JP6712322B2 - グルカゴン、ｇｌｐ−１及びｇｉｐ受容体のすべてに活性を有する三重活性体の持続型結合体 - Google Patents

Description

本発明は、グルカゴン、ＧＬＰ−１及びＧＩＰ受容体のすべてに活性を有する三重活性体の持続型結合体及びその用途に関する。

肥満と２型糖尿病を含む糖尿病は、現代社会に入って発生される代表的な代謝疾患の一つであり、世界的な健康の脅威要素として認識されており、疾病の発症に伴われる経済的費用も急増する傾向にある。

ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）は、代表的な胃腸ホルモンであり、神経ホルモンとして飲食物の摂取による血中糖の濃度調節に関与する物質である。グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）は、膵臓から分泌されるペプチドホルモンであり、前述した両物質とともに血中糖の濃度調節の作用に関与する。

ＧＬＰ−１は、飲食物の摂取に刺激を受け、小腸から分泌されるホルモンであり、血糖濃度依存的に膵臓からのインスリン分泌を促進し、グルカゴンの分泌を抑制し、血糖濃度を下げる作用を助ける。また、満腹因子として作用し、胃腸の消化作用を遅らせ、飲食の消化物の胃腸通過時間を遅延させて飲食物の摂取を減らす役割をする。さらにラットに投与時、飲食の摂取抑制と体重減少の効果があることが報告され、このような効果は、正常と肥満状態の両方で同一に示されることが確認され、肥満治療薬としての可能性を示した。

ＧＬＰ−１とともに飲食の摂取に刺激を受けて分泌される胃腸ホルモンの一つであるＧＩＰは、小腸のＫ細胞から分泌される４２個のアミノ酸で構成されたホルモンであり、血糖濃度に依存的に膵臓からのインスリン分泌を促進し、血糖濃度を下げるのに役立つ機能を行い、ＧＬＰ−１の活性の増加効果、抗炎症効果などが報告された。

グルカゴンは、薬物治療または疾病、ホルモンや酵素の欠乏などの原因により血糖値が低下し始めると、膵臓から生産される。グルカゴンは、肝臓に信号し、グリコーゲンを分解してグルコースを放出するように誘導し、血糖の水準を正常な水準まで高める役割をする。それだけではなく、グルカゴンは血糖の上昇効果以外に動物とヒトにおける食欲抑制及び脂肪細胞のホルモン感受性リパーゼ（hormone sensitive lipase）を活性化させ、脂肪分解を促進及びエネルギー代謝（energy expenditudre）を促進し、抗肥満効果を表すことが報告された。

それに対し、ＧＬＰ−１の血糖調節及び体重減少の効果を利用して糖尿病と肥満の治療薬として開発しようとする研究が活発に行われており、ＧＬＰ−１と約５０％の水準のアミノ酸配列の類似性を有するトカゲの毒液（lizard venom）から作られるエキセンジン−４（exendin-4）も同種の疾病に対する治療法としての開発が進行中である。しかし、現在までに報告されたところによると、ＧＬＰ−１とエキセンジン−４を使用した治療薬の場合、副作用として嘔吐と吐き気を伴うという問題が発生することが知られている（Syed YY., Drugs., 2015 Jul; 75(10):1141-52（非特許文献１））。

また、体重減少の効果の最大化及び前述したＧＬＰ−１ベースの治療物質の代替として、ＧＬＰ−１受容体とグルカゴン受容体の両方に活性を有する二重活性体（ｄｕａｌ ａｇｏｎｉｓｔ）に関する研究が進められており、既存のＧＬＰ−１単独の治療時よりグルカゴン受容体の活性により体重減少がさらに優れていることが報告された（Jonathan W et al., Nat Chem Bio、2009 Oct(5); 749-757（非特許文献２））。

それに加えて、最近ＧＬＰ−１、ＧＩＰ、グルカゴンの全体受容体に同時に活性を有する三重活性体（triple agonist）に関する研究では、胃腸ホルモンを分解して活性を喪失させるジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ−iv、ＤＰＰ−iv）に対する抵抗性を高めるようにアミノ酸配列を置換し、特定の部位にアシル基を追加して半減期を増加する努力が行われたことがあるが（Finan B et al., Nat Med., 2015 Jan; 21(1):27-36（非特許文献３））、３つの異なる受容体の活性化の効果が高くなく、多様な割合の活性比を有する三重活性体を示せなかった。

そこで、血糖の調節及び体重減少の効果を有しながらも、嘔吐と吐き気のような副作用が発生せず、ＧＬＰ−１とＧＩＰ、そしてグルカゴン受容体を高く活性化させる新規な物質の必要性が台頭している。

また、ＧＬＰ−１、ＧＩＰ、グルカゴン受容体に対する活性化の割合が多様な物質の開発の必要性も浮上している。例えば、血糖の強化のために、ＧＬＰ−１及びＧＩＰの活性は高いが、相対的にグルカゴンの活性は低く、体重減少の効果もあるが血糖の調節能力がより高い物質や、ＧＬＰ−１、ＧＩＰ、及びグルカゴンのすべての活性が高いため、体重減少の効果が高い物質が開発されるべき必要性が台頭している。

また、ＧＬＰ−１、ＧＩＰ、そしてグルカゴンは、生体内安定性が低く、人体に治療的用途に適用する際、一日２回、または毎日投与しなければならない短所がある。

国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号 国際特許公開第９６／３２４７８号

Syed YY., Drugs., 2015 Jul; 75(10):1141-52 Jonathan W et al., Nat Chem Bio、2009 Oct(5); 749-757 Finan B et al., Nat Med., 2015 Jan; 21(1):27-36 H.Neurath、RLHill、The Proteins、Academic Press、New York、1979

本発明の一つの目的は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）受容体に対して活性を有する、ペプチドの結合体を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記結合体をコードするポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドを含むベクター、及び前記ポリヌクレオチドまたはこれを含むベクターを含む形質転換体を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記結合体を含む組成物を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は、前記結合体またはこれを含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、前記結合体またはこれを含む組成物が目的とする疾患の治療方法を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は、薬剤の製造に使用するための、前記結合体またはその組成物の用途を提供することにある。

前記課題を解決するための本発明の一つの態様は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）受容体に対して活性を有する、ペプチドの結合体である。

一つの具体例として、前記結合体は、下記化学式（１）で示される、結合体であることを特徴とする：
Ｘ−Ｌａ−Ｆ・・・・・（１）
ここで、
Ｘは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドであり；
Ｌは、リンカーであり；
ａは、０または自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆは、Ｘの半減期を増加させる物質である。

他の具体例として、前記Ｘは、天然型グルカゴン配列で少なくとも１つ以上のアミノ酸に置換（substitution）、追加（addition）、除去（deletion）、修飾（modification）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択された変形が起こった、天然型グルカゴンのアナログであることを特徴とする。

他の具体例として、前記追加されるアミノ酸配列は、天然型ＧＬＰ−１、天然型ＧＩＰ、または天然型エキセンジン−４アミノ酸配列に由来することを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｘは下記一般式１で示されるアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｘａａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）
前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４−イミダゾアセチル（ＣＡ）、またはチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂ（aminoisobutyric acid）であり、
Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）またはグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、
Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）またはイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ１２はリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、またはイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、またはシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、
Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、またはチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、
Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、
Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、
Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２０はリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、またはアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）であり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、またはグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、
Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、またはメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、
Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、不存在であり、
Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ−ＳＳＧＡＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０７）、またはｍ−ＳＳＧＱＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０８）であるか、不存在であり、
ここで、
ｍは−Ｃｙｓ−、−Ｐｒｏ−、または−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−であり、
ｎは−Ｃｙｓ−、−Ｇｌｙ−、−Ｓｅｒ−、または−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−であるか、不存在である。

他の具体例として、
前記一般式１において、Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸、またはロイシンであることを特徴とする。

他の具体例として、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、システイン、またはメチオニンであり；
Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジン、アルギニン、またはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンであることを特徴とする。

他の具体例として、前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンであることを特徴とする。

他の具体例として、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシンまたはシステインであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であることを特徴とする。

他の具体例として、
前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたは４−イミダゾアセチルであり、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシンであり、
Ｘａａ１２はイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はアラニンまたはシステインであり、
Ｘａａ１４はメチオニンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はイソロイシンまたはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニンまたはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はグルタミンまたはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンであり、
Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアスパラギンであり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はアラニンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２９はグルタミンまたはトレオニンであり、
Ｘａａ３０はシステインまたはリジンであるか、不存在であることを特徴とする。

他の具体例として、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンであり、
Ｘａａ１３はチロシンであり、
Ｘａａ１４はロイシンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンであり、
Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、トレオニン、またはヒスチジンであることを特徴とする。

他の具体例として、
前記Ｘは下記一般式２で示されるアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）
前記式において、
Ｘａａ１は４−イミダゾアセチル、ヒスチジン、またはチロシンであり、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ１０はチロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、またはチロシンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸、またはロイシンであり、
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ２０はリジン、グルタミン、またはアルギニンであり、
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ２８はリジン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リジン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり；
Ｘａａ４０はシステインであるか、不存在である。

他の具体例として、前記一般式２において、
Ｘａａ１３はアラニン、チロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン、またはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はグルタミン、システイン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３０はシステイン、リジン、またはヒスチジンであることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｘは下記一般式３のアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｌｙｓ−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）、
前記一般式３において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたはチロシンであり、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ１３はアラニン、チロシンまたはシステインであり、
Ｘａａ１７はアルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニンまたはアルギニンであり、
Ｘａａ１９はアラニンまたはシステインであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２４はグルタミンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン、またはグルタミンであり、
Ｘａａ３０はシステインまたはヒスチジンであり、
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり、
Ｘａａ４０はシステインまたは不存在である。

他の具体例として、前記Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）、またはＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、不存在であることを特徴とする。

他の具体例として、前記一般式においてＮ末端から１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸は、互いに環を形成することを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｘは配列番号：１〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｆは高分子重合体、脂肪酸、コレステロール、アルブミン及びその断片、アルブミン結合物質、特定のアミノ酸配列の繰り返し単位の重合体、抗体、抗体断片、ＦｃＲｎ結合物質、生体内結合組織、ヌクレオチド、フィブロネクチン、トランスフェリン（Transferrin）、糖類（saccharide）、ヘパリン、及びエラスチンからなる群から選択されることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｆは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる群から選択される高分子重合体であることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であることを特徴とする。

