Met及びEGFRに対する作用を解析した。
各分画物は10%DMSO-RPMI1640培地で溶解し、2～4 mg/mLの濃度のStock solutionとした後、RPMI培地で希釈して用いた。培地に含まれるDMSOの最終の濃度は0.125%だった。H1993細胞に100 μg/mL EFE、 50μg/mL H2O分画物、25 μg/mL 20%MeOH分画物、25 μg/mL 40%MeOH分画物、あるいは25 μg/mL MeOH分画物を添加して4時間インキュベーションした
後、細胞を溶解し、遠心分離した上澄みを用いて、Western-blottingを行った。結果を図１４に示す。
後、細胞を溶解し、遠心分離した上澄みを用いて、Western-blottingを行った。結果を図１４に示す。
なお、H1993細胞は、c-Met及びEGFRを過剰発現しているため、HGFやEGFの刺激がなくても、自己リン酸化により受容体がリン酸化されている。
（１） c-Metに対する作用：
H2O分画物は、c-Metの発現量及びリン酸化に影響を与えなかった。20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、c-Met発現量を低下させ、リン酸化を阻害した。これらの作
用は、40%MeOH分画物が最も高く、EFEとほぼ同程度の作用を示した。したがって、c-Met
に対する作用は、H2O分画物にはなく、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物にあ
ることが明らかになった。これは、（実施例９）の疼痛試験の結果とほぼ一致していた。（２） EGFRに対する作用：
H2O分画物は、EGFRの発現量及びリン酸化に影響を与えなかった。20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、EGFRのリン酸化を阻害した。一方、EGFRの発現量は、EFEと40%MeOH分画物によって低下した。しかし、20%MeOH分画物及びMeOH分画物は、EGFRの発現量をやや低下させる程度であった。
（１） c-Metに対する作用：
H2O分画物は、c-Metの発現量及びリン酸化に影響を与えなかった。20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、c-Met発現量を低下させ、リン酸化を阻害した。これらの作
用は、40%MeOH分画物が最も高く、EFEとほぼ同程度の作用を示した。したがって、c-Met
に対する作用は、H2O分画物にはなく、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物にあ
ることが明らかになった。これは、（実施例９）の疼痛試験の結果とほぼ一致していた。（２） EGFRに対する作用：
H2O分画物は、EGFRの発現量及びリン酸化に影響を与えなかった。20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、EGFRのリン酸化を阻害した。一方、EGFRの発現量は、EFEと40%MeOH分画物によって低下した。しかし、20%MeOH分画物及びMeOH分画物は、EGFRの発現量をやや低下させる程度であった。
これらの結果から、EGFRのリン酸化阻害作用は、H2O分画物にはなく、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物にあることが明らかになり、実施例９の疼痛試験の結果及び
上記（１）のc-Metに対する作用とほぼ一致していた。一方、EGFRの発現量を低下させる
作用は、40%MeOH分画物にあることがわかった。
上記（１）のc-Metに対する作用とほぼ一致していた。一方、EGFRの発現量を低下させる
作用は、40%MeOH分画物にあることがわかった。
日本のがん死亡原因1位の肺がんにおいて、分子標的治療薬のEGFRチロシンキナーゼ阻
害剤（EGFR-TKI）が著効するタイプは、生存期間が延長したが、数年で耐性を獲得し再燃することが問題となっており、耐性獲得の原因のひとつにc-Met過剰発現が報告されてい
る（矢野聖二、実験医学、29, 203-208, 2011）。c-Met過剰発現が原因のEGFR-TKI耐性の場合、c-Met阻害剤とEGFR-TKIの併用が有効であると考えられているが、c－Met阻害剤は
医薬品化の目途が立っていない。
害剤（EGFR-TKI）が著効するタイプは、生存期間が延長したが、数年で耐性を獲得し再燃することが問題となっており、耐性獲得の原因のひとつにc-Met過剰発現が報告されてい
る（矢野聖二、実験医学、29, 203-208, 2011）。c-Met過剰発現が原因のEGFR-TKI耐性の場合、c-Met阻害剤とEGFR-TKIの併用が有効であると考えられているが、c－Met阻害剤は
医薬品化の目途が立っていない。
20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物は、肺がん細胞が過剰発現しているc-Met
及びEGFRのリン酸化を阻害することから、c-Met過剰発現が原因のEGFR-TKI耐性肺がん患
者の治療に有用でありうる。さらに、40%MeOH分画物は、過剰発現しているc-Met及びEGFRのリン酸化阻害作用だけなく、それの発現量を低下させることから、より有効性の高い分子標的治療薬になりうる。
