JP7336513B2 - アンジオポエチン様３ポリペプチドの持続送達 - Google Patents

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Description

本出願は、２０１８年１０月３日に出願された米国仮特許出願第６２／７４０，６０９号の利益を主張するものであり、この仮特許出願は、全体が参照により本明細書に援用される。
第一級若しくは第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤を送達するための薬物送達システム、その薬学的に許容できる塩、それに関連する薬物送達試薬、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。
配列表の参照
本出願は、米国特許法施行規則（３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．）１．８２１条（ｃ）にしたがってコンピュータ可読形式の配列表とともに出願される。提出されるテキストファイル、「ＰＡＴ０５８３１７－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔ」は、２０１９年１０月３１日に作成され、９９，３０３バイトのファイルサイズを有し、全体が参照により本明細書に援用される。
インビボの薬物の物理化学的又は薬物速度論的特性の調節は、薬物と担体とのコンジュゲーションによって影響され得る。特に、薬物と担体とのコンジュゲーションは、治療的作用持続時間を増加させるか、投与後の薬物の最高濃度を低下させるか、又は薬物の送達を所望の組織若しくは区画に限局するか又はこれらの目的の組合せの手段として使用されることが多い。典型的に、薬物送達システム中の担体は、（ａ）溶媒－担体混合物へと物理化学的に製剤化される薬物とともに非共有結合的な方法で使用されるか、又は（ｂ）薬物中に存在する官能基への担体試薬の共有結合によって結合されるかのいずれかである。
非共有結合的手法は、担体－薬物システムの初回投与時又は対象への投与後の担体の分解中のいずれかに起こり得る、薬物の無制御のバースト放出を防ぐために、高効率の薬物封入を必要とする。結合されていない水溶性薬物分子の拡散を抑えることは、疎水性部分によって媒介されることが多い強いファン・デル・ワールス接触、水素結合、又は荷電部分を介して媒介される静電結合を必要とする。タンパク質、ペプチド、又は抗体などの多くの立体配座的に感受性の薬物は、封入プロセス中及び／又は封入された薬物のその後の貯蔵中に機能しなくなる。
或いは、薬物は、安定したリンカーを介して又は薬物が放出される可逆性リンカー部分を介して、担体に共有結合され得る。薬物が担体に安定的に結合される場合、このようなコンジュゲートは、薬剤効果を有するために十分な残留活性を示す必要があり、コンジュゲートは、常に活性形態である。
薬物が切断可能なリンカーを介して担体にコンジュゲートされる場合、このようなコンジュゲートは、典型的に、担体結合薬物と呼ばれる。この手法は、低分子量有機分子から、天然産物、担体及びその類似体、タンパク質、ペプチドなどの、様々な種類及びサイズの生物学的活性分子に適用され得る。担体結合薬物の重要な考慮事項は、担体から薬物を放出するための機構である。放出機構は、酵素によるか、ｐＨ依存性であるか、又は自発的加水分解によるものであり得る。典型的に、薬物放出は、容易に制御することができず、長期間にわたって持続するのが難しい。
治療用途において生物学的活性部分の持続放出に好適な新規な薬物送達システムが必要とされ続けている。治療的に関連する用途のために生物学的活性部分の持続放出を提供する薬物送達システムが本明細書に記載される。
本明細書に記載される一実施形態は、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000001
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、それらが結合される炭素原子と組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
Ｒ１２及びＲ１３が、Ｃ（Ｒ１２ａ）及びＯと組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。一態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む。別の態様において、Ｄが、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤ１（配列番号１９）を含む。別の態様において、Ｒ１が、水素又はメチルであり、Ｒ１ａが、水素又はメチルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、シクロプロパン－１，１－ジイル基を形成する。別の態様において、変数ａが０である。別の態様において、Ｒ３及びＲ３ａがそれぞれ水素である。別の態様において、Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はＣ１～Ｃ２アルコキシＣ１～Ｃ２アルキルである。別の態様において、Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである。別の態様において、ＹがＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７であり；Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ４アルキル、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、２－エトキシエトキシ、２－イソプロポキシ－エトキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である。
別の態様において、Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ－［Ｓｐ－Ｑ］ｈ－Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、１，２，３－トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１～Ｃ４アルキル－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ、又はＯ－Ｐ（Ｏ）２－Ｃ１－４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ２～Ｃ２０アルキニル、［Ｗ－Ｏ］ｇ、Ｃ１～Ｃ８アルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ、［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８Ｃアルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１～２０の整数であり；
ｇが、約２～約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。別の態様において、Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ－Ａ、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；ｍが、１又は０であり；Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；Ｒ１１が担体である。別の態様において、ＺがＮＲ９であり；Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ－Ａ又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａであり；ｎが、１～８の整数であり；Ａが、Ｒ１０又はＲ１１である。別の態様において、Ｒ１０が、アジジル（ａｚｉｄｙｌ）、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、置換若しくは非置換ビニルカルボキシル、置換若しくは非置換ビニルスルホニル、置換若しくは非置換Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、ヒドラジジル（ｈｙｄｒａｚｉｄｙｌ）、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルである。別の態様において、Ｒ１０が、式（Ｉ）の前記薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩を担体に結合するのに好適な反応性官能基を含む。別の態様において、Ｒ１１が生分解性である。別の態様において、Ｒ１１が、ポリマー又は架橋ポリマーを含む。別の態様において、Ｒ１１が、１つ以上の架橋ポリマーを含むヒドロゲルを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ポリマー、架橋ポリマー、又はヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、プロピレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含むヒドロゲルを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸の架橋ヒドロゲル、ポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸又は架橋ポリエチレングリコールを含むヒドロゲルを含む。別の態様において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、アダマンタニル、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つの官能基で官能化される。別の態様において、Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸を含むヒドロゲルを含み、ここで、ヒアルロン酸は、－ＮＨ（Ｗ１）（Ｏ（Ｗ１））ｄ－Ｖから選択される少なくとも１つの側鎖を含み、Ｗ１が、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；ｄが、０～５００の数平均であり；Ｖが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルを含む好適な官能基である。別の態様において、Ｖがアジドである。
本明細書に記載される別の実施形態は、架橋担体製剤を作製するための方法であって、（ａ）担体分子Ｒ１１を官能化する工程と；（ｂ）反応性架橋剤を調製する工程と；（ｃ）官能化された担体分子を反応性架橋剤と反応させて、約４℃～約６０℃の温度での約０．５時間～約４８時間にわたるインキュベーションによって架橋担体を形成する工程とを含む方法である。一態様において、担体分子は、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、担体分子は、アジド、スルフヒドリル、アミン、アミノキシ（Ｏ－ＮＨ２）又はアルデヒド部分で官能化されて、架橋のための反応性官能基が得られる。別の態様において、反応性架橋剤の調製は、ポリエチレングリコールを、１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボン酸、３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－カルボン酸、２－（１－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロプロピル）酢酸、２－メチル－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、又は７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプタン酸と反応させること、及び官能化されたポリエチレングリコールエステルを脱保護することを含む。別の態様において、反応性架橋剤の調製は、官能化されたポリエチレングリコールエステルの脱保護後に少なくとも２つのビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル基の導入をさらに含む。別の態様は、本明細書に記載される方法を用いて得られる架橋ヒドロゲルを含む。別の態様において、担体分子は、アジドで官能化される。
本明細書に記載される別の実施形態は、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤに結合されたトレースレスリンカーＲを含む薬物付加物を調製するための方法であって、（ａ）少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤを提供する工程と；（ｂ）生物学的活性薬剤を、活性化されたカルボニル官能基を有するトレースレスリンカーＲと反応させる工程と；（ｃ）薬物付加物を試薬から精製する工程とを含む方法である。一態様は、本明細書に記載される方法を用いて得られる薬物付加物である。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを作製するための方法であって、（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって；任意選択的に、工程（ａ）が、架橋ヒドロゲル担体分子Ｒ１１を精製することをさらに含み得る工程と；（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー－Ｄ付加物を形成する工程であって；工程（ｂ）が、任意選択的に、トレースレスリンカー－Ｄ付加物の精製をさらに含み得る工程と、（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー－Ｄ付加物とコンジュゲートする工程と；（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。一態様は、本明細書に記載される方法を用いて作製される薬物送達システムである。
本明細書に記載される別の実施形態は、黄斑変性症を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000002
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；ａが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又はＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；ｂが、１～１０の整数であり；Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；ｍが、１又は０であり；Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
本明細書に記載される別の実施形態は、筋骨格系疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000003
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
本明細書に記載される別の実施形態は、疾病又は疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000004
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法である。
本明細書に記載される別の実施形態は、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤの半減期を延ばすための手段であって、式（Ｉ）によって表される、ＲへのＤの結合（式中、Ｒが、生物学的活性部分Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000005
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）を含む手段である。一態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＩＩＩ）：
Figure 0007336513000006
（式中、ＡＮＧＰＴＬ３が、配列番号１又は３～４５のいずれか１つ、又はそれらの組合せに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む）
を含む薬物送達システムである。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＩＶ）：
Figure 0007336513000007
（式中、Ｄ１が、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド（配列番号１９）を含む）
を含む薬物送達システムである。
本明細書に記載される別の実施形態は、Ｄ－Ｒ－Ｒ１１（式中、Ｒが、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーを含み；Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ１１が、複数のヒアルロン酸ポリマーを含み、これらのそれぞれが、ランダムに並んだ非官能化Ｄ－グルクロン酸モノマー、架橋剤で官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマー、又は薬物付加物Ｄ－Ｒで官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマーを含む）を含む薬物送達システムである。一態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＩＶ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000008
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000009
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000010
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000011
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＶＩＩＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000012
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＩＸ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000013
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸ）：
Figure 0007336513000014
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；
Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり；
Figure 0007336513000015
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＩ）：
Figure 0007336513000016
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＩＩＩによって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり；
Figure 0007336513000017
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［１－（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ－シクロプロパン－１－カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＶ）：
Figure 0007336513000018
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＶによって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり；
Figure 0007336513000019
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［１－（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン－４－カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＶＩ）：
Figure 0007336513000020
（式中、薬剤Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式ＸＸＸＶＩＩによって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり；
Figure 0007336513000021
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［７－（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘプタノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＶＩＩＩ）：
Figure 0007336513000022
（式中、薬剤Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
本明細書に記載される別の実施形態は、式（ＸＸＸＩＸ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり；
Figure 0007336513000023
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、ヒドロゲルを形成するのに使用される架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［２－メチル－３－（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。一態様において、ＤがＤ１（配列番号１９）であり、Ｒ４が－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、又はメチロシクロプロピルである。別の態様において、ＤがＤ１（配列番号１９）であり、Ｒ４が－ＣＨ３である。別の態様において、Ｄ－Ｒ付加物は、
Figure 0007336513000024
を含む。
図１は、トレースレスリンカーによって担体にコンジュゲートされた薬物、及び放出後の薬物を含む薬物送達システムの図を示す。トリガーの反応により、薬物を薬物送達システムに結合するアミド結合を切断する求核官能基が生成される。この非限定的な例において、薬物は、第一級アミン基を介して結合される。 図２は、ヒドロゲル－薬物コンジュゲートの部分的な化学的な図を示し、ここで、ヒドロゲルは、ＰＥＧで架橋されたヒアルロン酸で構成され、薬物は、トリガーＹを有するトレースレスリンカーによってヒドロゲルにコンジュゲートされる。図２及び本明細書全体を通して、ヒアルロン酸などのポリマー分子が、［Ｐ］ｎとして表され、ここで、Ｐは、モノマー繰返し単位を表し、ｎは、モノマーの繰返し単位の平均数を表す。繰返し単位の数は、任意の所与のポリマー集団のランダムな分布である。さらに、本明細書に記載されるヒドロゲル又は薬物送達システムのための独立した分子の相対的な結合性は、集団内でランダムである。ヒドロゲル又は薬物送達システムの構造図は、二次元で１つの可能な構造単位を表すが、これらの複合体は、多くの構造サブユニットを有する三次元である。 図３：図３Ａは、トレースレスリンカーと、アジド官能化ヒアルロン酸ポリマーとの例示的な反応を示し、図３Ｂは、トレースレスリンカーと、アジド官能化ヒドロゲルとの例示的な反応を示す。 （上記の通り。） 図４：図４Ａ（実施例８．１を例示する）は、ヒドロゲルコンジュゲートからのＤ１（配列番号１９）のインビトロ放出の例を示し、図４Ｂは、ヒドロゲルコンジュゲートＣ２－２からのＤ１（配列番号１９）のインビトロ放出を示す。 （上記の通り。） 図５（実施例９を例示する）は、関節内注射によってラットに投与されるヒドロゲルコンジュゲートＣ２－２からのＤ１（配列番号１９）のインビボ放出を示す。
第一級若しくは第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤を送達するための薬物送達システム、その薬学的に許容できる塩、それに関連する薬物送達試薬、この薬物送達システムを含む医薬組成物、及び持続放出治療薬としての薬物送達システムの使用が本明細書に記載される。
本明細書において使用される際、「アルキル」という用語は、直鎖、分枝鎖又は環状炭素鎖を指す。特に規定されない限り、アルキル炭素の１つ以上の水素原子は、置換基で置換され得る。アルキルの代表例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、３－メチルヘキシル、２，２－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルペンチル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシルなどが挙げられる。分子の２つの部分がアルキル基によって結合される場合、それは、アルキレンとも呼ばれる。本明細書において使用される際の「低級アルキル」は、好ましいある実施形態において、アルキルのサブセットであり、１～４個の炭素原子を含有する直鎖状又は分枝鎖状炭化水素基を指す。低級アルキルの代表例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチルなどが挙げられる。「アルキル」又は「低級アルキル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルキル又は低級アルキルの両方を含むことが意図され、これらの基は、ハロ（例えば、ハロアルキルを形成するため）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、複素環式、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ（それによって、ポリエチレングリコールなどのポリアルコキシを生成する）、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ハロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロｌアルキルオキシ、メルカプト、アミノ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ハロアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、ヘテロシクロアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、二置換アミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、エステル、アミド、スルホンアミド、尿素、アルコキシアシルアミノ、アミノアシルオキシ、ニトロ、シアノアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ、ハロアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ、アルケニル－Ｓ（Ｏ）ｎ、アルキニル－Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ、シクロアルキルアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ、アリール－Ｓ（Ｏ）ｍ、アリールアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ、ヘテロシクロ－Ｓ（Ｏ）ｍ、又はヘテロシクロアルキル－Ｓ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍ＝０、１、２、又は３である）から選択される基を含むがこれらに限定されないさらなる有機及び／又は無機基で置換され得る。
本明細書において使用される際、「アルケニル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、１～１０、２０、又は３０個以上の炭素原子（又は低級アルケニルでは１～４個の炭素原子）を含有し、直鎖中に１～４、５、又は６つ以上の二重結合を含む直鎖状又は分枝鎖状炭化水素を指す。アルケニルの代表例としては、限定はされないが、ビニル、２－プロペニル、３－ブテニル、２－ブテニル、４－ペンテニル、３－ペンテニル、２－ヘキセニル、３－ヘキセニル、２，４－ヘプタジエンなどが挙げられる。「アルケニル」又は「低級アルケニル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルケニル又は低級アルケニルの両方を含むことが意図され、これらの基は、上記のアルキル及び低級アルキルに関連して記載される基で置換され得る。
本明細書において使用される際、「アルキニル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、直鎖中に１、２、又は３個以上の三重結合を含む、１～１０、２０、３０、又は４０個以上の炭素原子（又は低級アルキニルでは１～４個の炭素原子）を含有する直鎖状又は分枝鎖状炭化水素を指す。アルキニルの代表例としては、限定はされないが、２－プロピニル、３－ブチニル、２－ブチニル、４－ペンチニル、３－ペンチニルなどが挙げられる。「アルキニル」又は「低級アルキニル」という用語は、特に示されない限り、置換及び非置換アルキニル又は低級アルキニルの両方を含むことが意図され、これらの基は、上記のアルキル及び低級アルキルに関連して記載されるのと同じ基で置換され得る。
本明細書において使用される際、「シクロアルキニル」という用語は、６～１６個の炭素原子、及び環構造中に少なくとも１つ以上の三重結合を含む１、２、又は３つの縮合若しくは架橋環を有する環状炭化水素環系を指す。
本明細書において使用される際、「ヘテロシクロアルキニル」という用語は、６～１６個の炭素原子、酸素、窒素及び硫黄から独立して選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子、及び環構造中に少なくとも１つ以上の三重結合を含む１、２又は３つの縮合若しくは架橋環を有する環状炭化水素環系を指す。
本明細書において使用される際、「シクロアルキル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、３、４、５、６、７、又は８個の炭素（この炭素は、後述される複素環式基において置換され得る）を含有する飽和又は部分的に不飽和の環状炭化水素基を指す。シクロアルキルの代表例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。これらの環は、ハロ又は低級アルキルなどの本明細書に記載されるさらなる置換基で任意選択的に置換され得る。「シクロアルキル」という用語は、包括的であり、特に規定されない限り、後述される複素環式基を含むことが意図される。
本明細書において使用される際、「複素環式」又は「ヘテロシクリル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、脂肪族（例えば、完全若しくは部分的に飽和した複素環式）又は芳香族（例えば、ヘテロアリール）単環式－又は二環式環系を指す。単環式環系は、酸素、窒素及び硫黄から独立して選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含有する任意の３員～８員環によって例示される。５員環は、０～２つの二重結合を有し、６員環は、０～３つの二重結合を有する。単環式環系の代表例としては、限定はされないが、アゼチジン、アゼピン、アジリジン、ジアゼピン、１，３－ジオキソラン、ジオキサン、ジチアン、フラン、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソチアゾール、イソチアゾリン、イソチアゾリジン、イソオキサゾール、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、モルホリン、オキサジアゾール、オキサジアゾリン、オキサジアゾリジン、オキサゾール、オキサゾリン、オキサゾリジン、ピペラジン、ピペリジン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラジン、テトラゾール、チアジアゾール、チアジアゾリン、チアジアゾリジン、チアゾール、チアゾリン、チアゾリジン、チオフェン、チオモルホリン、チオモルホリンスルホン、チオピラン、トリアジン、トリアゾール、トリチアンなどが挙げられる。二環式環系は、本明細書に定義されるアリール基、本明細書に定義されるシクロアルキル基に縮合された上記の単環式環系、又は本明細書に定義される別の単環式環系のいずれかによって例示される。二環式環系の代表例としては、限定はされないが、例えば、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサジアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾフラン、ベンゾピラン、ベンゾチオピラン、ベンゾジオキシン、１，３－ベンゾジオキソール、シンノリン、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、ナフチリジン、イソベンゾフラン、イソベンゾチオフェン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、フタラジン、プリン、ピラノピリジン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、キナゾリン、テトラヒドロイソキノリン、テトラヒドロキノリン、チオピラノピリジンなどが挙げられる。
本明細書において使用される際、「ヘテロアリール」という用語は、上記の複素環式に関連して記載されるとおりである。
本明細書において使用される際、「シクロアルキルアルキル」、「シクロアルキルアルケニル」、及び「シクロアルキルアルキニル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、本明細書に定義される、それぞれのアルキル、アルケニル、又はアルキニル基を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるシクロアルキル基を指す。
本明細書において使用される際、「アルコキシ」という用語は、単独で又は別の基の一部として、オキシ基、－Ｏ－を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるアルキル又は低級アルキル基（ひいては、ポリアルコキシなどの置換形態を含む）を指す。アルコキシの代表例としては、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２－プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシなどが挙げられる。ある態様において、アルコキシ基は、より複雑な分子の一部である場合、エーテル結合を介してアルキル又は低級アルキルに結合されるアルコキシ置換基を含む。
本明細書において使用される際、「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、又は－Ｉを含む任意の好適なハロゲンを指す。
本明細書において使用される際、「アシル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アリール、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル又は本明細書に記載される他の好適な置換基などの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「アルキルチオ」という用語は、単独で又は別の基の一部として、本明細書に定義されるチオール部分を介して親分子部分に付加される、本明細書に定義されるアルキル基を指す。アルキルチオの代表例としては、限定はされないが、メチルチオ、エチルチオ、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、ヘキシルチオなどが挙げられる。
本明細書において使用される際、「アミド」、「アミド」、又は「アミジル」という用語は、本明細書において使用される際、単独で又は別の基の一部として、－Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基を指し、ここで、Ｒａ及びＲｂが、独立して、アルキル、水素、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「エステル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「エーテル」という用語は、単独で又は別の基の一部として、－ＣＯＲ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「スルホン」という用語は、単独で又は別の基の一部として、－Ｓ（Ｏ）（Ｏ）Ｒ’基を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「スルホンアミド」という用語は、単独で又は別の基の一部として、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲａＲｂ基を指し、ここで、Ｒａ及びＲｂが、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「カルボキシル」という用語は、基－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
本明細書において使用される際、「ヒドロキシル」という用語は、基－ＯＨを指す。
本明細書において使用される際、「アミノ」という用語は、基－ＮＨ２を指す。
本明細書において使用される際、ビニルは、基－ＣＨ２ＣＨ２を指す。
本明細書において使用される際、「スルホネート」という用語は、基－Ｓ（Ｏ）（Ｏ）ＯＲ’を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、「スルホニル」という用語は、基－Ｓ（Ｏ）（Ｏ）Ｒ’を指し、ここで、Ｒ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールなどの任意の好適な置換基である。
