JP6675528B2 - グリコシルヘスペレチンとその製造方法並びに用途 - Google Patents

Description

本発明は、新規なグリコシルヘスペレチンに関し、より詳細には、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンとその製造方法並びに用途に関する。なお、詳細は後述するけれども、本明細書で言うグリコシルヘスペレチンとは、ヘスペレチンに糖類が結合した化合物全般（以下、「ヘスペレチン骨格を有する化合物」と言う。）を意味し、その具体例としては、ヘスペリジン、ヘスペリジンのルチノースを構成するラムノース基が離脱した構造を有する７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びヘスペリジンに糖類（例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、又はＤ−ガラクトースなどの糖類）が等モル以上α−結合したα−グリコシルヘスペリジンなどが挙げられる。

ビタミン類の内、ビタミンＰは、生体内で、ビタミンＣの生理作用、例えば、生体結合組織の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリンやリジンのヒドロキシル化反応に関与しているとともに、チトクロームＣのＦｅ^＋＋＋を還元してＦｅ^＋＋にするなどの酸化還元反応に関与し、更には、白血球増加による免疫増強作用に関与していることが知られ、生体の健康維持、増進にも重要な役割を担っていることが知られている。

ビタミンＰとして知られるヘスペリジンは、ラムノースとグルコースとからなるルチノースがヘスペレチンに結合した構造を有する下記化学式１に示す化合物であり、柑橘類の果皮等に多く含まれているフラボノイドの一種であり、毛細血管の強化、出血予防、血圧調節などの生理機能を有するビタミンＰとして古くから知られ、飲食品、化粧品、医薬品などに広く利用されている。

化学式１：

ヘスペリジンの用途としては、単に栄養素としてのビタミンＰ強化剤に止まらず、その化学構造、生理作用から、それ単独又は他のビタミン類などと併用して、例えば、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤などとして各種飲食品に、また、ヘスペリジンに感受性のあるウィルス性疾患、細菌性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍などの疾患の予防剤、治療剤、すなわち、ヘスペリジン感受性疾患剤として医薬品に、更には、安定剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、メラニン生成抑制剤などとして、美肌剤、色白剤、アンチエイジング剤などの化粧品にまで及び、その用途範囲は極めて広い。

しかしながら、ヘスペリジンは水に難溶で、室温では５０Ｌの水にわずか１ｇ程度（約０．００２ｗ／ｖ％）しか溶けず、使用上困難を極めていた。

これを改善する方法として、例えば、特許文献１には、ヘスペリジンと澱粉部分分解物とを含有する溶液に、糖転移酵素を作用させることにより、水溶性が高く、毒性の懸念もなく、生体内で容易に加水分解され、ヘスペリジン本来の生理機能を発揮するα−グリコシルヘスペリジンとその製造方法が開示されている。

α−グリコシルヘスペリジンの代表例であるα−グルコシルヘスペリジン（別名：酵素処理ヘスペリジン、糖転移ヘスペリジン、水溶性ヘスペリジン、又は糖転移ビタミンＰ）は、ヘスペリジンのルチノース構造におけるグルコースにグルコースが１分子α−結合した、下記化学式２に示す化合物で、これを主成分として含有する製品として、例えば、糖転移ヘスペリジン（商品名『林原ヘスペリジン（登録商標）Ｓ』、株式会社林原販売）が市販されている。

化学式２：

また、従来のα−グリコシルヘスペリジン含有物中には、その製造原料であるヘスペリジンが残存し、これがα−グリコシルヘスペリジンの水溶性の低下の原因となることが知られ、これを改善する試みとして、ヘスペリジンのルチノース構造を構成するラムノース基を離脱させることにより、ヘスペリジンを水溶性が極めて高い、下記化学式３に示す７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンに変換させることが知られている。例えば、特許文献２には、高濃度のα−グルコシルヘスペリジンとともにヘスペリジンを含有する溶液に、α−Ｌ−ラムノシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．４０）を作用させて、ヘスペリジンを７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンに変換し、残存するヘスペリジン含量を低減させ、水溶性を向上させたα−グルコシルヘスペリジン高含有物を製造する方法が開示されている。

化学式３：

しかしながら、従来のヘスペリジン、α−グルコシルヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンなどの所謂グリコシルヘスペレチンを含有するグリコシルヘスペレチン含有物（以下、単に「従来品」と言う場合がある。）は、特有の苦味（渋み、えぐみ、収斂味を含む）と好ましくない後味、つまり、雑味を有しており、従来、この欠点を改善する手段として、例えば、特許文献３には、グリコシルヘスペレチンである、α−グリコシルヘスペリジン（別名：水溶性ヘスペリジン）を含む飲料にリンゴ酸を添加する方法が開示されている。

しかし、今日に至っても、従来品特有の雑味が十分満足できるまでに改善されたグリコシルヘスペレチン製品は未だ提供されていない。

特許第３０６０２２７号公報 特許第３８３３８１１号公報 特開２０１１−１２６８４９号公報

本発明は、上記欠点を解消するために為されたもので、従来品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンとその製造方法並びに用途を提供することを課題とする。

本発明者等は、従来品の欠点であった雑味に着目し、この欠点を解消することを課題とし鋭意研究努力を重ねた。すなわち、本発明者等はその過程で、従来品の雑味は、その製造原料中に雑味の原因となる物質（以下、単に「雑味の原因物質」と略記する場合がある。）が本来的に含まれているか、その製造工程で雑味の原因物質が生成するからではないかとの仮説を立てた。この仮説のもと、本発明者等は、従来品における雑味を低減する手段について種々検討した結果、グリコシルヘスペレチンの製造工程において還元剤を共存させると、従来品と比べ、雑味が有意に低減したグリコシルヘスペレチンが得られることを新規に見出した。更に、本発明者等は、斯かるグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、着色や臭気も顕著に低減されていることを新規に見出した。更に、本発明者等は、このようにして得られたグリコシルヘスペレチンの諸特性について、従来品のそれと詳細に比較検討したところ、（ア）両者はいずれも、グリコシルヘスペレチンを主成分とするものであるけれども、微量成分としての芳香族アルデヒドの一種であるフルフラール（ＩＵＰＡＣ命名法で言う、２−フランカルボキシアルデヒドのこと）の含量に違いがあること、（イ）雑味が有意に低減した本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、フルフラール含量が有意に低いこと、換言すれば、従来品と比べ、フルフラール含量が有意に低いものは、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンであることを見出した。本発明者等はこれらの知見に基づき、フルフラール含量は、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得るための指標となり得ることを新規に見出した。

本発明者等は、前記一連の知見に基づいて、従来品の欠点であった雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得るための指標として、当該グリコシルヘスペレチン中に含まれるフルフラールに着目し、このフルフラール含量が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得るための手段として、還元剤をその製造工程で用いることにより、従来品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得、その製造方法並びに用途を確立し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、フルフラールを実質的に含まないグリコシルヘスペレチンを提供することにより、上記の課題を解決するものである。本明細書で言うフルフラールを実質的に含まないとは、従来品と比べ、フルフラール含量が有意に低いレベルであるグリコシルヘスペレチンを意味する。具体的には、後述する実験１の「（１）フルフラールの含量」に示すガスクロマトグラフ質量（ＧＣ／ＭＳ）分析装置を用いての分析手法（以下、『ＧＣ／ＭＳ分析法』と略記する。）により測定したとき、通常、２００ｐｐｂ（なお、１ｐｐｂは、１０億分の１のこと）未満、好適には、１００ｐｐｂ未満、より好適には、５０ｐｐｂ未満、更に好適には、３０ｐｐｂ未満、より更に好適には、２０ｐｐｂ未満、特に好適には、１５ｐｐｂ未満、更に特に最適には、１０ｐｐｂ未満であることを意味する。なお、本発明のグリコシルヘスペレチンの内、フルフラール含量がＧＣ／ＭＳ分析法の検出限界を下回るまでに低減されたものは、従来品と比べ雑味が有意に低減されていると共に、着色も顕著に低減された極めて高品質のグリコシルヘスペレチンである。しかしながら、本発明のグリコシルヘスペレチンを、医薬、精密機器などの分野において利用する場合は別にして、必ずしも最高純度のグリコシルヘスペレチンを使用することが要求されない、飲食品、嗜好品、化粧品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品などの分野で利用する場合には、最高純度のグリコシルヘスペレチンであることは必ずしも必要ではないことから、フルフラール含量が検出限界以下のレベルにまで低減されているものである必要性や、フルフラール不含有のものである必要性は必ずしもない。したがって、本発明のグリコシルヘスペレチンは、フルフラールを実質的に含んでいなければ良く、本発明の所期の目的を達成し得る限り、従来品と比べ有意に少ない量、若しくは検出限界以下のフルフラールを含有していてもよい。

また、本発明は、（ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、（イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチンを生成させる工程、及び（ウ）生成したグリコシルヘスペレチンを採取する工程を含むグリコシルヘスペレチンの製造方法であって、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程を還元剤の存在下で実施するか、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に還元剤を添加するグリコシルヘスペレチンの製造方法を提供することにより、上記の課題を解決するものである。

更に、本発明は、本発明のグリコシルヘスペレチンを含んでなる、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を提供することにより、上記の課題を解決するものである。

また、本発明は、グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤とを接触させることを特徴とする、グリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法を提供することにより、上記の課題を解決するものである。

本発明に係るグリコシルヘスペレチンは、従来品とは違って、雑味が有意に低減されているという優れた特徴を有している。また、本発明のグリコシルヘスペレチンの製造方法又は、本発明のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法によれば、従来品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを工業的に大量かつ安定に高収率で、しかも、容易かつ安価に提供できる優れた実益が奏せられる。したがって、本発明のグリコシルヘスペレチンによれば、従来品がその雑味のために、或いは、雑味と着色、更には臭気のために使用が困難か支障のあった物品へも好適に使用できる。しかも、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、加熱された場合でも、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されていることから、加熱工程を経て製造される物品であっても、より高品質のものを提供できるという優れた実益が奏せられる。

以下、本発明の実施形態について説明するが、それらは本発明を実施する上での好ましい態様のあくまで例示であり、本発明は、それら実施態様に何ら限定されるものではない。

本発明に係るグリコシルヘスペレチンは、グリコシルヘスペレチンを主成分とするものである点で従来品と共通点があるものの、従来品と比べ、雑味が有意に低減された新規なグリコシルヘスペレチンである。

すなわち、本発明で言うグリコシルヘスペレチンとは、ヘスペレチン骨格を有する化合物である（１）α−グリコシルヘスペリジン（α−グルコシルヘスペリジンなど）及び（２）ヘスペリジン及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンの一方又は双方を主成分として含む組成物、つまりは、グリコシルヘスペレチン混合物を意味し、他に、その製造原料に由来するか、その製造工程で副次的に生成すると考えられる（３）ナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、グルコシルナリルチンなどのフラボノイド、及び（４）塩類などの微量成分を含むものである。本発明のグリコシルヘスペレチンにおける前記（１）及び（２）の成分の合計割合（質量％）（以下、特に断りがない限り、単に「グリコシルヘスペレチン含量」と言う。）は、通常、乾燥固形物当たり、９０質量％以上１００質量％未満、好適には、９３質量％以上１００質量％未満、より好適には、９５質量％以上１００質量％未満、更には、９７質量％以上１００質量％未満、９８質量％以上１００質量％未満（以下、本願明細書においては、特に断らない限り、「質量％」を「％」と略記する。）である。

本発明のグリコシルヘスペレチンを、医薬、精密機器などの分野で利用する場合は別にして、最高純度のグリコシルヘスペレチンが必ずしも要求されない、つまり、比較的低純度のグリコシルヘスペレチンであっても特段の支障を生じない、飲食品、嗜好品、化粧品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品などの分野で利用する場合には、それらの最終形態を勘案しつつ、それら物品をより安価に提供するために、本発明のグリコシルヘスペレチンの純度、つまり、乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量の上限は、通常、工業的に比較的大量、安価かつ容易に提供できる９９％、より安価に提供するには９８％、更により安価に提供するには９７％以下にまで低含量のものであってもよい。しかし、本発明のグリコシルヘスペレチンの乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量が低い場合には、高含量のものと比べ、必然的に多量用いられることとなり、その結果、操作が煩雑となり、取り扱い性が悪くなることから、グリコシルヘスペレチン含量の下限は、通常、９０％以上、好適には、９３％以上、より好適には、９５％以上、より好適には、９７質量％以上とするのが望ましい。

本発明のグリコシルヘスペレチンの好適な実施態様として、グリコシルヘスペレチンがα−グルコシルヘスペリジンなどのα−グリコシルヘスペリジンである場合、乾燥固形物当たりのα−グリコシルヘスペリジン含量が５０％以上１００％未満であるものを例示できる。

また、本発明のグリコシルヘスペレチンをα−グルコシルヘスペリジンの給源として提供する場合、本発明のグリコシルヘスペレチンにおけるα−グルコシルヘスペリジン含量の上限は、本発明のグリコシルヘスペレチンをより安価に提供する場合には、通常、工業的に比較的大量、安価かつ容易に提供できる９０％以下、より安価には８５％以下、更により安価には８０％以下の低含量のものであってもよい。また、α−グルコシルヘスペリジン含量の下限は、上記グリコシルヘスペレチン含量と同様の理由により、通常、６０％以上、６５％以上、又は７０％以上とするのが望ましい。殊に、本発明のグリコシルヘスペレチンの好適な実施態様として、乾燥固形物当たり、α−グルコシルヘスペリジンを６０乃至９０％含有するものを例示できる。

以上述べた本発明のグリコシルヘスペレチンのグリコシルヘスペレチン含量は、斯界において汎用の測定機器を用いて求めることができる。その一例を示せば、本発明のグリコシルヘスペレチンの一部をサンプリングし、精製水により、例えば、０．１ｗ／ｗ％に希釈又は溶解し、市販の０．４５μｍメンブランフィルターにより濾過した後、濾液を下記条件による高速液体クロマトグラフィー（以下、「ＨＰＬＣ」と言う。）分析に供し、試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）を標準物質として用い、ＵＶ２８０ｎｍにおけるクロマトグラムに出現した各ピークの面積と、各ピークに対応するヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン（α−グルコシルヘスペリジンなど）、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンなどの各グリコシルヘスペレチンの分子量に基づき算出する。グリコシルヘスペレチンの定量の概要を示せば下記のとおりである。

＜ＨＰＬＣ分析条件＞
・ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−２０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
・デガッサー：『ＤＧＵ−２０Ａ３』（株式会社島津製作所製）
・カラム：『ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＵＧ １２０』（株式会社資生堂製）
・サンプル注入量：１０μ１
・溶離液：水／アセトニトリル／酢酸（８０／２０／０．０１（容積比））
・流 速：０．７ｍ１／分
・温 度：４０℃
・検 出：ＵＶ検出器『ＳＰＤ−２０Ａ』（株式会社島津製作所製）
・測定波長：２８０ｎｍ
・データ処理装置：『クロマトパックＣ−Ｒ７Ａ』（株式会社島津製作所製）

＜グリコシルヘスペレチンの定量＞
（１）ヘスペリジン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比に基づいて算出する。
（２）α−グルコシルヘスペリジン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、α−グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンの分子量比に基づいて算出する。
（３）７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンとヘスペリジンの分子量比に基づいて算出する。
（４）その他のグリコシルヘスペレチン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、その他のグリコシルヘスペレチンとヘスペリジンとの分子量比に基づいて算出する。

本発明のグリコシルヘスペレチンにおける、乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量とは、試料として用いた本発明のグリコシルヘスペレチンの無水物換算での質量に対する、前記（１）乃至（４）で求めた総グリコシルヘスペレチン含量の割合（％）を意味する。

本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンであって、フルフラール含量を指標にして得られた、フルフラールを実質的に含まないグリコシルヘスペレチンである。換言すれば、本発明のグリコシルヘスペレチンにおけるフルフラール含量は、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得るための指標であり、本明細書には、このフルフラール含量を指標にして、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを製造する方法を開示している。言うまでもなく、フルフラール含量が低いものほど雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンである。

更に、本発明者等は、本発明のグリコシルヘスペレチンについて種々検討する過程で、本発明のグリコシルヘスペレチンの内、フルフラールを実質的に含まないとともに、フェノールエーテルの一種である４−ビニルアニソール（別名：４−メトキシスチレン）（以下、「４−ＶＡ」と略記する。）を実質的に含まないものは、本発明のグリコシルヘスペレチンの中でも雑味はもとより、着色も顕著に低減されていることを見出した。４−ＶＡは、本発明のグリコシルヘスペレチンの製造原料に起因して生成すると推定される成分であり、本発明のグリコシルヘスペレチン中の含量は、通常、乾燥固形物当たり、３０ｐｐｂ未満であり、４−ＶＡ含量は、フルフラール含量が２００ｐｐｂ未満であるものにおいては、通常、フルフラール含量とパラレルの関係にある。なお、４−ＶＡを実質的に含まないとは、フルフラールの場合と同様、従来品と比べ、４−ＶＡ含量が有意に低いレベルであることを意味する。より具体的には、本発明のグリコシルヘスペレチンにおける４−ＶＡ含量は、後述する実験１の「（２）４−ＶＡの含量」に示すＧＣ／ＭＳ分析装置を用いての分析手法により測定したとき、通常、乾燥固形物当たり、３０ｐｐｂ未満、好適には、１５ｐｐｂ未満、より好適には、１０ｐｐｂ未満、更に好適には、５ｐｐｂ未満、より更に好適には、３ｐｐｂ未満、より更に好適には、２ｐｐｂ未満であることを意味する。

更に、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品の欠点であった、雑味が有意に低減されている優れた特徴を有している。すなわち、本発明のグリコシルヘスペレチンは自体、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているだけでなく、これを水溶液にして加熱した場合でも、従来品と比べ、雑味が有意に低減されている優れた特徴を有している。本発明のグリコシルヘスペレチンの雑味は、後述する「実験２：官能試験」に示すパネルを用いての官能試験により調べることができる。

また、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、着色（以下、「着色度」と言う場合がある。）も顕著に低減されている優れた特徴を有している。本発明のグリコシルヘスペレチンの着色度は、後述する実験１の「（２）色調と着色度」に示す方法により測定され、その概要を示せば下記のとおりである。すなわち、本発明のグリコシルヘスペレチンを所定濃度含有する水溶液を密閉容器中で加熱処理した後、処理液の色調を肉眼観察するとともに、分光光度計により、波長４２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ_{４２０ｎｍ}）及び波長７２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ_{７２０ｎｍ}）を測定し、両波長における吸光度の差（ＯＤ_{４２０ｎｍ}−ＯＤ_{７２０ｎｍ}）を求め、その測定値を着色度とする。本発明のグリコシルヘスペレチンの好適な態様としては、前記吸光度の差が０．２４未満、好適には０．２０以下、より好適には０．１７以下、更により好適には０以上０．１５以下であるものを例示できる。なお、本測定法において、当該グリコシルヘスペレチンの水溶液を加熱するのは、従来品が加熱により着色度が著しく増大する欠点があったことに鑑み、本発明のグリコシルヘスペレチン自体の着色及び加熱による着色の程度を確度よく評価する目的で設定されたものである。

更に、本発明のグリコシルヘスペレチンの好適な態様として、１ｗ／ｗ％水溶液とし、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、冷却し、２０℃にしたときの電気伝導度が１０μＳ／ｃｍ未満、好適には、８μＳ／ｃｍ未満、より好適には、６μＳ／ｃｍ未満、より更に好適には、０μＳ／ｃｍを超え４．５μＳ／ｃｍ未満であるグリコシルヘスペレチンを例示できる。電気伝導度は、汎用の電気伝導度計により測定することができる。従来品は、通常、１０μＳ／ｃｍ超の電気伝導度を示すことから、本発明のグリコシルヘスペレチンは従来品と比べ、イオン性化合物含量が少ない特徴を有している。なお、本測定法において、本発明のグリコシルヘスペレチンの水溶液を加熱する理由は、前記着色度の挙動に鑑みて設定されたものである。

また、本発明のグリコシルヘスペレチンの好適な態様として、当該グリコシルヘスペレチンの電気伝導度を左右するイオン性化合物である、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量が、従来品と比べ低いものを例示できる。本発明のグリコシルヘスペレチンにおけるカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量は、例えば、斯界において汎用の高周波誘導結合プラズマ発光分光分析法で測定することができる。本発明のグリコシルヘスペレチンとして、前記分析法で測定したとき、当該グリコシルヘスペレチンの乾燥固形物当たりのカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、１ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、０．２ｐｐｍ以下、及び０．４ｐｐｍ以下であるものを例示できる。より好適には、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、０．６ｐｐｍ以下、０．０６ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、及び０．３ｐｐｍ以下であるものを例示できる。更に好適には、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、０ｐｐｍ以上０．５ｐｐｍ以下、０ｐｐｍ以上０．０５ｐｐｍ以下、０ｐｐｍ以上０．０８ｐｐｍ以下、及び０ｐｐｍ以上０．２ｐｐｍ以下であるものを例示できる。

このように、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、電気伝導度が低減され、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムなどの金属元素（金属イオン）の濃度が低減されていることから、塩類、或いは、その他のイオン性成分などの生理学的許容性のイオン性化合物含量が低減されていると判断される。

次に、本発明に係るグリコシルヘスペレチンの製造方法とグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法について順次説明する。

本発明の製造方法は、（ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、（イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチンを生成させる工程、及び（ウ）生成したグリコシルヘスペレチンを採取する工程、を含むグリコシルヘスペレチンの製造方法であって、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程を還元剤の存在下で実施するか、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程の前の始発原料及び／又は前記工程後の結果物に還元剤を添加することにより、グリコシルヘスペレチンを製造する方法である。以下、当該製造方法で用いる製造原料、酵素反応（糖転移反応など）、還元剤処理、及び精製方法について逐次説明する。

（製造原料）
製造原料のヘスペリジンとしては、従来品の製造において用いられるヘスペリジンのいずれも用いることができ、高純度のヘスペリジンはもとより、比較的低純度のヘスペリジン含有植物由来の抽出物、搾汁液、又はその部分精製物などの１種又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。前記ヘスペリジン含有植物とは、例えば、ミカン類、オレンジ類、香酸柑橘類、雑柑橘類、タンゴール類、タンゼロ類、ブンタン類、キンカン類、ダイダイ類などのミカン科ミカン属に属する柑橘類を例示でき、ヘスペリジン含有部位としては、それらの果実、果皮、種子、未熟果などを例示できる。

製造原料の澱粉部分分解物としては、後述する糖転移酵素を作用させたとき、ヘスペリジンに糖転移し、グリコシルヘスペレチンとしてのα−グリコシルヘスペリジンを生成することのできるものであればよく、例えば、アミロース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトオリゴ糖などの澱粉部分分解物、更には、液化澱粉、糊化澱粉などから選ばれる１種又は２種以上の澱粉部分分解物が適宜選ばれる。

また、後述する酵素反応において用いる澱粉部分分解物の使用量は、原料のヘスペリジンの質量に対し、通常、約０．１乃至約１５０倍、好適には、約１乃至約１００倍、より好適には、約２乃至約５０倍の範囲から選ばれる量が用いられる。酵素反応においては、澱粉部分分解物由来の糖をヘスペリジンへ糖転移させ、α−グリコシルヘスペリジンを効率的に生成させ、しかも、酵素反応系に未反応ヘスペリジンができるだけ残存しないように、ヘスペリジンに対し過剰量の澱粉部分分解物を用いるのが望ましい。理由は、後述する精製工程において、澱粉部分分解物及びこれに由来する糖類等は、α−グリコシルヘスペリジンと比較的容易に分離できるのに対し、ヘスペリジンはα−グリコシルヘスペリジンと挙動をともにし、α−グリコシルヘスペリジンと分離し難いことから、水溶性が極めて低い、未反応のヘスペリジンの残存量が多いと、全体として得られるグリコシルヘスペレチンの水溶性が低くなる不都合を生じるからである。

（酵素反応）
本発明で言う酵素反応とは、前記製造原料としてのヘスペリジンと澱粉部分分解物に糖転移酵素を作用させてα−グリコシルヘスペリジンを生成させる酵素反応を意味する。

酵素反応で用いる糖転移酵素としては、α−グルコシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．２０）、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９、以下、「ＣＧＴａｓｅ」と言う。）、α−アミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．１）などを例示できる。α−グルコシダーゼとしては、ブタの肝臓、ソバの種子などの動植物組織由来の酵素、又は、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）などのアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属などに属するカビ培養物由来のもの、又はサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属などに属する酵母などの微生物を栄養培地で培養して得られる培養物由来のものが、ＣＧＴａｓｅとしては、例えば、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、サーモコッカス（Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ）属、サーモアナエロバクター（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、パイロコッカス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ブレビバチルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及びサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属由来のものを例示できる。α−アミラーゼとしては、ジオバチルス属などに属する細菌、又は、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）などのアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属などに属するカビ培養物由来の１種又は２種以上のものを適宜組み合わせて用いることができる。これら糖転移酵素は、本発明の目的を達成し得る限り、天然又は遺伝子組換え型のいずれのものも採用でき、市販品がある場合には、それらも適宜用いることができる。また、前記糖転移酵素のいずれも、必ずしも精製して用いる必要はなく、通常、粗酵素であっても本発明の目的を達成し得る限り、いずれも用いることができる。

また、前記天然又は遺伝子組換え型の糖転移酵素を用いるに際し、それら糖転移酵素に好適な澱粉部分分解物を採用することにより、α−グリコシルヘスペリジンの生成率を高めることができる。

前記α−グルコシダーゼを用いる場合には、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオースなどのマルトオリゴ糖、又はデキストロース・イクイバレント（ＤＥ）約１０乃至約７０の澱粉部分分解物が、ＣＧＴａｓｅを用いる場合には、α−、β−又はγ−シクロデキストリン又はＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約６０の澱粉部分分解物が、更には、α−アミラーゼを用いる場合には、ＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約３０のデキストリンなどの澱粉部分分解物が好適に用いられる。

酵素反応時のヘスペリジン含有溶液としては、ヘスペリジンをできるだけ高濃度に含有するものが望ましく、例えば、ヘスペリジンを懸濁状か、水などの溶媒に高温で溶解、若しくは、アルカリ剤を用いてｐＨ７．０を越えるアルカリ側ｐＨで溶解させた溶液状でヘスペリジンを高濃度に含有する溶液が好適に用いられる。アルカリ剤としては、約０．１乃至約１．０規定の水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液、アンモニア水などの１種又は２種以上の強アルカリ性水溶液を適宜用いることができる。

ヘスペリジンをアルカリ剤を用いて溶液状で用いる場合のヘスペリジン濃度は、通常、約０．００５ｗ／ｖ％以上、好ましくは、約０．０５乃至１０ｗ／ｖ％、より好ましくは、約０．５乃至約１０ｗ／ｖ％、より更に好ましくは、約１乃至約１０ｗ／ｖ％である。

一方、ヘスペリジンをアルカリ剤を用いないで懸濁状で用いる場合には、ヘスペリジンを水などの溶媒に懸濁して懸濁状ヘスペリジンとし、その際のヘスペリジン濃度は、通常、約０．１乃至約２ｗ／ｖ％、より好適には、約０．２乃至約２ｗ／ｖ％、より好適には、約０．３乃至約２ｗ／ｖ％とする。

ヘスペリジンと澱粉部分分解物に糖転移酵素を作用させるときの温度と時間は、酵素反応で用いるヘスペリジンと澱粉部分分解物の濃度、及び糖転移酵素の種類、至適温度、至適ｐＨ、或いは作用量などに依存して変わるものの、通常、約５０乃至約１００℃、好適には、約６０乃至約９０℃、より好適には、約７０乃至約９０℃、及び、約５乃至約１００時間、好適には、約１０乃至約８０時間、より好適には、約２０乃至約７０時間の範囲とする。

また、糖転移酵素をヘスペリジンを高濃度に含有するアルカリ性溶液に作用させるときのｐＨと温度は、糖転移酵素の種類、至適ｐＨ、至適温度、或いは作用量、及びヘスペリジンの濃度などに依存して変わるものの、糖転移酵素が作用し得るできるだけ高ｐＨ、高温、具体的には、ｐＨ約７．５乃至約１０、好適には、ｐＨ約８乃至約１０、及びｐＨ約４０乃至約８０℃、より好適には、ｐＨ約５０乃至約８０℃の範囲とする。なお、アルカリ性溶液中のヘスペリジンは、分解を起し易いので、これを防ぐため、できるだけ遮光下、嫌気下にヘスペリジンを保つのが望ましい。

更に、糖転移酵素を懸濁状ヘスペリジンに作用させるときのｐＨは、糖転移酵素の種類、至適温度、至適ｐＨ、或いは作用量、及び懸濁状ヘスペリジンの濃度などに依存して変わるものの、通常、ｐＨ約４乃至約７、好適には、ｐＨ約４．５乃至約６．５の範囲とする。

また、更に必要ならば、酵素反応前のヘスペリジンの溶解度を高め、ヘスペリジンへの糖転移反応を容易にするために、ヘスペリジン高含有溶液、殊に、ヘスペリジン高含有水溶液中に水と相溶性の高い有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトール、アセトンなどの低級アルコール、低級ケトンなどの１種又は２種以上を適量共存させることも随意である。

酵素量と反応時間とは密接な関係にあり、通常、経済性の観点から、約５乃至約１５０時間、好適には、約１０乃至約１００時間、より好適には、約２０乃至約８０時間で酵素反応を終了する酵素量を用いる糖転移酵素の種類に応じて適宜設定すればよい。また、固定化された糖転移酵素を用いてバッチ式で繰り返し反応させるか、連続式で反応させることも適宜実施できる。

前記糖転移酵素反応後に得られるα−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する酵素反応液は、必要により、そのままで、又は、多孔性合成吸着樹脂により精製した後、グルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３）、又はβ−アミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．２）などのアミラーゼによって部分加水分解し、α−グリコシルヘスペリジンのα−Ｄ−グルコシル基の数を低減させることができる。例えば、グルコアミラーゼを作用させる場合には、α−マルトシルヘスペリジン以上の高分子を加水分解し、グルコースを生成させるとともにα−グルコシルヘスペリジンを生成させ、蓄積させることができる。また、β−アミラーゼを作用させる場合には、α−マルトトリオシルヘスペリジン以上の高分子を加水分解し、マルトースを生成させるとともに、α−グルコシルヘスペリジンとα−マルトシルヘスペリジンとを含む混合物を生成させ、蓄積させることができる。

一方、糖転移酵素反応後に得られるα−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する酵素反応液に、グルコアミラーゼとα−Ｌ−ラムノシダーゼとを同時に、又はそのいずれか一方を先にして順次作用させることにより、α−グリコシルヘスペリジンのルチノース構造におけるグルコースに等モル以上α−結合したグルコースを離脱させ、α−グリコシルヘスペリジンをα−グルコシルヘスペリジンに変換させてα−グルコシルヘスペリジン含量を高めるとともに、水溶性の低いヘスペリジンを水溶性の高い７−Ｏ−β−モノグルコシルヘスペレチンに変えることにより、水溶性の高いグリコシルヘスペレチンとすることができる。

糖転移酵素と同様、グルコアミラーゼとα−Ｌ−ラムノシダーゼについても、それら酵素量と酵素反応時間とは密接な関係にあり、通常、経済性の観点から、約５乃至約１５０時間、好適には、約１０乃至約１００時間、より好適には、約２０乃至約８０時間で酵素反応を終了させる酵素量を用いる酵素の種類に応じて適宜設定すればよい。また、固定化されたα−Ｌ−ラムノシダーゼを用いてバッチ式で繰り返し反応させるか、連続式で途切れなく反応させることも適宜実施できる。

（還元剤処理）
還元剤処理とは、還元剤を用いて、グリコシルヘスペレチンの雑味を有意に低減させるための処理を意味し、後述する還元剤を、（ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、（イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチンを生成させる工程、及び（ウ）生成したグリコシルヘスペレチンを採取する工程の１又は２以上の工程で用いるか、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程の前の始発原料及び／又は前記工程後の結果物に、その所定量を添加することを意味する。

還元剤は、本発明の所期の目的を達成し得る限り、特段の制限はなく、斯界において汎用の無機系及び有機系の還元剤のいずれも用いることができる。しかしながら、本発明のグリコシルヘスペレチンは、主として、ヒトに適用することを前提とするものであることから、安全性が高く、安定性、取り扱い性の優れた還元剤を用いるのが望ましい。

好適に用いられる還元剤の具体的としては、例えば、ヒドロキシルアミン類、ヒドラジン系化合物、二酸化塩素、水素、水素化合物（硫化水素、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム、水素化アルミニウムカリウムなど）、硫黄化合物（二酸化硫黄、二酸化チオ尿素、チオ硫酸塩、亜硫酸塩、硫酸鉄、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、亜硫酸カルシウムなど）、亜硝酸塩、塩化スズ、塩化鉄、ヨウ化カリウム、過酸化水素、希釈過酸化ベンゾイル、ヒドロペルオキシド、亜塩素酸ナトリウムなど亜塩素酸塩などの無機系還元剤を、又、フェノール類、アミン類、キノン類、ポリアミン類、蟻酸とその塩類、蓚酸とその塩類、クエン酸とその塩類、二酸化チオ尿素、還元性糖質、過酸化ベンゾイル、過硫酸ベンゾイル、水素化ジイソブチルアルミニウム、カテキン、ケルセチン、トコフェロール、没食子酸とそのエステル、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジチオトレイトール、還元型グルタチオン、及びポリフェノール類などの有機系還元剤を例示できる。前記無機系及び有機系の還元剤は、それらの１種又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。

前記無機系及び有機系の還元剤の内、前者の還元剤は、従来品が本来的に有していた雑味が有意に低減され、異臭も低減された高品質のグリコシルヘスペレチンを提供することができるので、より好適に用いることができる。なお、その理由は定かでないものの、以下のように推察される。すなわち、有機系還元剤は有機物であることから、自体、雑味や着色の原因となる恐れがあり、有機系還元剤或いはその分解物が本発明のグリコシルヘスペレチンの製造工程で完全に除去されずに残存し、それらがグリコシルヘスペレチンの品質に負の影響を与えるからではないかと考えられる。

無機系還元剤の内、ＳＯ_２ ⁻イオン、ＨＳＯ_３ ⁻イオン、ＳＯ_３ ^２−イオン、Ｓ_２Ｏ_４ ^２−イオン、又はＳ_２Ｏ_７ ^２−イオンと金属イオンとからなる、所謂、亜硫酸塩（亜硫酸塩類とも言う。）は、安全性、安定性、及び取り扱い性の点でも優れていることから、本発明においてより好適に用いることのできる還元剤である。殊に、無機系還元剤である亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸カリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、メタ亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びメタ重亜硫酸カリウムなどの亜硫酸塩は、本発明において最も好適に用いることができる。

また、前記還元剤は、グリコシルヘスペレチンの製造工程における１工程、又はその工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に対して適用されるが、２以上の工程、又はそれら工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に、その適量を適宜小分けして用いる場合には、より少ない量の還元剤で効率よく本発明の所期の目的を達成することができる。

前記還元剤の添加量としては、合計で、前記（ア）乃至（ウ）のそれぞれの工程で、前記（イ）酵素反応後（糖転移酵素以外に他の酵素を用いる場合には、それら全ての酵素反応終了後を意味する）に得られる酵素反応液質量に対し、通常、０．００１％以上、好適には、０．０１乃至３％、より好適には、０．０１乃至１％、更に好適には、０．０１乃至０．５％に相当する範囲から選ばれる量が用いられる。なお、還元剤を前記（ウ）の工程より前に添加する場合には、通常、残存する還元剤は、精製工程で実質的に除去されることから、最終製品として得られるグリコシルヘスペレチン中には実質的に検出されない。前記全工程で添加される還元剤の量は、酵素反応後に得られる酵素反応液質量に対して、通常、合計で、０．００１％以上、好適には、０．０１％以上、より好適には、０．０１乃至１％の範囲となるように、１回ないしは複数回にわけて添加される。添加する際の温度は、通常、前記（ア）乃至（ウ）の工程で採用されている温度であるが、別途、その温度を上回る温度とすることも可能である。具体的には、室温以上の温度、好適には、５０℃以上、より好適には、７０℃以上、より好適には、８０℃以上、更に好適には、９０乃至１２０℃を例示できる。

（精製方法）
斯くして得られる酵素反応溶液は、そのまま、本発明のグリコシルヘスペレチンとして用いることができる。しかし、通常、酵素反応溶液は、斯界において公知の分別方法、濾過方法、多孔性合成樹脂等を用いる精製方法、濃縮方法、噴霧方法、乾燥方法などの１種又は２種以上の手段を適宜組み合わせて、液状、固状、粉末状などの形態にあるグリコシルヘスペレチンとすることができる。

前記多孔性合成樹脂としては、多孔性で広い吸着表面積を有し、かつ非イオン性のスチレン−ジビニルベンゼン重合体、フェノール−ホルマリン樹脂、アクリレート樹脂、メタアクリレート樹脂などの合成樹脂を意味し、例えば、市販されているＲｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ社製の商品名：アンバーライトＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、アンバーライトＸＡＤ−１１、及びアンバーライトＸＡＤ−１２などの樹脂；三菱化学株式会社製の商品名：ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−３０、ダイヤイオンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０、ダイヤイオンＨＰ−２ＭＧ、セパビーズＳＰ７０、セパビーズＳＰ２０７、セパビーズＳＰ７００、セパビーズＳＰ８００などの樹脂；及びＩＭＡＣＴＩ社製の商品名：イマクティＳｙｎ−４２、イマクティＳｙｎ−４４、及びイマクティＳｙｎ−４６などの樹脂を例示できる。

多孔性合成吸着剤を用いる精製方法による場合、酵素反応液を多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すると、グリコシルヘスペレチンは多孔性合成吸着剤に吸着するのに対し、残存する澱粉部分分解物や水溶性糖類などは吸着されることなく、そのままカラムから流出する。この際、グリコシルヘスペレチンである、ヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びα−グリコシルヘスペリジンは、通常、挙動をともにし、多孔性合成吸着剤によってそれらを個別に分離することはできない。しかし、操作は煩雑となり、収率は低下するものの、多孔性合成吸着剤を充填したカラムに選択的に吸着したグリコシルヘスペレチンを希アルカリ、水などの溶媒で洗浄した後、比較的少量の有機溶媒又は有機溶媒と水との混合液、例えば、メタノール水溶液、エタノール水溶液などを通液すれば、α−グリコシルヘスペリジンがカラムから最初に溶出し、次いで、通液量を増すか有機溶媒濃度を高めることにより未反応ヘスペリジンが溶出してくる。斯くして得られたグリコシルヘスペレチン含有溶出液を蒸留処理して、有機溶媒を留去した後、所望の濃度まで濃縮すれば、ヘスペリジン含量が低減された、本発明のグリコシルヘスペレチンが得られる。なお、前記有機溶媒によるグリコシルヘスペレチンの溶出操作は、同時に、多孔性合成吸着剤の再生操作にもなるので、用いる多孔性合成吸着剤の繰り返し使用を可能にする利点がある。

また、酵素反応終了後、酵素反応液を多孔性合成吸着剤に接触させるまでの間に、例えば、反応液を加温して生じる不溶物を濾過して除去したり、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウムなどで処理して反応液中の蛋白性物質などを吸着除去したり、強酸性イオン交換樹脂（Ｈ型）、中塩基性又は弱塩基性イオン交換樹脂（ＯＨ型）などで処理して脱塩するなどの精製方法を組み合せて、グリコシルヘスペレチン含量を高めた、液状の本発明のグリコシルヘスペレチンを製造することができる。

更に、前記液状のグリコシルヘスペレチンを公知の乾燥方法により乾燥し粉末化して、粉末状のグリコシルヘスペレチンとすることも随意である。

このようにして、従来品の欠点であった特有の雑味が効果的に有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを製造することができる。一方、本発明者等が確認したところによれば、前記還元剤処理をしていない、従来品特有の雑味は、前記精製方法を適用しただけでは実質的に変化しない。すなわち、従来品の製造工程において汎用されている、例えば、前記多孔性合成吸着剤を用いる精製方法は、澱粉部分分解物や水溶性糖類だけでなく、水溶性の塩類などの夾雑物も同時に除去できる利点を有しているけれども、斯かる精製方法をいかに駆使しようとも、従来品特有の雑味を有意に低減することは困難である。想定される理由として、グリコシルヘスペレチン中に含まれる雑味の原因物質は、多孔性合成吸着剤への吸脱着の挙動がグリコシルヘスペレチンと同様であり、グリコシルヘスペレチンと分離することができないからではないかと考えられる。

また、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味が有意に低減されており、電気伝導度も低く、電気伝導度に関与するイオン性化合物含量が低減されている。なお、イオン性化合物としては、例えば、原材料としてのヘスペリジンに本来的に含まれているナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、或いは、酵素反応生成物であるグルコシルナリルチン、グルコシルネオポンシリンなどの化合物やその分解物、或いは、その分解物と密接な関連性を有する化合物、更には、グリコシルヘスペレチンの製造原料に由来するか、又はその製造工程で副次的に生成すると考えられる、本発明において指標としているフルフラールをはじめ、フルフリルアルコール、及びヒドロキシメチルフルフラールなどのフルフラール類やその塩類などの他、溶液状態で、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムなどの金属の陽イオンを遊離する化合物などが挙げられる。なお、前記ナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、グルコシルナリルチン、グルコシルネオポンシリンなどの成分は、通常、本発明のグリコシルヘスペレチンに微量ながら含まれている。

以上述べたとおり、フルフラール含量が有意に低減された本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味が有意に低減された高品質のグリコシルヘスペレチンである。

本発明のグリコシルヘスペレチンの製造方法により、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られるメカニズムは定かでないが、推定すれば以下のとおりである。

（１）本発明のグリコシルヘスペレチンを製造するに際し、その製造原料に由来して、雑味の原因物質が存在し、それらに還元剤が作用し、その原因物質がマスク、分解ないしは修飾され、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。
（２）本発明のグリコシルヘスペレチンの製造工程において、還元剤が、雑味の原因物質が生成するのを低減ないしは抑制するか、生成した雑味の原因物質をマスク、分解ないしは修飾され、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。
（３）前記（１）及び（２）に示す雑味の原因物質が還元剤により修飾を受け、多孔性合成吸着剤などによる精製工程でグリコシルヘスペレチンと分離し易くなり、その結果、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。

更に、本発明のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法は、グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤とを接触させることによる、グリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法である。なお、本発明のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法で言う、グリコシルヘスペレチン含有物とは、グリコシルヘスペレチンを主成分として含むグリコシルヘスペレチン含有物全般を意味する。また、当該方法によれば、グリコシルヘスペレチン含有物の着色をも効果的に顕著に低減することができる。グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤との接触は、固状で接触させるよりも、水などの適宜溶媒を用いて、溶液状態又は懸濁状態で行うのがよい。また、前記還元剤を接触させるグリコシルヘスペレチンとしては、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上を含有するグリコシルヘスペレチンを例示できる。前記グリコシルヘスペレチン含有物としては、乾燥固形物当たり、グリコシルヘスペレチンを、通常、７０％以上１００％未満、より好適には、８０％以上１００％未満、更に好適には、９０％以上１００％未満含有するグリコシルヘスペレチンを例示できる。

また、本発明のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法において用いる還元剤は、本発明のグリコシルヘスペレチンの製造方法におけると同様のものを用いることができる。また、還元剤の使用量は、グリコシルヘスペレチンの乾燥固形物当たり、通常、０．００００１％以上、好適には、０．０００１乃至０．５％、より好適には、０．００１乃至０．４％、より更に好適には、０．００１乃至０．３％の範囲で添加し、それらを均一に混合し、グリコシルヘスペレチンと還元剤とを接触させることにより、従来品特有の雑味を有意に低減することができる。

斯くして得られる本発明のグリコシルヘスペレチンは、例えば、液状、ペースト状、固状、顆粒状、粉末状などの各種形態にして提供することができる。

本発明のグリコシルヘスペレチンの製造方法及びグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法により得られるグリコシルヘスペレチンは自体、雑味が有意に低減されているとともに、着色も顕著に低減され、更には、臭気も顕著に低減されており、しかも、熱安定性にも優れていることから、例えば、８０乃至１００℃の高温で３０分間以上加熱しても、また、当該グリコシルヘスペレチンを含有させる工程又はこれを含有させた飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を室温ないしは室温を若干上回る温度で数十分間乃至数カ月間に亘って保存しても、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色、更には臭気も顕著に低減されているという優れた特徴が発揮される。したがって、本発明のグリコシルヘスペレチンは、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの呈味を有する各種物質ともよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、特定保健用食品などの健康補助食品などを含む飲食物全般を含む、例えば、調味料、和菓子、洋菓子、氷菓、飲料（緑茶、紅茶、ハーブティーなどの茶飲料、果汁飲料、清涼飲料、コーヒー、ココア、ドリンク剤など）、アルコール類（日本酒、洋酒など）、スプレッド、ペースト、漬物、ビン缶詰、畜肉加工品、魚肉・水産加工品、乳・卵加工品、野菜加工品、果実加工品、穀類加工品などの広範囲に有利に利用することができる。また、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための飼料、餌料などにビタミンＰ強化剤、嗜好性改善などの目的で配合して利用することも有利に実施できる。

更に、本発明のグリコシルヘスペレチンは、昨今、注目を集めている、所謂美容食品として、また、各種美容食品や飲食品にも適宜配合して用いることができる。

また、本発明のグリコシルヘスペレチンは、ローション、クリーム、乳液、ゲル、粉末、ペースト、ブロックなどの形態で、石けん、化粧石けん、漢方石鹸、肌洗い粉、洗顔クリーム、洗顔フォーム、フェイシャルリンス、ボディーシャンプー、ボディーリンス、シャンプー、リンス、髪洗い粉などの清浄用化粧品；セットローション、ヘアブロー、チック、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、ヘアリキッド、ヘアトニック、ヘアローション、養毛料、染毛料、頭皮用トリートメントなどの頭髪化粧品；化粧水、バニシングクリーム、エモリエントクリーム、エモリエントローション、パック用化粧料（ゼリー状ピールオフタイプ、ゼリー状ふきとり型、ペースト状洗い流し型、粉末状など）、クレンジングクリーム、コールドクリーム、ハンドクリーム、ハンドローション、乳液、保湿液、アフターシェービングローション、シェービングローション、プレシェーブローション、アフターシェービングクリーム、アフターシェービングフォーム、プレシェーブクリーム、化粧用油、ベビーオイルなどの基礎化粧品；ファンデーション（液状、クリーム状、固型など）、タルカムパウダー、ベビーパウダー、ボディパウダー、パヒュームパウダー、メークアップベース、おしろい（クリーム状、ペースト状、液状、固型、粉末など）、アイシャドウ、アイクリーム、マスカラ、眉墨、まつげ化粧料、頬紅、頬化粧水などのメークアップ化粧品；香水、練香水、粉末香水、オーデコロン、パフュームコロン、オードトワレなどの芳香化粧品；日焼けクリーム、日焼けローション、日焼けオイル、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼け止めオイルなどの日焼け又は日焼け止め化粧品；マニキュア、ペディキュア、ネイルカラー、ネイルラッカー、エナメルリムーバー、ネイルクリーム、爪化粧料などの爪化粧品；アイライナー化粧品；口紅、リップクリーム、練紅、リップグロスなどの口唇化粧品；口臭防止剤、練歯磨、マウスウォッシュなどの口腔化粧品；バスソルト、バスオイル、浴用化粧料などの入浴用化粧品；更には、美肌剤、色白剤、老化の抑制剤／防止剤などに配合して利用することも、更には、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチック製品などに配合して利用することも有利に実施できる。更には、本発明のグリコシルヘスペレチンは、タバコ、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタミン剤、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬、経管栄養剤、内服薬、注射剤などの各種固状、ペースト状、液状の嗜好品、感受性疾患の予防・治療剤などの感受性疾患剤などに適宜配合して利用することも有利に実施できる。また、本発明のグリコシルヘスペレチンは、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品にも好適に適用することができる。

本発明のグリコシルヘスペレチンは、前記種々の組成物又は物品の総質量に対し、通常、約０．０００１％以上、好適には、約０．００１乃至約５０％、より好適には、約０．０１乃至約３０％、更に好適には、約０．０１乃至約２０％、より更に好適には、約０．０１乃至約１０％の範囲で用いられる。

また、本明細書で言う感受性疾患とは、グリコシルヘスペレチンによって予防若しくは治療される疾患全般を意味し、例えば、グリコシルヘスペレチンによって予防若しくは治療される、ウイルス性疾患、細菌性疾患、外傷性疾患、免疫性疾患、リューマチ、糖尿病、アレルギー性疾患、脂質代謝異常症、循環器疾患、悪性腫瘍などのグリコシルヘスペレチン感受性疾患を例示できる。グリコシルヘスペレチン感受性疾患の予防剤、治療剤は、その目的に応じてその形状を適宜選択でき、例えば、噴霧剤、点眼剤、点鼻剤、うがい剤、注射剤などの液剤、軟膏、ハップ剤、クリームのようなペースト剤、更には、粉剤、散剤、顆粒、錠剤、カプセル剤などの固剤などを例示できる。製剤の調製に当たっては、必要に応じて、他の成分、例えば、薬効成分、生理活性物質、抗生物質、補助剤、増量剤、賦形剤、安定剤、着色剤、着香剤、保存剤、殺菌剤、静菌剤などの１種又は２種以上を併用することも随意である。

本発明のグリコシルヘスペレチンの投与量は、含量、投与経路、投与頻度、症状などによって、適宜調節することができる。通常、本発明のグリコシルヘスペレチンは、乾燥固形物換算で、成人１日当り、約０．００１乃至約１０ｇ、好適には、約０．０１乃至約５ｇ、より好適には、約０．０５乃至約１ｇの範囲で用いられる。

本発明のグリコシルヘスペレチンを各種組成物に配合する方法としては、それら各種組成物が完成するまでの工程で、例えば、混和、混捏、溶解、浸漬、浸透、散布、塗布、噴霧、注入などの公知の１種又は２種以上の方法を単独又は適宜組み合わせて用いることができる。前記各種組成物とは、例えば、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を例示できる。前記各種組成物に本発明のグリコシルヘスペレチンを配合したものは、従来品を配合したものと比べ、既述の温度範囲で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、雑味と着色はもとより、臭気が効果的に顕著に低減されている実益が奏せられる。また、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、高品質かつ安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、又は紫外線吸収剤などとして、各種化合物又は組成物に有利に利用できる。

以下、本発明のグリコシルヘスペレチンについて実験により、更に詳細に説明する。

＜実験１：粉末状グリコシルヘスペレチンの物性＞
後述する実施例１の方法において、還元剤としてのピロ亜硫酸ナトリウムを０．１、０．０９、０．０７又は０．０４％用いた以外は、実施例１の方法と同様にして４種類の粉末状グリコシルヘスペレチン（被験試料５乃至８:本発明）を調製するとともに、対照として、実施例１、３、４、及び５の方法において、還元剤を用いない以外は、それら実施例の方法と同様にして４種類の粉末状グリコシルヘスペレチン（被験試料１乃至４：従来品）を調製した。なお、被験試料１乃至４の内、被験試料１は、後述する参考例１で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンと同等品である。

（１）フルフラールの含量
被験試料１乃至８のそれぞれにつき、下記手順及び装置を用いてフルフラール含量を求めた。

＜Ａ．試料の調製＞
（ア）５０ｍＬ容共栓付三角フラスコに被験試料としての前記粉末状グリコシルヘスペレチンのいずれかを乾燥固形物換算で０．５ｇ採取する。
（イ）次いで、脱イオン水５．０ｍＬを各粉末状グリコシルヘスペレチンに加え溶解し、サロゲート物質（分析に際し、被験試料の回収率を調べるための指標）として、濃度０．００２５％のシクロヘキサノール２０μＬを加える。
（ウ）更に、塩化ナトリウムを１．５ｇ加え溶解し、ジエチルエーテル（試薬特級、和光純薬工業株式会社販売）を３ｍＬ加え、７００ｒｐｍで１０分間攪拌する。
（エ）全量を分液漏斗に移し取り、１０分間静置した後、ジエチルエーテル相を回収し、硫酸ナトリウム無水塩にて脱水後、窒素気流下、約２００μＬとなるまで濃縮する。
（オ）濃縮液１μＬを採取し、ＧＣ／ＭＳ分析装置に供する。
（カ）対照として、粉末状グリコシルヘスペレチンに代えて試薬級フルフラール（試薬特級、東京化成工業株式会社販売）を用いた以外は、被験試料と同様に、（ア）乃至（オ）の処理を行う。

＜ＧＣ／ＭＳ分析条件＞
・ＧＣ／ＭＳ分析装置：『Ｃｌａｒｕｓ ＳＱ８Ｔ ＧＣ／ＭＳ』（パーキンエルマー社製）
・カラム：ＶＦ−ＷＡＸｍｓ ［カラム長３０ ｍ×内径０．２５ ｍｍ、膜厚０．２５ μｍ］（ＡＧＩＬＥＮＴ Ｊ＆Ｗ社製）
・検出器：質量分析器
・キャリアー：ヘリウムガス
・線速度３５ｃｍ／秒
・昇温条件：４０℃で３分間保持し、４０℃〜８０℃まで５℃／分の割合で昇温し、８０℃〜２００℃まで１０℃／分の割合で昇温し、２００℃で７分間保持し、２００℃〜２２０℃まで１０℃／分の割合で昇温し、更に、２２０℃で８分間保持する。
・サロゲート物質：シクロヘキサノール（試薬一級、片山化学工業株式会社販売）
・内部標準物質：ヘンエイコサン（ＧＣ用標準物質、東京化成工業株式会社販売）
・抽出溶媒：ジエチルエーテル（試薬特級、和光純薬工業株式会社販売）

＜Ｂ．試料中のフルフラールの定量＞
ＧＣ／ＭＳ分析法で得られた、対照の試薬特級フルフラール（和光純薬株式会社販売）についての測定データを元に検量線を作成し、これに基づいて、被験試料のフルフラール含量を求めた。

（２）４−ＶＡの含量
被験試料１乃至８それぞれにつき、下記試薬、手順、及び装置を用いて４−ＶＡ含量を測定した。なお、その測定方法は、平成１８年７月２８日付、食安基発第０７２８００８号厚生労働省医薬食品局食品安全部基準審査課長通知『清涼飲料水中のベンゼンについて』に準じて行った。

＜Ａ．試薬、各種溶液の調製＞
（ア）塩化ナトリウム（水質試験用、和光純薬工業株式会社販売）
（イ）シクロヘキサノール標準原液の調製
シクロヘキサノール（試薬一級、片山化学工業株式会社販売）をメタノール（局方一般試験法用）に溶解して０．０１質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「シクロヘキサノール標準原液」と言う。）を調製した。
（ウ）内部標準液
前記シクロヘキサノール標準原液とメタノールを用いて、０．０００４質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「内部標準液１」と言う。）及び０．００００４質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「内部標準液２」と言う。）を調製した。
（エ）標準原液の調製
４−ＶＡ（和光純薬工業株式会社販売）をメタノールに溶解し、０．０００５質量％４−ＶＡ溶液（以下、「標準液Ａ」と言う。）及び０．００００５質量％４−ＶＡ溶液（以下、「標準液Ｂ」と言う。）をそれぞれ調製した。
（オ）検量線作成用標準原液の調製
前記標準液Ａ、Ｂ、前記内部標準液１、及びメタノールを用いて、４−ＶＡ濃度が０．０５、０．１、０．２、０．５又は１．０μｇ／ｍＬである５種類の検量線作成用混合標準原液を調製した。
（カ）検量線作成用標準液の調製
２０ｍＬ容ヘッドスペースバイアル５本にそれぞれ超純水を１０ｍＬ加え、更に前記５種類の検量線作成用混合標準原液のいずれかを１０μＬ加え、更に塩化ナトリウム３．０ｇを添加し、直ちに密栓し、撹拌溶解し、５種類の検量線作成用標準液を調製した。

＜Ｂ．被験試料の調製＞
２０ｍＬ容ヘッドスペースバイアル８本に被験試料１乃至８のいずれかを乾燥固形物換算で０．２０ｇ精秤し、これに超純水を加え全量を１０．０ｇとし、撹拌溶解した。得られた水溶液に前記内部標準液２を１０μＬ加え、更に塩化ナトリウムを３．０ｇ添加し、直ちに密栓し、撹拌溶解し、被験試料１乃至８のいずれかを含む８種類の被験試料を調製した。

＜Ｃ．４−ＶＡの定量方法＞
（ア）測定条件
＜ＧＣ／ＭＳ分析条件＞
・ＧＣ／ＭＳ分析装置：『Ｃｌａｒｕｓ ＳＱ８Ｔ ＧＣ／ＭＳ』（パーキンエルマー社製）
・ヘッドスペースサンプラー：『ＴｕｒｂｏＭａｔｒｉｘ Ｔｒａｐ ４０』
・カラム：ＶＦ-ＷＡＸｍｓ [カラム長３０ ｍ×内径０．２５ ｍｍ、膜厚０．２５ μｍ）（ＡＧＩＬＥＮＴ Ｊ＆Ｗ社製）
・検出器：質量分析器
・キャリアー：ヘリウムガス
・線速度：３５ｃｍ／秒
・カラム注入口温度：２００℃
・昇温条件：４０℃で３分間保持し、４０℃〜８０℃まで５℃／分の割合で昇温し、８０℃〜２００℃まで１０℃／分の割合で昇温し、２００℃で７分間保持し、２００℃〜２２０℃まで１０℃／分の割合で昇温し、更に、２２０℃で８分間保持する。
・バイアルオーブン温度：６０℃
・ニードル温度：１４０℃
・トランスファーライン温度：２０５℃
・バイアル加熱時間：３０分間
＜検出法＞
・イオン化[Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｉｍｐａｃｔ（ＥＩ）]法
・ＳＩＭ選択イオン（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｉｏｎ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）
ｍ／ｚ １３４， １１９ （４−ＶＡ）
ｍ／ｚ ８２， ５７ [シクロヘキサノール（試薬一級、片山化学工業株式会社販売）]

（イ）４−ＶＡの定量
前記８種類の被験試料及び前記５種類の検量線作成用混合標準液における４−ＶＡと内部標準（シクロヘキサノール）のピーク高さ比と、別途作成しておいた４−ＶＡの検量線とに基づき、前記被験試料における４−ＶＡ濃度を求め、それに基づいて被験試料１乃至８における４−ＶＡ含量を算出した。

（３）色調と着色度
被験試料１乃至８の水溶液それぞれにつき、色調を肉眼観察するとともに、下記手順により、着色度を求めた。すなわち、被験試料１乃至８それぞれにつき、１ｗ／ｗ％水溶液とし、その４０ｍＬを密閉容器（５０ｍＬ容）中で１００℃で３０分間加熱した後、２７℃とし、幅１ｃｍのセルに入れ、分光光度計（商品名『ＵＶ−２６００』、島津製作所製）により波長４２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ_{４２０ｎｍ}）及び波長７２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ_{７２０ｎｍ}）を測定し、両波長における吸光度の差（ＯＤ_{４２０ｎｍ}−ＯＤ_{７２０ｎｍ}）を求め、その値を着色度とした。

（４）電気伝導度
被験試料１乃至８それぞれにつき、１ｗ／ｗ％水溶液となるように純水に溶解し、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２０℃に冷却し、２０℃での電気伝導度を電気伝導度計（商品名『ＣＭ−５０ＡＴ』、東亜ディーケーケー社製）により測定した。

（５）イオン性化合物の含量
イオン性化合物を定量することは容易ではないので、簡便法として、下記手法により、陽イオン金属元素の含量を求めた。すなわち、被験試料１乃至８それぞれにつき、約０．５ｇを５０ｍＬ容器（商品名『ファルコンチューブ』、日本ベクトンディッキンソン社製）に精秤し、超純水２０ｍＬに加熱溶解し、これに精密分析用の６０ｗ／ｗ％硝酸水溶液を０．５４ｍＬ添加し、７０℃で１４時間加熱し、室温まで冷却した後、超純水にて全量を５０ｍＬとし、下記分析装置と測定条件下で金属元素含量を求めた。なお、対照は超純水のみを用いた。

＜装置及び測定条件＞
・誘導結合プラズマ発光分光分析装置：『ＣＩＲＯＳ−１２０』
（Ｓｐｅｃｔｒｏ社製）
・プラズマ電力：１，４００Ｗ
・プラズマガス（Ａｒ）：１３．０Ｌ／分
・補助ガス（Ａｒ）：１．０Ｌ／分
・ネブライザーガス（Ａｒ）：１．０Ｌ／分
・ポンプ動作：１．０ｍＬ／分
・金属元素含量（ｐｐｍ）の算出方法：
{（被験試料の測定値）−（対照の測定値）}×希釈倍率

前記（１）乃至（５）の結果を表１に示す。なお、被験試料１乃至８のグリコシルヘスペレチンの組成は、実施例１、３、４又は５に示すものと実質的に同等であることから、表１にはその記載を割愛した。

表１から明らかなとおり、被験試料１乃至４のフルフラール含量はいずれも３００ｐｐｂ超であったのに対し、被験試料５乃至８はいずれも、約１０ｐｐｂであった。また、被験試料１乃至４の４−ＶＡ含量はいずれも４０ｐｐｂ超であったのに対し、被験試料５乃至８はいずれも約２ｐｐｂ以下であった。

また、表１に示すとおり、被験試料１乃至４（対照）の水溶液の色調（肉眼観察による）は淡黄色であったが、被験試料５乃至８（本発明）の水溶液は、対照と比べ明らかに淡い色調であった。また、分光光度計による着色度は、被験試料１乃至４の水溶液の着色度はいずれも、０．２４以上であったのに対し、被験試料５乃至８の水溶液はいずれも０．２０以下と低値であった。更に、被験試料５乃至８の着色度は、用いた還元剤の量が多いものほど低値を示した。

更に、表１から明らかなとおり、被験試料１乃至４の水溶液の電気伝導度は、約１１乃至約１２μＳ／ｃｍと１０μＳ／ｃｍ超であったのに対し、被験試料５乃至８の水溶液は、約３乃至約７μＳ／ｃｍと１０μＳ／ｃｍ未満であった。

なお、表１から明らかなとおり、被験試料５乃至８の金属元素（カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム）含量はそのいずれも、被験試料１乃至４と比べ明らかに低く、この結果は、電気伝導度の測定結果とも良く整合していた。

以上の結果から、還元剤を用いて製造された本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、フルフラール含量、４−ＶＡ含量、着色度が有意に低減され、電気伝導度や金属元素含量も明らかに低減されていることが判明した。

＜実験２：官能試験＞
本発明のグリコシルヘスペレチンと従来品とを用いて、下記の官能試験を行った。

（１）官能試験の概要と被験試料の調製
本発明のグリコシルヘスペレチンの代表例として、実験１で用いた被験試料５乃至８の内、フルフラール含量、着色度、電気伝導度、及び金属元素含量のそれぞれが中間に位置する値を示した被験試料６と、従来品の代表例として、実験１で用いた被験試料１乃至４の内、フルフラール含量、着色度、電気伝導度、及び金属元素含量が最も低値を示した被験試料１を用いて、２８乃至５９歳の健常な男女８人（女性２人、男性６人）をパネルとする下記（２）に示す官能試験を行った。すなわち、従来品（被験試料１）と本発明のグリコシルヘスペレチン（被験試料６）をそれぞれ１ｗ／ｗ％水溶液となるように室温でＲＯ水（逆浸透膜を通した水）に溶解し、非加熱被験試料１、６とし、これらは下記試験に供するまで密閉容器中に保管した。また、非加熱被験試料１、６をそれぞれ、容器に入れ密閉し、沸騰水浴中で３０分間加熱し、室温まで冷却した（以下、「加熱処理」と言う。）ものを加熱被験試料１、６とした。
（２）官能試験
各パネリストに、室温に調整した、前記（１）で得た非加熱被験試料１、６（各１０ｍＬ）及び加熱被験試料１、６（各１０ｍＬ）について、試飲前に、（ａ）着色と（ｂ）臭気とを各自に評価させた。その後、各パネリストには、各被験試料を試飲する前に白湯で口を漱がせた後、（ｃ）苦味（渋み、えぐみ、収斂味を含む）、（ｄ）後味、及び（ｅ）試飲時の臭気について各自に評価させた。評価基準は下記表２（表中、「従来品」とは、「被験試料１」を意味する。）に示すとおりであり、非加熱被験試料６に対しては、非加熱被験試料１を対照とし、加熱被験試料６に対しては、加熱被験試料１を対照とし、前記（ａ）乃至（ｅ）の評価項目につき、各パネリストに評価させた。結果はそれぞれ、表３、表４に示す。

（評価基準）

（３）官能試験の結果

なお、表３、４に示す評価結果には、従来品（加熱／非加熱被験試料１：対照）自体についての（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価結果を示していないが、評価基準に示すとおり、表３及び表４に示す評価結果は、従来品を基準として本発明のグリコシルヘスペレチンを評価したものであることから、従来品の評価結果は、各評価項目につき、評価基準に示すスコア（５段階評価）で言えば、中間の「３」である。

一方、表３の評価結果から明らかなとおり、非加熱被験試料６、すなわち、加熱処理をしていない本発明のグリコシルヘスペレチンは、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の各評価項目につき、５段階評価で最高の「１」と評価したパネル数はそれぞれ、８人中、４人、３人、０人、３人、及び４人（合計１４人）であった。一方、表４の評価結果に示す加熱被験試料６、すなわち、加熱処理した本発明のグリコシルヘスペレチンは、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価項目につき、５段階評価で最高の「１」と評価したパネル数はそれぞれ、８人中、４人、５人、７人、４人、及び４人（合計２４人）であった。この結果は、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味、着色のみならず、臭気が効果的に低減された高品質のグリコシルヘスペレチンであることを示している。

同様に、表３の評価結果から明らかなとおり、非加熱被験試料６（加熱処理をしていない本発明のグリコシルヘスペレチン）は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価項目につき、５段階評価で最低の「５」及びその最低レベルより１段階高い「４」と評価したパネル数はいずれも０人（合計０人）であった。一方、表４の評価結果から明らかなとおり、加熱被験試料６（加熱処理した本発明のグリコシルヘスペレチン）は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価項目につき、５段階評価で最低の「５」及びその最低レベルより１段階高い「４」と評価したパネル数はいずれも０人（合計０人）であった。この結果は、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味、着色のみならず、臭気が効果的に低減された高品質のグリコシルヘスペレチンであることを示している。

これらの結果から、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、加熱／非加熱を問わず、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の全ての評価項目において著しく優れているとともに、その優劣の差は、加熱した場合、より顕著な差として現れることが判明した。

なお、前記実験２の「（１）被験試料の調製」に示す被験試料５、７、及び８についても実験２の「（２）官能試験」と同様の官能試験に供したところ、前記被験試料６とほぼ同等の結果が得られた。

このように、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品特有の苦味（渋み、えぐみ、収斂味を含む）と後味、つまり、雑味が有意に低減されているとともに、着色が顕著に低減されていることが判明した。更に、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、臭気も顕著に低減されていることが判明した。

＜実験３：グリコシルヘスペレチンの雑味、着色と、フルフラール及び４−ＶＡの含量との関係＞
グリコシルヘスペレチンの雑味、着色と、フルフラール及び４−ＶＡの含量との関係を調べる目的で下記の試験を行った。

（１）被験試料の調製
後述する実施例４の方法及び参考例１の方法に準じて、本発明のグリコシルヘスペレチン（以下、「試料Ａ」と言う。）と従来品（以下、「試料Ｂ」と言う。）とを調製した。次いで、便宜上、試料Ａ、Ｂを適宜割合で配合し、フルフラール含量が段階的に異なる、表５に示す３種類のグリコシルヘスペレチン試料（以下、「被験試料９乃至１１」と言う。）を調製した。

（２）フルフラール及び４−ＶＡの含量
実験１の（１）と（２）に示す測定方法にしたがって、被験試料９乃至１１のフルフラール含量と４−ＶＡ含量とをそれぞれ測定した。

（３）着色判定試験
２８乃至５７歳の健常な男女９人（女性２人、男性７人）をパネルとし、被験試料９乃至１１及び試料Ｂ（以下、「対照」と言う。）を用いて着色についての評価試験を行った。すなわち、被験試料９乃至１１及び対照をそれぞれ蒸留水に１ｗ／ｗ％水溶液となるように室温で溶解し、それらを各パネリストに肉眼観察させ、各パネリストが各被験試料につき、対照と比べ、「着色が低減されている」と評価した場合には「判定Ａ１」、「着色が低減されていない」と評価した場合には「判定Ｂ１」と判定させ、その結果を表５に示した。

（４）官能試験
前記男女９人をパネルとし、被験試料９乃至１１及び対照の雑味について官能試験を行った。すなわち、被験試料９乃至１１及び対照をそれぞれ蒸留水に１ｗ／ｗ％水溶液となるように室温で溶解し、それらを各パネリストに試飲させ、各パネリストが、各被験試料につき対照と比べ、「雑味が改善されている」と評価した場合には「判定Ａ２」、「雑味が改善されていない」と評価した場合には「判定Ｂ２」と判定させ、その結果を表５に示した。

表５の結果から明らかなとおり、グリコシルヘスペレチンの雑味は、フルフラール含量が２００ｐｐｂ近傍を境に顕著かつ有意に改善され、４−ＶＡ含量が３０ｐｐｂ近傍を境に顕著かつ有意に改善されていた。また、グリコシルヘスペレチンの着色についても同様であった。これらの結果から、フルフラール含量と４−ＶＡ含量は、雑味が有意に低減され、しかも、着色が顕著に低減されたグリコシルヘスペレチンを峻別するための指標とすることができ、フルフラール含量が２００ｐｐｂ以下、４−ＶＡ含量が３０ｐｐｂ以下であるものを峻別すれば、従来品と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色も顕著に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られることが強く示唆された。

因みに、既述の実験１の表１、後述する実施例１乃至７、及び参考例１に示された複数の粉末状グリコシルヘスペレチンの雑味と、フルフラール含量及び４−ＶＡ含量との関係について取り纏めたものを下記表６に示す。表６中、本発明のグリコシルヘスペレチンである被験試料５乃至８、及び実施例１乃至７の粉末状グリコシルヘスペレチン（以下、纏めて「本発明の被験試料」と言う。）のフルフラール含量は、１９１ｐｐｂ以下、４−ＶＡ含量は２８．７ｐｐｂ以下であり、それらはいずれも、従来品特有の雑味が有意に低減されていた。これに対し、対照１乃至５の被験試料１乃至４、及び参考例１の粉末状グリコシルヘスペレチン（以下、纏めて「対照の被験試料」と言う。）のフルフラール含量は、３０８ｐｐｂ以上、４−ＶＡ含量は４０．０ｐｐｂ以上であり、それらはいずれも、従来品特有の雑味を有していた。

上記表６に纏められた実験及び実施例、参考例の結果は、実験３の結果とよく整合し、これら一連の結果に基づき、フルフラール含量及び／又は４−ＶＡ含量を指標とし、フルフラール含量が２００ｐｐｂ未満及び／又は４−ＶＡ含量が３０ｐｐｂ未満であるものを峻別すれば、従来品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得ることができると判断される。

以上述べた実験結果から、本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されていることから、自体、雑味が有意に低減され、着色、更には臭気も顕著に低減された飲食品として極めて有用であるとともに、従来品では、その雑味のために、或いは、雑味と着色、更には臭気のために使用できないか、不可避的に品質低下を招いていた、各種飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、プラスチック製品などの用途にも不具合なく使用できることとなった。

以下、本発明を実施例及び参考例に基づいてより詳細に説明するが、本発明はそれらによって何等限定されるものではない。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、ヘスペリジン１質量部及びデキストリン（ＤＥ２０）７質量部を加え、３０分間撹拌しつつ溶解させ、ｐＨを９．０とし、これにジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（日本国〒３０５−８５６６ 茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６所在の独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３ 寄託日：１９７３年７月３０日）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り３０単位加え、ｐＨ６．９、５０℃に維持しつつ１８時間反応させ、ヘスペリジンの約７０％をα−グリコシルヘスペリジンに変換させた。次いで、得られた酵素反応液に対し、還元剤としてのピロ亜硫酸ナトリウムを０．０５％添加し、１００℃で３０分間加熱するともに、残存する酵素を加熱失活させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス社製）を酵素反応液の固形分グラム当り１００単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ５時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約７０％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン８０．０％、ヘスペリジン１２．３％、その他の成分を７．７％含有していた。

更に、本品のフルフラール含量は１２ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２ｐｐｂ、着色度は０．１９、及び電気伝導度は約６μＳ／ｃｍであった。また、本品は乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ含有していた。

本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、飼料、餌料、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、これにヘスペリジン１質量部、デキストリン（ＤＥ１０）４質量部、及び亜硫酸ナトリウム０．０６質量部を順次添加し、３０分間撹拌しつつ溶解し、０．０１規定塩酸溶液にて中和した後、直ちにジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し、攪拌しつつ、２４時間反応させた。得られた酵素反応液をサンプリングして、ＨＰＬＣで分析したところ、ヘスペリジンの約６９％が、α−グリコシルヘスペリジンに変換していた。次いで、得られた酵素反応液に還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウムを０．０３％となるように添加し、９０℃で１２０分間加熱した後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス社製）を当該中間生成物グラム当り５０単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ１０時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、糖類や塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約６８％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン７７．０％、ヘスペリジン１５．５％、その他の成分を７．５％含有していた。

本品のフルフラール含量は、１１ｐｐｂであり、４−ＶＡ含量は１．５ｐｐｂ、着色度は、０．１４、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０６ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ含有していた。

本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、これに還元剤として亜硫酸ナトリウム０．１質量部、ヘスペリジン１質量部、及びデキストリン（ＤＥ１０）４質量部を順次添加し、３０分間撹拌しつつ溶解し、これに０．０１規定塩酸溶液を加えて中和した後、直ちにジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し、攪拌しつつ、２４時間反応させたところ、ヘスペリジンの約７２％がα−グリコシルヘスペリジンに変換していた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−２０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グリコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グリコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを、固形物当り、原料のヘスペリジン質量に対して約７１％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グリコシルヘスペリジン７６．０％、ヘスペリジン１８．５％、その他の成分を５．５％含有していた。

本品のフルフラール含量は１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は３．０ｐｐｂ、着色度は０．１７、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．３ｐｐｍ、約０．０４ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．０５ｐｐｍ含有していた。

本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（抗感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、及びプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
ヘスペリジン１質量部、デキストリン（ＤＥ８）１０質量部、及び還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウム０．０５質量部を水５０質量部に添加し、ｐＨ９．５、９０℃で７０分間加熱し、次いで、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り３０単位加え、ｐＨ８．２、６５℃に維持し、攪拌しつつ、４０時間保持しつつ、この酵素反応が終了する直前に、酵素反応液に還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウムを０．０５％となるように添加し、８５℃で加熱し、酵素を失活させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス社製）を酵素反応液固形物グラム当り１００単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ５時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させた。次いで、得られた酵素反応液に、α−Ｌ−ラムノシダーゼとしてヘスペリジナーゼ（商品名『可溶性ヘスペリジナーゼ＜タナベ＞２号』、田辺製薬製）を０．５質量部を添加し、ｐＨ４に調整し、５５℃で２４時間反応させ、得られた酵素反応液にピロ亜硫酸ナトリウム０．０１質量部を添加し、加熱して酵素を失活させた後、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及び未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約７０％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン８１．９％、ヘスペリジン０．５％、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン８．９％、及びその他の成分を８．７％含有していた。

本品のフルフラール含量は９ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２．０ｐｐｂ、着色度は０．１６、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．３ｐｐｍ、約０．０３ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ、及び約０．０５ｐｐｍ含有していた。

本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（抗感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、及びプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
ヘスペリジン５０質量部と還元剤として次亜硫酸ナトリウム１質量部とを０．２５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液９０質量部に８０℃で加熱溶解し、ＤＥ８のデキストリン１５０質量部を添加し溶解し、ｐＨ９．０に調整した後、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリン１質量部当たり１５単位加え、６０℃まで加温しながらｐＨ８．３に調整し、６時間反応させた。その後、ｐＨ７．０に調整し、６８℃に加温して４０時間反応させた。酵素反応終了後、酵素を加熱失活させた後、濾過して酵素反応液を得た。酵素反応液をＨＰＬＣにより分析したところ、反応前液中のヘスペリジンの７２％がα−グルコシルヘスペリジンに変換しており、残り２８％は未反応のままであった。酵素反応液に、α−Ｌ−ラムノシダーゼとしてヘスペリジナーゼ（商品名『可溶性ヘスペリジナーゼ＜タナベ＞２号』、田辺製薬製）を２質量部を添加し、ｐＨ４に調整し、５５℃で２４時間反応させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス社製）を１質量部加え、更に５５℃で２４時間反応させた。酵素反応終了後、得られた酵素反応液を加熱して酵素を加熱失活させ、中間極性多孔性吸着樹脂（商品名『アンバーライトＸＡＤ−７』、Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ社製）を充填したカラムにかけ、カラムを水洗し、８０ｖ／ｖ％エタノール水溶液にて樹脂吸着成分を溶出した。溶出液中のエタノールを除去した後、凍結乾燥し、α−グルコシルヘスペリジンを８２．０％、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン８．０％、ヘスペリジンを１．０％、及びその他の成分を９．０％含む粉末状グリコシルヘスペレチンを得た。

本品のフルフラール含量は１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は１．５ｐｐｂ、着色度は０．１５、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０４ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．２ｐｐｍ含有していた。

本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（抗感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、及びプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
酵素反応液に対し、還元剤としてのメタ亜硫酸カリウムを０．００１％添加した以外は実施例１と同様にして、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約６９％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン７９．５％、ヘスペリジン１３．８％、その他の成分を６．７％含有していた。

本品のフルフラール含量は１８０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２０ｐｐｂ、着色度は０．２３、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．５ｐｐｍ、約０．０８ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．３ｐｐｍ含有していた。

本品は、実施例１乃至５で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンと比べると劣るものの、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、及びプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
メタ亜硫酸カリウムを亜硫酸水素ナトリウムに代えた以外は実施例６と同様にして、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを、乾燥固形物当り、原料のヘスペリジン質量に対して約６５％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン７７．２％、ヘスペリジン１６．５％、その他の成分を６．３％含有していた。

本品のフルフラール含量は１９１ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２８．７ｐｐｂ、着色度は０．２３、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．５ｐｐｍ、約０．０７ｐｐｍ、約０．０９ｐｐｍ、及び約０．４ｐｐｍ含有していた。

本品は、実施例１乃至５で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンの物性と比べると劣るものの、本品は、従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、従来品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。したがって、本品を含有させた飲食品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、又はプラスチック製品を前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存したとき、従来品を用いた場合と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているという優れた実益が奏せられる。また、本品は、従来品と同様、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食品、嗜好品、化粧品、医薬品（感受性疾患剤など）、医薬部外品、化学品、工業用原料及び資材、飼料、餌料、衣料、雑貨（日用品を含む）、及びプラスチック製品などの各種組成物に有利に利用できる。

＜グリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法＞
後述する参考例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチンに、その乾燥固形物当たり、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、又はピロ亜硫酸ナトリウムを０．０３質量％添加し、均一に撹拌し、加熱し、精製し、粉末状グリコシルヘスペレチンを得た。

本法は、参考例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチンに還元剤を添加するだけという極めて簡易な手法ではあるけれども、従来品特有の雑味を有意に低減することができる優れた利点を有している。本法により得られる粉末状グリコシルヘスペレチンは、雑味が有意に低減されているだけでなく、着色や臭気も顕著に低減されていることから、当該粉末状グリコシルヘスペレチンを各種飲食品に配合して加熱処理、或いは、溶液状態とした後、比較的長期間に亘って加熱保存した場合でも、本品に起因する雑味は言うに及ばず、着色及び臭気が効果的に顕著に低減される。

＜混合甘味料＞
異性化液糖１００質量部、砂糖２質量部、及び実施例１の方法で得た粉末状グリコシルヘスペレチン１質量部を８０℃で３０分間加熱処理してビタミンＰ強化液状混合甘味料を得た。

本品は、従来品特有の雑味、着色、臭気とが効果的に低減された、ビタミンＰ強化液状混合甘味料である。したがって、本品を用いて各種飲食品を加熱調理する場合でも、本品に起因する雑味、着色、臭気が気にならないことから、飲食物素材の風味、色調を損なうことのない利点が奏せられる。

＜ハードキャンディー＞
α，α−トレハロース（登録商標『トレハ』、株式会社林原販売）１０質量部と水２０質量部とを１５５℃の減圧下で、水分約２％以下になるまで濃縮し、次いで、１２０℃まで冷却し、これにクエン酸０．５質量部及び実施例２の方法で得た粉末状グリコシルヘスペレチン０．０１質量部及びレモン香料を適量混和し、次いで常法に従って、成形、包装してビタミンＰ強化ハードキャンディーを得た。

本品は、従来品を用いて調製したハードキャンディーとは違って、従来品特有の雑味、着色、臭気とが効果的に低減されていることから、レモン風味とハードキャンディーの透明感が損なわれることのないビタミンＰ強化ハードキャンディーである。

＜カプセル剤＞
酢酸カルシウム１水塩１０質量部、Ｌ−乳酸マグネシウム３水塩５０質量部、マルトース５７質量部、実施例３の方法で得た粉末状グリコシルヘスペレチン２０質量部及びエイコサペンタエン酸２０％含有γ−シクロデキストリン包接化合物１２質量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法に従って、ゼラチンカプセルに封入して、１カプセル当たり内容物を１５０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。

本品は、室温ないしは室温を上回る温度で比較的長期間に亘って保存した後も、本品に起因する雑味、着色、臭気の増大ないしは変化が実質的に認められない高品質の血中コレステロール低下剤、免疫賦活剤、美肌剤などとして、感受性疾患の予防剤、治療剤、健康増進用飲食物などとして有利に利用できる。

＜浴用剤＞
ＤＬ−乳酸ナトリウム２１質量部、ピルビン酸ナトウム８質量部、実施例４の方法で得た粉末状グリコシルヘスペレチン５質量、着色料、及び香料の適量と混合し、浴用剤を得た。

本品は、入浴用の湯に１００乃至１０，０００倍に希釈して用いられる。本品を用いるときには、入浴用の湯が循環式の場合でも、本品を湯に投入してから１時間以上経過した後も、投入直後と比べ、本品に起因する着色、臭気の増大ないしは変化が実質的に認められず、本品に配合された香料の香りが損なわれない、高品質の浴用剤である。

＜乳液＞
ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５質量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１質量部、ピルビン酸０．５質量部、ベヘニルアルコール０．５質量部、アボガド油１質量部、実施例１の方法で得た粉末状グリコシルヘスペレチン１質量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部、カルボキシビニルポニマー０．１質量部、及び精製水８５．３質量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌し、混合して乳液を製造した。

本品は、室温又は室温をやや上回る温度環境下で比較的長期間保存しても、本品に起因する雑味、着色、臭気の増大ないしは変化が実質的に認められず、本品に配合された香料の香りが損なわれない、高品質の乳液である。

＜ビタミンＰ強化剤＞
実施例４の方法で得た粉末状グリコシルヘスペリジン１質量部に対し、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、及びピロ亜硫酸ナトリウムから選ばれる１種又は２種以上を合計で０．０００５質量部添加し、均一に混合して、健康補助飲食物としての１５種類のビタミンＰ強化剤を得た。

本品のいずれも、室温乃至比較的高温の環境下で数十分間乃至数カ月間保存した後、緑茶、紅茶、コーヒー、ココアなどの飲料に添加して飲用しても、本品に起因する雑味、着色、臭気の増大ないしは変化が実質的に認められない、保存安定性及び熱安定性に優れたビタミンＰ強化剤である。

＜美容食品＞
実施例１乃至７で得た粉末状グリコシルヘスペレチンのいずれかを１０質量部、蔗糖３質量部、マルチトール１質量部、及びデキストリン１５質量部を撹拌混合し、スティック状の遮光・防湿性包装容器に５ｇずつ収容し、８種類の本発明の粉末状美容食品を得た。

本品は、雑味、着色、臭気が効果的に低減されているので、不快感なく日常的に経口摂取して利用することができる。本品は一日当たり、その１乃至２包を水、お茶、紅茶、コーヒーなどの各種飲料や他の飲食品に添加し、日常的に経口摂取することができる。

＜美容食品＞
実施例１４で得た１５種類のビタミンＰ強化剤のいずれかを２質量部、マルトース２質量部、精製水２０質量部、及び適量のｐＨ調製剤を混合撹拌し、ｐＨ７．２に調整し、精密濾過し、無菌容器に無菌的に充填し、１５種類の本発明の液状美容食品を得た。

本品は、雑味、着色、臭気が低減されているので、不快感なく日常的に経口摂取して利用することができる。本品を、一日当たり、５０乃至２００ｍＬ日常的に経口摂取することにより、肌を健康な状態に維持することができる。

＜参考例１＞
＜粉末状グリコシルヘスペレチン＞
従来の粉末状グリコシルヘスペレチンの製造方法として、実施例１の粉末状グリコシルヘスペレチンの製造方法において、還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウムを用いない以外は、実施例１と同様にして、粉末状グリコシルヘスペレチンを得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチンは、α−グルコシルヘスペリジン７７．０％、ヘスペリジン１５．５％、その他の成分を７．５％含有していた。

本品のフルフラール含量は３１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は４０ｐｐｂ、着色度は０．２４、及び電気伝導度は約１１μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、及び約１ｐｐｍ含有していた。

斯くして得られた粉末状グリコシルヘスペレチンの適量を水に溶解して試飲したところ、従来品特有の雑味、着色を有しており、不快な臭気も強かった。

このように、本発明で用いる還元剤を用いないで製造されたグリコシルヘスペレチンは、本発明に係るグリコシルヘスペレチンと比べ、少なくとも、雑味と着色及び臭気の点で明らかに劣っていた。

従来品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている本発明のグリコシルヘスペレチンは、従来品の製造工程におけるいずれかの工程に還元剤を添加するだけで、工業的に大量かつ安価に安定して提供できることから、従来品が適用されていた分野はもとより、従来品特有の雑味のために、或いは、雑味と着色、更には臭気のために適用が困難か支障のあった分野においても、支障なく容易に適用可能となった。このように、本発明が斯界に及ぼす影響は甚大であり、本発明の産業上の利用可能性は極めて大きい。

Claims (13)

1. α−グリコシルヘスペリジンと、ヘスペリジン及び／又は７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンを含んでなるグリコシルヘスペレチン組成物であって、グリコシルヘスペレチンを乾燥固形物当たり９０質量％以上１００質量％未満、α−グルコシルヘスペリジンを乾燥固形物当たり９０質量％以下含有し、且つ、ＧＣ／ＭＳ分析法で測定されたフルフラール含量が、乾燥固形物当たり２００ｐｐｂ未満であることを特徴とするグリコシルヘスペレチン組成物。
2. ＧＣ／ＭＳ分析法で測定された４−メトキシスチレン含量が、乾燥固形物当たり３０ｐｐｂ未満であることを特徴とする請求項１記載のグリコシルヘスペレチン組成物。
3. α−グルコシルヘスペリジンを乾燥固形物当たり６０質量％以上９０質量％以下含有することを特徴とする請求項１又は２記載のグリコシルヘスペレチン組成物。
4. １ｗ／ｗ％水溶液とし、これを密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２７℃に調整し、幅１ｃｍのセルに入れ、分光光度計により波長４２０ｎｍ及び波長７２０ｎｍにおける吸光度を測定したときの両波長における吸光度の差が０．２４未満であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載のグリコシルヘスペレチン組成物。
5. １ｗ／ｗ％水溶液とし、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２０℃としたときの電気伝導度が１０μＳ／ｃｍ未満であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載のグリコシルヘスペレチン組成物。
6. 高周波誘導結合プラズマ発光分光分析法で測定したときの組成物の固形物当たりのカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムの含量がそれぞれ１ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、０．２ｐｐｍ以下、及び０．４ｐｐｍ以下であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載のグリコシルヘスペレチン組成物。
7. （ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、
   （イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチンを生成させる工程、及び
   （ウ）生成したグリコシルヘスペレチンを採取する工程、
   を含むグリコシルヘスペレチン組成物の製造方法であって、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程において亜硫酸塩を添加して加熱することを特徴とする請求項１乃至６のいずれかに記載のグリコシルヘスペレチン組成物の製造方法。
8. 前記（イ）の工程で使用する糖転移酵素が、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ、α−グルコシダーゼ、及びα−アミラーゼから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする請求項７記載の製造方法。
9. 前記（イ）の工程で得られた酵素反応液に、更にグルコアミラーゼ及び／又はα−Ｌ−ラムノシダーゼを作用させることを特徴とする請求項７又は８記載の製造方法。
10. α−グリコシルヘスペリジンと、ヘスペリジン及び／又は７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンを含んでなるグリコシルヘスペレチン組成物と亜硫酸塩とを接触させ、加熱することにより、グリコシルヘスペレチン組成物に起因する雑味を低減させることを特徴とする、グリコシルヘスペレチン組成物を含んでなるグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法。
11. α−グリコシルヘスペリジンが、α−グルコシルヘスペリジンであることを特徴とする請求項１０記載のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法。
12. α−グリコシルヘスペリジンの含量が、グリコシルヘスペレチン組成物の乾燥固形物当たり５０質量％以上１００質量％未満であることを特徴とする請求項１０又は１１記載のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法。
13. 更に、グリコシルヘスペレチン含有物の着色も低減することを特徴とする請求項１０乃至１２のいずれかに記載のグリコシルヘスペレチン含有物の雑味低減方法。