TW202027794A - 血管生成素樣３多肽之持續遞送 - Google Patents

血管生成素樣３多肽之持續遞送 Download PDF

Info

Publication number
TW202027794A
TW202027794A TW108135606A TW108135606A TW202027794A TW 202027794 A TW202027794 A TW 202027794A TW 108135606 A TW108135606 A TW 108135606A TW 108135606 A TW108135606 A TW 108135606A TW 202027794 A TW202027794 A TW 202027794A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
alkyl
group
drug delivery
delivery system
hydrogen
Prior art date
Application number
TW108135606A
Other languages
English (en)
Inventor
琴 巴普帝斯特 喬吉斯 阿曼德 藍格洛伊斯
坎羅 李
米利安 艾波羅
提茲那 法茲
寇妮麗亞 潔塔 佛斯特
艾德華 査爾斯 霍爾
克里斯多弗 M 亞當
妮可 格溫
Original Assignee
瑞士商諾華公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=68165677&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TW202027794(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 瑞士商諾華公司 filed Critical 瑞士商諾華公司
Publication of TW202027794A publication Critical patent/TW202027794A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1891—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/555—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound pre-targeting systems involving an organic compound, other than a peptide, protein or antibody, for targeting specific cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6903—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being semi-solid, e.g. an ointment, a gel, a hydrogel or a solidifying gel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin

Abstract

本文描述了用於遞送包含一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑之藥物遞送系統、其藥學上可接受的鹽、與其相關的藥物遞送劑、包含該等藥物遞送系統的藥物組成物以及該等藥物遞送系統作為持續釋放治療劑之用途。