（実施例１１）関節炎モデルマウスに対する疼痛抑制作用
実施例10から40%MeOH分画物の薬効が最も高く、実施例9-10より、H2O分画物には薬効がないことが明らかになった。そこで、これらの分画物の関節炎モデルマウスに対する鎮痛効果をin vivoで比較検討した。結果を図15に示す。
及びEGFRのリン酸化を阻害することから、c-Met過剰発現が原因のEGFR-TKI耐性肺がん患
者の治療に有用でありうる。さらに、40%MeOH分画物は、過剰発現しているc-Met及びEGFRのリン酸化阻害作用だけなく、それの発現量を低下させることから、より有効性の高い分子標的治療薬になりうる。
（実施例１１）関節炎モデルマウスに対する疼痛抑制作用
実施例10から40%MeOH分画物の薬効が最も高く、実施例9-10より、H2O分画物には薬効がないことが明らかになった。そこで、これらの分画物の関節炎モデルマウスに対する鎮痛効果をin vivoで比較検討した。結果を図15に示す。
実験動物は、雌性Balb/cの9週齢を用いた。マウスを搬入し1週間程度訓化した後、右後足足蹠にComplete Freud’s Adjuvant (CFA) 5 mg/mLを10 μL接種し、7日間飼育したマ
ウスを関節炎モデルマウスとした。CFA接種7日目のマウスは足関節が有意に腫脹し、機械刺激に対する感受性が最も高くなっているからである。10%DMSO溶液に溶解させた390 mg/kg H2O分画物、あるいは、190 mg/kg 40%MeOH分画物を関節炎モデルマウスに経口投与し
た。Control群は、正常マウスにvehicle(10%DMSO溶液)を投与し、Vehicle群は、関節炎モデルマウスにvehicleを投与した。試験薬投与の6時間後に、右足のvon Frey testを行い
、up-down法を用いて50%反応閾値（50% paw withdrawal threshold: 50%PWT）を算出した（S. R. Chapman et al, Journal of Neuroscience Method 53 (1994) 55-63）。統計解
析は、一元配置分散分析のあとTukeyの多重比較検定法で行った。解析ソフトは、Prism 7（GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA）を使用し、統計的に有意水準p＜0.05
を有意差ありと判断した。
ウスを関節炎モデルマウスとした。CFA接種7日目のマウスは足関節が有意に腫脹し、機械刺激に対する感受性が最も高くなっているからである。10%DMSO溶液に溶解させた390 mg/kg H2O分画物、あるいは、190 mg/kg 40%MeOH分画物を関節炎モデルマウスに経口投与し
た。Control群は、正常マウスにvehicle(10%DMSO溶液)を投与し、Vehicle群は、関節炎モデルマウスにvehicleを投与した。試験薬投与の6時間後に、右足のvon Frey testを行い
、up-down法を用いて50%反応閾値（50% paw withdrawal threshold: 50%PWT）を算出した（S. R. Chapman et al, Journal of Neuroscience Method 53 (1994) 55-63）。統計解
析は、一元配置分散分析のあとTukeyの多重比較検定法で行った。解析ソフトは、Prism 7（GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA）を使用し、統計的に有意水準p＜0.05
を有意差ありと判断した。
40%MeOH分画物の経口投与により、50%PWTがvehicle群と比較して有意に増加し、機械刺激に対する感受性が低下していた。一方、H2O分画物の経口投与では、50%PWTがvehicle群とほぼ同じで、機械刺激に対する感受性が高いままであった。これらの結果から、40%MeOH分画物は、関節炎モデルマウスに対して疼痛抑制作用を示すが、H2O分画物には疼痛抑制作用がないことが明らかになった。
（実施例１２）抗インフルエンザウイルス作用
実施例９のホルマリン試験の結果から、EFEの水エキスをDiaion HP-20で分画した、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物に疼痛抑制作用があることがわかったことから
、これらの画分の抗インフルエンザウイルス作用を測定した。この測定方法は、インフルエンザウイルスの感染によりMDCK細胞が溶解することを利用し、50%の細胞が生存する試
料濃度で抗インフルエンザウイルス作用を評価する。また、細胞毒性ではなく、抗インフルエンザウイルス作用を測定していることを確認するために、細胞生存率が50%となる濃
度も同時に測定した。
（実施例１２）抗インフルエンザウイルス作用
実施例９のホルマリン試験の結果から、EFEの水エキスをDiaion HP-20で分画した、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物に疼痛抑制作用があることがわかったことから
、これらの画分の抗インフルエンザウイルス作用を測定した。この測定方法は、インフルエンザウイルスの感染によりMDCK細胞が溶解することを利用し、50%の細胞が生存する試
料濃度で抗インフルエンザウイルス作用を評価する。また、細胞毒性ではなく、抗インフルエンザウイルス作用を測定していることを確認するために、細胞生存率が50%となる濃