本明細書において使用される際、チオールは、基－ＳＨを指す。
本明細書において使用される際、オキシアミン又はアミノキシは、基－ＯＮＨ２を指す。
本明細書において使用される際、「ヒドラジド」又は「ヒドラジジル」は、基－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＮＨ２を指す。
本明細書において使用される際、「マレイミド又はマレイミジル」は、少なくとも１つのＣ－Ｃ二重結合を有する分子式Ｃ２Ｈ２（Ｃ（Ｏ））２ＮＨ又は基－Ｎ（Ｃ（Ｏ））２Ｃ２Ｈ２で表される環状化合物を指す。
本明細書において使用される際、フランは、４個の炭素原子及び１個の酸素を有する５員芳香環を指す。
本明細書において使用される際、「テトラジン」又は「テトラジニル」は、分子式Ｃ２Ｈ２Ｎ４又は基－Ｃ２ＨＮ４を有する、４個の窒素原子を含有する６員芳香環を指す。
本明細書において使用される際、「アジド」、「アジジル」、又は「アジド」という用語は、－Ｎ３基を指す。
本明細書において使用される際、「ＢＣＮ」という用語は、ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチルを指し、ここで、環外メチレンは、示されるように二環に対してエキソ（ｅｘｏ）又はエンド（ｅｎｄｏ）配向を有し得る。
Figure 0007336513000025
本明細書において使用される際、本明細書全体を通して、便宜上、ほとんどの構造が、立体化学を示さず、したがってあらゆる可能な立体異性体を表す。
特に、ＢＣＮとアジド化合物との間の反応のトリアゾール生成物の構造に関して、本明細書において使用される際、本明細書全体を通して、トリアゾール環上のＮ－結合置換基は、便宜上、１つの位置化学位置で示される。当業者は、ＢＣＮアルキンとアジド化合物との反応が、示されるようにトリアゾールの１位及び３位におけるＮ－結合置換基を有する生成物の立体異性体混合物をもたらすことを認識するであろう。
Figure 0007336513000026
本明細書において使用される際、「反応性官能基」は、直交カップリング反応に好適な官能基を指す。好適な反応性官能基は、直交反応を容易に起こすものである。例示的及び非限定的な直交化学反応は、表２に示される官能基を含む。
本明細書において使用される際、「トリガー」は、新たな官能基をもたらす化学反応を起こすことが可能な、薬物トレースレスリンカー付加物Ｄ－Ｒ中に存在する官能基を指す。新たな官能基の存在は、薬物とトレースレスリンカーとの間の結合の安定性を著しく低下させ、薬物放出の可能性を高める。
「数平均分子量」又は「Ｍｎ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される試料中の全ての分子の統計的平均分子量を指す。数平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ここで、Ｍｎは、屈折率、紫外線、又は他の検出器などのオンライン検出システムに基づく公知の標準に基づいて計算され得る）、粘度測定、質量分析法、又は束一的（ｃｏｌｌｉｇａｔｉｖｅ）方法（例えば、蒸気圧浸透圧法、末端基決定、若しくはプロトンＮＭＲ）などの当該技術分野において公知の技術によって決定され得る。数平均分子量は、下式
Figure 0007336513000027
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数である。
「重量平均分子量」又は「Ｍｗ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される、分子量平均へのその寄与を決定する際に各分子の重量を考慮に入れて、全ての分子の統計的平均分子量を指す。所与の分子の分子量が高くなるほど、より多くの該当する分子がＭｗ値に寄与する。重量平均分子量は、静的光散乱、小角中性子散乱、Ｘ線散乱、及び沈降速度などの、分子サイズに対して感受性である、当該技術分野において公知の技術によって計算され得る。重量平均分子量は、下式
Figure 0007336513000028
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数である。
「粘度平均分子量」又は「Ｍｖ」という用語は、ｇ／ｍｏｌの単位で表される、分子量平均へのその寄与を決定する際に各分子の重量を考慮に入れて、全ての分子の統計的平均分子量を指す。より大きい分子又はポリマーは、より小さい分子より高い粘度を有する。粘度平均分子量は、下式
Figure 0007336513000029
によって定義され、式中、Ｍｉは、分子の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の分子の数であり、ａは、分子、溶媒、及び温度によって決定される定数である。可撓性ポリマー分子は、０．５≦ａ≦０．８のａ値を有する。半可撓性ポリマー分子は、≧０．８のａを有する。粘度平均分子量は、固有粘度実験又はサイズ排除クロマトグラフィーから決定され得る。
本明細書において使用される際、「薬物」は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む１つ以上の生物学的活性部分を含む。生物学的活性部分は、小分子、高分子、例えばタンパク質、ペプチド、若しくは核酸、又はそれらの組合せであり得る。特に、トレースレスリンカーＲに関して、薬物又は生物学的活性部分は、Ｄ－Ｒの図中の「Ｄ」を含む。「薬物」、「生物学的活性分子」、「生物学的活性部分」、「生物学的活性薬剤」、「活性薬剤」又は「Ｄ」という用語又は語句は、ウイルス、細菌、真菌、植物、動物、及びヒトを含むがこれらに限定されない生物有機体の任意の物理的又は生化学的特性に影響を与え得る任意の物質を指す。特に、薬物又は生物学的活性分子は、ヒト若しくは他の動物の疾病の診断、治癒、軽減、治療、若しくは予防、又はヒト若しくは動物の身体的若しくは精神的健康を他の形で向上させることを意図した任意の物質を含む。
一実施形態において、生物学的活性部分Ｄは、アンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３）ポリペプチドを含む。「ＡＮＧＰＴＬ３」は、アンジオポエチンタンパク質ファミリーのメンバーを指す。ヒトＡＮＧＰＴＬ３のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５５３１０．１）は、配列番号１に記載され；その対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号２に記載される（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ０１４４９５．２、ここで、ＡＮＧＰＴＬ３コード配列は、配列番号２のヌクレオチド５２－１４３４を含む）（表１を参照）。本開示の趣旨では、アミノ酸の番号付けは、典型的に、完全長野生型ヒトＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド配列（配列番号１）を参照して決定される。したがって、本発明のポリペプチドが、完全長ＡＮＧＰＴＬ３のＣ末端部分のみを含み、Ｎ末端部分を含まない実施形態において、ペプチドは、４６０アミノ酸長未満であるが、位置の番号付けは、配列番号１に基づく。例えば、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのアミノ酸位置４２３への言及は、本発明のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド自体が２００アミノ酸長に過ぎない可能性があるとしても、配列番号１の４２３位を指す。配列番号１などの参照配列における位置「に対応する」対象とする配列中のアミノ酸を決定する際、これは、例えば、デフォルトのＣＬＵＳＴＡＬアライメントパラメータ又はデフォルトのＢＬＡＳＴ ２アライメントパラメータを用いて、配列を最適に整列させ、配列を比較することによって行われる。例えば、「配列番号１を参照して決定される」対象とする配列の４２３位、又は配列番号１の４２３位「に対応する」アミノ酸は、対象とする配列が配列番号１と最適に整列されるときに、配列番号１の４２３位と合致するアミノ酸を意味する。
一実施形態において、生物学的活性部分Ｄは、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤ１を含む。本明細書において使用される際、Ｄ１は、配列番号１９の配列を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを指す。
「ペプチド模倣物」及び「模倣物」という用語は、天然又は非天然ポリペプチド（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）と実質的に同じ機能特性を有するが、（典型的に類似しているが）異なる構造特性を有する合成の化学的化合物を指す。ペプチド類似体は、当該技術分野において、鋳型ペプチドの特性と類似の特性を有する非ペプチド活性化合物（例えば、薬物）として一般的に使用されている。このような非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃ）」又は「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ ａｎｄ Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ ＴＩＮＳ ｐ．３９２（１９８５）；Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）。治療的に有用なペプチドと構造的に類似したペプチド模倣物は、同等の又は向上した治療又は予防効果を生じさせるために使用され得る。一般に、ペプチド模倣物は、対象とするポリペプチドに見出されるものなどの代表例のポリペプチド（すなわち、生物学的又は薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、例えば、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス及びトランス）、－ＣＯＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、及び－ＣＨ２ＳＯ－からなる群から選択される結合によって任意選択的に置換される１つ以上のペプチド結合を有する。模倣物は、完全に、合成、非天然のアミノ酸類似体から構成され得、又は、部分的に天然のペプチドアミノ酸及び部分的に非天然のアミノ酸類似体のキメラ分子である。模倣物はまた、置換がまた模倣物の構造及び／又は活性を実質的に変化させない限り、任意の量の天然アミノ酸の保存的置換を組み込み得る。例えば、模倣組成物は、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの軟骨形成活性を生じさせる能力がある場合、本明細書に記載されるポリペプチドの範囲内である。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために、本明細書において同義的に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。本明細書に記載されるポリペプチド、ペプチド、及びタンパク質は、軟骨形成活性を有するプロテアーゼ抵抗性ＡＮＧＰＴＬ３ペプチド模倣物を含む。
「アミノ酸」という用語は、天然及び合成アミノ酸、並びに天然アミノ酸と類似の方式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、並びに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素に結合されたα炭素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。天然にコードされるアミノ酸は、２０種の通常のアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）並びにピロリシン、ピロリン－カルボキシ－リジン、及びセレノシステインである。
「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一若しくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が、任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定される全ての位置において、コドンは、コードされるポリペプチドを改変せずに、記載される対応するコドンのいずれかに改変され得る。このような核酸変異は、保存的に修飾された変異の一種である「サイレント変異」である。ポリヌクレオチドによってコードされる本明細書における全てのポリペプチド配列は、核酸の全ての可能なサイレント変異を包含する。当業者は、（通常はメチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除いて）核酸中の各コドンが、機能的に同一の分子をもたらすように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異が、各記載される配列中に潜在的に含まれる。
当業者は、元のコードされるアミノ酸配列に対して１つのアミノ酸若しくは小さいパーセンテージのアミノ酸を改変、付加若しくは欠失させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列に対する個々の置換、欠失又は付加が、改変によりアミノ酸が化学的に類似したアミノ酸で置換された「保存的に修飾された変異体」及び／又は元のタンパク質と類似した機能的活性を有する構造的に類似したタンパク質をもたらすポリペプチド配列をもたらすことを認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換の表は、当該技術分野において周知である。このような保存的に修飾された変異体は、本明細書に記載される多型変異体、種間のホモログ、及び対立遺伝子に追加され、それらを除外しない。
「保存的なアミノ酸置換」という用語は、１つのこのような群のアミノ酸を、同じ群の異なるアミノ酸で（概念的に又は他の形で）置換することを指す。置換の一例は、同族の生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の正規化された頻度を分析することに基づく。このような分析によれば、ある群内のアミノ酸が、互いに、優先的に交換され、したがって全体的なタンパク質構造に対する影響が互いに最も類似するアミノ酸の群が定義され得る（Ｓｃｈｕｌｚ ａｎｄ Ｓｃｈｉｒｍｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇを参照）。このように定義される一連のアミノ酸群の一例としては、（ｉ）Ｇｌｕ及びＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓからなる荷電した群；（ｉｉ）Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓからなる正に荷電した群；（ｉｉｉ）Ｇｌｕ及びＡｓｐからなる負に荷電した群；（ｉｖ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐからなる芳香族群；（ｖ）Ｈｉｓ及びＴｒｐからなる窒素環群；（ｖｉ）Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる大型脂肪族非極性群；（ｖｉｉ）Ｍｅｔ及びＣｙｓからなるわずかに極性の群；（ｖｉｉｉ）Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ及びＰｒｏからなる小型残基の群；（ｉｘ）Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ及びＣｙｓからなる脂肪族群；並びに（ｘ）Ｓｅｒ及びＴｈｒからなる小型ヒドロキシル群が挙げられる。共有される物理的特性に基づく保存的置換の他の例は、以下の群における置換である：（１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；（２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；（３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；（４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；（５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；（６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；（７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び（８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。
「配列同一性のパーセンテージ」は、比較領域（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｎｄｏｗ）にわたって２つの最適に整列された配列を比較することによって決定され、ここで、比較領域中のアミノ酸配列又はポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアライメントに対する付加又は欠失を含まない参照配列（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド）と比較して、付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、両方の配列において同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が生じる位置の数を求めて、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を比較領域の位置の総数で除算し、その結果に１００を乗算して、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
「同一の」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関して、同じ配列である２つ以上の配列又は部分配列を指す。以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを用いて又は手動のアライメント及び目視による検証によって測定される際、比較領域、又は指定領域に対して比較され、最大一致のために整列される場合、２つの配列が、規定のパーセンテージの同じアミノ酸残基又はヌクレオチド（すなわち、規定の領域に対して、又は、規定されない場合は全配列に対して、９５％の同一性、任意選択的に、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有する場合、２つの配列は、「実質的に同一である」。本明細書において例示されるそれぞれのポリペプチドと実質的に同一であるポリペプチド（例えば、配列番号１、３～４５のいずれか）、並びに関節炎又は関節傷害を治療又は予防するための使用を含むがこれらに限定されないその使用。任意選択的に、核酸について、同一性は、少なくとも約１５０ヌクレオチド長である領域、又はより好ましくは、３００～４５０若しくは６００ヌクレオチド長以上である領域、又は参照配列の完全長にわたって存在する。アミノ酸配列について、任意選択的に、同一性は、少なくとも約５０アミノ酸長である領域、又はより好ましくは、１００～１５０若しくは２００アミノ酸長以上である領域、又は参照配列の完全長にわたって存在する。
配列比較について、典型的に、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として働く。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験及び参照配列が、コンピュータに入力され、必要に応じて、部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトのプログラムパラメータが使用され得るか、又は代替的なパラメータが指定され得る。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。
本明細書において使用される際の「比較領域」は、２つの配列が最適に整列された後、配列が同数の連続的な位置の参照配列と比較され得る、５０～６００、通常、約７５～約２００、より一般には、約１００～約１５０からなる群から選択される連続的な位置の数のいずれか１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列のアライメントの方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性検索法（ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｍｅｔｈｏｄ）、これらのアルゴリズム（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータによる実施、又は手動のアライメント及び目視による検証によって行われ得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５）を参照）。
パーセント配列同一性及び配列類似性を決定するのに好適なアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を通して公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを特定することによって高スコアの配列ペア（ＨＳＰ）を特定することを含み、これは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列されるとき、一致するか又はある正値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかである。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記を参照）。これらの最初の隣接ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するためのシード（ｓｅｅｄ）として働く。累積アライメントスコアが増加され得る限り、ワードヒットは、各配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基のペアに対するリワードスコア（ｒｅｗａｒｄ ｓｃｏｒｅ）；常に＞０）及びＮ（不一致の残基に対するペナルティスコア（ｐｅｎａｌｔｙ ｓｃｏｒｅ）；常に＜０）を用いて計算される。アミノ酸配列について、スコア行列が、累積スコアを計算するために使用される。各方向へのワードヒットの伸長は、累積アライメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ以上の負のスコアの残基アライメントの蓄積のため、累積スコアが、ゼロ以下になる場合；又はいずれかの配列の末端に達する場合、停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列のための）は、１１のワードの長さ（Ｗ）、期待値（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４及び両鎖の比較をデフォルトとして使用する。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワードの長さ、及び１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照）５０のアライメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較をデフォルトとして使用する。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析も行う（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に起こる確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、核酸は、参照配列に類似していると見なされる。
「単離される」という用語は、核酸又はタンパク質に適用される場合、核酸又はタンパク質が、自然な状態では関連している他の細胞成分を実質的に含まないように精製されることを示す。それは、均質又はほぼ均質な状態であることが多い。それは、乾燥又は水溶液のいずれかであり得る。純度及び均質性は、当該技術分野において典型的に知られており、使用されている分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィーなどを用いて決定され得る。調製物中に存在する主な種類のタンパク質が実質的に精製される。「精製される」という用語は、ある態様において、タンパク質が、電気泳動ゲルに本質的に１つのバンドを生じさせることを示す。典型的に、それは、タンパク質が、少なくとも８５％純粋、より好ましくは、少なくとも９５％純粋、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋であることを意味する。
本明細書において使用される際、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、天然又は組み換えであり、任意の種に由来し得；ＡＮＧＰＴＬ３ペプチドはまた、合成であり得る。一態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＡＮＧＰＴＬ３の配列、その突然変異体、その欠失、その切断型を含む。特に有用なのは、完全長野生型ヒトＡＮＧＰＴＬ３配列（配列番号１）についての番号付けを用いて、アミノ酸Ｋ４２３の突然変異体又は欠失を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、米国特許第９，３０１，９７１号明細書；同第９，６４９，３５９号明細書；同第９，７４５，３５８号明細書；同第９，８６８，７７１号明細書、又は欧州特許第２ ９６４ ２５０号明細書に記載されており、これらはそれぞれ、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド及びその配列に関連する具体的な教示について、参照により本明細書に援用される。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、プロテアーゼ抵抗性ポリペプチドである。一態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、Ｒ又はＫ残基において、天然の野生型ペプチド配列と比べて、アミノ酸置換を有するプロテアーゼ抵抗性ポリペプチドである。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、完全長野生型ヒトＡＮＧＰＴＬ３配列（配列番号１）についての番号付けを用いて、Ｋ４２３Ｑ突然変異を有する切断型のヒトＡＮＧＰＴＬ３（例えば、アミノ酸２４２～４６０）を含むＤ１（配列番号１９）である。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に示されるように、配列番号１又は３～４５のいずれかを含む。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号２のＤＮＡ配列又はその突然変異又は欠失によってコードされるポリペプチドを含む。一態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、記載される範囲内の全ての整数を含む、配列番号１又は３～４５に対する８０～９９％の同一性を有する配列を含む。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に示されるいずれかの配列に対する少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１を参照して決定される際、４２３位におけるＫ又はＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を含む。一態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、軟骨形成活性を有する。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、突然変異、切断、又は欠失をコードするＤＮＡ配列を含む、配列番号２（例えば、ヌクレオチド５２－１４３４）のコード部分に対する９０～１００％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドを含む。
Figure 0007336513000030
本明細書において使用される際、「少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分」は、トレースレスリンカーへの結合前の遊離生物学的活性部分、又はトレースレスリンカー付加物「Ｄ－Ｒ」からの切断後に生じる遊離生物学的活性部分「Ｄ－Ｈ」の両方を指す。ある態様において、薬物付加物Ｄ－Ｒは、生物学的活性を有し得る。ある態様において、生物学的活性部分は、本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
本明細書において使用される際、薬物又は生物学的活性部分の「遊離形態」は、トレースレスリンカーに結合される前又は薬物送達システム中でトレースレスリンカーから放出された後などの、その非修飾、薬理活性形態の薬物を指す。
本明細書において使用される際、「トレースレスリンカー」、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000031
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
別の実施形態において、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000032
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ－［Ｓｐ－Ｑ］ｈ－Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、１，２，３－トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１～Ｃ４アルキル－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ、又はＯ－Ｐ（Ｏ）２－Ｃ１－４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ２～Ｃ２０アルキニル、［Ｗ－Ｏ］ｇ、Ｃ１～Ｃ８アルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ、［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８Ｃアルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１～２０の整数であり；
ｇが、約２～約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
別の実施形態において、Ｒは、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分Ｄの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000033
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
一態様において、トレースレスリンカーは、生物学的活性部分の持続放出に好適なリンカーである。一態様において、「Ｒ」は、図Ｄ－Ｒ中のトレースレスリンカーであり、ここで、「Ｄ」は、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含む薬物を指す。
本明細書において使用される際、「薬物付加物」は、トレースレスリンカーＲに結合された薬物Ｄである。特に、トレースレスリンカーＲに関して、薬物付加物は、「Ｄ－Ｒ」を含む。
本明細書において使用される際、「担体」は、可溶性ポリマー、バイオポリマー、又は架橋ポリマー又はバイオポリマーである。担体は、タンパク質、核酸、炭水化物、又はポリエチレングリコールを含む。一態様において、１つ又は複数の担体は、分子間で、分子内で、又はそれらの組合せで架橋される。一態様において、架橋担体は、ヒドロゲルを含む。特に、トレースレスリンカーＲに関して、担体は、Ｒ１１を含む。一態様において、Ｚは、担体、典型的に、ポリマー又はヒドロゲルに結合される。担体は、直接又は非切断性スペーサを介してトレースレスリンカーＲに結合される。非限定的な例として、担体は、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸ポリマー、又はヒドロゲルを形成することが可能な架橋ヒアルロン酸若しくはポリエチレングリコールを含み得る。
本明細書において使用される際、「ポリマー」は、合成若しくは生物由来又はその両方の組合せのものであり得る、直鎖状、環状、分枝鎖状、若しくは樹状の方式で又はそれらの組合せで化学結合によって結合される繰返し構造単位（モノマー）で構成される分子を指す。典型的に、ポリマーは、少なくとも１ｋＤａの平均分子量を有する。コポリマーは、少なくとも２つの化学的に異なるモノマーで構成されるポリマーである。典型的に、ポリマーは、分子量の分布を有する分子で構成される。ポリマーの分子量分布を表すための一方法は、平均分子量である。典型的に、ポリマーは、重合度の分布を有する分子で構成される。ポリマーの重合度分布を表すための一方法は、平均重合度である。
本明細書に記載され、及び本明細書における構造中に示される際、ポリエチレングリコール又はヒアルロン酸などのポリマー分子が、［Ｐ］ｎとして表され、ここで、Ｐは、モノマー繰返し単位を表し、ｎは、ポリマー中のモノマーの平均重合度を表す。当業者は、同一の繰返し単位Ｐを有するが異なるｎを有するように示される２つのポリマー分子は、差がｎの約１０％以下である場合に同等と見なされることを理解するであろう。記載され、本明細書における構造中に示されるヒアルロン酸コポリマーについて、ポリマー中のモノマーの分布は、不明確であり、ランダムであると仮定される。さらに、本明細書に記載されるヒドロゲル又は薬物送達システムのための独立した分子の相対的な結合性は、集団内でランダムである。ヒドロゲル又は薬物送達システムの構造図は、二次元で１つの可能な構造単位を表すが、これらの複合体は、多くの構造サブユニットを有する三次元である。
本明細書に記載される際、アミド結合形成の正確な位置は、トレースレスリンカー－薬物付加物Ｒ－Ｄについて正確に知られていない。これは、Ｄが、リンカーＲ（例えば、タンパク質又はポリペプチド）とともにアミド結合を形成することが可能な、２つ以上の第一級又は第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含有する場合に起こり得る。便宜上、アミド結合形成の位置が正確に知られていない付加物は、本明細書において以下のように示される。
Figure 0007336513000034
本明細書において使用される際、「ヒドロゲル」は、大量の水を吸収することが可能な三次元の親水性又は両親媒性ポリマー網目構造を指す。この網目構造は、ホモポリマー又はコポリマーで構成され、共有結合性の化学的又は物理的（イオン性、疎水性相互作用、交絡）架橋の存在のため不溶性である。この架橋は、網目構造及び物理的完全性を提供する。ヒドロゲルは、水性媒体中でそれが膨潤するのを可能にする、水との熱力学的相溶性を示す。網目構造の鎖は、細孔が存在し、細孔より小さい寸法を有する水溶性溶質が網目構造を出入りして拡散するのが可能であるように結合される。
本明細書において使用される際、「リンカー」又は「非生物学的活性リンカー」は、薬理作用を生じないリンカーを指す。ある実施形態において、リンカーは、生物系と適合性の二価又は多価有機リンカーを含む。「二価」は、ポリマーの各末端において、トレースレスリンカー又は薬物Ｄへの結合に好適な反応基を有することを指す。「多価」は、さらなる反応性部分がリンカー分子に沿って組み入れられたポリマーの各末端において、トレースレスリンカー又は薬物Ｄへの結合に好適な反応基を有することを指す。
本明細書において使用される際、「薬物送達システム」は、薬物付加物に結合された担体、Ｄ－Ｒ－Ｒ１１を含み、ここで、担体はＲ１１を含む。本明細書に記載される薬物送達システムは、１つ以上の薬物Ｄ；１つ以上のトレースレスリンカーＲ；及び１つ以上の担体Ｒ１１を含む分子コンジュゲートである。ある実施形態において、薬物送達システムにコンジュゲートされた複数の異なる薬物種があり得る。例えば、Ｄ１及び本明細書に記載の別のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドなどの２つの異なる薬物が、単一の薬物送達システムにおいてコンジュゲートされ得る。
本明細書において使用される際、「水溶性」という語句は、ヒドロゲルを形成する膨潤性の三次元架橋分子網目構造を指す。ヒドロゲルは、大量の水又は生理的オスモル濃度の水性緩衝液中で懸濁される場合、かなりの量の水、例えば、重量／重量基準で最大で１０倍を吸収することができ、したがって膨潤性であるが、過剰な水を除去した後、ゲルの物理的安定性及び形状を保持したままである。このような形状は、任意の幾何学形状のものであってもよく、このような個々のヒドロゲル物体は、各構成要素が化学結合によって互いに結合された複数の構成要素からなる単一の分子と見なされることが理解される。
本明細書において使用される際、「持続放出」又は「持続放出速度」は、所望の治療効果を達成するのに必要とされるそれぞれの薬物送達システムの次の投与間の間隔が延長される状況を指す。１日投与量を有する薬物は、例えば２つの投与間の１週間又はさらに長い間隔を有する持続放出形態に変えられ得る。
本明細書において使用される際、「官能基」は、特定の化学活性を示す分子内の原子団を指す。例は、アミド、アミン、アルコール、カルボニル、カルボン酸、チオールである。
本明細書において使用される際、「保護基」は、次の化学反応において化学選択性を得るために合成中に分子の官能基を一時的に保護する部分を指す。アルコールの保護基は、例えば、ベンジル及びトリチルであり、アミンの保護基は、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル及びベンジルであり、チオールについては、保護基の例は、２，４，６－トリメトキシベンジル、フェニルチオメチル、アセトアミドメチル、ｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、トリフェニルメチル、３－ニトロ－２－ピリジルチオ、４－メチルトリチルである。
本明細書において使用される際、「保護された官能基」は、１つ以上の保護基によって保護された官能基を意味する。
本明細書において使用される際、「ＰＢＳ」は、リン酸緩衝生理食塩水を指す。