Description

血管生成素樣3多肽之持續遞送
本文描述了用於遞送包含一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑的藥物遞送系統、其藥學上可接受的鹽、與其相關的藥物遞送劑、包含該等藥物遞送系統的藥物組成物以及該等藥物遞送系統作為持續釋放治療劑的用途。
對序列表的引用
本申請與根據37 C.F.R.§ 1.821(c)的電腦可讀形式的序列表一起提交。所提交的文字檔案「PPR0672_14293-831_sequence_listing_1-OCT-2018_ST25.txt」係在2018年10月1日創建的，檔案大小為97.1千位元組，並且藉由引用以其整體特此併入。
藥物在體內的物理化學或藥物動力學特性的調節可能受到藥物與載體軛合(conjugation)的影響。具體而言，藥物與載體的軛合經常用作增加治療作用的持續時間、降低施用後藥物的最大濃度、或將藥物局部遞送至所需組織或區室、或該等目的的組合之方法。通常，藥物遞送系統中的載體抑或(a)以 非共價方式與藥物以物理化學方式配製成溶劑-載體混合物來使用，抑或(b)藉由載體試劑的共價附接與藥物中存在的官能基連接。
非共價方法需要高效的藥物包封，以防止藥物的可能發生在載體-藥物系統的初始施用時或向受試者施用後載體降解期間的不受控制的突釋。抑制未結合的水溶性藥物分子的擴散需要強凡得瓦接觸，通常藉由以下來介導：疏水性部分、氫鍵合或藉由帶電部分介導的靜電結合。許多構象敏感的藥物(例如蛋白質、肽或抗體)在包封過程期間和/或在包封的藥物後續存儲期間變得功能異常。
可替代地，藥物可以藉由穩定的連接子(linker)或藉由釋放藥物的可逆連接子部分與載體共價軛合。如果藥物穩定地連接到載體，則這樣一種軛合物需要表現出足夠的殘餘活性以具有藥物作用，並且該軛合物始終處於活性形式。
如果藥物藉由可裂解的連接子與載體軛合，則此類軛合物通常被稱為載體連接的藥物。此方法可以應用於來自低分子量有機分子、天然產物、抗體及其類似物、蛋白質、肽等的各種類型和大小的生物活性分子。對於載體連接的藥物的重要考慮因素係從載體釋放藥物的機制。釋放機制可以是酶促的、pH依賴性的或藉由自主水解。通常，藥物釋放不容易可控制並且難以長時間維持。
在治療應用中仍然需要適於生物活性部分的持續釋放的新藥物遞送系統。本文描述了為治療上相關的應用提供生物活性部分的持續釋放的藥物遞送系統。
本文所述的一個實施方式係一種由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0003-349
其中虛線表示與該一級胺附接；R1係氫或C1-C4烷基；R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團與它們所附接的一個或多個碳原子一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；a係0、1、2、3或4；R3係氫或C1-C4烷基；R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；R12係氫或C1-C4烷基；R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R13係C1-C4烷基；或者R12和R13與C(R12a)和O一起組合形成5、6或7員環醚；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；b係從1至10的整數；Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；L係視需要經取代的二價連接子；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經 0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。在一方面，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。在另一方面，D包含具有K423Q取代或K423缺失的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有胺基酸殘基201-460；207-460；225-455；225-455；225-460；225-460；226-455；226-455；226-460；226-460；228-455；228-455；228-460；228-460；233-455；233-455；233-460；233-460；241-455；241-455；241-460；241-460；242-455；242-455；242-460；或242-460的ANGPTL3多肽，各自參考SEQ ID NO：1。在另一方面，D包含與參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460具有至少95%同一性且含有K423Q取代的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽D1(SEQ ID NO：19)。在另一方面，R1係氫或甲基，R1a係氫或甲基，或者CR1R1a一起組合形成環丙-1,1-二基基團。在另一方面，變數a係0。在另一方面，R3和R3a各自係氫。在另一方面，Y係C(O)R4，並且R4係C1-C6烷基、C3-C6環烷基或C1-C2烷氧基C1-C2烷基。在另一方面，R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基。在另一方面，Y係SiR5R6R7；R5和R6各自係甲基、乙基、丙基或異丙基；並且R7係C1-C4烷基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、三級丁氧基、2-乙氧基乙氧基、2-異丙氧基-乙氧基、四氫哌喃基氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中b係2、3或4。在另一方面，Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；L係視需要經取代的二價連接子Q-[Sp-Q]h-Q；Q在每次出現時獨立地選自鍵、O、C(O)、N(H)、N(C1-C4烷基)、C(O)NH、C(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)、N(C1-C4烷基)C(O)、N(H)C(O)O、N(C1-C4烷基)C(O)O、OC(O)N(H)、OC(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)N(H)、N(C1-C4烷基)C(O)N(H)、N(H)C(O)N(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)C(O)N(C1-C4烷基)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、S、S(O)2、N(H)S(O)2、N(C1- C4烷基)S(O)2、S(O)2N(H)、S(O)2N(C1-C4烷基)、C1-C2烷基-C(O)N(H)、N(H)C(O)C1-C2烷基、C1-C2烷基-C(O)O、OC(O)C1-C2烷基、1,2,3-三唑、OP(O)2、P(O)2O、C1-C4烷基-P(O)2-O或O-P(O)2-C1-4烷基；Sp在每次出現時獨立地選自視需要經取代的C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、[W-O]g、C1-C8烷基-[O-W]g、[O-W]g-O-C1-C8烷基、C1-C8烷基-[O-W]g-O-C1-C8烷基或寡肽；h係在1與20之間的整數；g係在約2與約50之間的加權平均數；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。在另一方面，Z係CHR8或NR9；R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)-(CH2)n-Q-A、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；q在每次出現時獨立地是1、2或3；g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；m係1或0；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。在另一方面，Z係NR9；R9係C(O)-(CH2)n-Q-A或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A；n係1至8的整數；並且A係R10或R11。在另一方面，R10係疊氮基(azidyl)、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環烯基、降冰片基(norbornyl)、經取代的或未經取代的乙烯基羧基、經取代的或未經取代的乙烯基磺醯基、經取代的或未經取代的C2-C8烯基、胺基、巰基(thiol)、經取代的或未經取代的C1-C8羧基、經取代的或未經取代的C1-C8羰基、-O-NH2、醯肼基、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、 經取代的或未經取代的四
Figure 108135606-A0202-12-0006-105
基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精或金剛烷基。在另一方面，R10包含適於將式(I)之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽與載體偶合的反應性官能基。在另一方面，R11係生物可降解的。在另一方面，R11包含聚合物或交聯聚合物。在另一方面，R11包含含有一種或多種交聯聚合物的水凝膠。在另一方面，R11包含含有以下中的一種或多種的聚合物、交聯聚合物或水凝膠：透明質酸、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚麩胺酸酯、聚離胺酸、聚唾液酸、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚乙烯吡咯啶酮、聚
Figure 108135606-A0202-12-0006-106
唑啉、聚亞胺基碳酸酯、聚胺基酸、親水性聚酯、聚醯胺、聚胺酯、聚脲、葡聚糖、瓊脂糖、木聚糖、甘露聚糖、卡拉膠、海藻酸鹽、明膠、膠原、白蛋白、纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基澱粉、幾丁聚醣、核酸、其衍生物、其共聚物或其組合。在另一方面，R11包含透明質酸、聚乙二醇、透明質酸的交聯水凝膠、聚乙二醇的交聯水凝膠或其組合。在另一方面，R11包含透明質酸或聚乙二醇。在另一方面，R11包含含有交聯透明質酸或交聯聚乙二醇的水凝膠。在另一方面，該透明質酸或聚乙二醇被至少一個包含疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、C7-C12環烯基、降冰片基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、胺基、巰基、C1-C8羧基、C1-C8羰基、-O-NH2、卡巴肼、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
Figure 108135606-A0202-12-0006-107
基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精、金剛烷基或其組合的官能基官能化。在另一方面，R11包含含有交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含至少一個選自-NH(W1)(O(W1))d-V的側鏈，其中W1係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；d係0至500的數均值；並且V係包含疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、C7-C12環烯基、降冰片基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、胺基、巰基、C1-C8羧基、 C1-C8羰基、-O-NH2、卡巴肼、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
Figure 108135606-A0202-12-0007-108
基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精或金剛烷基的合適的官能基。在另一方面，V係疊氮化物。
本文所述的另一個實施方式係一種用於製備交聯載體配製物之方法，該方法包括：(a)官能化載體分子R11；(b)製備反應性交聯劑；以及(c)藉由在約4℃至約60℃的溫度下孵育約0.5小時至約48小時，使該官能化的載體分子與該反應性交聯劑反應以形成交聯載體。在一方面，該載體分子包含透明質酸或聚乙二醇。在另一方面，該載體分子被疊氮化物、巰基、胺、胺氧基(O-NH2)或醛部分官能化以提供用於交聯的反應性官能基。在另一方面，該反應性交聯劑的製備包括使聚乙二醇與1-((三級丁氧羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸、3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸、1-(三級丁氧羰基)哌啶-4-甲酸、2-(1-(((三級丁氧羰基)胺基)甲基)環丙基)乙酸、2-甲基-3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸或7-((三級丁氧羰基)胺基)庚酸反應和使該官能化的聚乙二醇酯去保護。在另一方面，該反應性交聯劑的製備還包括在該官能化的聚乙二醇酯去保護後引入至少兩個雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基基團。另一方面包括可使用本文所述的方法獲得的交聯水凝膠。在另一方面，該載體分子被疊氮化物官能化。
本文所述的另一個實施方式係一種用於製備藥物加合物的方法，該藥物加合物包含與包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D偶合的無痕連接子R，該方法包括：(a)提供包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D；(b)使該生物活性劑與具有活化的羰基官能基的無痕連接子R反應；以及(c)從該等試劑中純化該藥物加合物。一方面係可使用本文所述的方法獲得的藥物加合物。
本文所述的另一個實施方式係一種用於製備藥物遞送系統之方法，該方法包括：(a)製備載體分子R11，其中R11係交聯水凝膠；視需要，步驟(a)還可以包括純化該交聯水凝膠載體分子R11；(b)分開地使無痕連接子R與包含至 少一個一級胺的ANGPTL3多肽D軛合，從而形成無痕連接子-D加合物；步驟(b)還可以視需要包括對該無痕連接子-D加合物的純化；(c)使該載體分子R11與該無痕連接子-D加合物軛合；以及(d)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。一方面係使用本文所述的方法製備的藥物遞送系統。
本文所述的另一個實施方式係一種用於治療黃斑變性之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0008-350
其中虛線表示與該一級胺附接；R1係氫或C1-C4烷基；R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；a係0、1、2、3或4；R3係氫或C1-C4烷基；R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；R12係氫或C1-C4烷基；R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R13係C1-C4烷基；或者CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環 烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；b係從1至10的整數；Z係CHR8或NR9；R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；q在每次出現時獨立地是1、2或3；g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；m係1或0；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。
本文所述的另一個實施方式係一種用於治療肌肉骨骼障礙之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0009-351
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；R1係氫或C1-C4烷基；R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；a係0、1、2、3或4；R3係 氫或C1-C4烷基；R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；R12係氫或C1-C4烷基；R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R13係C1-C4烷基；或者CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；b係從1至10的整數；Z係CHR8或NR9；R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；q在每次出現時獨立地是1、2或3；g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；m係1或0；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。
本文所述的另一個實施方式係一種用於治療疾病或障礙之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0011-352
其中虛線表示與該一級胺附接；R1係氫或C1-C4烷基；R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；a係0、1、2、3或4；R3係氫或C1-C4烷基；R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；R12係氫或C1-C4烷基；R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R13係C1-C4烷基；或者CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；b係從1至10的整數；Z係CHR8或NR9；R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；q在每次出現時獨立地是1、2或3；g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；m係1或0；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；A係氫、C1-C8烷基、 C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。
本文所述的另一個實施方式係一種用於延長包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D的半衰期之方法，該方法包括將D附接到由式(I)表示的R，其中R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0012-353
其中虛線表示與該一級胺附接；R1係氫或C1-C4烷基；R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；a係0、1、2、3或4；R3係氫或C1-C4烷基；R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；R12係氫或C1-C4烷基；R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；R13係C1-C4烷基；或者CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取 代的4至7員飽和雜環的環；b係從1至10的整數；Z係CHR8或NR9；R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；q在每次出現時獨立地是1、2或3；g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；m係1或0；W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且R11係載體。在一方面，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。
本文所述的另一個實施方式係一種包含式(III)之藥物遞送系統：
Figure 108135606-A0202-12-0013-354
其中ANGPTL3包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽或其組合。
本文所述的另一個實施方式係一種包含式(IV)之藥物遞送系統：
Figure 108135606-A0202-12-0013-355
其中D1包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽(SEQ ID NO：19)。
本文所述的另一個實施方式係一種包含D-R-R11的藥物遞送系統，其中R包含與生物活性劑D偶合的無痕連接子；D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R11包含多種透明質酸聚合物，其中每種聚合物包含一系列隨機的未官能化D-葡糖醛酸單體、一個或多個被交聯劑官能化的D-葡糖醛酸單體或一個或多個被藥物加合物D-R官能化的D-葡糖醛酸單體。在一方面，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXIV)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D係包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0014-356
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXV)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0015-357
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXVI)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0016-358
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXVII)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0017-359
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXVIII)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0018-360
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXIX)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0019-361
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXX)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
Figure 108135606-A0202-12-0020-362
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXI)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0020-363
其中虛線表示與該一級胺附接；Y係C(O)R4；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；Z係N-L-A；L係C(O)CH2CH2NH；A係R11；R11係衍生 自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]。
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXII)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
Figure 108135606-A0202-12-0021-364
本文所述的另一個實施方式係一種由式XXXIII表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0022-365
其中虛線表示與該一級胺附接；Y係C(O)R4；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；Z係N-L-A；L係C(O)CH2CH2NH；A係R11；R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[1-((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基-環丙烷-1-甲酸酯]。
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXIV)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
Figure 108135606-A0202-12-0023-366
本文所述的另一個實施方式係一種由式XXXV表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0023-367
其中虛線表示與該一級胺附接；Y係C(O)R4；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視 需要被C1-C4烷氧基取代；Z係N-L-A；L係C(O)CH2CH2NH；A係R11；R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[1-((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)哌啶-4-甲酸酯]。
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXVI)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
Figure 108135606-A0202-12-0024-368
本文所述的另一個實施方式係一種由式XXXVII表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0025-369
其中虛線表示與該一級胺附接；Y係C(O)R4；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；Z係N-L-A；L係C(O)CH2CH2NH；A係R11；R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[7-(((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基)庚酸酯]。
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXVIII)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
Figure 108135606-A0202-12-0026-370
本文所述的另一個實施方式係一種由式(XXXIX)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0026-371
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；Y係C(O)R4；R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；Z係N-L-A；L 係C(O)CH2CH2NH；A係R11；R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[2-甲基-3-(((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]。在一方面，D係D1(SEQ ID NO：19)，並且R4係-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)CH3或甲基環丙基。在另一方面，D係D1(SEQ ID NO：19)，並且R4係-CH3。在另一方面，該D-R加合物包含：
Figure 108135606-A0202-12-0027-372
[圖1]顯示了包含藉由無痕連接子與載體軛合的藥物的藥物遞送系統、和釋放後的藥物的動畫。引發物的反應產生親核官能基，該親核官能基裂解將藥物與藥物遞送系統連接的醯胺鍵。在此非限制性實例中，藥物藉由一級胺基團連接。
[圖2]顯示了水凝膠-藥物軛合物的部分化學表示，其中水凝膠由與PEG交聯的透明質酸組成，並且藥物藉由具有引發物Y的無痕連接子與水凝膠軛合。在圖2和整個說明書中，聚合物分子(例如透明質酸)表示為[P] n ，其中P表示單體重複單元，並且n表示單體的重複單元平均數。對於任何給定的聚合物群體，重複單元數係隨機分佈的。另外，本文所述的水凝膠或藥物遞送系統的獨立分子的相對連線性在群體內係隨機的。水凝膠或藥物遞送系統的結構描繪表 示二維的單個潛在的結構單元，然而該等複合物係具有許多結構亞單元的三維複合物。
[圖3A]顯示了無痕連接子與疊氮化物官能化的透明質酸聚合物的示例性反應。
[圖3B]顯示了無痕連接子與疊氮化物官能化的水凝膠的示例性反應。
[圖4A](說明性實例8.1)顯示了D1(SEQ ID NO：19)從水凝膠軛合物的體外釋放的實例。
[圖4B]顯示了D1(SEQ ID NO：19)從水凝膠軛合物C2-2的體外釋放。
[圖5](說明性實例9)顯示了D1(SEQ ID NO：19)從藉由關節內注射而在大鼠中施用的水凝膠軛合物C2-2的體內釋放。
本文描述了用於遞送包含一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑的藥物遞送系統、其藥學上可接受的鹽、與其相關的藥物遞送劑、包含該等藥物遞送系統的藥物組成物以及該等藥物遞送系統作為持續釋放治療劑的用途。
如本文所用，術語「烷基」係指直鏈、支鏈或環狀碳鏈。除非另有說明，烷基碳的一個或多個氫原子可以被取代基代替。烷基的代表性實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、異丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。當分子的兩個部分藉由烷基基團連接 時，它也稱為伸烷基。如本文所用，「低級烷基」係烷基的亞組，在一些實施方式中係較佳的，並且是指含有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烴基。低級烷基的代表性實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基等。除非另有指示，術語「烷基」或「低級烷基」旨在包括經取代的和未經取代的烷基或低級烷基，並且該等基團可以經另外的有機和/或無機基團取代，該另外的有機和/或無機基團包括但不限於選自以下的基團：鹵代(例如，以形成鹵代烷基)、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、環烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜環、雜環烷基、羥基、烷氧基(從而產生聚烷氧基，例如聚乙二醇)、烯基氧基、炔基氧基、鹵代烷氧基、環烷氧基、環烷基烷基氧基、芳基氧基、芳基烷基氧基、雜環氧基、雜環烷基氧基、巰基、胺基、烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、鹵代烷基胺基、環烷基胺基、環烷基烷基胺基、芳基胺基、芳基烷基胺基、雜環胺基、雜環烷基胺基、二取代的胺基、醯基胺基、醯基氧基、酯、醯胺、磺醯胺、脲、烷氧基醯基胺基、胺基醯基氧基、硝基、氰基烷基-S(O)m、鹵代烷基-S(O)m、烯基-S(O)n、炔基-S(O)m、環烷基-S(O)m、環烷基烷基-S(O)m、芳基-S(O)m、芳基烷基-S(O)m、雜環-S(O)m或雜環烷基-S(O)m，其中m=0、1、2或3。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「烯基」係指含有1至10、20或30個或更多個碳原子(或在低級烯基中，1至4個碳原子)的直鏈或支鏈烴，其在正鏈中包括1至4、5或6個或更多個雙鍵。烯基的代表性實例包括但不限於乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2,4-庚二烯等。除非另有指示，術語「烯基」或「低級烯基」旨在包括經取代的和未經取代的烯基或低級烯基，並且該等基團可以經如上文關於烷基和低級烷基所述的基團取代。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「炔基」係指含有1至10、20、30或40個或更多個碳原子(或在低級炔基中，1至4個碳原子) 的直鏈或支鏈烴，其在正鏈中包括1、2或3個或更多個三鍵。炔基的代表性實例包括但不限於2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基等。除非另有指示，術語「炔基」或「低級炔基」旨在包括經取代的和未經取代的炔基或低級炔基，並且該等基團可以經如上關於烷基和低級烷基所述相同的基團取代。
如本文所用，術語「環炔基」係指在環結構中包括至少1個或多個三鍵的具有在6與16個之間的碳原子和1、2或3個稠合的或橋連的環的環狀烴環系統。
如本文所用，術語「雜環炔基」係指在環結構中包括至少1個或多個三鍵的具有在6與16個之間的碳原子，1、2、3或4個獨立地選自氧、氮和硫的雜原子以及1、2或3個稠合的或橋接的環的環狀烴環系統。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「環烷基」係指含有3、4、5、6、7或8個碳(該等碳可以在如下所討論的雜環基團中被代替)的飽和的或部分不飽和的環狀烴基。環烷基的代表性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。該等環可以視需要經如本文所述的另外的取代基(例如鹵代或低級烷基)取代。除非另有說明，術語「環烷基」係通用的並且旨在包括如下所討論的雜環基團。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「雜環」或「雜環基」係指脂肪族的(例如，完全飽和的或部分飽和的雜環)或芳香族的(例如，雜芳基)單環的或雙環的環系統。單環的環系統例示為含有1、2、3或4個獨立地選自氧、氮和硫的雜原子的任何3元至8員環。5員環具有0-2個雙鍵，並且6員環具有0-3個雙鍵。單環的環系統的代表性實例包括但不限於氮雜環丁烷、氮呯、氮雜環丙烷、二氮呯、1,3-二氧戊環、二
Figure 108135606-A0202-12-0030-109
、二噻
Figure 108135606-A0202-12-0030-110
、呋喃、咪唑、咪唑啉、咪唑啶、異噻唑、異噻唑啉、異四氫噻唑、異
Figure 108135606-A0202-12-0030-111
唑、異
Figure 108135606-A0202-12-0030-112
唑啉、異
Figure 108135606-A0202-12-0030-113
唑烷、
Figure 108135606-A0202-12-0030-114
啉、
Figure 108135606-A0202-12-0030-115
二唑、
Figure 108135606-A0202-12-0030-116
二唑啉、
Figure 108135606-A0202-12-0030-117
二唑烷、
Figure 108135606-A0202-12-0030-118
唑、
Figure 108135606-A0202-12-0030-119
唑啉、
Figure 108135606-A0202-12-0030-120
唑烷、哌
Figure 108135606-A0202-12-0030-121
、哌啶、哌喃、吡
Figure 108135606-A0202-12-0031-122
、吡唑、吡唑啉、吡唑啶、吡啶、嘧啶、嗒
Figure 108135606-A0202-12-0031-123
、吡咯、吡咯啉、吡咯啶、四氫呋喃、四氫噻吩、四
Figure 108135606-A0202-12-0031-124
、四唑、噻二唑、噻二唑啉、噻二唑烷、噻唑、噻唑啉、四氫噻唑、噻吩、硫代
Figure 108135606-A0202-12-0031-125
啉、硫代
Figure 108135606-A0202-12-0031-126
啉碸、硫代哌喃、三
Figure 108135606-A0202-12-0031-127
、三唑、三噻
Figure 108135606-A0202-12-0031-128
等。雙環的環系統例示為與如本文所定義的芳基基團、如本文所定義的環烷基基團或如本文所定義的另一單環的環系統稠合的任何上述單環的環系統。雙環的環系統的代表性實例包括但不限於例如苯并咪唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、苯并噻吩、苯并
Figure 108135606-A0202-12-0031-129
二唑、苯并
Figure 108135606-A0202-12-0031-130
唑、苯并呋喃、苯并哌喃、苯并硫代哌喃、苯并二
Figure 108135606-A0202-12-0031-190
、1,3-苯并間二氧雜環戊烯、
Figure 108135606-A0202-12-0031-131
啉、吲唑、吲哚、吲哚啉、中氮茚、
Figure 108135606-A0202-12-0031-132
啶、異苯并呋喃、異苯并噻吩、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、酞
Figure 108135606-A0202-12-0031-134
、嘌呤、哌喃并吡啶、喹啉、喹
Figure 108135606-A0202-12-0031-135
、喹
Figure 108135606-A0202-12-0031-136
啉、喹唑啉、四氫異喹啉、四氫喹啉、硫代哌喃并吡啶等。該等環包括其季銨化衍生物，並且可以視需要經另外的有機和/或無機基團取代，該另外的有機和/或無機基團包括但不限於選自以下的基團：鹵代、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、環烷基、環烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜環、雜環烷基、羥基、烷氧基、烯基氧基、炔基氧基、鹵代烷氧基、環烷氧基、環烷基烷基氧基、芳基氧基、芳基烷基氧基、雜環氧基、雜環烷基氧基、巰基、胺基、烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、鹵代烷基胺基、環烷基胺基、環烷基烷基胺基、芳基胺基、芳基烷基胺基、雜環胺基、雜環烷基胺基、二取代的胺基、醯基胺基、醯基氧基、酯、醯胺、磺醯胺、脲、烷氧基醯基胺基、胺基醯基氧基、硝基、氰基、烷基-S(O)m、鹵代烷基-S(O)m、烯基-S(O)m、炔基-S(O)m、環烷基-S(O)m、環烷基烷基-S(O)m、芳基-S(O)m、芳基烷基-S(O)m、雜環-S(O)m、雜環烷基-S(O)m，其中m=0、1、2或3。
如本文所用，術語「雜芳基」如上關於雜環所述。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「環烷基烷基」、「環烷基烯基」和「環烷基炔基」係指分別藉由如本文所定義的烷基、烯基或炔基基團附加到母體分子部分的如本文所定義的環烷基基團。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「烷氧基」係指藉由氧基基團-O-附加到母體分子部分的如本文所定義的烷基或低級烷基基團(因此包括經取代的形式，例如聚烷氧基)。烷氧基的代表性實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基等。在一些方面，當烷氧基基團係較高複合物分子的一部分時，其包含藉由醚鍵附加到烷基或低級烷基的烷氧基取代基。
如本文所用，術語「鹵代」或「鹵素」係指任何合適的鹵素，包括-F、-Cl、-Br或-I。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「醯基」係指-C(O)R'自由基，其中R'係任何合適的取代基，例如芳基、烷基、烯基、炔基、環烷基或如本文所述的其他合適的取代基。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「烷硫基」係指藉由如本文所定義的巰基部分附加到母體分子部分的如本文所定義的烷基基團。烷硫基的代表性實例包括但不限於甲硫基、乙硫基、三級丁硫基、己硫基等。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「醯胺」、「醯胺基(amido)」或「醯胺基(amidyl)」係指-C(O)NRaRb自由基，其中Ra和Rb獨立地是任何合適的取代基，例如烷基、氫、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「酯」係指-C(O)OR'自由基，其中R'係任何合適的取代基，例如烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「醚」係指-COR'自由基，其中R'係任何合適的取代基，例如烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「碸」係指-S(O)(O)R'自由基，其中R'係任何合適的取代基，例如烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，單獨或作為另一基團的一部分的術語「磺醯胺」係指-S(O)2NRaRb自由基，其中Ra和Rb獨立地是任何合適的取代基，例如H、烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，術語「羧基」係指自由基-C(O)OH。
如本文所用，術語「羥基」係指自由基-OH。
如本文所用，術語「胺基」係指自由基-NH2。
如本文所用，乙烯基係指自由基-CH2CH2。
如本文所用，術語「磺酸酯」係指自由基-S(O)(O)OR'，其中R'係任何合適的取代基，例如烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，術語「磺醯基」係指自由基-S(O)(O)R'，其中R'係任何合適的取代基，例如烷基、環烷基、烯基、炔基或芳基。
如本文所用，巰基(thiol)係指自由基-SH。
如本文所用，羥基胺或胺氧基係指自由基-ONH2。
如本文所用，「醯肼」或「醯肼基」係指自由基-C(O)-NH-NH2。
如本文所用，「馬來醯亞胺或馬來醯亞胺基」係指具有分子式C2H2(C(O))2NH的環狀化合物或具有至少一個C-C雙鍵的自由基-N(C(O))2C2H2。
如本文所用，呋喃係指具有四個碳原子和一個氧的五元芳香族環。
如本文所用，「四
Figure 108135606-A0202-12-0034-137
」或「四
Figure 108135606-A0202-12-0034-138
基」係指具有分子式C2H2N4的含有四個氮原子的六元芳香族環或自由基-C2HN4。
如本文所用，術語「疊氮化物」、「疊氮基(azidyl)」或「疊氮基(azido)」係指-N3基團。
如本文所用，術語「BCN」係指雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基自由基，其中環外亞甲基可以具有相對於雙環的外型或內型取向，如下所示：
Figure 108135606-A0202-12-0034-373
如本文所用，在整個說明書中，為方便起見，大多數結構未描繪立體化學，因此代表所有可能的立體異構物。
具體而言，關於BCN與疊氮基化合物之間反應的三唑產物的結構，如本文所用，在整個說明書中，為方便起見，在單個區域化學位置上顯示了三唑環上的N連接的取代基。熟悉該項技術者應認識到，BCN炔烴與疊氮基化合物的反應將產生三唑的1位和3位上具有N連接的取代基的產物的立體異構混合物，如下所示：
Figure 108135606-A0202-12-0034-374
如本文所用，「反應性官能基」係指適於正交偶合反應的官能基。合適的反應性官能基係易於進行正交反應的那些。示例性且非限制性的正交化學反應包括表2中所示的官能基。
如本文所用，「引發物」係指存在於藥物無痕連接子加合物D-R中的官能基，其能夠發生化學反應而產生新的官能基。新官能基的存在顯著降低了藥物與相關無痕連接子之間的鍵的穩定性，並且導致藥物釋放的可能性增加。
術語「數均分子量」或「M n」係指樣品中所有分子的統計平均分子量，以g/mol為單位表示。數均分子量可以藉由本領域已知的技術來確定，例如凝膠滲透層析法(其中M n可以基於已知標準基於線上檢測系統例如折射率、紫外線或其他檢測器來計算)、黏度測定法、質譜法或依數法(例如，蒸氣壓滲透法、端基測定或質子NMR)。數均分子量由以下方程式定義，
Figure 108135606-A0202-12-0035-375
其中M i係分子的分子量，並且N i係該分子量的分子數。
術語「重均分子量」或「M w」係指所有分子的統計平均分子量，在確定其對分子量平均值的貢獻時考慮到每個分子的重量，以g/mol為單位表示。給定分子的分子量越高，該分子對M w值的貢獻將越大。重均分子量可以藉由對分子大小敏感的本領域已知的技術來計算，例如靜態光散射、小角中子散射，X射線散射和沈降速度。重均分子量由以下方程式定義，
Figure 108135606-A0202-12-0035-376
其中「M i」係分子的分子量，並且「N i」係該分子量的分子數。
術語「黏均分子量」或「M v」係指所有分子的統計平均分子量，在確定其對分子量平均值的貢獻時考慮到每個分子的重量，以g/mol為單位表示。大分子或聚合物具有比較小分子更高的黏度。黏均分子量由以下方程式定義，
Figure 108135606-A0202-12-0036-377
其中「M i」係分子的分子量，並且「N i」係該分子量的分子數，並且a係由分子、溶劑和溫度決定的常數。柔性聚合物分子具有0.5
Figure 108135606-A0202-12-0036-139
a
Figure 108135606-A0202-12-0036-140
0.8的a值。半柔性聚合物分子具有a
Figure 108135606-A0202-12-0036-141
0.8。黏均分子量可以藉由特性黏度實驗或尺寸排阻層析法來確定。
如本文所用，「藥物」包含一個或多個生物活性部分，其包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子。生物活性部分可以是小分子、大分子(例如蛋白質、肽或核酸)或其組合。具體關於無痕連接子R，藥物或生物活性部分包含在D-R表示中的「D」。術語或短語「藥物」、「生物活性分子」、「生物活性部分」、「生物活性劑」、「活性劑」或「D」係指可以影響生物有機體(包括但不限於病毒、細菌、真菌、植物、動物和人)的任何物理或生化特性的任何物質。具體而言，藥物或生物活性分子包括旨在診斷、治癒、緩解、治療或預防人或其他動物疾病，或旨在以其他方式增強人或動物的身心健康的任何物質。
在一個實施方式中，生物活性部分D包含血管生成素樣3(ANGPTL3)多肽。「ANGPTL3」指血管生成素蛋白家族的成員。人ANGPTL3的胺基酸序列(GenBank登錄號NP_055310.1)列示於SEQ ID NO：1；並且相應的多核苷酸序列示為SEQ ID NO：2(NCBI參考序號NM014495.2，其中ANGPTL3編碼序列包含SEQ ID NO：2的核苷酸52-1434)。參見表1。出於本揭露的目的，通常參考全長野生型人ANGPTL3多肽序列(SEQ ID NO：1)確定胺基酸的編號。因此，在本發明的多肽僅含有全長ANGPTL3的C-末端部分但不含有N-末端部分的實施方式中，儘管該肽的長度小於460個胺基酸，但該等位置的編號係基於SEQ ID NO：1。例如，對ANGPTL3多肽的胺基酸位置423的提及係指SEQ ID NO：1的 位置423，即使本發明的ANGPTL3多肽本身長度可能僅為200個胺基酸。在確定目的序列中「對應於」參考序列(例如SEQ ID NO：1)中的位置的胺基酸時，這藉由最佳地比對該等序列來進行，例如使用預設的CLUSTAL比對參數或預設的BLAST2比對參數並且比較該等序列來進行。例如，在「參考SEQ ID NO：1確定的」目的序列中的位置423或「對應於」SEQ ID NO：1的位置423的胺基酸意指當目的序列與SEQ ID NO：1最佳地比對時與SEQ ID NO：1的位置423對齊的胺基酸。
在一個實施方式中，生物活性部分D包含ANGPTL3多肽D1。如本文所用，D1係指具有SEQ ID NO：19的序列的ANGPTL3多肽。