他の具体例として、前記ＦはＩｇＧ Ｆｃ領域であることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｌはペプチド、脂肪酸、糖類（saccharide）、高分子重合体、低分子化合物、ヌクレオチド、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｌはポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる群から選択される高分子重合体であることを特徴とする。

他の具体例として、前記Ｌはポリエチレングリコールであることを特徴とする。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体をコードするポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドを含むベクター、及び前記ポリヌクレオチドまたはこれを含むベクターを含む形質転換体である。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体を含む組成物である。

一つの具体例として、前記組成物は、薬学的組成物であることを特徴とする。

他の具体例として、前記組成物は、メタボリックシンドロームの予防または治療用であることを特徴とする。

他の具体例として、前記メタボリックシンドロームは、耐糖能障害、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧、脂質異常症による動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、または冠動脈心疾患（冠動脈性心臓病）を含むことを特徴とする。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体またはこれを含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、前記結合体またはこれを含む組成物が目的とする疾患を治療する方法である。

一つの具体例として、前記疾患は、メタボリックシンドロームであることを特徴とする。

本発明を具現する他の態様は、薬剤の製造に使用するための、前記結合体またはこれを含む組成物の用途である。

一つの具体例として、前記薬剤は、メタボリックシンドロームの予防または治療用であることを特徴とする。

本発明に係る三重活性体の持続型結合体は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）受容体に対して活性を有し、メタボリックシンドロームの治療に適用することができる。

高脂肪の食餌を通じた肥満動物モデル（マウス）に三重活性体の持続型結合体を２日に１回、２８日間投与する間、２日単位でマウスの体重の変化を測定した結果を示した図である（ｐ＜０．０５、** ｐ＜０．０１、*** ｐ＜０．００１、ｖｓ． ｖｅｈｉｃｌｅ ｂｙ Ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）。 高脂肪の食餌を通じた肥満動物モデル（マウス）に三重活性体の持続型結合体を２日に１回、２８日間投与する間、２日単位のマウスの腸間膜脂肪量を測定した結果を示した図である（ｐ＜０．０５、** ｐ＜０．０１、*** ｐ＜０．００１、ｖｓ． ｖｅｈｉｃｌｅ ｂｙ Ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）。

以下では、本発明をさらに詳しく説明する。

一方、本願で開示された各説明及び実施形態は、それぞれの異なる説明及び実施形態にも適用することができる。すなわち、本願で開示された多様な要素のすべての組み合わせが本発明の範囲に属する。また、下記記述される具体的な叙述によって、本発明の範疇が限定されると言えない。

本明細書の全般を通じて、天然に存在するアミノ酸に対する通常の１文字と３文字のコードが使用されるだけでなく、Ａｉｂ（α−アミノイソ酪酸）、Ｓａｒ（N-methylglycine）、アルファ−メチル−グルタミン酸（α-methyl-glutamic acid）などのような異なるアミノ酸に対して一般に許容される３文字のコードが使用される。また、本明細書において略語で言及されたアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ命名法に基づいて記載された。

アラニンＡｌａ、Ａ アルギニンＡｒｇ、Ｒ
アスパラギンＡｓｎ、Ｎ アスパラギン酸Ａｓｐ、Ｄ、
システインＣｙｓ、Ｃ グルタミン酸Ｇｌｕ、Ｅ、
グルタミンＧｌｎ、Ｑ グリシンＧｌｙ、Ｇ
ヒスチジンＨｉｓ、Ｈ イソロイシンＩｌｅ、Ｉ
ロイシンＬｅｕ、Ｌ リジンＬｙｓ、Ｋ
メチオニンＭｅｔ、Ｍ フェニルアラニンＰｈｅ、Ｆ
プロリンＰｒｏ、Ｐ セリンＳｅｒ、Ｓ
トレオニンＴｈｒ、Ｔ トリプトファンＴｒｐ、Ｗ
チロシンＴｙｒ、Ｙ バリンＶａｌ、Ｖ

本発明を具現するための一つの態様は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）受容体に対して活性を有する、ペプチドの結合体を提供する。

本発明において、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドの結合体は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドにその生体内半減期を増加させるための生体適合性物質が結合された形態であってもよい。本明細書において、前記生体適合性物質は、キャリアと混用することができる。

本発明において、前記ペプチドの結合体は、キャリアが結合されていない前記ペプチドに比べて増加した効力の持続性を示すことができ、本発明では、これらの結合体を「持続型結合体」と称する。

一方、このような結合体は、非自然に発生した（non-naturally occurring）ものであってもよい。

本発明の一つの態様において、前記結合体は、下記化学式（１）で示される、結合体である：
Ｘ−ＬＡ−Ｆ・・・・・（１）
ここで、
Ｘは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドであり；
Ｌは、リンカーであり；
ａは、０または自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆは、Ｘの半減期を増加させる物質である。

本発明において、前記「グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチド」とは、前記結合体を構成する一部分の構成に該当してもよい。具体的には、前記化学式（１）において、Ｘに該当する。

前記グルカゴン、ＧＬＰ−１、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドは、本発明において三重活性体と混用して使用することができる。

このようなペプチドは、グルカゴン、ＧＬＰ−１、及びＧＩＰ受容体に対して有意な水準の活性を有する多様な物質、例えば、多様なペプチドを含む。

特にこれに限定されるものではないが、前記グルカゴン、ＧＬＰ−１、及びＧＩＰ受容体に対して有意な水準の活性を有する三重活性体はグルカゴン、ＧＬＰ−１、及びＧＩＰ受容体中の一つまたはそれ以上の受容体、具体的には二つまたはそれ以上の受容体、より具体的には三つの受容体のすべてに対してｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が、該当受容体の天然型リガンド（天然型グルカゴン、天然型ＧＬＰ−１、及び天然型ＧＩＰ）に比べて０．１％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、１００％以上を示すことができる。

これらの三重活性体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を測定する方法は、本願の明細書の実験例１を参照することができるが、特にこれに限定されるものではない。

一方、前記ペプチドは、下記ｉ）〜ｉｉｉ）中の一つ以上、二つ以上、具体的には３つの活性を有すること、具体的には、有意な活性を有することを特徴とする：

ｉ）ＧＬＰ−１受容体の活性化；ｉｉ）グルカゴン受容体の活性化；及びｉｉｉ）ＧＩＰ受容体の活性化。

ここで、受容体を活性化させるということは、天然型に比べて受容体に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が０．１％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、１００％以上を示す場合を例として挙げることができる。しかし、これに制限されるものではない。

また、前記ペプチドは、天然型ＧＬＰ−１、天然型グルカゴン及び天然型ＧＩＰのいずれか一つに比べて体内半減期が増加したものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

特にこれに限定されるものではないが、このような前記ペプチドは、非自然に発生した（non-naturally occurring）ものであってもよい。

具体的には、前記分離されたペプチドは、天然型グルカゴンのアナログであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明に係る天然型グルカゴンアナログは、天然型グルカゴンと比較してアミノ酸配列に１つ以上の差があるペプチド、天然型グルカゴン配列の改質（modification）を通じて変形させたペプチド、天然型グルカゴンの模倣体を含む。

一方、特にこれに限定されるものではないが、天然型グルカゴンは、以下のアミノ酸配列を有することができる：

Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ（配列番号：１１８）

具体的には、前記ペプチドは、天然型グルカゴン配列で少なくとも１つ以上のアミノ酸に置換（substitution）、追加（addition）、除去（deletion）、修飾（modification）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択された変形が起こった、天然型グルカゴンのアナログであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

また、前記アミノ酸の置換は、アミノ酸への置換、または非天然型の化合物への置換をすべて含む。

また、追加は、ペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端に行うことができる。一方、追加されるアミノ酸の長さは、特に限定されず、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上のアミノ酸が追加されてもよく、広くは、ポリペプチドの追加を含むが、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然型グルカゴンのアミノ酸配列において１番、２番、３番、７番、１０番、１２番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択された、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、または２０個のアミノ酸が他のアミノ酸が置換されたものであってもよく、また、独立して、またはさらにそのＣ末端に１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１個以上のアミノ酸が追加されたものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然型グルカゴンのアミノ酸配列において１番、２番、３番、１０番、１２番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択された、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９個のアミノ酸が他のアミノ酸が置換されたものであってもよく、また、独立して、またはさらにそのＣ末端に１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、または１１個以上のアミノ酸が追加されたものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然型グルカゴンのアミノ酸配列において１番、２番、３番、１０番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２８番及び２９番からなる群から選択された、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７個のアミノ酸が他のアミノ酸が置換されたものであってもよく、また、独立して、またはさらにそのＣ末端に１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、または１１個以上のアミノ酸が追加されたものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然型グルカゴンのアミノ酸配列において１番、２番、１３番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択された、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、または１４個のアミノ酸が他のアミノ酸が置換されたものであってもよく、また、独立して、またはさらにそのＣ末端に１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１個以上のアミノ酸が追加されたものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

前記天然型グルカゴンで導入されるアミノ酸は、チロシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、Ａｉｂ、メチオニン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、ロイシン、イソロイシン、グルタミン、バリン、グリシン、アラニン、システイン、セリン、アラニン、アスパラギン酸、及びアルギニンからなる群から選択されてもよいが、特にこれに限定されるものではない。

例えば、前記追加されるアミノ酸配列は、天然型ＧＬＰ−１、天然型ＧＩＰ、または天然型エキセンジン−４アミノ酸配列に由来する１つ以上のアミノ酸配列であってもよい。

このようなグルカゴンアナログまたは三重活性体は、分子内架橋（intramolecular bridge）を含むことができ（例えば、共有結合的架橋または非共有結合的架橋）、具体的に環を含む形態であってもよく、例えば、グルカゴンアナログまたは三重活性体の１６番目及び２０番目のアミノ酸の間に環が形成された形態であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