度も同時に測定した。
各試料について、それぞれ10%FBS-MEMで25μg/mLの溶液に調製し、さらに10段階の2倍
希釈系列を作製し、試料溶液とした。インフルエンザウイルス（A/WSN/33 (H1N1)株）を
含む液を10%FBS-MEMで1000TCID50/mLに希釈し、インフルエンザウイルス液とした。MDCK
細胞を10%FBS-MEMで懸濁し、96穴培養プレートの各ウエルあたり、3x104個/100μLで播種した。24時間培養した後、培養上清を除去し、試料溶液100μLを各ウエルに添加し、さらに100μLのインフルエンザウイルス液もしくは10%FBS-MEMを添加した。72時間培養した後、クリスタルバイオレットで染色し、マイクロプレートリーダーで各ウエルの560nmにお
ける吸光度を測定した。添加した試料濃度と細胞生存率の曲線について４パラメーラーロジスティック解析を行い、インフルエンザウイルス添加群から50%阻害濃度（IC50値）、
非インフルエンザウイルス添加群から50%細胞障害濃度（CC50値）をそれぞれ求めた（表
１）。
希釈系列を作製し、試料溶液とした。インフルエンザウイルス（A/WSN/33 (H1N1)株）を
含む液を10%FBS-MEMで1000TCID50/mLに希釈し、インフルエンザウイルス液とした。MDCK
細胞を10%FBS-MEMで懸濁し、96穴培養プレートの各ウエルあたり、3x104個/100μLで播種した。24時間培養した後、培養上清を除去し、試料溶液100μLを各ウエルに添加し、さらに100μLのインフルエンザウイルス液もしくは10%FBS-MEMを添加した。72時間培養した後、クリスタルバイオレットで染色し、マイクロプレートリーダーで各ウエルの560nmにお
ける吸光度を測定した。添加した試料濃度と細胞生存率の曲線について４パラメーラーロジスティック解析を行い、インフルエンザウイルス添加群から50%阻害濃度（IC50値）、
非インフルエンザウイルス添加群から50%細胞障害濃度（CC50値）をそれぞれ求めた（表
１）。
各試料のIC50値は、CC50値よりも低濃度であったことから、抗インフルエンザウイルス作用が測定できていることが確認された。また、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物のIC50値は、EFEのIC50値と同程度であったことから、EFEの抗インフルエンザウイルス作用を示す活性成分は、20%MeOH分画物、40%MeOH分画物、MeOH分画物に存在することが明らかになった。
（実施例１３）高分子縮合型タンニン標準物質の調製
実施例１で得た水エキス-40%MeOH分画物について、さらにSephadex LH-20カラムクロマトグラフィー（GE Healthcare）を用いて精製した。カラムを50%MeOHで洗浄後、70%アセ
トンで溶出し、高分子縮合型タンニンを得た。溶出液を濃縮、凍結乾燥した後、約100 mgを精密に量り（100.0 mg）、50%ジメチルホルムアミド溶液10 mLを正確に加え、完全に溶解した。この溶液について、実施例２で示したGPC分析した結果、重量平均分子量は85642で、低分子量域にピークは確認されなかった（図１６）。この溶液約1 mLをバイアルに分注し、高分子縮合型タンニン標準物質溶液（10.0 mg/mL）とした。
（実施例１４）GPCを用いた高分子縮合型タンニン含量の測定
実施例２で示したGPCを用いた分子量分析法及び実施例１３で示した高分子縮合型タン
ニン標準物質を用いて、麻黄エキスの高分子縮合型タンニン含量を測定した。
麻黄エキス３ロットについて、それぞれ10.00 mg/mL となるよう50%ジメチルホルムア
ミド溶液に溶解し試料溶液とした。各試料溶液及び高分子縮合型タンニン標準物質溶液（10.0 mg/mL）について、実施例２で示した条件でGPC分析した。試料導入後5～10分の高分子縮合型タンニンのピーク面積について、次式によって試料1 mL中の高分子縮合型タンニン含量を求めた(表２)。
ミド溶液に溶解し試料溶液とした。各試料溶液及び高分子縮合型タンニン標準物質溶液（10.0 mg/mL）について、実施例２で示した条件でGPC分析した。試料導入後5～10分の高分子縮合型タンニンのピーク面積について、次式によって試料1 mL中の高分子縮合型タンニン含量を求めた(表２)。
試料溶液1 mL中の高分子縮合型タンニンの量（mg）= AT/AS x 10.00
AT：試料のピーク面積
AS：標準物質のピーク面積
10.00：標準物質溶液1 mL中の高分子縮合型タンニンの量（mg）
AT：試料のピーク面積
AS：標準物質のピーク面積
10.00：標準物質溶液1 mL中の高分子縮合型タンニンの量（mg）
Claims (9)
- 麻黄の熱水抽出物である麻黄エキス、又は前記麻黄エキスからエフェドリンアルカロイドを除去したエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキス（EFE）由来の、高分子縮合型タンニンを含む重量平均分子量45,000以上の抽出分画物を含有する経口投与用の医薬組成物であって、
高分子縮合型タンニンが、エクステンションユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールが主にプロアントシアニジンBタイプで縮合し、その一部にプロアントシアニジンAタイプの縮合型タンニンユニットを含み、さらにターミナルユニットとして、カテコールタイプ又はピロガロールタイプのフラバン 3-オールを主に含み、ピロガロールタイプとカテコールタイプを約5:1で含む、医薬組成物。 - 抽出分画物が、