術語「肽模擬物」和「模擬物」係指合成的化學化合物，該化合物與天然或非天然存在的多肽(例如，ANGPTL3)具有基本上相同的功能特徵，但不同的(儘管通常是相似的)結構特徵。肽類似物在本領域中通常用作和模板肽具有類似特性的非肽活性化合物(例如，藥物)。此類非肽化合物被稱為「肽模擬物」(「peptide mimetic」或「peptidomimetic」)。Fauchere,J.Adv.Drug Res.[高級藥物研究雜誌]15：29(1986)；Veber和Freidinger TINS第392頁(1985)；Evans等人J.Med.Chem.[藥物化學雜誌]30：1229(1987)。與治療上有用的肽在結構上相似的肽模擬物可以用於產生等同或增強的治療或預防效果。通常，肽模擬物與範例多肽(即，具有生物學或藥理學活性的多肽)在結構上相似(例如在目的多肽中發現的)，但一個或多個肽鍵視需要被選自由例如以下組成的組的鍵代替：-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(順式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。模擬物可以完全由合成的非天然胺基酸類似物組成，或者係部分天然肽胺基酸和部分非天然胺基酸類似物的嵌合分子。模擬物也可以摻入任何數量的天然胺基酸保守取代，只要此類取代也不實質地改變模擬物的結構和/或活 性即可。例如，如果模擬物組成物能夠具有ANGPTL3多肽的成軟骨活性，則該模擬物組成物落入本文所述的多肽的範圍內。
術語「多肽」、「肽」和「蛋白質」在本文中可互換使用來指胺基酸殘基的聚合物。該術語適用於其中的一個或多個胺基酸殘基係相應天然存在的胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸聚合物，並且適用於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。本文所述的多肽、肽和蛋白質包含具有成軟骨活性的蛋白酶抗性ANGPTL3肽模擬物。
術語「胺基酸」係指天然存在的和合成的胺基酸、以及以類似於天然存在的胺基酸的方式發揮功能的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸係由遺傳密碼編碼的那些、以及後來經修飾的那些胺基酸(例如，羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸和O-磷酸絲胺酸)。胺基酸類似物係指與天然存在的胺基酸具有相同的基本化學結構(即，結合到氫、羧基基團、胺基基團和R基團的α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有經修飾的R基團(例如，正白胺酸)或經修飾的肽骨架，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。天然編碼的胺基酸為20種常見胺基酸(丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸和纈胺酸)以及吡咯離胺酸、吡咯啉-羧基-離胺酸和硒代半胱胺酸。
「保守修飾的變體」適用於胺基酸和核酸序列。對於特定核酸序列，保守修飾的變體係指編碼相同或基本上相同的胺基酸序列的那些核酸，或者在該核酸不編碼胺基酸序列的情況下，係指基本上相同的序列。由於遺傳密碼的簡並性，大量功能上相同的核酸編碼任何給定的蛋白質。例如，密碼子GCA、GCC、GCG和GCU均編碼胺基酸丙胺酸。因此，在密碼子指定丙胺酸的每個位 置，該密碼子可以改變為任何所述的相應密碼子而不改變編碼的多肽。此類核酸變異係「沈默變異」，其係保守修飾變異中的一種。本文中每一個由多核苷酸編碼的多肽序列都涵蓋該核酸的每一種可能的沈默變異。技術人員應認識到，核酸中的每個密碼子(除了通常是甲硫胺酸的唯一密碼子的AUG和通常是色胺酸的唯一密碼子的TGG)均可以被修飾以產生功能上相同的分子。因此，在每個所述序列中均隱含了編碼多肽的核酸的每一種沈默變異。
技術人員應認識到，核酸、肽、多肽或蛋白質序列的個別取代、缺失或添加(這相對於原始編碼的胺基酸序列改變、添加或缺失單個胺基酸或小百分比的胺基酸)產生「保守修飾的變體」，其中該改變產生了對一個胺基酸用化學上相似的胺基酸的取代和/或如下多肽序列，該多肽序列產生與原始蛋白質具有相似功能活性的在結構上相似的蛋白質。提供在功能上相似的胺基酸的保守取代表在本領域係熟知的。此類保守修飾的變體係對如本文所述的多態變體、種間同源物和等位基因的補充，並且不排除該等多態變體、種間同源物和等位基因。
術語「保守胺基酸取代」係指來自一個這樣的組的胺基酸被來自同一組的不同胺基酸取代(從概念上或以其他方式)。取代的一個實例係基於分析同源有機體的相應蛋白質之間的胺基酸變化的歸一化頻率。根據此類分析，可以定義胺基酸組，其中組內的胺基酸優先地彼此交換，因此就其對總體蛋白質結構的影響而言彼此最為相似。參見Schulz和Schirmer,Principles of Protein Structure[蛋白質結構原理]，Springer-Verlag[施普林格出版公司]。以這種方式定義的一組胺基酸基團的一個實例包括：(i)帶電組，由Glu和Asp、Lys、Arg和His組成；(ii)帶正電組，由Lys、Arg和His組成；(iii)帶負電組，由Glu和Asp組成；(iv)芳香族組，由Phe、Tyr和Trp組成；(v)氮環組，由His和Trp組成；(vi)大脂肪族非極性組，由Val、Leu和Ile組成；(vii)輕極性組，由Met和Cys組成；(viii)小 殘基組，由Ser、Thr、Asp、Asn、Gly、Ala、Glu、Gln和Pro組成；(ix)脂肪族組，由Val、Leu、Ile、Met和Cys組成；以及(x)小羥基組，由Ser和Thr組成。基於共有物理特性的保守取代的其他實例為以下組內的取代：(1)丙胺酸(A)、甘胺酸(G)；(2)天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)；(3)天冬醯胺(N)、麩醯胺酸(Q)；(4)精胺酸(R)、離胺酸(K)；(5)異白胺酸(I)、白胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)；(6)苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)；(7)絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)；以及(8)半胱胺酸(C)、甲硫胺酸(M)。參見Creighton,Proteins[蛋白質](1984)。
「序列同一性百分比」藉由在比較窗中比較兩個最佳比對的序列來確定，其中比較窗中的胺基酸序列或多核苷酸序列部分與不包含添加或缺失的參考序列(例如，ANGPTL3多肽)相比可以包含添加或缺失(即，空位)，以實現這兩個序列的最佳比對。該百分比藉由如下方式來計算：確定在兩個序列中出現相同核酸鹼基或胺基酸殘基的位置的數目以得到匹配位置數，用該匹配位置數除於比較窗中的位置總數，結果乘以100，以得到序列同一性百分比。
在兩個或更多個核酸或多肽序列的情況下，術語「相同」或「同一性」百分比可以指兩個或更多個作為相同序列的序列或子序列。當在比較窗或指定區域內進行比較和比對以尋求如使用以下序列比較演算法之一或藉由手動比對和目視檢查所測量的最大對應時，如果兩個序列具有規定百分比的相同的胺基酸殘基或核苷酸(即，在規定區域上或當沒有規定時則在整個序列上，95%同一性，視需要96%、97%、98%或99%同一性)，則兩個序列係「基本上相同的」。分別與本文例示的多肽(例如，SEQ ID NO：1、3-45中的任一者)基本上相同的多肽及其用途，包括但不限於用於治療或預防關節炎或關節損傷的用途。視需要，對於核酸，同一性存在於長度為至少約150個核苷酸的區域上、或更較佳的是長度為300至450個或600個或更多個核苷酸的區域上、或參考序列的全長 上。視需要，對於胺基酸序列，同一性存在於長度為至少約50個胺基酸的區域上、或更較佳的是長度為100至150個或200個或更多個胺基酸的區域上、或參考序列的全長上。
為了序列比較，通常一個序列充當參考序列，測試序列與其進行比較。當使用序列比較演算法時，將測試序列和參考序列輸入到電腦中，必要時指定子序列座標，並且指定序列演算法程式參數。可以使用預設程式參數，或者可以指定替代參數。然後，序列比較演算法將基於程式參數計算測試序列相對於參考序列的序列同一性百分比。
如本文所用，「比較窗」包括提及選自由50至600、通常約75至約200、更通常約100至約150組成的組的多個鄰接位置中的任何一個的區段，其中在兩個序列最佳比對後，可以將序列與相同數量的鄰接位置的參考序列進行比較。用於比較的序列比對方法在本領域係熟知的。用於比較的序列最佳比對可以例如藉由如下方式來進行：藉由Smith和Waterman(1970)Adv.Appl.Math.[應用數學進展]2：482c的局部同源性演算法、藉由Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]48：443的同源比對演算法、藉由Pearson和Lipman(1988)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]85：2444的相似性搜索方法、藉由該等演算法的電腦化實施(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或藉由手動對齊和目視檢查。參見例如，Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學實驗指南](1995)。
適於確定序列同一性百分比和序列相似性的演算法的兩個實例係BLAST和BLAST 2.0演算法，它們分別描述於Altschul等人(1977)Nuc.Acids Res.[核酸研究]25：3389-3402和Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]215：403-410。用於執行BLAST分析的軟體可藉由美國國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)公開地獲得。此演算法包括首先 藉由鑒定查詢序列中長度為W的短字來鑒定高評分序列對(HSP)，當與數據庫序列中的相同長度的字比對時，該長度為W的短字匹配或滿足一些正值閾值得分T。T被稱為鄰域詞得分閾值(Altschul等人，同上)。該等最初的鄰域字命中點作為種子，用於啟動搜索以找到包含它們的更長的HSP。字命中點沿著每個序列在兩個方向上擴展，遠至可以增加累積比對得分。對於核苷酸序列，使用參數M(一對匹配殘基的獎勵得分；總是>0)和N(錯配殘基的罰分；總是<0)計算累積得分。對於胺基酸序列，使用評分矩陣來計算累積得分。當出現以下情形時，字命中點向各方向的延伸終止：累積比對得分從其最大獲得值跌落數量X；由於一個或多個負評分殘基比對的累積，累積得分走向零或更低；或到達任一序列的一端。BLAST演算法參數W、T和X決定了比對的靈敏度和速度。BLASTN程式(對於核苷酸序列)使用字長(W)為11、期望值(E)為10、M=5、N=-4以及兩條鏈的比較作為預設值。對於胺基酸序列，BLASTP程式使用字長為3和期望(E)為10以及BLOSUM62評分矩陣作為預設值。參見Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]89：10915(1989)比對(B)為50、期望(E)為10、M=5、N=-4以及兩條鏈的比較。
BLAST演算法還執行兩個序列之間相似性的統計分析。參見Karlin和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]90：5873-5787(1993)。由BLAST演算法提供的一種相似性量度係最小總和概率(P(N))，其提供了兩個核苷酸或胺基酸序列之間偶然發生匹配的概率的指示。例如，如果在測試核酸與參考核酸的比較中的最小總和概率小於約0.2、更較佳的是小於約0.01、最較佳的是小於約0.001，則認為核酸與參考序列相似。
當應用於核酸或蛋白質時，術語「分離的」表示該核酸或蛋白質被純化為基本上不含天然狀態下與其結合的其他細胞組分。它通常處於同質或接近同質的狀態。它可以是乾燥的或者係水溶液。純度和均質性可以使用本領域 已知且通常使用的分析化學技術(例如，聚丙烯醯胺凝膠電泳、高效液相層析法等)確定。作為製劑中存在的主要種類的蛋白質基本上得到純化。在一些方面中，術語「純化的」表示蛋白質在電泳凝膠中產生基本上一條帶。通常，這意味著蛋白質為至少85%純、更較佳的是至少95%純、最較佳的是至少99%純。
如本文所用，該ANGPTL3多肽可以是天然的或重組的並且可以來自任何物種；ANGPTL3肽也可以是合成的。在一方面，該ANGPTL3多肽包含智人ANGPTL3、其突變體、其缺失或其截短形式的序列。特別有用的是使用全長野生型人ANGPTL3序列(SEQ ID NO：1)的編號包含胺基酸K423的突變體或缺失的ANGPTL3多肽。在另一方面，該ANGPTL3多肽在美國專利號9,301,971；9,649,359；9,745,358；9,868,771或歐洲專利號EP2 964 250中有描述，將其中的每一篇專利藉由引用與ANGPTL3多肽及其序列相關的具體指導而併入本文。在另一方面，該ANGPTL3多肽係蛋白酶抗性多肽。在一方面，該ANGPTL3多肽係相對於天然野生型肽序列在R或K殘基上具有胺基酸取代的蛋白酶抗性多肽。
在另一方面，該ANGPTL3多肽係D1(SEQ ID NO：19)，其包含使用全長野生型人ANGPTL3序列(SEQ ID NO：1)的編號具有K423Q突變的人ANGPTL3的截短形式(例如，胺基酸242-460)。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含如表1所示的SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含由SEQ ID NO：2或其突變體或缺失的DNA序列編碼的多肽。在一方面，該ANGPTL3多肽包含與SEQ ID NO：1或3-45具有80%-99%同一性(包括指定範圍內所有整數)的序列。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含與表1中所示的任何序列具有至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性或至少99%同一性的胺基酸序列，其中該多肽在如參考SEQ ID NO：1所確定的位置423處包含作為除K或R之外的極性胺基酸的胺基酸。在一方面，該ANGPTL3多肽具有成軟骨活性。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含與SEQ ID NO：1或3- 45中任一個具有至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性或至少99%同一性的胺基酸序列。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含由與SEQ ID NO：2的編碼部分(例如，核苷酸52-1434)具有90%-100%同一性的DNA序列(包括編碼突變、截斷或缺失的DNA序列)編碼的多肽。
Figure 108135606-A0202-12-0044-378
Figure 108135606-A0202-12-0045-379
Figure 108135606-A0202-12-0046-380
如本文所用，「包含至少一個一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分」係指在附接到無痕連接子之前的游離生物活性部分或從無痕連接子加合物「D-R」裂解後產生的游離生物活性部分「D-H」。在一些方面，該藥物加合物D-R可能具有生物活性。在一些方面，生物活性部分包含如本文所述的ANGPTL3多肽。
如本文所用，藥物或生物活性部分的「游離形式」係指例如在附接到無痕連接子之前或在藥物遞送系統中從無痕連接物釋放後未修飾的藥理活性形式的藥物。
如本文所用，「無痕連接子」R係由式(I)表示的適於釋放包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0046-381
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在另一個實施方式中，R係由式(I)表示的適於釋放包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0048-382
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子Q-[Sp-Q]h-Q；
Q在每次出現時獨立地選自鍵、O、C(O)、N(H)、N(C1-C4烷基)、C(O)NH、C(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)、N(C1-C4烷基)C(O)、N(H)C(O)O、N(C1-C4烷基)C(O)O、OC(O)N(H)、OC(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)N(H)、N(C1-C4烷基)C(O)N(H)、N(H)C(O)N(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)C(O)N(C1-C4烷基)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、S、S(O)2、N(H)S(O)2、N(C1-C4烷基)S(O)2、S(O)2N(H)、S(O)2N(C1-C4烷基)、C1-C2烷基-C(O)N(H)、N(H)C(O)C1-C2烷基、C1-C2烷基-C(O)O、OC(O)C1-C2烷基、1,2,3-三唑、OP(O)2、P(O)2O、C1-C4烷基-P(O)2-O或O-P(O)2-C1-4烷基；
Sp在每次出現時獨立地選自視需要經取代的C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、[W-O]g、C1-C8烷基-[O-W]g、[O-W]g-O-C1-C8烷基、C1-C8烷基-[O-W]g-O-C1-C8烷基、寡肽；
h係在1與20之間的整數；
g係在約2與約50之間的加權平均數；
W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在另一個實施方式中，R係由式(I)表示的適於釋放包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0050-383
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CHR8或NR9；
R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
q在每次出現時獨立地是1、2或3；
g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
m係1或0；
W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在一方面，該無痕連接子係適於持續釋放生物活性部分的連接子。在一方面，「R」係在表示D-R中的無痕連接子，其中「D」係指包含含有至少一個一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分的藥物。
如本文所用，「藥物加合物」係連接到無痕連接子R的藥物D。具體關於無痕連接子R，該藥物加合物包含「D-R」。
如本文所用，「載體」係可溶性聚合物、生物聚合物或交聯聚合物或生物聚合物。載體包含蛋白質、核酸、碳水化合物或聚乙二醇。在一方面，該一種或多種載體係分子間地、分子內地或其組合地交聯的。在一方面，該交聯載體包含水凝膠。具體關於無痕連接子R，該載體包含R11。在一方面，Z連接到載體，通常是聚合物或水凝膠。該載體直接或藉由不可裂解的間隔子附接到該無痕連接子R。作為非限制性實例，載體可以包含能夠形成水凝膠的聚乙二醇、透明質酸聚合物或交聯透明質酸或聚乙二醇。
如本文所用，「聚合物」係指由藉由化學鍵以直鏈、環狀、支鏈或樹枝狀方式或其組合連接的重複結構單元(單體)組成的分子，該等重複結構單元(單體)可以具有合成來源或生物來源或兩者的組合。通常，聚合物具有至少1kDa的平均分子量。共聚物係由至少兩個在化學上不同的單體組成的聚合物。通常，聚合物由具有分子量分佈的分子組成。描述聚合物分子量分佈的一種方式係平均分子量。通常，聚合物由具有聚合度分佈的分子組成。描述聚合物聚合度分佈的一種方式係平均聚合度。
如本文所述和在本文結構中所描繪的，聚合物分子(例如聚乙二醇或透明質酸)表示為[P] n ，其中P表示單體重複單元，並且n表示聚合物中單體的平均聚合度。熟悉該項技術者應理解，如果差異係n的約10%或更小，則用相同重複單元P但不同n描繪的兩個聚合物分子被認為係等同的。對於本文結構中描述的和描繪的透明質酸共聚物，單體在聚合物中的分佈係未限定的並且假定 為隨機的。另外，本文所述的水凝膠或藥物遞送系統的獨立分子的相對連線性在群體內係隨機的。水凝膠或藥物遞送系統的結構描繪表示二維的單個潛在的結構單元，然而該等複合物係具有許多結構亞單元的三維複合物。
如本文所述，對於無痕連接子-藥物加合物R-D，醯胺鍵形成的確切位置不能精確地瞭解。當D含有一個以上能夠與連接子R(例如，蛋白質或多肽)形成醯胺鍵的一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子時，會發生這種情況。為方便起見，本文描繪了醯胺鍵形成的位置未確切已知的加合物如下：
Figure 108135606-A0202-12-0053-384
如本文所用，「水凝膠」係指能夠吸收大量水的三維的親水性或兩親性聚合物網路。該網路由均聚物或共聚物組成，並且由於共價化學或物理(離子、疏水性相互作用、纏結)交聯的存在而不溶。該交聯提供了網路結構和物理完整性。水凝膠表現出與水的熱力學相容性，從而使其在水性介質中溶脹。網路的鏈以存在孔並且尺寸小於該孔的水溶性溶質能夠在網路內外擴散的方式連接。
如本文所用，「連接子」或「非生物活性連接子」係指不產生任何藥理作用的連接子。在一些實施方式中，該連接子包含與生物系統相容的二價或多價有機連接子。「二價」係指在聚合物的每個末端具有適於附接到無痕連接子或藥物D的反應性基團。「多價」係指在具有另外的沿著連接子分子散佈的反應性部分的聚合物的每個末端具有適於附接到無痕連接子或藥物D的反應性基團。
如本文所用，「藥物遞送系統」包含載體連接到藥物加合物D-R-R11，其中該載體包含R11。如本文所述的藥物遞送系統係包含一種或多種藥物D；一種或多種無痕連接子R；和一種或多種載體R11的分子軛合物。在一些實施方式中，可以有多種不同的藥物種類與藥物遞送系統軛合。例如，兩種不同的藥物(例如如本文所述的D1和另一種ANGPTL3多肽)可以在單一藥物遞送系統中軛合。
如本文所用，短語「水不溶性」係指可膨脹的三維交聯分子網路形成水凝膠。如果將水凝膠懸浮於大量過量的水或生理莫耳滲透壓的水性緩衝液中，則可能會吸收大量的水，例如以重量/重量計多達10倍，因此係可溶脹的，但在除去多餘的水後仍保留凝膠的物理穩定性和形狀。這種形狀可以屬於任何幾何形狀，並且應理解，這種單個水凝膠對象應被認為係由組分組成的單個分子，其中每種組分藉由化學鍵彼此連接。
如本文所用，「持續釋放」或「持續釋放速率」係指達到所需治療效果所需的對應的藥物遞送系統的後續劑量之間的間隔擴大的情況。每日劑量的藥物可以例如變成兩次施用之間間隔一週或甚至更長時間的持續釋放形式。
如本文所用，「官能基」係指分子內表現出特定化學活性的原子團。實例係醯胺、胺、醇、羰基化合物、羧酸、硫醇(thiol)。
如本文所用，「保護基」係指在合成期間暫時保護分子的官能基以在後續化學反應中獲得化學選擇性的部分。醇的保護基係例如苄基和三苯甲基，胺的保護基係例如三級丁氧基羰基、9-茀基甲基氧基羰基和苄基，並且對於硫醇，保護基的實例係2,4,6-三甲氧基苄基、苯硫基甲基、乙醯胺基甲基、對甲氧基苄基氧基羰基、三級丁硫基、三苯甲基、3-硝基-2-吡啶硫基、4-甲基三苯甲基。
如本文所用，「受保護的官能基」意指藉由一個或多個保護基保護的官能基。
如本文所用，「PBS」係指磷酸鹽緩衝鹽水。
如本文所用，術語「藥學上可接受的鹽」係指保留生物活性劑的生物有效性和特性並且通常不是生物學或其他方面不期望的鹽。在許多情況下，該生物活性劑能夠因存在胺基和/或羧基基團或與之類似的基團而形成酸鹽和/或鹼鹽。
藥學上可接受的酸加成鹽可以採用無機酸和有機酸形成，例如乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、膽茶鹼(chlortheophyllinate)、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳糖醛酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、鹼式水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。
可以衍生出鹽的無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以衍生出鹽的有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。
可以用無機鹼和有機鹼形成藥學上可接受的鹼加成鹽。
可以衍生出鹽的無機鹼包括例如銨鹽和來自元素週期表第I至XII族的金屬。在某些實施方式中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅；特別合適的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。
可以衍生出鹽的有機鹼包括例如一級胺、二級胺和三級胺；經取代的胺(包括天然存在的經取代的胺)；環胺；鹼性離子交換樹脂等。某些有機胺包括異丙胺、苄星青黴素、膽鹼鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌
Figure 108135606-A0202-12-0056-142
或三級丁三醇。
藥學上可接受的鹽可以藉由常規化學方法從鹼性或酸性部分的母體化合物合成。
通常，此類鹽可以藉由使該等化合物的游離酸形式與化學計量量的適當的鹼(例如鈉、鉀、鈣或鎂的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應來製備，或者藉由使該等化合物的游離鹼形式與化學計量量的適當的酸反應來製備。此類反應通常在水中或在有機溶劑中或在二者的混合物中進行。通常，如果可行的話，使用非水性介質(像醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)係可取的。另外的合適的鹽的列表可見於例如「Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明頓藥物科學]」，第18版，Mack Publishing Company[麥克出版公司]，賓夕法尼亞州伊斯頓，(1990)；以及Stahl和Wermuth的「Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use[藥物鹽手冊：特性、選擇和使用]」(Wiley-VCH出版社，德國魏因海姆，2002)。
如本文所用，術語「藥學上可接受的載體」包括任何和所有溶劑、分散介質、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料等及其組合，如熟悉該項技術者應已知的(參見例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明頓藥物科學]，第18版Mack Printing Company[麥克出版公司]，1990，第1289-1329頁)。除非任何常規載體與活性成分不相容，考慮了其在治療或藥物組成物中的使用。
術語生物活性劑的「治療有效量」係指生物活性劑的將引起受試者的生物學或醫學反應(例如，改善症狀、減輕病症、減慢或延緩疾病進展或者預防疾病等)的量。
在另一個非限制性實施方式中，術語「治療有效量」係指生物活性劑的如下量，當施用細胞、或組織、或非細胞生物材料或介質時，該量可有效地至少部分地治療疾病或障礙。如熟悉該項技術者應理解的，有效的特定藥劑的絕對量可以根據諸如所需的生物學終點、待遞送的藥劑、靶組織等因素而變化。熟悉該項技術者理解，「治療有效量」能以單劑量施用或這可以藉由多劑量的施用來實現。例如，在藥劑治療心臟衰竭的情況下，有效量可以是足以導致患者臨床改善(例如，運動耐量/能力增加、血壓升高、液體瀦留減少/或在心臟功能的定量試驗時結果改善，例如射血分數、運動能力(達到筋疲力盡的時間)等)的量。
如本文所用，術語「受試者」係指動物。通常，該動物係哺乳動物。受試者還指例如靈長類動物(例如，人和非人靈長類動物)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥等。在某些實施方式中，該受試者係靈長類動物。在又其他實施方式中，該受試者係人。
如本文所用，術語「抑制(inhibit)」、「抑制(inhibition)」或「抑制(inhibiting)」係指減輕或抑制給定的病症、症狀、或障礙、或疾病，或者在生物活動或過程的基線活性方面的顯著降低。
如本文所用，術語任何疾病或障礙的「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」在一個實施方式中係指改善疾病或障礙(即，減慢或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀的發展)。在另一個實施方式中， 「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指減輕或改善至少一種身體參數，包括不能被患者辨別的那些。在又另一個實施方式中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指在身體上(例如，可辨別的症狀的穩定化)、在生理上(例如，身體參數的穩定化)或二者上調節疾病或障礙。在又另一個實施方式中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指預防或延緩疾病或障礙的發作或發展或進展。如本文所用，術語「預防(prevent)」、「預防(preventing)」和「預防(prevention)」係指防止由治療(例如，治療劑)的施用或治療組合(例如，治療劑組合)的施用而導致的受試者的障礙的一種或多種症狀的復發、發作或發展。
如本文所用，如果受試者將在生物學上、在醫學上或在生活品質上從治療中獲益，則該受試者係「需要(in need of或in need thereof)」這種治療的。
如本文所用，術語「一個/種(a)」、「一個/種(an)」、「該(the)」以及在本文中使用的類似術語(特別是在申請專利範圍的上下文中)應被解釋為涵蓋單數和複數二者，除非在本文中另有指示或與上下文明顯相矛盾。
如本文所用，術語「約」係指在被術語「約」修飾的值的高達±10%的變化內的任何值，包括整數和分數部分二者。
術語「或」可以是連詞的或轉折的，使得「或」涵蓋「和/或」。
本文所述的一個實施方式係包含藥物和無痕連接子的藥物加合物D-R，其中R係由式(I)表示的適於釋放包含含有至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的ANGPTL3多肽的D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0059-385
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環 雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
本文所述的另一個實施方式係包含藥物和無痕連接子的藥物加合物D-R，其中R係由式(I)表示的適於釋放包含含有至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的ANGPTL3多肽的D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0060-386
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子Q-[Sp-Q]h-Q；
Q在每次出現時獨立地選自鍵、O、C(O)、N(H)、N(C1-C4烷基)、C(O)NH、C(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)、N(C1-C4烷基)C(O)、N(H)C(O)O、N(C1-C4烷基)C(O)O、OC(O)N(H)、OC(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)N(H)、N(C1-C4烷基)C(O)N(H)、N(H)C(O)N(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)C(O)N(C1-C4烷基)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、S、S(O)2、N(H)S(O)2、N(C1-C4烷基)S(O)2、S(O)2N(H)、S(O)2N(C1-C4烷基)、C1-C2烷基-C(O)N(H)、N(H)C(O)C1-C2烷基、C1-C2烷基-C(O)O、OC(O)C1-C2烷基、1,2,3-三唑、OP(O)2、P(O)2O、C1-C4烷基-P(O)2-O或O-P(O)2-C1-4烷基；
Sp在每次出現時獨立地選自視需要經取代的C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、[W-O]g、C1-C8烷基-[O-W]g、[O-W]g-O-C1-C8烷基、C1-C8烷基-[O-W]g-O-C1-C8烷基、寡肽；
h係在1與20之間的整數；
g係在約2與約50之間的加權平均數；
W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
本文所述的另一個實施方式係包含藥物和無痕連接子的藥物加合物D-R，其中R係由式(I)表示的適於釋放包含含有至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的ANGPTL3多肽的D的連接子：
Figure 108135606-A0202-12-0062-387
其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
R1係氫或C1-C4烷基；
R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
a係0、1、2、3或4；
R3係氫或C1-C4烷基；
R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
R12係氫或C1-C4烷基；
R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
R13係C1-C4烷基；或者
CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
b係從1至10的整數；
Z係CHR8或NR9；
R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
q在每次出現時獨立地是1、2或3；
g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
m係1或0；
W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在一些方面，式(I)之R1-R8具有以下含義。在一方面，R1係氫或甲基。在另一方面，R1a係氫或甲基。在另一方面，R1和R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基。在另一方面，R2係甲基。在另一方面，兩個R2基團一起組合形成稠合的或螺C3-C6環烷基基團。在另一方面，R3係氫或甲基。在另一方面，R3a係氫或甲基。在另一方面，R3和R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基。在另一方面，Y係C(O)R4，並且R4係C1-C6烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷基或C1-C6烷氧基。在另一方面，R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基。在另一方面，Y係SiR5R6OR7；並且R5和R6各自係甲基、乙基、丙基或異丙基；並且R7係乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、三級丁基、乙氧基乙基、乙氧基異丙基、四氫哌喃基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中b係2、3或4。
在一些方面，式(I)之R8和R9具有以下含義。在一方面，R9係C(O)C2胺基甲醯基。在另一方面，R9係C(O)C2醯胺基。在另一方面，R9係C(O)C5烷基。在另一方面，R9係C(O)C2烷基。在另一方面，R9係C(O)C1烷基。在另一方面，R9係C(O)CH2CH2NHC(O)CH2CH2CH2CH2。在另一方面，R9係C(O)(CH2CH2O)bCH2CH2，其中b係1、2、3或4。在另一方面，R9係醯胺基。在另一方面，R9係胺基甲醯基。在另一方面，R9係C1烷基醯胺基。在另一方面，R9係C2烷基醯胺基。
在一些方面，Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在一些方面，Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
L係視需要經取代的二價連接子Q-[Sp-Q]h-Q；
Q在每次出現時獨立地選自鍵、O、C(O)、N(H)、N(C1-C4烷基)、C(O)NH、C(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)、N(C1-C4烷基)C(O)、N(H)C(O)O、N(C1-C4烷基)C(O)O、OC(O)N(H)、OC(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)N(H)、N(C1-C4烷基)C(O)N(H)、N(H)C(O)N(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)C(O)N(C1-C4烷基)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、S、S(O)2、N(H)S(O)2、N(C1-C4烷基)S(O)2、S(O)2N(H)、S(O)2N(C1-C4烷基)、C1-C2烷基-C(O)N(H)、N(H)C(O)C1-C2烷基、C1-C2烷基-C(O)O、OC(O)C1-C2烷基、1,2,3-三唑、OP(O)2、P(O)2O、C1-C4烷基-P(O)2-O或O-P(O)2-C1-4烷基；
Sp在每次出現時獨立地選自視需要經取代的C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、[W-O]g、C1-C8烷基-[O-W]g、[O-W]g-O-C1-C8烷基、C1-C8烷基-[O-W]g-O-C1-C8烷基、寡肽；
h係在1與20之間的整數；
g係在約2與約50之間的加權平均數；
W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
R10係適於將式I與載體偶合的反應性官能基；並且
R11係載體。
在某些方面，g和h係1至約25或1至約10。
在一些方面，式(I)之Z係NR9。在一方面，R9進一步經R10取代。在另一方面，R9經一步經R11取代。
根據式(I)，R10係適於用於正交偶合反應的反應性官能基。合適的反應性官能基係易於進行正交反應的那些。示例性且非限制性的正交化學反應包括表2中所示的官能基。對於表2中的給定行，官能基X(左列)適於用於和官能基Y(右列)的偶合反應。偶合反應可以是共價鍵或分子間複合物。在多數實施方式中，偶合反應產生共價鍵。在其他反應中，例如金剛烷與環葡聚糖，該偶合係非共價分子結合。在一方面，該官能基選自疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C6-C12環炔基、C6-C12雜環炔基、C6-C12環烯基、降冰片基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、經取代的或未經取代的C1-C8烷氧基、巰基、C1-C8羧基、C1-C8羰基、羥基胺、卡巴肼、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
Figure 108135606-A0202-12-0066-143
基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精和金剛烷基。在另一方面，該官能基係經取代的C6-C12環炔基，其中該取代包括稠合的環丙基基團。在另一方面，該官能基係雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基。在另一方面，該官能基係疊氮基。
Figure 108135606-A0202-12-0066-449
Figure 108135606-A0202-12-0067-389
Figure 108135606-A0202-12-0068-390
Figure 108135606-A0202-12-0069-391
Figure 108135606-A0202-12-0070-392
在一些實施方式中，該無痕連接子R包含式(II)：
Figure 108135606-A0202-12-0071-393
其中，R9和D均如上針對式(I)所定義，並且T1包含經取代的或未經取代的C2-C10酯、含有一個或多個選自氮或氧的雜原子的經取代的或未經取代的C3-C10矽基醚。
在一些方面，T1係-CR1R1aOY，其含有引發物部分並且包含表3中以下結構中的一種。
Figure 108135606-A0202-12-0071-450
Figure 108135606-A0202-12-0072-395
在一些實施方式中，根據式I或II的無痕連接子R包含表4中以下結構中的任一種。
Figure 108135606-A0202-12-0072-451
Figure 108135606-A0202-12-0073-397
Figure 108135606-A0202-12-0074-398
在另一個實施方式中，式(I)或式(II)之無痕連接子R與藥物或生物活性部分軛合。在一方面，式(I)或式(II)之無痕連接子R與ANGPTL3多肽軛合。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含SEQ ID NO：1或3-45。在另一方面，該ANGPTL3多肽包含D1(SEQ ID NO：19)。
無痕連接子R的合成
另一個實施方式係用於製造式(I)之無痕連接子R之方法，該方法包括任何一個以下步驟：(A)使在C2位置處含有親核基團的哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-144
化合物的N4氮與官能化醯基連接子化合物反應以形成N4-醯基哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-186
：(B)使N4-醯基哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-187
的哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-188
環的N1氮羧甲基化，其中該羧基基團共價附接到合適的保護基團上；(C)使N4-醯基哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-149
的親核基團與本文所述的引發物化合物反應；(D)如果需要，加工(elaborating)在N4上的官能化醯基連接子以含有適於將無痕連接子附接到載體化合物的官能基。在一方面，在哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-150
化合物的C2位置處的親核基團包含羥基。在另一方面，在哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-151
化合物的C2位置處的親核基團係伯醇。在另一方面，存在於步驟(A)或(D)之哌
Figure 108135606-A0202-12-0074-152
化合物中的一級醇附接到合適的保護基團或引發物基團。在另一方面，該保護基團或引發物基團包含酯、矽基醚、縮醛、胺基甲酸酯、 碳酸酯或含有二矽氧烷的化合物。在一方面，使N4羧甲基酯保護基團去保護以形成適於與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑形成醯胺鍵的羧酸。在另一方面，在羧甲基化步驟中，該羧甲基化試劑的羧基基團藉由醯胺鍵與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑共價附接。在一方面，步驟A的官能基適於將無痕連接子附接到載體化合物。
另一個實施方式係用於製造式(I)之無痕連接子R之方法，該方法包括任何一個以下步驟：(A)羧甲基化在C2位置處含有親核基團的哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-153
化合物的N1氮，其中該羧基基團共價附接到合適的保護基團上；(B)使哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-154
化合物的N4氮與官能化烷基連接子反應以形成N4-烷基哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-156
；(C)使N4-烷基哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-157
的親核基團與本文所述的引發物化合物反應；(D)如果需要，加工在N4上的官能化烷基連接子以含有適於將無痕連接子附接到載體化合物的官能基。在一方面，在哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-158
化合物上的反應性基團包含羥基。在另一方面，在哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-159
化合物的C2位置處的親核基團係一級醇。在另一方面，存在於步驟(A)或(D)之哌
Figure 108135606-A0202-12-0075-160
化合物上的一級醇附接到合適的保護基團或引發物基團。在另一方面，該引發物化合物包含酯、矽基醚、縮醛、胺基甲酸酯、碳酸酯或含有二矽氧烷的化合物。在一方面，使N4羧甲基酯保護基團去保護以形成適於與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑形成醯胺鍵的羧酸。在另一方面，在羧甲基化步驟中，該羧甲基化試劑的羧基基團藉由醯胺鍵與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑共價附接。在一方面，步驟A的官能基適於將無痕連接子附接到載體化合物。
另一個實施方式係用於製造式(I)之無痕連接子R之方法，該方法包括任何一個以下步驟：(A)藉由交聯或取代反應於在C2位置處含有親核基團的吡啶化合物的C4位置處引入官能化連接子；(B)氫化4-取代的吡啶化合物以形成 4-取代的哌啶化合物；(C)羧甲基化4-取代的哌啶化合物的N1氮，其中該羧基基團共價附接到合適的保護基團上；(D)使4-取代的哌啶化合物的親核基團與本文所述的引發物化合物反應；(E)如果需要，加工在C4上的官能化烷基連接子以含有適於將無痕連接子附接到載體化合物的官能基。在一方面，在吡啶或哌啶化合物上的親核基團包含羥基。在另一方面，在吡啶或哌啶化合物的C2位置處的親核基團係一級醇。在另一方面，該引發物化合物包含酯、矽基醚、縮醛、胺基甲酸酯、碳酸酯或含有二矽氧烷的化合物。在一方面，使N4羧甲基酯保護基團去保護以形成適於與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑形成醯胺鍵的羧酸。在另一方面，在羧甲基化步驟中，該羧甲基化試劑的羧基基團藉由醯胺鍵與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑共價附接。在一方面，步驟A的官能基適於將無痕連接子附接到載體化合物。
合適的保護基團係可逆地連接到反應性官能基或化學官能基從而使其不能與例如其他化學官能基反應的部分。示例性且非限制性的胺基保護基團包括茀基亞甲基氧基(fluorenylmethylenoxy)基團(FMOC)、三級丁氧基羰基(BOC)、羧苄基(Cbz)等。示例性且非限制性的醇保護基團包括三級丁基醚、烯丙基醚、苄基醚、三級丁基二甲基矽基醚(TBDMS)等。在整個合成過程中可以根據需要添加或去除去保護基團，以封閉和暴露特定部分。
在一個實施方式中，用於製造無痕連接子的方法係根據反應方案1-3。以下方案係用於製造無痕連接子的通用且非限制性的方案。如本文實例中所示，一些合成路線不特別符合該等通用方案。在另一方面，用於製造無痕連接子的方法係根據實例1中提供的反應方案。
Figure 108135606-A0202-12-0077-399
其中一個或多個以上所示的步驟可以根據所用的試劑以不同的順序進行或省略；
X係包含Cl、O-NHS、O(C=O)-R2a或X-OH的活化基團，並且該反應包括標準肽偶合試劑，例如1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(HATU)；
R2a係C1-C8烷基或芳基；
P4係合適的保護基團或H；
L係視需要經取代的二價連接子；
P1和P2係可以相同的保護基團；
Y係表3中提供的合適的引發物；並且
FG包含一個或多個能夠與本文所述的載體軛合的合適的官能基。
Figure 108135606-A0202-12-0078-400
其中一個或多個以上所示的步驟可以根據所用的試劑以不同的順序進行或省略；
其中，X2係活化基團，例如Cl、Br、I或三氟甲磺酸酯；
Y、L、P1、P2、P4和FG係如方案1中所述的；
P3係可以與P1和P2相同的保護基團。
Figure 108135606-A0202-12-0079-401
其中一個或多個以上所示的步驟可以根據所用的試劑以不同的順序進行或省略；並且
L、P1、P2、P3、Y和FG係如方案2中所述的。
如本文所述，藉由使羧酸形式的無痕連接子R與包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑的胺基基團反應以形成醯胺鍵來製備式(I)或式(II)之加合物D-R。此方法描述於方案4中。使用合適的羧酸活化劑以促進醯胺鍵形成反應。作為一個實例，藉由碳酸二琥珀醯亞胺基 酯的作用，羧酸可以轉化為胺基反應性形式以形成NHS酯；然後使無痕連接子的NHS酯與含有胺基的藥物D反應以形成加合物D-R。
在方案4中，L、Y和FG係如方案1-3中所述的；D係包含至少一個一級胺或二級胺或者氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑。
Figure 108135606-A0202-12-0080-402