本明細書において使用される際、「薬学的に許容できる塩」という用語は、生物学的活性薬剤の生物学的効果及び特性を保持し、典型的に、生物学的に又は他の形で不都合でない塩を指す。多くの場合、生物学的活性薬剤は、アミノ基及び／又はカルボキシル基又はそれと同様の基の存在によって酸及び／又は塩基塩を形成することが可能である。
薬学的に許容できる酸付加塩は、無機酸及び有機酸とともに形成され得、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロロテオフィリン酸塩（ｃｈｌｏｒｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎａｔｅ）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、次サリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩及びトリフルオロ酢酸塩である。
塩が誘導され得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
塩が誘導され得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。
薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機及び有機塩基とともに形成され得る。
塩が誘導され得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩及び周期表のＩ～ＸＩＩ列の金属が挙げられる。特定の実施形態において、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、及び銅から誘導され；特に好適な塩としては、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩が挙げられる。
塩が誘導され得る有機塩基としては、例えば、第一級、第二級、及び第三級アミン、置換アミン（天然の置換アミンを含む）、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ）、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン、又はトロメタミンが挙げられる。
薬学的に許容できる塩は、従来の化学的方法によって、親化合物、塩基性又は酸性部分から合成され得る。
一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、化学量論量の適切な塩基（ナトリウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウムの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させることによって、又はこれらの化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の適切な酸と反応させることによって調製され得る。このような反応は、典型的に、水中若しくは有機溶媒中で、又はこれら２つの混合物中で行われる。一般に、実行可能である場合、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルのような非水性媒体の使用が望ましい。さらなる好適な塩のリストは、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，（１９９０）；及び“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ”ｂｙ Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）において見られる。
本明細書において使用される際、「薬学的に許容できる担体」という用語は、当業者に公知であるように（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９－１３２９を参照）、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌薬）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、着香剤、染料など及びそれらの組合せを含む。従来の担体が活性成分と非相溶性でない限り、治療薬又は医薬組成物におけるその使用が想定される。
生物学的活性薬剤の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的又は医学的応答、例えば、症状の改善、病態の緩和を引き起こすか、疾病の進行を減速若しくは遅延させるか、又は疾病を予防するなどの生物学的活性薬剤の量を指す。
別の非限定的な実施形態において、「治療有効量」という用語は、細胞、又は組織、又は非細胞の生物学的物質、又は培地に投与したとき、疾病又は疾患を少なくとも部分的に治療するのに有効である生物学的活性薬剤の量を指す。当業者によって理解されるように、有効である特定の薬剤の絶対量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬剤、標的組織などの要因に応じて変化し得る。当業者は、「治療有効量」は、単回用量で投与され得るか、又は複数回用量の投与によって達成され得ることを理解する。例えば、心不全を治療するための薬剤の場合、有効量は、患者の臨床的改善をもたらす、例えば、運動耐容能／運動能力を向上させ、血圧を上昇させ、体液貯留を減少させ、及び／又は心臓機能、例えば、駆出率、運動能力（疲労困憊までの時間）などの定量試験に対する結果を向上させるのに十分な量であり得る。
本明細書において使用される際、「対象」という用語は、動物を指す。典型的に、動物は哺乳動物である。対象はまた、例えば、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などを指す。特定の実施形態において、対象は霊長類である。さらに他の実施形態において、対象はヒトである。
本明細書において使用される際、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」、又は「阻害すること（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」という用語は、所与の病態、症状、若しくは疾患、若しくは疾病の軽減若しくは抑制、又は生物学的活性若しくは過程のベースライン活性の有意な低下を指す。
本明細書において使用される際、任意の疾病又は疾患を「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、一実施形態において、疾病又は疾患を改善すること（すなわち、疾病又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅延させるか又は停止させるか又は低減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、患者が識別できないものを含む少なくとも１つの身体的パラメータを緩和又は改善することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理的に、（例えば、身体的パラメータの安定化）、又はその両方で疾病又は疾患を調節することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、疾病又は疾患の発症又は発生又は進行を予防するか又は遅延させることを指す。本明細書において使用される際、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、治療（例えば、治療剤）の投与、又は治療の組合せ（例えば、治療剤の組合せ）の投与から得られる、対象の疾患の１つ以上の症状の再発、発症、又は発生の予防を指す。
本明細書において使用される際、対象が、生物学的に、医学的に、又は生活の質においてこのような治療から利益を得られる場合、このような対象は、治療「を必要とする」又は「それを必要とする」。
本明細書において使用される際、本明細書において使用される単数形の用語（「ａ」、「ａｎ」「ｔｈｅ」）及び類似の用語は、（特に特許請求の範囲の文脈において）本明細書に特に示されない限り、又は文脈上明らかに矛盾していない限り、単数及び複数の両方を包含するものと解釈されるべきである。
本明細書において使用される際、「約」という用語は、整数及び分数成分の両方を含む任意の値が、「約」という用語によって修飾される値の最大で±１０％の変動の範囲内にあることを指す。
「又は」という用語は、「又は」が「及び／又は」を包含するように、連言的（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅ）又は選言的（ｄｉｓｊｕｎｃｔｉｖｅ）であり得る。
本明細書に記載される一実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ－Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むＤの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000035
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ－Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むＤの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000036
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ－［Ｓｐ－Ｑ］ｈ－Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、１，２，３－トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１～Ｃ４アルキル－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ、又はＯ－Ｐ（Ｏ）２－Ｃ１－４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ２～Ｃ２０アルキニル、［Ｗ－Ｏ］ｇ、Ｃ１～Ｃ８アルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ、［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８Ｃアルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１～２０の整数であり；
ｇが、約２～約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物及びトレースレスリンカーＤ－Ｒ（式中、Ｒが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むＤの放出に好適な式（Ｉ）によって表されるリンカーであり：
Figure 0007336513000037
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれＣ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択されるか、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、若しくは７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物付加物である。
ある態様において、式（Ｉ）のＲ１～Ｒ８は、以下の意味を有する。一態様において、Ｒ１が、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ１ａが、水素、又はメチルである。別の態様において、Ｒ１及びＲ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成する。別の態様において、Ｒ２がメチルである。別の態様において、２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルキル基を形成する。別の態様において、Ｒ３が、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ３ａが、水素又はメチルである。別の態様において、Ｒ３及びＲ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成する。別の態様において、ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルコキシ、Ｃ１～Ｃ２アルキル又はＣ１～Ｃ６アルコキシである。別の態様において、Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである。別の態様において、ＹがＳｉＲ５Ｒ６ＯＲ７であり；Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；Ｒ７が、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチル、エトキシエチル、エトキシイソプロピル、テトラヒドロピラニル、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である。
ある態様において、式（Ｉ）のＲ８及びＲ９は、以下の意味を有する。一態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２カルバモイルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２アミジルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ５アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ２アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）Ｃ１アルキルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２である。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｂＣＨ２ＣＨ２であり、ここで、ｂが、１、２、３、又は４である。別の態様において、Ｒ９がアミジルである。別の態様において、Ｒ９がカルバモイルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ１アルキルアミジルである。別の態様において、Ｒ９が、Ｃ２アルキルアミジルである。
ある態様において、Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
ある態様において、Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ－［Ｓｐ－Ｑ］ｈ－Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、１，２，３－トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１～Ｃ４アルキル－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ、又はＯ－Ｐ（Ｏ）２－Ｃ１－４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ２～Ｃ２０アルキニル、［Ｗ－Ｏ］ｇ、Ｃ１～Ｃ８アルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ、［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８Ｃアルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、オリゴペプチドから選択され；
ｈが、１～２０の整数であり；
ｇが、約２～約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式Ｉを担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である。
特定の態様において、ｇ及びｈが、１～約２５又は１～約１０である。
ある態様において、式（Ｉ）のＺがＮＲ９である。一態様において、Ｒ９が、Ｒ１０でさらに置換される。別の態様において、Ｒ９が、Ｒ１１でさらに置換される。
式（Ｉ）によれば、Ｒ１０が、直交カップリング反応に好適な反応性官能基である。好適な反応性官能基は、直交反応を容易に起こすものである。例示的及び非限定的な直交化学反応は、表２に示される官能基を含む。表２中の所与の行では、官能基Ｘ（左列）が、官能基Ｙ（右列）とのカップリング反応に好適である。カップリング反応は、共有結合又は分子間複合体であり得る。ほとんどの実施形態において、カップリング反応は、共有結合をもたらす。シクロデキストランとのアダマンタンなどの、他の反応において、カップリングは、非共有結合性分子会合である。一態様において、官能基は、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ６～Ｃ１２シクロアルキニル、Ｃ６～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ６～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、オキシアミン、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、及びアダマンタニルから選択される。別の態様において、官能基は、置換Ｃ６～Ｃ１２シクロアルキニルであり、ここで、置換は、縮合シクロプロピル基を含む。別の態様において、官能基は、ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルである。別の態様において、官能基はアジジルである。
Figure 0007336513000038
Figure 0007336513000039
Figure 0007336513000040
Figure 0007336513000041
ある実施形態において、トレースレスリンカーＲは、式（ＩＩ）：
Figure 0007336513000042
を含み、式中、Ｒ９及びＤが両方とも、上記の式（Ｉ）について定義されるとおりであり、Ｔ１が、窒素又は酸素から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する、置換若しくは非置換Ｃ２～Ｃ１０エステル、置換若しくは非置換Ｃ３～Ｃ１０シリルエーテルを含む。
ある態様において、Ｔ１が、－ＣＲ１Ｒ１ａＯＹであり、これは、トリガー部分を含有し、表３中の以下の構造のうちの１つを含む。
Figure 0007336513000043
ある実施形態において、式Ｉ又はＩＩのいずれかで表されるトレースレスリンカーＲは、表４中の以下の構造のいずれか１つを含む。
Figure 0007336513000044
Figure 0007336513000045
別の実施形態において、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のトレースレスリンカーＲは、薬物又は生物活性部分にコンジュゲートされる。一態様において、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のトレースレスリンカーＲは、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドにコンジュゲートされる。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１、又は３～４５を含む。別の態様において、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、Ｄ１（配列番号１９）を含む。
トレースレスリンカーＲの合成
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）Ｃ２位に求核基を含むピペラジン化合物のＮ４窒素を、官能化アシルリンカー化合物と反応させて、Ｎ４－アシルピペラジンを形成する工程；（Ｂ）Ｎ４－アシルピペラジンのピペラジン環のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｃ）Ｎ４－アシルピペラジンの求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｄ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＮ４における官能化アシルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、工程（Ａ）又は（Ｄ）のピペラジン化合物中に存在する第一級アルコールは、好適な保護基又はトリガー基にコンジュゲートされる。別の態様において、保護基又はトリガー基は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）Ｃ２位に求核基を含むピペラジン化合物のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｂ）ピペラジン化合物のＮ４窒素を、官能化アルキルリンカーと反応させて、Ｎ４－アルキルピペラジンを形成する工程；（Ｃ）Ｎ４－アルキルピペラジンの求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｄ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＮ４における官能化アルキルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピペラジン化合物における反応基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピペラジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、好適（Ａ）又は（Ｄ）のピペラジン化合物上に存在する第一級アルコールは、好適な保護基又はトリガー基にコンジュゲートされる。別の態様において、トリガー化合物は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
別の実施形態は、式（Ｉ）のトレースレスリンカーＲを製造するための方法であって、（Ａ）クロスカップリング又は置換反応によってＣ２位に求核基を含むピリジン化合物のＣ４位に官能化リンカーを導入する工程；（Ｂ）４－置換ピリジン化合物を水素化して、４－置換ピペリジン化合物を形成する工程；（Ｃ）４－置換ピペリジン化合物のＮ１窒素をカルボキシメチル化する工程であって、カルボキシル基が好適な保護基に共有結合される工程；（Ｄ）４－置換ピペリジン化合物の求核基を、本明細書に記載されるトリガー化合物と反応させる工程；（Ｅ）必要に応じて、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適な官能基を含むようにＣ４における官能化アルキルリンカーを構成する工程のいずれか１つを含む方法である。一態様において、ピリジン又はピペリジン化合物における求核基は、ヒドロキシルを含む。別の態様において、ピリジン又はピペリジン化合物のＣ２位における求核基は、第一級アルコールである。別の態様において、トリガー化合物は、エステル、シリルエーテル、アセタール、カルバメート、カーボネート、又はジシロキサン含有化合物を含む。一態様において、Ｎ４カルボキシメチルエステル保護基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を形成するのに好適なカルボン酸を形成するように脱保護される。別の態様において、カルボキシメチル化工程において、カルボキシメチル化試薬のカルボキシル基は、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤へのアミド結合を介して共有結合される。一態様において、工程Ａの官能基は、トレースレスリンカーを担体化合物に結合するのに好適である。
好適な保護基は、反応性官能基又は化学官能基に可逆的に結合されて、それらが例えば他の化学官能基と反応できないようにする部分である。例示的及び非限定的なアミノ保護基としては、フルオレニルメチレンオキシ基（ＦＭＯＣ）、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、カルボキシベンジル（Ｃｂｚ）などが挙げられる。例示的及び非限定的なアルコール保護基としては、ｔ－ブチルエーテル、アリルエーテル、ベンジルエーテル、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）などが挙げられる。特定の部分をブロック及び露出するために合成全体を通して必要に応じて脱保護基が付加又は除去され得る。
一実施形態において、トレースレスリンカーを製造するための方法は、反応スキーム１～３で表される。以下のスキームは、トレースレスリンカーを製造するための一般的及び非限定的なスキームである。本明細書の実施例に示されるように、ある合成経路は、これらの一般的なスキームと特に一致しない。別の態様において、反応スキームで表されるトレースレスリンカーを製造するための方法は、実施例１において提供される。
Figure 0007336513000046
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
Ｘが、Ｃｌ、Ｏ－ＮＨＳ、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－Ｒ２ａ、又はＸ－ＯＨを含む活性化基であり、反応は、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）などの標準的なペプチドカップリング試薬を含み；
Ｒ２ａが、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はアリールであり；
Ｐ４が、好適な保護基又はＨであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ｐ１及びＰ２が、同一であり得る保護基であり；
Ｙが、表３中に示される好適なトリガーであり；
ＦＧが、本明細書に記載される担体にコンジュゲートすることが可能な好適な官能基を含む。
Figure 0007336513000047
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
ここで、Ｘ２が、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はトリフレートなどの活性化基であり；
Ｙ、Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、及びＦＧが、スキーム１に記載されるとおりであり；
Ｐ３が、Ｐ１及びＰ２と同一であり得る保護基である。
Figure 0007336513000048
式中、上に示される工程の１つ以上は、異なる連続した順序で行われても、又は用いられる試薬に応じて省略されてもよく；
Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｙ、及びＦＧが、スキーム２に記載されるとおりである。
本明細書に記載されるように、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の付加物Ｄ－Ｒは、トレースレスリンカーＲのカルボン酸形態を、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤のアミノ基と反応させて、アミド結合を形成することによって調製される。このプロセスは、スキーム４に記載されている。好適なカルボン酸活性化剤が、アミド結合形成反応を促進するのに使用される。一例として、カルボン酸は、炭酸ジスクシンイミジルの作用によってアミノ反応性形態に変換されて、ＮＨＳエステルが形成され得；次に、トレースレスリンカーＲのＮＨＳエステルは、アミノ含有薬物Ｄと反応されて、付加物Ｄ－Ｒが形成される。
スキーム４において、Ｌ、Ｙ、及びＦＧが、スキーム１～３に記載されるとおりであり；Ｄが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミン又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤である。
Figure 0007336513000049
本明細書に記載される一実施形態は、１つ以上の官能基を有するリンカーを介して担体組成物に結合された式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のトレースレスリンカーＲである。一態様において、担体組成物は、本明細書に記載されるトレースレスリンカーのＲ１１を含む。一態様において、Ｒ１１が、リンカーを介してＲ８又はＲ９に結合された、ポリマー、バイオポリマー、又はポリエチレングリコールを含む。一態様において、担体組成物は、ヒドロゲルである。一態様において、ヒドロゲル組成物は、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート／ポリメタクリレートコポリマー、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ナノ粒子又は分子表面を含む。一態様において、ヒドロゲルは、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む。別の態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲルを含む。薬物送達システムが眼又は滑膜関節に用いられる一態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸又は架橋ヒアルロン酸を含む。
本明細書に記載されるように、Ｒ１１担体組成物は、架橋されて、複数の分子を一緒に結合し、ヒドロゲル形成を促進し得る。架橋は、当該技術分野において公知の任意の手段を用いて行われ得る（例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓａｂｌｅ， ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ ｓｕｌｆｕｒ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ ｓｏｌｉｄ ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ ｉｎ ｄｙｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ ｓｏｌａｒ ｃｅｌｌｓ」Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５１，１４６６０－１４６６２（２０１５）を参照されたい。本明細書に記載される一実施形態において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、表２に示される１つ以上の官能基で官能化されて、架橋のための反応性官能基を提供する。別の態様において、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールは、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、オキシアミン、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、及びアダマンタニルから選択される官能基で官能化される。別の態様において、ヒアルロン酸は、アジジル基で官能化される。
官能化度は、ヒドロゲルの多孔性を決定し得る。一態様において、担体ポリマーの約５％～約５０％（規定の範囲内の全ての整数を含む）が官能化される。一態様において、担体ポリマーは、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、或いはそれ以上官能化される。
一態様において、担体は、ヒアルロン酸である。別の態様において、ヒアルロン酸は、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリン－４－イウムクロリド（ＣＡＳ番号３９４５－６９－５）及び２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（ＣＡＳ番号１３４１７９－３８－７）と反応されて、アジド官能化ヒアルロン酸（［ＨＡ－Ｎ３］）が形成される。一態様において、反応は以下のとおりである。
Figure 0007336513000050
実験条件が、実施例３に記載されている。一態様において、ヒアルロン酸の約５％～約５０％（規定の範囲内の全ての整数を含む）が官能化される。一態様において、ヒアルロン酸は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、或いはそれ以上官能化される。
別の実施形態において、ポリエチレングリコールは、様々な試薬で官能化されて、上述される官能化ヒアルロン酸モノマーを結合するための架橋剤が形成される。
２ｋＤａの２アームＰＥＧ－ＢＣＮ架橋剤の合成
一態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコールジアミン塩酸塩が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
Figure 0007336513000051
１０ｋＤａの４アームＰＥＧ－ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約１０ｋＤａの４アームポリエチレングリコールアミン塩酸塩（ペンタエリトリトールコア、ＪｅｎＫｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
Figure 0007336513000052
２ｋＤａの２アームβ－アラニンＰＥＧ－ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコール及び３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
Figure 0007336513000053
２ｋＤａの２アームアミノシクロプロパンカルボン酸ＰＥＧ－ＢＣＮ架橋剤の合成
別の態様において、Ｍｎ約２ｋＤａのポリエチレングリコール及び１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボン酸が、示されるように反応される。反応条件は、実施例４に記載されている。
Figure 0007336513000054
本明細書に記載される別の実施形態は、１つ以上の架橋剤である。一態様において、架橋剤は、式Ｖ：
Figure 0007336513000055
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩ：
Figure 0007336513000056
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩａ：
Figure 0007336513000057
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩｂ：
Figure 0007336513000058
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩｃ：
Figure 0007336513000059
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩＩ：
Figure 0007336513000060
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＶＩＩＩ：
Figure 0007336513000061
を含む。
別の態様において、架橋剤は、式ＩＸ：
Figure 0007336513000062
を含む。
本明細書に記載される別の実施形態において、Ｒ１１が、架橋担体を形成するために１つ以上の架橋剤と反応された官能化担体を含む。一実施形態において、架橋担体は、ヒドロゲルを形成する。一態様において、架橋担体は、ヒドロゲルを形成するために本明細書に記載される１つ以上のポリエチレングリコール架橋剤で官能化及び架橋されたヒアルロン酸である。
一実施形態において、ヒアルロン酸を含む架橋担体は、示されるように、適切に官能化されたポリマーを反応させることによって調製され得る。
Figure 0007336513000063
何らかの特定の例によって制約されるものではなく、例示として、一実施形態において、供給業者、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ＨＡ２００Ｋ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）によって、公称平均分子量を有するとラベル付けされたヒアルロン酸ナトリウム塩は、粘度測定によって決定した際に、バッチ間で１５１～３００ｋＤａの範囲で変動する。この例示のため、２００ｋＤａの仮定公称平均分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム塩の分子は、平均約５００モノマー単位からなる。この及び以下の構造において、非修飾モノマー単位が「ｍ」として定義され、アジド基で修飾されたモノマー単位が「ｎ」として定義され、架橋分子にコンジュゲートされたアジド－モノマー単位が「ｐ」として定義され、トレースレスリンカー－薬物付加物にコンジュゲートされたアジドモノマー単位が「ｑ」として定義される。約５００モノマー単位を含むポリマー鎖の場合、（ｎ＋ｍ＋ｐ＋ｑ≒５００）である。ヒアルロン酸ナトリウム塩分子の修飾パーセントが２５％である場合、ｍ＝７５％且つ（ｎ＋ｐ＋ｑ）＝２５％である。
同様に、架橋剤の一実施形態において存在するＰＥＧ単位は、１ｋＤａ、２ｋＤａ、４ｋＤａ、６ｋＤａ、８ｋＤａ、又は１０ｋＤａの公称平均分子量を有すると記載される出発ＰＥＧから誘導され、これらの示される構造中で「ｗ」として記載される、それぞれ約２２、４５、９１、１３６、１８１、又は２２６の繰返しオキシエチレンモノマー単位からなり得る。ある態様において、ｗが、約５～約２５０であり得る。他の態様において、ｗが、約５、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２１０、約２２０、約２３０、約２４０、又は約２５０のオキシエチレンモノマー単位を含む。他の態様において、ｗが、約２０、約４５、約９０、約１４０、約１８０、又は約２２５である。
下式中、一実施形態において、ランダム分布中のヒアルロン酸（ｍ）の非修飾二糖繰返し単位＋ヒアルロン酸の修飾二糖繰返し単位（ｎ＋ｐ＋ｑ）の和（＝ｍ＋ｎ＋ｐ＋ｑ）は、約２００ｋＤａの粘度測定によって決定した際に公称平均分子量について約５００単位を含み得る。これは、式Ｘ～ＸＸＩＩに適用される。
一態様において、架橋担体は、式Ｘ：
Figure 0007336513000064
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩ：
Figure 0007336513000065
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩ：
Figure 0007336513000066
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩａ：
Figure 0007336513000067
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩｂ：
Figure 0007336513000068
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩｃ：
Figure 0007336513000069
を含む。
別の態様において、架橋担体は、式ＸＩＩＩ：
Figure 0007336513000070
を含む。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物付加物Ｄ－Ｒであり、式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分であり；Ｒが、生物学的活性部分の放出に好適なリンカーである。一態様において、Ｄが、タンパク質、核酸、炭水化物、ペプチド、ヌクレオチド、オリゴ糖、又は小分子を含み、これらのそれぞれが、少なくとも１つの第一級若しくは第二級アミンを有し、小分子が、約１００ｇ／ｍｏｌ～約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
本明細書に記載される一実施形態は、薬物付加物Ｄ－Ｒであり、式中、Ｄが、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。一態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む。別の態様において、Ｄが、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤ１（配列番号１９）を含む。
本明細書に記載される別の実施形態は、担体－トレースレスリンカー生物学的活性薬剤コンジュゲートＤ－Ｒ－Ｒ１１（式中、Ｄが、本明細書に記載される、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性部分を含み、Ｒが、本明細書に記載される担体ポリマー又はヒドロゲルを含む、Ｒ１１に結合された本明細書に記載されるトレースレスリンカーを含む）を含む薬物送達システムである。一態様において、Ｒ１１が、ヒアルロン酸、架橋ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、架橋ポリエチレングリコール又は本明細書に記載される他の好適なポリマーを含む。別の態様において、Ｒが、本明細書に記載されるトレースレスリンカーを含む。別の態様において、Ｄが、本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。一態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む。別の態様において、Ｄが、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤ１（配列番号１９）を含む。
別の実施形態において、Ｄ－Ｒ－Ｒ１１が、式ＸＩＶを含み、式中、「薬物」が、配列番号１又は３～４５の１つ以上を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド又は配列番号１又は３～４５に対する少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドを含む。
ある実施形態において、Ｄ－Ｒ－Ｒ１１が、式ＸＶ－ＸＸＩＩＩに示される種のいずれかを含む。
一実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、配列番号１又は３～４５の１つ以上を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
一実施形態において、薬物又は生物学的活性薬剤Ｄは、配列番号１９の配列を有するＤ１を含む。
本明細書に記載される一実施形態は、軟骨を修復するためのペプチド組成物である。特に、本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ペプチドは、野生型ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドと比較して、増加したプロテアーゼ抵抗性を有する。
本明細書に記載される別の実施形態は、本発明のポリペプチドを、関節、軟骨組織若しくは軟骨に近接する組織（ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ）中に、又は全身に投与することによって、関節炎又は関節傷害を予防又は改善するためのＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの投与のための組成物及び方法である。軟骨細胞への間葉性幹細胞の分化の誘導のための組成物及び方法も記載される。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であり；この方法は、以下の一連の工程：
（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって、次に、この工程が、そのヒドロゲルを調製するのに使用されるプロセスを含み；担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程；
（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー－Ｄ付加物を形成する工程であって；トレースレスリンカー－Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程、
（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー－Ｄ付加物とコンジュゲートする工程；及び
（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程のうちの１つを含み得る。この方法は、以下のスキーム５Ａに示される。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）担体分子Ｒ１１（ここで、Ｒ１１が架橋ヒドロゲルである）を調製する工程であって、次に、この工程が、そのヒドロゲルを調製するのに使用されるプロセスを含み；担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子－トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子－トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、担体分子－トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程と；
（ｄ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｂに示される。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）別々に、トレースレスリンカーＲを、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄにコンジュゲートし、それによって、トレースレスリンカー－Ｄ付加物を形成する工程であって；トレースレスリンカー－Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）担体分子Ｒ１１を、トレースレスリンカー－Ｄ付加物とコンジュゲートする工程であって、トレースレスリンカー－Ｄ付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｄ）非架橋担体分子－トレースレスリンカー－生物学的活性薬剤Ｒ１１－Ｒ－Ｄを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｃに示される。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子－トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子－トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、担体分子－トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程と；
（ｄ）非架橋担体分子－トレースレスリンカー－生物学的活性薬剤Ｒ１１－Ｒ－Ｄを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｄに示される。
本明細書に記載される別の実施形態は、薬物送達システムを組み立てるための方法であって、以下の工程：
（ａ）非架橋担体分子Ｒ１１を調製する工程であって、担体分子が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｂ）トレースレスリンカーＲを、担体分子Ｒ１１にコンジュゲートし、それによって、担体分子－トレースレスリンカー付加物を形成する工程であって、担体分子－トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｃ）非架橋担体分子－トレースレスリンカー－付加物Ｒ１１－Ｒを、適切な架橋試薬とともにインキュベートして、ヒドロゲルを形成することによって、架橋ヒドロゲルを調製する工程であって、ヒドロゲルが、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｄ）第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性薬剤Ｄを、架橋担体分子－トレースレスリンカー付加物にコンジュゲートする工程であって、架橋担体分子－トレースレスリンカー付加物が、任意選択的に、この段階で精製され得る工程と；
（ｅ）薬物送達システムを試薬から精製する工程とを含む方法である。この方法は、以下のスキーム５Ｅに示される。
スキーム５Ａ～Ｅ．スキーム５は、本明細書に記載される薬物送達システムを組み立てるための５つの方法Ａ～Ｅを示す。
Figure 0007336513000071
Figure 0007336513000072
Figure 0007336513000073
Figure 0007336513000074
Figure 0007336513000075
Figure 0007336513000076
一実施形態において、薬物送達システムは、式（ＸＩＶ）：
Figure 0007336513000077
を含むことができ、式中、Ｌ２が、特定の架橋剤に特異的であり得るスペーサ基を表し、「薬物」が、治療的に有益な方法で少なくとも１つの生物学的に関連する標的を調節する、少なくとも１つの第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子を含む生物学的活性分子を表す。一態様において、「薬物」は、本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、「薬物」は、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、「薬物」は、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む。別の態様において、「薬物」は、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、「薬物」は、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、「薬物」は、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。別の態様において、「薬物」は、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド、例えば、Ｄ１（配列番号１９）を含む。
一実施形態において、スペーサＬ２が、表５に示される任意の種を含む。
Figure 0007336513000078
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶ）：
Figure 0007336513000079
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩ）：
Figure 0007336513000080
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩ）：
Figure 0007336513000081
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩ）：
Figure 0007336513000082
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩａ）：
Figure 0007336513000083
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩｂ）：
Figure 0007336513000084
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩｃ）：
Figure 0007336513000085
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩｄ）：
Figure 0007336513000086
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩｅ）：
Figure 0007336513000087
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＶＩＩＩｆ）：
Figure 0007336513000088
を含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システムは、薬物が本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドである式（ＸＸＩＩＩ）：
Figure 0007336513000089
を含み得る。
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムを用いて疾病又は疾患を治療するための方法である。本明細書に記載される別の実施形態は、薬剤として使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩に関する。別の実施形態は、関節傷害、又は関節炎、変形性関節症、外傷性関節炎、若しくは急性関節傷害若しくは外傷を含む疾病の治療のための薬剤の製造のための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の使用である。一態様において、本明細書に記載される薬物送達システムの医薬組成物は、注射によって、それを必要とする対象に投与され得る。一態様において、投与は、注射又は外科的移植によって行われ得る。
本明細書に記載される別の実施形態は、関節傷害、又は関節炎、変形性関節症、外傷性関節炎、急性関節傷害、若しくは外傷を含む疾病の治療に使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、配列番号１、３～４５の１つ以上に対する少なくとも９５％の配列同一性を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む）を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩に関する。一態様において、Ｄが、Ｄ１（配列番号１９）を含む。別の態様において、組成物は、関節内に注射される溶液又は懸濁液である。別の態様において、組成物は、外科的手段を用いて又は外径の大きい針による注射（ｌａｒｇｅ－ｂｏｒｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）によって関節内に埋め込まれるゲル又は半固体組成物である。別の態様において、組成物は、関節内又は関節の近傍に注射される粒子の形態である。別の態様において、組成物は、最終的に吸収されるか又はその場で処理される生分解性メッシュ又はガーゼとして関節内又は関節の周囲に埋め込まれる。別の態様において、組成物は、外傷又は疾病後に腱、靱帯、軟骨、骨、又は他の関節構成要素を再付着又は修復するための外科手術中に用いられる、縫合糸、ステープル、プレート、メッシュ、又は同様の物品に含浸される。一態様において、組成物は、静脈内に、動脈内に、皮下に、筋肉内に、又は腹腔内に送達される溶液又は懸濁液である。別の態様において、組成物は、外科的手段又は外径の大きい針による注射を用いて埋め込まれるゲル又は半固体組成物である。別の態様において、組成物は、皮膚創傷に局所的に又は直接適用されるゲル又は半固体組成物である。
一実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システムは、特定の放出速度で生物学的活性薬剤を放出する。一態様において、放出速度は、トレースレスリンカーＲの「トリガー」構成要素によって調整又は調節され得る。何らかの理論によって制約されるものではないが、生理的条件下でのトリガーの反応により、求核官能基、例えば、分子内の方式で、薬物を薬物送達システムに結合するアミド結合を切断するヒドロキシル官能基が生成されるものと考えられる。一実施形態において、トリガーの反応は、加水分解反応であり、ヒドロキシル官能基の形成をもたらす。何らかの理論によって制約されるものではないが、トリガー部分の立体障害が、トリガーのより遅い反応に相関され、電子求引基の存在及び近接が、トリガーのより速い反応に相関されるものと考えられる。
一実施形態において、生物学的活性部分の放出の半減期は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。一態様において、生物学的活性部分放出半減期は、約２．５日、約４．５日、約７日、約１０日、約１１日、約１２日、約１４日、約１５日、約２１日、約２８日、約３０日、約３１日、約３２日、約４０日、約５８日、約６０日、約６５日、約７０日、約８０日、約１２５日、約１６５日、約３８０日、約９４０日、或いはより長い。
一実施形態において、トレースレスリンカートリガーエステル加水分解の半減期は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。一態様において、トレースレスリンカートリガーエステル加水分解半減期は、約１日、約１．５日、約２日、約２．５日、約４日、約５日、約１０日、約１２日、約１５日、約２０日、約３０日、約３２日、約３５日、約４０日、約５５日、約６０日、約９０日、約１２０日、約１５０日、約１８０日、約２００日、約３００日、約４００日、或いはより長い。
別の実施形態において、薬物送達システムを投与した組織、器官、又は区画からの薬物Ｄの放出後の薬物送達システムＲ－Ｒ１１のクリアランスの半減期（例えば、Ｄ－Ｒ－Ｒ１１→Ｒ－Ｒ１１＋Ｄ）は、約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１年間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３年間、約３．５年間、約４、又は４年間超である。
本明細書に記載される他の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムＤ－Ｒ－Ｒ１１を含む医薬組成物である。一態様において、医薬組成物は、それを必要とする対象における注射又は移植に好適である。
注射又は移植による投与に好適な医薬組成物は、滅菌注射用溶液又は分散体の即時調製のための、滅菌水溶液、懸濁液、又は分散体及び滅菌粉末又は凍結乾燥物を含む。
静脈内投与のために、好適な担体としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、リンゲル液、又は注射用蒸留水が挙げられる。全ての場合、組成物は、滅菌であるべきであり、容易な注射針通過が存在する程度に流体であるべきである。好ましい医薬製剤は、製造及び貯蔵の条件下で安定しており、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。一般に、関連する担体は、例えば、水、緩衝液、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、並びにそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合、必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌薬及び抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトールなどの多価アルコール、アミノ酸、ソルビトール、塩化ナトリウム、又はそれらの組合せを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされ得る。
特定の注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液であり、坐薬は、脂肪エマルジョン又は懸濁液から有利に調製される。前記組成物は、滅菌されてもよく、及び／又は保存剤、安定化剤、湿潤剤若しくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液又はそれらの組み合わせなどの補助剤を含有し得る。さらに、それらは、他の治療的に有益な物質も含有し得る。前記組成物は、従来の混合、造粒又はコーティング方法にしたがってそれぞれ調製され、約０．１～７５％の活性成分を含有するか、又は約１～５０％の活性成分を含有する。
滅菌した注射用溶液又は懸濁液は、必要に応じて、１つの成分又は成分の組合せとともに適切な溶液中に必要な量の薬物送達システムを組み込んだ後、ろ過滅菌によって調製され得る。一般に、溶液又は懸濁液は、滅菌ＰＢＳ及び任意の賦形剤などの滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌した注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、既に滅菌ろ過されたその溶液から、活性成分の粉末及び任意のさらなる所望の成分を生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。
経粘膜又は経皮投与手段も可能である。経皮適用に好適な組成物は、好適な担体とともに有効量の生物学的活性薬剤を含む。経皮送達に好適な担体は、宿主の皮膚を通過するのを助けるために、吸収可能な薬理学的に許容できる溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、バッキング部材と、任意選択的に担体とともに化合物を含むリザーバと、任意選択的に、長期間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚の化合物を送達する速度制御障壁と、デバイスを皮膚に固定する手段とを含む包帯の形態である。
例えば、皮膚、眼、又は関節への局所適用に好適な組成物は、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル又は噴霧可能な製剤、例えばエアロゾルなどによる送達用のものを含む。このような局所送達系は、皮膚適用に特に適切であろう。したがって、それらは、当該技術分野において周知の局所製剤（化粧用を含む）に使用するのに特に適している。このような系は、可溶化剤、安定剤、等張性増強剤、緩衝液、又は保存剤を含有し得る。
本明細書において使用される際、局所適用はまた、吸入又は鼻内適用に関するものであり得る。それらは、乾燥粉末吸入器からの乾燥粉末（単独で、混合物、例えばラクトースとの乾燥ブレンドとして、又は例えばリン脂質との混合成分粒子として）の形態、又は好適な噴射剤を用いて若しくは用いずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザ又はネブライザからのエアロゾルスプレーの提示の形態で好都合に送達され得る。
活性成分としての本明細書に記載される組成物が分解する速度を低下させる１つ以上の薬剤を含む医薬組成物及び剤形も本明細書に記載される。本明細書において「安定剤」と呼ばれるこのような薬剤としては、限定はされないが、アスコルビン酸などの酸化防止剤、ｐＨ緩衝液、又は塩緩衝液などが挙げられる。
治療的に用いられる医薬組成物の有効量は、例えば、治療の状況及び目的に応じて決まる。治療のための適切な投与量レベルが、部分的に、薬物送達システムに組み込まれる治療剤、薬物送達システムが使用されている適応症、投与経路、並びに患者のサイズ（体重、体表面、又は器官のサイズ）及び状態（年齢及び全体的な健康）に応じて変化することを当業者は理解するであろう。したがって、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を滴定し、投与経路を調節することができる。
投与の頻度は、使用されている薬物送達システムに組み込まれる治療剤の薬物動態パラメータに応じて決まる。典型的に、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで組成物を投与する。したがって、組成物は、単回用量として、時間をかけて２回以上の用量（同じ量の所望の分子を含有しても若しくは含有しなくてもよい）として、又は埋め込みデバイス若しくはカテーテルによる持続注入として投与され得る。適切な投与量のさらなる調整は、当業者によって日常的に行われ、当業者によって日常的に行われる作業の範囲内である。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用によって確認され得る。
薬物送達システムは、微粒子の溶液又は懸濁液として調製され得る。一態様において、担体は、標準的なシリンジによって標的組織に投与され得る（例えば、皮下、硝子体内、関節内、腱内、又は筋肉内への投与）微粒子へと形成される。このような粒子は、１μｍ～５０００μｍの平均粒径分布を有し得る。他の態様は、本明細書に記載される薬物送達システムが含侵された生分解性ガーゼ、メッシュ、又は縫合糸を含む。
ある実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システムの微粒子は、乳化重合、リソグラフィ、スピニング、成形、噴霧乾燥、ミリング、押し出し、機械的粉砕、又は当該技術分野において公知の同様の手順によって製造され得る。一実施形態において、本明細書に記載される薬物送達システム、担体ポリマー、又はヒドロゲルは、メッシュ又はスクリーンを通した押し出しによって微粒子に分割され得る。一態様において、押し出しは、所望の粒子分布サイズを達成するために、複数回及び／又は連続的により小さいメッシュに通して繰り返され得る。
一実施形態において、粒径を測定するためのレーザー回折に基づいて、薬物送達システムは、等張水性製剤緩衝液中で懸濁した際に、１μｍ～５０００μｍの平均粒径分布を有する。ある態様において、薬物送達システムは、等張緩衝液中で懸濁した際に、１０μｍ～１０００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液中で懸濁した際に、５０μｍ～５００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液中で懸濁した際に、１００μｍ～３００μｍの平均粒径分布を有する。別の態様において、薬物送達システムは、等張水性緩衝液に懸濁した際に、２００μｍ～３００μｍの平均粒径分布を有する。ある実施形態において、平均粒径分布は、約１０μｍ、約５０μｍ、約１００μｍ、約１５０μｍ、約２００μｍ、約２５０μｍ、約３００μｍ、約３５０μｍ、約４００μｍ、約４５０μｍ、約５００μｍ、約７５０μｍ、約１０００μｍ、約１５００μｍ、約２０００μｍ、約２５００μｍ、又は約５０００μｍを含む。
粒径は、当業者に公知の標準的な技術を用いて決定され得る。薬物送達システム粒子の粒径分布を測定するのに使用され得る例示的な技術としては、レーザー回折分析、光散乱（例えば、動的光散乱）、微細粒子画像解析、水簸、又はエアロゾル質量分析法が挙げられる。薬物送達システム粒子の試料は、乾燥試料又は湿潤試料として測定され得る。製造業者の使用説明書にしたがって、推奨される操作手順にしたがって、Ｃｉｌａｓ；Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｈｏｒｉｂａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；又はＷｙａｔｔ製の機器を含む、粒径を測定するための任意の市販の機器が使用され得る。
本明細書に記載される技術を用いて測定される粒径は、平均径、中央径（例えば、質量中央径）、及び粒径のモードによる正規分布又は非正規分布で導かれる直径として表され得る。粒径分布は、直径数分布、表面積分布、又は粒子体積分布として表され得る。粒径分布の平均は、体積平均直径（Ｄ［４，３］又はｄ４３）、平均表面積直径（Ｄ［３，２］又はｄ３２）又は平均数粒径（Ｄ［１，０］又はｄ１０）などの様々な方法で計算され、表され得る。粒径分布値が、測定方法及び分布の表し方に応じて変化するため、異なる平均粒径分布の比較は、正確な比較を行うために、同じ方法によって計算されなければならない。例えば、体積平均直径の測定及び計算値を有する試料は、理想的には、同じ条件下で同じ測定機器を用いて測定された、体積平均直径の測定及び計算値を有する第２の試料と比較されなければならない。したがって、本明細書に記載される特定の粒径分布は、粒径分布（例えば、直径数分布、表面積分布、又は粒子体積分布）を測定又は計算するためのいずれか１つのタイプの方法に限定されることは意図されず、本明細書に記載される粒径を測定する各方法について粒径値及びその分布を示すことが意図される。
一実施形態において、薬物送達システムは、０．６ｍｍ未満の内径（例えば、２０ゲージ）の針を通した、好ましくは、０．３ｍｍ未満の内径（例えば、２５ゲージ）の針を通した、より好ましくは、０．２５ｍｍ未満の内径（例えば、２７ゲージ）の針を通した、さらにより好ましくは、０．２ｍｍ未満の内径（例えば、２８ゲージ）の針を通した、最も好ましくは、０．１６ｍｍ未満の内径（例えば、３０ゲージ）の針を通した注射によって投与され得る。例えば、１００μｍ～３００μｍの粒径分布の薬物送達システムが注射される場合、２０ゲージ針が、送達のために最適であり得る。しかしながら、粒子形態は可撓性であるため、薬物送達システム粒径より狭い針のサイズが、首尾よく使用され得る。
「注射によって投与され得る」、「注射用」、又は「注射可能性（ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ）」という語句及び用語は、特定の濃度（ｗ／ｖ）及び特定の温度で、液体中で膨潤する本明細書に記載される薬物送達システムを含むシリンジのプランジャに加えられる特定の力、このようなシリンジの出口に接続される所与の内径の針、及び針を通してシリンジから特定の体積の薬物送達システムを押し出すのに必要とされる時間などの要因の組合せを指す。
一実施形態において、注射可能性の測定は、約０．１％～約２０％（ｗ／ｖ）（規定のパーセンテージ範囲内の全ての整数を含む）の濃度になるまでＰＢＳ又は生理食塩水中で懸濁された薬物送達システムについて行われる。
結果として、薬物送達システムは、放出される薬物Ｄ－Ｈに関して制御された放出速度の有益な効果を示す。好ましくは、持続放出速度が得られる。持続放出は、それぞれの本明細書に記載される薬物送達システムの投与間隔が、薬物送達システムの非存在下での薬物の投与と比較して延長されることを意味する。例えば、一般的に１日に１回又は数回投与される薬物に基づく薬物送達システムは、少なくとも３日間、少なくとも１週間、少なくとも１か月、数か月、又は数年間にわたって治療的に有効なレベルを提供する。
本明細書に記載される別の実施形態は、本明細書に記載される薬物送達システムの医薬組成物である。医薬組成物は、以下のものなどの１つ以上の賦形剤を含み得る：
（ｉ）緩衝剤：ｐＨを所望の範囲内で維持するための生理学的に許容できる緩衝剤、例えば、リン酸ナトリウム、重炭酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩及び酢酸塩、硫酸塩、硝酸塩、塩化物、ピルビン酸塩。Ｍｇ（ＯＨ）２又はＺｎＣＯ３などの制酸薬も使用され得る。緩衝能力は、ｐＨ安定性に最も感受性の条件に一致するように調整され得る。
（ｉｉ）等張性調節剤：注射デポーでの浸透圧差に起因する細胞損傷から生じ得る疼痛を最小限に抑えるためのもの。グリセリン及び塩化ナトリウムが例である。有効濃度は、血清についての２８５～３１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの仮定モル浸透圧濃度を用いて浸透圧法によって決定され得る。
（ｉｉｉ）保存剤及び／又は抗菌剤：複数回投与用非経口製剤は、注射により感染する対象のリスクを最小限に抑えるのに十分な濃度の保存剤の添加を必要とすることがあり、対応する規制要件は確立されている。典型的な保存剤としては、ｍ－クレゾール、フェノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸、クロロクレゾール、及び塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
（ｉｖ）安定剤：安定化は、タンパク質安定化力の強化によって、変性状態の不安定化によって、又はタンパク質への賦形剤の直接の結合によって達成される。安定剤は、アミノ酸、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グリシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、糖、例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ポリオール、例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、塩、例えば、リン酸カリウム、硫酸ナトリウム、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、ヘキサホスフェート、リガンド、例えば、二価金属イオン（亜鉛、カルシウムなど）、他の塩又は有機分子、例えば、フェノール誘導体であり得る。さらに、オリゴマー又はポリマー、例えば、シクロデキストリン、デキストラン、デンドリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、プロタミン、若しくはヒト血清アルブミンが使用され得る。
（ｖ）抗吸着剤：主に、イオン性若しくは非イオン性界面活性剤又は他のタンパク質又は可溶性ポリマー、例えば、ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８）、ＰＥＧドデシルエーテル（Ｂｒｉｊ ３５）、ポリソルベート２０及び８０、デキストラン、ポリエチレングリコール、ＰＥＧ－ポリヒスチジン、ＢＳＡ及びＨＳＡ並びにゼラチンが、組成物の容器の内面を被覆するか又は競合的に吸着するために使用される。賦形剤の選択される濃度及びタイプは、回避されるべき作用に応じて決まるが、典型的に、ＣＭＣ値の直ぐ上で界面活性剤の単層が界面に形成される。
（ｖｉ）凍結乾燥又は凍結保護剤：凍結又は噴霧乾燥中、賦形剤は、水素結合破壊及び水分除去に起因する不安定効果を中和し得る。このために、糖及びポリオールが使用され得るが、対応するプラスの効果が、界面活性剤、アミノ酸、非水性溶媒、及び他のペプチドについても観察されている。トレハロースは、水分に誘発される凝集を低減するのに特に効率的であり、水へのタンパク質疎水性基の曝露に起因する可能性がある熱安定性も改善する。マンニトール及びスクロースも、単独の凍結乾燥／凍結保護剤として、又はマンニトール又はスクロースのより高い比率が凍結乾燥ケークの物理的安定性を促進することが知られている場合に互いに組み合わせて使用され得る。マンニトールはまた、トレハロースと組み合わされ得る。トレハロースはまた、ソルビトールと組み合わされ得、又はソルビトールが、単独の保護剤として使用され得る。デンプン又はデンプン誘導体も使用され得る。
（ｖｉｉ）酸化保護剤：酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、エクトイン、メチオニン、グルタチオン、モノチオグリセロール、モリン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、キレート剤、例えば、クエン酸、ＥＤＴＡ、ヘキサホスフェート、チオグリコール酸。
（ｖｉｉｉ）増粘剤又は粘度増強剤：バイアル及びシリンジ中で粒子が沈降するのを遅延させ、粒子の混合及び再懸濁を容易にし、懸濁液を容易に注射できる（すなわち、シリンジプランジャに対して小さい力で）ようにするために使用される。好適な増粘剤又は粘度増強剤は、例えば、カルボマー増粘剤、例えばＣａｒｂｏｐｏｌ ９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ Ｕｌｔｒｅｚ １０、セルロース誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース、ＨＰＭＣ）又はジエチルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥ又はＤＥＡＥ－Ｃ）、コロイド状ケイ酸マグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）又はケイ酸ナトリウム、ヒドロキシアパタイトゲル、リン酸三カルシウムゲル、キサンタン、カラギーナン、例えばＳａｔｉａｇｕｍ ＵＴＣ ３０、脂肪族ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（Ｄ，Ｌ－又はＬ－乳酸）（ＰＬＡ）及びポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）及びそれらのコポリマー（ＰＬＧＡ）、Ｄ，Ｌ－ラクチド、グリコリド及びカプロラクトンのターポリマー、ポロキサマー、ポリ（オキシエチレン）－ポリ（オキシプロピレン）－ポリ（オキシエチレン）のトリブロック（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ．（商標））を構成するための親水性ポリ（オキシエチレン）ブロック及び疎水性ポリ（オキシプロピレン）ブロック、ポリエーテルエステルコポリマー、例えばポリエチレングリコールテレフタレート／ポリブチレンテレフタレートコポリマー、イソ酪酸酢酸スクロース（ＳＡＩＢ）、デキストラン又はそれらの誘導体、デキストラン及びＰＥＧの組合せ、ポリジメチルシロキサン、コラーゲン、キトサン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）及び誘導体、ポリアルキルイミド、ポリ（アクリルアミド－コ－ジアリルジメチルアンモニウム（ＤＡＤＭＡ））、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、例えばデルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロナン、疎水性Ａ－ブロック、例えばポリラクチド（ＰＬＡ）又はポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）と、親水性Ｂ－ブロック、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリビニルピロリドンとから構成されるＡＢＡトリブロック又はＡＢブロックコポリマーである。このようなブロックコポリマー並びに上記のポロキサマーは、逆熱ゲル化挙動を示し得る（投与を容易にするために室温で流体状態であり、注射後に体温でのゾル－ゲル転移温度超でゲル状態である）。
（ｉｘ）拡散剤：結合組織の細胞間隙に見られる、限定はされないが、ヒアルロン酸、多糖などの間質腔中の細胞外基質の成分の加水分解によって、結合組織の浸透性を調節する。限定はされないが、ヒアルロニダーゼなどの展着剤は、細胞外基質の粘度を一時的に低下させ、注入された薬物の拡散を促進する。
（ｘ）他の助剤：例えば湿潤剤、粘度調整剤、抗生物質、ヒアルロニダーゼ。塩酸及び水酸化ナトリウムなどの酸及び塩基は、製造の際のｐＨ調整に必要な助剤である。
薬物送達システムは、液体、懸濁液として、又は乾燥組成物として提供され得る。
一実施形態において、薬物送達システムは、乾燥組成物である。好適な乾燥方法は、例えば、噴霧乾燥及び凍結乾燥（フリーズドライ）である。一態様において、薬物送達システムは、凍結乾燥によって乾燥される。
一実施形態において、薬物送達システムは、１回の適用で少なくとも１２時間にわたって治療有効量の生物学的活性薬剤を提供するのに十分に組成物中で投与される。一態様において、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、６か月、９か月、１年間、２年間、３年間、４年間、或いはより長い期間にわたって、薬物送達システムの１回の適用で十分である。
一実施形態において、薬物送達システムは、単回投与として提供され、これは、それを供給する容器が１回の薬剤用量を含むことを意味する。
別の実施形態において、組成物は、複数回投与組成物として提供され、これは、それが２回以上の治療用量を含むことを意味する。好ましくは、複数回投与組成物は、少なくとも２回の用量を含む。このような複数回投与薬物送達システムは、それを必要とする異なる対象に使用され得るか、又は１人の対象に使用することが意図され、残りの用量は、第１の用量の適用後、必要になるまで貯蔵される。
別の実施形態において、薬物送達システムは、１つ以上の容器に含まれる。液体又は懸濁液組成物については、容器は、好ましくは、シングルチャンバシリンジである。乾燥組成物については、好ましくは、容器は、デュアルチャンバシリンジである。乾燥組成物が、デュアルチャンバシリンジの第１のチャンバ中に提供され、再構成溶液が、デュアルチャンバシリンジの第２のチャンバ中に提供される。
乾燥薬物送達システムを、それを必要とする対象に適用する前に、乾燥組成物は、再構成される。再構成は、バイアル、シリンジ、デュアルチャンバシリンジ、アンプル、及びカートリッジなどの、乾燥薬物送達システムが提供される容器中で行われ得る。再構成は、所定の量の再構成溶液を、乾燥組成物に加えることによって行われる。再構成溶液は、滅菌液、例えばリン酸緩衝生理食塩水、等張食塩水、注射用蒸留水、又は他の緩衝液であり、これらは、保存剤及び／又は例えば、ベンジルアルコール及びクレゾールなどの抗菌剤などのさらなる賦形剤を含有し得る。好ましくは、再構成溶液は、滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は生理食塩水である。或いは、再構成溶液は、注射用滅菌水である。
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む、再構成された組成物を調製する方法であって、組成物を、ある体積の再構成ビヒクルと接触させる工程を含む方法である。次に、再構成された薬物送達システムは、注射又は他の経路によって投与され得る。
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、再構成ビヒクル、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む、再構成された組成物である。
別の実施形態は、治療有効量の薬物送達システム、及び任意選択的に１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む溶液又は懸濁液を含むプレフィルドシリンジである。一態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ～約５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。一態様において、シリンジに、約０．０５ｍＬ～約５ｍＬ、約１ｍＬ～約２ｍＬ、約０．１ｍＬ～約０．１５ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．５ｍＬの間、約０．１５ｍＬ～約０．１７５ｍＬ、又は約０．５～約５ｍＬが充填される。一実施形態において、シリンジに、０．１６５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。ある態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、又は約５ｍＬの本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。シリンジ及び針内の「デッドスペース」に起因する損失を考慮して、患者に投与されるべき所望の用量より多くシリンジに充填されることが多い。シリンジが患者に注射できる状態になるように医師によって準備される場合も、所定の量の損失があり得る。
一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載される薬物送達システムの注射の経路に応じて約０．０１ｍＬ～約５ｍＬ（例えば、約０．０１ｍＬ～約０．１ｍＬ、約０．１ｍＬ～約０．５ｍＬ、約０．２ｍＬ～約２ｍＬ、約０．５ｍＬ～約５ｍＬ、又は約１ｍＬ～約５ｍＬ）の投与体積（すなわち、患者への送達を意図される薬剤の体積）が充填される。関節内注射を意図される一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように１ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．０５ｍＬ～約５．０ｍＬの投与体積が充填される。皮下注射を意図される一実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように０．１ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．１ｍＬ～約５．０ｍＬの投与体積が充填される。他の経路による注射を意図される他の実施形態において、シリンジに、本明細書に記載されるように０．１ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬの薬物濃度を有する薬物送達システム溶液又は懸濁液の約０．０１ｍＬ～約５．０ｍＬの投与体積が充填される。ある態様において、シリンジに、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬ、約１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．７５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、又は約５ｍＬの、それを必要とする患者への送達用の本明細書に記載される薬物送達システムが充填される。
シリンジが薬剤溶液を含む際、出口が、薬剤の滅菌状態を維持するために可逆的に密封され得る。この密封は、ルアーロック又は不正開封防止シールなどの、当該技術分野において公知のような密封デバイスによって達成され得る。
別の実施形態は、本明細書に記載される１つ以上の薬物送達システムの溶液又は懸濁液を含む１つ以上のプレフィルドシリンジを含むキットである。一実施形態において、このようなキットは、ブリスターパック又は密封スリーブ中に本明細書に記載される薬物送達システムを含むプレフィルドシリンジを含む。ブリスターパック又はスリーブは、内部が滅菌状態であり得る。一態様において、本明細書に記載されるプレフィルドシリンジは、滅菌、例えば最終滅菌を行う前に、このようなブリスターパック又はスリーブの内部に入れられ得る。
このようなキットは、本明細書に記載される薬物送達システムの投与のための１つ以上の針をさらに含み得る。このようなキットは、使用説明書、薬物ラベル、禁忌、警告、又は他の関連情報をさらに含み得る。本明細書に記載される一実施形態は、ブリスターパック内に含まれる本明細書に記載される１つ以上の薬物送達システムを含む１つ以上のプレフィルドシリンジ、針、及び任意選択的に、投与のための使用説明書、薬物ラベル、禁忌、警告、又は他の関連情報を含む、カートン又はパッケージである。
最終滅菌プロセスが、シリンジを滅菌するのに使用されてもよく、このようなプロセスは、エチレンオキシド又は過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）滅菌プロセスなどの公知のプロセスを使用し得る。シリンジとともに使用される針は、本明細書に記載されるキットと同様に、同じ方法によって滅菌され得る。一態様において、シリンジの外側が滅菌状態になるまで、パッケージが、滅菌に曝される。このようなプロセスの後、シリンジの外面は、最大で６か月、９か月、１２か月、１５か月、１８か月、２４か月以上にわたって（そのブリスターパック中で）滅菌状態に保たれ得る。したがって、一実施形態において、本明細書に記載されるプレフィルドシリンジ（そのブリスターパック中で）は、最大で６か月、９か月、１２か月、１５か月、１８か月、２４か月、或いはそれより長い貯蔵寿命を有し得る。一実施形態において、１００万分の１未満のシリンジが、１８か月の貯蔵後にシリンジの外側に検出可能な微生物の存在を有する。一態様において、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０－６の無菌性保証水準（Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ Ａｓｓｕｒａｎｃｅ Ｌｅｖｅｌ）を有するエチレンオキシドを用いて滅菌されている。別の態様において、プレフィルドシリンジは、少なくとも１０－６の無菌性保証水準を有する過酸化水素を用いて滅菌されている。かなりの量の滅菌ガスが、シリンジの可変体積チャンバに入ってはならない。「かなりの量」という用語は、本明細書において使用される際、可変体積チャンバ内の薬物送達システム溶液又は懸濁液の許容できない変性を引き起こし得るガスの量を指す。一実施形態において、滅菌プロセスは、薬物送達システムの≦１０％（好ましくは、≦５％、≦３％、≦１％）のアルキル化を引き起こす。一実施形態において、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを用いて滅菌されているが、シリンジの外面は、≦１ｐｐｍ、好ましくは、≦０．２ｐｐｍのエチレンオキシド残渣を有する。一実施形態において、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を用いて滅菌されているが、シリンジの外面は、≦１ｐｐｍ、好ましくは、≦０．２ｐｐｍの過酸化水素残渣を有する。別の実施形態において、プレフィルドシリンジは、エチレンオキシドを用いて滅菌されているが、シリンジの外側及びブリスターパックの内側に見られる総エチレンオキシド残渣は、≦０．１ｍｇである。別の実施形態において、プレフィルドシリンジは、過酸化水素を用いて滅菌されているが、シリンジの外側及びブリスターパックの内側に見られる総過酸化水素残渣は、≦０．１ｍｇである。
別の態様は、パーツのキットである。液体及び懸濁液組成物については、投与デバイスが単に皮下シリンジである場合、キットは、シリンジ、針及びシリンジとともに使用するための薬物送達システム組成物を含む容器を含み得る。乾燥組成物の場合、容器は、乾燥薬物送達システム組成物を含む１つのチャンバ、及び再構成溶液を含む第２のチャンバを有し得る。一実施形態において、注射デバイスは、使用の際、容器内の液体若しくは懸濁液又は再構成された乾燥組成物注射デバイスの出口と流体連通するように、薬物送達システム組成物を含む別個の容器が注射デバイスと係合し得るように構成された皮下シリンジである。投与デバイスの例としては、限定はされないが、皮下シリンジ及びペンインジェクタデバイスが挙げられる。特に好ましい注射デバイスは、ペンインジェクタであり、その場合、容器は、カートリッジ、好ましくは、使い捨てカートリッジである。
別の実施形態は、針、及び薬物送達システム組成物を含む容器を含み、任意選択的に、再構成溶液をさらに含むキットを含み、容器は、針とともに使用するように構成されている。一態様において、容器は、プレフィルドシリンジである。別の態様において、容器は、デュアルチャンバシリンジである。
別の実施形態は、ペンインジェクタデバイスとともに使用するための、本明細書において上述される薬物送達システムの組成物を含むカートリッジである。カートリッジは、単回用量又は複数回用量の薬物送達システムを含み得る。
別の実施形態において、薬物送達システム溶液又は懸濁液は、薬物送達システム及び１つ以上の賦形剤、及びさらに他の生物学的活性薬剤を、それらの遊離形態で又は薬物として又はＰＥＧ化薬物若しくはヒドロゲル結合薬物など、他の薬物送達システムと組み合わせて含む。一態様において、このようなさらなる１つ以上の生物学的活性薬剤は、遊離形態薬物又は第２の薬物送達システムである。
別の実施形態において、１つ以上の薬物送達システムは、同時に投与され、各薬物送達システムは、別個の又は関連する生物学的活性のいずれかを有する。
代替的な実施形態において、薬物送達システムは、薬物送達システムがそれを必要とする対象にまず投与された後、第２の化合物の投与が続くように、第２の生物学的活性化合物と組み合わされる。或いは、薬物送達システム組成物は、別の化合物が同じ対象に投与された後、それを必要とする対象に投与される。
別の実施形態は、薬剤として使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
別の実施形態は、筋骨格系疾患の治療に使用するための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩である。
別の実施形態は、筋骨格系疾患の治療のための薬剤の製造のための、式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒを含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の使用である。
別の実施形態は、薬物送達システム、又は薬物送達システムから放出される生物学的活性部分によって治療され得る疾病又は疾患を治療又は予防する方法に使用するための医薬組成物である。
別の実施形態は、薬物送達システムの溶液又は懸濁液組成物を製造する方法である。一実施形態において、このような組成物は、
（ｉ）薬物送達システムを１つ以上の賦形剤と混合し；
（ｉｉ）単回又は複数回用量に相当する量の液体又は懸濁液組成物を好適な容器中に移し；
（ｉｉｉ）容器を密封する
ことによって作製される。
別の実施形態は、薬物送達システムの乾燥組成物を製造する方法である。一実施形態において、このような組成物は、
（ｉ）薬物送達システムを１つ以上の賦形剤と混合し；
（ｉｉ）単回又は複数回用量に相当する量を好適な容器中に移し；
（ｉｉｉ）前記容器中の組成物を乾燥させ；
（ｉｖ）容器を密封する
ことによって作製される。
好適な容器は、バイアル、シリンジ、デュアルチャンバシリンジ、アンプル、及びカートリッジである。
別の実施形態は、上に定義される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩の合成のための方法である。薬物送達システム又は薬物送達システムの前駆体は、公知の方法によって、又は後述される一連の反応にしたがって調製され得る。薬物送達システムの調製（合成）又はその手順に使用される出発材料は、公知であるか若しくは市販されており、又は公知の方法によって若しくは後述されるように調製され得る。
本明細書に記載される組成物、方法、及び応用に対する好適な変更及び改変が、その任意の実施形態又は態様の範囲から逸脱せずに行われ得ることが、関連技術の当業者に容易に明らかになるであろう。提供される組成物及び方法は、例示的なものであり、記載される実施形態のいずれかの範囲を限定することは意図されていない。本明細書に開示される様々な実施形態、態様、及び選択肢の全ては、あらゆる形態で又は反復して組み合わされ得る。本明細書に記載される組成物、製剤、方法、及びプロセスの範囲は、本明細書に記載される実施形態、態様、選択肢、例、及び選好の全ての実際の又は潜在的な組合せを含む。
Figure 0007336513000090
Figure 0007336513000091
Figure 0007336513000092
Figure 0007336513000093
方法
いくつかの以下の実施例に使用される（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート
Figure 0007336513000094
の合成が、Ａ．Ｍ．Ｊａｗａｌｅｋａｒ，ｅｔ ａｌ；Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０１３，１８，７３４６－７３６３によって記載された。
いくつかの以下の実施例に使用される（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート
Figure 0007336513000095
の合成が、Ｊ．Ｄｏｍｍｅｒｈｏｌｔ，ｅｔ ａｌ；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１０，４９，９４２２－９４２５によって記載された。
本明細書において合成される際に特に説明されていない全ての他の中間体及び試薬は、市販されており、供給されたままの状態で使用した。
ＬＣＭＳ方法
方法１
カラムＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ ３．５μｍ ３．０×３０ｍｍ；カラム温度４０℃；流量２．０ｍＬ／分；停止時間２．２０分；ｐＨ２．２；溶離剤Ａ１ 水中０．０５％のＴＦＡ；溶離剤Ｂ１ アセトニトリル；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９５：５；１．７０／５：９５；２．００／５：９５；２．１０／９５：５。
方法２
カラムＡｃＱｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ ２．１×３０ｍｍ；カラム温度５０℃；流量１．０ｍＬ／分；停止時間２．００分；ｐＨ２．６；溶離剤Ａ１ 水中０．１％のギ酸；溶離剤Ｂ１ アセトニトリル中０．１％のギ酸；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）
０．００／９８：２；０．１０／９８：２；１．５０／２：９８；１．８０／２：９８；１．９０／９８：２；２．００／９８：２。
方法３
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００Ａ（２．６μｍ １００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／５、１／３０、３／９５、４／９５、４．１／５、６／５。
方法４
カラム：ＡｃＱｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ ２．１×３０ｍｍ；カラム温度５０℃；流量１．０ｍＬ／分；停止時間：２．００分；ｐＨ２．６；溶離剤Ａ１ 水中０．１％のギ酸；溶離剤Ｂ１ アセトニトリル中０．１％のギ酸；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９８：２；０．１０／９８：２；１．５０／２：９８；１．８０／２：９８；１．９０／９８：２；２．００／９８：２。
方法５
カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ ３．５μｍ ３．０×３０ｍｍ；カラム温度４０℃；流量２．０ｍＬ／分；停止時間２．２０分；ｐＨ２．２；溶離剤Ａ１ 水中５ｍＭの水酸化アンモニウム；溶離剤Ｂ１ アセトニトリル；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）；０．００／９５：５；１．７０／５：９５；２．００／５：９５；２．１０／９５：５。
方法６
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００Ａ、（２．６μｍ １００×４．６０ｍｍ）；勾配／（時間（分）／％Ｂ）０／５、１／３０、３／９５、４／９５、４．１／５、６／５；移動相：水中０．１％のギ酸（Ａ）／アセトニトリル（Ｂ）；流量：１．４ｍＬ／分；カラム温度：４０℃。
方法７
カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ ＭＡＸ－ＲＰ １００Ａ Ｍｅｒｃｕｒｙ（２．５μｍ １００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／３０、０．５／３０、１．５／９５、２．４／９５、２．５／３０、３．０／３０。
方法８
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００Ａ（２．６μｍ １００×４．６ｍｍ）；移動相Ａ（水中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル）；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／５０、１／７０、２／１００、４／１００、４．１／５０、６／５０。ＥＳＩ－ＭＳデータを、Ａｃｑｕｉｔｙ Ｇ２ Ｘｅｖｏ－ＱＴＯＦ－ＭＳにおいて記録した。正イオン質量スペクトルを、ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアパッケージにおけるＭａｘＥｎｔ １プログラムを用いてデコンボリュートした。
方法９
カラム：Ａｃｃｌａｉｍ ＰｅｐＭａｐ Ｃ４、５μｍ、３００Å、（３００μｍ×１５ｃｍ）；移動相Ａ（水／アセトニトリル（９５／５％）中０．１％のギ酸）、Ｂ（アセトニトリル／イソプロパノール／水（４７．５／４７．５／５％）中０．１％のギ酸；勾配（時間（分）／％Ｂ）：０／５、２／５、１０／４０、１１／９５、１３／９５、１４／５、２０／５。試料を、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（５０／５０％）中で１／１００に希釈し、ＥＳＩ－ＭＳデータを、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００ ＣａｐＬＣに結合されたＬｕｍｏｓ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳシステムにおいて記録した。正イオン質量スペクトルを、ＢｉｏＰｈａｒｍａ Ｆｉｎｄｅｒ ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてデコンボリュートし、質量を記録した。
方法１０
カラムＡｃＱｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ Ｃ１８（１．８μｍ ２．１×５０ｍｍ）；カラム温度６０℃；流量１．０ｍＬ／分；停止時間２．００分；溶離剤Ａ１ 水中０．０５％のギ酸＋３．７５ｍＭの酢酸アンモニウム；溶離剤Ｂ１ アセトニトリル中０．０４％のギ酸；グラジエント時間（分）／％Ａ（溶離剤Ａ１）：％Ｂ（溶離剤Ｂ１）０．００／９５：５；１．４０／２：９８；１．８０／２：９８；１．９０／９５：５；２．００／９５：５。ＵＰＬＣ機器を、正及び負モードの両方でエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を用いた一段階四重極質量分析法に結合した。（Ｍ＋Ｈ）＋についてのデコンボリュートされたｍ／ｚを記録した。
実施例１
トレースレスリンカー
この実施例は、アミン含有薬物及び担体の両方にコンジュゲートされることが可能ないくつかのトレースレスリンカーの合成を説明している。
Figure 0007336513000096
トレースレスリンカーの合成
一般的な中間体：Ｌ－ＩＮＴ－１ｃ
Figure 0007336513000097
Ｌ－ＩＮＴ－１ｃ．１－（Ｂｏｃ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）ピペラジン
Figure 0007336513000098
２５０ｍＬのフラスコ中に、ｔｅｒｔ－ブチル２－（ヒドロキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレートＳＭ－２（５．８１ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、３－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸ＳＭ－１（５ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１００ｍＬ）を充填した。この懸濁液に、トリエチルアミン（９．３７ｍＬ、６７．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．６８６ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ．ＨＣｌ（６．４４ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。この後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。組み合わされた有機層を、１ＭのＨＣｌの溶液、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液及び最後に塩水で連続して洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレータ（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて減圧下で濃縮して、Ｌ－ＩＮＴ－１ｃ（８．７５ｇ、８３％の収率）を無色油として得た。この材料を、さらに精製せずに次の工程に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋；方法１０）ｍ／ｚ ４２２．５（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ７．４９－７．２７（ｍ，５Ｈ）、５．１５－４．９８（ｍ，２Ｈ）、４．５６－４．２７（ｍ，１Ｈ）、４．１９－３．８３（ｍ，３Ｈ）、３．６１－３．３７（ｍ，４Ｈ）、３．２９－２．５５（ｍ，５Ｈ）、１．４９（ｓ，９Ｈ）．
リンカー中間体Ｘｃ
Figure 0007336513000099
Ｘａ．１－（Ｂｏｃ）－２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）ピペラジン
Figure 0007336513000100
５００ｍＬのフラスコ中で、ジクロロメタン（１６０ｍＬ）中のＬ－ＩＮＴ－１ｃ（８．６ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の溶液を調製した。溶液を、氷浴を用いて０℃に冷却し、次に、トリエチルアミン（７．１１ｍＬ、５１．０ｍｍｏｌ）を加えた後、塩化アセチル（１．７４ｍＬ、２４．４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。この後、混合物を水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で連続して洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレータを用いて減圧下で濃縮して、Ｘａ（１０．６ｇ、９５％の収率）を黄色の油として得た。この材料を、さらに精製せずに次の工程に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋；方法１０）ｍ／ｚ ４６４．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ７．４８－７．２７（ｍ，５Ｈ）、５．１８－５．０１（ｍ，２Ｈ）、４．５４－３．８４（ｍ，６Ｈ）、３．４７－３．３６（ｍ，２Ｈ）、３．１９－２．５１（ｍ，５Ｈ）、２．３３－２．０１（ｍ，３Ｈ）、１．４９（ｓ，９Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
Ｘｂ．１－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）－３－（アセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000101
ジクロロメタン（１６０ｍＬ）中のＸａ（１０．６ｇ、１９．４４ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、トリフルオロ酢酸（２２．４６ｍＬ、２９２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。氷浴を除去し、溶液を室温で６時間撹拌した。この後、混合物を濃縮乾固させて、トリフルオロ酢酸塩Ｘｂを得て、それをさらに精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ３６４．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ７．５２－７．２２（ｍ，５Ｈ）、５．０９（ｓ，２Ｈ）、４．６２－４．０４（ｍ，４Ｈ）、３．７１－３．３８（ｍ，５Ｈ）、３．１７－２．５９（ｍ，４Ｈ）、２．２７－２．１０（ｍ，３Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
Ｘｃ．２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸ベンジルエステル
Figure 0007336513000102
２５０ｍＬのフラスコ中に、Ｘｂ（１６ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（７．５０ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１６０ｍＬ）を充填した。次に、２－ブロモ酢酸ベンジルＳＭ－３（４．２６ｍＬ、２７．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１５時間撹拌した。この後、反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。組み合わされた有機層を塩水で連続して洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレータを用いて減圧下で濃縮した。粗混合物を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ｉｓｏｌｅｒａ、ＲｅｄｉＳｅｐカラム：シリカ２２０ｇ、溶離剤Ａ：ジクロロメタン、溶離剤Ｂ：ジクロロメタン＋ＭｅＯＨ（９：１）、２０分で０～１００％のＢの勾配）によって精製して、混合物を得たが、それは十分な純度ではなかった。第２の精製を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ｉｓｏｌｅｒａ、ＲｅｄｉＳｅｐカラム：シリカＳＩ ＫＰ－ＮＨ ４４ｇ、溶離剤Ａ：シクロヘキサン、溶離剤Ｂ：酢酸エチル、２０分で０～１００％のＢの勾配）を用いて行って、Ｘｃ（６．５２ｇ、６３％の収率）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ５１２．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ７．４９－７．１５（ｍ，１０Ｈ）、５．１７（ｓ，２Ｈ）、５．０８（ｓ，２Ｈ）、４．１９－３．９６（ｍ，３Ｈ）、３．８２－３．５４（ｍ，３Ｈ）、３．４０（ｍ，２Ｈ）、３．２７－３．０８（ｍ，２Ｈ）、３．０６－２．９４（ｍ，１Ｈ）、２．８８－２．７３（ｍ，２Ｈ）、２．６９－２．５２（ｍ，２Ｈ）、１．９９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ、３Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
Ｘｄ．２－（１’－メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸ベンジルエステル
Figure 0007336513000103
Ｌ－ＩＮＴ－５ａ．１－（Ｂｏｃ）－２－（１’－メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）ピペラジン
Figure 0007336513000104
ジクロロメタン（２ｍＬ）中の１－メチルシクロプロパンカルボン酸ＳＭ－４（４７．５ｍｇ、０．４７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（９１ｍｇ、０．４７５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５８．０ｍｇ、０．４７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌し、Ｌ－ＩＮＴ－１ｃ（１００ｍｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。この後、反応混合物を、塩化アンモニウムの飽和溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。組み合わされた有機層を、無水硫酸マグネシウム上で連続して乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレータ（ｒｏｔａｖａｐ）を用いて濃縮乾固させた。粗残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ、カラム：ＲｅｄｉＳｅｐ ４ ｇ．溶離剤Ａ：ジクロロメタン、溶離剤Ｂ：ジクロロメタン／ＭｅＯＨ ８：２、２０分で０～１００％のＢの勾配）によって精製して、所望の化合物（９７ｍｇ、７７％の収率）を淡黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋；方法１０）ｍ／ｚ ５０４．２（Ｍ＋Ｈ）．
Ｘｄ．２－（１’－メチルシクロプロピルカルボニルオキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸ベンジルエステル
Figure 0007336513000105
Ｘｄを、Ｘｂ及びＸｃの合成について記載される一般的な方法にしたがって、Ｌ－ＩＮＴ－５ａから２工程で調製した。Ｌ－ＩＮＴ－５：ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法１０）：保持時間＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ５５２．４（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．４０－７．３０（ｍ，１０Ｈ）、７．１９－７．１７（ｍ，１Ｈ）、５．１４－５．０６（ｍ，２Ｈ）、５．０５－５．００（ｍ，２Ｈ）、４．０７－３．９７（ｍ，２Ｈ）、３．９１－３．７９（ｍ，１Ｈ）、３．６７－３．５６（ｍ，３Ｈ）、３．２３－３．１８（ｍ，２Ｈ）、３．１０－２．８８（ｍ，３Ｈ）、２．７８－２．５７（ｍ，３Ｈ）、２．４５－２．３９（ｍ，２Ｈ）、１．２０（ｍ，３Ｈ）、１．０８－１．０７（ｍ，２Ｈ）、０．７２－０．７１（ｍ，２Ｈ）．
トレースレスリンカー；Ｌ１－Ｌ７
Figure 0007336513000106
Ｌ－２ｂ：２－（アセトキシメチル）－４－（β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸、ビストリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000107
Ｘｃ（３ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１．０４ｍＬ、１３．４９ｍｍｏｌ）を加えた後、パラジウム炭素（０．６２４ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを連続して減圧下に置き、水素でバックフィルした。この操作を３回繰り返し、反応混合物を室温で１５時間撹拌した。この後、混合物を、ジクロロメタン／メタノール混合物（９：１、５０ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過した。Ｃｅｌｉｔｅをメタノール（５０ｍＬ）で注意深く洗浄し、組み合わされたろ液を減圧下で濃縮して、粗表題材料Ｌ－２ｂ（３．２ｇ、９５％の収率）を黄色がかった発泡体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ２８８．３（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．５０－４．１６（ｍ，３Ｈ）、４．１０－３．８２（ｍ，３Ｈ）、３．７２－３．３９（ｍ，４Ｈ）、３．２９－３．２０（ｍ，３Ｈ）、２．９２－２．７６（ｍ，２Ｈ）、２．１１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ、３Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
Ｌ２．２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシカルボニル）－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸
Figure 0007336513000108
粗Ｌ－２ｂ（２００ｍｇ、０．３４９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）及びアセトニトリル（３ｍＬ）に取り込んで、わずかに曇った混合物を得た。トリエチルアミン（０．１９５ｍＬ、１．３９７ｍｍｏｌ）及び（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（１１２ｍｇ、０．３８４ｍｍｏｌ）の添加により、溶液が得られ、それを１時間後に蒸発させた。粗材料に以下のいずれかを行った：（ｉ）６ｍＬの３：１のアセトニトリル：水に溶解させ、ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ ５μｍ １９×１５０ｍｍ；方法：３０ｍＬ／分の水中１５～３０％のアセトニトリルの１０分の勾配（１０ｍＭの水酸化アンモニウム））によって精製した。画分を蒸発させ、フラッシュを冷凍し、凍結乾燥させて、Ｌ２を得るか；又は（ｉｉ）Ｉｓｏｌｕｔｅに直接吸着させ、逆相クロマトグラフィー（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ、カラム：ＲｅｄｉＳｅｐ Ｃ１８ １５．５ ｇｏｌｄ、溶離剤Ａ：水、溶離剤Ｂ：アセトニトリル、２０分で１０～１００％のＢの勾配）によって精製して、凍結乾燥後にＬ２を得た。白色の粉末。ＵＰＬＣ－ＭＳ（方法１０）：保持時間＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ４６４．３（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．３１－４．１１（ｍ，４Ｈ）、４．０６－３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．８４－３．６４（ｍ，１Ｈ）、３．５５－３．３６（ｍ，５Ｈ）、３．２９－３．００（ｍ，２Ｈ）、２．９８－２．７４（ｍ，２Ｈ）、２．６６－２．５４（ｍ，２Ｈ）、２．３２ －２．１６（ｍ，６Ｈ）、２．１０－２．０３（ｍ，３Ｈ）、１．６９－１．５７（ｍ，２Ｈ）、１．４６－１．３５（ｍ，１Ｈ）、１．０３－０．８９（ｍ，２Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
表７に示される種は、Ｌ２の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000109
Figure 0007336513000110
Figure 0007336513000111
トレースレスリンカーＬ８．２－（２’－メトキシアセトキシメチル）－４－（６’－アジドヘキサノイル）－１－ピペラジン酢酸
Figure 0007336513000112
Ｌ－８ａ．１－（Ｂｏｃ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－（６’－アジドヘキサノイル）ピペラジン
Figure 0007336513000113
６－アジドヘキサン酸（７４３ｍｇ、４．７３ｍｍｏｌ）及びＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（１．０ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに量り入れ、ジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させた。５分後、固体ｔｅｒｔ－ブチル２－（ヒドロキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．９８ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．０ｍＬ、５．７３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で一晩貯蔵した。翌日、反応混合物を、１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、１ＭのＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、１ＭのＮａＯＨ（１×５０ｍＬ）、及び塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮して、Ｌ－８ａを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ３５６．３（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－８ｂ．１－（Ｂｏｃ）－２－（２’－メトキシアセトキシメチル）－４－（６’’－アジドヘキサノイル）ピペラジン
Figure 0007336513000114
Ｌ－８ａ（９５９ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコ中でジクロロメタン（１２ｍＬ）に溶解させた。撹拌子及びジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ、５．７３ｍｍｏｌ）、続いて２－メトキシアセチルクロリド（０．３２ｍＬ、３．５１ｍｍｏｌ）を加え、フラスコに蓋をした。反応物を室温で撹拌した。６時間後、１００μＬのさらなる２－メトキシアセチルクロリドを加えた。３０分後、反応混合物を９０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、１ＭのＨＣｌ（２×２５ｍＬ）及び塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を、ロータリーエバポレータ（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて濃縮した。生成物を、酢酸エチル：ヘプタン勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物含有画分を組み合わせて、濃縮して、Ｌ－８ｂを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝４２８．３（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－８ｃ．１－（６’－アジドヘキサノイル）－３－（２’’－メトキシアセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000115
Ｌ－８ｂ（８４６ｍｇ、１．９７９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ、１３０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。溶液を室温で撹拌した。１時間後、ロータリーエバポレータを用いて溶媒を除去し、生成物を減圧下で乾燥させて、Ｌ－８ｃを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ３２８．２（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－８ｄ．２－（２’－メトキシアセトキシメチル）－４－（６’’－アジドヘキサノイル）－１－ピペラジン酢酸ｔ－ブチルエステル
Figure 0007336513000116
Ｌ－８ｃ（４３９ｍｇ、０．９９４ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えたガラスバイアル中でジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させた。ブロモ酢酸ｔ－ブチル（０．２２０ｍＬ、１．４９１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．８６８ｍＬ、４．９７ｍｍｏｌ）を加え、バイアルに蓋をした。反応物を５０℃で一晩撹拌した。翌日、反応混合物を熱源から取り外し、翌日の精製まで－２０℃で貯蔵した。反応混合物を、ヘプタン：酢酸エチル勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィーによる抽出後処理を用いずに精製した。生成物含有画分を組み合わせて、濃縮して、Ｌ－８ｄを得た。ＭＳ（ＥＳＩ－）ｍ／ｚ＝４８６．５（Ｍ＋ホルメート）．
Ｌ８．２－（２’－メトキシアセトキシメチル）－４－（６’’－アジドヘキサノイル）－１－ピペラジン酢酸
Figure 0007336513000117
Ｌ－８ｄ（１５０ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）に溶解させ、反応物を室温で一晩撹拌した。翌日、溶液を、ロータリーエバポレータを用いて濃縮し、残渣を、４ｍＬのアセトニトリルに再溶解させた。溶液をろ過し、質量に基づく画分収集（以下の方法）を用いた分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、Ｌ８を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝３８６．５（Ｍ＋Ｈ）．分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８；粒径：５μｍ；カラムサイズ：３０×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：１０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．７分、１０～３０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／３．５分、３０～９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．５分（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及びＨ２Ｏ）；流量：７５ｍＬ／分；カラム温度：室温；収集ｍ／ｚ：＋３８５。
トレースレスリンカー：Ｌ９～Ｌ１１
Figure 0007336513000118
Ｌ－９ａ．２－（プロパノイルオキシメチル）－４－（Ｎ－Ｃｂｚ－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸、トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000119
Ｌ－ＩＮＴ－３（２５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ）で処理し、アルゴン下で、室温で６時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗Ｌ－９ａをトリフルオロ酢酸塩として得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．２６２分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ４３６．２（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－９ｂ．２－（プロパノイルオキシメチル）－４－（β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸
Figure 0007336513000120
Ｌ－９ａ（２５０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を、エタノール（５ｍＬ）に溶解させ、それに、１０％のパラジウム炭素（２５ｍｇ）を加えた。溶液を、６時間にわたって水素ガスのバルーン下で撹拌し、次に、エタノールで洗浄しながら、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過した。組み合わされたろ液を蒸発させて、化合物Ｌ－９ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．７７４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ３０２．２（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ９．
Figure 0007336513000121
０℃で酢酸エチル（５ｍＬ）中のＬ－９ｂ（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び５－アジドペンタン酸（５７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、ジイソプロピルエチルアミン（１０７ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及びプロピルホスホン酸無水物（酢酸エチル中５０％の溶液、１５８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を、アルゴン下で、室温で１６時間撹拌し、次に、水でクエンチし、蒸発させた。最初のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％のメタノール：ジクロロメタン）の後、分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ Ｃ－１８ ４．６×１５０ｍｍ；移動相Ａ＝：メタノール（１：１）水中０．０１％のＴＦＡ、移動相Ｂ＝アセトニトリル：メタノール（１：１）；時間＝０分：３０％のＢ；１分：７０％のＢ；６分：１００％のＢ；１ｍＬ／分）を行って、Ｌ９を得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ４２７．１（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ－ＮＭＲ（ＭｅＯＨ－ｄ４、ｐｐｍ）（全ての割り当ては一時的である）４．２３－４．１７（ｍ，２Ｈ）、４．１６－３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．７８－３．６２（ｍ，１Ｈ）、３．５４（ｓ，２Ｈ）、３．４６－３．４３（ｔ，Ｊ＝４、３Ｈ）、３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ）、３．１８－３．０５（ｍ，１Ｈ）、３．０３－２．７６（ｍ，２Ｈ）、２．６４－２．６１（ｔ，Ｊ＝８，２Ｈ）、２．４３－２．３６（ｍ，２Ｈ）、２．２４－２．２１（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、１．７５－１．５８（ｍ，４Ｈ）、１．１５－１．１２（ｔ，Ｊ＝８、３Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
表８に示される種は、Ｌ－９：
Figure 0007336513000122
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000123
トレースレスリンカー：Ｌ１２及びＬ１３
Figure 0007336513000124
Ｌ－１２ａ．１－（Ｂｏｃ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－（Ｎ－マレオイル－β－アラニル）ピペラジン
Figure 0007336513000125
ｔｅｒｔ－ブチル２－（ヒドロキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２００ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン（３５９ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４２２ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃で１５分間撹拌した。３－マレイミドプロピオン酸（１８７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、次に、反応物を、アルゴン下で、室温で１２時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、２％のメタノール：酢酸エチルによる精製により、表題材料Ｌ－１２ａを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝２．８７分。
Ｌ－１２ｂ．１－（Ｂｏｃ）－２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－マレオイル－β－アラニル）ピペラジン
Figure 0007336513000126
アルゴン下で、０℃でジクロロメタン（４ｍＬ）中のＬ－１２ａ（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３３０ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）に、塩化アセチル（１２５ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次に、水で処理し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、２％のメタノール：酢酸エチル）によって精製して、表題材料Ｌ－１２ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．２分。
Ｌ－１２ｃ．１－（Ｎ－マレオイル－β－アラニル）－３－（アセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000127
Ｌ－１２ｂ（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ）で滴下して処理し、アルゴン下で、室温で３時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗表題材料Ｌ－１２ｃを得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝１．７０９分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ３１０（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ１２．２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－マレオイル－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸ｔ－ブチルエステル
Figure 0007336513000128
０℃でアセトニトリル（５ｍＬ）中のＬ－１２ｃ（１４０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１５６ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）に、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（１００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を１０～１５℃に温め、次に、アルゴン下で、室温で１２時間撹拌させた。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ Ｃ１８、２１．２×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ＝水、移動相Ｂ＝アセトニトリル；時間＝０分：３０％のＢ；２分：４０％のＢ；１０分：６０％のＢ）によって精製して、Ｌ１２を得た。ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．０８分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ４２４（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）６．６９（ｓ，２Ｈ）、４．２５－４．１４（ｍ，２Ｈ）、４．０９－３．９６（ｍ，２Ｈ）、３．８８－３．８３（ｔ，Ｊ＝９、２Ｈ）、３．６５－３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．４６－３．３３（ｍ，２Ｈ）、３．３１－３．１７（ｍ，２Ｈ）、３．０５－２．９８（ｍ ，２Ｈ）、２．８４－２．７５（ｍ，２Ｈ）、２．６８－２．６３（ｔ，Ｊ＝９，２Ｈ）、２．０９－２．０７（ｄ，Ｊ＝６、３Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）．
Ｌ１３は、Ｌ１２の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した：
Ｌ１３．２－（２’－メトキシアセトキシメチル）－４－（Ｎ－マレオイル－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸ｔ－ブチルエステル（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－４－（３－（マレイミジル）プロパノイル）ピペラジン－２－イル）メチル２－メトキシアセテート
Figure 0007336513000129
Ｌ１３．ＬＣＭＳ（方法６）：保持時間＝３．０４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ４５４．５（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）６．７０（ｓ，２Ｈ）、４．４０－４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．２０－４．１０（ｍ，１Ｈ）、４．０７－４．６０（ｄ，Ｊ＝４、２Ｈ）、４．０２－３．９４（ｍ，１Ｈ）、３．８７－３．８３（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、３．７０－３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．６８－３．６０（ｍ，１Ｈ），３．５８－３．５１（ｍ，１Ｈ）、３．４５（ｓ，３Ｈ）、３．４１－３．３９（ｄ，Ｊ＝８、１Ｈ）、３．３６－３．３２（ｓ，１Ｈ）、３．３２－３．２８（ｓ，１Ｈ）、３．１８－３．１０（ｍ，１Ｈ）、３．０４－２．９７（ｍ，１Ｈ）、２．８３－２．８１（ｔ，Ｊ＝４、１Ｈ）、２．７９－２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．６７－２．６４（ｔ，Ｊ＝８、２Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）．
トレースレスリンカー；Ｌ１４～Ｌ１６
Figure 0007336513000130
Ｌ１４ａ．１－（Ｂｏｃ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－（３’－（２’’－（２’’’－（２’’’’－（（Ｎ－Ｃｂｚ）－アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）ピペラジン
Figure 0007336513000131
０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解されたｔｅｒｔ－ブチル２－（ヒドロキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（１．０ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）に、ジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２．１０ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃で１５分間撹拌した。３－（２’－（２’’－（２’’’－（（Ｎ－Ｃｂｚ）－アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１．６４ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、アルゴン下で、室温で１６時間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１～４％のメタノール：ジクロロメタン）による精製により、表題材料Ｌ－１４ａを得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ５５４．３（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－１４ｂ．１－（Ｂｏｃ）－２－（アセトキシメチル）－４－（３’－（２’’－（２’’’－（２’’’’－（（Ｎ－Ｃｂｚ）－アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）ピペラジン
Figure 0007336513000132
０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解されたＬ－１４ａ（５００ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２２８ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）に、塩化アセチル（８３ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を、１６時間にわたってアルゴン下で、室温で撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、次に、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１～４％のメタノール：ジクロロメタン）によって精製して、表題材料Ｌ－１４ｂを得た。ＬＣＭＳ（方法７）：保持時間＝１．５４分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ５９５．８（Ｍ＋Ｈ）．
Ｌ－１４ｃ．１－（３’－（２’’－（２’’’－（２’’’’－（（Ｎ－Ｃｂｚ）－アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）－３－（アセトキシメチル）ピペラジン、トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007336513000133
Ｌ－１４ｂ（５００ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で滴下して処理し、アルゴン下で、室温で３時間撹拌した。反応物を蒸発させ、ペンタンで洗浄し、乾燥させて、粗表題材料Ｌ－１４ｃを得て、それを、さらなる精製又は分析なしで次の反応に持ち越した。
Ｌ１４．２－（アセトキシメチル）－４－（３’－（２’’－（２’’’－（２’’’’－（（Ｎ－Ｃｂｚ）－アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）－１－ピペラジン酢酸ｔ－ブチルエステル
Figure 0007336513000134
０℃でアセトニトリル（１０ｍＬ）中のＬ－１４ｃ（５００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４１８ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）に、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（２９５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を、アルゴン下で、室温で２０時間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮し、最初のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１～５％のメタノール：ジクロロメタン）、続いて分取ＨＰＬＣ（カラム：ｚｏｒｂａｘ ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ＝水中０．０１％のＴＦＡ、移動相Ｂ＝アセトニトリル：メタノール（１：１）、１ｍＬ／分；時間＝０分：３０％のＢ；１分：７０％のＢ；６分：１００％のＢ）によって精製して、Ｌ１４を得た。ＬＣＭＳ（方法５）：保持時間＝３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ６１０．３５（Ｍ＋Ｈ）．１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）７．３６－７．３１（ｍ，５Ｈ）、５．４９（ｓ，１Ｈ）、５．０９（ｓ，２Ｈ）、４．２６－４．１６（ｍ，１Ｈ）、４．０７－３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．７８－３．７４（ｔ，Ｊ＝６、２Ｈ）、３．６０－３．５３（ｍ，１１Ｈ）、３．３９－３．３２（ｍ，４Ｈ）、２．８４－２．７２（ｍ，２Ｈ）、２．６１－２．５７（ｔ，Ｊ＝３、２Ｈ）、２．０８－２．０６（ｄ，Ｊ＝６、２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）．
表９に示される種は、Ｌ１４：
Figure 0007336513000135
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000136
Figure 0007336513000137
Figure 0007336513000138
Figure 0007336513000139
Figure 0007336513000140
実施例２
生物学的活性部分とのトレースレスリンカーの付加物
この実施例は、同様に担体にコンジュゲートされることが可能な、いくつかのトレースレスリンカー－薬物付加物の合成を説明している。以下に示されるＤ１は、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド（配列番号１９）を含む。
Figure 0007336513000141
Figure 0007336513000142
付加物の合成
トレースレスリンカーによる生物学的活性部分のアシル化：
Ｌ２－ＮＨＳ．２－（アセトキシメチル）－４－（Ｎ－（（（１Ｒ’，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシカルボニル）－β－アラニル）－１－ピペラジン酢酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル
Figure 0007336513000143
Ｌ２（１６ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）を、ジメチルスルホキシド（０．８１８ｍＬ）に溶解させて、３８ｍＭの濃度に到達させた。トリエチルアミン（３．４６μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加えた後、炭酸Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジル（１１．９４ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加え、得られた透明の溶液を、アルゴン下で、室温で１時間撹拌した。溶液を、さらに精製せずにそのまま次の工程に使用した。ＬＣＭＳ（方法１０）：保持時間＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ５６１．４（Ｍ＋Ｈ）。
表１２中の種は、Ｌ２－ＮＨＳの合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000144
Ｌ２－Ｄ１（配列番号１９）（Ｌ２Ｄ１）
Figure 0007336513000145
ヒスチジン緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ５．８）又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中のＤ１（配列番号１９）（３０ｍＬ、９．６６ｍｍｏｌ）の１０ｍｇ／ｍＬの溶液に、ＤＭＳＯ（０．５０８ｍＬ、１９．３２ｍｍｏｌ）中のＬ２－ＮＨＳの３８ｍＭの溶液をゆっくりと加えた。反応混合物を激しくボルテックスし、次に、２００ｔｒ／分で２時間にわたって室温で振とうした。精製を、超遠心分離（Ａｍｉｃｏｎ ｆｉｌｔｅｒ、３ｋＤａのＭＷＣＯ、２０００ｒｃｆ、４５分、室温）によって行い、ヒスチジン緩衝液又は１×ＰＢＳ（３回）による洗浄により、残留小分子不純物を除去し、Ｌ２Ｄ１及び非修飾Ｄ１の混合物を得た。ＭＳ（方法９）デコンボリュートされたｍ／ｚ ２９９６９（Ｄ１、Ｍ＋Ｈ）；デコンボリュートされたｍ／ｚ ３０４１５（Ｌ２Ｄ１、Ｍ＋Ｈ、予測ＭＷ＝ＭＷ（Ｄ１）＋ ４４６）。
重要な分析パラメータは、（非修飾Ｄ１、ｎ＝０）：（モノアシル化Ｄ１、ｎ＝１）：（ポリアシル化Ｄ１、ｎ＞１）の比率の決定である。質量スペクトル中の様々な種についての相対ピーク高さの比較により、生成物の比率の推定を行うことが可能になる。
反応生成物の比率を推定するためのさらなる方法は、誘導体化反応生成物のＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）分析を用いて；誘導体化が、反応生成物の分離を達成するために必要とされる。
Ｌ２Ｄ１誘導体化反応
Figure 0007336513000146
Figure 0007336513000147
反応混合物（１０ｍｇ／ｍＬのＬ２Ｄ１溶液、０．０２０ｍＬ、０．０６０μｍｏｌ）からのアリコートを、Ｍｎ約５ｋＤａのメトキシ－ＰＥＧ－アジド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、６８９４７５、０．０１４ｍＬの、１×ＰＢＳ中１００ｍｇ／ｍＬの溶液、０．２８μｍｏｌ）で処理し、ボルテックスし、３７℃で３０分間振とうし、ＰＢＳ（０．０６６ｍＬ）で希釈した。
Ｌ２Ｄ１－誘導体の分析
ＳＥＣ：（機器：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ；カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬ（２８－９９０９－４４）；カラム温度：室温、流量：０．７５ｍＬ／分；注入量：１０μＬ；移動相：０．１０膜フィルタ（定組成）に通して予備ろ過される１／９のＰＢＳ／水；実行時間：４０分；検出波長：２１４ｎｍ）。（非修飾Ｄ１、ｎ＝０、保持時間＝２０．９０分）：（モノアシル化Ｄ１、ｎ＝１、保持時間＝１８．２３分）：（ビスアシル化Ｄ１、ｎ＝２、保持時間＝１６．６４分）＝［（ｎ＝０）：（ｎ＝１）：（ｎ＝２）］＝８７：１２：１の比率のＬ２Ｄ１－誘導体決定。
実施例３
ヒアルロン酸の官能化
この実施例は、官能化ヒアルロン酸の合成を説明し、官能化ヒアルロン酸は、それ自体が担体であってもよく、又は架橋部分と反応されて、ヒドロゲルを形成してもよい。
ヒアルロン酸中間体［ＨＡ－Ｎ３］の合成：
Figure 0007336513000148
ヒアルロン酸ナトリウム塩は、４０１．３Ｄａの繰返し単位分子量を有する、グルクロン酸及びＮ－アセチルガラクトサミンの繰返し二量体単位からなる直鎖状ポリマーである。この実施例において、報告されるヒアルロン酸のモルは、繰返し単位のモルを指し、ヒアルロン酸との反応に使用される試薬の当量は、ヒアルロン酸繰返し単位のモルに対して報告される。ポリマーの平均分子量は、ポリマー鎖当たりの繰返し単位の平均数を決定する。供給業者、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ＨＡ２００Ｋ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ）によって、２００ｋＤａの公称平均分子量を有するとラベル付けされたヒアルロン酸ナトリウム塩は、粘度測定によって決定した際に、バッチ間で１５１～３００ｋＤａの範囲で変動し得る。この実施例において、２００ｋＤａの仮定公称平均分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム塩のこのような分子は、約５００モノマー単位の平均長さを有するであろう。
［ＨＡ－Ｎ３］－２３％の合成
ヒアルロン酸、ナトリウム塩（公称平均分子量２００ｋＤ；２５０．１ｍｇ、０．６２３ｍｍｏｌ；Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，ＬＬＣ；製品番号ＨＡ２００Ｋ）の溶液を、２５ｍＬのＭＥＳ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ５．５）に完全に溶解させた。この溶液に、４－（４’，６’－ジメトキシ－１’，３’，５’－トリアジン－２’－イル）－４－メチルモルホリン－４－イウムクロリド（ＤＭＴＭＭ、２９５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、１．７１当量）を加えた後、５分後に、１１－アジド－３，６，９－トリオキサウンデカン－１－アミン（Ｎ３－ＰＥＧ３－ＮＨ２、１９６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を一晩撹拌し、次に、２５ｍＬの０．２５ＭのＮａＣｌ溶液で希釈し、タンジェンシャルフローろ過によって精製した。
タンジェンシャルフローろ過を、４００ｍＬの０．２５ＭのＮａＣｌ溶液、次に４００ｍＬの水で溶離しながら、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ製の３０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｖｉｖａｆｌｏｗ－５０Ｒ ｈｙｄｒｏｓａｒｔカートリッジを用いて行った。
生成物を急速冷凍し、凍結乾燥させて、表題材料［ＨＡ－Ｎ３］－２３％を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ ４．４５（ｂｓ、２Ｈ）、４．０－３．１（ｍ，１５．５Ｈ）、１．９５（ｓ，３Ｈ）．
ＤＯＳＹ－ＮＭＲ。一次元拡散秩序化ＮＭＲスペクトル（ＤＯＳＹ）を、５ｍｍのＤＣＨクライオプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ４００ＭＨｚ（１Ｈについて）機器において１つの傾斜磁場パルスシーケンス（ｓｔｅｇｐ１ｓ１ｄ）で刺激されたエコーを用いて収集した。拡散時間及び拡散グラジエント時間を、それぞれ５０ｍｓ及び４ｍｓに設定した。２つのスペクトルを、２％及び９５％に設定された勾配強度（ｇｐｚ６）で収集した。２つのスペクトルの比較は、溶媒ピークを別として差を示さず、これは、小分子不純物がポリマー中に存在しなかったことを示す。
Ｅｌｅｍ．Ａｎａｌ：Ｃ：４０．０５％：Ｈ：５．６７％；Ｎ：５．７０％。
［ＨＡ－Ｎ３］の置換度は、カルボキシレート部分が示されるアミドを得るために反応を起こした繰返し単位の％として定義される。元素分析を用いて、置換度を決定した。精製された試料の元素分析によって決定される［％Ｃ／％Ｎ］比が、下式に代入されて、置換度が得られる。ｙ＝［（％Ｃ）／（％Ｎ）］）である場合：
Figure 0007336513000149
この実施例において、［ＨＡ－Ｎ３］の置換度（ＤＳ）は２３％であった。
２３％のアジドリンカーで官能化されたこの２００ｋＤａヒアルロン酸は、［ＨＡ－Ｎ３］－２３％とラベル付けされる。
実施例の残りの部分では、Ｘ％のアジドリンカーで官能化された２００ｋＤａのヒアルロン酸が、［ＨＡ－Ｎ３］－Ｘ％とラベル付けされる。
表１３中の種は、［ＨＡ－Ｎ３］－２３％の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製し、特性評価した。本発明者らは、達成される置換度が、使用されるＤＭＴＭＭ試薬の所与のストックに左右され、特異的であり得ることを見出した。一般に、ＤＭＴＭＭの所与のストックでは、置換度は、使用されるＤＭＴＭＭの当量数が増加するにつれて増加し、置換度は、使用されるＤＭＴＭＭの当量数が減少するにつれて減少する。［ＨＡ－Ｎ３］中間体のいくつかは、タンジェンシャルフローろ過の代わりに透析によって精製された（［ＨＡ－Ｎ３］－２３％ｂ、［ＨＡ－Ｎ３］－３７％）。これらの場合、粗反応混合物を、再生されたセルロース透析膜（ＭＷＣＯ １～２５ｋＤ）中に充填し、透析溶液を数回交換しながら、０．２５Ｍ～１ＭのＮａＣｌに対して１～３日間透析し、続いて、同様に透析溶液を複数回交換しながら、脱イオン水に対して１～３日間透析した。完了したら、試料を透析管から取り出し、急速冷凍し、凍結乾燥させた。
Figure 0007336513000150
実施例４
ＰＥＧポリマー、ＸＬ－１－ＸＬ－１０の調製
この実施例は、他の官能化ポリマーと反応されて、ヒドロゲルを形成し得る架橋剤の合成を説明している。
ＰＥＧベースの架橋ポリマー
一般的な構造１．
Figure 0007336513000151
ある態様において、ｗが、２２、４５、９１、１３６、１８１、又は２２６であり得、それぞれ、約１ｋＤａ、約２ｋＤａ、約４ｋＤａ、約６ｋＤａ、約８ｋＤａ、又は約１０ｋＤａの公称平均分子量を有するＰＥＧに対応する。
一般的な構造２．
Figure 0007336513000152
Figure 0007336513000153
Figure 0007336513000154
ＸＬ－８の構造：
Figure 0007336513000155
出発ＰＥＧのＭＷ：Ｍｎ約１０，０００ｋＤａ。
ＰＥＧベースの架橋ポリマーの合成
置換度は、ＰＥＧ由来の架橋剤の重要なパラメータであり、所望の導入された官能基で置換されるＰＥＧ末端基のパーセンテージとして定義される。置換度を、ＰＥＧ末端基に特異的なメチレン基の積分を、導入された官能基に特異的なプロトンの積分と比較するために、１Ｈ－ＮＭＲを用いて決定した。ＸＬ－１～ＸＬ－６については、ＰＥＧ部分に特異的なメチレン基は、エステル又はカルバメートメチレン［－（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ２－］であり、これを、ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン部分におけるプロトンの積分と比較した。置換度＝（（１Ｈ－ＮＭＲによる導入された官能基のモル）／（１Ｈ－ＮＭＲによるＰＥＧ末端基のモル））×１００。
ＸＬ－１．ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］
Figure 0007336513000156
ＸＬ－１ａ．ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパノエート］
Figure 0007336513000157
３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸（１．１５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）及びＭｎ約２ｋＤａのＰＥＧ（３ｇ、１．５００ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。ジメチルアミノピリジン（０．０９２ｇ、０．７５０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ・ＨＣｌ（１．２１１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、室温で一晩撹拌した。粗生成物を、０～２０％のジクロロメタン：ジクロロメタン／メタノール（４：２）勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＬＳＤ検出器を用いる）によって精製した。生成物含有画分をプールし、濃縮乾固させて、ＸＬ－１ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ６．８３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．１６－４．０９（ｍ，４Ｈ）、３．６１－３．５６（ｍ，５Ｈ）、３．５１（ｓ，１８４Ｈ）、３．１５（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、４Ｈ）、２．４３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ、４Ｈ）、１．３７（ｓ，１８Ｈ）．
ＸＬ－１ｂ．ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（アミノ）プロパノエート］、ビス－トリフルオロ酢酸
Figure 0007336513000158
ＸＬ－１ａ（３．１２ｇ、１．３５７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３６ｍＬ）に溶解させた。トリフルオロ酢酸を加え（３６ｍＬ）、反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、ジエチルエーテルで連続して研和し、ろ過して取り除いた。この操作を３回繰り返し、得られた固体を減圧下で乾燥させて、ＸＬ－１ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．８０（ｓ，４Ｈ）、４．２４－４．１１（ｍ，４Ｈ）、３．７２－３．３２（ｍ，１８２Ｈ）、３．０９－２．９５（ｍ，４Ｈ）、２．６７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ、４Ｈ）．
ＸＬ－１－１．ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］
Figure 0007336513000159
ＸＬ－１ｂ（６００ｍｇ、０．２８６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（７ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（１．９９ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）を加えた後、（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（３３３ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、０～４０％のジクロロメタン：ジクロロメタン／メタノール（４：２）勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＬＳＤ検出器を用いる）によって直接精製した。生成物含有画分をプールし、濃縮乾固させて、ＸＬ－１－１を得た。貯蔵のために、ＸＬ－１－１を、冷凍庫に入れられるアセトニトリル（５０ｍｇ／ｍＬ）中の溶液として保存した。分析ＵＰＬＣ（方法Ｂ、以下を参照）：保持時間＝１．１９分。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．２３（ｍ，４Ｈ）、４．１４（ｍ，４Ｈ）、３．６４（ｂｒ ｓ，２１４Ｈ）、２．５５（ｍ，４Ｈ）、２．２２（ｍ，１２Ｈ）、１．６１（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）、０．９２（ｍ，４Ｈ）．
方法Ａ：ＣＡＤ検出器を用いた分析ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００ Ｃ１８；粒径：３．５μｍ；カラムサイズ：４．６×１００ｍｍ；溶離剤／勾配：２％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、２～９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１７．５分（０．０５％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：５０℃。
方法Ｂ：ＥＬＳＤ検出器を用いた分析ＵＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３；粒径：１．８μｍ；カラムサイズ：２．１×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：１．４分で５～９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．０４％のＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．０５％のＦＡ＋３．７５ｍＭのＡＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：６０℃。
方法Ｃ：ＣＡＤを用いた分析ＵＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＢＥＨ Ｃ１８；粒径：１．７μｍ；細孔径：１３０Å；カラムサイズ：２．１×５０ｍｍ；溶離剤／勾配：５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１．２分、５～９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１．８分（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：４５℃。
表１５中の種は、ＸＬ－１（ＸＬ－１－２を除く）：
Figure 0007336513000160
の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000161
ＰＥＧベースの架橋ポリマーの合成に使用される中間体：
Figure 0007336513000162
Figure 0007336513000163
ＸＬ－５．ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチルカルバモイル］
Figure 0007336513000164
Ｍｎ約２ｋＤａのＰＥＧジアミン塩酸塩（ＪｅｎＫｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３００ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．４１３ｍＬ、２．９６ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（３４５ｍｇ、１．１８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、ＥＬＳＤによる画分収集（以下の方法）を用いて分取逆相ＨＰＬＣによって直接精製した。生成物含有画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥させて、ＸＬ－５を得た。貯蔵のために、ＸＬ－５を、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、又はメタノール溶液として冷凍庫に保存した。分析ＨＰＬＣ－ＣＡＤ（以下の方法）：保持時間＝１１．８５分。ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．１４（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｂｒ ｓ，１８６Ｈ）、３．５４（ｍ，４Ｈ）、２．２２（ｍ，１２Ｈ）、１．６１（ｍ，４Ｈ）、１．３８（ｍ，２Ｈ）、０．９４（ｍ，４Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
分取ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８；粒径：５μｍ；カラムサイズ：１９×２５０ｍｍ；溶離剤／勾配：５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、５～９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１２．５分、９５％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／３分；流量：３０ｍＬ／分；カラム温度：室温。
分析ＨＰＬＣ－ＣＡＤ条件：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００ Ｃ１８；粒径：３．５μｍ；カラムサイズ：４．６×１００ｍｍ；溶離剤／勾配：２％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．５分、２～９８％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／１７．５分（０．０５％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ及び０．１％のＴＦＡを含有するＨ２Ｏ）；流量：１ｍＬ／分；カラム温度：５０℃。
ＸＬ－６．ＰＥＧ（１００００）－テトラ－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチルカルバモイル］
Figure 0007336513000165
Ｍｎ約１０ｋＤａの４アームＰＥＧアミン塩酸塩（ペンタエリトリトールコア、ＪｅｎＫｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、５００ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．５５４ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（１７５ｍｇ、０．６００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を、２ｋＤａのＭＷＣＯスペクトル／Ｐｏｒ ６再生セルロース透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，Ｉｎｃ．）を用いたメタノールに対する透析によって直接精製した。分析及びさらなる反応への利用のために、ＸＬ－６を、ロータリーエバポレータを用いた濃縮によって単離した。貯蔵のために、化合物を、メタノール溶液として室温で保存した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．１４（ｍ，８Ｈ）、３．６３（ｂｒ ｓ，９９５Ｈ）、２．２２（ｍ，２４Ｈ）、１．６１（ｍ，８Ｈ）、１．３８（ｍ，４Ｈ）、０．９４（ｍ，８Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
ＸＬ－８．
Figure 0007336513000166
Ｍｎ約１０ｋＤａの８アームＰＥＧアミン塩酸塩（ヘキサグリセロールコア、ＪｅｎＫｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８００ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（０．８８７ｍＬ、６．４０ｍｍｏｌ）、続いて（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（８０７ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を、ロータリーエバポレータを用いて濃縮し、次に、メタノールに溶解させ、２ｋＤａのＭＷＣＯスペクトル／Ｐｏｒ ６再生セルロース透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，Ｉｎｃ．）を用いたメタノールに対する透析によって精製した。分析及びさらなる反応への利用のために、ＸＬ－８を、ロータリーエバポレータを用いた濃縮によって単離したが、貯蔵のために、ＸＬ－８を、メタノール溶液として室温で保存した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．１４（ｍ，１６Ｈ）、３．６３（ｂｒ ｓ，９３５Ｈ）、２．２３（ｍ，４８Ｈ）、１．６１（ｍ，１６Ｈ）、１．３８（ｍ，８Ｈ）、０．９５（ｍ，１６Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
ＸＬ－１２．ＰＥＧ（４０００）－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（１－（（（（（１Ｒ，８Ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボキシレート）
Figure 0007336513000167
ＸＬ－１２ａ．ＰＥＧ（４０００）－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）、ビス（１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボキシレート）
Figure 0007336513000168
１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパンカルボン酸（２５２ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）及びＭｎ約４ｋＤａのＰＥＧ（１ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。ジメチルアミノピリジン（１５ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ・ＨＣｌ（１９２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、室温で一晩撹拌した。粗生成物を、０～１００％のヘプタン：ＥｔＯＡｃ、次に０～１００％のジクロロメタン：ジクロロメタン／メタノール（４：２）勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＬＳＤ検出器を用いる）によって精製した。生成物含有画分をプールし、濃縮乾固させて、ＸＬ－１２ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．５３（ｓ，２Ｈ）、４．０９（ｔ，４Ｈ）、３．５１（ｓ，４４６Ｈ）、３．３８－３．３５（ｍ，４Ｈ）、１．４１－１．３３（ｍ，１８Ｈ）、１．３０（ｄ，４Ｈ）、１．０３－０．９７（ｍ，４Ｈ）．
ＸＬ－１２ｂ．ＰＥＧ（４０００）－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（１－アミノシクロプロパン－１－カルボキシレート）、ビス－トリフルオロ酢酸
Figure 0007336513000169
ＸＬ－１２ａ（１．０３ｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解させた。トリフルオロ酢酸を加え（４ｍＬ）、反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をジエチルエーテルで連続して研和し、デカントして取り除いた。この操作を３回繰り返し、得られた固体を減圧下で乾燥させて、ＸＬ－１２ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７２（ｓ，４Ｈ）、４．３０－４．２０（ｍ，４Ｈ）、３．６７－３．６０（ｍ，４Ｈ）、３．５０（ｓ，４４３Ｈ）、１．４６－１．４１（ｍ，４Ｈ）、１．３６－１．３１（ｍ，４Ｈ）．
ＸＬ－１２．ＰＥＧ（４０００）－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（１－（（（（（１Ｒ，８Ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボキシレート）
Figure 0007336513000170
ＸＬ－１２ｂ（１．０４ｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解させた。トリエチルアミン（１．６６ｍＬ、１１．８９ｍｍｏｌ）を加えた後、（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（２７７ｍｇ、０．９５２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を、０～１００％のヘプタン：ＥｔＯＡｃ、次に０～１００％のジクロロメタン：ジクロロメタン／メタノール（４：２）勾配を用いたシリカにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＬＳＤ検出器を用いる）によって直接精製した。生成物含有画分をプールし、濃縮乾固させた。次に、固体をジクロロメタンに溶解させ、脱イオン水で洗浄した。有機層を相分離器上で乾燥させて、ＸＬ－１２を得た。貯蔵のため、ＸＬ－１２を、アセトニトリル（５０ｍｇ／ｍＬ）中の溶液として保存し、冷凍庫に入れた。分析ＵＰＬＣ（方法Ｂ、上記を参照）：保持時間＝１．２１分。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ４）δ ４．２５－４．１３（ｍ，８Ｈ）、３．６４（ｓ，４０１Ｈ）、２．３３－２．１０（ｍ，８Ｈ）、１．６７－１．５６（ｍ，４Ｈ）、１．５２－１．４７（ｍ，４Ｈ）、１．４４－１．３４（ｍ，２Ｈ）、１．１９－１．１１（ｍ，４Ｈ）、１．００－０．９１（ｍ，４Ｈ）．交換可能なプロトンは、ＭｅＯＤにおいて視認されない。
実施例５
この実施例は、適切に官能化されたポリマーを架橋剤と反応させることによって調製されたヒドロゲルの合成を説明している。
ヒアルロン酸ヒドロゲル：Ｈ１ｇの合成
Figure 0007336513000171
Figure 0007336513000172
［ＨＡ－Ｎ３］－１９％（６０ｍｇ、１３７μｍｏｌ、置換度＝１９％）を、１５ｍＬのチューブ中で１時間にわたって、室温で４．０ｍＬの滅菌した１×ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４に溶解させた。非置換カルボキシレートナトリウム塩繰返し二量体単位の分子量は、４０１．３Ｄａである。アジド化繰返し二量体単位のＭＷは、５７９．６Ｄａである。［ＨＡ－Ｎ３］－１９％のナトリウム塩形態の二量体単位の平均ＭＷは、４３５．２Ｄａ＝（（４０１．３×０．８１）＋（５７９．６×０．１９））である。ナトリウム塩二量体単位の平均ＭＷを用いて、繰返し二量体単位の総モルは１３７μｍｏｌであり、アジド化繰返し二量体単位のモル数は２６μｍｏｌである。
この溶液に、ＸＬ－１－１（０．２０５ｍＬ、２４７４ＤａのＭＷを仮定する４．１μｍｏｌの試薬、８．２０μｍｏｌの反応性官能基）の５０ｍｇ／ｍＬの溶液を加えた。これにより、［ＨＡ－Ｎ３］－１９％に対して３％ ｗ／ｖである溶液が得られ、６％の［ＨＡ－Ｎ３］－１９％繰返し単位が、ＸＬ－１－１］によって架橋されることが予測された（（８．２０μｍｏｌ［ＸＬ－１－１－反応性官能基］／１３７μｍｏｌ［ＨＡ－単位）×１００＝６％）。
混合物を短時間ボルテックスして混合し、次に、１０ｍＬのシリンジに分配し、それに蓋をし、一晩３７℃に保持して、Ｈ１ｇを得た。目視検査（内がえし試験（ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ ｔｅｓｔ））は、成功したゲル化を示した。
ヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子の調製
Ｈ１ｇ、２ｍＬを、１００メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに押し通して、５ｍＬのシリンジに入れて、粗いゲル粒子を得た。このシリンジに、１ｍＬの１×ＰＢＳを加えた後、ボルテックスして混合した。シリンジを６時間にわたって室温に保持して、ヒドロゲルを膨潤させた。これにより、［ＨＡ－Ｎ３］－１９％に対して１．５％である混合物が得られた。Ｈ１ｇの膨潤された粗いゲル粒子を、２００－メッシュステンレス鋼スクリーンディスクに２０回押し通して、微細なゲル粒子を最終生成物として得た。
表１７に列挙されたヒアルロン酸ベースのヒドロゲル（及び対応するヒドロゲル粒子）を、Ｈ１ｇと類似の方法で調製した。ヒドロゲルは、架橋反応において使用される［ＨＡ－Ｎ３］成分及びその濃度、並びに使用されるＰＥＧ架橋剤及び骨格ポリマーへの架橋を形成することが予測される程度（架橋％）によって定義される。
Figure 0007336513000173
実施例６
ヒドロゲル－薬物コンジュゲートの合成
この実施例は、薬物がトレースレスリンカーを介して担体にコンジュゲートされた、ヒドロゲル－薬物コンジュゲートの合成を説明している。
インビボ投与のために試料を調製する場合、蓋をされなかった材料又は溶液の全ての操作は、無菌条件下で、クリーンベンチ中で行った。使用された全ての消耗品は、事前に開封されておらず、「滅菌」とラベル付けされた。
Ｃ１－２（Ｈ１ｇ－Ｌ２Ｄ１）
Figure 0007336513000174
Figure 0007336513000175
Ｈ１ｇのヒドロゲル粒子懸濁液（１．０８ｇ、１５ｍｇ／ｍＬ、１９ｍＭの総二量体繰返し単位）を、Ｌ２Ｄ１の溶液（７ｍＬの、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液（ｐＨ＝５．８）中１３．３３ｍｇ／ｍＬの溶液）で処理し、ボルテックスし、３０℃で一晩振とうした（６００ｒｐｍ）。反応管を遠心分離し（１５００ｒｃｆ、５分）、上清を、針及びシリンジを用いて管から除去した。新鮮な１×ＰＢＳ（１０～１５ｍＬ）を管に加え、それを振とうして、ゲルを再懸濁させた。遠心分離、上清の除去、新鮮な緩衝液による希釈を繰り返した。Ｄ１が上清中で検出されなくなるまで洗浄を続けた。２８０ｎｍにおける吸光度の検出に使用されるＮａｎｏｄｒｏｐ分光光度計。
ヒドロゲル－薬物コンジュゲートの主な記述子は、ヒドロゲルの体積当たり充填される薬物の量（＝薬物充填量）である。薬物がタンパク質である場合、充填量を決定するためのいくつかの方法がある。
ヒドロゲルのタンパク質充填量を、公知の体積のヒドロゲルからのコンジュゲートされたタンパク質の強制放出、続いて、放出されたタンパク質の定量化によって決定した。この実施例において：２０．０ｍｇの［Ｃ１－２］を、反応管に量り入れた。試料を、０．５ＭのＮａＯＨ（４ｍＬ、ＡＶＳ Ｔｉｔｒｉｎｏｒｍ、３１９５１．２９０）で処理し、ボルテックスし、３７℃で３０分間振とうした。ＵＶ分光光度計を用いて、放出された薬物Ｄ１（配列番号１９）の濃度が、この試料中で１１．６８ｍｇ／ｍＬであることが測定され、これは、［Ｃ１－２］中の１１．６８ｍｇのＤ１／ｍＬのヒドロゲルに相当する。この分析を、デュプリケートで行った。希釈前の［Ｃ１－２］の決定された平均タンパク質充填量は、１２．１４ｍｇのＤ１／ｍＬのヒドロゲルであった。
別の方法では、２０．８ｍｇの［Ｃ１－２］を、反応管に量り入れた。試料を、１Ｍのトリス－ＨＣｌ緩衝液ｐＨ＝９．５（４ｍＬ）で処理し、ボルテックスし、３７℃で２４時間振とうした（又は測定される濃度が定常状態に達するまで）。ＵＶ分光光度計を用いて、放出された薬物Ｄ１の濃度が、この試料中で１３．３ｍｇ／ｍＬであることが測定され、これは、［Ｃ１－２］中の１３．３ｍｇのＤ１／ｍＬのヒドロゲルに相当する。この分析を、トリプリケートで行った。希釈前の［Ｃ１－２］の決定された平均タンパク質充填量は、１２．７２ｍｇのＤ１／ｍＬのヒドロゲルであった。
別の方法では、２４．５ｍｇの［Ｃ２－２］を、反応管に量り入れ、２８００μＬの水を加えた後、５８．０５μＬのヒアルロニダーゼ溶液（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ製、ＬＳ００５４７５、８１４０Ｕ／ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温で３時間振とうし、ＵＶ分光光度計を用いて、吸収が、この試料中で１９．６８ｍｇ／ｍＬであることが測定された。この分析を、トリプリケートで行った。希釈前の［Ｃ２－２］の決定された平均タンパク質充填量は、１９．４９ｍｇのＤ１／ｍＬのヒドロゲルであった。
タンパク質充填量を決定する代替的な方法は、差分計算によるものである。この方法では、ヒドロゲル洗浄中に回収された（ＵＶ分光光度計を用いた）Ｄ１の測定された濃度が、実験の開始時の既知の加算された総タンパク質（例えば：Ｄ１＋Ｌ２Ｄ１）から差し引かれる。差分は、総ヒドロゲルの体積に基づいてＤ１充填量を示す。
表１８中のヒドロゲルは、Ｃ１－２の合成に使用される方法と類似の方法を用いて調製した。
Figure 0007336513000176
ヒドロゲル－薬物コンジュゲートを、１×ＰＢＳで希釈して、投与のための所望の最終薬物濃度を得た。加えられる１×ＰＢＳの量を、下式によって計算した：（ＰＢＳ希釈剤（ｍＬ））＝［（総薬物（ｍｇ）／所望の薬物充填量（ｍｇ／ｍＬ）］－（コンジュゲートの初期体積（ｍＬ））。
プランジャを取り外し、所望の体積のＣ２－２を充填することによって、コンジュゲートＣ２－２を、３０Ｇ針が取り付けられた０．５ｍＬのインスリンシリンジ中に投与のために分配した。
ヒドロゲル－薬物コンジュゲートを、室温で貯蔵した。
実施例７
インビトロ薬物放出試験
７－１．ヒドロゲル－薬物コンジュゲートからのＤ１（配列番号１９）の放出
Figure 0007336513000177
式中、Ｙが、以下の表３から選択される。
ヒドロゲルコンジュゲートＣ１－２、及びＣ２－２からのＤ１（配列番号１９）の放出が、図４Ａに示されるように起こる。この試験において、一連のヒドロゲル－Ｄ１－コンジュゲートを、１×ＰＢＳ中で３７℃に保持して、トレースレスリンカー切断反応後の薬物の放出を評価した。これらの反応物を、様々な時点で採取し、分析して、上清中の放出されたＤ１の濃度を決定した。
各ヒドロゲル（約１２５μＬ；秤量によって決定される正確な量、ヒドロゲルの仮定密度＝１ｇ／ｍＬ）を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ；６ウェルプレート、２４ｍｍの直径、ポリカーボネート膜、８．０μｍの細孔径）中に加えた。プレートのウェルに２．６ｍＬのＰＢＳ＋（１％）ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１００００ＩＵ／μｇ／ｍＬ）を充填した。次に、ヒドロゲル含有インサートをウェルに入れ、１．３７５ｍＬのＰＢＳ＋（１％）ペニシリン／ストレプトマイシンを、（インサート中で）ヒドロゲルの上に加えた。３つのウェルを、各ヒドロゲル試料のために準備した。プレートにしっかりと蓋をし、湿潤環境中で３７℃に保持した。
収集緩衝液の試料を、最大で２８日間にわたって様々な時点でウェルから取り出した。各時点で及び各ウェルについて、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサートを、ウェルから取り出し、ドリップドライし、３．６ｍＬの新鮮な１×ＰＢＳ＋（１％）ペニシリン／ストレプトマイシンを含むウェル中で、新しいプレートに移した。補充されたプレートをインキュベートに戻した。一方、収集緩衝液の全体積を清浄な管に移し、秤量し、次に、ある時点の試料を、収集緩衝液（０．１０ｍＬが分析のために使用される）から取り出し、残りをアッセイまで－８０℃で貯蔵した。
このアッセイに使用される他の緩衝液は、ウシ滑液（ＢＳＦ）、１ＭのトリスＨＣｌ溶液（Ｔｅｋｎｏｖａ、ｐＨ９．５）、又は１％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、ｒｅｆ １０２７０１０６）、１２．５ｕｇ／ｍｌのインスリン－トランスフェリン－亜セレン酸ナトリウムサプリメント（Ｒｏｃｈｅ、ｒｅｆ １１０７４５４７００１）、５０ｕｇ／ｍｌのＬ－アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩ｎ－水和物（Ｗａｋｏ、ｒｅｆ ０１３－１２０６１）、１００単位／ｍｌのペニシリン及び１００ｕｇ／ｍｌのストレプトマイシンにあるダルベッコ改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ、ｒｅｆ ４１９６５）である。ペニシリン／ストレプトマイシン添加剤は、実験が３７℃の代わりに２２℃で実行される場合、省略され得る。
各時点の試料について、タンパク質濃度（その時点での各ウェルにおけるタンパク質濃度を表す）を、Ｄ１で予備校正されたサイズ排除クロマトグラフィーＳＥＣ（機器：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ；カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬ（２８－９９０９－４４）；カラム温度：室温、流量：０．７５ｍＬ／分；注入量：１０μＬ；移動相：０．１０μｍの膜フィルタに通して予備ろ過される１／９のＰＢＳ／水；実行時間：４０分；検出波長：２１４、２８０、及び６８０ｎｍ）によって決定した。各時点の試料を、トリプリケートで分析し、結果を平均した。
所与の時点で所与のウェル中のタンパク質の総量を、その時点でのタンパク質濃度に、測定された体積（１ｇ／ｍＬの仮定密度）を乗算することによって計算した。その時点まで各ヒドロゲルから各ウェル中に放出された累積Ｄ１を、各時点でのウェル中のＤ１の総量を加算することによって計算した。所与の時点までコンジュゲートＣ２－２から放出されたタンパク質の累積パーセントが、図４Ｂに示される。放出されたＤ１の累積パーセントが、所与の時点で放出された累積Ｄ１を、最初のヒドロゲル試料中に存在する総Ｄ１で除算し、１００を乗算することによって計算される。図４Ｂから明らかであるように、担体からのＤ１の放出は、ゆっくりであるが、１か月の期間にわたって持続される。
時点ｔでのウェル中のタンパク質の濃度：
［Ｐ］（ｔ）
時点ｔでのウェル中の総体積：
Ｖ（ｔ）
時点ｔでのウェル中のタンパク質の総質量：
ｍ（Ｐ）ｗｅｌｌ（ｔ）＝［Ｐ］（ｔ）×Ｖ（ｔ）
時点ｔまでヒドロゲルから放出されたタンパク質の累積質量：
Figure 0007336513000178
実施例８
ヒドロゲルの組織耐性の比較
この試験は、膝変形性関節症を有するＬｅｗｉｓラットにおける単回の関節内注射の後、１１週間の期間にわたって、ヒドロゲルが、深刻な炎症反応又は何らかの他の有害事象を引き起こすかどうかを調べた。被験物質は、Ｈ１ａ、Ｈ９ａ、及び変形性関節症の膝の疼痛の治療のためのＳｙｎｖｉｓｃ－Ｏｎｅ（登録商標）ヒアルロン酸ベースの注射用溶液（Ｓａｎｏｆｉ）であった。
Ｈ９ａの調製
Ｈ９ａのヒアルロン酸ベースのヒドロゲル粒子を、Ｈ１ａ（上記、架橋剤ＸＬ－９－１を用いる）について記載されるように調製し、ここで、半分の体積の１×ＰＢＳを、最初の押し出しの後、粒子に加えた。プランジャを取り出し、所望の体積のＨ１ａ／Ｈ９ａでバックフィルすることによって、Ｈ１ａ／Ｈ９ａのヒドロゲル粒子を、３０Ｇ針が結合された０．５ｍＬのインスリンシリンジ中で投与するために分注した。気泡を、シリンジの穏やかな操作によって取り除いた。
Ｓｙｎｖｉｓｃ－Ｏｎｅ（登録商標）
Ｓｙｎｖｉｓｃ－Ｏｎｅ（登録商標）を購入し、入手したままの状態で使用した。
関節内注射
雄Ｌｅｗｉｓラット（ＬＥＷ／ＯｒｌＲｊ Ｊａｎｖｉｅｒ）に、片方の膝の半月板断裂手術を行った。膝変形性関節症が、手術の約７日後に関節の安定性のために発生した場合、２５μＬの被験物質又は生理食塩水対照を、麻酔下で手術された膝関節に関節内注射した（表１９）。１匹の未処理の（手術されていない）ラットを対照として用いた。生存中の観察を、投与後１～２時間にわたって、その後、１週間にわたって１日に少なくとも１回記録した。解剖までその後の数週間、生存中の観察を、週に１回記録した。体重を毎週量った。
Figure 0007336513000179
ラットを、関節内注射の４、６、８、又は１１週間後に安楽死させた。注射された膝関節からの滑液を、膝関節を開くことによって収集し、２５μＬの生理食塩水で洗浄した。肉眼で見える異常が、解剖中に記録された。右側の手術／注射された膝を、全ての動物から収集し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、パラフィンに包埋し、薄い切片にした。ヘマトキシリン及びエオシン及びサフラニンＯ／ファストグリーンで染色された膝関節切片が、病理学者によって評価された。
結果及び結論
ヒドロゲルは、ラット膝関節に関節内注射されるとき、１１週間にわたって有害事象を引き起こさなかった。滑膜下の空間（ｓｕｂｓｙｎｏｖｉａｌ ｓｐａｃｅ）におけるヒドロゲルの存在、関節腔への滑膜細胞のブレブ形成並びに滑膜及び滑膜下細胞の増殖は、早い時点で一時的であり、変形性関節症の膝の疼痛の治療のために販売され、使用されることが多いＳｙｎｖｉｓｃ－Ｏｎｅ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ）よりＨＡヒドロゲルコンジュゲートについて顕著でなかった。
実施例９
インビボ薬物放出試験
この試験は、ラット膝関節における関節内注射の後、ヒドロゲル薬物コンジュゲートＣ２－２からのＤ１のインビボ放出プロファイルを調べた。
Ｃ２－２の調製
ヒドロゲル薬物コンジュゲートＣ２－２を、実施例６に記載されるように調製した。Ｃ２－２中のＤ１濃度は、１９．０ｍｇ／ｇであり、これは、関節当たり０．４７５のＤ１用量に相当する。
関節内注射
９匹の未処理の雄Ｌｅｗｉｓラット（ＬＥＷ／ＯｒｌＲｊ Ｊａｎｖｉｅｒ；９週齢）の両方の膝関節に、麻酔下で２５μＬのＣ２－２をそれぞれ注射した。血液／血清を、表２０に示される時点で収集した。関節内注射の２４、７２及び１６８時間後の時点で、３匹のラットをそれぞれ安楽死させた。滑液及び関節軟骨を、左膝関節から収集し、全体的な関節組織を右膝から収集した。
Figure 0007336513000180
２０μＬの生理食塩水を、閉じた膝関節に関節内注射し、関節を動かし、膝関節を開けた後、滑液を直接収集することによって、膝関節からの滑液を収集した。その後、さらなる２０μＬを、開いた膝関節に注射し、収集した。さらなる２０μＬの生理食塩水を用いて洗浄を繰り返して、６０μＬの総洗浄液体積を得た。滑液を含む予め秤量されたバイアルを、試料採取した直後に遠心分離したところ、ヒドロゲル粒子が管の底部に位置していた。その後、５μＬを予め秤量されたバイアルから取り出してから、主要バイアルを－８０℃で貯蔵した。分離された５μＬの滑液を、ヒアルロニダーゼ処理なしの分析を可能にするために、予備の試料として保存し、同様に－８０℃で貯蔵した。Ｄ１濃度を、ＥＣＬＩＡアッセイによって、血清及び滑液中で定量した。この方法は、ＭＳＤプレート上に固定された抗ＡＮＧＰＴＬ３モノクローナル抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ｉＰｒｏｔ１０９０４６）を用いたＤ１の捕捉に基づく。捕捉されたＤ１は、ビオチン化抗ＡＮＧＰＴＬ３ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ３８２９）を用いて検出され、その後、ストレプトアビジン－ＳｕｌｆｏＴａｇとのインキュべーションを行った。滑液試料を、ヒアルロニダーゼ（１５００Ｕ／ｍＬ）で前処理し、分析前に４５０ｒｐｍで振とうしながら４℃で一晩インキュベートするか、又はヒアルロニダーゼ前処理なしで、－８０℃で保存するかのいずれかであった。
結果及び結論
図５に示されるように、Ｃ２－２ヒドロゲルは、１週間の時点でもはや検出されなかった、Ｄ１即時放出製剤で観察された短く且つ高い全身曝露と比較して、最大で１週間にわたって非常に低いレベルで持続性の血清曝露を提供した。Ｃ２－２ヒドロゲル関節内注射はまた、滑液中で少なくとも１週間にわたって高い持続性のＤ１レベルをもたらし、これは、滑液中の残留ヒドロゲルからＤ１を放出するようにヒアルロニダーゼ処理されていた。ヒアルロニダーゼ前処理なしで、滑液中で検出される遊離Ｄ１レベルは、はるかに低かったが、少なくとも１週間にわたって検出可能であった。これらの結果は、Ｃ２－２ヒドロゲルが、滑液中へのＤ１の放出を、少なくとも１週間持続させたことを示す。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。１．式（Ｉ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；
Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000181
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、それらが結合される炭素原子と組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
Ｒ１２及びＲ１３が、Ｃ（Ｒ１２ａ）及びＯと組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーであり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
２．Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
３．Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
４．Ｄが、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
５．Ｄが、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
６．Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
７．Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド（配列番号１９）を含む、上記１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
８．Ｒ１が、水素又はメチルであり、Ｒ１ａが、水素又はメチルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、シクロプロパン－１，１－ジイル基を形成する、上記１～７のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
９．変数ａが０である、上記１～８のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１０．Ｒ３及びＲ３ａがそれぞれ水素である、上記１～９のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１１．Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はＣ１～Ｃ２アルコキシＣ１～Ｃ２アルキルである、上記１～１０のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１２．Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである、上記１１に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１３．ＹがＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７であり；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ４アルキル、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、２－エトキシエトキシ、２－イソプロポキシ－エトキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、ｂが、２、３、又は４である、上記１～１０のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１４．Ｚが、ＣＨ－Ｌ－Ａ、ＣＨ－Ａ、Ｎ－Ｌ－Ａ、又はＮ－Ａであり；
Ｌが、任意選択的に置換される二価リンカーＱ－［Ｓｐ－Ｑ］ｈ－Ｑであり；
Ｑが、独立して、それぞれ、結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｈ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ２アルキル、１，２，３－トリアゾール、ＯＰ（Ｏ）２、Ｐ（Ｏ）２Ｏ、Ｃ１～Ｃ４アルキル－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ、又はＯ－Ｐ（Ｏ）２－Ｃ１－４アルキルから選択され；
Ｓｐが、独立して、それぞれ、任意選択的に置換されるＣ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ２～Ｃ２０アルキニル、［Ｗ－Ｏ］ｇ、Ｃ１～Ｃ８アルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ、［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８Ｃアルキル－［Ｏ－Ｗ］ｇ－Ｏ－Ｃ１～Ｃ８アルキル、又はオリゴペプチドから選択され；
ｈが、１～２０の整数であり；
ｇが、約２～約５０の加重平均数であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である、上記１～１３のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１５．Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ－Ａ、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、前記アルキル基は、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である、上記１～１３のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１６．ＺがＮＲ９であり；
Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ－Ａ又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａであり；
ｎが、１～８の整数であり；
Ａが、Ｒ１０又はＲ１１である、上記１５に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１７．Ｒ１０が、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、置換若しくは非置換ビニルカルボキシル、置換若しくは非置換ビニルスルホニル、置換若しくは非置換Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、ヒドラジジル、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルである、上記１～１６のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１８．Ｒ１０が、式（Ｉ）の前記薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩を担体に結合するのに好適な反応性官能基を含む、上記１～１７のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
１９．Ｒ１１が生分解性である、上記１～１６のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２０．Ｒ１１が、ポリマー又は架橋ポリマーを含む、上記１～１６又は１９のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２１．Ｒ１１が、１つ以上の架橋ポリマーを含むヒドロゲルを含む、上記１９又は２０に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２２．Ｒ１１が、ポリマー、架橋ポリマー、又はヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、プロピレンオキシド、ポリグルタメート、ポリリジン、ポリシアル酸、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリオキサゾリン、ポリイミノカーボネート、ポリアミノ酸、親水性ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ尿素、デキストラン、アガロース、キシラン、マンナン、カラギーナン、アルギネート、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン、キトサン、核酸、それらの誘導体、それらのコポリマー、又はそれらの組合せのうちの１つ以上を含むヒドロゲルを含む、上記１～１６及び１９～２１のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２３．Ｒ１１が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸の架橋ヒドロゲル、ポリエチレングリコールの架橋ヒドロゲル、又はそれらの組合せを含む、上記１～１６及び１９～２２のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２４．Ｒ１１が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む、上記１～１６及び１９～２３のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２５．Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸又は架橋ポリエチレングリコールを含むヒドロゲルを含む、上記１～１６及び１９～２３のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２６．前記ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、アダマンタニル、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つの官能基で官能化される、上記２４又は２５に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２７．Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸を含むヒドロゲルを含み、ここで、前記ヒアルロン酸は、－ＮＨ（Ｗ１）（Ｏ（Ｗ１））ｄ－Ｖから選択される少なくとも１つの側鎖を含み、Ｗ１が、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
ｄが、０～５００の数平均であり；
Ｖが、アジジル、アルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２シクロアルキニル、置換若しくは非置換Ｃ７～Ｃ１２ヘテロシクロアルキニル、Ｃ７～Ｃ１２シクロアルケニル、ノルボルニル、ビニルカルボキシル、ビニルスルホニル、Ｃ２～Ｃ８アルケニル、アミノ、チオール、Ｃ１～Ｃ８カルボキシル、Ｃ１～Ｃ８カルボニル、－Ｏ－ＮＨ２、カルボヒドラジド、マレイミド、α－ハロカルボニル、フラン、置換若しくは非置換テトラジニル、リジン、グルタミン、シクロデキストリン、又はアダマンタニルを含む好適な官能基である、上記１～１６及び１９～２６のいずれかに記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２８．Ｖがアジドである、上記２７に記載の薬物送達システム又は薬学的に許容できる塩。
２９．架橋担体製剤を作製するための方法であって、
（ａ）担体分子Ｒ１１を官能化する工程と；
（ｂ）反応性架橋剤を調製する工程と；
（ｃ）前記官能化された担体分子を前記反応性架橋剤と反応させて、約４℃～約６０℃の温度での約０．５時間～約４８時間にわたるインキュベーションによって架橋担体を形成する工程とを含む方法。
３０．前記担体分子が、ヒアルロン酸又はポリエチレングリコールを含む、上記２９に記載の方法。
３１．前記担体分子が、アジド、スルフヒドリル、アミン、アミノキシ（Ｏ－ＮＨ２）又はアルデヒド部分で官能化されて、架橋のための反応性官能基が得られる、上記３０に記載の方法。
３２．前記反応性架橋剤の前記調製が、ポリエチレングリコールを、１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボン酸、３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－カルボン酸、２－（１－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロプロピル）酢酸、２－メチル－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸、又は７－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプタン酸と反応させる工程と、前記官能化されたポリエチレングリコールエステルを脱保護する工程とを含む、上記２９～３１のいずれかに記載の方法。
３３．前記反応性架橋剤の前記調製が、前記官能化されたポリエチレングリコールエステルの脱保護後に少なくとも２つのビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル基の導入をさらに含む、上記３２に記載の方法。
３４．上記２９～３３のいずれかに記載の方法を用いて得られる架橋ヒドロゲル。
３５．前記担体分子が、アジドで官能化される、上記３４に記載の架橋ヒドロゲル。
３６．少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤに結合されたトレースレスリンカーＲを含む薬物付加物を調製するための方法であって、
（ａ）少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤを提供する工程と；
（ｂ）前記生物学的活性薬剤を、活性化されたカルボニル官能基を有するトレースレスリンカーＲと反応させる工程と；
（ｃ）前記薬物付加物を前記試薬から精製する工程と
を含む方法。
３７．上記３６に記載の方法を用いて得られる薬物付加物。
３８．薬物送達システムを作製するための方法であって、
（ａ）担体分子Ｒ１１、ここでＲ１１が架橋ヒドロゲルである、を調製する工程であって；任意選択的に、工程（ａ）が、前記架橋ヒドロゲル担体分子Ｒ１１を精製することをさらに含み得る工程と；
（ｂ）別々に、前記トレースレスリンカーＲを、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤにコンジュゲートし、それによって、前記トレースレスリンカー－Ｄ付加物を形成する工程であって；工程（ｂ）が、任意選択的に、前記トレースレスリンカー－Ｄ付加物の精製をさらに含み得る工程と、
（ｃ）前記担体分子Ｒ１１を、前記トレースレスリンカー－Ｄ付加物とコンジュゲートする工程と；
（ｄ）前記薬物送達システムを前記試薬から精製する工程と
を含む方法。
３９．上記３８に記載の方法を用いて作製される薬物送達システム。
４０．黄斑変性症を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；
Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000182
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、前記水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
４１．筋骨格障害を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；
Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000183
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、前記水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
４２．疾病又は疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、式（Ｉ）によって表されるコンジュゲートＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000184
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、前記水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法。
４３．少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドＤの半減期を延ばすための手段であって、式（Ｉ）によって表される、ＲへのＤの結合（式中、Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000185
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
Ｒ１が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１Ｒ１ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
ａが、０、１、２、３又は４であり；
Ｒ３が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３ａが、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ３Ｒ３ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、ＳｉＲ５Ｒ６Ｒ７、又はＣＲ１２Ｒ１２ａＯＲ１３であり；
Ｒ１２が、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１２ａが、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルであるか、又はＣＲ１２Ｒ１２ａが、組み合わされて、Ｃ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイルを形成し；
Ｒ１３がＣ１～Ｃ４アルキルであるか；又は
ＣＨＲ１２ＯＲ１３が、組み合わされて、５、６、又は７員環状エーテルを形成し；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、アルキルが、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ４アルコキシ又はモノ－及びジ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノで任意選択的に置換され；
Ｒ５及びＲ６がそれぞれ、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル及びＣ３～Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、又は－（ＯＣＨＲ３ＣＨ２）ｂＯ－Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ここで、前記ヘテロシクロアルキルオキシが、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つの環ヘテロ原子を有し、且つ０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換される４～７員飽和複素環であり；
ｂが、１～１０の整数であり；
Ｚが、ＣＨＲ８又はＮＲ９であり；
Ｒ８及びＲ９がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａから選択され、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＱ－Ａで任意選択的に置換され；
ｑが、独立して、それぞれ、１、２、又は３であり；
ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、約２～約５０の加重平均長さを有し；
ｍが、１又は０であり；
Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、前記水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
Ａが、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１～Ｃ８アルキル、Ｒ１０、又はＲ１１であり、ここで、前記アルキル基が、０又は１つのＲ１０で任意選択的に置換され；
Ｒ１０が、式（Ｉ）を担体に結合するのに好適な反応性官能基であり；
Ｒ１１が担体である）
を含む手段。
４４．Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記４３に記載の手段。
４５．式（ＩＩＩ）：
Figure 0007336513000186
（式中、ＡＮＧＰＴＬ３が、配列番号１又は３～４５のいずれか１つ、又はそれらの組合せに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む）
を含む薬物送達システム。
４６．式（ＩＶ）：
Figure 0007336513000187
（式中、配列番号１９が、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む）
を含む薬物送達システム。
４７．Ｄ－Ｒ－Ｒ１１（式中、Ｒが、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーを含み；Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ１１が、複数のヒアルロン酸ポリマーを含み、これらのそれぞれが、ランダムに並んだ非官能化Ｄ－グルクロン酸モノマー、架橋剤で官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマー、又は薬物付加物で官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマーＤ－Ｒを含む）を含む薬物送達システム。
４８．Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、上記４７に記載の薬物送達システム。
４９．式（ＸＸＩＶ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000188
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドであり；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５０．式（ＸＸＶ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000189
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５１．式（ＸＸＶＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000190
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５２．式（ＸＸＶＩＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000191
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５３．式（ＸＸＶＩＩＩ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000192
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５４．式（ＸＸＩＸ）によって表されるＤ－Ｒ：
Figure 0007336513000193
（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５５．式（ＸＸＸ）：
Figure 0007336513000194
（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５６．式（ＸＸＸＩ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000195
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［３－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５７．式（ＸＸＸＩＩ）：
Figure 0007336513000196
（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５８．式ＸＸＸＩＩＩによって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000197
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［１－（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ－シクロプロパン－１－カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
５９．式（ＸＸＸＩＶ）：
Figure 0007336513000198
（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６０．式ＸＸＸＶによって表されるＤ－Ｒ（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000199
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［１－（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン－４－カルボン酸エステル］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６１．式（ＸＸＸＶＩ）：
Figure 0007336513000200
（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６２．式ＸＸＸＶＩＩによって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000201
ここで、破線が、第一級アミンへの結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［７－（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘプタノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６３．式（ＸＸＸＶＩＩＩ）：
Figure 0007336513000202
（式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
によって表される薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６４．式（ＸＸＸＩＸ）によって表されるＤ－Ｒ（式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；
Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーであり：
Figure 0007336513000203
ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
ＹがＣ（Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ８アルキル又はＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキルが、０、１、又は２つの独立して選択されるＣ１～Ｃ４アルキル基で任意選択的に置換され、ここで、アルキルが、Ｃ１～Ｃ４アルコキシで任意選択的に置換され；
ＺがＮ－Ｌ－Ａであり；
ＬがＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨであり；
ＡがＲ１１であり；
Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸に由来するヒドロゲルであり、ここで、前記ヒアルロン酸は、Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の少なくとも１つのアミド結合した側鎖を含み、前記ヒドロゲルを形成するのに使用される前記架橋剤は、ＰＥＧ（２０００）－ビス－［２－メチル－３－（（（（（１’Ｒ，８’Ｓ，９’ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４’－イン－９’－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート］を含む）
を含む薬物送達システム又はその薬学的に許容できる塩。
６５．Ｄが配列番号１９であり、Ｒ４が、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、又はメチルシクロプロピルである、上記５５～６４のいずれかに記載の薬物送達システム。
６６．Ｄが配列番号１９であり、Ｒ４が－ＣＨ３である、上記５５～６５のいずれかに記載の薬物送達システム。
６７．前記Ｄ－Ｒ付加物が、
Figure 0007336513000204
を含む、上記５５～６６のいずれかに記載の薬物送達システム。

Claims (16)

  1. Ｄ－Ｒ－Ｒ１１（式中、Ｒが、生物学的活性薬剤Ｄに結合されたトレースレスリンカーを含み；Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ１１が、複数のヒアルロン酸ポリマーを含み、これらのそれぞれが、ランダムに並んだ非官能化Ｄ－グルクロン酸モノマー、架橋剤で官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマー、又は薬物付加物で官能化された１つ以上のＤ－グルクロン酸モノマーＤ－Ｒを含む）を含む薬物送達化合物又はその薬学的に許容できる塩であって；
    Ｒが、式（Ｉ）のＤの放出に好適なリンカーであり：
    ここで、破線が、第一級アミン、第二級アミン、又はアザヘテロアリール環の環窒素原子への結合を示し；
    Ｒ１が、水素であり；
    Ｒ１ａが、水素であり；
    Ｒ２が、独立して、それぞれ、Ｃ１～Ｃ４アルキル又はオキソから選択され、又は２つのＲ２基が、それらが結合される炭素原子と組み合わされて、縮合Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロＣ３～Ｃ６シクロアルカ－１，１－ジイル基を形成し；
    ａが、０であり；
    Ｒ３が、水素であり；
    Ｒ３ａが、水素であり；
    Ｙが、Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル又はＣ１～Ｃ２アルコキシＣ１～Ｃ２アルキルであり；
    Ｚが、ＮＲ９であり；
    Ｒ９が、Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ－Ａ又は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｇ（ＮＨＣ（Ｏ））ｍ（ＣＨ２）ｑ［Ｏ－Ｗ］ｐ－Ｑ－Ａであり；
    ｎが、１～８の整数であり、
    ｑが、独立して、それぞれの出現で１、２、又は３であり；
    ｇ及びｐがそれぞれ、独立して、２～５０の加重平均長さを有し；
    ｍが、１又は０であり；
    Ｗが、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
    Ｑが、結合、Ｏ、Ｎ（Ｈ）又はＮ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり；
    Ａが、Ｒ１０であり、Ｒ１０が、置換Ｃ６～Ｃ１２シクロアルキニルであり、ここで、置換は、式（Ｉ）を担体Ｒ１１に結合するのに好適な縮合シクロプロピル基を含み；
    Ｒ１１が、架橋ヒアルロン酸を含むヒドロゲルを含み、ここで、前記ヒアルロン酸は、－ＮＨ（Ｗ１）（Ｏ（Ｗ１））ｄ－Ｖから選択される少なくとも１つの側鎖を含み、Ｗ１が、Ｃ２～Ｃ４アルキル－１，２－ジイルであり、ここで、水素、メチル、又はエチル側鎖が、いずれかの骨格炭素原子上に存在してもよく；
    ｄが、０～５００の数平均であり；
    Ｖが、アジドである）
    を含む薬物送達化合物又はその薬学的に許容できる塩。
  2. Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  3. Ｄが、配列番号１又は３～４５のいずれか１つを含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  4. Ｄが、Ｋ４２３Ｑ置換又はＫ４２３欠失を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  5. Ｄが、それぞれ配列番号１を参照して、アミノ酸残基２０１～４６０；２０７～４６０；２２５～４５５；２２５～４５５；２２５～４６０；２２５～４６０；２２６～４５５；２２６～４５５；２２６～４６０；２２６～４６０；２２８～４５５；２２８～４５５；２２８～４６０；２２８～４６０；２３３～４５５；２３３～４５５；２３３～４６０；２３３～４６０；２４１～４５５；２４１～４５５；２４１～４６０；２４１～４６０；２４２～４５５；２４２～４５５；２４２～４６０；又は２４２～４６０を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  6. Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０に対する少なくとも９５％の同一性及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  7. Ｄが、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド（配列番号１９）を含む、請求項１に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  8. Ｒ１０が、ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルである、請求項１～７のいずれか一項に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  9. Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の薬物送達化合物又は薬学的に許容できる塩。
  10. 式（ＩＩＩ）：
    （式中、ＡＮＧＰＴＬ３が、配列番号１又は３～４５のいずれか１つ、又はそれらの組合せに対する少なくとも９５％の同一性を有するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み、Ｒ４は請求項１又は請求項９で規定されるものであり、前記担体は請求項１に規定されるものである）
    を含む薬物送達化合物。
  11. 式（ＩＶ）：
    （式中、Ｄ１が、配列番号１を参照して、アミノ酸残基２４２～４６０及びＫ４２３Ｑ置換を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み、Ｒ４は請求項１又は請求項９で規定されるものであり、前記担体は請求項１に規定されるものである）
    を含む薬物送達化合物。
  12. 式（ＸＸＩＶ）、式（ＸＸＶ）、式（ＸＸＶＩ）、式（ＸＸＶＩＩ）、式（ＸＸＶＩＩＩ）、又は式（ＸＸＩＸ）によって表される、請求項１～１１のいずれか一項に規定されるＤ－Ｒ：
    （式中、Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒが、Ｄの放出に好適なリンカーである）
    を含む薬物送達化合物又はその薬学的に許容できる塩。
  13. 式（ＸＸＸ）、式（ＸＸＸＩＩ）、式（ＸＸＸＩＶ）、式（ＸＸＸＶＩ）、又は式（ＸＸＸＶＩＩＩ）：
    （式中、薬物Ｄが、少なくとも１つの第一級アミンを含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み；Ｒ４が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１－メチル－シクロプロピル、又はメトキシメチルである）
    によって表される薬物送達化合物又はその薬学的に許容できる塩。
  14. Ｄが配列番号１９であり、Ｒ４が、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、又はメチルシクロプロピルである、請求項１２又は１３に記載の薬物送達化合物。
  15. Ｄが配列番号１９であり、Ｒ４が－ＣＨ３である、請求項１２又は１３に記載の薬物送達化合物。
  16. 前記Ｄ－Ｒ付加物が、
    を含み、
    Ｄが、請求項１～７のいずれか一項でＤにおいて規定されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の薬物送達化合物。
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