前記環の非限定的な例としてラクタム架橋（またはラクタム環）を含むことができる。

また、前記グルカゴンアナログまたは三重活性体は、環を含むように、目的とする位置に環を形成することができるアミノ酸を含むように変形されたものをすべて含む。

例えば、グルカゴンアナログまたは三重活性体の１６番目及び２０番目のアミノ酸対がそれぞれ環を形成することができるグルタミン酸またはリジンに置換されたものであってもよいが、これに制限されない。

このような環は、前記グルカゴンアナログまたは三重活性体内のアミノ酸の側鎖の間に形成されてもよく、その例としてリジンの側鎖とグルタミン酸の側鎖の間にラクタム環が形成される形態であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

このような方法の組み合わせで製造されるグルカゴンのアナログの例として、天然型グルカゴンとアミノ酸配列が一つ以上異なり、Ｎ末端のアミノ酸残基のアルファ−炭素が除去された、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドなどがあるが、これに限定されず、アナログの製造のための種々の方法の組み合わせで、本発明に適用される天然型グルカゴンのアナログを製造することができる。

また、特にこれに制限されないが、本発明のペプチドは、体内半減期の増加のために活性体分解酵素の認識作用を回避するため、一部のアミノ酸を他のアミノ酸もしくは非天然型化合物に置換することができる。

具体的には、前記三重活性体のアミノ酸配列中の２番目のアミノ酸配列の置換を通じて分解酵素の認識作用を回避して体内半減期を増加させたペプチドであってもよいが、体内分解酵素の認識作用を回避するためのアミノ酸置換または変更は制限なく含まれる。

また、天然型グルカゴンのアナログの製造のためのこのような変形は、Ｌ型あるいはＤ型アミノ酸、及び／または非天然型アミノ酸を利用した変形；及び／または天然型配列を改質、例えば、側鎖官能基の変形、分子内共有結合、例えば、側鎖間の環の形成、メチル化、アシル化、ユビキチン化、リン酸化、アミノヘキサン化、ビオチン化などのように改質することにより、変形するものをすべて含む。

また、天然型グルカゴンのアミノ及び／またはカルボキシ末端に１つまたはそれ以上のアミノ酸が追加されたものをすべて含む。

前記置換または追加されたアミノ酸は、ヒトタンパク質で通常観察される２０個のアミノ酸だけでなく、非定型または非自然発生アミノ酸を使用することができる。非定型アミノ酸の商業的出所にはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣｈｅｍＰｅｐとＧｅｎｚｙｍｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが含まれる。このようなアミノ酸が含まれたペプチドと定型的なペプチド配列は、商業化されたペプチド合成会社、例えば、米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙやＢａｃｈｅｍ、または韓国のＡｎｙｇｅｎを通じて合成及び購買が可能である。

アミノ酸誘導体も同様の方法で入手することができるが、その例を一部だけ挙げると、４−イミダゾ酢酸（4-imidazoacetic acid）などを使用することができる。

また、本発明に係るペプチドは、生体内のタンパク質切断酵素から保護し、安定性を増加するためにそのＮ末端及び／またはＣ末端などが化学的に修飾されたり、有機団で保護されるか、またはペプチド末端などのアミノ酸が追加されて変形された形態であってもよい。

特に、化学的に合成したペプチドの場合には、Ｎ及びＣ末端が電荷を帯びているため、このような電荷を除去するためにＮ末端をアセチル化（acetylation）及び／またはＣ末端をアミド化（amidation）することができるが、特にこれに限定されない。

また、本発明に係るペプチドは、ペプチドそれ自体、その塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容可能な塩）、またはその溶媒和物の形態をすべて含む。さらに、ペプチドは、薬学的に許容される任意の形態であってもよい。

前記塩の種類は特に制限されない。ただし、個体、例えば哺乳類に安全かつ効果的な形態であることが望ましいが、特にこれに限定されるものではない。

前記用語、「薬学的に許容される」とは、医薬学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、またはアレルギー反応などを誘発することなく、目的の用途に効果的に使用可能な物質を意味する。

本発明において、用語、「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、または塩基から誘導された塩を含む。適切な酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを挙げることができる。適切な塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、及びアンモニウムなどを含むことができる。

また、本発明で使用される用語「溶媒和物」とは、本発明に係るペプチドまたはその塩が溶媒分子と複合体を形成しているものをいう。

一つの具体的な態様としては、前記Ｘは下記一般式１で示されるアミノ酸配列を含む、分離されたペプチドであってもよい。

Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｘａａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）

前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジン、４−イミダゾアセチル、またはチロシンであり、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミン酸またはグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１０はロイシン、チロシン、リジン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジン、セリン、またはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はグルタミン、チロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、またはチロシンであり、
Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはロイシンであり、
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ２０はリジン、グルタミン、またはアルギニンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ２７はバリン、ロイシン、リジン、またはメチオニンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、リジン、アラニン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はシステイン、グリシン、グルタミン、トレオニン、グルタミン酸、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リジン、またはヒスチジンであるか、不存在であり、
Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ−ＳＳＧＡＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０７）、またはｍ−ＳＳＧＱＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０８）であるか、不存在であり、
ここで、
ｍは−Ｃｙｓ−、−Ｐｒｏ−、または−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−であり、
ｎは−Ｃｙｓ−、−Ｇｌｙ−、−Ｓｅｒ−、または−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−であるか、不存在である。

前記三重活性体の例として、配列番号：１〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、配列番号：１〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されるわけではない。

また、本願において「特定の配列番号で構成されるペプチド」と記載されているとしても、該当配列番号のアミノ酸配列からなるペプチドと同一の、あるいは相応する活性を有する場合であれば、該当配列番号のアミノ酸配列前後の無意味な配列の追加または自然に発生し得る突然変異、あるいはそのサイレント突然変異（silent mutation）を除外するものではなく、このような配列の追加、あるいは突然変異を有する場合でも、本願の範囲内に属することが自明である。

以上の内容は、本発明の他の具体例あるいは他の態様にも適用してもよいが、これに制限されるものではない。

具体的には、前記一般式１において、Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸、またはロイシンであってもよい。

このようなペプチドの例として、配列番号：１〜１２、１４〜１７、及び２１〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。

このようなペプチドは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体中の一つ以上を有意に活性化させることができるが、特にこれに限定されるものではない。具体的には、ＧＬＰ−１を有意に活性化させたり、さらにグルカゴン受容体及び／またはＧＩＰ受容体を有意に活性化させるものであってもよいが、特にこれに制限されない。

より具体的には、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、システイン、またはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジン、アルギニン、またはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンである、ペプチドであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンであってもよいが、特にこれに制限されない。

より具体的には、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシンまたはシステインであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であってもよい。

具体的には、
前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたは４−イミダゾアセチルであり、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシンであり、
Ｘａａ１２はイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はアラニンまたはシステインであり、
Ｘａａ１４はメチオニンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はイソロイシンまたはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニンまたはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はグルタミンまたはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンであり、
Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアスパラギンであり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はアラニンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２９はグルタミンまたはトレオニンであり、
Ｘａａ３０はシステインまたはリジンであるか、不存在であってもよい。

より具体的には、
前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンであり、
Ｘａａ１３はチロシンであり、
Ｘａａ１４はロイシンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンであり、
Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、トレオニン、またはヒスチジンであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

このようなペプチドは、ＧＬＰ−１受容体及びグルカゴン受容体の活性化の程度が有意であり、ＧＩＰ受容体の活性化の程度に比べて高かったり；ＧＬＰ−１受容体、グルカゴン受容体及びＧＩＰ受容体の活性化の程度が、いずれも有意であったり；ＧＬＰ−１受容体及びＧＩＰ受容体の活性化の程度が有意であり、グルカゴン受容体の活性化に比べて高い場合に該当するが、特にこれに制限されない。

ＧＬＰ−１受容体及びＧＩＰ受容体の活性化の程度が有意であり、グルカゴン受容体の活性化の程度に比べて高い場合には、体重減少の効力とともに血糖値の調節能力がより高いペプチドを提供することができ、ＧＬＰ−１受容体、グルカゴン受容体及びＧＩＰ受容体の活性化程度のすべてが有意な場合には、体重減少の効果が極大化されるという利点がある。しかし、特にこれに制限されるものではない。

このようなペプチドの例として、配列番号：８、９、２１〜３７、３９、４２、４３、４９〜６１、６４〜８３、８５、８６、８８、８９、９１〜９３、９５〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。

具体的な態様としては、前記ペプチドは、下記一般式２で示されるアミノ酸配列を含むものであってもよい。

Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）

前記式において、
Ｘａａ１は４−イミダゾアセチル、ヒスチジン、またはチロシンであり；
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり；
Ｘａａ１０はチロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン、またはシステインであり；
Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、またはチロシンであり；
Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸、またはロイシンであり；
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり；
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、またはリジンであり；
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり；
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、またはバリンであり；
Ｘａａ２０はリジン、グルタミン、またはアルギニンであり；
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン、またはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり；
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、またはグルタミン酸であり；
Ｘａａ２８はリジン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン、またはヒスチジンであり；
Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リジン、またはヒスチジンであり；
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり；
Ｘａａ４０はシステインであるか、不存在である。

より具体的には、前記一般式２において、
Ｘａａ１３はアラニン、チロシン、またはシステインであり；
Ｘａａ１５はアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、またはリジンであり；
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり；
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、またはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり；
Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン、またはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２９はグルタミン、システイン、またはヒスチジンであり；
Ｘａａ３０はシステイン、リジン、またはヒスチジンであってもよい。

このようなペプチドの例として、配列番号：２１、２２、４２、４３、５０、６４〜７７、及び９５〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列、より具体的には、配列番号：２１、２２、４２、４３、５０、６４〜７７、及び９６〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。

具体的な態様としては、前記ペプチドは、下記一般式３のアミノ酸配列を含むことができる。

Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｌｙｓ−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）、

前記一般式３において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたはチロシンであり；
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり；
Ｘａａ１３はアラニン、チロシンまたはシステインであり；
Ｘａａ１７はアルギニン、システイン、またはリジンであり；
Ｘａａ１８はアラニンまたはアルギニンであり；
Ｘａａ１９はアラニンまたはシステインであり；
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２４はグルタミンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステインまたはアスパラギン酸であり；
Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン、またはグルタミンであり；
Ｘａａ３０はシステインまたはヒスチジンであり；
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり；
Ｘａａ４０はシステインまたは不存在であってもよい。