本文所述的一個實施方式係藉由具有一個或多個官能基的連接子附接到載體組成物的式(I)或式(II)之無痕連接子R。在一方面，該載體組成物包含如本文所述的無痕連接子的R11。在一方面，R11包含藉由連接子連接到R8或R9的聚合物、生物聚合物或聚乙二醇。在一方面，該載體組成物係水凝膠。在 一方面，該水凝膠組成物包含透明質酸、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯、聚麩胺酸酯、聚離胺酸、聚唾液酸、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯/聚甲基丙烯酸共聚物、聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚乙烯吡咯啶酮、聚
Figure 108135606-A0202-12-0081-161
唑啉、聚亞胺基碳酸酯、聚胺基酸、親水性聚酯、聚醯胺、聚胺酯、聚脲、葡聚糖、瓊脂糖、木聚糖、甘露聚糖、卡拉膠、海藻酸鹽、明膠、膠原、白蛋白、纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基澱粉、幾丁聚醣、核酸、其衍生物、其共聚物或其組合。在另一方面，R11包含奈米顆粒或分子表面。在一方面，該水凝膠包含透明質酸或聚乙二醇。在另一方面，R11包含透明質酸或聚乙二醇的交聯水凝膠。在一方面，當該藥物遞送系統用於眼睛中或滑膜關節中時，R11包含透明質酸或交聯透明質酸。
如本文所述，R11載體組成物可以交聯以將多種分子結合在一起並促進水凝膠形成。交聯可以使用本領域已知的任何方法來完成。參見例如，Liu等人，「Solution processable,cross-linked sulfur polymers as solid electrolytes in dye-sensitized solar cells[可溶液處理的交聯的硫聚合物作為染料敏化太陽能電池中的固體電解質]，」Chem.Commun.[化學通訊]51：14660-14662(2015)。在本文所述的一個實施方式中，透明質酸或聚乙二醇被一個或多個表2中所示的官能基官能化以提供用於交聯的反應性官能基。在另一方面，該透明質酸或聚乙二醇被選自以下的官能基官能化：疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、C7-C12環烯基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、胺基、巰基、C1-C8羧基、C1-C8羰基、羥基胺、卡巴肼、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
Figure 108135606-A0202-12-0081-162
基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精和金剛烷基。在另一方面，該透明質酸被疊氮基基團官能化。
官能化程度可以決定水凝膠的孔隙率。在一方面，約5%至約50%的載體聚合物被官能化，包括指定範圍內的所有整數。在一方面，該載體聚合物 被官能化約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%或甚至更多。在一方面，該載體係透明質酸。在另一方面，使透明質酸與4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三
Figure 108135606-A0202-12-0082-164
-2-基)-4-甲基
Figure 108135606-A0202-12-0082-165
啉-4-鎓鹽酸鹽(CAS號3945-69-5)和2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙胺(CAS號134179-38-7)反應以形成疊氮化物官能化透明質酸([HA-N3])。在一方面，該反應係：。
Figure 108135606-A0202-12-0082-403
實驗條件描述於實例3中。在一方面，約5%至約50%的透明質酸被官能化，包括指定範圍內的所有整數。在一方面，該透明質酸被官能化約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%或甚至更多。
在另一個實施方式中，聚乙二醇被各種試劑官能化以形成用於連接如上所述的官能化透明質酸單體的交聯劑。
2kDa的2臂PEG-BCN交聯劑的合成
在一方面，如所示，使M n 約2kDa的聚乙二醇二胺鹽酸鹽反應。反應條件描述於實例4中。
Figure 108135606-A0202-12-0083-404
10kDa的4臂PEG-BCN交聯劑的合成
在另一方面，如所示，使M n 約10kDa的4臂聚乙二醇胺鹽酸鹽(季戊四醇核心，鍵凱科技公司(JenKem Technology))反應。反應條件描述於實例4中。
Figure 108135606-A0202-12-0083-405
2kDa的2臂β-丙胺酸PEG-BCN交聯劑的合成
在另一方面，如所示，使Mn約2kDa的聚乙二醇和3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸反應。反應條件描述於實例4中。
Figure 108135606-A0202-12-0084-406
2kDa的2臂胺基環丙烷甲酸PEG-BCN交聯劑的合成
在另一方面，如所示，使M n 約2kDa的聚乙二醇和1-((三級丁氧羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸反應。反應條件描述於實例4中。
Figure 108135606-A0202-12-0085-407
本文所述的另一個實施方式係一種或多種交聯劑。在一方面，該交聯劑包含式V：
Figure 108135606-A0202-12-0085-408
在另一方面，該交聯劑包含式VI：
Figure 108135606-A0202-12-0085-409
在另一方面，該交聯劑包含式VIa：
Figure 108135606-A0202-12-0085-410
在另一方面，該交聯劑包含式VIb：
Figure 108135606-A0202-12-0086-411
在另一方面，該交聯劑包含式VIc：
Figure 108135606-A0202-12-0086-412
在另一方面，該交聯劑包含式VII：
Figure 108135606-A0202-12-0086-413
在另一方面，該交聯劑包含式VIII：
Figure 108135606-A0202-12-0086-414
在另一方面，該交聯劑包含式IX：
Figure 108135606-A0202-12-0086-415
在本文所述的另一個實施方式中，R11包含已經與一種或多種交聯劑反應的官能化載體，以形成交聯載體。在一個實施方式中，該交聯載體形成水凝膠。在一方面，該交聯載體係已經被官能化並且與一種或多種如本文所述的聚乙二醇交聯劑交聯的透明質酸，以形成水凝膠。
在一個實施方式中，可以藉由使適當官能化的聚合物反應來製備包含透明質酸的交聯載體，如下所示：
Figure 108135606-A0202-12-0087-416
Figure 108135606-A0202-12-0088-417
儘管不受任何特定實例的束縛並且藉由說明的方式，在一個實施方式中，透明質酸鈉鹽由供應商生命中心生物醫學公司(Lifecore Biomedical)(HA200K，明尼蘇達州的查斯卡)標記為各批次具有在151kDa-300kDa範圍內變化的標稱平均分子量，如藉由黏度測定法確定的。出於本說明的目的，具有假定標稱平均分子量200kDa的透明質酸鈉鹽分子將由平均大約500個單體單元組成。在此結構和後續結構中，未經修飾的單體單元定義為「m」，用疊氮基基團修飾的單體單元定義為「n」，軛合到交聯分子的疊氮基單體單元定義為「p」，並且軛合到無痕連接子-藥物加合物的疊氮基單體單元定義為「q」。對於包含
Figure 108135606-A0202-12-0088-483
500個單體單元的聚合物鏈，(n+m+p+q
Figure 108135606-A0202-12-0088-484
500)。如果透明質酸鈉鹽分子的修飾百分比係25%，則m=75%，並且(n+p+q)=25%。
類似地，存在於交聯劑的一個實施方式中的PEG單元衍生自起始PEG，該起始PEG被描述為具有1kDa、2kDa、4kDa、6kDa、8kDa或10kDa的標稱平均分子量，並且分別由22、45、91、136、181或226個重複的氧乙烯單體單元組成，在該等描繪的結構中被描述為「w」。在一些方面，w可以在約5與約250之間。在其他方面，w包含約5、約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約160、約170、約180、約190、約200、約210、約220、約230、約240或約250個氧乙烯單體單元。在其他方面，w係約20、約45、約90、約140、約180或約225。
在下式中，在一個實施方式中，透明質酸的未經修飾的二糖重複單元(m)與透明質酸的經修飾的二糖重複單元(n+p+q)以隨機分佈的方式之和(=m+n+p+q)可以包含約500個單元，如藉由黏度測定法確定標稱平均分子量為大約200kDa。這適用於式X至式XXII。
在一方面，該交聯載體包含式X：
Figure 108135606-A0202-12-0090-418
在另一方面，該交聯載體包含式XI：
Figure 108135606-A0202-12-0091-419
在另一方面，該交聯載體包含式XII：
Figure 108135606-A0202-12-0092-420
在另一方面，該交聯載體包含式XIIa：
Figure 108135606-A0202-12-0093-421
在另一方面，該交聯載體包含式XIIb：
Figure 108135606-A0202-12-0094-422
在另一方面，該交聯載體包含式XIIc：
Figure 108135606-A0202-12-0095-423
在另一方面，該交聯載體包含式XIII：
Figure 108135606-A0202-12-0096-424
本文所述的另一個實施方式係藥物加合物D-R，其中D係包含至少一個一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分；並且R係適於釋放生物活性部分的連接子。在一方面，D包含蛋白質、核酸、碳水化合物、肽、核苷酸、寡糖或小分子，其中的每一種具有至少一個一級胺或二級胺，並且小分子具有在約100g/mol與約2000g/mol之間的分子量。
本文所述的一個實施方式係藥物加合物D-R，其中D包含ANGPTL3多肽。在一方面，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。在另一方面，D包含具有K423Q取代或K423缺失的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有胺基酸殘基201-460；207-460；225-455；225-455；225-460；225-460；226-455；226-455；226-460；226-460；228-455；228-455；228-460；228-460；233-455；233-455；233-460；233-460；241-455；241-455；241-460；241-460； 242-455；242-455；242-460；或242-460的ANGPTL3多肽，各自參考SEQ ID NO：1。在另一方面，D包含與參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460具有至少95%同一性且含有K423Q取代的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽D1(SEQ ID NO：19)。
本文所述的另一個實施方式係包含載體-無痕連接子-生物活性劑軛合物的藥物遞送系統D-R-R11，其中D包含如本文所述的包含至少一個一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性部分，R包含附接到包含如本文所述的載體聚合物或水凝膠的R11的如本文所述的無痕連接子。在一方面，R11包含透明質酸、交聯透明質酸、聚乙二醇、交聯聚乙二醇或如本文所述的其他合適的聚合物。在另一方面，R包含如本文所述的無痕連接子。在另一方面，D包含如本文所述的ANGPTL3多肽。在一方面，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。在另一方面，D包含具有K423Q取代或K423缺失的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有胺基酸殘基201-460；207-460；225-455；225-455；225-460；225-460；226-455；226-455；226-460；226-460；228-455；228-455；228-460；228-460；233-455；233-455；233-460；233-460；241-455；241-455；241-460；241-460；242-455；242-455；242-460；或242-460的ANGPTL3多肽，各自參考SEQ ID NO：1。在另一方面，D包含與參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460具有至少95%同一性且含有K423Q取代的ANGPTL3多肽。在另一方面，D包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽D1(SEQ ID NO：19)。
在另一個實施方式中，D-R-R11包含式XIV，其中「藥物」包含含有SEQ ID NO：1或3-45中的一個或多個的ANGPTL3多肽或與其具有至少90%同一性的多肽。
在一些實施方式中，D-R-R11包含式XV-XXIII中所示的種類中的任一種。
在一個實施方式中，該藥物或生物活性劑D包含含有SEQ ID NO：1或3-45中的一個或多個的ANGPTL3多肽。
在一個實施方式中，該藥物或生物活性劑D包含具有SEQ ID NO：19的序列的D1。
本文所述的一個實施方式係用於修復軟骨的肽組成物。具體而言，與野生型ANGPTL3多肽相比，如本文所述的ANGPTL3肽具有增加的蛋白酶抗性。
本文所述的另一個實施方式係用於施用ANGPTL3多肽的組成物和方法，以藉由向關節、軟骨組織或軟骨鄰近組織中或全身性地施用本發明的多肽來預防或改善關節炎或關節損傷。還描述了用於誘導間充質幹細胞分化為軟骨細胞的組成物和方法。
本文所述的另一個實施方式係用於組裝藥物遞送系統的方法；該方法可以包括以下步驟序列中的一個：
(a)製備載體分子R11，其中R11係交聯水凝膠，然後此步驟包括用於製備該水凝膠的方法；可以視需要在此階段純化該載體分子；
(b)分開地使無痕連接子R與包含一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑D軛合，從而形成無痕連接子-D加合物；可以視需要在此階段純化該無痕連接子-D加合物，
(c)使該載體分子R11與該無痕連接子-D加合物軛合；以及
(d)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。此方法顯示於以下方案5A中。
本文所述的另一個實施方式係用於組裝藥物遞送系統之方法，該方法包括以下步驟：
(a)製備載體分子R11，其中R11係交聯水凝膠，然後此步驟包括用於製備該水凝膠的方法；可以視需要在此階段純化該載體分子；
(b)使無痕連接子R與該載體分子R11軛合，從而形成載體分子-無痕連接子加合物，其可以視需要在此階段進行純化；
(c)使包含一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑D與該載體分子-無痕連接子加合物軛合；以及
(d)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。此方法顯示於以下方案5B中。
本文所述的另一個實施方式係用於組裝藥物遞送系統之方法，該方法包括以下步驟：
(a)製備未交聯的載體分子R 11 ，可以視需要在此階段純化該載體分子；
(b)分開地使無痕連接子R與包含一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑D軛合，從而形成無痕連接子-D加合物；可以視需要在此階段純化該無痕連接子-D加合物；
(c)使該載體分子R 11 與該無痕連接子-D加合物軛合，可以視需要在此階段純化該產物；
(d)藉由將未交聯的載體分子-無痕連接子-生物活性劑R 11 -R-D與適當的交聯劑一起孵育以形成水凝膠來製備交聯水凝膠；以及
(e)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。此方法顯示於以下方案5C中。
本文所述的另一個實施方式係用於組裝藥物遞送系統之方法，該方法包括以下步驟：
(a)製備未交聯的載體分子R 11 ，可以視需要在此階段純化該載體分子；
(b)使無痕連接子R與該載體分子R 11 軛合，從而形成載體分子-無痕連接子加合物，其可以視需要在此階段進行純化；和
(c)使包含一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑D與該載體分子-無痕連接子加合物軛合；
(d)藉由將未交聯的載體分子-無痕連接子-生物活性劑R11-R-D與適當的交聯劑一起孵育以形成水凝膠來製備交聯水凝膠；以及
(e)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。此方法顯示於以下方案5D中。
本文所述的另一個實施方式係用於組裝藥物遞送系統之方法，該方法包括以下步驟：
(a)製備未交聯的載體分子R 11 ，可以視需要在此階段純化該載體分子；
(b)使無痕連接子R與該載體分子R 11 軛合，從而形成載體分子-無痕連接子加合物，其可以視需要在此階段進行純化；
(c)藉由將未交聯的載體分子-無痕連接子-加合物R 11 -R與適當的交聯劑一起孵育以形成水凝膠來製備交聯水凝膠，可以視需要在此階段純化該水凝膠；
(d)使包含一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性劑D與交聯載體分子-無痕連接子加合物軛合，可以視需要在此階段純化該產物；以及
(e)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。此方法顯示於以下方案5E中。
方案5A-E。方案5顯示了用於組裝如本文所述的藥物遞送系統的五種方法A-E。
圖例：
Figure 108135606-A0202-12-0101-425
載體分子R11，非交聯
Figure 108135606-A0202-12-0101-426
交聯劑
Figure 108135606-A0202-12-0101-427
載體分子R11，交聯水凝膠
Figure 108135606-A0202-12-0101-428
無痕接頭R
Figure 108135606-A0202-12-0101-429
生物活性劑D
Figure 108135606-A0202-12-0101-430
Figure 108135606-A0202-12-0101-431
Figure 108135606-A0202-12-0101-432
Figure 108135606-A0202-12-0101-433
Figure 108135606-A0202-12-0101-434
在一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XⅣ)：
Figure 108135606-A0202-12-0102-435
其中L2表示間隔子基團，其可以特異於特定的交聯劑，並且「藥物」表示包含至少一個一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子的生物活性分子，該生物活性分子以治療上有益的方式調節至少一種生物相關靶標。在一方面，「藥物」包含如本文所述的ANGPTL3多肽。在另一方面，「藥物」包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。在另一方面，「藥物」包含SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。在另一方面，「藥物」包含具有K423Q取代或K423缺失的ANGPTL3多肽。在另一方面，「藥物」包含含有胺基酸殘基201-460；207-460；225-455；225-455；225-460；225-460；226-455；226-455；226-460；226-460；228-455；228-455；228-460；228-460；233-455；233-455；233- 460；233-460；241-455；241-455；241-460；241-460；242-455；242-455；242-460；或242-460的ANGPTL3多肽，各自參考SEQ ID NO：1。在另一方面，「藥物」包含與參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460具有至少95%同一性且含有K423Q取代的ANGPTL3多肽。在另一方面，「藥物」包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽，例如D1(SEQ ID NO：19)。
在一個實施方式中，間隔子L2包含表5中所示的任何種類。
Figure 108135606-A0202-12-0103-436
Figure 108135606-A0202-12-0104-437
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XV)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0104-438
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVI)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0105-439
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVII)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0106-440
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIII)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0107-441
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIIa)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0108-442
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIIb)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0109-443
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIIc)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0110-444
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIId)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0111-445
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIIe)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0112-446
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XVIIIf)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0113-447
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統可以包含式(XXIII)，其中藥物係如本文所述的ANGPTL3多肽：
Figure 108135606-A0202-12-0114-448
本文所述的另一個實施方式係用於使用本文所述的藥物遞送系統治療疾病或障礙的方法。本文所述的另一個實施方式涉及由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，用作藥劑。另一個實施方式係由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療關節損傷或疾病(包括關節炎、骨關節炎、創傷性關節炎或急性關節損傷或創傷)的藥劑中的用途。在一方面，本文所述的藥物遞送系統的藥物組成物可以藉由注射施用有需要的受試者。在一方面，施用可以藉由注射或手術植入來完成。
本文所述的另一個實施方式涉及由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含與SEQ ID NO：1、3-45中的一個或多個具有至少95%序列同一性的ANGPTL3多肽，用於治療關節損傷或疾病，包 括關節炎、骨關節炎、創傷性關節炎、急性關節損傷或創傷。在一方面，D包含D1(SEQ ID NO：19)。在一方面，該組成物係注射到關節中的溶液或懸浮液。在另一方面，該組成物係使用手術方法或藉由大口徑注射植入關節中的凝膠或半固體組成物。在另一方面，該組成物呈注射到關節中或關節附近的顆粒形式。在另一方面，該組成物作為最終原位吸收或加工的生物可降解的網或紗布植入關節內或周圍。在另一方面，將組成物浸漬到縫合線、釘、板、網或在手術期間用於在創傷或疾病之後重新附接或修復肌腱、韌帶、軟骨、骨頭或其他關節組件的類似物品中。在另一方面，該組成物係靜脈內、動脈內、皮下、肌內或腹膜內遞送的溶液或懸浮液。在另一方面，該組成物係使用手術方法或大口徑注射植入的凝膠或半固體組成物。在另一方面，該組成物係局部或直接施用於皮膚傷口的凝膠或半固體組成物。
在一個實施方式中，如本文所述的藥物遞送系統以特定的釋放速率釋放生物活性劑。在一方面，釋放速率可以藉由無痕連接子R的「引發物」組分來調諧或調節。不受任何理論的束縛，據信，在生理條件下，引發物的反應產生以分子內方式裂解連接藥物與藥物遞送系統的醯胺鍵的親核官能基，例如羥基官能基。在一個實施方式中，該引發物的反應係導致羥基官能基的形成的水解反應。不受任何理論的束縛，據信，該引發物部分的空間位阻與引發物的較慢反應相關，並且吸電子基團的存在和接近與引發物的較快反應相關。
在一個實施方式中，釋放該生物活性部分的半衰期係約0.5小時、約1小時、約2小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約22小時、約24小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約 3.5年、約4年或長於4年。在一方面，該生物活性部分的釋放半衰期係約2.5天、約4.5天、約7天、約10天、約11天、約12天、約14天、約15天、約21天、約28天、約30天、約31天、約32天、約40天、約58天、約60天、約65天、約70天、約80天、約125天、約165天、約380天、約940天或甚至更長。
在一個實施方式中，該無痕連接子引發物酯水解的半衰期係約0.5小時、約1小時、約2小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約22小時、約24小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年或長於4年。在一方面，該無痕連接子引發物酯水解的半衰期係約1天、約1.5天、約2天、約2.5天、約4天、約5天、約10天、約12天、約15天、約20天、約30天、約32天、約35天、約40天、約55天、約60天、約90天、約120天、約150天、約180天、約200天、約300天、約400天或甚至更長。
在另一個實施方式中，在釋放藥物D後(例如，D-R-R11→R-R11+D)，藥物遞送系統R-R11從該藥物遞送系統所給藥的組織、器官或區室清除的半衰期係約0.5小時、約1小時、約2小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約22小時、約24小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約3.5年、約4年或長於4年。
本文所述的其他實施方式係包含如本文所述的藥物遞送系統D-R-R11的藥物組成物。在一方面，該藥物組成物適於在有需要的受試者體內注射或植入。
適於藉由注射或植入施用的藥物組成物包括無菌水性溶液、懸浮液或分散液以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末或凍乾劑。
對於靜脈內施用，合適的載體包括磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、生理鹽水、林格氏溶液或注射用水。在所有情況下，該組成物應當係無菌的並且應當具有達到容易注射的程度的流動性。較佳的藥物配製物在製造和儲存條件下係穩定的並且必須抗微生物(例如細菌和真菌)污染作用而保存。通常，相關載體可以是溶劑或分散介質，其包含例如水、緩衝液、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)及其合適的混合物。例如，可以藉由使用包衣(例如卵磷脂)、在分散液的情況下藉由維持所需粒徑以及藉由使用表面活性劑來維持適當的流動性。防止微生物的作用可以藉由不同的抗細菌劑和抗真菌劑(例如，對羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等)來實現。在許多情況下，較佳的是在該組成物中包括等滲劑，例如糖、多元醇(例如甘露糖醇)、胺基酸、山梨糖醇、氯化鈉或其組合。可以藉由在該組成物中包括延遲吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁和明膠)延長可注射組成物的吸收。
某些可注射組成物係水性等滲溶液或懸浮液，並且栓劑有利地由脂肪乳液或懸浮液製備。所述組成物可以滅菌和/或含有佐劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、溶解促進劑、用於調節滲透壓的鹽、緩衝劑或其組合。另外，它們也可以含有其他有治療價值的物質。所述組成物分別根據常規的混合、製粒或包衣方法來製備，並且含有約0.1%-75%、或含有約1%-50%的活性成分。
可以藉由將所需量的藥物遞送系統與根據需要的成分中的一種或組合一起摻入適當的溶劑中、隨後過濾滅菌來製備無菌可注射溶液或懸浮液。通常，藉由將活性化合物摻入無菌媒介物(如無菌PBS和任何賦形劑)中來製備溶液或懸浮液。在用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，較佳的製備方法係真空乾燥和冷凍乾燥，其產生活性成分的粉末以及來自其以前的無菌過濾溶液的任何另外的所需成分。
透黏膜或透皮施用方法也是可能的。用於透皮施用的合適的組成物包括有效量的生物活性劑與合適的載體。適於透皮遞送的載體包括幫助通過宿主皮膚的可吸收的藥理學上可接受的溶劑。例如，透皮裝置呈繃帶的形式，該繃帶包括襯件、含有化合物並視需要含有載體的貯庫、視需要在延長的一段時間內以受控且預定的速率將化合物遞送至宿主皮膚的控速屏障、以及將該裝置固定至皮膚的器具。
用於局部施用(例如，施用至皮膚、眼睛或關節)的合適的組成物包括水性溶液、懸浮液、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑或可噴霧配製物(例如，用於藉由氣霧劑等遞送)。此類局部遞送系統特別地適合於表皮施用。因此，它們特別地適合用於本領域熟知的局部(包括化妝品)配製物中。此類局部遞送系統可以含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑或防腐劑。
如本文所用，局部施用也可以涉及吸入或鼻內施用。它們可以在使用或不使用合適的推進劑的情況下自乾燥粉末吸入器以乾燥粉末的形式(單獨的作為混合物，例如與乳糖的乾燥摻混物，或經混合的組分顆粒，例如與磷脂混合的組分顆粒)或自加壓容器、泵、噴霧、霧化器或噴霧器以氣溶膠噴霧形式便利地遞送。
本文還描述了包含一種或多種降低作為活性成分的本文所述的組成物分解速率的試劑的藥物組成物和劑型。此類試劑在本文中稱為「穩定劑」，包括但不限於抗氧化劑(例如抗壞血酸)、pH緩衝劑或鹽緩衝劑等。
例如，待在治療上使用的藥物組成物的有效量將取決於治療環境和目的。熟悉該項技術者應理解，用於治療的適當劑量水平將因此部分地根據摻入藥物遞送系統中的治療劑、藥物遞送系統使用的適應症、施用途徑和患者大小(體重、體表面積或器官大小)和情況(年齡和一般健康狀況)而改變。因此，臨床醫師可以遞增劑量並且改變施用途徑，以獲得最佳治療效果。
給藥頻率將取決於摻入所使用的藥物遞送系統中的治療劑的藥物動力學參數。通常，臨床醫師將施用組成物直至劑量達到實現所需效果為止。因此，可以將該組成物作為單劑量施用，作為兩次或更多次劑量(其可以含有或不含有相同量的所需分子)隨時間施用，或者作為藉由植入裝置或導管連續輸注施用。適當劑量的進一步精簡通常由熟悉該項技術者進行並且在他們通常所執行的任務範圍內。可以藉由使用適當的劑量反應數據確定適當劑量。
可以作為微粒的溶液或懸浮液製備藥物遞送系統。在一方面，該載體形成可以藉由標準注射器施用(例如，皮下、關節內、肌腱內或肌內施用)至靶組織的微粒。此類顆粒可以具有在1μm與5000μm之間的平均粒徑分佈。其他方面包括已經用如本文所述的藥物遞送系統浸漬的生物可降解的紗布、網或縫合線。
在一些實施方式中，本文所述的藥物遞送系統的微粒可以藉由乳液聚合、平版印刷、旋壓、模塑、噴霧乾燥、研磨、擠出、機械粉碎或本領域已知的類似程序來生產。在一個實施方式中，如本文所述的藥物遞送系統、載體聚合物或水凝膠可以通過網或篩擠出而分成微粒。在一方面，擠出可以重複多次和/或連續通過較小的網以獲得所需顆粒分佈尺寸。
在一個實施方式中，基於測量粒徑的雷射衍射，當懸浮於等滲水性配製物緩衝液中時，該藥物遞送系統具有在1μm與5000μm之間的平均粒徑分佈。在一些方面，當懸浮於等滲緩衝液中時，該藥物遞送系統具有在10μm與1000μm之間的平均粒徑分佈。在另一方面，當懸浮於等滲水性緩衝液中時，該藥物遞送系統具有在50μm與500μm之間的平均粒徑分佈。在另一方面，當懸浮於等滲水性緩衝液中時，該藥物遞送系統具有在100μm與300μm之間的平均粒徑分佈。在另一方面，當懸浮於等滲水性緩衝液中時，該藥物遞送系統具有在200μm與300μm之間的平均粒徑分佈。在一些實施方式中，平均粒徑分佈包含約10μm、約50μm、約100μm、約150μm、約200μm、約250μm、約300μm、約350μm、約400μm、約450μm、約500μm、約750μm、約1000μm、約1500μm、約2000μm、約2500μm或約5000μm。
可以使用熟悉該項技術者已知的標準技術來確定粒徑。可以用於測量藥物遞送系統顆粒的粒徑分佈的示例性技術可以包括雷射衍射分析、光散射(例如，動態光散射)、微觀顆粒圖像分析、淘析或氣溶膠質譜法。藥物遞送系統顆粒的樣品可以作為乾樣品或濕樣品來測量。可以使用用於測量粒徑的任何可商購的儀器，包括來自西萊斯公司(Cilas)；布魯克海文儀器公司(Brookhaven Instruments Corporation)；瑪律文儀器公司(Malvern Instruments)；堀場科學公司(Horiba Scientific)；或懷亞特公司(Wyatt)的儀器，根據製造商的說明書按照推薦的操作程序進行。
使用本文所述的技術測得的粒徑可以表示為具有正態分佈或非正態分佈(具有粒徑大小的均值、中值(例如，質量中值直徑)和模式)的衍生的直徑。粒徑分佈可以表示為直徑數分佈、表面積分布或顆粒體積分佈。粒徑分佈的均值能以各種方式計算和表示，例如體積平均直徑(D[4,3]或d 43)、平均表面積直徑(D[3,2]或d 32)或平均數粒徑(D[1,0]或d 10)。由於粒徑分佈值會根據 測量方法學和表達分佈的方式而變化，因此，為了得出準確的比較結果，必須藉由相同的方法學來計算不同平均粒徑分佈的比較。例如，必須將具有測量和計算出的體積平均直徑的樣品與具有測量和計算出的體積平均直徑的第二樣品進行比較，理想地使用相同測量儀器在相同條件下測量。因此，本文所述的特定粒徑分佈不旨在限於用於測量或計算粒徑分佈(例如，直徑數分佈、表面積分布或顆粒體積分佈)的任何一種類型的方法，而是指示本文所述的每種測量粒徑的方法的粒徑值及其分佈。
在一個實施方式中，藥物遞送系統可以通過小於0.6mm內徑(例如，20規格)的針頭、較佳的是通過小於0.3mm內徑(例如，25規格)的針頭、更較佳的是通過小於0.25mm內徑(例如，27規格)的針頭、甚至更較佳的是通過小於0.2mm內徑(例如，28規格)的針頭、最較佳的是通過小於0.16mm內徑(例如，30規格)的針頭進行注射來施用。例如，當注射100μm至300μm粒度分佈的藥物遞送系統時，20規格針頭對於遞送可能是最佳的。但是，由於顆粒形態具有柔性，因此可以成功地使用比藥物遞送系統粒徑窄的針頭尺寸。
短語和術語「可以藉由注射施用」、「可注射的」或「可注射性」係指如下因素的組合，例如向含有在一定濃度(w/v)和一定溫度下在液體中發生溶脹的本文所述的藥物遞送系統的注射器的柱塞上施加的一定力、與此注射器的出口連接的給定內徑的針頭以及通過針頭從注射器擠出一定體積的藥物遞送系統所需的時間。
在一個實施方式中，對懸浮於PBS或生理鹽水中至濃度為約0.1%至約20%(w/v)(包括指定百分比範圍內的所有整數)的藥物遞送系統進行了可注射性測量。
因此，就釋放的藥物D-H而言，該藥物遞送系統顯示了受控釋放速率的有益效果。較佳的是，獲得了持續釋放速率。持續釋放意味著，與不存在 藥物遞送系統的情況下的藥物的施用相比，本文所述的對應的藥物遞送系統的施用間隔得以擴大。例如，基於通常每天施用一次或幾次藥物的藥物遞送系統提供了至少三天、至少一週、至少一個月、幾個月或幾年的治療有效水平。
本文所述的另一個實施方式係本文所述的藥物遞送系統的藥物組成物。該藥物組成物可以包含一種或多種賦形劑，例如：
(i)緩衝劑：將pH維持在所需範圍內的生理上耐受的緩衝液，例如磷酸鈉、碳酸氫鹽、琥珀酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽和乙酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氯化物、丙酮酸鹽。也可以使用抗酸劑，例如Mg(OH)2或ZnCO3。可以調節緩衝能力以匹配對pH穩定性最敏感的條件。
(ii)等滲調節劑：用於將由於注射儲器的滲透壓差引起的細胞損傷可引起的疼痛最小化。甘油和氯化鈉係實例。有效濃度可以使用假定的滲透壓285-315mOsmol/kg(對於血清)藉由滲透法來確定。
(iii)防腐劑和/或抗微生物劑：多劑量腸胃外製劑可能需要添加足夠濃度的防腐劑，以將受試者在注射後被感染的風險最小化，並且已經建立了相應的法規要求。典型的防腐劑包括間甲酚、苯酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、氯丁醇、苯甲醇、硝酸苯汞、硫柳汞、山梨酸、山梨酸鉀、苯甲酸、氯甲酚和苯紮氯銨。
(iv)穩定劑：藉由增強穩定蛋白質的力、藉由變性狀態的去穩定或藉由賦形劑與蛋白質的直接結合來實現穩定性。穩定劑可以是胺基酸(例如丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、組胺酸、離胺酸、脯胺酸)、糖(例如葡萄糖、蔗糖、海藻糖)、多元醇(例如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇)、鹽(例如磷酸鉀、硫酸鈉)、螯合劑(例如EDTA、六磷酸鹽)、配位基(例如二價金屬離子(鋅、鈣等))、其他鹽或有機分子(例如苯酚衍生物)。另外，可以使用低聚物或聚 合物，例如環糊精、葡聚糖、樹狀聚合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、魚精蛋白或人血清白蛋白。
(v)抗吸附劑：主要使用離子或非離子表面活性劑或其他蛋白質或可溶性聚合物來包衣或競爭性吸附到該組成物容器的內表面，例如泊洛沙姆(Pluronic F-68)、PEG十二烷基醚(Brij 35)、聚山梨醇酯20和80、葡聚糖、聚乙二醇、PEG-聚組胺酸、BSA和HSA以及明膠。賦形劑的所選濃度和類型取決於待避免的作用，但通常在介面處僅在CMC值之上形成表面活性劑單層。
(vi)凍乾或冷凍保護劑：在冷凍乾燥或噴霧乾燥期間，賦形劑可能會抵消由氫鍵斷裂和脫水引起的去穩定作用。為此，可以使用糖和多元醇，但是針對表面活性劑、胺基酸、非水性溶劑和其他肽還觀察到了相應的積極作用。海藻糖在減少水分引起的聚集方面特別有效，並且還改善可能由蛋白質疏水性基團暴露於水導致的熱穩定性。當已知較高比例的甘露糖醇或蔗糖可以增強凍乾餅的物理穩定性時，也可以將甘露糖醇和蔗糖作為凍乾保護劑/冷凍保護劑單獨使用或彼此組合使用。甘露糖醇也可以與海藻糖組合。海藻糖也可以與山梨糖醇組合，或者山梨糖醇可以作為唯一的保護劑使用。也可以使用澱粉或澱粉衍生物。
(vii)氧化保護劑：抗氧化劑例如抗壞血酸、四氫嘧啶、甲硫胺酸、麩胱甘肽、一硫代甘油、桑色素、聚乙烯基亞胺(PEI)、沒食子酸丙酯、維生素E，螯合劑例如檸檬酸、EDTA、六磷酸鹽、巰基乙酸。
(viii)增黏劑或黏度增強劑：延遲小瓶和注射器中顆粒的沈降，並且用於促進顆粒的混合和重懸以及使懸浮液更易於注射(即，對注射器柱塞的力降低)。合適的增黏劑或黏度增強劑係例如卡波姆增黏劑(像Carbopol 940、Carbopol Ultrez 10)、纖維素衍生物(像羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素，HPMC)或二乙基胺基乙基纖維素(DEAE或DEAE-C))、膠體矽酸鎂(Veegum)或矽酸鈉、羥基磷灰石凝膠、磷酸三鈣凝膠、黃原膠、卡拉膠(像Satiagum UTC 30)、 脂肪族聚(羥基酸)(例如聚(D,L-或L-乳酸)(PLA)和聚(乙醇酸)(PGA)及其共聚物(PLGA))、D,L-丙交酯、乙交酯和己內酯的三聚物、泊洛沙姆(poloxamer)、親水性聚(氧乙烯)嵌段和疏水性聚(氧丙烯)嵌段以組成聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)-聚(氧乙烯)的三嵌段(例如，Pluronic.TM)、聚醚酯共聚物(例如對苯二酸聚乙二醇酯/對苯二酸聚丁烯酯共聚物)、乙酸異丁酸蔗糖酯(SAIB)、葡聚糖或其衍生物、葡聚糖和PEG的組合、聚二甲基矽氧烷、膠原、幾丁聚醣、聚乙烯醇(PVA)和衍生物、聚烷基醯亞胺、聚(丙烯醯胺-共-二烯丙基二甲基銨(DADMA))、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、葡糖胺基葡聚糖(GAG)(例如硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、硫酸角質素、肝素、硫酸乙醯肝素)、透明質酸、由疏水性A-嵌段(例如聚丙交酯(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA))和親水性B-嵌段(例如聚乙二醇(PEG)或聚乙烯吡咯啶酮)組成的ABA三嵌段或AB嵌段共聚物。此類嵌段共聚物以及上述泊洛沙姆可以表現出相反的熱膠凝行為(在室溫下為流動狀態以促進施用，而在注射後在體溫下為高於溶膠-凝膠轉變溫度的凝膠狀態)。
(ix)擴散劑：藉由間質空間中細胞外基質的組分(例如但不限於透明質酸，一種在結締組織細胞間隙中發現的多糖)的水解來改變結締組織的滲透性。鋪展劑(例如但不限於透明質酸酶)暫時降低細胞外基質的黏度並且促進注射藥物的擴散。
(x)其他助劑：例如潤濕劑、黏度調節劑、抗生素、透明質酸酶。酸和鹼(例如鹽酸和氫氧化鈉)係製造期間用於調節pH所必需的助劑。
該藥物遞送系統可以作為液體、懸浮液或作為乾組成物提供。
在一個實施方式中，該藥物遞送系統係乾組成物。合適的乾燥方法係例如噴霧乾燥和凍乾(冷凍乾燥)。在一方面，該藥物遞送系統藉由凍乾來乾燥。
在一個實施方式中，該藥物遞送系統在該組成物中足量給藥以提供在一次施用中生物活性劑持續至少12小時的治療有效量。在一方面，藥物遞送系統的一次施用足以持續約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約1週、約2週、約3週、約4週、1個月、2個月、3個月、4個月、6個月、9個月、1年、2年、3年、4年或甚至更長。
在一個實施方式中，該藥物遞送系統作為單劑量提供，意味著提供藥物遞送系統的容器含有一個藥物劑量。
在另一個實施方式中，該組成物作為多劑量組成物提供，意味著其含有多於一個的治療劑量。較佳的是，多劑量組成物含有至少2個劑量。此類多劑量藥物遞送系統可以用於有需要的不同受試者，或者旨在用於一名受試者，其中剩餘劑量在施用第一劑量之後儲存直至需要。
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統包含在一個或多個容器中。對於液體或懸浮液組成物，該容器較佳的是為單室注射器。對於乾組成物，較佳的是該容器係雙室注射器。該乾組成物提供於雙室注射器的第一室中，並且重構溶液提供於雙室注射器的第二室中。
在向有需要的受試者施用幹藥物遞送系統之前，將該乾組成物重構。重構可以在提供幹藥物遞送系統的容器中進行，例如在小瓶、注射器、雙室注射器、安瓿和藥筒中進行。藉由向乾組成物中添加預定量的重構溶液完成重構。重構溶液係無菌液體(例如磷酸鹽緩衝鹽水、等滲鹽水、注射用水或其他緩衝液)，其還可以含有賦形劑，例如防腐劑和/或抗微生物劑，例如苄醇和甲酚。較佳的是，該重構溶液係無菌磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理鹽水。可替代地，該重構溶液係無菌注射用水。
另一個實施方式係製備包含治療有效量的藥物遞送系統和視需要一種或多種藥學上可接受的賦形劑的重構組成物之方法，該方法包括使該組 成物與一定體積的重構媒介物接觸的步驟。然後可以藉由注射或其他途徑施用重構的藥物遞送系統。
另一個實施方式係包含治療有效量的藥物遞送系統、重構媒介物和視需要一種或多種藥學上可接受的賦形劑的重構組成物。
另一個實施方式係包含含有治療有效量的藥物遞送系統和視需要一種或多種藥學上可接受的賦形劑的溶液或懸浮液的預填充注射器。在一方面，該注射器填充有在約0.01mL與約5mL之間的如本文所述的藥物遞送系統。在一方面，該注射器填充有在約0.05mL與約5mL之間、在約1mL與約2mL之間、在約0.1mL與約0.15mL之間、在約0.1mL與約0.5mL之間、在約0.15mL與約0.175mL之間或約0.5mL至約5mL的如本文所述的藥物遞送系統。在一個實施方式中，該注射器填充有0.165mL的如本文所述的藥物遞送系統。在一些方面，注射器填充有約0.01mL、約0.02mL、約0.03mL、約0.04mL、約0.05mL、約0.06mL、約0.07mL、約0.08mL、約0.09mL、約0.1mL、約0.2mL、約0.3mL、約0.4mL、約0.5mL、約0.6mL、約0.7mL、約0.8mL、約0.9mL、約1mL、約1.2mL、約1.5mL、約1.75mL、約2mL、約2.5mL、約3mL、約4mL或約5mL的如本文所述的藥物遞送系統。考慮到歸因於注射器和針頭內的「死腔」的損耗，注射器通常填充有比待施用患者的所需劑量多的劑量。當由醫生灌注注射器時，也可能存在預定量的廢物，以便準備好為患者注射。
在一個實施方式中，取決於注射途徑，注射器填充有在約0.01mL與約5mL之間(例如，在約0.01mL與約0.1mL之間、在約0.1mL與約0.5mL之間、在約0.2mL與約2mL之間、在約0.5mL與約5mL之間或在約1mL與約5mL之間)的劑量體積(即，旨在遞送給患者的藥劑體積)的如本文所述的藥物遞送系統。在旨在用於關節內注射的一個實施方式中，注射器填充有在約0.05mL與約5.0mL之間的劑量體積的如本文所述的藥物遞送系統溶液或懸浮液，其中藥物 濃度為1mg/mL至40mg/mL。在旨在用於皮下注射的一個實施方式中，注射器填充有在約0.1mL與約5.0mL之間的劑量體積的如本文所述的藥物遞送系統溶液或懸浮液，其中藥物濃度為0.1mg/mL至40mg/mL。在旨在用於藉由其他途徑注射的其他實施方式中，注射器填充有在約0.01mL與約5.0mL之間的劑量體積的如本文所述的藥物遞送系統溶液或懸浮液，其中藥物濃度為0.1mg/mL至40mg/mL。在一些方面，注射器填充有約0.01mL、約0.02mL、約0.03mL、約0.04mL、約0.05mL、約0.06mL、約0.07mL、約0.08mL、約0.09mL、約0.1mL、約0.2mL、約0.3mL、約0.4mL、約0.5mL、約0.6mL、約0.7mL、約0.8mL、約0.9mL、約1mL、約1.2mL、約1.5mL、約1.75mL、約2mL、約2.5mL、約3mL、約4mL或約5mL的如本文所述的藥物遞送系統用於遞送給有需要的患者。
由於注射器含有藥劑溶液，出口可以可逆地密封以維持藥劑的無菌性。這種密封可以藉由本領域已知的密封裝置(例如魯爾鎖(luer lock)或防篡改密封件)來實現。
另一個實施方式係包含一個或多個預填充注射器的套組(kit)，該套組包含如本文所述的一種或多種藥物遞送系統的溶液或懸浮液。在一個實施方式中，這樣一種套組包含預填充注射器，該注射器包含在泡罩包裝或密封套筒中的如本文所述的藥物遞送系統。泡罩包裝或套筒的內部可以是無菌的。在一方面，如本文所述的預填充注射器可以在經受滅菌(例如終端滅菌)之前被放置在此類泡罩包裝或套筒內。
這樣一種套組還可以包含一個或多個用於施用如本文所述的藥物遞送系統的針頭。此類套組還可以包含使用說明書、藥物標籤、禁忌症、警告或其他相關資訊。本文所述的一個實施方式係包含一個或多個預填充注射器、針頭和視需要施用說明書、藥物標籤、禁忌症、警告或其他相關資訊的紙盒或包裝，該注射器包含在泡罩包裝內所含的如本文所述的一種或多種藥物遞送系統。
可以使用終端滅菌方法對注射器進行滅菌，並且這樣一個過程可以使用已知方法，例如環氧乙烷或過氧化氫(H2O2)滅菌方法。與注射器一起使用的針頭以及本文所述的套組可以藉由相同的方法滅菌。在一方面，包裝暴露於滅菌氣體直至注射器的外部無菌。這樣一個過程後，注射器的外表面可以保持無菌(在其泡罩包裝中時)長達6個月、9個月、12個月、15個月、18個月、24個月或更長時間。因此，在一個實施方式中，如本文所述的預填充注射器(在其泡罩包裝中)可以具有長達6個月、9個月、12個月、15個月、18個月、24個月或更長時間的有效期。在一個實施方式中，在儲存18個月後，少於百萬分之一的注射器在注射器外部具有可檢測到的微生物存在。在一方面，已經使用具有至少10-6的無菌保證水平的環氧乙烷對預填充注射器進行了滅菌。在另一方面，已經使用具有至少10-6的無菌保證水平的過氧化氫對預填充注射器進行了滅菌。大量的滅菌氣體不應當進入注射器的可變容積室。如本文所用，術語「大量」係指會導致在可變容積室內的藥物遞送系統溶液或懸浮液不可接受的改變的量。在一個實施方式中，滅菌過程導致藥物遞送系統的烷基化