（ａ）麻黄エキス若しくはEFEの水溶性画分を極性の低い有機溶媒から極性の高い有機溶媒を用いて順次分配して水エキスを得ること；および／または
（ｂ）水エキスを100％メタノールで抽出して100％メタノール分画物を得ること；および／または
（ｃ）麻黄エキス若しくはEFEの水溶性画分又は水エキスをカラムクロマトグラフィーによって、水とメタノール又はエタノールから選択されるアルコールとの混合溶媒を用いて、アルコール濃度を高くしながら順次溶出し、得られる各分画の分子量を測定して、高分子縮合型タンニンを含む重量平均分子量45,000以上の抽出分画物を得ること
を含む方法により得られる、請求項１記載の医薬組成物。 - 重量平均分子量45,000以上の抽出分画物を得る方法が、画分の分子量をゲル浸透クロマトグラフィー（GPC）により測定して、重量平均分子量45,000以上の抽出分画物を得ることを含む、請求項２に記載の医薬組成物。
- 高分子縮合型タンニンがEFE由来である、請求項１に記載の医薬組成物。
- 疼痛抑制薬である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
- c-Metを発現するがんに対する抗がん・抗転移薬である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
- EGFRを発現するがんに対する抗がん薬である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
- 抗インフルエンザウイルス薬である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
- EFEは、麻黄エキスから陽イオン交換クロマトグラフィーによってエフェドリンを除去し、濃縮乾燥を経ることによって得られるものである、請求項４に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018013399 | 2018-01-30 | ||
| JP2018013399 | 2018-01-30 | ||
| JP2018237151A JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2018-12-19 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018237151A Division JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2018-12-19 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023052160A JP2023052160A (ja) | 2023-04-11 |
| JP2023052160A5 JP2023052160A5 (ja) | 2023-10-26 |
| JP7544322B2 true JP7544322B2 (ja) | 2024-09-03 |
Family
ID=67544714
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018237151A Pending JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2018-12-19 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
| JP2022211572A Active JP7544322B2 (ja) | 2018-01-30 | 2022-12-28 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018237151A Pending JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2018-12-19 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JP2019131536A (ja) |
| KR (1) | KR20190092314A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2019-08-08 | 学校法人北里研究所 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
| JP7214080B2 (ja) * | 2020-10-02 | 2023-01-30 | 学校法人北里研究所 | 新型コロナウイルス感染症の予防又は治療のための抗ウイルス剤 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015076286A1 (ja) | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 株式会社常磐植物化学研究所 | エフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスと、その製法及び用途 |
| JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2019-08-08 | 学校法人北里研究所 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4822291B1 (ja) | 1966-03-30 | 1973-07-05 | ||
| JPS5459699A (en) | 1977-10-21 | 1979-05-14 | Chugoku Kikai Seisakusho Kk | Device of deciding pace in band saw mill |
| JPS5786164A (en) | 1980-11-17 | 1982-05-29 | Sony Corp | Tape loading device |
| US5282575A (en) | 1992-04-24 | 1994-02-01 | Dorr-Oliver Incorporated | High pressure screen shower |
| JPH092963A (ja) * | 1995-06-20 | 1997-01-07 | Yakult Honsha Co Ltd | マオウより得られる糖質分解酵素阻害物質及びそれを含有するダイエット食品 |
| JP2000159669A (ja) | 1998-11-26 | 2000-06-13 | Mikoo:Kk | ウレアーゼ阻害剤及びこれを含有する医薬及び食品組成物並びにウレアーゼ活性測定方法 |
| DE60037838T2 (de) | 1999-04-23 | 2008-12-11 | Asahi Breweries, Ltd. | Verfahren zur Reinigung von Proanthocyanidin-Oligomeren |
| JP6264685B2 (ja) | 2012-11-27 | 2018-01-24 | 国立医薬品食品衛生研究所長 | マルチキナーゼ阻害剤、抗癌剤、抗転移剤、薬剤耐性抑制剤、疼痛抑制剤及び止痒薬 |
| JP6434267B2 (ja) | 2014-09-30 | 2018-12-05 | 小林製薬株式会社 | カプセル剤 |
-
2018
- 2018-12-19 JP JP2018237151A patent/JP2019131536A/ja active Pending
-
2019
- 2019-01-30 KR KR1020190012222A patent/KR20190092314A/ko not_active Application Discontinuation
-
2022
- 2022-12-28 JP JP2022211572A patent/JP7544322B2/ja active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015076286A1 (ja) | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 株式会社常磐植物化学研究所 | エフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスと、その製法及び用途 |
| JP2019131536A (ja) | 2018-01-30 | 2019-08-08 | 学校法人北里研究所 | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Characterization of Proanthocyanidin Oligomers of Ephedra sinica，Molecules，2017年，Vol.22，1308 (page 1-18)，Supporting Information S1-S6 |
| Journal of Chromatography A，2003年，Vol.995，pp.99-107 |
| Molecules，2013年，Vol.18，pp.5172-5189，doi:10.3390/molecules18055172 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20190092314A (ko) | 2019-08-07 |
| JP2023052160A (ja) | 2023-04-11 |
| JP2019131536A (ja) | 2019-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7544322B2 (ja) | 麻黄エキス、又はエフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスより得られた高分子縮合型タンニンを含有する抽出分画物とその製法及び用途 | |
| Jung et al. | Extraction and identification of three major aldose reductase inhibitors from Artemisia montana | |
| JP7143972B2 (ja) | エフェドリンアルカロイド除去麻黄エキスと、その製法及び用途 | |