このようなペプチドの例として、配列番号：２１、２２、４２、４３、５０、６４〜７１、７５〜７７、及び９６〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。

また、前記一般式１においてＲ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）、またはＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、不存在であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

また、本発明のペプチドは、その長さに応じて、この分野においてよく知られている方法、例えば、自動ペプチドシンセサイザーによって合成することができ、遺伝子操作技術によって生産することもできる。

具体的には、本発明のペプチドは、標準的な合成方法、組換え発現システム、または任意の他の当該分野の方法により製造することができる。従って、本発明に係るペプチドは、例えば、下記方法を含む多数の方法で合成することができる：

（ａ）ペプチドを固相または液相方法の手段で段階的に、または断片の組み立てによって合成し、最終のペプチド生成物を分離及び精製する方法；または
（ｂ）ペプチドをエンコードする核酸作製物を宿主細胞内で発現させ、発現生成物を宿主細胞培養物から回収する方法；または
（ｃ）ペプチドをエンコードする核酸作製物の無細胞インビトロ発現を行い、発現生成物を回収する方法；または
（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組み合わせでペプチドの断片を得て、続いて断片を連結させてペプチドを得て、当該ペプチドを回収する方法。

前記結合体においてＦは、Ｘ、すなわち、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドの半減期を増加させる物質であり、本発明の結合体を構成する部分の一構成に該当する。

前記Ｆは、Ｘと共有化学結合または非共有化学結合で互いに結合されるものであってもよく、共有化学結合、非共有化学結合、またはこれらの組み合わせでＬを通じてＦとＸが互いに結合されるものであってもよい。

前記Ｘの半減期を増加させる物質は、生体適合性物質であってもよく、例えば、高分子重合体、脂肪酸、コレステロール、アルブミン及びその断片、アルブミン結合物質、特定のアミノ酸配列の繰り返し単位の重合体、抗体、抗体断片、ＦｃＲｎ結合物質、生体内結合組織、ヌクレオチド、フィブロネクチン、トランスフェリン（Transferrin）、糖類（saccharide）、ヘパリン、及びエラスチンからなる群から選択されるものであってもよいが、特にこれに制限されない。

前記エラスチンの場合、水溶性前駆体であるヒトトロポエラスチン（ｔｒｏｐｏｅｌａｓｔｉｎ）であってもよく、これらのうちの一部の配列または一部の繰り返し単位の重合体であってもよく、例えば、エラスチン類似ポリペプチドである場合をすべて含むが、特にこれに限定されるものではない。

前記高分子重合体の例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる群から選択される高分子重合体が挙げられるが、特にこれに制限されない。

前記ポリエチレングリコールは、エチレングリコール同種重合体、ＰＥＧ共重合体、またはモノメチル−置換されたＰＥＧ重合体（ｍＰＥＧ）の形態をすべて包括する用語であるが、特にこれに限定されるものではない。

また、前記生体適合性物質は、ポリ−リジン、ポリ−アスパラギン酸及びポリ−グルタミン酸のようなポリ−アミノ酸を含むが、これに制限されるものではない。

また、脂肪酸は、生体内アルブミンとの結合力を有するものであってもよいが、特にこれに制限されない。

より具体的な例として、前記ＦｃＲｎ結合物質は、免疫グロブリンＦｃ領域であってもよく、より具体的にはＩｇＧ Ｆｃ領域であってもよいが、特にこれに制限されない。

本発明のペプチド内の一つ以上のアミノ酸側鎖は、生体内で可溶性及び／または半減期を増加させ／させるか、生体利用率を増加させるために、このような生体適合性物質に接合されてもよい。このような変形は、治療学的タンパク質とペプチドの消去（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）を減少させることができる。

上述した生体適合性物質は、水溶性（両親媒性または親水性）及び／または非毒性及び／または薬学的に許容可能なものであってもよい。

前記Ｆは、Ｘと直接連結されるか（すなわち、前記化学式１においてａが０であるか）、またはリンカー（Ｌ）を通じて連結されたものであってもよい。

具体的には、前記Ｌはペプチド性リンカーまたは非ペプチド性リンカーであってもよい。

前記Ｌがペプチド性リンカーであるとき、１つ以上のアミノ酸を含むことができ、例えば、１個〜１０００個のアミノ酸を含むことができるが、特にこれに限定されるものではない。本発明において、ＦとＸを連結するために公知となった多様なペプチドリンカーが、本発明に使用されてもよく、その例として［ＧＳ］ｘリンカー、［ＧＧＧＳ］ｘリンカー及び［ＧＧＧＧＳ］ｘリンカーなどを含み、ここで、ｘは１以上の自然数であってもよい。しかしながら、前記の例に制限されるものではない。

本発明において、「非ペプチド性リンカー」とは、繰り返し単位が２つ以上結合された生体適合性重合体を含む。前記繰り返し単位は、ペプチド結合ではなく、任意の共有結合を通じて相互に連結される。前記非ペプチド性リンカーは、本発明の結合体の一部分をなす一構成であってもよく、前記化学式１においてＬに該当する。

前記Ｌａにおいてａは１以上であってもよく、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは独立であってもよい。

本発明では、前記非ペプチド性リンカーは、非ペプチド性重合体と混用して使用することができる。

また、１つの具体的な実施形態では、前記結合体は、両末端にＦ、具体的には免疫グロブリンＦｃ領域と、Ｘ、具体的にはペプチド薬物と結合することができる反応基を含む非ペプチド性リンカーを通じてＦとＸが互いに共有結合的に連結されたものであってもよい。

具体的には、前記非ペプチド性リンカーは、脂肪酸、糖類（saccharide）、高分子重合体、低分子化合物、ヌクレオチド、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるものであってもよい。

特にこれに限定されないが、前記非ペプチド性リンカーは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（polylactic acid）及びＰＬＧＡ（polylactic-glycolic acid）のような生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせで構成された群から選択されるものであってもよい。より具体的な実施形態において、前記非ペプチド性重合体は、ポリエチレングリコールであってもよいが、これに制限されない。また、当該分野において既に公知となったこれらの誘導体及び当該分野の技術水準で容易に製造することができる誘導体も、本発明の範囲に含まれる。

本発明で使用することができる非ペプチド性リンカーは、生体内のタンパク質分解酵素に抵抗性のある重合体であれば制限なく使用することができる。非ペプチド性重合体の分子量は、１〜１００ｋＤａの範囲、具体的には１〜２０ｋＤａの範囲であるが、これに制限されない。また、前記Ｆに該当するポリペプチドと結合される本発明の非ペプチド性リンカーは、一種類の重合体だけでなく、異なる種類の重合体の組み合わせが使用されてもよい。

一つの具体的な実施形態において、前記非ペプチド性リンカーの両末端は、それぞれＦ、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域のアミン基またはチオール基及びＸのアミン基またはチオール基に結合することができる。

具体的には、前記非ペプチド性重合体は、両末端にそれぞれＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）及びＸと結合することができる反応基、具体的には、Ｘ、あるいはＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）のＮ末端またはリジンに位置したアミン基、またはシステインのチオール基と結合することができる反応基を含むことができるが、これに制限されない。

また、Ｆ、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域及びＸと結合することができる、前記非ペプチド性重合体の反応基は、アルデヒド基、マレイミド基及びスクシンイミド誘導体で構成された群から選択されてもよいが、これに制限されない。

前記において、アルデヒド基としてプロピオンアルデヒド基またはブチルアルデヒド基を例として挙げられるが、これに制限されない。

前記において、スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジル吉草酸、スクシンイミジルメチルブタノエート、スクシンイミジルメチルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、スクシンイミジルプロピオネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジルカルボキシメチルまたはスクシンイミジルカーボネートが使用されることができるが、これに制限されない。

非ペプチド性リンカーは、このような反応基を通じてＸとＦに連結されてもよいが、特にこれに限定されるものではない。

また、アルデヒド結合による還元性アルキル化で生成された最終的な産物は、アミド結合で連結されたものより遥かに安定している。アルデヒド反応基は、低いｐＨでＮ末端に選択的に反応し、高いｐＨ、例えばｐＨ９．０の条件では、リジン残基と共有結合を形成することができる。

また、前記非ペプチド性リンカーの両末端の反応基は、互いに同一または互いに異なるものであってよく、例えば、一方の末端にはマレイミド基を、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、またはブチルアルデヒド基を有してもよい。しかし、非ペプチド性リンカーの各末端にＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃ領域とＸが結合されうるのであれば、特にこれに限定されない。

例えば、前記非ペプチド性リンカーの一方の末端には、反応基としてマレイミド基を含み、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基またはブチルアルデヒド基などを含むことができる。

両末端にヒドロキシ反応基を有するポリエチレングリコールを非ペプチド性重合体として利用する場合には、公知となった化学反応によって、前記ヒドロキシ基を前記多様な反応基で活性化したり、商業的に入手可能な変形された反応基を有するポリエチレングリコールを用いて本発明の持続型タンパク質結合体を製造することができる。

一つの具体的な実施形態において、前記非ペプチド性重合体は、Ｘのシステイン残基、より具体的にはシステインの−ＳＨ基に連結されるものであってもよいが、これに制限されない。

もし、マレイミド−ＰＥＧ−アルデヒドを使用する場合、マレイミド基は、Ｘの−ＳＨ基とチオエーテル（thioether）結合で連結し、アルデヒド基はＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃの−ＮＨ₂基と還元的アルキル化反応を通じて連結することができるが、これに限定されず、これは一つの例に該当する。

また、前記結合体において、非ペプチド性重合体の反応基が免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端に位置する−ＮＨ₂と連結されたものであってもよいが、これは一つの例に該当する。

本発明において、「免疫グロブリンＦｃ領域」とは、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除いた、重鎖定常領域２（ＣＨ２）及び／または重鎖定常領域３（ＣＨ３）の部分を含む部位を意味する。前記免疫グロブリンＦｃ領域は、本発明の結合体の一部分をなす一構成であってもよい。

このような免疫グロブリンＦｃ領域は、重鎖定常領域にヒンジ（ｈｉｎｇｅ）部分を含むことができるが、これらに限定されるものではない。また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、天然型と実質的に同等または向上された効果を有する限り、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖可変領域のみを除き、一部または全体の重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び／または軽鎖定常領域１（ＣＬ１）を含む拡張されたＦｃ領域であってもよい。また、ＣＨ２及び／またはＣＨ３に対応する非常に長い、一部のアミノ酸配列が除去された領域であってもよい。

例えば、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、５）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、及びＣＨ４ドメイン中の１つまたは２つ以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域（またはヒンジ領域の一部）との組み合わせ、６）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体であってもよい。しかし、これに制限されるものではない。

また、１つの具体例として、前記免疫グロブリンＦｃ領域は、二量体型（dimeric form）であってもよく、二量体型の一つのＦｃ領域にＸの１分子が共有結合的に連結されてもよく、この時、前記免疫グロブリンＦｃとＸは、非ペプチド性重合体によって互いに連結されてもよい。一方、二量体型の一つのＦｃ領域にＸの２分子が対称的に結合することも可能である。この時、前記免疫グロブリンＦｃとＸは、非ペプチド性リンカーによって互いに連結されてもよい。しかし、前記記述された例に制限されるものではない。

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、天然型アミノ酸配列だけでなく、その配列誘導体を含む。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列中の一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的または保存的置換またはこれらの組み合わせによって異なる配列を有することを意味する。

例えば、ＩｇＧ Ｆｃの場合、結合に重要であると知られている２１４〜２３８、２９７〜２９９、３１８〜３２２または３２７〜３３１番目のアミノ酸残基が変形のために適当な部位として使用されてもよい。

また、ジスルフィド結合を形成することができる部位が除去されたり、天然型ＦｃからＮ末端のいくつかのアミノ酸が除去され、又は天然型ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加されるなど、多様な種類の誘導体が可能である。また、エフェクター機能をなくすために、補体結合部位、例えば、Ｃ１ｑ結合部位が除去されてもよく、ＡＤＣＣ（antibody dependent cell mediated cytotoxicity）部位が除去されてもよい。このような免疫グロブリンＦｃ領域の配列誘導体を製造する技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号（特許文献１）、国際特許公開第９６／３２４７８号（特許文献２）などに開示されている。

分子の活性を全体的に変更させないタンパク質及びペプチドのアミノ酸の交換は、当該分野において公知となっている（H.Neurath、RLHill、The Proteins、Academic Press、New York、1979（非特許文献４））。最も一般的に起こる交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。場合によっては、リン酸化（phosphorylation）、硫化（sulfation）、アクリル化（acrylation）、糖化（glycosylation）、メチル化（methylation）、ファルネシル化（farnesylation）、アセチル化（acetylation）及びアミド化（amidation）などで修飾（modification）されてもよい。

上述したＦｃ誘導体は、本発明のＦｃ領域と同等の生物学的活性を示し、Ｆｃ領域の熱、ｐＨなどの構造的安定性を増大させたものであってもよい。

また、このようなＦｃ領域は、ヒト、ウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、またはモルモットピックなどの動物の生体内から分離した天然型から得ることもでき、形質転換された動物細胞または微生物から得られた組換え型またはその誘導体であってもよい。ここで、天然型から獲得する方法は、全体の免疫グロブリンをヒトまたは動物の生体から分離した後、タンパク質分解酵素を処理して取得する方法であってもよい。パパインを処理する場合には、Ｆａｂ及びＦｃに切断され、ペプシンを処理する場合には、ｐＦ’ｃ及びＦ（ａｂ）₂に切断される。これをサイズ排除クロマトグラフィー（size-exclusion chromatography）などを利用してＦｃまたはｐＦ’ｃを分離することができる。より具体的な実施形態では、ヒト由来のＦｃ領域を微生物から収得した組換え免疫グロブリンＦｃ領域である。

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、天然型糖鎖、天然型に比べて増加した糖鎖、天然型に比べて減少した糖鎖または糖鎖が除去された形態であってもよい。このような免疫グロブリンＦｃ糖鎖の増減または除去には化学的方法、酵素学的方法及び微生物を利用した遺伝子工学的方法のような通常の方法を用いることができる。ここで、Ｆｃから糖鎖が除去された免疫グロブリンＦｃ領域は、補体（ｃ１ｑ）との結合力が著しく低下し、抗体−依存性細胞毒性または補体−依存性細胞毒性が減少または除去されるため、生体内で不要な免疫反応を誘発しない。このような点で、薬物のキャリアとしての本来の目的に、より附合する形態は、糖鎖が除去されたり非糖鎖化された免疫グロブリンＦｃ領域であると言える。

本発明において、「糖鎖の除去（Deglycosylation）」とは、酵素で糖を除去したＦｃ領域をいい、非グリコシル化（Aglycosylation）は、原核動物、より具体的な実施形態では、大腸菌で生産してグリコシル化されないＦｃ領域を意味する。

一方、免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒトまたはウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットピックなどの動物由来であってもよく、より具体的な実施形態では、ヒト起源である。

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭに由来またはこれらの組み合わせ（combination）またはこれらの混成（ｈｙｂｒｉｄ）によるＦｃ領域であってもよい。より具体的な実施形態では、ヒトの血液に最も豊富なＩｇＧまたはＩｇＭ由来であり、より具体的な実施形態では、リガンド結合タンパク質の半減期を向上させることが公知となったＩｇＧ由来である。さらに具体的な実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域であり、最も具体的な実施形態において前記免疫グロブリンＦｃ領域はヒトＩｇＧ４由来の非グリコシル化されたＦｃ領域であるが、これに制限されるものではない。

一方、本発明において「組み合わせ（combination）」とは、二量体または多量体を形成するとき、同一起源の短鎖免疫グロブリンＦｃ領域を暗号化するポリペプチドが異なる起源の短鎖ポリペプチドと結合を形成することを意味する。即ち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＤ Ｆｃ及びＩｇＥのＦｃ断片からなるグループから選択された２つ以上の断片から二量体または多量体の製造が可能である。

また、上述した結合体は、効力の持続性が天然型ＧＬＰ−１、ＧＩＰ、あるいはグルカゴンに比べ、またはＦが修飾されないＸに比べて増加したものであってもよく、このような結合体は、上述した形態だけでなく、生分解性ナノパーティクルに封入された形態などをすべて含む。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体をコードするポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドを含むベクター、及び前記ポリヌクレオチドまたはこれを含むベクターを含む形質転換体を提供する。

前記結合体については、先に説明した通りである。

前記ポリヌクレオチドは、融合タンパク質の形態の結合体をコードするものであってもよい。

また、前記結合体をコードする分離されたポリヌクレオチドは、その配列と７５％以上、具体的には８５％以上、より具体的には９０％以上、さらに具体的には９５％以上の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を、本発明の範疇に含む。

用語「相同性」とは、野生型（wild type）アミノ酸配列及び野生型核酸配列との類似度を示すためのものであり、相同性の比較は、肉眼または購入が容易な比較プログラムを使用して行う。市販中のコンピュータプログラムは、２つ以上の配列間の相同性の割合（％）で計算することができる。相同性（％）は、隣接する配列について計算することができる。

本発明において、用語「組換えベクター」とは、適切な宿主内で目的タンパク質、例えば、結合体を発現させることができるよう、目的タンパク質、例えば、結合体が、適切な調節配列に作動可能に連結されたＤＮＡ製造物を意味する。

前記調節配列は、転写を開始することができるプロモーター、このような転写を調節するための任意のオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、及び転写及び解読の終結を調節する配列を含む。組換えベクターは、適当な宿主細胞内に形質転換された後、宿主ゲノムとは無関係に複製または機能することができ、ゲノムそのものに統合することができる。

本発明で使用される組換えベクターは、宿主細胞内で複製可能なものであれば特に限定されず、当業界において公知となった任意のベクターを用いて作製することができる。通常使用されるベクターの例としては、天然の状態であるか、組換えされた状態のプラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージを挙げることができる。本発明で使用可能なベクターは、特に制限されるものではなく公知となった発現ベクターを使用することができる。

前記組換えベクターは、本発明の結合体を生産するために宿主細胞を形質転換させるのに使用される。また、本発明の一部である、このような形質転換細胞は、本発明の核酸断片及びベクターの増殖に使用されたり、本発明の結合体の組換え生産に使用された培養された細胞または細胞株であってもよい。

本発明において、用語「形質転換」とは、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む組換えベクターを宿主細胞内に導入して宿主細胞内で前記ポリヌクレオチドがコードするタンパク質が発現させるようにすることを意味する。形質転換されたポリヌクレオチドが宿主細胞内で発現さえできれば、宿主細胞の染色体内に挿入されて位置するか、染色体の外に位置するかに関係なく、これら両方を含む。

また、前記ポリヌクレオチドは、目的タンパク質をコードするＤＮＡ及びＲＮＡを含む。前記ポリヌクレオチドは、宿主細胞内に導入されて発現することができるものであれば、どのような形態で導入されるものであれ構わない。例えば、前記ポリヌクレオチドは、それ自体で発現されるのに必要なすべての要素を含む遺伝子構造体である発現カセット（expression cassette）の形態で宿主細胞に導入することができる。前記発現カセットは、通常、前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結されているプロモーター（promoter）、転写終結シグナル、リボソーム結合部位及び翻訳終結シグナルを含むことができる。前記発現カセットは、自体の複製が可能な発現ベクターの形態であってもよい。また、前記ポリヌクレオチドは、それ自体の形態で宿主細胞に導入され、宿主細胞において発現に必要な配列と作動可能に連結されているものであってもよく、これに限定されない。

また、前記において用語「作動可能に連結された」ということは本発明の目的とするタンパク質、具体的には結合体をコードするポリヌクレオチドの転写を開始及び媒介させるプロモーター配列と、前記遺伝子配列が機能的に連結されていることを意味する。

本発明に適した宿主は、本発明のポリヌクレオチドを発現させる限り、特に制限されない。本発明に使用することができる宿主の特定の例としては、大腸菌（E. coli）のようなエシェリキア（Escherichia）属細菌；バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）のようなバチルス（Bacillus）属細菌；シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）のようなシュードモナス（Pseudomonas）属細菌；ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）のような酵母；スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｆ９）のような昆虫細胞；及びＣＨＯ、ＣＯＳ、ＢＳＣなどのような動物細胞がある。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体を含む組成物を提供する。

前記結合体については、先に説明した通りである。

具体的には、前記組成物は、薬学的組成物であってもよく、より具体的には、前記組成物は、メタボリックシンドロームの予防または治療用であってもよい。

本発明において、用語「予防」とは、前記結合体またはこれを含む組成物の投与にメタボリックシンドロームの発症を抑制または遅延させる全ての行為を意味し、「治療」とは、前記結合体またはこれを含む組成物の投与にメタボリックシンドロームの症状が好転または有利になるすべての行為を意味する。

本発明において、用語「投与」とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を導入することを意味し、前記組成物の投与経路は特に限定されないが、前記組成物が、生体内標的に到達することができる任意の一般的な経路を通じて投与することができ、例えば、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、または直腸内投与などが挙げられる。

本発明において、用語「メタボリックシンドローム（metabolic syndrome）」とは、慢性的な代謝障害により起こる多様な疾患が単独または複合的に起こる症状をいい、特にメタボリックシンドロームに該当する疾患としては、耐糖能障害、高コレステロール血症、脂質異常症（dyslipidemia）、肥満、糖尿病、高血圧、脂質異常症による動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、及び冠動脈心疾患（冠動脈性心臓病）などがあるが、これに制限されない。

本発明において、用語「肥満」とは、体内の脂肪組織が過度状態で、身体の肥満指数（体重（ｋｇ）を身長（ｍ）の二乗で割った値）が２５以上であれば、肥満と定義される。肥満は長年に渡ってエネルギー消費量に比べて栄養素を過剰に摂取した場合のエネルギーの不均衡によって誘発されることが通常である。肥満は、体全体に影響を与える代謝疾患に糖尿病と高脂血症にかかる可能性が高くなり、性機能障害、関節炎、心血管系疾患の発症リスクが大きくなり、場合によって癌の発生とも関連がある。

本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含むことができる。これらの薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤は、非自然的に発生したものであってもよい。

本発明において、用語「薬学的に許容可能な」とは、治療効果を示すことができるほどの十分な量と副作用を起こさないことを意味し、疾患の種類、患者の年齢、体重、健康、性別、患者の薬物に対する感度、投与経路、投与方法、投与回数、治療期間、配合または同時使用される薬物など医学分野でよく知られている要素に応じて、当業者によって容易に決定することができる。

本発明のペプチドを含む薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。前記担体は、特にこれに限定されないが、経口投与の際には、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料などを使用することができ、注射剤の場合には、緩衝剤、保存剤、無痛化剤、可溶化剤、等張化剤、安定化剤などを混合して使用することができ、局所投与用の場合には、基剤、賦形剤、潤滑剤、保存剤などを使用することができる。

本発明の組成物の剤形は、上述したような薬学的に許容可能な担体と混合して多様に製造することができる。例えば、経口投与の際には、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、サスペンション、シロップ、ウェーハなどの形態で製造することができ、注射剤の場合には、単位投薬アンプルまたは多数回の投薬形態で製造することができる。その他、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性製剤などに剤形化することができる。

一方、製剤化に適した担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシア、アルギン酸、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウムまたは鉱物油などが使用されてもよい。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、防腐剤などをさらに含むことができる。

また、本発明の薬学的組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌された水溶液、非水性溶剤、凍結乾燥製剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれか一つの剤形を有することができる。

また、前記組成物は、薬学的分野において通常の方法によって、患者の身体内投与に適した単位投与型の製剤、具体的には、タンパク質医薬品の投与に有用な製剤形態で剤形化し、当業界において通常使用される投与方法を用いて経口、または皮膚、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、髄膜腔内、心室内、肺、経皮、皮下、腹内、鼻腔内、消化管内、局所、舌下、膣内または直腸の経路を含む非経口投与経路によって投与することができるが、これらに限定されるものではない。

また、前記結合体は、生理食塩水または有機溶媒のような薬剤として許容された種々の伝達体（carrier）と混合して使用することができ、安定性や吸水性を増加させるためにグルコース、スクロースまたはデキストランのような炭水化物、アスコルビン酸（ascorbic acid）またはグルタチオンのような抗酸化剤（antioxidants）、キレート剤、低分子タンパク質または他の安定化剤（stabilizers）などが薬剤として使用されてもよい。

本発明の薬学的組成物の投与量と回数は治療疾患、投与経路、患者の年齢、性別、体重、及び疾患の重篤度などの種々の関連因子とともに、活性成分である薬物の種類に応じて決定される。

本発明の組成物の総有効量は、単一投与量（single dose）で患者に投与されてもよく、複数回投与（multiple dose）で長期間投与される分割治療方法（fractionated treatment protocol）によって投与されてもよい。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度に応じて、有効成分の含有量を異にすることができる。具体的には、本発明の結合体の望ましい全体用量は一日に患者の体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ〜５００ｍｇであり得る。しかし、前記結合体の用量は、薬学的組成物の投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食物や排泄率など、種々の要因を考慮して、患者の有効投与量が決定されるため、このような点を考慮すると、当分野における通常の知識を有する者であれば、前記本発明の組成物の特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができる。本発明に係る薬学的組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路及び投与方法に特に制限されない。

本発明の薬学的組成物は、生体内持続性と力価が優れるため、本発明の薬学的製剤の投与回数と頻度を著しく減少させることができる。

本発明を具現する他の態様は、前記結合体またはこれを含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、前記結合体またはこれを含む組成物が目的とする疾患を治療する方法を提供する。

前記結合体またはそれを含む組成物は、先に説明した通りである。

前記疾患は、メタボリックシンドロームであり得る。

本発明で、前記個体は、メタボリックシンドローム（metabolic syndrome）が疑われる個体であり、前記メタボリックシンドローム（metabolic syndrome）の疑いのある個体は、その疾患が発症又は発症する可能性があるヒトを含むマウス、家畜などを含む哺乳動物を意味するが、本発明の結合体、あるいはこれを含む組成物で治療可能な個体は、制限なく含まれる。

本発明の方法は、前記結合体を含む薬学的組成物を薬学的有効量で投与することを含むことができる。適切な総１日使用量は、正しい医学的判断の範囲内で処置医によって決定することができ、１回または多数回に分けて投与することができる。しかし、本発明の目的上、特定の患者のための特定の治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によっては、他の製剤が使用されるかどうかを含め、具体的組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別及び食餌、投与時間、投与経路、及び組成物の比率、治療期間、具体的組成物とともに使用されたり、同時使用される薬剤をはじめとする多様な因子と医薬分野においてよく知られている同様の因子に応じて異なって適用することが望ましい。

本発明を具現する他の態様は、薬剤の製造に使用するための、前記結合体またはこれを含む組成物の用途を提供する。

前記結合体またはそれを含む組成物は、先に説明した通りである。

前記薬剤は、メタボリックシンドロームの予防または治療用であってもよい。

以下、下記の実施例により本発明をより詳しく説明する。但し、下記実施例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。

実施例１：三重活性体の製造
ＧＬＰ−１、ＧＩＰ及びグルカゴン受容体のすべてに活性を示す三重活性体を製造して、下記表１にその配列を示した。

前記表１に記載された配列のＸで示されるアミノ酸は、非天然型アミノ酸であるＡｉｂ（aminoisobutyric acid）であり、下線で示されるアミノ酸は下線で示されるアミノ酸が互いに環を形成することを意味する。また、前記表１において、ＣＡは４−イミダゾアセチル（4-imidazoacetyl）を、Ｙはチロシンを意味する。

実施例２：三重活性体の持続型結合体の製造
両末端にそれぞれマレイミド基及びアルデヒド基を有する１０ｋＤａのＰＥＧ、すなわち、マレイミド−ＰＥＧ−アルデヒド（１０ｋＤａ、ＮＯＦ、日本）を実施例１の三重活性体（配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７、及び９６）のシステイン残基にＰＥＧ化させるために、三重活性体とマレイミド−ＰＥＧ−アルデヒドのモル比を１：１〜３、タンパク質の濃度を１〜５ｍｇ／ｍｌにして、低温で０．５〜３時間反応させた。この際、反応は５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）に２０〜６０％のイソプロパノールが添加された環境下で行われた。反応が終了した後、前記反応液をＳＰセファロースＨＰ（GE healthcare、米国）に適用してシステインにモノＰＥＧ化された三重活性体を精製した。

次に、前記精製されたモノＰＥＧ化された三重活性体と免疫グロブリンＦｃをモル比を１：１〜５、タンパク質の濃度を１０〜５０ｍｇ／ｍｌにして、４〜８℃で１２〜１８時間反応させた。反応は、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に還元剤である１０〜５０ｍＭシアノ水素化ホウ素ナトリウムと１０〜３０％のイソプロパノールが添加された環境下で行われた。反応が終了した後、前記反応液をブチルセファロースＦＦ精製カラム（GE healthcare、米国）とＳｏｕｒｃｅ ＩＳＯ精製カラム（GE healthcare、米国）に適用し、三重活性体と免疫グロブリンＦｃを含む結合体を精製した。

製造の後、逆相クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及びイオン交換クロマトグラフィーで分析した純度は９５％以上であった。

ここで、配列番号２１の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号２１の免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号２１の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号２２の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号２２と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号２２の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号４２の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号４２と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号４２の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号４３の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号４３の免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号４３の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号５０の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号５０の免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号５０の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号７７の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号７７と免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号７７の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

ここで、配列番号９６の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体を、「配列番号９６の免疫グロブリンＦｃを含む結合体」あるいは「配列番号９６の持続型結合体」と命名し、これらは本願で混用して使用することができる。

実験例１：三重活性体及びその持続型結合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性の測定
前記実施例１及び２で製造された三重活性体及びその持続型結合体の活性を測定するためにＧＬＰ−１受容体、グルカゴン（ＧＣＧ）受容体、及びＧＩＰ受容体がそれぞれ形質転換された細胞株を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞活性を測定する方法を用いた。

前記各細胞株は、ＣＨＯ（chinese hamster ovary）にヒトＧＬＰ−１受容体、ヒトＧＣＧ受容体及びヒトＧＩＰ受容体遺伝子をそれぞれ発現するように形質転換されたものであり、ＧＬＰ−１、ＧＣＧ及びＧＩＰの活性を測定するのに適している。したがって、各部分に対する活性をそれぞれの形質転換細胞株を用いて測定した。

前記実施例１と２で製造された三重活性体及びその持続型結合体のＧＬＰ−１活性の測定のために、ヒトＧＬＰ−１を５０ｎＭから４倍ずつ０．００００４８ｎＭまで連続的に希釈し、前記実施例１と２で製造された三重活性体及びその持続型結合体を４００ｎＭから４倍ずつ０．０００３８ｎＭまで連続的に希釈した。前記培養されたヒトＧＬＰ−１受容体が発現されたＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続的に希釈された各物質を５μｌずつ前記細胞に添加した後、ｃＡＭＰ抗体が含まれた緩衝液を５μｌずつ追加した後、１５分間室温で培養した。その後、細胞溶解緩衝液（cell lysis buffer）が含まれたｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加え、細胞を溶解させ、９０分間室温で反応させた。前記反応が完了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（PerkinElmer、USA）に適用して蓄積されたｃＡＭＰを通じてＥＣ₅₀値を算出した後、相互比較した。ヒトＧＬＰ−１対比相対力価は表２と表３に示した。

前記実施例１と２で製造された三重活性体及びその持続型結合体のＧＣＧ活性の測定のために、ヒトＧＣＧを５０ｎＭから４倍ずつ０．００００４８ｎＭまで連続的に希釈し、前記実施例１と２で製造された三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから４倍ずつ０．０００３８ｎＭまで連続的に希釈した。前記培養されたヒトＧＣＧ受容体が発現されたＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続的に希釈された各物質を５μｌずつ前記細胞に添加した後、ｃＡＭＰ抗体が含まれた緩衝液を５μｌずつ追加した後、１５分間室温で培養した。その後、細胞溶解緩衝液（cell lysis buffer）が含まれたｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加え、細胞を溶解させ、９０分間室温で反応させた。前記反応が完了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（PerkinElmer、USA）に適用して蓄積されたｃＡＭＰを通じてＥＣ₅₀値を算出した後、相互比較した。ヒトＧＣＧ対比相対力価は表２と表３に示した。

前記実施例１と２で製造された三重活性体及びその持続型結合体のＧＩＰ活性の測定のために、ヒトＧＩＰを５０ｎＭから４倍ずつ０．００００４８ｎＭまで連続的に希釈し、前記実施例１と２で製造された三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから４倍ずつ０．０００３８ｎＭまで連続的に希釈した。前記培養されたヒトＧＩＰ受容体が発現されたＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続的に希釈された各物質を５μｌずつ前記細胞に添加した後、ｃＡＭＰ抗体が含まれた緩衝液を５μｌずつ追加した後、１５分間室温で培養した。その後、細胞溶解緩衝液（cell lysis buffer）が含まれたｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加え、細胞を溶解させ、９０分間室温で反応させた。前記反応が完了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（PerkinElmer、USA）に適用して蓄積されたｃＡＭＰを通じてＥＣ₅₀値を算出した後、相互比較した。ヒトＧＩＰ対比相対力価は表２と表３に示した。

前記で製造した新規な三重活性体持続型結合体は、ＧＬＰ−１受容体、ＧＩＰ受容体及びグルカゴン受容体をすべて活性化させることができる三重活性体の機能を有するところ、糖尿病や肥満などを含むメタボリックシンドローム患者の治療剤物質として使用することができる。

実験例２：三重活性体持続型結合体のｉｎ ｖｉｖｏ活性の測定
肥満動物モデルとして広く使われている高脂肪の食餌誘導肥満マウスを、この研究のために使用した。マウスの体重は、投与前に、約４０〜６０ｇであった。研究期間中にマウスは群別に収容され、水に自由に接近できるようした。光は６ＡＭから６ ＰＭまでオフにして置いた。

高脂肪の食餌が供給された試験群は、群１：賦形剤（２日に１回注射）−高脂肪の食餌誘導肥満マウス対照群、群２：配列番号４２の持続型結合体１．４４ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）、群３：配列番号４２の持続型結合体２．８８ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）、群４：配列番号４３の持続型結合体１．４４ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）、群５：配列番号４３の持続型結合体２．８８ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）、群６：配列番号５０の持続型結合体１．４４ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）、群７：配列番号５０の持続型結合体２．８８ｎｍｏｌ／ｋｇ（２日に１回注射）がある。実験は２８日目終了し、実験が行われている間、２日単位で各群に対応するマウスの体重の変化を測定した。実験が終了した後、剖検を通じて腸間膜脂肪量を測定した。統計処理は、１元ＡＮＯＶＡを使用して高脂肪の食餌誘導肥満マウス対照群と試験群の間を比較した。

体重の変化を測定した結果、図１で確認できるように、配列番号４２、４３、及び５０の持続型結合体の大容量投与群すべてが投与開始前に比べてそれぞれ−５６．９％、−５７．０％と−６３．５％の体重減少を示した。

また、腸間膜脂肪量を測定した結果、図２で確認できるように、配列番号４２、４３、及び５０の持続型結合体の大容量投与群すべてが賦形剤投与群との比較で、体内の脂肪が有意に減少することが確認された。

以上の説明から、本発明が属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施されることを理解できるだろう。これに関連し、以上で記述した実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明の範囲は前記詳細な説明よりは、後述する特許請求の範囲の意味及び範囲、そしてその等価概念から導かれるあらゆる変更または変形された形態が本発明の範囲に含まれるものと解釈すべきである。
次に、本発明の好ましい態様を示す。
１． 下記化学式（１）で示される、結合体：
Ｘ−Ｌａ−Ｆ・・・・・（１）
ここで、Ｘは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insuliontropic polypeptide）受容体に対して活性を有する、ペプチドであり；
Ｌは、リンカーであり；
ａは、０または自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆは、Ｘの半減期を増加させる物質である。
２． 前記Ｘは、天然型グルカゴン配列で少なくとも１つ以上のアミノ酸に置換（substitution）、追加（addition）、除去（deletion）、修飾（modification)、及びこれらの組み合わせからなる群から選択された変形が起こった、天然型グルカゴンのアナログである、上記１に記載の結合体。
３． 追加されるアミノ酸配列は、天然型ＧＬＰ−１、天然型ＧＩＰ、または天然型エキセンジン−４アミノ酸配列に由来する、上記２に記載の結合体。
４． 前記Ｘは、下記一般式１で示されるアミノ酸配列を含むペプチドである、上記１に記載の結合体：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｘａａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）
前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４−イミダゾアセチル（ＣＡ）、またはチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂ（aminoisobutyric acid）であり、
Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）またはグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、
Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）またはイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ１２はリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、またはイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、またはシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、
Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、またはチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、
Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、
Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、
Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙ
ｓ、Ｃ）、またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２０はリジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、またはアルギニン（
Ａｒｇ、Ｒ）であり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌ
ｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、またはアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙ
ｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、またはグルタ
ミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、
Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）
、またはメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、
Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、
Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌ
ｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、またはヒスチジン
（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リジン（Ｌｙｓ、
Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、不存在であり、
Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ−
ＳＳＧＡＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０７）、またはｍ−ＳＳＧＱＰＰＰＳ−ｎ（配列番号
１０８）であるか、不存在であり、
ここで、ｍは−Ｃｙｓ−、−Ｐｒｏ−、または−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−であり、
ｎは−Ｃｙｓ−、−Ｇｌｙ−、−Ｓｅｒ−、または−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−であるか、不存
在である。
５． Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸、またはロイシンである、上記４に記載の
結合体。
６． 前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、システイン、またはメチオニンであり；
Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸、ま
たはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジン、アルギニン、またはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、またはアスパラギン
酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、また
はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンである、上記４に記載の結合体。
７． 前記Ｘは、下記一般式２で示されるアミノ酸配列を含むペプチドである、上記４に記載の結合体：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）
前記式において、
Ｘａａ１は４−イミダゾアセチル、ヒスチジン、またはチロシンであり、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ１０はチロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、またはチロシンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸、またはロイシンであり、
Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、またはセリンであり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ２０はリジン、グルタミン、またはアルギニンであり、
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ２８はリジン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リジン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり；
Ｘａａ４０はシステインであるか、不存在である。
８． 前記一般式１において、
Ｘａａ２はグリシン、アルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシン、システイン、またはバリンであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンまたはリジンである、上記４に記載の結合体。
９． 前記一般式２において、
Ｘａａ１３はアラニン、チロシン、またはシステインであり、
Ｘａａ１５は、アスパラギン酸またはグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はイソロイシンまたはバリンであり、
Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン、またはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はグルタミン、システイン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ３０はシステイン、リジン、またはヒスチジンである、上記７に記載の結合体
。
１０． 前記一般式１において、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０は、チロシンまたはシステインであり、
Ｘａａ１２はリジンまたはイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、またはシステインであり、
Ｘａａ１４はロイシンまたはメチオニンであり、
Ｘａａ１５はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、またはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、またはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンまたはグルタミンであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン、またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン、またはアスパラギン酸である、請
求項４に記載の結合体。
１１． 前記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたは４−イミダゾアセチルであり、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ３はグルタミンであり、
Ｘａａ７はトレオニンであり、
Ｘａａ１０はチロシンであり、
Ｘａａ１２はイソロイシンであり、
Ｘａａ１３はアラニンまたはシステインであり、
Ｘａａ１４はメチオニンであり、
Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、
Ｘａａ１７はイソロイシンまたはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニンまたはヒスチジンであり、
Ｘａａ１９はグルタミンまたはシステインであり、
Ｘａａ２０はリジンであり、
Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２３はバリンであり、
Ｘａａ２４はアスパラギンであり、
Ｘａａ２７はロイシンであり、
Ｘａａ２８はアラニンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２９はグルタミンまたはトレオニンであり、
Ｘａａ３０はシステインまたはリジンであるか、不存在である、上記４に記載の結合体。
１２． 前記Ｘは、下記一般式３のアミノ酸配列を含むペプチドである、上記４に記載の結合体：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｌｙｓ−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）、
前記一般式３において、
Ｘａａ１はヒスチジンまたはチロシンであり、
Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂであり、
Ｘａａ１３はアラニン、チロシンまたはシステインであり、
Ｘａａ１７はアルギニン、システイン、またはリジンであり、
Ｘａａ１８はアラニンまたはアルギニンであり、
Ｘａａ１９はアラニンまたはシステインであり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸またはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２４はグルタミンまたはアスパラギンであり、
Ｘａａ２８はシステインまたはアスパラギン酸であり、
Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン、またはグルタミンであり、
Ｘａａ３０はシステインまたはヒスチジンであり、
Ｘａａ３１はプロリンまたはシステインであり、
Ｘａａ４０はシステインまたは不存在である。
１３． 前記Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）、またはＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、不存在である、上記４に記載の結合体。
１４． 前記一般式において、Ｎ末端から１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸は、互いに環を形成する、上記４〜１３のいずれか一項に記載の結合体。
１５． 前記Ｘは、配列番号：１〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むペプチドである、上記１に記載の結合体。
１６． 前記Ｆは高分子重合体、脂肪酸、コレステロール、アルブミン及びその断片、アルブミン結合物質、特定のアミノ酸配列の繰り返し単位の重合体、抗体、抗体断片、ＦｃＲｎ結合物質、生体内結合組織、ヌクレオチド、フィブロネクチン、トランスフェリン（Transferrin）、糖類（saccharide）、ヘパリン、及びエラスチンからなる群から選択される、上記１〜１３のいずれか一項に記載の結合体。
１７． 前記高分子重合体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレン
グリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニ
ルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂
質重合体、キチン、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる
群から選択される、上記１６に記載の結合体。
１８． 前記Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域である、上記１〜１３のいずれか一項に記載の結
合体。
１９． 前記ＦはＩｇＧ Ｆｃ領域である、上記１８に記載の結合体。
２０． 前記Ｌはペプチド、脂肪酸、糖類（saccharide）、高分子重合体、低分子化合物、ヌク
レオチド、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、上記１〜１３のいずれ
か一項に記載の結合体。
２１． 前記高分子重合体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレン
グリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニ
ルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂
質重合体、キチン、ヒアルロン酸、オリゴヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる
群から選択される、上記２０に記載の結合体。
２２． 前記Ｌはポリエチレングリコールである、上記１〜１３のいずれか一項に記載の結合
体。
２３． 上記１〜１３のいずれか一項に記載の結合体を含む、メタボリックシンドロームの予
防または治療用薬学的組成物。
２４． 前記メタボリックシンドロームは、耐糖能障害、高コレステロール血症、脂質異常症、
肥満、糖尿病、高血圧、脂質異常症による動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化
症、または冠動脈心疾患（冠動脈性心臓病）を含む、上記２３に記載の組成物。

Claims (15)

1. 下記化学式（１）で示される、結合体：
   Ｘ−Ｌａ−Ｆ・・・・・（１）
   ここで、Ｘは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insulinotropic polypeptide）受容体に対してアゴニスト活性を有する、ペプチドであり；
   Ｌは、リンカーであり；
   ａは、０または自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；
   Ｆは、Ｘの半減期を増加させる物質であり、
   前記ペプチドは、下記一般式３のアミノ酸配列を含む：
   Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｌｙｓ−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）、
   前記一般式３において、
   Ｘａａ１はＨｉｓまたはＴｙｒであり、
   Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸またはＡｉｂ（aminoisobutyric acid）であり、
   Ｘａａ１３はＡｌａ、ＴｙｒまたはＣｙｓであり、
   Ｘａａ１７はＡｒｇ、Ｃｙｓ、またはＬｙｓであり、
   Ｘａａ１８はＡｌａまたはＡｒｇであり、
   Ｘａａ１９はＡｌａまたはＣｙｓであり、
   Ｘａａ２１はＧｌｕまたはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２４はＧｌｎまたはＡｓｎであり、
   Ｘａａ２８はＣｙｓまたはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２９はＣｙｓ、Ｈｉｓ、またはＧｌｎであり、
   Ｘａａ３０はＣｙｓまたはＨｉｓであり、
   Ｘａａ３１はＰｒｏまたはＣｙｓであり、
   Ｘａａ４０はＣｙｓまたは不存在であり、
   一般式３において、Ｎ末端から１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸は、一緒にラクタム環を形成する。
2. 前記Ｘは、配列番号：２１、２２、４２、４３、５０、６４、６６、６７、７０、７１、７６、７７、９６、９７、及び１００からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項１に記載の結合体。
3. Ｘａａ１はＴｙｒである、請求項１に記載の結合体。
4. 下記化学式（１）で示される、結合体：
   Ｘ−Ｌａ−Ｆ・・・・・（１）
   ここで、Ｘは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）受容体、及びＧＩＰ（Glucose-dependent insulinotropic polypeptide）受容体に対してアゴニスト活性を有する、ペプチドであり；
   Ｌは、リンカーであり、１〜１００ｋＤａの分子量を有し、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、及びその組み合わせからなる群から選ばれ；
   ａは、０または自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；
   Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であり、
   式（１）において、Ｘ−Ｌ及びＦ−Ｌは、それぞれ共有結合により結合され、
   前記ペプチドは、下記一般式１で示されるアミノ酸配列を含む：
   Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｘａａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）
   前記一般式１において、
   Ｘａａ１はＨｉｓ、４−イミダゾアセチル（ＣＡ）、またはＴｙｒであり、
   Ｘａａ２はアルファ−メチル−グルタミン酸、またはＡｉｂ（aminoisobutyric acid）であり、
   Ｘａａ３はＧｌｎであり、
   Ｘａａ７はＴｈｒであり、
   Ｘａａ１０はＴｙｒであり、
   Ｘａａ１２はＬｙｓであり、
   Ｘａａ１３はＴｙｒ、Ａｌａ、またはＣｙｓであり、
   Ｘａａ１４はＬｅｕまたはＭｅｔであり、
   Ｘａａ１５はＣｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、
   Ｘａａ１６はＧｌｕであり、
   Ｘａａ１７はＧｌｎ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、またはＬｙｓであり、
   Ｘａａ１８はＡｌａ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、
   Ｘａａ１９はＡｌａ、Ｇｌｎ、またはＣｙｓであり、
   Ｘａａ２０はＬｙｓまたはＧｌｎであり、
   Ｘａａ２１はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、またはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２３はＩｌｅまたはＶａｌであり、
   Ｘａａ２４はＡｌａ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、またはＡｓｎであり、
   Ｘａａ２７はＬｅｕまたはＬｙｓであり、
   Ｘａａ２８はＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ａｓｎ、またはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２９はＣｙｓ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＨｉｓであり、
   Ｘａａ３０はＣｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓであるか、不存在であり、
   Ｒ１はＣｙｓ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ−ＳＳＧＡＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０７）、またはｍ−ＳＳＧＱＰＰＰＳ−ｎ（配列番号１０８）であるか、不存在であり、
   ここで、ｍは−Ｃｙｓ−、−Ｐｒｏ−、または−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−であり、
   ｎは−Ｃｙｓ−、−Ｇｌｙ−、−Ｓｅｒ−、または−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−であるか、不存在であり、
   一般式１において、Ｎ末端から１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸は、一緒にラクタム環を形成する。
5. 前記Ｒ１はＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）である、請求項４に記載の結合体。
6. 前記Ｘは、配列番号：２１〜２４、２７〜３２、３４、３６、３７、３９、４２、４３、５０〜５２、５６、５８、６４〜７１、７３〜７８、８１、８２、８６、８８、８９、９３、及び９５〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項４に記載の結合体。
7. 前記Ｘは、配列番号：２１、２２、２３、３１、３２、４２、４３、５０、５３、５５、６４〜７７、７９、及び９６〜１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項４に記載の結合体。
8. 前記一般式１において、
   Ｘａａ１３はＴｙｒ、Ａｌａ、またはＣｙｓであり、
   Ｘａａ１５はＧｌｕ、またはＡｓｐであり、
   Ｘａａ１７はＧｌｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、またはＬｙｓであり、
   Ｘａａ１８はＡｌａ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、
   Ｘａａ２１はＧｌｕ、Ｃｙｓ、またはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２３はＩｌｅまたはＶａｌであり、
   Ｘａａ２４はＣｙｓ、Ｇｌｎ、またはＡｓｎであり、
   Ｘａａ２８はＣｙｓ、Ａｓｎ、またはＡｓｐであり、
   Ｘａａ２９はＣｙｓ、Ｇｌｎ、またはＨｉｓであり、
   Ｘａａ３０はＣｙｓ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである、請求項４に記載の結合体。
9. 前記一般式１において、
   Ｘａａ１はＨｉｓまたは４−イミダゾアセチルであり、
   Ｘａａ１３はＡｌａ、またはＣｙｓであり、
   Ｘａａ１４はＭｅｔであり、
   Ｘａａ１５はＡｓｐであり、
   Ｘａａ１６はＧｌｕであり、
   Ｘａａ１７はＩｌｅまたはＬｙｓであり、
   Ｘａａ１８はＡｌａまたはＨｉｓであり、
   Ｘａａ１９はＧｌｎ、またはＣｙｓであり、
   Ｘａａ２０はＬｙｓであり、
   Ｘａａ２１はＡｓｐであり、
   Ｘａａ２３はＶａｌであり、
   Ｘａａ２４はＡｓｎであり、
   Ｘａａ２８はＡｌａまたはＡｓｎであり、
   Ｘａａ２９はＧｌｎまたはＴｈｒであり、
   Ｘａａ３０はＣｙｓまたはＬｙｓであるか、不存在である、請求項４に記載の結合体。
10. 請求項１に記載の結合体を含む、薬学的組成物。
11. 請求項１に記載の結合体を含む、メタボリックシンドロームの治療用薬学的組成物。
12. 前記メタボリックシンドロームは、耐糖能障害、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧、脂質異常症による動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、または冠動脈心疾患（冠動脈性心臓病）を含む、請求項１１に記載の組成物。
13. 請求項４に記載の結合体を含む、薬学的組成物。
14. 請求項４に記載の結合体を含む、メタボリックシンドロームの治療用薬学的組成物。
15. 前記メタボリックシンドロームは、耐糖能障害、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧、脂質異常症による動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、または冠動脈心疾患（冠動脈性心臓病）を含む、請求項１４に記載の組成物。