Figure 108135606-A0202-12-0128-169
10%(較佳的是
Figure 108135606-A0202-12-0128-485
5%、
Figure 108135606-A0202-12-0128-171
3%、
Figure 108135606-A0202-12-0128-172
1%)。在一個實施方式中，已經使用環氧乙烷對預填充注射器進行了滅菌，但是注射器的外表面的環氧乙烷殘留
Figure 108135606-A0202-12-0128-194
1ppm，較佳的是
Figure 108135606-A0202-12-0128-180
0.2ppm。在一個實施方式中，已經使用過氧化氫對預填充注射器進行了滅菌，但是注射器的外表面的過氧化氫殘留
Figure 108135606-A0202-12-0128-486
1ppm，較佳的是
Figure 108135606-A0202-12-0128-184
0.2ppm。在另一個實施方式中，已經使用環氧乙烷對預填充注射器進行了滅菌，並且注射器的外表面和泡罩包裝的內部發現的總環氧乙烷殘留
Figure 108135606-A0202-12-0128-487
0.1mg。在另一個實施方式中，已經使用過氧化氫對預填充注射器進行了滅菌，並且注射器的外表面和泡罩包裝的內部發現的總過氧化氫殘留
Figure 108135606-A0202-12-0128-178
0.1mg。
另一方面係部件套組(kit of parts)。對於液體和懸浮液組成物，並且當施用裝置僅是皮下注射器時，該套組可以包含注射器、與注射器一起使用 的針頭和包含藥物遞送系統組成物的容器。在乾組成物的情況下，該容器可以具有一個含有幹藥物遞送系統組成物的腔室以及包含重構溶液的第二腔室。在一個實施方式中，該注射裝置係適合的皮下注射器，因此具有藥物遞送系統組成物的單獨容器可以與注射裝置接合，使得在使用時，容器中的液體或懸浮液或重構乾組成物與注射裝置的出口流體連通。施用裝置的實例包括但不限於皮下注射器和筆式注射器裝置。特別較佳的注射裝置係筆式注射器，在這種情況下，該容器係藥筒，較佳的是一次性藥筒。
另一個實施方式包括套組，該套組包含針頭和含有藥物遞送系統組成物並且視需要還含有重構溶液的容器，該容器適於與針頭一起使用。在一方面，該容器係預填充注射器。在另一方面，該容器係雙室注射器。
另一個實施方式係含有如上文所述的藥物遞送系統組成物的與筆式注射裝置一起使用的藥筒。該藥筒可以含有單劑量或多劑量的藥物遞送系統。
在另一個實施方式中，該藥物遞送系統溶液或懸浮液包含藥物遞送系統和一種或多種賦形劑以及呈游離形式或作為藥物或與其他藥物遞送系統(例如聚乙二醇化藥物或水凝膠連接的藥物)組合的其他生物活性劑。在一方面，此類另外的一種或多種生物活性劑係游離形式的藥物或第二藥物遞送系統。
在另一個實施方式中，同時施用一種或多種藥物遞送系統，其中每種藥物遞送系統具有單獨或相關的生物活性。
在一個替代性實施方式中，將該藥物遞送系統與第二生物活性化合物以這種方法組合，使得首先向有需要的受試者施用藥物遞送系統，隨後施用第二化合物。可替代地，向有需要的受試者施用另一種化合物後，向同一名受試者施用藥物遞送系統組成物。
另一個實施方式係由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，用作藥劑。
另一個實施方式係由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，用於治療肌肉骨骼障礙。
另一個實施方式係由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療肌肉骨骼障礙的藥劑中的用途。
另一個實施方式係在治療或預防疾病或障礙的方法中使用的藥物遞送系統或藥物組成物，該疾病或障礙可以藉由從藥物遞送系統中釋放的生物活性部分來治療。
另一個實施方式係製造藥物遞送系統的溶液或懸浮液組成物的方法。在一個實施方式中，此類組成物藉由如下方式製備：
(i)將該藥物遞送系統與一種或多種賦形劑混合；
(ii)將相當於單劑量或多劑量的量的液體或懸浮液組成物轉移到合適的容器中；以及
(iii)密封該容器。
另一個實施方式係製造藥物遞送系統的乾組成物的方法。在一個實施方式中，此類組成物藉由如下方式製備：
(i)將該藥物遞送系統與一種或多種賦形劑混合；
(ii)將相當於單劑量或多劑量的量轉移到合適的容器中；
(iii)在所述容器中乾燥該組成物；以及
(iv)密封該容器。
合適的容器係小瓶、注射器、雙室注射器、安瓿和藥筒。
另一個實施方式係用於合成如上所定義的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽的方法。藥物遞送系統或藥物遞送系統的先質可以藉由已知方 法或根據如下所述的反應順序來製備。在藥物遞送系統或其先質的製備(合成)中使用的起始材料係已知的或可商購的，或者可以藉由已知方法或如下所述來製備。
對於相關領域的普通技術人員容易清楚的是，在不脫離其任何實施方式或方面的範圍的情況下，可以對本文所述的組成物、方法和應用做出合適的修改和調整。所提供的組成物和方法係示例性的，並不旨在限制任何特定實施方式的範圍。本文揭露的所有各個實施方式、方面和選項能以任何和所有變化或迭代進行組合。本文所述的組成物、配製物、方法和過程的範圍包括本文所述的實施方式、方面、選擇、實例和較佳項的所有實際的或潛在的組合。
實例
縮寫
Ac 乙醯基
ACN 乙腈
AcOH 乙酸
Ac2O 乙酸酐
aq. 水性的
atm 大氣
Boc、BOC 三級丁基羧基
Boc-酸酐 二碳酸二三級丁酯
(Boc)2O、(BOC)2O 二碳酸二三級丁酯
br. 寬峰
BSA 牛血清白蛋白
BuOH 丁醇
CAD 荷電氣溶膠檢測器
calcd. 計算值
Cat、cat 催化的
CBZ、Cbz 苄氧羰基
Cu(OTf)2 三氟甲烷磺酸銅(II)
d 二重峰
dd 雙二重峰
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二異丙酯
DIPEA、DIEA N,N-二異丙基乙胺
DMAP 4,4-二甲基胺基吡啶
DMF N,N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲亞碸
DOSY-NMR 一維擴散序NMR
DSC N，N'-二琥珀醯亞胺基碳酸酯
ECL 電化學發光
Elem.Anal. 元素分析
ELSD 蒸發光散射檢測器
EDC．HCl N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
ESI 電灑電離
EtOAc、AcOEt 乙酸乙酯
Et 乙基
EtOH 乙醇
FCC 快速柱層析法
FITC 異硫氰酸螢光素
g 克
G 規格
h 小時
HATU 2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)--1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲銨
HC HPLC條件
HOBt 1-羥基苯并三唑水合物
HPLC 高效液相層析法
IPA 2-丙醇
IR 紅外光譜法
i或iso 異
K2CO3 碳酸鉀
kD、kDa 千道耳頓
L 升
LCMS 液相層析法-質譜法
M 莫耳
MHz 兆赫茲
m 多重峰
Me 甲基
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MES 2-(N-
Figure 108135606-A0202-12-0133-307
啉代)乙磺酸
mg 毫克
μg 微克
mM 毫莫耳
mm 毫米
min 分鐘
mL 毫升
mmol 毫莫耳
μL 微升
μmol 微莫耳
MOPS 3-(N-
Figure 108135606-A0202-12-0134-308
啉代)丙磺酸
MS 質譜法
MsCl 甲磺醯氯
MsOH甲磺酸
MWCO截留分子量
m/z 質荷比
N 當量
NA 不可用
NaBH4 硼氫化鈉
NaBH3CN 氰基硼氫化鈉
Na(AcO)3BH 三乙醯氧基硼氫化鈉
ng 納克
NH4Cl 氯化銨
NHS N-羥基琥珀醯亞胺
nM 納莫耳
NMR 核磁共振
OMe 甲氧基
PBS 磷酸鹽緩衝鹽水
1×PBS 磷酸鹽緩衝鹽水，通常約為10mM PO4 3-
Pd/C 鈀碳
Pd(dppf)Cl2 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)
Pd(dppf)Cl2‧CH2Cl2 加 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲烷
合物 錯合物
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)鈀(0)
Ph 苯基
ppm 百萬分率
psi 磅每平方英吋
rac 外消旋的
rcf 相對離心力
RP 反相
rt、RT 室溫
s 單峰
sat. 飽和的
SDS-page 十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳
SEC 尺寸排阻層析法
SFC 超臨界液相層析法
t 三重峰
t-Bu、tBu 三級丁基
t½ 半衰期
tr或ret.time 保留時間
TBAF 四正丁基氟化銨
TBSCl、TBDMSCl 三級丁基二甲基氯矽烷
TEA、Et3N、NEt3 三乙胺
tert- 三級
TFA 三氟乙酸
Tf2O 三氟甲磺酸酐
THF 四氫呋喃
TLC 薄層層析法
TMS 三甲基矽基
TMSOTf 三氟甲磺酸三甲基矽酯
Tris 三(羥基甲基)胺基甲烷
Triton X-100 三級辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(CAS 9002-93-1)
Ts 對甲苯磺醯基
TsOH 對甲苯磺酸
Tween 20 聚山梨醇酯20、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單月桂酸酯
UPLC 超高效液相層析法
UV 紫外線
v/v 體積/體積
w/v 重量/體積
w/w 重量/重量
方法
在一些以下實例中使用的
Figure 108135606-A0202-12-0137-105
((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯的合成描述於A.M.Jawalekar等人；Molecules[分子],2013,18,7346-7363中。
在一些以下實例中使用的
Figure 108135606-A0202-12-0137-106
((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(4-硝基苯基)碳酸酯描述於J.Dommerholt等人；Angew.Chem.Int.Ed.[德國應用化學國際版]2010,49,9422-9425中。
本文未具體描述合成的所有其他中間體和試劑係可商購的，並且可以按交付時使用。
LCMS方法
方法1
柱SunFire C18 3.5μm 3.0×30mm；柱溫40℃；流速2.0mL/min；停止時間2.20min；pH 2.2；洗脫劑A1在水中的0.05% TFA；洗脫劑B1乙腈；梯度時間(min)/% A(洗脫劑A1)：% B(洗脫劑B1)；0.00/95：5；1.70/5：95；2.00/5：95；2.10/95：5。
方法2
柱AcQuity UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×30mm；柱溫50℃；流速1.0mL/min；停止時間2.00min；pH 2.6；洗脫劑A1在水中的0.1%甲酸；洗脫劑B1在乙腈中的0.1%甲酸；梯度時間(min)/% A(洗脫劑A1)：% B(洗脫劑B1)；
0.00/98：2；0.10/98：2；1.50/2：98；1.80/2：98；1.90/98：2；2.00/98：2。
方法3
柱：Kinetex C18 100A(2.6μm 100×4.6mm)；流動相A(在水中的0.1%甲酸)，B(乙腈)；梯度(時間(min)/% B)：0/5、1/30、3/95、4/95、4.1/5、6/5。
方法4
柱：AcQuity UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1×30mm；柱溫50℃；流速1.0mL/min；停止時間：2.00min；pH 2.6；洗脫劑A1在水中的0.1%甲酸；洗脫劑B1在乙腈中的0.1%甲酸；梯度時間(min)/% A(洗脫劑A1)：% B(洗脫劑B1)；0.00/98：2；0.10/98：2；1.50/2：98；1.80/2：98；1.90/98：2；2.00/98：2。
方法5
柱：SunFire C18 3.5μm 3.0×30mm；柱溫40℃；流速2.0mL/min；停止時間2.20min；pH2.2；洗脫劑A1在水中的5mM氫氧化銨；洗脫劑B1乙腈；梯度時間(min)/% A(洗脫劑A1)：% B(洗脫劑B1)；0.00/95：5；1.70/5：95；2.00/5：95；2.10/95：5。
方法6
柱：Kinetex C18 100A(2.6μm 100×4.60mm)；梯度/(時間(min)/% B)0/5、1/30、3/95、4/95、4.1/5、6/5；流動相：在水中的0.1%甲酸(A)/乙腈(B)；流速：1.4mL/min；柱溫：40℃。
方法7
柱：Synergi MAX-RP 100A Mercury(2.5μm 100×4.6mm)；流動相A(在水中的0.1%甲酸)，B(乙腈)；梯度(時間(min)/% B)：0/30、0.5/30、1.5/95、2.4/95、2.5/30、3.0/30。
方法8
柱：Kinetex C18 100A(2.6μm 100×4.6mm)；流動相A(在水中的0.1%甲酸)，B(乙腈)；梯度(時間(min)/% B)：0/50、1/70、2/100、4/100、4.1/50、6/50。ESI-MS數據記錄於Acquity G2 Xevo-QTOF-MS上。使用MassLynx套裝軟體中的MaxEnt 1程式對正離子質譜進行解卷積。
方法9
柱：Acclaim PepMap C4，5μm，300Å(300μm×15cm)；流動相A(在水中的0.1%甲酸/乙腈(95%/5%))，B(在乙腈中的0.1%甲酸/異丙醇/水(47.5%/47.5%/5%))；梯度(時間(min)/% B)：0/5、2/5、10/40、11/95、13/95、14/5、20/5。將樣品在MeOH/H 2 O(50%/50%)中以1/100稀釋，並且在聯接到Ultimate 3000 CapLC的Lumos Orbitrap MS系統上記錄ESI-MS數據。使用BioPharma Finder 3.0(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))對正離子質譜進行解卷積，並且報告了質量。
方法10
柱AcQuity UPLC HSS T3 C18(1.8μm 2.1×50mm)；柱溫60℃；流速1.0mL/min；停止時間2.00min；洗脫劑A1在水中的0.05%甲酸+3.75mM乙酸銨；洗脫劑B1在乙腈中的0.04%甲酸；梯度時間(min)/% A(洗脫劑A1)：% B(洗脫劑B1)0.00/95：5；1.40/2：98；1.80/2：98；1.90/95：5；2.00/95：5。在正負兩種模式下使用電灑電離(ESI)，將UPLC儀器聯接到單級四極質譜儀。報告了對(M+H) + 的解卷積m/z。
實例1
無痕連接子
此實例描述了許多能夠與含胺藥物和載體二者軛合的無痕連接子的合成。
Figure 108135606-A0202-12-0139-452
Figure 108135606-A0202-12-0140-109
無痕連接子的合成
共同中間體：L-INT-1c
Figure 108135606-A0202-12-0141-110
L-INT-1c.1-(Boc)-2-(羥基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0141-309
Figure 108135606-A0202-12-0141-111
在250-mL燒瓶中裝入2-(羥基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0141-310
-1-甲酸三級丁酯SM-2(5.81g，26.9mmol)、3-(((苄基氧基)羰基)胺基)丙酸SM-1(5g，22.4mmol)和乙腈(100mL)。向此懸浮液中依次添加三乙胺(9.37mL，67.2mmol)、HOBt(0.686g，4.48mmol)和EDC.HCl(6.44g，33.6mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h。在此時間之後，將混合物用水稀釋並用乙酸乙酯萃取三次。將合併的有機層依次用1M HCl溶液、NaHCO 3 飽和溶液洗滌，最後用鹽水洗滌。將有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾並且使用旋轉蒸發儀真空濃縮以得到呈無色油狀物的L-INT-1c(8.75g，83%產率)。將材料不經進一步純化而用於下一步驟。MS(ESI+；方法10)m/z 422.5(M+H)。 1 H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.49-7.27(m,5H),5.15-4.98(m,2H),4.56-4.27(m,1H),4.19-3.83(m,3H),3.61-3.37(m,4H),3.29-2.55(m,5H),1.49(s,9H)。
連接子中間體Xc
Figure 108135606-A0202-12-0142-112
Xa.1-(Boc)-2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0142-311
Figure 108135606-A0202-12-0142-113
在500mL燒瓶中製備L-INT-1c(8.6g，20.4mmol)在二氯甲烷(160mL)中的溶液。使用冰浴將溶液冷卻至0℃，然後添加三乙胺(7.11mL，51.0mmol)，隨後添加乙醯氯(1.74mL，24.48mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4h。在此時間之後，將混合物用水淬滅並且用二氯甲烷萃取。將合併的有機層依次用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾並且使用旋轉蒸發儀真空濃縮以得到呈黃色油狀物的Xa(10.6g，95%產率)。將材料不經進一步純化而用於下一步驟。MS(ESI+；方法10)m/z 464.3(M+H)。 1 H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.48-7.27(m,5H),5.18-5.01(m,2H),4.54-3.84(m,6H),3.47-3.36(m,2H),3.19-2.51(m,5H),2.33-2.01(m,3H),1.49(s,9H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
Xb.1-(N-Cbz-β-丙胺醯基)-3-(乙醯氧基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0142-312
三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0143-114
向Xa(10.6g，19.44mmol)在二氯甲烷(160mL)中的0℃溶液中緩慢添加三氟乙酸(22.46mL，292mmol)。除去冰浴，並且將溶液在室溫下攪拌6h。在此時間之後，將混合物濃縮至乾以提供三氟乙酸鹽Xb，將其不經進一步純化而使用。MS(ESI+)m/z 364.3(M+H)。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.52-7.22(m,5H),5.09(s,2H),4.62-4.04(m,4H),3.71-3.38(m,5H),3.17-2.59(m,4H),2.27-2.10(m,3H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
Xc.2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0143-313
乙酸苄基酯
Figure 108135606-A0202-12-0143-116
在250mL燒瓶中裝入Xb(16g，18.1mmol)、碳酸鉀(7.50g，54.3mmol)和乙腈(160mL)。然後，添加2-溴乙酸苄酯SM-3(4.26mL，27.1mmol)並且將反應混合物在室溫下攪拌15h。在此時間之後，將反應混合物用水淬滅並且用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層依次用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾並且使用旋轉蒸發儀真空濃縮。將粗混合物藉由快速層析法(Biotage isolera，RediSep柱：二氧化矽220g，洗脫劑A：二氯甲烷，洗脫劑B：二氯甲烷+MeOH(9：1)，梯度在20min內從0至100% B)純化以得到不夠純的混合物。使用快速層析法(Biotage isolera，RediSep柱：二氧化矽SI KP-NH 44g，洗脫劑A：環己烷，洗脫劑B：乙酸乙酯，梯度在20min內從0至100% B)進行第二次純化以獲得呈無色油狀物的Xc(6.52g，63%產率)。MS(ESI+)m/z 512.3(M+H)。 1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.49-7.15(m,10H),5.17(s,2H),5.08(s,2H),4.19-3.96(m,3H),3.82-3.54(m,3H),3.40(m,2H),3.27-3.08(m,2H),3.06-2.94(m,1H),2.88-2.73(m,2H),2.69-2.52(m,2H),1.99(d,J=5.1Hz,3H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
Xd.2-(1'-甲基環丙基羰基氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0144-314
乙酸苄基酯
Figure 108135606-A0202-12-0144-117
L-INT-5a.1-(Boc)-2-(1'-甲基環丙基羰基氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0144-315
Figure 108135606-A0202-12-0144-118
向1-甲基環丙烷甲酸SM-4(47.5mg，0.475mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加EDC．HCl(91mg，0.475mmol)和DMAP(58.0mg，0.475mmol)。將反應在室溫下攪拌30min並且添加L-INT-1c(100mg，0.237mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h。在此時間之後，將反應混合物用氯化銨飽和溶液淬滅並且用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層依次經無水硫酸鎂乾燥，過濾並且使用旋轉蒸發儀濃縮至乾。將粗殘餘物藉由快速層析法(Teledyne Isco，柱：RediSep 4g，洗脫劑A：二氯甲烷，洗脫劑B：二氯甲烷/MeOH 8：2，梯度在20 min內從0至100% B)純化以得到呈淺黃色油狀物的所需化合物(97mg，77%產率)。MS(ESI+；方法10)m/z 504.2(M+H)。
Xd.2-(1'-甲基環丙基羰基氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0145-316
乙酸苄基酯
Figure 108135606-A0202-12-0145-119
按照針對Xb和Xc的合成描述的通用方法，從L-INT-5a以兩步製備Xd。L-INT-5：UPLC-MS(方法10)：保留時間=1.18min；MS(ESI+)m/z 552.4(M+H)。 1 HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.40-7.30(m,10H),7.19-7.17(m,1H),5.14-5.06(m,2H),5.05-5.00(m,2H),4.07-3.97(m,2H),3.91-3.79(m,1H),3.67-3.56(m,3H),3.23-3.18(m,2H),3.10-2.88(m,3H),2.78-2.57(m,3H),2.45-2.39(m,2H),1.20(m,3H),1.08-1.07(m,2H),0.72-0.71(m,2H)。
無痕連接子；L1-L7
Figure 108135606-A0202-12-0145-120
L-2b：2-(乙醯氧基甲基)-4-(β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0145-317
乙酸雙三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0145-121
將Xc(3g，5.86mmol)溶解於四氫呋喃(60mL)中，並且添加三氟乙酸(1.04mL，13.49mmol)，隨後添加鈀炭(0.624g，5.86mmol)。將 燒瓶依次置於真空下並且用氫回填。重複該操作三次，並且將反應混合物在室溫攪拌15h。在此時間之後，將混合物用二氯甲烷/甲醇混合物(9：1，50mL)稀釋並且通過矽藻土墊過濾。將矽藻土小心地用甲醇(50mL)洗滌，並且將合併的濾液真空濃縮以提供呈微黃色泡沫的粗標題材料L-2b(3.2g，95%產率)。MS(ESI+)m/z 288.3(M+H)。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 4.50-4.16(m,3H),4.10-3.82(m,3H),3.72-3.39(m,4H),3.29-3.20(m,3H),2.92-2.76(m,2H),2.11(d,J=5.1Hz,3H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
L2.2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-(((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基羰基)-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0146-318
乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0146-453
將粗L-2b(200mg，0.349mmol)吸收於二氯甲烷(2mL)和乙腈(3mL)中以提供輕微混濁的混合物。添加三乙胺(0.195mL，1.397mmol)和((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(112mg，0.384mmol)產生溶液，將其在1h後蒸發。將粗材料：(i)溶解於6mL的3：1乙腈：水中並且使用HPLC(柱：Waters XBridge BEH 5μm 19×150mm；方法：在水中的15%-30%乙腈10min梯度(10mM氫氧化銨)，30mL/min)純化。將級分蒸發，快速冷凍並且凍乾以提供L2；或(ii)直接吸附在Isolute上並且藉由反相層析法(Teledyne Isco，柱：RediSep C18 15.5金，洗脫劑A：水，洗脫劑B：乙腈，梯度在20min內從10%至100% B)純化凍乾後以得到L2。白色粉末。UPLC-MS(方法10)：保留時間=0.71min；MS(ESI+)m/z 464.3(M+H)。 1 H NMR (500MHz,MeOH-d4)δ 4.31-4.11(m,4H),4.06-3.96(m,1H),3.84-3.64(m,1H),3.55-3.36(m,5H),3.29-3.00(m,2H),2.98-2.74(m,2H),2.66-2.54(m,2H),2.32-2.16(m,6H),2.10-2.03(m,3H),1.69-1.57(m,2H),1.46-1.35(m,1H),1.03-0.89(m,2H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
表7中所示的種類係使用類似於L2的合成中所使用的那些的方法製備的。
Figure 108135606-A0202-12-0147-455
Figure 108135606-A0202-12-0148-124
Figure 108135606-A0202-12-0149-125
無痕連接子L8.2-(2'-甲氧基乙醯氧基甲基)-4-(6'-疊氮基己醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0149-319
乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0149-126
L-8a.1-(Boc)-2-(羥基甲基)-4-(6'-疊氮基己醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0150-320
Figure 108135606-A0202-12-0150-127
將6-疊氮基己酸(743mg，4.73mmol)和N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.0g，5.22mmol)稱重到圓底燒瓶中並且溶解於二氯甲烷(20mL)中。5min後，添加固體2-(羥基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0150-321
-1-甲酸三級丁酯(0.98g，4.53mmol)和二異丙基乙胺(1.0mL，5.73mmol)並且將溶液在室溫下儲存過夜。第二天，將反應混合物用100mL二氯甲烷稀釋並且用1M HCl(2×50mL)、1M NaOH(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌。濃縮有機相以提供L-8a。MS(ESI+)m/z 356.3(M+H)。
L-8b.1-(Boc)-2-(2'-甲氧基乙醯氧基甲基)-4-(6"-疊氮基己醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0150-322
Figure 108135606-A0202-12-0150-128
在圓底燒瓶中，將L-8a(959mg，2.70mmol)溶解於二氯甲烷(12mL)中。添加攪拌棒和二異丙基乙胺(1mL，5.73mmol)，隨後添加2-甲氧基乙醯氯(0.32mL，3.51mmol)，並且將燒瓶蓋上。將反應在室溫下攪拌。6h後，添加100μL另外的2-甲氧基乙醯氯。30min後，將反應混合物用90mL乙酸乙酯稀釋並且用1M HCl(2×25mL)和鹽水(1×20mL)洗滌。將有機相使用旋轉 蒸發儀濃縮。將產物藉由二氧化矽快速柱層析法(使用乙酸乙酯：庚烷梯度)純化。將含有產物的級分合併並且濃縮以提供L-8b。MS(ESI+)m/z=428.3(M+H)。
L-8c.1-(6'-疊氮基己醯基)-3-(2"-甲氧基乙醯氧基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0151-323
三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0151-129
將L-8b(846mg，1.979mmol)溶解於三氟乙酸(10mL，130mmol)和二氯甲烷(10mL)中。將溶液在室溫下攪拌。1h後，使用旋轉蒸發儀除去溶劑，並且將產物在真空下乾燥以提供L-8c。MS(ESI+)m/z 328.2(M+H)。
L-8d.2-(2'-甲氧基乙醯氧基甲基)-4-(6"-疊氮基己醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0151-324
乙酸三級丁基酯
Figure 108135606-A0202-12-0151-130
在帶有攪拌棒的玻璃小瓶中，將L-8c(439mg，0.994mmol)溶解於二甲基甲醯胺(5mL)中。添加溴乙酸三級丁酯(0.220mL，1.491mmol)和二異丙基乙胺(0.868mL，4.97mmol)，並且將小瓶蓋上。將反應在50℃下攪拌過夜。第二天，將反應混合物從熱源中除去並且在-20℃下儲存直至第二天純化。將反應混合物在不進行萃取後處理的情況下藉由二氧化矽快速柱層析法(使用庚烷：乙酸乙酯梯度)純化。將含有產物的級分合併並且濃縮以提供L-8d。MS(ESI-)m/z=486.5(M+甲酸酯)。
L8.2-(2'-甲氧基乙醯氧基甲基)-4-(6"-疊氮基己醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0151-325
乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0152-131
將L-8d(150mg，0.317mmol)溶解於二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)中，並且將反應在室溫下攪拌過夜。第二天，將溶液使用旋轉蒸發儀濃縮並且將殘餘物再溶解於4mL乙腈中。將溶液過濾並且藉由製備型反相HPLC與質量導向級分收集純化(方法如下)。將含有產物的級分合併，冷凍並且凍乾以提供L8。MS(ESI+)m/z=386.5(M+H)。製備型HPLC條件：Waters Sunfire C18；粒徑：5μm；柱尺寸：30×50mm；洗脫劑/梯度：10% CH3CN/H2O/0.7min、10%-30% CH3CN/H2O/3.5min、30%-95% CH3CN/H2O 0.5min(CH3CN和含有0.1% TFA的H2O)；流速：75mL/min；柱溫：室溫；收集m/z：+385。
無痕連接子：L9-L11
Figure 108135606-A0202-12-0152-132
L-9a.2-(丙醯基氧基甲基)-4-(N-Cbz-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0152-326
乙酸三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0153-133
在0℃下，將L-INT-3(250mg，0.51mmol)溶解於二氯甲烷(5mL)中，然後用三氟乙酸(2.5mL)處理並且在氬氣下在室溫下攪拌6h。將反應蒸發，用戊烷洗滌並且乾燥以提供呈三氟乙酸鹽的粗L-9a。LCMS(方法5)：保留時間=0.262min；MS(ESI+)m/z 436.2(M+H)。
L-9b.2-(丙醯基氧基甲基)-4-(β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0153-327
乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0153-134
將L-9a(250mg，0.57mmol)溶解於乙醇(5mL)中，向其中添加10%鈀碳(25mg)。將溶液在氫氣氣球下攪拌6h，然後通過Celite ® 過濾(用乙醇洗滌)。將合併的濾液蒸發以提供化合物L-9b。LCMS(方法5)：保留時間=0.774min；MS(ESI+)m/z 302.2(M+H)。
L9.
Figure 108135606-A0202-12-0153-135
在0℃下，將在乙酸乙酯(5mL)中的L-9b(100mg，0.33mmol)和5-疊氮基戊酸(57mg，0.40mmol)用二異丙基乙胺(107mg，0.83mmol)和丙基膦酸酐(在乙酸乙酯中的50%溶液，158mg，0.50mmol)處理。將反應在氬氣下在室溫下16h，然後用水淬滅並且蒸發。初始快速層析法(SiO 2 ，10%甲醇： 二氯甲烷)之後后製備型HPLC(柱：zorbax C-184.6×150mm；流動相A=在水中的0.01% TFA：甲醇(1：1)，流動相B=乙腈：甲醇(1：1)；時間=0min：30% B；1min：70% B；6min：100% B；1mL/min)以提供L9。LCMS(方法5)：保留時間=0.18min；MS(ESI+)m/z 427.1(M+H)。1H-NMR(MeOH-d4,ppm)(所有分配都是臨時的)4.23-4.17(m,2H),4.16-3.98(m,1H),3.78-3.62(m,1H),3.54(s,2H),3.46-3.43(t,J=4,3H),3.26-3.20(m,1H),3.18-3.05(m,1H),3.03-2.76(m,2H),2.64-2.61(t,J=8,2H),2.43-2.36(m,2H),2.24-2.21(t,J=8,2H),1.75-1.58(m,4H),1.15-1.12(t,J=8,3H)。可交換的質子在MeOD中不可見。表8中所示的種類係使用類似於L-9的合成中所使用的那些的方法製備的：
Figure 108135606-A0202-12-0154-136
Figure 108135606-A0202-12-0154-137
Figure 108135606-A0202-12-0155-138
無痕連接子：L12和L13
Figure 108135606-A0202-12-0155-139
L-12a.1-(Boc)-2-(羥基甲基)-4-(N-馬來醯基-β-丙胺醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0155-328
Figure 108135606-A0202-12-0156-140
在0℃下，將2-(羥基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0156-329
-1-甲酸三級丁酯(200mg，0.93mmol)溶解於二氯甲烷(10mL)中。添加二異丙基乙胺(359mg，2.78mmol)和HATU(422mg，1.11mmol)，並且將溶液在0℃下攪拌15min。添加3-馬來醯亞胺基丙酸(187mg，1.11mmol)，然後將反應在氬氣下在室溫下攪拌12h。將反應用水稀釋並且用二氯甲烷萃取。將有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並且濃縮。藉由快速層析法(中性氧化鋁，2%甲醇：乙酸乙酯)純化提供標題材料L-12a。LCMS(方法6)：保留時間=2.87min。
L-12b.1-(Boc)-2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-馬來醯基-β-丙胺醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0156-330
Figure 108135606-A0202-12-0156-141
在氬氣下，在0℃下，向L-12a(300mg，0.82mmol)和三乙胺(330mg，3.27mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中逐滴添加乙醯氯(125mg，1.64mmol)。將反應在室溫下攪拌3h，然後用水處理並且用二氯甲烷萃取。將有機層乾燥(硫酸鈉)，濃縮並且藉由快速層析法(中性氧化鋁，2%甲醇：乙酸乙酯)純化以提供標題材料L-12b。LCMS(方法6)：保留時間=3.2min。
L-12c.1-(N-馬來醯基-β-丙胺醯基)-3-(乙醯氧基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0156-331
三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0157-142
在0℃下，將L-12b(200mg，0.49mmol)溶解於二氯甲烷(5mL)中，然後逐滴用三氟乙酸(0.4mL)處理並且在氬氣下在室溫下攪拌3h。將反應蒸發，用戊烷洗滌並且乾燥以提供粗標題材料L-12c。LCMS(方法6)：保留時間=1.709min；MS(ESI+)m/z 310(M+H)。
L12.2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-馬來醯基-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0157-332
乙酸三級丁基酯
Figure 108135606-A0202-12-0157-143
在0℃下，向在乙腈(5mL)中的L-12c(140mg，0.45mmol)和碳酸鉀(156mg，1.13mmol)中逐滴添加溴乙酸三級丁酯(100mg，0.54mmol)。將反應溫熱至10℃-15℃，然後允許在氬氣下在室溫下攪拌12h。將反應用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。將有機層乾燥(硫酸鈉)，濃縮並且藉由製備型HPLC(柱：zorbax eclipse XDB C18，21.2×150mm，5μm；流動相A=水，流動相B==乙腈；時間=0min：30% B；2min：40% B；10min：60% B)純化以提供L12。LCMS(方法6)：保留時間=3.08min；MS(ESI+)m/z 424(M+H)。 1 H-NMR(CDCl 3 ,ppm)6.69(s,2H),4.25-4.14(m,2H),4.09-3.96(m,2H),3.88-3.83(t,J=9,2H),3.65-3.54(m,1H),3.46-3.33(m,2H),3.31-3.17(m,2H),3.05-2.98(m,2H),2.84-2.75(m,2H),2.68-2.63(t,J=9,2H),2.09-2.07(d,J=6,3H),1.45(s,9H)。
L13係使用類似於L12的合成中所使用的那些的方法製備的：
L13.2-(2'-甲氧基乙醯氧基甲基)-4-(N-馬來醯基-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0158-333
乙酸三級丁基酯(1-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)-4-(3-(馬來醯亞胺基)丙醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0158-334
-2-基)甲基2-甲氧基乙醯酯
Figure 108135606-A0202-12-0158-144
L13.LCMS(方法6)：保留時間=3.04min；MS(ESI+)m/z 454.5(M+H)。 1 H-NMR(CDCl 3 ,ppm)6.70(s,2H),4.40-4.24(m,1H),4.20-4.10(m,1H),4.07-4.60(d,J=4,2H),4.02-3.94(m,1H),3.87-3.83(t,J=8,2H),3.70-3.60(m,1H),3.68-3.60(m,1H),3.58-3.51(m,1H),3.45(s,3H),3.41-3.39(d,J=8,1H),3.36-3.32(s,1H),3.32-3.28(s,1H),3.18-3.10(m,1H),3.04-2.97(m,1H),2.83-2.81(t,J=4,1H),2.79-2.75(m,1H),2.67-2.64(t,J=8,2H),1.46(s,9H)。
無痕連接子；L14-L16
Figure 108135606-A0202-12-0159-146
L14a.1-(Boc)-2-(羥基甲基)-4-(3'-(2"-(2'''-(2''''-((N-Cbz)-胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0159-335
Figure 108135606-A0202-12-0159-147
在0℃下，向溶解於二氯甲烷(20mL)中的2-(羥基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0160-336
-1-甲酸三級丁酯(1.0g，4.63mmol)中添加二異丙基乙胺(1.79g，13.9mmol)和HATU(2.10g，5.55mmol)。將溶液在0℃下攪拌15min。添加3-(2'-(2"-(2'''-((N-Cbz)-胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(1.64g，4.63mmol)，並且將反應在氬氣下在室溫下攪拌16h。將反應用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。將有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並且濃縮。藉由快速層析法(SiO2，1%-4%甲醇：二氯甲烷)純化提供標題材料L-14a。LCMS(方法5)：保留時間=1.27min；MS(ESI+)m/z 554.3(M+H)。
L-14b.1-(Boc)-2-(乙醯氧基甲基)-4-(3'-(2"-(2'''-(2''''-((N-Cbz)-胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙醯基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0160-337
Figure 108135606-A0202-12-0160-148
在0℃下，向溶解於二氯甲烷(20mL)中的L-14a(500mg，0.90mmol)和三乙胺(228mg，2.26mmol)中逐滴添加乙醯氯(83mg，1.08mmol)。將反應在氬氣下在室溫下攪拌16h。將反應用水稀釋並且用二氯甲烷萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥並且濃縮，然後藉由快速層析法(SiO 2 ，1%-4%甲醇：二氯甲烷)純化以提供標題材料L-14b。LCMS(方法7)：保留時間=1.54min；MS(ESI+)m/z 595.8(M+H)。
L-14c.1-(3'-(2"-(2'''-(2''''-((N-Cbz)-胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙醯基)-3-(乙醯氧基甲基)哌
Figure 108135606-A0202-12-0160-338
三氟乙酸鹽
Figure 108135606-A0202-12-0160-149
在0℃下，將L-14b(500mg，0.84mmol)溶解於二氯甲烷(10mL)中，然後逐滴用三氟乙酸(3mL)處理並且在氬氣下在室溫下攪拌3h。將反應蒸發，用戊烷洗滌並且乾燥以提供粗標題材料L-14c，將其不經進一步純化或分析而用於下一反應。
L14.2-(乙醯氧基甲基)-4-(3'-(2"-(2'''-(2''''-((N-Cbz)-胺基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0161-339
乙酸三級丁基酯
Figure 108135606-A0202-12-0161-150
在0℃下，向在乙腈(10mL)中的L-14c(500mg，1.0mmol)和碳酸鉀(418mg，3.03mmol)中逐滴添加溴乙酸三級丁酯(295mg，1.51mmol)。將反應在氬氣下在室溫下攪拌20h。將反應用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。將有機層乾燥(硫酸鈉)，濃縮並且藉由初始快速層析法(SiO 2 ，1%-5%甲醇：二氯甲烷)純化，隨後藉由製備型HPLC(柱：zorbax eclipse XDB C18，4.6×150mm，5μm；流動相A=在水中的0.01% TFA，流動相B=乙腈：甲醇(1：1)，1mL/min；時間=0min：30% B；1min：70% B；6min：100% B)純化以提供L14。LCMS(方法5)：保留時間=3.43min；MS(ESI+)m/z 610.35(M+H)。 1 H-NMR(CDCl 3 ,ppm)7.36-7.31(m,5H),5.49(s,1H),5.09(s,2H),4.26-4.16(m,1H),4.07-3.98(m,1H),3.78-3.74(t,J=6,2H),3.60-3.53(m,11H),3.39-3.32(m,4H),2.84-2.72(m,2H),2.61-2.57(t,J=3,2H),2.08-2.06(d,J=6,2H),1.45(s,9H)。
表9中所示的種類係使用類似於L14的合成中所使用的那些的方法製備的：
Figure 108135606-A0202-12-0162-151
Figure 108135606-A0202-12-0162-152
Figure 108135606-A0202-12-0162-456
Figure 108135606-A0202-12-0163-154
Figure 108135606-A0202-12-0164-155
Figure 108135606-A0202-12-0165-157
Figure 108135606-A0202-12-0166-158
實例2
無痕連接子與生物活性部分的加合物
此實例描述了許多也能夠與載體軛合的無痕連接子-藥物加合物的合成。如下所描繪的D1包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽(SEQ ID NO：19)。
Figure 108135606-A0202-12-0166-458
Figure 108135606-A0202-12-0167-160
加合物的合成
生物活性部分與無痕連接子的醯化：
L2-NHS.2-(乙醯氧基甲基)-4-(N-(((1R',8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基羰基)-β-丙胺醯基)-1-哌
Figure 108135606-A0202-12-0167-340
乙酸N-羥基琥珀醯亞胺基酯
Figure 108135606-A0202-12-0168-161
將L2(16mg，0.031mmol)溶解於二甲亞碸(0.818mL)中以達到38mM的濃度。添加三乙胺(3.46μL，0.025mmol)，隨後添加N,N'-二琥珀醯亞胺基碳酸酯(11.94mg，0.047mmol)，並且將所得的澄清溶液在氬氣下在室溫下攪拌1h。將溶液不經進一步純化按原樣用於下一步驟。LCMS(方法10)：保留時間=0.93min；MS(ESI+)m/z 561.4(M+H)。
表12中的種類係使用類似於L2-NHS的合成中所使用的那些的方法製備的。
Figure 108135606-A0202-12-0168-162
Figure 108135606-A0202-12-0169-163
L2-D1(SEQ ID NO：19)(L2D1)
Figure 108135606-A0202-12-0170-164
向D1(SEQ ID NO：19)(30mL，9.66mmol)在組胺酸緩衝液(20mM，pH 5.8)或1x PBS(pH7.4)中的10mg/mL溶液中緩慢添加L2-NHS在DMSO中的38mM溶液(0.508mL，19.32mmol)。將反應混合物劇烈渦旋，然後在室溫下以200tr/min振盪2h。藉由超速離心(Amicon過濾器，3kDa MWCO，2000rcf，45min，室溫)進行純化，用組胺酸緩衝液或1x PBS洗滌(3次)除去殘餘小分子雜質，從而得到L2D1和未經修飾的D1的混合物。MS(方法9)解卷積m/z 29969(D1,M+H)；解卷積m/z 30415(L2D1，M+H，預期MW=MW(D1)+446)。
重要的分析參數係確定(未經修飾的D1，n=0)的比率：(單醯化D1，n=1)：(聚醯化D1，n>1)。比較質譜中各種種類的相對峰高允許估算出待製備的產物比率。
估算反應產物比率的另一種方法係利用衍生化反應產物的SEC(尺寸排阻層析法)分析；為了實現反應產物的分離，需要進行衍生化。
L2D1衍生化反應
Figure 108135606-A0202-12-0171-166
Figure 108135606-A0202-12-0172-167
將來自反應混合物的等分試樣(10mg/mL的L2D1溶液，0.020mL，0.060μmol)用Mn約5kDa的甲氧基-PEG-疊氮化物(西格瑪-奧德里奇公司(Sigma-Aldrich)，689475，0.014mL的在1×PBS中的100mg/mL溶液，0.28μmol)處理，渦旋，在37℃下振盪30min並且用PBS(0.066mL)稀釋。
L2D1衍生物的分析
SEC：(儀器：Agilent LC 1260 Infinity；柱：Superdex 200 increase 10/300GL(28-9909-44)；柱溫：室溫，流速：0.75mL/min；注射體積：10μL；流動相：通過0.10膜過濾器(等度)初步過濾的1/9 PBS/水；執行時間：40min；檢測波長：214nm)。L2D1衍生物比率的確定(未經修飾的D1，n=0，保留時間=20.90min)：(單醯化D1，n=1，保留時間=18.23min)：(雙醯化D1，n=2，保留時間=16.64min)=[(n=0)：(n=1)：(n=2)]=87：12：1。
實例3
透明質酸的官能化
此實例描述了官能化透明質酸的合成，該透明質酸本身可以是載體，或者也可以與交聯部分反應以形成水凝膠。
透明質酸中間體[HA-N3]的合成：
Figure 108135606-A0202-12-0173-168
透明質酸鈉鹽係一種線性聚合物，由葡糖醛酸和N-乙醯半乳糖胺的重複二聚體單元組成，其中重複單元分子量為401.3Da。在此實例中，報告的 透明質酸的莫耳數係指重複單元的莫耳數，並且相對於透明質酸的重複單元的莫耳數報告與透明質酸反應所用的試劑的當量。聚合物的平均分子量決定了每條聚合物鏈的重複單元的平均數。由供應商生命中心生物醫學公司(HA200K，明尼蘇達州的查斯卡)標記為具有200kDa的標稱平均分子量的透明質酸鈉鹽的各批次可以在151kDa-300kDa範圍內變化，如藉由黏度測定法確定的。在此實例中，這樣一個具有200kDa的假定標稱平均分子量的透明質酸鈉鹽分子將具有大約500個單體單元的平均長度。
[HA-N3]-23%的合成
將透明質酸鈉鹽溶液(標稱平均分子量200kD；250.1mg，0.623mmol；生命中心生物醫學有限責任公司(Lifecore Biomedical,LLC)；產品編號HA200K)完全溶解於25mL的MES緩衝液(50mM，pH 5.5)中。向此溶液中添加4-(4',6'-二甲氧基-1',3',5'-三
Figure 108135606-A0202-12-0174-341
-2'-基)-4-甲基
Figure 108135606-A0202-12-0174-342
啉-4-鎓鹽酸鹽(DMTMM，295mg，1.07mmol，1.71當量)，隨後5mim後添加11-疊氮基-3,6,9-三氧雜十一烷-1-胺(N3-PEG3-NH2，196mg，0.90mmol)。將反應攪拌過夜，然後用25mL的0.25M NaCl溶液稀釋並且藉由切向流過濾純化。
使用來自賽多利斯公司(Sartorius)的30kDa MWCO Vivaflow-50R hydrosart濾筒進行切向流過濾(用400mL的0.25M NaCl溶液洗脫，然後用400mL水洗脫)。
將產物快速冷凍並且凍乾以提供標題材料[HA-N3]-23%。
1 H NMR(400MHz,D 2 O)δ 4.45(bs,2H),4.0-3.1(m,15.5H),1.95(s,3H)。
DOSY-NMR。在帶有5mmDCH冷凍探針的Bruker AVANCE III 400MHz(對於 1 H)儀器上，使用具有一個破壞梯度脈衝序列(stegplsld)的受激回波收集一維擴散序NMR譜(DOSY)。擴散時間和擴散梯度時間分別設定為 50ms和4ms。收集了兩個光譜，梯度強度(gpz6)分別設定為2%和95%。這兩個光譜的比較顯示除了溶劑峰外沒有差異，表明在聚合物中不存在小分子雜質。
Elem.Anal：C：40.05%；H：5.67%：N：5.70%。[HA-N3]的取代度定義為其中的羧酸酯部分已經發生反應以給出所描繪的醯胺的重複單元的%。元素分析用於確定取代度。將藉由經純化的樣品的元素分析確定的[% C/% N]比率輸入以下公式以提供取代度。其中y=[(% C)/(% N)]，則：
取代度=
Figure 108135606-A0202-12-0175-169
在此實例中，[HA-N3]的取代度(DS)係23%。
將用23%的疊氮化物連接子官能化的此200kDa的透明質酸標記為[HA-N3]-23%。
在剩餘的實例中，將用X%的疊氮化物連接子官能化的200kDa的透明質酸標記為[HA-N3]-X%。
表13中的種類係使用類似於[HA-N3]-23%的合成中所使用的那些的方法製備和表徵的。我們發現所達到的取代度取決於所使用的DMTMM試劑的給定存量，並且可能是特質的。通常，對於DMTMM的給定存量，取代度隨著使用的DMTMM當量數的增加而增長，並且取代度隨著使用的DMTMM當量數的減少而降低。藉由透析而不是切向流過濾純化一些[HA-N3]中間體([HA-N3]-23%b、[HA-N3]-37%)。在該等情況下，將粗反應混合物填充到再生的纖維素透析膜(MWCO 1-25kD)中，並且對0.25M-1M NaCl透析1-3天，更換幾次透析溶液，隨後對去離子水進行1-3天的透析，也多次更換透析液。完成後，將樣品從透析管中取出，快速冷凍，並且凍乾。
Figure 108135606-A0202-12-0176-170
實例4
PEG聚合物XL-1-XL-10的製備
此實例描述了可以與其他官能化聚合物反應以形成水凝膠的交聯劑的合成。
PEG基交聯聚合物
通用結構1。
Figure 108135606-A0202-12-0177-171
在一些方面，w可以是22、45、91、136、181或226，並且分別對應具有約1kDa、約2kDa、約4kDa、約6kDa、約8kDa或約10kDa的標稱平均分子量的PEG。
通用結構2。
Figure 108135606-A0202-12-0177-172
Figure 108135606-A0202-12-0177-173
Figure 108135606-A0202-12-0178-174
Figure 108135606-A0202-12-0179-177
XL-8的結構：
Figure 108135606-A0202-12-0179-176
起始PEG的MW：Mn約10,000kDa。
PEG基交聯聚合物的合成
取代度係PEG衍生的交聯劑的重要參數，並且定義為被所需引入的官能基取代的PEG端基的百分比。使用 1 H-NMR確定取代度，以比較特異於PEG端基的亞甲基基團的整合與特異於引入的官能基的質子的整合。對於XL-1-XL-6，特異於PEG部分的亞甲基基團係酯或胺基甲酸酯亞甲基[-(C=O)-O-CH 2 -]，將其與在雙環[6.1.0]壬-4-炔部分中的質子的整合進行比較。取代度=((藉由 1 H-NMR測得的引入官能基的莫耳數)/(藉由 1 H-NMR測得的PEG端基的莫耳數))×100。
XL-1.PEG(2000)-雙-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]
Figure 108135606-A0202-12-0180-178
XL-1a.PEG(2000)-雙-[3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸酯]
Figure 108135606-A0202-12-0180-179
將3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸(1.15g，6.0mmol)和Mn約2kDa的PEG(3g，1.500mmol)溶解於30mL二氯甲烷中。添加二甲基胺基吡啶(0.092g，0.750mmol)和EDC．HCl(1.211g，6.0mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將粗產物藉由二氧化矽快速柱層析法(帶有ELSD檢測器)(使用0-20%二氯甲烷：二氯甲烷/甲醇(4：2)梯度)純化。將含有產物的級分合併並且濃縮至乾以提供XL-1a。 1 H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 6.83(t,J=5.7Hz,2H),4.16-4.09(m,4H),3.61-3.56(m,5H),3.51(s,184H),3.15(q,J=6.7Hz,4H),2.43(t,J=7.0Hz,4H),1.37(s,18H)。
XL-1b.PEG(2000)-雙-[3-(胺基)丙酸酯]雙-三氟乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0181-180
將XL-1a(3.12g，1.357mmol)溶解於二氯甲烷(36mL)中。添加三氟乙酸(36mL)，並且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將溶劑在減壓下去除。將粗產物依次用乙醚研磨並且濾出。重複該操作三次，並且將所得的固體在真空下乾燥以提供XL-1b。 1 H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.80(s,4H),4.24-4.11(m,4H),3.72-3.32(m,182H),3.09-2.95(m,4H),2.67(t,J=6.9Hz,4H)。
XL-1-1.PEG(2000)-雙-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]
Figure 108135606-A0202-12-0181-182
將XL-1b(600mg，0.286mmol)溶解於乙腈(7mL)中。添加三乙胺(1.99mL，14.3mmol)，隨後添加((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(333mg，1.14mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物藉由二氧化矽快速柱層析法(帶有ELSD檢測器)(使用0-40%二氯甲烷：二氯甲烷/甲醇(4：2)梯度)直接純化。將含有產物的級分合併並且濃縮至乾以得到XL-1-1。出於儲存目的，將XL-1-1作為在乙腈中的溶液(50mg/mL)保存放置在冰箱中。分析型UPLC(方法B，參見下文)：保留時間=1.19min。 1 H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 4.23(m,4H),4.14(m,4H),3.64(br s,214H),2.55(m,4H),2.22(m,12H),1.61(m,4H),1.35(m,2H),0.92(m,4H)。
方法A：帶有CAD檢測器的分析型HPLC：Waters XBridge BEH300 C18；粒徑：3.5μm；柱尺寸：4.6×100mm；洗脫劑/梯度：2% CH 3 CN/H 2 O/0.5 min、2%-98% CH3CN/H2O/17.5min(含有0.05% TFA的CH3CN和含有0.1% TFA的H2O)；流速：1mL/min；柱溫：50℃。
方法B：帶有ELSD檢測器的分析型UPLC：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；粒徑：1.8μm；柱尺寸：2.1×50mm；洗脫劑/梯度：在1.4min內5%-98% CH3CN/H2O(含有0.04% FA的CH3CN和含有0.05% FA+3.75mM AA的H2O)；流速：1mL/min；柱溫：60℃。
方法C：帶有CAD的分析型UPLC：Waters ACQUITY BEH C18；粒徑：1.7μm；孔徑：130Ǻ；柱尺寸：2.1×50mm；洗脫劑/梯度：5% CH3CN/H2O/1.2min、5%-95% CH3CN/H2O/1.8min(含有0.1% TFA的CH3CN和含有0.1% TFA的H2O)；流速：1mL/min；柱溫：45℃。
表15中的種類係使用類似於XL-1(XL-1-2除外)的合成中所使用的那些的方法製備的。
Figure 108135606-A0202-12-0182-184
Figure 108135606-A0202-12-0182-185
Figure 108135606-A0202-12-0183-186
Figure 108135606-A0202-12-0184-187
PEG基交聯聚合物的合成中使用的中間體：
Figure 108135606-A0202-12-0184-188
Figure 108135606-A0202-12-0184-189
Figure 108135606-A0202-12-0185-190
XL-5.PEG(2000)-雙-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基胺基甲醯]
Figure 108135606-A0202-12-0185-191
將Mn約2kDa的PEG二胺鹽酸鹽(鍵凱科技公司，300mg，0.148mmol)溶解於乙腈(3mL)中。添加三乙胺(0.413mL，2.96mmol)，隨後添加((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(345mg，1.184mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌4h。將反應混合物藉由製備型反相HPLC與ELSD引發的級分收集直接純化(方法如下)。將含有產物的級分合併，冷凍並且凍乾以提供XL-5。出於儲存目的，將XL-5作為乙腈、DMSO或甲醇溶液保存在冰箱中。分析型HPLC-CAD(方法如下)：保留時間=11.85min。NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 4.14(m,4H),3.63(br s,186H),3.54(m,4H),2.22(m,12H),1.61(m,4H),1.38(m,2H),0.94(m,4H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
製備型HPLC條件：Waters XBridge C18；粒徑：5μm；柱尺寸：19×250mm；洗脫劑/梯度：5% CH3CN/H2O/0.5min、5%-95% CH3CN/H2O/12.5min、95% CH3CN/H2O/3min；流速：30mL/min；柱溫：室溫。
分析型HPLC-CAD條件：Waters XBridge BEH300 C18；粒徑：3.5μm；柱尺寸：4.6×100mm；洗脫劑/梯度：2% CH3CN/H2O/0.5min、2%-98% CH3CN/H2O/17.5min(含有0.05% TFA的CH3CN和含有0.1% TFA的H2O)；流速：1mL/min；柱溫：50℃。
XL-6.PEG(10000)-四-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基胺基甲醯]
Figure 108135606-A0202-12-0187-192
將Mn約10kDa的4臂PEG胺鹽酸鹽(季戊四醇核心，鍵凱科技公司，500mg，0.05mmol)溶解於二氯甲烷(15mL)中。添加三乙胺(0.554mL，4.00mmol)，隨後添加((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(175mg，0.600mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物藉由使用2kDa MWCO Spectra/Por 6再生纖維素透析膜(斯百全公司(Spectrum,Inc.))對甲醇透析直接純化。為了在進一步反應中分析和利用，使用旋轉蒸發儀將XL-6藉由濃縮分離。出於儲存目的，將化合物作為甲醇溶液保存在室溫下。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 4.14(m,8H),3.63(br s,995H),2.22(m,24H),1.61(m,8H),1.38(m,4H),0.94(m,8H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
XL-8.
Figure 108135606-A0202-12-0188-194
將Mn約10kDa的8臂PEG胺鹽酸鹽(六甘油核心，鍵凱科技公司，800mg，0.08mmol)溶解於二氯甲烷(5mL)中。添加三乙胺(0.887mL，6.40mmol)，隨後添加((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(807mg，2.56mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌5h。將反應混合物使用旋轉蒸發儀濃縮，然後溶解於甲醇中並且藉由使用2kDa MWCO Spectra/Por 6再生纖維素透析膜(斯百全公司)對甲醇透析純化。為了在進一步反應中分析和利用，使用旋轉蒸發儀將XL-8藉由濃縮分離，然而出於儲存目的，將XL-8作為甲醇溶液保存在室溫下。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 4.14(m,16H),3.63(br s,935H),2.23(m,48H),1.61(m,16H),1.38(m,8H),0.95(m,16H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
XL-12.PEG(4000)-((氧基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧基))雙(乙烷-2,1-二基)雙(1-(((((1R,8S)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸酯)
Figure 108135606-A0202-12-0189-195
XL-12a.PEG(4000)-((氧基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧基))雙(乙烷-2,1-二基)雙(1-((三級丁氧羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸酯)
Figure 108135606-A0202-12-0189-196
將1-((三級丁氧羰基)胺基)環丙烷甲酸(252mg，1.25mmol)和M n 約4kDa的PEG(1g，0.25mmol)溶解於10mL二氯甲烷中。添加二甲基胺基吡啶(15mg，0.125mmol)和EDC．HCl(192mg，1.0mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將粗產物藉由二氧化矽快速柱層析法(帶有ELSD檢測器)(使用0-100%己烷：EtOAc，然後0-100%二氯甲烷：二氯甲烷/甲醇(4：2)梯度)純化。將含有產物的級分合併並且濃縮至乾以提供XL-12a。 1 H NMR(500MHz, DMSO-d 6)δ 7.53(s,2H),4.09(t,4H),3.51(s,446H),3.38-3.35(m,4H),1.41-1.33(m,18H),1.30(d,4H),1.03-0.97(m,4H)。
XL-12b.PEG(4000)-((氧基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧基))雙(乙烷-2,1-二基)雙(1-胺基環丙烷-1-甲酸酯)雙-三氟乙酸
Figure 108135606-A0202-12-0190-197
將XL-12a(1.03g，0.238mmol)溶解於二氯甲烷(4mL)中。添加三氟乙酸(4mL)，並且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將溶劑在減壓下去除。將粗產物依次用乙醚研磨並且潷析出。重複該操作三次，並且將所得的固體在真空下乾燥以提供XL-12b。 1 H NMR(500MHz,DMSO-d 6 )δ 8.72(s,4H),4.30-4.20(m,4H),3.67-3.60(m,4H),3.50(s,443H),1.46-1.41(m,4H),1.36-1.31(m,4H)。
XL-12.PEG(4000)-((氧基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧基))雙(乙烷-2,1-二基)雙(1-(((((1R,8S)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸酯)
Figure 108135606-A0202-12-0190-198
將XL-12b(1.04g，0.238mmol)溶解於乙腈(5mL)中。添加三乙胺(1.66mL，11.89mmol)，隨後添加((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸酯(277mg，0.952mmol)，並且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物藉由二氧化矽快速柱層析法(帶有ELSD檢測器)(使用0-100%己烷：EtOAc，然後0-100%二氯甲烷：二氯甲烷/甲醇(4：2)梯度)直接純化。將含有產物的級分合併並且濃縮至乾。然後，將固體溶解於二氯甲烷中並且用去離子水洗滌。將有機層經相分離器乾燥以得到XL-12。出於儲存目的，將XL-12作為在乙腈中的溶液(50mg/mL)保存並且放置在冰箱中。 分析型UPLC(方法B，參見上文)：保留時間=1.21min。1H NMR(500MHz,MeOH-d 4)δ 4.25-4.13(m,8H),3.64(s,401H),2.33-2.10(m,8H),1.67-1.56(m,4H),1.52-1.47(m,4H),1.44-1.34(m,2H),1.19-1.11(m,4H),1.00-0.91(m,4H)。可交換的質子在MeOD中不可見。
實例5
此實例描述了藉由使適當官能化的聚合物與交聯劑反應製備的水凝膠的合成。
透明質酸水凝膠的合成：H1g
Figure 108135606-A0202-12-0191-199
Figure 108135606-A0202-12-0192-200
在15mL管中，在室溫下，經1h將[HA-N3]-19%(60mg，137μmol，取代度=19%)溶解於4.0mL無菌1×PBS緩衝液(pH 7.4)中。未經取代的羧酸鈉鹽重複二聚體單元的分子量係401.3Da。疊氮化的重複二聚體單元的MW係579.6Da。[HA-N3]-19%鈉鹽形式的二聚體單元的平均MW係435.2Da=((401.3×0.81)+(579.6×0.19))。使用鈉鹽二聚體單元的平均MW，重複二聚體單元的總莫耳數係137μmol，並且疊氮化的重複二聚體單元的莫耳數係26μmol。
向此溶液中添加XL-1-1的50mg/mL溶液(0.205mL，假定2474Da的MW的試劑4.1μmol，反應官能度8.20μmol)。這產生了關於[HA-N3]- 19%為3% w/v的溶液，並且預測其中6%的[HA-N3]-19%重複單元與XL-1-1交聯((8.20μmol[XL-1-1-反應官能度]/137μmol[HA單元])×100=6%)。
將混合物短暫渦旋以混合，然後分配到10mL注射器中，將該注射器蓋上並且在37℃下保持過夜，以提供H1g。目視檢查(反轉測試)顯示成功的凝膠化。
透明質酸基水凝膠顆粒的製備
強壓H1g(2mL)穿過100目不銹鋼篩網盤到5mL注射器中，從而得到粗凝膠顆粒。向此注射器中添加1mL的1×PBS，隨後渦旋以混合。將注射器保持在室溫下6h以允許水凝膠溶脹。這產生了關於[HA-N3]-19%為1.5%的混合物。強壓H1g的溶脹的粗凝膠顆粒通過200目不銹鋼篩網盤20次，從而得到作為最終產物的細凝膠顆粒。
表17中列出的透明質酸基水凝膠(和相應的水凝膠顆粒)類似於H1g來製備。藉由使用的[HA-N3]組分及其在交聯反應中的濃度以及藉由使用的PEG交聯劑及其預期與骨架聚合物形成交聯的程度(交聯%)來定義水凝膠。
Figure 108135606-A0202-12-0193-201
實例6
水凝膠-藥物軛合物的合成
此實例描述了其中的藥物藉由無痕連接子與載體軛合的水凝膠-藥物軛合物的合成。
當製備用於體內給藥的樣品時，未蓋上的材料或溶液的所有操作均在無菌條件下在層流罩中進行。使用的所有消耗品此前未打開並且標記為「無菌」。
C1-2(H1g-L2D1)
Figure 108135606-A0202-12-0194-202
Figure 108135606-A0202-12-0195-204
將H1g的水凝膠顆粒懸浮液(1.08g，15mg/mL，19mM總二聚體重複單元)用L2D1的溶液(7mL的在20mM組胺酸緩衝液(pH=5.8)中的13.33mg/mL溶液)處理，渦旋並且在30℃下振盪過夜(600rpm)。將反應管離心(1500rcf，5min)，並且使用針頭和注射器將上清液從管中除去。將新鮮的1×PBS(10-15mL)添加到管中，將管振盪以重懸凝膠。重複離心、除去上清液並且用新鮮的緩衝液稀釋。繼續洗滌直至在上清液中檢測不到D1。使用Nanodrop分光光度計在280nm處檢測吸光度。
水凝膠-藥物軛合物的關鍵描述符係每體積的水凝膠負載藥物的量(=載藥量)。當藥物係蛋白質時，有幾種方法確定負載量。
水凝膠的蛋白質負載量係藉由使軛合的蛋白質從已知體積的水凝膠中強制釋放，隨後定量釋放的蛋白質來確定的。在此實例中：將20.0mg的[C1-2]稱重到反應管中。將樣品用0.5M NaOH(4mL，AVS Titrinorm，31951.290)處理，渦旋並且在37℃下振盪30min。使用UV分光光度計測量在此樣品中釋放的藥物D1(SEQ ID NO：19)的濃度為11.68mg/mL，相當於在[C1-2]中11.68mg D1/mL的水凝膠。一式兩份地進行此分析。稀釋前[C1-2]的平均確定蛋白負載量係12.14mg D1/mL的水凝膠。
在另一種方法中，將20.8mg的[C1-2]稱重到反應管中。將樣品用1M Tris-HCl緩衝液pH=9.5(4mL)處理，渦旋並且在37℃下振盪24小時(或直至測量濃度達到穩定狀態)。使用UV分光光度計測量在此樣品中釋放的藥物D1的濃度為13.3mg/mL，相當於在[C1-2]中13.3mg D1/mL的水凝膠。一式三份地進行此分析。稀釋前[C1-2]的平均確定蛋白負載量係12.72mg D1/mL的水凝膠。
在另一種方法中，將24.5mg的[C2-2]稱重到反應管中並且添加2800μL的水，隨後添加58.05μL的透明質酸酶溶液(來自沃辛頓公司(Worthington)，LS005475，8140U/mg)。將反應混合物在室溫下振盪3hr，並且使用UV分光光度計測量在此樣品中的吸收為19.68mg/mL。一式三份地進行此分析。稀釋前[C2-2]的平均確定蛋白負載量係19.49mg D1/mL的水凝膠。
確定蛋白質負載量的替代方法依賴於差分計算。在此方法中，在實驗開始時從已知的總添加蛋白質中減去在水凝膠洗滌液中回收的D1的測量濃度(使用UV分光光度計)(例如：D1+L2D1)。基於總水凝膠的體積，該差分給出D1負載量。
表18中的水凝膠係使用類似於C1-2的合成中所使用的那些的方法製備的。
Figure 108135606-A0202-12-0197-205
可以將水凝膠-藥物軛合物用1×PBS稀釋以達到用於給藥的所需最終藥物濃度。添加的1×PBS的量可以藉由以下方程式計算：(PBS稀釋劑(mL))=[總藥物(mg)/所需載藥量(mg/mL)]-(軛合物的初始體積(mL))。
藉由移除柱塞並且回填所需體積的C2-2，將軛合物C2-2分配到附帶30G針頭的0.5mL胰島素注射器中用於給藥。
將水凝膠-藥物軛合物在室溫下儲存。
實例7
體外藥物釋放研究
7-1.D1(SEQ ID NO：19)從水凝膠-藥物軛合物中的釋放
Figure 108135606-A0202-12-0198-206
其中Y選自上表3。
D1(SEQ ID NO：19)從水凝膠軛合物C1-2和C2-2中的釋放如圖4A中所描繪的發生。在此研究中，在37℃下，將一系列水凝膠-D1-軛合物保持在1×PBS中以評估無痕連接子裂解反應後藥物的釋放。在不同的時間點對該等反應取樣，並且進行分析以確定在上清液中釋放的D1的濃度。
將每種水凝膠(大約125μL；藉由稱量確定的精確量，假定水凝膠密度=1g/mL)添加到Transwell®插入皿(康寧公司(Corning Inc)；6孔板，24mm直徑，聚碳酸酯膜，8.0μm孔徑)中。板的孔中填充有2.6mL的PBS+(1%)青黴素/鏈黴素。(生命技術公司(Life Technologies)，10000IU/μg/mL)。然後，將含有水凝膠的插入皿放入孔中，並且在水凝膠的頂部(在插入皿中)添加1.375mL的PBS+(1%)青黴素/鏈黴素。為每個水凝膠樣品準備了三個孔。將板牢固地蓋上並在潮濕的環境中保持在37℃下。
在不同的時間點將收集緩衝液樣品從孔中取出，持續長達28天。在每個時間點，並且對於每個孔，將Transwell®插入皿從孔中取出，滴乾並且轉移到新板的含有3.6mL的新鮮1x PBS+(1%)青黴素/鏈黴素的孔中。將補充的板返回到培養箱。同時，將全部體積的收集緩衝液轉移到乾淨的管中並且稱量，然後從收集緩衝液中取出時間點樣品(0.10mL用於分析目的)，並且將剩餘的樣品儲存在-80℃下直至測定。
此測定中使用的其他緩衝液係包含1%胎牛血清(吉博科公司(Gibco)，參考號10270106)、12.5μg/ml胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉補充劑(羅氏公司(Roche)，參考號11074547001)、50μg/ml L-抗壞血酸磷酸鎂鹽n水合物(和光株式會社(Wako)，參考號013-12061)、100單位/ml青黴素和100μg/ml鏈黴素的牛滑液(BSF)、1M Tris．HCl溶液(天惠華公司(Teknova)，pH 9.5)或杜爾貝科改良的伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)(吉博科公司，參考號41965)。如果實驗係在22℃下而不是在37℃下運行，則可以省略青黴素/鏈黴素添加劑。
對於每個時間點樣品，蛋白質濃度(其代表該時間點每個孔中的蛋白質濃度)係藉由用D1初步校準的尺寸排阻層析法SEC確定的(儀器：Agilent LC 1260 Infinity；柱：Superdex 200 increase 10/300GL(28-9909-44)；柱溫：室溫，流速：0.75mL/min；注射體積：10μL；流動相：通過0.10μm膜過濾器初步過濾的1/9 PBS/水；執行時間：40min；檢測波長：214nm、280nm和680nm)。一式三份地對每個時間點樣品進行分析，並且對結果取平均值。
在給定時間點在給定孔中的蛋白質總量藉由將該時間點的蛋白質濃度乘以測量的體積(假設密度為1g/mL)來計算。到該時間點為止從每種水凝膠釋放到每個孔中的累積D1係藉由將每個時間點該孔中D1的總量相加來計算的。圖4B中顯示了直至給定時間點為止從軛合物C2-2中釋放的蛋白質的累積 百分比。釋放的D1的累積百分比係藉由將給定時間點釋放的累積D1除以初始水凝膠樣品中存在的總D1並且乘以100來計算的。如從圖4B中明顯看出，D1從載體的釋放係緩慢的，但是持續了一個月的時間。
在時間點t孔中的蛋白質濃度：
[P](t)
在時間點t孔中的總體積：
V(t)
在時間點t孔中蛋白質的總質量：
m(P)孔(t)=[P](t)×V(t)
直至時間點t從水凝膠中釋放的蛋白質的累積質量：
Figure 108135606-A0202-12-0200-343
孔
實例8
水凝膠的比較性組織耐受性
此研究檢查了在患有膝骨關節炎的Lewis大鼠中單次關節內注射後，經11週的時間，水凝膠是否引發嚴重的炎症反應或任何其他不良事件。測試品係H1a、H9a和用於治療骨關節炎膝蓋痛的Synvisc-One ® 透明質酸基可注射溶液(賽諾菲公司(Sanofi))。
H9a的製備
如針對H1a描述的製備H9a的透明質酸基水凝膠顆粒(上文，使用交聯劑XL-9-1)，其中在第一次擠出之後，將一半體積的1×PBS添加到顆粒中。藉由移除柱塞並且回填所需體積的H1a/H9a，將H1a/H9a的水凝膠顆粒分配到附帶30G針頭的0.5mL胰島素注射器中用於給藥。藉由對注射器的輕柔操作去除氣泡。
Synvisc-One ®
Synvisc-One®係購買的並且按接收時使用。
關節內注射
對雄性Lewis大鼠(LEW/OrlRj Janvier)的一個膝蓋進行半月板撕裂手術。手術後約7天，由於關節穩定性導致發生膝骨關節炎時，在麻醉下在手術後的膝關節中關節內注射25μL的測試品或生理鹽水(表19)。一隻初試(未手術)大鼠作為對照。給藥後持續1-2小時記錄生活觀察結果，並且此後每天至少一次持續一週。在直到屍檢的接下來幾週內，每週記錄一次生活觀察結果。每週測量體重。
Figure 108135606-A0202-12-0201-207
關節內注射後第4、6、8或11週對大鼠實施安樂死。藉由打開膝關節並用25μL鹽水沖洗來收集來自注射的膝關節的滑液。在屍檢期間記錄宏觀異常。從所有動物收集操作/注射的右膝蓋，固定在10%中性緩衝的福馬林中，包埋在石蠟中並且切片。由病理學家對蘇木素和伊紅以及番紅/快綠染色的膝關節切片進行評估。
結果和結論
當在大鼠膝關節中關節內注射時，在11週內水凝膠未導致任何不良事件。在早期時間點，在滑膜下間隙中存在水凝膠、滑膜細胞向關節間隙出泡以及滑膜和滑膜下細胞的增殖係短暫的，並且對於HA水凝膠軛合物明顯少於Synvisc-One ® ，後者已經上市並且經常用於治療骨關節炎膝關節疼痛(賽諾菲公司)。
實例9
體內藥物釋放研究
此研究檢查了在大鼠膝關節中關節內注射後D1從水凝膠藥物綴物C2-2的體內釋放特性。
C2-2的製備
如在實施方式6中所述的製備水凝膠藥物軛合物C2-2。C2-2中的D1濃度係19.0mg/g，相當於0.475/關節的D1劑量。
關節內注射
在麻醉下對9隻初試雄性Lewis大鼠(LEW/Or1Rj Janvier；9週齡)的兩個膝關節各自注射25μL的C2-2。在表20中指示的時間點收集血液/血清。在時間點在關節內注射後第24、72和168小時，對3隻大鼠各自實施安樂死。從左膝關節收集滑液和關節軟骨，從右膝收集整個關節組織。
Figure 108135606-A0202-12-0202-208
藉由向閉合的膝關節中關節內注射20μL鹽水，移動關節並且在打開膝關節後直接收集液體來收集膝關節的滑液。之後，將另外20μL注射到打開的膝關節內並且收集。用另外的20μL鹽水重複灌洗，從而得到60μL的總灌洗體積。取樣後立即將裝有滑液的預稱重的小瓶離心，以保證水凝膠顆粒位於管底。之後，在將主小瓶儲存於-80℃下之前，從預稱重的小瓶中取出5μL。將分離出的5μL滑液保留為備用樣品，以允許在不進行透明質酸酶處理的情況下進行分析，並且也儲存在-80℃下。藉由ECLIA測定法定量血清和滑液中的D1濃度。該方法係基於使用固定在MSD板上的抗ANGPTL3單株抗體(諾華公司(Novartis)，iProt109046)捕獲D1。使用生物素化的抗ANGPTL3多株抗體(R & D系統公司(R&D Systems)，BAF3829)檢測捕獲的D1，隨後與鏈黴親和素-SulfoTag一起孵育。將滑液樣品在分析之前用透明質酸酶(1500U/mL)預處理並且在4℃下以450rpm振盪孵育過夜，或者在不進行透明質酸酶預處理的情況下保存在-80℃下。
結果和結論
如圖5中所示，與在1週時不再可檢測到的在D1速釋配製物的情況下觀察到的短且高的全身性暴露相比，C2-2水凝膠以非常低的水平提供了長達1週的長時間血清暴露。C2-2水凝膠關節內注射還導致滑液中持續至少一週的持續高D1水平，其藉由透明質酸酶處理以從滑液中的殘餘水凝膠中釋放D1。在不進行透明質酸酶預處理的情況下在滑液中檢測到的游離D1水平要低得多，但持續至少一週也是可檢測到的。
該等結果表明，C2-2水凝膠延長了D1向滑液中的釋放持續至少一週。
<110> 諾華公司(NOVARTIS AG)
<120> 血管生成素樣3多肽之持續遞送
<130> PPR0672-US-PSP
<160> 45
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 460
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Figure 108135606-A0202-12-0205-209
Figure 108135606-A0202-12-0206-210
<210> 2
<211> 2126
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
Figure 108135606-A0202-12-0206-211
<210> 3
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 K423Q
<400> 3
Figure 108135606-A0202-12-0206-212
Figure 108135606-A0202-12-0207-213
<210> 4
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 K423S
<400> 4
Figure 108135606-A0202-12-0207-214
Figure 108135606-A0202-12-0208-215
<210> 5
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 207-460 K423Q
<400> 5
Figure 108135606-A0202-12-0208-216
Figure 108135606-A0202-12-0209-217
<210> 6
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 207-460 K423S
<400> 6
Figure 108135606-A0202-12-0209-218
<210> 7
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-460 K423Q
<400> 7
Figure 108135606-A0202-12-0210-219
<210> 8
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-460 K423S
<400> 8
Figure 108135606-A0202-12-0210-220
Figure 108135606-A0202-12-0211-221
<210> 9
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-460 S424T
<400> 9
Figure 108135606-A0202-12-0211-222
<210> 10
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-460 K423Q
<400> 10
Figure 108135606-A0202-12-0211-223
Figure 108135606-A0202-12-0212-224
<210> 11
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-460 K423S
<400> 11
Figure 108135606-A0202-12-0212-225
<210> 12
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-460 K423Q
<400> 12
Figure 108135606-A0202-12-0213-226
<210> 13
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-460 K423S
<400> 13
Figure 108135606-A0202-12-0213-227
Figure 108135606-A0202-12-0214-228
<210> 14
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-460 S424T
<400> 14
Figure 108135606-A0202-12-0214-229
<210> 15
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-460 K423Q
<400> 15
Figure 108135606-A0202-12-0214-230
Figure 108135606-A0202-12-0215-231
<210> 16
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-460 K423S
<400> 16
Figure 108135606-A0202-12-0215-232
<210> 17
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-460 K423Q
<400> 17
Figure 108135606-A0202-12-0216-233
<210> 18
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-460 K423S
<400> 18
Figure 108135606-A0202-12-0216-234
Figure 108135606-A0202-12-0217-235
<210> 19
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-460 K423Q
<400> 19
Figure 108135606-A0202-12-0217-236
<210> 20
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-460 K423S
<400> 20
Figure 108135606-A0202-12-0217-237
Figure 108135606-A0202-12-0218-238
<210> 21
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-455 K423Q
<400> 21
Figure 108135606-A0202-12-0218-239
<210> 22
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-455 K423S
<400> 22
Figure 108135606-A0202-12-0218-240
Figure 108135606-A0202-12-0219-241
<210> 23
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-455 K423Q
<400> 23
Figure 108135606-A0202-12-0219-242
<210> 24
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-455 K423S
<400> 24
Figure 108135606-A0202-12-0220-243
<210> 25
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-455 K423Q
<400> 25
Figure 108135606-A0202-12-0220-244
Figure 108135606-A0202-12-0221-245
<210> 26
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-455 K423S
<400> 26
Figure 108135606-A0202-12-0221-246
<210> 27
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-455 K423Q
<400> 27
Figure 108135606-A0202-12-0221-247
Figure 108135606-A0202-12-0222-248
<210> 28
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-455 K423S
<400> 28
Figure 108135606-A0202-12-0222-249
<210> 29
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-455 K423Q
<400> 29
Figure 108135606-A0202-12-0222-250
Figure 108135606-A0202-12-0223-251
<210> 30
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-455 K423S
<400> 30
Figure 108135606-A0202-12-0223-252
<210> 31
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-455 K423Q
<400> 31
Figure 108135606-A0202-12-0224-253
<210> 32
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-455 K423S
<400> 32
Figure 108135606-A0202-12-0224-254
Figure 108135606-A0202-12-0225-255
<210> 33
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 201-460 K423del
<400> 33
Figure 108135606-A0202-12-0225-256
<210> 34
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-460 K423del
<400> 34
Figure 108135606-A0202-12-0225-257
Figure 108135606-A0202-12-0226-258
<210> 35
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-460 K423del
<400> 35
Figure 108135606-A0202-12-0226-259
<210> 36
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-460 K423del
<400> 36
Figure 108135606-A0202-12-0227-260
<210> 37
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-460 K423del
<400> 37
Figure 108135606-A0202-12-0227-261
Figure 108135606-A0202-12-0228-262
<210> 38
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-460 K423del
<400> 38
Figure 108135606-A0202-12-0228-263
<210> 39
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-460 K423del
<400> 39
Figure 108135606-A0202-12-0228-264
Figure 108135606-A0202-12-0229-265
<210> 40
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 225-455 K423del
<400> 40
Figure 108135606-A0202-12-0229-266
<210> 41
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 226-455 K423del
<400> 41
Figure 108135606-A0202-12-0229-267
Figure 108135606-A0202-12-0230-268
<210> 42
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 228-455 K423del
<400> 42
Figure 108135606-A0202-12-0230-269
<210> 43
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 233-455 K423del
<400> 43
Figure 108135606-A0202-12-0231-270
<210> 44
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 241-455 K423del
<400> 44
Figure 108135606-A0202-12-0231-271
Figure 108135606-A0202-12-0232-272
<210> 45
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ANGPTL3 242-455 K423del
<400> 45
Figure 108135606-A0202-12-0232-273
Figure 108135606-A0202-11-0002-348

Claims (67)

  1. 一種由式(I)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且
    R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0001-459
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    R1係氫或C1-C4烷基；
    R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團與它們所附接的一個或多個碳原子一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
    a係0、1、2、3或4；
    R3係氫或C1-C4烷基；
    R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
    R12係氫或C1-C4烷基；
    R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R13係C4-C4烷基；或者
    R12和R13與C(R12a)和O一起組合形成5、6或7員環醚；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
    R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
    b係從1至10的整數；
    Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
    L係視需要經取代的二價連接子；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含SEQ ID NO：1或3-45中的任一者。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含具有K423Q取代或K423缺失的ANGPTL3多肽。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含含有胺基酸殘基201-460；207-460；225-455；225-455；225-460；225-460；226-455；226-455；226-460；226-460；228-455；228-455；228-460；228- 460；233-455；233-455；233-460；233-460；241-455；241-455；241-460；241-460；242-455；242-455；242-460；或242-460的ANGPTL3多肽，各自參考SEQ ID NO：1。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含與參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460具有至少95%同一性且含有K423Q取代的ANGPTL3多肽。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中D包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽(SEQ ID NO：19)。
  8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R1係氫或甲基，R1a係氫或甲基，或者CR1R1a一起組合形成環丙-1,1-二基基團。
  9. 如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中變數a係0。
  10. 如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R3和R3a各自係氫。
  11. 如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中Y係C(O)R4，並且R4係C1-C6烷基、C3-C6環烷基或C1-C2烷氧基C1-C2烷基。
  12. 如申請專利範圍第11項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基。
  13. 如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中Y係SiR5R6R7；
    R5和R6各自係甲基、乙基、丙基或異丙基；並且
    R7係C1-C4烷基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、三級丁氧基、2-乙氧基乙氧基、2-異丙氧基-乙氧基、四氫哌喃基氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中b係2、3或4。
  14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中Z係CH-L-A、CH-A、N-L-A或N-A；
    L係視需要經取代的二價連接子Q-[Sp-Q]h-Q；
    Q在每次出現時獨立地選自鍵、O、C(O)、N(H)、N(C1-C4烷基)、C(O)NH、C(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)、N(C1-C4烷基)C(O)、N(H)C(O)O、N(C1-C4烷基)C(O)O、OC(O)N(H)、OC(O)N(C1-C4烷基)、N(H)C(O)N(H)、N(C1-C4烷基)C(O)N(H)、N(H)C(O)N(C1-C4烷基)、N(C1-C4烷基)C(O)N(C1-C4烷基)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、S、S(O)2、N(H)S(O)2、N(C1-C4烷基)S(O)2、S(O)2N(H)、S(O)2N(C1-C4烷基)、C1-C2烷基-C(O)N(H)、N(H)C(O)C1-C2烷基、C1-C2烷基-C(O)O、OC(O)C1-C2烷基、1,2,3-三唑、OP(O)2、P(O)2O、C1-C4烷基-P(O)2-O或O-P(O)2-C1-4烷基；
    Sp在每次出現時獨立地選自視需要經取代的C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、[W-O]g、C1-C8烷基-[O-W]g、[O-W]g-O-C1-C8烷基、C1-C8烷基-[O-W]g-O-C1-C8烷基或寡肽；
    h係在1與20之間的整數；
    g係在約2與約50之間的加權平均數；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  15. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中Z係CHR8或NR9；
    R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)-(CH2)n-Q-A、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
    q在每次出現時獨立地是1、2或3；
    g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
    m係1或0；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中Z係NR9；
    R9係C(O)-(CH2)n-Q-A或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A；
    n係1至8的整數；並且
    A係R10或R11。
  17. 如申請專利範圍第1至16項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R10係疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環烯基、降冰片基、經取代的或未經取代的乙烯基羧基、經取代的或未經取代的乙烯基磺 醯基、經取代的或未經取代的C2-C8烯基、胺基、巰基、經取代的或未經取代的C1-C8羧基、經取代的或未經取代的C1-C8羰基、-O-NH2、醯肼基、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
    Figure 108135606-A0202-13-0006-344
    基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精或金剛烷基。
  18. 如申請專利範圍第1至17項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R10包含適於將式(I)之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽與載體偶合的反應性官能基。
  19. 如申請專利範圍第1至16項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11係生物可降解的。
  20. 如申請專利範圍第1至16或19項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含聚合物或交聯聚合物。
  21. 如申請專利範圍第19或20項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含含有一種或多種交聯聚合物的水凝膠。
  22. 如申請專利範圍第1至16和19至21項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含含有以下中的一種或多種的聚合物、交聯聚合物或水凝膠：透明質酸、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚麩胺酸酯、聚離胺酸、聚唾液酸、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚乙烯吡咯啶酮、聚
    Figure 108135606-A0202-13-0006-345
    唑啉、聚亞胺基碳酸酯、聚胺基酸、親水性聚酯、聚醯胺、聚胺酯、聚脲、葡聚糖、瓊脂糖、木聚糖、甘露聚糖、卡拉膠、海藻酸鹽、明膠、膠原、白蛋白、纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基澱粉、幾丁聚醣、核酸、其衍生物、其共聚物或其組合。
  23. 如申請專利範圍第1至16和19至22項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含透明質酸、聚乙二醇、透明質酸的交聯水凝膠、聚乙二醇的交聯水凝膠或其組合。
  24. 如申請專利範圍第1至16和19至23項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含透明質酸或聚乙二醇。
  25. 如申請專利範圍第1至16和19至23項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含含有交聯透明質酸或交聯聚乙二醇的水凝膠。
  26. 如申請專利範圍第24或25項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中該透明質酸或聚乙二醇被至少一個包含疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、C7-C12環烯基、降冰片基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、胺基、巰基、C1-C8羧基、C1-C8羰基、-O-NH2、卡巴肼、馬來醯亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
    Figure 108135606-A0202-13-0007-346
    基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精、金剛烷基或其組合的官能基官能化。
  27. 如申請專利範圍第1至16和19至26項中任一項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中R11包含含有交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含至少一個選自-NH(W1)(O(W1))d-V的側鏈，其中W1係C2-C4烷基-1,2-二基，其中氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    d係0至500的數均值；並且
    V係包含疊氮基、炔基、經取代的或未經取代的C7-C12環炔基、經取代的或未經取代的C7-C12雜環炔基、C7-C12環烯基、降冰片基、乙烯基羧基、乙烯基磺醯基、C2-C8烯基、胺基、巰基、C1-C8羧基、C1-C8羰基、-O-NH2、卡巴肼、馬來醯 亞胺、α-鹵代羰基、呋喃、經取代的或未經取代的四
    Figure 108135606-A0202-13-0008-347
    基、離胺酸、麩醯胺酸、環糊精或金剛烷基的合適的官能基。
  28. 如申請專利範圍第27項所述之藥物遞送系統或藥學上可接受的鹽，其中V係疊氮化物。
  29. 一種用於製備交聯載體配製物之方法，該方法包括：
    (a)官能化載體分子R11；
    (b)製備反應性交聯劑；以及
    (c)藉由在約4℃至約60℃的溫度下孵育約0.5小時至約48小時，使該官能化的載體分子與該反應性交聯劑反應以形成交聯載體。
  30. 如申請專利範圍第29項所述之方法，其中該載體分子包含透明質酸或聚乙二醇。
  31. 如申請專利範圍第30項所述之方法，其中該載體分子被疊氮化物、巰基、胺、胺氧基(O-NH2)或醛部分官能化以提供用於交聯的反應性官能基。
  32. 如申請專利範圍第29至31項中任一項所述之方法，其中該反應性交聯劑的製備包括使聚乙二醇與1-((三級丁氧羰基)胺基)環丙烷-1-甲酸、3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸、1-(三級丁氧羰基)哌啶-4-甲酸、2-(1-(((三級丁氧羰基)胺基)甲基)環丙基)乙酸、2-甲基-3-((三級丁氧羰基)胺基)丙酸或7-((三級丁氧羰基)胺基)庚酸反應和使該官能化的聚乙二醇酯去保護。
  33. 如申請專利範圍第32項所述之方法，其中該反應性交聯劑的製備還包括在該官能化的聚乙二醇酯去保護後引入至少兩個雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基基團。
  34. 一種可使用如申請專利範圍第29至33項中任一項所述之方法獲得的交聯水凝膠。
  35. 如申請專利範圍第34項所述之交聯水凝膠，其中該載體分子被疊氮化物官能化。
  36. 一種用於製備藥物加合物之方法，該藥物加合物包含與包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D偶合的無痕連接子R，該方法包括：
    (a)提供包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D；
    (b)使該生物活性劑與具有活化的羰基官能基的無痕連接子R反應；以及
    (c)從該等試劑中純化該藥物加合物。
  37. 一種可使用如申請專利範圍第36項所述之方法獲得的藥物加合物。
  38. 一種用於製備藥物遞送系統之方法，該方法包括：
    (a)製備載體分子R11，其中R11係交聯水凝膠；視需要，步驟(a)還可以包括純化該交聯水凝膠載體分子R11；
    (b)分開地使無痕連接子R與包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D軛合，從而形成無痕連接子-D加合物；步驟(b)還可以視需要包括對該無痕連接子-D加合物的純化；
    (c)使該載體分子R11與該無痕連接子-D加合物軛合；以及
    (d)從該等試劑中純化該藥物遞送系統。
  39. 一種使用如申請專利範圍第38項所述之方法製備的藥物遞送系統。
  40. 一種用於治療黃斑變性之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；
    R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0010-460
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    R1係氫或C1-C4烷基；
    R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
    a係0、1、2、3或4；
    R3係氫或C1-C4烷基；
    R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
    R12係氫或C1-C4烷基；
    R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R13係C1-C4烷基；或者
    CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；
    R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
    R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜 原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
    b係從1至10的整數；
    Z係CHR8或NR9；
    R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
    q在每次出現時獨立地是1、2或3；
    g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
    m係1或0；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  41. 一種用於治療肌肉骨骼障礙之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；
    R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0012-461
    其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
    R1係氫或C1-C4烷基；
    R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
    a係0、1、2、3或4；
    R3係氫或C1-C4烷基；
    R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
    R12係氫或C1-C4烷基；
    R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R13係C1-C4烷基；或者
    CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；
    R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
    R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜 原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
    b係從1至10的整數；
    Z係CHR8或NR9；
    R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
    q在每次出現時獨立地是1、2或3；
    g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
    m係1或0；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  42. 一種用於治療疾病或障礙之方法，該方法包括向有需要的受試者施用由式(I)表示的包含軛合物D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0013-462
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    R1係氫或C1-C4烷基；
    R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
    a係0、1、2、3或4；
    R3係氫或C1-C4烷基；
    R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
    R12係氫或C1-C4烷基；
    R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R13係C1-C4烷基；或者
    CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；
    R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
    R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
    b係從1至10的整數；
    Z係CHR8或NR9；
    R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]g(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
    q在每次出現時獨立地是1、2或3；
    g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
    m係1或0；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  43. 一種用於延長包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽D的半衰期之方法，該方法包括將D附接到由式(I)表示的R，其中R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0015-463
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    R1係氫或C1-C4烷基；
    R1a係氫或C1-C4烷基，或者CR1R1a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R2在每次出現時獨立地選自C1-C4烷基或側氧基，或者兩個R2基團一起組合形成稠合的C3-C6環烷基或螺C3-C6環烷-1,1-二基基團；
    a係0、1、2、3或4；
    R3係氫或C1-C4烷基；
    R3a係氫、C1-C4烷基，或者CR3R3a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    Y係C(O)R4、C(O)OR4、C(O)NHR4、C(O)NR5R6、SiR5R6R7或CR12R12aOR13；
    R12係氫或C1-C4烷基；
    R12a係氫或C1-C4烷基，或者CR12R12a一起組合形成C3-C6環烷-1,1-二基；
    R13係C1-C4烷基；或者
    CHR12OR13一起組合形成5、6或7員環醚；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被羥基、胺基、C1-C4烷氧基或單和雙C1-C4烷基胺基取代；
    R5和R6各自獨立地選自C1-C4烷基和C3-C6環烷基；
    R7係C1-C8烷基、C3-C7環烷基、C1-C8烷氧基、C3-C7環烷氧基、雜環烷氧基或-(OCHR3CH2)bO-C1-C4烷基，其中該雜環烷氧基係具有一個選自N、O和S的環雜原子並且視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代的4至7員飽和雜環的環；
    b係從1至10的整數；
    Z係CHR8或NR9；
    R8和R9各自獨立地選自氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基或-C(O)(CH2)q[O-W]8(NHC(O))m(CH2)q[O-W]p-Q-A，其中該烷基基團視需要經0或1個Q-A取代；
    q在每次出現時獨立地是1、2或3；
    g和p各自獨立地具有在約2與約50之間的加權平均長度；
    m係1或0；
    W係C2-C4烷基-1,2-二基，其中該氫、甲基或乙基側鏈可以存在於任一主鏈碳原子上；
    Q係鍵、O、N(H)或N(C1-C4烷基)；
    A係氫、C1-C8烷基、C(O)C1-C8烷基、C(O)N(H)C1-C8烷基、C(O)OC1-C8烷基、R10或R11，其中該烷基基團視需要經0或1個R10取代；
    R10係適於將式(I)與載體偶合的反應性官能基；並且
    R11係載體。
  44. 如申請專利範圍第43項所述之方法，其中，D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。
  45. 一種包含式(III)之藥物遞送系統：
    Figure 108135606-A0202-13-0017-464
    其中ANGPTL3包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽或其組合。
  46. 一種包含式(IV)之藥物遞送系統：
    Figure 108135606-A0202-13-0017-465
    其中SEQ ID NO：19包含含有參考SEQ ID NO：1的胺基酸殘基242-460和K423Q取代的ANGPTL3多肽。
  47. 一種包含D-R-R11的藥物遞送系統，其中R包含與生物活性劑D偶合的無痕連接子；D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R11包含多種透明質酸聚合物，其中每種聚合物包含一系列隨機的未官能化D-葡糖醛酸單體、一個或多個被交聯劑官能化的D-葡糖醛酸單體或一個或多個被藥物加合物D-R官能化的D-葡糖醛酸單體。
  48. 如申請專利範圍第47項所述之藥物遞送系統，其中D包含與SEQ ID NO：1或3-45中任一個具有至少95%同一性的ANGPTL3多肽。
  49. 一種由式(XXIV)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D係包含至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0018-466
    (XXIV)。
  50. 一種由式(XXV)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0019-467
  51. 一種由式(XXVI)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0020-468
  52. 一種由式(XXVII)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0021-469
  53. 一種由式(XXVIII)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0022-470
  54. 一種由式(XXIX)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0023-471
  55. 一種由式(XXX)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
    Figure 108135606-A0202-13-0024-472
  56. 一種由式(XXXI)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0024-473
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    Y係C(O)R4；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    Z係N-L-A；
    L係C(O)CH2CH2NH；
    A係R11；並且
    R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[3-(((((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]。
  57. 一種由式(XXXII)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
    Figure 108135606-A0202-13-0026-474
  58. 一種由式XXXIII表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0026-475
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    Y係C(O)R4；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    Z係N-L-A；
    L係C(O)CH2CH2NH；
    A係R11；並且
    R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[1-((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基-環丙烷-1-甲酸酯]。
  59. 一種由式(XXXIV)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
    Figure 108135606-A0202-13-0028-476
  60. 一種由式XXXV表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0028-477
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    Y係C(O)R4；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    Z係N-L-A；
    L係C(O)CH2CH2NH；
    A係R11；並且
    R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[1-((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)哌啶-4-甲酸酯]。
  61. 一種由式(XXXVI)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
    Figure 108135606-A0202-13-0030-478
  62. 一種由式XXXVII表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0030-479
    其中虛線表示與該一級胺附接；
    Y係C(O)R4；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    Z係N-L-A；
    L係C(O)CH2CH2NH；
    A係R11；並且
    R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[7-(((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基)庚酸酯]。
  63. 一種由式(XXXVIII)表示的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中藥物D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R4係甲基、乙基、丙基、異丙基、1-甲基-環丙基或甲氧基甲基：
    Figure 108135606-A0202-13-0032-480
  64. 一種由式(XXXIX)表示的包含D-R的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽，其中D包含含有至少一個一級胺的ANGPTL3多肽；並且R係適於釋放D的連接子：
    Figure 108135606-A0202-13-0032-481
    其中虛線表示與該一級胺、二級胺或氮雜雜芳基環的環氮原子附接；
    Y係C(O)R4；
    R4係C1-C8烷基或C3-C7環烷基，其中環烷基視需要經0、1或2個獨立選擇的C1-C4烷基基團取代，並且其中烷基視需要被C1-C4烷氧基取代；
    Z係N-L-A；
    L係C(O)CH2CH2NH；
    A係R11；並且
    R11係衍生自交聯透明質酸的水凝膠，其中該透明質酸包含N(H)(CH2CH2O)3CH2CH2N3的至少一個醯胺連接的側鏈，並且其中用於形成該水凝膠的交聯劑包含PEG(2000)-雙-[2-甲基-3-(((((1'R,8'S,9's)-雙環[6.1.0]壬-4'-炔-9'-基)甲氧基)羰基)胺基)丙酸酯]。
  65. 如申請專利範圍第55至64項中任一項所述之藥物遞送系統，其中D係SEQ ID NO：19，並且R4係-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)CH3或甲基環丙基。
  66. 如申請專利範圍第55至65項中任一項所述之藥物遞送系統，其中D係SEQ ID NO：19，並且R4係-CH3。
  67. 如申請專利範圍第55至66項中任一項所述之藥物遞送系統，其中該D-R加合物包含：
    Figure 108135606-A0202-13-0033-482
TW108135606A 2018-10-03 2019-10-01 血管生成素樣３多肽之持續遞送 TW202027794A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862740609P 2018-10-03 2018-10-03
US62/740,609 2018-10-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202027794A true TW202027794A (zh) 2020-08-01

Family

ID=68165677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108135606A TW202027794A (zh) 2018-10-03 2019-10-01 血管生成素樣３多肽之持續遞送

Country Status (25)

Country Link
US (2) US11389541B2 (zh)
EP (1) EP3860657A1 (zh)
JP (2) JP7336513B2 (zh)
KR (1) KR20210066860A (zh)
CN (1) CN112770782A (zh)
AR (1) AR116566A1 (zh)
AU (1) AU2019353174A1 (zh)
BR (1) BR112021005981A2 (zh)
CA (1) CA3112251A1 (zh)
CL (1) CL2021000819A1 (zh)
CO (1) CO2021004012A2 (zh)
CR (1) CR20210156A (zh)
CU (1) CU20210022A7 (zh)
DO (1) DOP2021000053A (zh)
EA (1) EA202190650A1 (zh)
EC (1) ECSP21022120A (zh)
IL (1) IL281227A (zh)
JO (1) JOP20210061A1 (zh)
MX (1) MX2021003839A (zh)
PE (1) PE20211646A1 (zh)
PH (1) PH12021550675A1 (zh)
SG (1) SG11202102076TA (zh)
TW (1) TW202027794A (zh)
WO (1) WO2020070675A1 (zh)
ZA (1) ZA202101419B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220005561A (ko) * 2019-05-07 2022-01-13 젠자임 코포레이션 전구약물 조성물에서 약물 농도를 정량화하는 방법
CN112220963B (zh) * 2020-09-24 2022-05-24 哈尔滨工业大学 一种非溶胀uv交联壳聚糖可注射水凝胶及其合成方法
CN117355323A (zh) 2021-05-24 2024-01-05 诺华股份有限公司 用于治疗骨关节炎的方法
TW202306970A (zh) 2021-05-24 2023-02-16 瑞士商諾華公司 用於治療骨關節炎之方法
WO2024044608A1 (en) * 2022-08-23 2024-02-29 Astellas Institute For Regenerative Medicine Cell cryopreservative formulations and methods of use
CN117379362A (zh) * 2023-10-11 2024-01-12 首都医科大学附属北京潞河医院 负载血管生成素样蛋白3的水凝胶及其制备方法与应用

Family Cites Families (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308236D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Dna vectors
DE3737523A1 (de) 1987-11-05 1989-05-18 Bayer Ag Verwendung von substituierten hydroxypiperidinen als antivirale mittel
US5462990A (en) 1990-10-15 1995-10-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Multifunctional organic polymers
US5288931A (en) 1991-12-06 1994-02-22 Genentech, Inc. Method for refolding insoluble, misfolded insulin-like growth factor-I into an active conformation
WO1995031223A1 (fr) 1994-05-13 1995-11-23 Kuraray Co., Ltd. Gel polymere a usage medical
AU4172397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Biochem Pharma Inc. Lactam inhibitors of thrombin
WO1999058660A1 (en) 1998-05-12 1999-11-18 Human Genome Sciences, Inc. 97 human secreted proteins
US6030831A (en) 1997-09-19 2000-02-29 Genetech, Inc. Tie ligand homologues
AU3661199A (en) 1998-04-27 1999-11-16 Zymogenetics Inc. Novel polypeptide growth factors and materials and methods for making them
AU4643699A (en) 1998-06-24 2000-01-10 Compugen Ltd. Angiopoietin-like growth factor sequences
WO2000021572A2 (en) 1998-10-09 2000-04-20 The University Of Michigan Hydrogels and water soluble polymeric carriers for drug delivery
JP2003531811A (ja) 1999-03-08 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 血管形成及び心臓血管新生の促進又は阻害
GB9912350D0 (en) 1999-05-26 1999-07-28 European Molecular Biology Lab Embl Modified cytokine
ES2291198T3 (es) 1999-07-20 2008-03-01 Genentech, Inc. Composiciones y procedimientos para el tratamiento de enfermedades de tipo inmunologico.
US20030013649A1 (en) 2000-01-31 2003-01-16 Rosen Craig A. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US20040249141A1 (en) 2000-10-16 2004-12-09 Audrey Goddard Tie ligand homologues
WO2002033085A2 (en) 2000-10-16 2002-04-25 Genentech, Inc. Wisp polypeptides and therapeutical applications thereof
JP2004524297A (ja) 2001-01-23 2004-08-12 イーライ・リリー・アンド・カンパニー メラノコルチン受容体アゴニスト
US20030027751A1 (en) 2001-04-10 2003-02-06 Genvec, Inc. VEGF fusion proteins
US20030194798A1 (en) 2001-05-24 2003-10-16 Surber Mark W. Minicell compositions and methods
FI117667B (fi) 2001-07-05 2007-01-15 Univ Zuerich Farmaseuttinen koostumus, joka soveltuu käytettäväksi ortopediassa ja hammaslääketieteessä
EP1451578B1 (en) 2001-11-16 2013-08-21 Genentech, Inc. Use of angptl3 antagonists for the treatment of liver diseases
US7157546B2 (en) 2002-09-09 2007-01-02 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer alkanals
JP4685775B2 (ja) 2003-09-18 2011-05-18 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、とりわけｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
BR122019000248B8 (pt) 2004-03-23 2021-07-27 Complex Biosystems Gmbh reagente de ligador de pró-fármaco de cascata polimérico
US7968085B2 (en) 2004-07-05 2011-06-28 Ascendis Pharma A/S Hydrogel formulations
JP2008532516A (ja) 2005-03-11 2008-08-21 ジェネンテック・インコーポレーテッド 遺伝子破壊、組成物、およびそれに関連する方法
WO2006127809A2 (en) 2005-05-24 2006-11-30 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods for expansion and analysis of cultured hematopoietic stem cells
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
WO2007003054A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Shoichet Molly S Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
US20070060658A1 (en) 2005-08-31 2007-03-15 Diaz David D Stabilization of organogels and hydrogels by azide-alkyne [3+2] cycloaddition
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
EP2094280A1 (en) 2006-12-06 2009-09-02 Seikagaku Corporation Pharmaceutical agent having long-lasting effect of treating arthritic disorders
PT2121751T (pt) 2006-12-08 2017-04-18 Lexicon Pharmaceuticals Inc Anticorpos monoclonais contra angptl3
JP2010518099A (ja) 2007-02-09 2010-05-27 アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー チャネル活性化プロテアーゼ阻害剤としての化合物および組成物
US8173645B2 (en) 2007-03-21 2012-05-08 Takeda San Diego, Inc. Glucokinase activators
CA2682483A1 (en) 2007-03-29 2008-10-09 Novartis Ag 3-imidazolyl-indoles for the treatment of proliferative diseases
WO2008137641A2 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells
AU2008258548B2 (en) 2007-06-08 2014-07-10 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Long-acting transient polymer conjugates of exendin
WO2009095954A2 (ja) 2008-01-31 2009-08-06 Appside Co., Ltd. データ入力装置、データ入力方法ならびにデータ入力プログラムおよびこれを記録した記録媒体
LT2237799T (lt) 2008-02-01 2019-07-25 Ascendis Pharma A/S Provaistas, apimantis besiskaidantį linkerį
CN102272120B (zh) 2008-11-07 2013-12-25 H.隆德贝克有限公司 生物活性酰胺
US8133979B2 (en) 2008-12-16 2012-03-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human angiopoietin 2
US8648144B2 (en) 2009-02-21 2014-02-11 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
WO2010099818A1 (en) 2009-03-03 2010-09-10 Ao Technology Ag Thermoreversible polysaccharide hydrogel
WO2010102663A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Glaxo Group Limited Piperazine derivatives for use in therapy
IN2012DN00352A (zh) 2009-06-16 2015-08-21 Bikam Pharmaceuticals Inc
TW201113280A (en) 2009-07-03 2011-04-16 Nensius Res As Aminoalkamides for use in the treatment of inflammatory, degenerative or demyelinating diseases of the CNS
US9139633B2 (en) 2009-07-14 2015-09-22 Novartis Ag Mesenchymal stem cell differentiation
US9173953B2 (en) 2009-07-31 2015-11-03 Ascendis Pharma As Prodrugs containing an aromatic amine connected by an amido bond to a linker
JP5738291B2 (ja) 2009-07-31 2015-06-24 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング インスリンリンカー複合体を含むプロドラッグ
WO2011012715A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Ascendis Pharma As Biodegradable polyethylene glycol based water-insoluble hydrogels
AU2010277560B2 (en) 2009-07-31 2014-12-11 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Long acting insulin composition
WO2011012723A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Ascendis Pharma As Injectable sustained release compositions comprising a pramipexole prodrug
US20120191039A1 (en) 2009-07-31 2012-07-26 Ascendis Pharma A/S Carrier linked pramipexole prodrugs
US8758780B2 (en) 2009-10-06 2014-06-24 Ascendis Pharma As Subcutaneous paliperidone composition
EP2485767A1 (en) 2009-10-06 2012-08-15 Ascendis Pharma A/S Carrier linked paliperidone prodrugs
KR101756493B1 (ko) 2009-10-29 2017-07-10 아센디스 파마 에이에스 생분해성 하이드로겔의 살균
US9062094B2 (en) 2010-01-22 2015-06-23 Ascendis Pharma As Dipeptide-based prodrug linkers for aliphatic amine-containing drugs
EP2525831B1 (en) 2010-01-22 2019-05-15 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked carbamate prodrug linkers
US20130030359A1 (en) 2010-01-22 2013-01-31 Ascendis Pharma A/S Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs
EP3604264A1 (en) 2010-04-27 2020-02-05 SynAffix B.V. Fused cyclooctyne compounds
JP5964815B2 (ja) 2010-05-05 2016-08-03 プロリンクス リミテッド ライアビリティ カンパニー 固体担体からの放出制御薬物
MY165584A (en) 2010-07-29 2018-04-05 Rigel Pharmaceuticals Inc Ampk-activating heterocyclic compounds and methods for using the same
JP6161541B2 (ja) 2011-02-03 2017-07-12 ゾーマ テクノロジー リミテッド 細菌中の機能的タンパク質発現を向上させるための方法および物質
WO2012116250A1 (en) 2011-02-25 2012-08-30 University Of Massachusetts Medical School Monomers and polymers for functional polycarbonates and poly (ester-carbonates) and peg-co-polycarbonate hydrogels
US9464065B2 (en) 2011-03-24 2016-10-11 The Scripps Research Institute Compounds and methods for inducing chondrogenesis
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
EP2716662A4 (en) 2011-05-31 2014-11-19 Univ Tokyo HYDROGEL AND METHOD FOR ITS MANUFACTURE
WO2012173952A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Emory University Piperazine derivatives, compositions, and uses related thereto
MX2014001496A (es) 2011-08-12 2014-04-30 Ascendis Pharma As Composicion de liberacion sostenida de prostaciclina.
CA2848142C (en) 2011-09-07 2021-05-18 Prolynx Llc Hydrogels with biodegradable crosslinking
WO2013036748A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Berry, Lana, L. Bicyclo[6.1.0]non-4-yne reagents for chemical modification of oligonucleotides
US20150010634A1 (en) 2011-10-12 2015-01-08 Ascendis Pharma Ophthamology Division A/S Prevention and treatment of ocular conditions
WO2013078562A2 (en) 2011-12-01 2013-06-06 Angiochem Inc. Targeted enzyme compounds and uses thereof
JP2013116858A (ja) 2011-12-01 2013-06-13 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd Ｂｄｎｆ様低分子化合物を含有する治療薬
JP2015505824A (ja) 2011-12-01 2015-02-26 アンジオケム インコーポレーテッド 標的化リソソーム酵素化合物
EP2852664B1 (en) 2012-05-18 2017-09-06 Medical Research Council Methods of incorporating an amino acid comprising a bcn group into a polypeptide using an orthogonal codon encoding it and an orthorgonal pylrs synthase.
ES2651113T3 (es) 2012-06-25 2018-01-24 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Tratamientos terapéuticos dirigidos
JP2015533132A (ja) 2012-10-11 2015-11-19 アセンディス ファーマ オフサルモロジー ディヴィジョン エー／エス 眼状態を処置するためのｖｅｇｆ中和プロドラッグ
WO2014056915A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Ascendis Pharma A/S Diagnosis, prevention and treatment of diseases of the joint
WO2014056926A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Ascendis Pharma A/S Hydrogel prodrugs
WO2014059446A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Case Western Reserve University Biodegradable hydrogel for polynucleotide delivery
EP2925256A4 (en) 2013-01-22 2016-08-17 Prolynx Llc SEALANTS HAVING CONTROLLED DEGRADATION
US9301971B2 (en) 2013-03-08 2016-04-05 Novartis Ag Peptides and compositions for treatment of joint damage
UY35368A (es) * 2013-03-08 2014-10-31 Irm Llc Péptidos y composiciones para el tratamiento de daño articular
CA2903772A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Novartis Ag Antibody drug conjugates
US11116849B2 (en) 2013-04-22 2021-09-14 Ascendis Pharma A/S Hydrogel-linked prodrugs releasing tagged drugs
DK2988732T3 (da) 2013-04-22 2023-06-26 Ascendis Pharma As Modificerede hydrogeler
WO2014181287A1 (en) 2013-05-09 2014-11-13 Piramal Enterprises Limited Heterocyclyl compounds and uses thereof
CN104292454B (zh) 2013-07-17 2017-12-01 北京键凯科技股份有限公司 聚乙二醇‑环辛炔衍生物
JP2016172783A (ja) 2013-08-08 2016-09-29 生化学工業株式会社 組織膨隆材
WO2015052154A1 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Ascendis Pharma Osteoarthritis Division A/S Hydrogel-linked il-1ra prodrug
WO2015061503A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Prolynx Llc Conjugates of somatostatin and its analogs
EP3068438A1 (en) 2013-11-11 2016-09-21 Ascendis Pharma Relaxin Division A/S Relaxin prodrugs
EP3110450B1 (en) 2014-02-26 2023-06-07 University of Massachusetts Medical School Degradable hydrogel with predictable tuning of properties, and compositions and methods thereof
EP3193941A1 (en) 2014-08-06 2017-07-26 Ascendis Pharma A/S Prodrugs comprising an aminoalkyl glycine linker
WO2016025752A1 (en) 2014-08-14 2016-02-18 Prolynx Llc Reagents for thiol conjugation and conjugates formed therefrom
TWI705827B (zh) 2014-11-07 2020-10-01 瑞士商諾華公司 治療眼部疾病之方法
US20170368189A1 (en) 2015-01-09 2017-12-28 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Cnp prodrugs
MA41794A (fr) 2015-03-18 2018-01-23 The California Institute For Biomedical Res Agents thérapeutiques modifiés et compositions associées
US11298427B2 (en) 2015-05-29 2022-04-12 Ascendis Pharma A/S Prodrugs comprising a pyroglutamate linker
BR112018010205A2 (pt) 2015-11-20 2018-11-21 Cristal Delivery B V nanopartículas com direcionamento ativo
EP3429608A4 (en) 2016-03-16 2019-12-11 Prolynx LLC CONJUGATES WITH EXTENDED RELEASE OF EXENATIDE ANALOGS
CA3030376A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Ascendis Pharma A/S Conjugation method for carrier-linked prodrugs
JOP20190245A1 (ar) * 2017-04-20 2019-10-15 Novartis Ag أنظمة توصيل إطلاق مستدام تتضمن روابط بلا أثر لنقطة الربط

Also Published As

Publication number Publication date
DOP2021000053A (es) 2021-04-30
CO2021004012A2 (es) 2021-04-19
EA202190650A1 (ru) 2021-07-21
WO2020070675A1 (en) 2020-04-09
JP2023145478A (ja) 2023-10-11
ZA202101419B (en) 2022-07-27
JP7336513B2 (ja) 2023-08-31
SG11202102076TA (en) 2021-04-29
ECSP21022120A (es) 2021-04-29
AR116566A1 (es) 2021-05-19
US11389541B2 (en) 2022-07-19
CU20210022A7 (es) 2021-10-12
AU2019353174A1 (en) 2021-04-01
JP2022501406A (ja) 2022-01-06
CR20210156A (es) 2021-04-28
BR112021005981A2 (pt) 2021-06-29
MX2021003839A (es) 2021-05-27
JOP20210061A1 (ar) 2023-01-30
US20220323595A1 (en) 2022-10-13
CN112770782A (zh) 2021-05-07
EP3860657A1 (en) 2021-08-11
KR20210066860A (ko) 2021-06-07
US20200108153A1 (en) 2020-04-09
PH12021550675A1 (en) 2022-01-03
CA3112251A1 (en) 2020-04-09
CL2021000819A1 (es) 2021-11-12
IL281227A (en) 2021-04-29
PE20211646A1 (es) 2021-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW202027794A (zh) 血管生成素樣３多肽之持續遞送
AU2018255933B2 (en) Sustained release delivery systems comprising traceless linkers
EP2455104B1 (en) Bio-functionalized stimulus-responsive dissolvable PEG-hydrogels
US20190282699A1 (en) Thiolated hyaluronan-based hydrogels cross-linked using oxidized glutathione
US20130030359A1 (en) Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs
US11529424B2 (en) Synthetic bioconjugates
CN111918665A (zh) Il-2缀合物
KR20170010651A (ko) 약물이 충전된 히알루론산 가교물 하이드로겔 및 이의 이용
US11261237B2 (en) Modified pigment epithelium-derived factor (PEDF) peptides and uses thereof for treating neovascular diseases, inflammatory diseases, cancer, and for cytoprotection
US20230405136A1 (en) New Combinations of Boron Compounds and Adjuvants for the Treatment of Pathophysiological Conditions and Cancer and for Muscle Regeneration
RU2772690C2 (ru) Системы доставки с замедленным высвобождением, содержащие бесследные линкеры