| EP3132692A1 (en) | Compositions comprising small molecular inhibitors suitable to inhibit and stimulate signaling pathways in a manner leading to prevention of muscle atrophy | |
| KR102432796B1 (ko) | 오리나무 추출물로부터 분리된 화합물 2를 함유하는 골격근 근육관련 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
| CN101151029A (zh) | 木酚素类化合物的新用途 | |
| CN102099028A (zh) | 新型标准化组合物、制造方法及其在消除rna病毒感染中的应用 | |
| Yoshimura et al. | Quality evaluation and characterization of fractions with biological activity from ephedra herb extract and ephedrine alkaloids-free ephedra herb extract | |
| KR20150115108A (ko) | 개똥쑥 추출물을 유효성분으로 함유하는 골 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
| JP6837960B2 (ja) | 化学療法に耐性である腫瘍の処置において用いるための、メラトニンおよびフラボノイド類を含む組成物 | |
| CN101277711A (zh) | 来自白锥花(Gomphostema niveum)的生物活性水级分 | |
| KR20180115916A (ko) | Hesperetin을 유효성분으로 포함하는 퇴행성신경질환 예방, 개선 또는 치료용 약학조성물 | |
| CN110090235A (zh) | 含有由麻黄提取物或efe得到的高分子缩合型鞣质的提取分级物及其制法和用途 | |
| KR20170125045A (ko) | 화학치료에 내성을 가진 종양의 치료용 조성물 | |
| JP6627141B2 (ja) | ベニバナボロギク抽出物を調製する方法、それにより調製された抽出物、及び抽出物の使用 | |
| KR20200129596A (ko) | 초피나무 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| JP6969041B2 (ja) | 血管内皮型一酸化窒素合成酵素産生促進剤及び経口用組成物 | |
| KR20110055833A (ko) | 플라보노이드를 유효성분으로 하는 백혈병 치료용 조성물 | |
| KR102001338B1 (ko) | 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 파킨슨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| KR101575702B1 (ko) | 상황버섯 자실체 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 창상치료 또는 피부 활성용 약학적 조성물 | |
| JP6736645B2 (ja) | クローディン−５産生促進剤及びクローディン−５産生促進用経口用組成物 | |
| Ćetković et al. | In vitro assessment of genotoxic and cytotoxic effects of Artemisia annua L. tincture | |
| KR101926021B1 (ko) | 텔렉타디엄 동나이엔스 추출물을 유효성분으로 하는 대장암 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| CA3231590A1 (en) | Cannabis-derived flavonoids and related methods | |
| BR112021004119A2 (pt) | modulador botânico de transtornos metabólicos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230120 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231018 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240119 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240312 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240412 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240726 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240808 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7544322 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |