KR102172553B1 - 글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도 - Google Patents

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아키코 야스다
히토시 미츠즈미
토시오 아리야스
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Abstract

본 발명은 종래의 글리코실헤스페레틴 함유물에 특유의 잡맛이 유의적으로 저감된 신규의 글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도를 제공하는 것을 과제로 하며, 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하지 않고, 건조고형물당, 글리코실헤스페레틴을 90질량% 이상 100질량% 미만 함유하는 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도를 제공함으로써 해결한다.

Description

글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도{GLUCOSYL HESPERIDIN, METHOD FOR MANUFACTURING SAME, AND APPLICATION FOR SAME}
본 발명은 신규의 글리코실헤스페레틴에 관한 것으로, 보다 상세하게는 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도에 관한 것이다.　또한, 상세사항은 후술하겠지만, 본 명세서에서 말하는 글리코실헤스페레틴이란, 헤스페레틴에 당류가 결합된 화합물 전반(이하 「헤스페레틴 골격을 갖는 화합물」이라 한다.)을 의미하며, 그 구체적인 예로서는 헤스페리딘, 헤스페리딘의 루티노오스를 구성하는 람노오스기가 이탈된 구조를 갖는 7-O-β-글루코실헤스페레틴, 및 헤스페리딘에 당류(예를 들면, D-글루코오스, D-프룩토오스 또는 D-갈락토오스 등의 당류)가 등몰 이상 α-결합된 α-글리코실헤스페리딘 등을 들 수 있다.
비타민류 중, 비타민 P는 생체 내에서 비타민 C의 생리 작용, 예를 들면, 생체 결합 조직의 주성분인 콜라겐의 합성에 필요한 프롤린이나 라이신의 하이드록실화 반응에 관여하고 있음과 동시에, 시토크롬(cytochrome) C의 Fe+++를 환원하여 Fe++로 하는 등의 산화환원반응에 관여하고, 나아가 백혈구 증가로 인한 면역증강작용에 관여하고 있는 것으로 알려져 있으며, 생체의 건강유지, 증진에도 중요한 역할을 담당하고 있는 것으로 알려져 있다.
비타민 P로 알려진 헤스페리딘은 람노오스와 글루코오스로 이루어진 루티노오스가 헤스페레틴에 결합된 구조를 갖는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물이며, 감귤류의 껍질 등에 다량 함유되어 있는 플라보노이드의 일종으로, 모세혈관 강화, 출혈 예방, 혈압 조절 등의 생리 기능을 갖는 비타민 P로서 오래전부터 알려져, 음식품, 화장품, 의약품 등에 널리 이용되고 있다.
화학식　1 :
Figure 112016091894079-pct00001
헤스페리딘의 용도로서는, 단순히 영양소로서의 비타민 P 강화제에 그치지 않고, 그 화학구조, 생리작용 때문에, 그 단독으로 또는 다른 비타민류 등과 병용하여, 예를 들면 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 자외선 흡수제 등으로서 각종 음식품에 이용되며, 또한, 헤스페리딘에 감수성이 있는 바이러스성 질환, 세균성 질환, 순환기 질환, 악성 종양 등의 질환의 예방제, 치료제, 즉 헤스페리딘 감수성 질환제로서 의약품에 이용되며, 나아가 안정제, 산화방지제, 자외선 흡수제, 멜라닌 생성억제제 등으로서 피부 미용제, 미백제, 안티에이징제 등의 화장품에까지 이용되는 등, 그 용도 범위는 매우 넓다.
그러나, 헤스페리딘은 물에 잘 녹지 않으며, 실온에서는 50L의 물에 불과 1g 정도(약 0.002w/v%) 밖에 녹지 않아, 사용상 어려움이 많았다.
이를 개선하기 위한 방법으로서, 예를 들면, 특허문헌 1에는 헤스페리딘과 전분 부분 분해물을 함유하는 용액에 당전이효소를 작용시킴으로써, 수용성이 높고, 독성의 염려도 없으며, 생체 내에서 쉽게 가수분해되어 헤스페리딘 본래의 생리기능을 발휘하는 α-글리코실헤스페리딘과 그 제조방법이 개시되어 있다.
α-글리코실헤스페리딘의 대표적인 예인 α-글루코실헤스페리딘(일명 : 효소처리 헤스페리딘, 당전이 헤스페리딘, 수용성 헤스페리딘 또는 당전이 비타민 P)은 헤스페리딘의 루티노오스 구조에서의 글루코오스에 글루코오스가 1분자 α-결합된, 하기 화학식 2로 표시되는 화합물이며, 이를 주성분으로 함유하는 제품으로서, 예를 들어, 당전이 헤스페리딘(상품명『하야시바라 헤스페리딘(등록상표) S』, 주식회사 하야시바라 판매)이 시판되고 있다.
화학식 2 :
Figure 112016091894079-pct00002
또한, 종래의 α-글리코실헤스페리딘 함유물 중에는 그 제조원료인 헤스페리딘이 잔존하고, 이것이 α-글리코실헤스페리딘의 수용성 저하의 원인이 되는 것으로 알려져, 이를 개선하기 위한 시도로서, 헤스페리딘의 루티노오스 구조를 구성하는 람노오스기를 이탈시킴으로써, 헤스페리딘을 수용성이 매우 높은, 하기 화학식 3으로 표시되는 7-O-β-글루코실헤스페레틴으로 변환시키는 것이 알려져 있다.　예를 들면, 특허문헌 2에는 고농도의 α-글루코실헤스페리딘과 함께 헤스페리딘을 함유하는 용액에 α-L-람노시다아제(EC 3.2.1.40)를 작용시켜 헤스페리딘을 7-O-β-글루코실헤스페레틴으로 변환하고, 잔존하는 헤스페리딘 함량을 저감시켜 수용성을 향상시킨 α-글루코실헤스페리딘 고함유물을 제조하는 방법이 개시되어 있다.
화학식 3 :　
Figure 112016091894079-pct00003
그러나, 종래의 헤스페리딘, α-글루코실헤스페리딘, 7-O-β-글루코실헤스페레틴 등의 이른바 글리코실헤스페레틴을 함유하는 글리코실헤스페레틴 함유물(이하, 단순히 「종래품」이라 하는 경우가 있다.)은 특유의 쓴 맛(떫은 맛, 아린 맛, 수렴맛을 포함)과 바람직하지 않은 뒷맛, 즉 잡맛을 가지고 있어, 종래, 이 결점을 개선하는 수단으로서, 예를 들면, 특허문헌 3에는 글리코실헤스페레틴인 α-글리코실헤스페리딘(일명 : 수용성 헤스페리딘)을 포함하는 음료에 사과산을 첨가하는 방법이 개시되어 있다.
그러나, 오늘에 이르러서도, 종래품 특유의 잡맛이 충분히 만족할 수 있을 때까지 개선된 글리코실헤스페레틴 제품은 아직 제공되고 있지 않다.
일본특허 제3060227호 공보 일본특허 제3833811호 공보 일본특허공개 2011-126849호 공보
본 발명은 상기 단점을 해소하기 위해 이루어진 것으로, 종래품에 비해, 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴과 그 제조방법 및 용도를 제공하는 것을 과제로 한다.
본 발명자들은 종래품의 단점이었던 잡맛에 착안하여, 이 단점을 해소하는 것을 과제로 하여 예의 연구 노력을 거듭하였다.　즉, 본 발명자들은 그 과정에서, 종래품의 잡맛은 그 제조원료 중에 잡맛의 원인이 되는 물질(이하, 단순히 「잡맛의 원인물질」로 약기하는 경우가 있다.)이 본래 포함되어 있거나, 그 제조공정에서 잡맛의 원인물질이 생성되기 때문은 아닌가라는 가설을 세웠다.　이 가설을 토대로, 본 발명자들은 종래품에서의 잡맛을 저감하는 수단에 대해 여러 가지 검토한 결과, 글리코실헤스페레틴의 제조공정에서 환원제를 공존시키면, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있음을 새롭게 발견하였다.　또한, 본 발명자들은 이러한 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있음을 새롭게 발견하였다.　또한, 본 발명자들은 이렇게 하여 얻어진 글리코실헤스페레틴의 제특성에 대해, 종래품의 그것과 상세히 비교검토한 결과, (가) 양자는 모두 글리코실헤스페레틴을 주성분으로 하는 것이지만, 미량 성분인 방향족 알데히드의 일종인 퍼퓨랄(furfural)(IUPAC 명명법에서 말하는 2-퓨란카르복시알데히드)의 함량에 차이가 있는 점, (나) 잡맛이 유의적으로 저감된 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 퍼퓨랄 함량이 유의적으로 낮은 점, 다시 말하면 종래품에 비해 퍼퓨랄 함량이 유의적으로 낮은 것은 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴임을 발견하였다.　본 발명자들은 이러한 지견에 기초하여, 퍼퓨랄 함량은 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻기 위한 지표가 될 수 있음을 새롭게 발견하였다.
본 발명자들은 상기 일련의 지견에 기초하여, 종래품의 단점이었던 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻기 위한 지표로서, 당해 글리코실헤스페레틴 중에 포함되는 퍼퓨랄에 주목하여, 이 퍼퓨랄 함량이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻기 위한 수단으로서, 환원제를 그 제조공정에서 사용함으로써, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻고, 그 제조방법 및 용도를 확립하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하지 않는 글리코실헤스페레틴을 제공함으로써 상기의 과제를 해결하는 것이다.　본 명세서에서 말하는 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하지 않는다는 것은, 종래품에 비해 퍼퓨랄 함량이 유의적으로 낮은 레벨인 글리코실헤스페레틴을 의미한다.　구체적으로는, 후술하는 실험 1의 「(1) 퍼퓨랄의 함량」에 나타내는 가스크로마토그래프 질량(GC/MS) 분석장치를 사용한 분석수법(이하,「GC/MS 분석법」이라고 약기한다.)에 의해 측정했을 때, 통상적으로, 200ppb(또한, 1ppb는 10억분의 1) 미만, 바람직하게는 100ppb 미만, 보다 바람직하게는 50ppb 미만, 더 바람직하게는 30ppb 미만, 보다 더 바람직하게는 20ppb 미만, 특히 바람직하게는 15ppb 미만, 더 특히 가장 바람직하게는 10ppb 미만인 것을 의미한다.　또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 중, 퍼퓨랄 함량이 GC/MS 분석법의 검출한계를 밑돌 때까지 저감된 것은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색도 현저하게 저감된 매우 고품질의 글리코실헤스페레틴이다.　그러나, 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 의약, 정밀기기 등의 분야에서 이용하는 경우는 별개로 하고, 반드시 최고순도의 글리코실헤스페레틴을 사용하는 것이 요구되는 것은 아닌, 음식품, 기호품, 화장품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품 등의 분야에서 이용하는 경우에는 반드시 최고순도의 글리코실헤스페레틴일 필요는 없으므로, 반드시 퍼퓨랄 함량이 검출한계 이하의 레벨로까지 저감되어 있는 것일 필요성이나 퍼퓨랄 불포함의 것일 필요성은 없다.　따라서, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하고 있지 않으면 되며, 본 발명의 소기의 목적을 달성할 수 있는 한, 종래품에 비해 유의적으로 적은 양 또는 검출한계 이하의 퍼퓨랄을 함유하고 있어도 좋다.
또한, 본 발명은 (가) 헤스페리딘 및 전분 부분 분해물을 함유하는 수용액을 조제하는 공정, (나) 얻어진 수용액에 당전이효소를 작용시켜 α-글루코실헤스페리딘을 포함하는 글리코실헤스페레틴을 생성시키는 공정, 및 (다) 생성된 글리코실헤스페레틴을 채취하는 공정을 포함하는 글리코실헤스페레틴의 제조방법으로서, 상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정을 환원제의 존재하에서 실시하거나, 상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정 전의 시발원료 및/또는 공정 후의 결과물에 환원제를 첨가하는 글리코실헤스페레틴의 제조방법을 제공함으로써, 상기의 과제를 해결하는 것이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 포함하여 이루어지는, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품, 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 제공함으로써 상기의 과제를 해결하는 것이다.
또한, 본 발명은 글리코실헤스페레틴 함유물과 환원제를 접촉시키는 것을 특징으로 하는, 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법을 제공함으로써 상기의 과제를 해결하는 것이다.
본 발명에 따른 글리코실헤스페레틴은 종래품과는 달리 잡맛이 유의적으로 저감되어 있다는 뛰어난 특징을 가지고 있다.　또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조방법 또는 본 발명의 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법에 따르면, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 공업적으로 대량으로 안정적으로 고수율로, 게다가 쉽고 저렴하게 제공할 수 있는 뛰어난 실익이 얻어진다.　따라서, 본 발명의 글리코실헤스페레틴에 따르면, 종래품이 그 잡맛 때문에, 혹은 잡맛과 착색, 나아가 냄새 때문에 사용이 어렵거나 지장이 있었던 물품에도 바람직하게 사용될 수 있다.　게다가, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해, 가열된 경우에도 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있기 때문에, 가열공정을 거쳐 제조되는 물품이라도, 보다 고품질의 것을 제공할 수 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.
이하, 본 발명의 실시형태에 대해 설명하는데, 이는 본 발명을 실시함에 있어서 어디까지나 바람직한 양태의 예시이며, 본 발명은 이들 실시양태에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 글리코실헤스페레틴은 글리코실헤스페레틴을 주성분으로 하는 것인 점에서 종래품과 공통점이 있지만, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 신규의 글리코실헤스페레틴이다.
즉, 본 발명에서 말하는 글리코실헤스페레틴이란, 헤스페레틴 골격을 갖는 화합물인 (1) α-글리코실헤스페리딘(α-글루코실헤스페리딘 등) 및 (2) 헤스페리딘 및 7-O-β-글루코실헤스페레틴 중 한쪽 또는 양쪽을 주성분으로 포함하는 조성물, 즉, 글리코실헤스페레틴 혼합물을 의미하며, 그 외에, 그 제조원료에서 유래하거나 그 제조과정에서 부차적으로 생성되는 것으로 생각되는 (3) 나리루틴(Narirutin), 디오스민, 네오폰시린(Neoponcirin), 글루코실 나리루틴 등의 플라보노이드, 및 (4) 염류 등의 미량성분을 포함하는 것이다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 상기 (1) 및 (2) 성분의 합계 비율(질량%)(이하, 특별히 언급이 없는 한, 단순히 「글리코실헤스페레틴 함량」이라고 한다.)은 통상적으로 건조고형물당 90질량% 이상 100질량% 미만, 바람직하게는 93질량% 이상 100질량% 미만, 보다 바람직하게는 95질량% 이상 100질량% 미만, 나아가서는 97질량% 이상 100질량% 미만, 98질량% 이상 100질량% 미만(이하, 본원 명세서에서는 특별히 언급하지 않는 한, 「질량%」를 「%」로 약기한다.)이다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴을, 의약, 정밀기기 등의 분야에서 이용하는 경우는 별개로 하고, 최고순도의 글리코실헤스페레틴이 반드시 요구되는 것은 아닌, 즉 비교적 저순도의 글리코실헤스페레틴일지라도 특별한 지장을 일으키지 않는 음식품, 기호품, 화장품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품 등의 분야에서 이용할 경우에는 그들 최종형태를 감안하면서, 그들 물품을 보다 저렴하게 제공하기 위해, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 순도, 즉 건조고형물당 글리코실헤스페레틴 함량의 상한은 통상, 공업적으로 비교적 대량으로 저렴하고 쉽게 제공될 수 있는 99%, 보다 저렴하게 제공하기 위해서는 98%, 더욱 보다 저렴하게 제공하기 위해서는 97% 이하로까지 낮은 함량의 것이어도 좋다. 그러나, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 건조고형물당 글리코실헤스페레틴 함량이 낮은 경우에는 고함량의 것에 비해 필연적으로 다량 사용되게 되며, 그 결과, 조작이 번잡해지며 취급성이 나빠지기 때문에, 글리코실헤스페레틴 함량의 하한은 통상 90% 이상, 바람직하게는 93% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97 질량% 이상으로 하는 것이 바람직하다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴의 바람직한 실시양태로서, 글리코실헤스페레틴이 α-글루코실헤스페리딘 등의 α-글리코실헤스페리딘일 경우, 건조고형물당 α-글리코실헤스페리딘 함량이 50% 이상 100% 미만인 것을 예시할 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 α-글루코실헤스페리딘의 공급원으로서 제공할 경우, 본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 α-글루코실헤스페리딘 함량의 상한은 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 보다 저렴하게 제공하는 경우에는 통상 공업적으로 비교적 대량으로 저렴하고 쉽게 제공될 수 있는 90% 이하, 보다 저렴하게는 85% 이하, 더욱 보다 저렴하게는 80% 이하의 낮은 함량의 것이어도 좋다.　또한, α-글루코실헤스페리딘 함량의 하한은 상기 글리코실헤스페레틴 함량과 마찬가지의 이유로, 통상 60% 이상, 65% 이상 또는 70% 이상으로 하는 것이 바람직하다.　특히, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 바람직한 실시양태로서, 건조고형물당 α-글루코실헤스페리딘을 60 내지 90% 함유하는 것을 예시할 수 있다.
이상에서 설명한 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 글리코실헤스페레틴 함량은 이 분야에서 범용적인 측정기기를 사용하여 구할 수 있다.　그 일례를 나타내면, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 일부를 샘플링하고, 정제수에 의해 예를 들면 0.1w/w%로 희석 또는 용해하여, 시판하는 0.45μm 멤브레인 필터에 의해 여과한 후, 여액을 하기의 조건에 따른 고속 액체크로마토그래피(이하 「HPLC」라고 한다.) 분석에 제공하여, 시약 헤스페리딘(와코순약공업주식회사 판매)을 표준물질로 사용하고, UV 280nm에서의 크로마토그램에 출현한 각 피크의 면적과 각 피크에 대응하는 헤스페리딘, α-글리코실헤스페리딘(α-글루코실헤스페리딘 등) 및 7-O-β-글루코실헤스페레틴 등의 각 글리코실헤스페레틴의 분자량에 기초하여 산출한다.　글리코실헤스페레틴의 정량의 개요를 나타내면, 다음과 같다.
<HPLC 분석조건>　
·HPLC장치 : 『LC-20AD』(주식회사 시마즈제작소제)
·디개서 :『DGU-20A3』(주식회사 시마즈제작소제)
·칼럼 :『CAPCELL PAK C18 UG 120』(주식회사 시세이도제)
·샘플주입량 : 10μ1
·용리액 : 물/아세토니트릴/아세트산(80/20/0.01(용적비))
·유속 : 0.7m1/분
·온도 : 40℃
·검출 : UV 검출기『SPD-20A』(주식회사 시마즈제작소제)
·측정파장 : 280nm
·데이터 처리장치 :『크로마토 팩 C-R7A』(주식회사 시마즈제작소제)
<글리코실헤스페레틴의 정량>　
(1) 헤스페리딘 함량 : HPLC로 분석하여, 그 피크면적과 소정 농도의 표준물질인 시약 헤스페리딘(와코순약공업주식회사 판매)의 피크면적과의 비에 기초하여 산출한다.　
(2) α-글루코실헤스페리딘 함량 : HPLC로 분석하여, 그 피크면적과 소정 농도의 표준물질인 시약 헤스페리딘(와코순약공업주식회사 판매)의 피크면적과의 비와, α-글루코실헤스페리딘과 헤스페리딘의 분자량비에 기초하여 산출한다.　
(3) 7-O-β-글루코실헤스페레틴 함량 : HPLC로 분석하여, 그 피크면적과 소정 농도의 표준물질인 시약 헤스페리딘(와코순약공업주식회사 판매)의 피크면적과의 비와, 7-O-β-글루코실헤스페레틴과 헤스페리딘의 분자량비에 기초하여 산출한다.　
(4) 기타 글리코실헤스페레틴 함량 : HPLC로 분석하여, 그 피크면적과 소정 농도의 표준물질인 시약 헤스페리딘(와코순약공업주식회사 판매)의 피크면적과의 비와, 기타 글리코실헤스페레틴과 헤스페리딘과의 분자량비에 기초하여 산출한다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 건조고형물당 글리코실헤스페레틴 함량이란, 시료로서 사용한 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 무수물 환산으로의 질량에 대한, 상기 (1) 내지 (4)에서 구한 총 글리코실헤스페레틴 함량의 비율(%)을 의미한다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴으로서, 퍼퓨랄 함량을 지표로 하여 얻어진, 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하지 않는 글리코실헤스페레틴이다.　바꿔 말하면, 본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 퍼퓨랄 함량은 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻기 위한 지표이며, 본 명세서에는 이 퍼퓨랄 함량을 지표로 하여 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 제조하는 방법을 개시하고 있다.　말할 것도 없이, 퍼퓨랄 함량이 낮은 것일수록 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴이다.
또한, 본 발명자들은 본 발명의 글리코실헤스페레틴에 대해 여러 가지 검토하는 과정에서, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 중, 퍼퓨랄을 실질적으로 포함하지 않음과 동시에, 페놀에테르의 일종인 4-비닐아니솔(일명 : 4-메톡시스티렌)(이하, 「4-VA」라고 약기한다.)을 실질적으로 포함하지 않는 것은 본 발명의 글리코실헤스페레틴 중에서도 잡맛은 물론, 착색도 현저하게 저감되어 있는 것을 발견하였다.　4-VA는 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조 원료에 기인하여 생성되는 것으로 추정되는 성분이며, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 중의 함량은 통상적으로 건조고형물당 30ppb 미만이며, 4-VA 함량은 퍼퓨랄 함량이 200ppb 미만인 것에 있어서는 통상적으로 퍼퓨랄 함량과 평행 관계에 있다.　또한, 4-VA를 실질적으로 포함하지 않는다란, 퍼퓨랄의 경우와 마찬가지로, 종래품에 비해 4-VA 함량이 유의적으로 낮은 레벨인 것을 의미한다.　보다 구체적으로는, 본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 4-VA 함량은 후술하는 실험 1의 「(2) 4-VA 함량」에 나타내는 GC/MS 분석장치를 사용한 분석수법에 의해 측정했을 때, 통상 건조고형물당 30ppb 미만, 바람직하게는 15ppb 미만, 보다 바람직하게는 10ppb 미만, 더욱 바람직하게는 5ppb 미만, 보다 더욱 바람직하게는 3ppb 미만, 더 더욱 바람직하게는 2ppb 미만인 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품의 단점이었던, 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 뛰어난 특징을 가지고 있다.　즉, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 자체가 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있을 뿐만 아니라, 이를 수용액으로 하여 가열한 경우에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 뛰어난 특징을 가지고 있다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴의 잡맛은 후술하는 「실험 2 : 관능시험」에 나타내는 패널을 사용한 관능시험에 의해 조사할 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해, 착색(이하 「착색도」라고 하는 경우가 있다.)도 현저하게 저감되어 있는 뛰어난 특징을 가지고 있다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴의 착색도는 후술하는 실험 1의 「(2) 색조와 착색도」에 나타내는 방법에 의해 측정되며, 그 개요를 나타내면 하기와 같다.　즉, 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 소정 농도 함유하는 수용액을 밀폐용기 중에서 가열처리한 후, 처리액의 색조를 육안으로 관찰함과 동시에, 분광광도계에 의해 파장 420nm에서의 흡광도(OD420nm)　및 파장 720nm에서의 흡광도(OD720nm)를 측정하고, 양 파장에서의 흡광도의 차이(OD420nm- OD720nm)를 구하여, 그 측정값을 착색도로 한다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴의 바람직한 양태로서는 상기 흡광도의 차이가 0.24 미만, 바람직하게는 0.20 이하, 보다 바람직하게는 0.17 이하, 더욱 보다 바람직하게는 0이상 0.15 이하인 것을 예시할 수 있다.　또한, 본 측정법에 있어서, 당해 글리코실헤스페레틴의 수용액을 가열하는 것은 종래품이 가열에 의해 착색도가 현저하게 증대되는 단점이 있었던 것을 감안하여, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 자체의 착색 및 가열에 의한 착색의 정도를 확실도 좋게 평가할 목적으로 설정된 것이다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 바람직한 양태로서, 1w/w% 수용액으로 하여, 밀폐용기 중에서 100℃에서 30분간 가열한 후, 냉각하고, 20℃로 했을 때의 전기전도도가 10μS/cm 미만, 바람직하게는 8μS/cm 미만, 보다 바람직하게는 6μS/cm 미만, 보다 더욱 바람직하게는 0μS/cm 초과 4.5μS/cm 미만인 글리코실헤스페레틴을 예시할 수 있다.　전기전도도는 일반적으로 사용되는 전기전도도계에 의해 측정할 수 있다.　종래품은 통상적으로 10μS/cm 초과의 전기전도도를 나타내기 때문에, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 이온성 화합물 함량이 적은 특징을 가지고 있다.　또한, 본 측정법에서, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 수용액을 가열하는 이유는 상기 착색도의 거동을 감안하여 설정된 것이다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 바람직한 양태로서, 당해 글리코실헤스페레틴의 전기전도도를 좌우하는 이온성 화합물인, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 함량이 종래품에 비해 낮은 것을 예시할 수 있다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴에서의 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 함량은 예를 들면 이 분야에서 범용적인 고주파 유도결합 플라즈마 발광 분광분석법으로 측정할 수 있다.　본 발명의 글리코실헤스페레틴으로서, 상기 분석법으로 측정했을 때, 당해 글리코실헤스페레틴의 건조고형물당 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 함량이 각각 1ppm 이하, 0.1ppm 이하, 0.2ppm 이하 및 0.4ppm 이하인 것을 예시할 수 있다.　보다 바람직하게는 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 함량이 각각 0.6ppm 이하, 0.06ppm 이하, 0.1ppm 이하 및 0.3ppm 이하인 것을 예시할 수 있다. 더욱 바람직하게는 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 함량이 각각 0ppm 이상 0.5ppm 이하, 0ppm 이상 0.05ppm 이하, 0ppm 이상 0.08ppm 이하, 및 0ppm 이상 0.2ppm 이하인 것을 예시할 수 있다.
이와 같이, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 전기전도도가 저감되어, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 등의 금속원소(금속이온)의 농도가 저감되어 있기 때문에, 염류 혹은 기타 이온성 성분 등의 생리학적 허용성의 이온성 화합물 함량이 저감되어 있다고 판단된다.
다음으로, 본 발명에 따른 글리코실헤스페레틴의 제조방법 및 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법에 대해 순차적으로 설명한다.
본 발명의 제조방법은 (가) 헤스페리딘 및 전분 부분 분해물을 함유하는 수용액을 조제하는 공정, (나) 얻어진 수용액에 당전이효소를 작용시켜, α-글루코실헤스페리딘을 포함하는 글리코실헤스페레틴을 생성시키는 공정, 및 (다) 생성된 글리코실헤스페레틴을 채취하는 공정을 포함하는 글리코실헤스페레틴의 제조방법으로서, 상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정을 환원제의 존재하에서 실시하거나, 상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정 전의 시발원료 및/또는 공정 후의 결과물에 환원제를 첨가함으로써 글리코실헤스페레틴을 제조하는 방법이다. 이하, 당해 제조방법에서 사용하는 제조원료, 효소반응(당전이반응 등), 환원제 처리, 및 정제방법에 대해 순서대로 설명한다.
(제조원료)　
제조원료인 헤스페리딘으로서는 종래품의 제조에서 사용되는 헤스페리딘의 어느 것이나 사용할 수 있으며, 고순도의 헤스페리딘은 물론, 비교적 저순도의 헤스페리딘 함유 식물 유래의 추출물, 착즙액, 또는 그 부분 정제물 등의 1종 또는 2종 이상을 적절히 조합하여 사용할 수 있다.　상기 헤스페리딘 함유 식물로서는 예를 들면 귤류, 오렌지류, 향산감귤류, 잡종 감귤류, 탄골(Tangor)류, 탄제로(Tangelo)류, 문단류, 금귤류, 등자류 등의 귤과 귤속에 속하는 감귤류를 예시할 수 있으며, 헤스페리딘 함유 부위로서는 그들의 과실, 과피, 씨앗, 미숙과 등을 예시할 수 있다.
제조원료의 전분 부분 분해물로서는 후술하는 당전이효소를 작용시켰을 때 헤스페리딘으로 당전이하고, 글리코실헤스페레틴인 α-글리코실헤스페리딘을 생성할 수 있는 것이면 되며, 예를 들면 아밀로오스, 덱스트린, 시클로덱스트린, 말토 올리고당 등의 전분 부분 분해물, 나아가 액화 전분, 호화 전분 등으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 전분 부분 분해물이 적절하게 선택된다.
또한, 후술하는 효소반응에서 사용하는 전분 부분 분해물의 사용량은 원료인 헤스페리딘의 질량에 대해 통상적으로 약 0.1 내지 약 150배, 바람직하게는 약 1 내지 약 100배, 보다 바람직하게는 약 2 내지 약 50배의 범위에서 선택되는 양이 사용된다.　효소반응에서는 전분 부분 분해물 유래의 당을 헤스페리딘으로 당전이시켜 α-글리코실헤스페리딘을 효율적으로 생성시키고, 게다가 효소반응계에 미반응 헤스페리딘이 가능한 잔존하지 않도록, 헤스페리딘에 대해 과도한 양의 전분 부분 분해물을 사용하는 것이 바람직하다.　이유는 후술하는 정제공정에서 전분 부분 분해물 및 이에 유래하는 당류 등은 α-글리코실헤스페리딘과 비교적 쉽게 분리할 수 있는 것에 반해, 헤스페리딘은 α-글리코실헤스페리딘과 거동을 함께 하여 α-글리코실헤스페리딘과 잘 분리되지 않기 때문에, 수용성이 매우 낮은 미반응의 헤스페리딘의 잔존량이 많으면, 전체적으로 얻어지는 글리코실헤스페레틴의 수용성이 낮아지는 단점이 생기기 때문이다.
(효소반응)
본 발명에서 말하는 효소반응이란, 상기 제조원료인 헤스페리딘과 전분 부분 분해물에 당전이효소를 작용시켜 α-글리코실헤스페리딘을 생성시키는 효소반응을 의미한다.
효소반응에서 사용하는 당전이효소로서는 α-글루코시다아제(EC 3.2.1.20), 시클로말토덱스트린·글루카노트란스페라아제(EC 2.4.1.19, 이하 「CGTase」라고 한다.), α-아밀라아제(EC 3.2.1.1) 등을 예시할 수 있다. α-글루코시다아제로서는 돼지의 간, 메밀 씨앗 등의 동식물 조직 유래의 효소, 또는, 무코르(Mucor)속, 페니실리움(Penicillium)속, 아스페르길루스·니거(Aspergillus niger) 등의 아스페르길루스(Aspergillus)속 등에 속하는 곰팡이 배양물 유래의 것, 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)속 등에 속하는 효모 등의 미생물을 영양배지에서 배양하여 얻어지는 배양물 유래의 것을 예시할 수 있으며, CGTase로서는 예를 들면 바실러스(Bacillus)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 클레브시엘라(Klebsiella)속, 파에니바실러스(Paenibacillus)속, 서모코커스(Thermococcus)속, 서보아나에로박터(Thermoanaerobacter)속, 브레비박테리움(Brevibacterium)속, 파이로코커스(Pyrococcus)속, 브레비바실러스(Brevibacillus)속 및 사카로마이세스(Saccharomyces)속 유래의 것을 예시할 수 있다. α-아밀라아제로서는 지오바실러스속 등에 속하는 세균, 또는, 아스페르길루스·니거(Aspergillus niger) 등의 아스페르길루스(Aspergillus)속 등에 속하는 곰팡이 배양물 유래의 1종 또는 2종 이상을 적절히 조합하여 사용할 수 있다. 이들 당전이효소는 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 한, 천연 또는 유전자 재조합형 중 어느 것이라도 채용할 수 있으며, 시판품이 있는 경우에는 그들도 적절히 사용할 수 있다. 또한, 상기 당전이효소 모두는 반드시 정제하여 사용할 필요는 없고, 통상, 조효소(crude enzyme)일지라도, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 한 어느 것이나 사용할 수 있다.
또한, 상기 천연 또는 유전자 재조합형의 당전이효소를 사용할 때, 그들 당전이효소에 바람직한 전분 부분 분해물을 채용함으로써, α-글리코실헤스페리딘의 생성률을 높일 수 있다.
상기 α-글루코시다아제를 사용할 경우에는 말토오스, 말토트리오스, 말토테트라오스 등의 말토 올리고당, 또는 덱스트로오스 당량(DE : Dextrose equivalent) 약 10 내지 약 70의 전분 부분 분해물이 바람직하게 사용되며, CGTase를 사용할 경우에는 α-, β- 또는 γ-시클로덱스트린 또는 DE1 이하의 전분 호화물로부터 DE 약 60의 전분 부분 분해물이 바람직하게 사용되고, 게다가 α-아밀라아제를 사용할 경우에는 DE1 이하의 전분 호화물로부터 DE 약30의 덱스트린 등의 전분 부분 분해물이 바람직하게 사용된다.
효소반응시의 헤스페리딘 함유용액으로서는 헤스페리딘을 가능한 고농도로 함유하는 것이 바람직하며, 예를 들어, 헤스페리딘을 현탁상이나, 물 등의 용매에 고온에서 용해시키거나 혹은 알칼리제를 사용하여 pH 7.0을 초과하는 알칼리측 pH에서 용해시킨 용액상으로 헤스페리딘을 고농도로 함유하는 용액이 바람직하게 사용된다. 알칼리제로서는 약 0.1 내지 약 1.0 규정의 수산화나트륨 수용액, 수산화칼륨 수용액, 탄산나트륨 수용액, 수산화칼슘 수용액, 암모니아수 등의 1종 또는 2종 이상의 강알칼리성 수용액을 적절하게 사용할 수 있다.
헤스페리딘을 알칼리제를 사용하여 용액상으로 사용하는 경우의 헤스페리딘 농도는 통상 약 0.005w/v% 이상, 바람직하게는 약 0.05 내지 10w/v%, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 약 10w/v%, 보다 더욱 바람직하게는 약 1 내지 약 10w/v%이다.
한편, 헤스페리딘을 알칼리제를 사용하지 않고 현탁상으로 이용할 경우에는 헤스페리딘을 물 등의 용매에 현탁하여 현탁상 헤스페리딘으로 하고, 그 때의 헤스페리딘 농도는 통상 약 0.1 내지 약 2w/v%, 보다 바람직하게는 약 0.2 내지 약 2w/v%, 보다 바람직하게는 약 0.3 내지 약 2w/v%로 한다.
헤스페리딘과 전분 부분 분해물에 당전이효소를 작용시킬 때의 온도와 시간은 효소반응에서 사용하는 헤스페리딘과 전분 부분 분해물의 농도, 및 당전이효소의 종류, 최적 온도, 최적 pH, 혹은 작용량 등에 의존하여 달라지지만, 통상 약 50 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 60 내지 약 90℃, 보다 바람직하게는 약 70 내지 약 90℃, 및 약 5 내지 약 100시간, 바람직하게는 약 10 내지 약 80시간, 보다 바람직하게는 약 20 내지 약 70시간의 범위로 한다.
또한, 당전이효소를 헤스페리딘을 고농도로 함유하는 알칼리성 용액에 작용시킬 때의 pH와 온도는 당전이효소의 종류, 최적 pH, 최적 온도, 혹은 작용량, 및 헤스페리딘의 농도 등에 의존하여 달라지지만, 당전이효소가 작용할 수 있는 가능한 높은 pH, 고온, 구체적으로는 pH 약 7.5 내지 약 10, 바람직하게는 pH 약 8 내지 약 10, 및 pH 약 40 내지 약 80℃, 보다 바람직하게는 pH 약 50 내지 약 80℃의 범위로 한다. 또한, 알칼리성 용액 중의 헤스페리딘은 분해를 일으키기 쉽기 때문에, 이를 방지하기 위해 가능한 차광하, 혐기하에 헤스페리딘을 유지하는 것이 바람직하다.
또한, 당전이효소를 현탁상 헤스페리딘에 작용시킬 때의 pH는 당전이효소의 종류, 최적 온도, 최적 pH, 혹은 작용량, 및 현탁상 헤스페리딘의 농도 등에 의존하여 달라지지만, 통상 pH 약 4 내지 약 7, 바람직하게는 pH 약 4.5 내지 약 6.5의 범위로 한다.
또한, 추가로 필요하다면, 효소반응 전의 헤스페리딘의 용해도를 높이고 헤스페리딘으로의 당전이반응을 용이하게 하기 위해, 헤스페리딘 고함유 용액, 특히 헤스페리딘 고함유 수용액 중에 물과 상용성이 높은 유기용매, 예를 들면, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, 아세톨, 아세톤 등의 저급 알코올, 저급 케톤 등의 1종 또는 2종 이상을 적당량 공존시키는 것도 임의이다.
효소량과 반응시간은 밀접한 관계에 있으며, 통상 경제성의 관점에서 약 5 내지 약 150시간, 바람직하게는 약 10 내지 약 100시간, 보다 바람직하게는 약 20 내지 약 80시간에서 효소반응을 종료시키는 효소량을 사용하는 당전이효소의 종류에 따라 적절히 설정하면 된다. 또한, 고정화된 당전이효소를 사용하여 배치식으로 반복적으로 반응시키거나 연속식으로 반응시키는 것도 적절히 실시할 수 있다.
상기 당전이효소 반응 후에 얻어지는 α-글리코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 효소 반응액은 필요에 따라 그대로, 또는 다공성 합성흡착수지에 의해 정제한 후, 글루코아밀라아제(EC 3.2.1.3) 또는 β-아밀라아제(EC 3.2.1.2) 등의 아밀라아제에 의해 부분 가수분해하여 α-글리코실헤스페리딘의 α-D-글루코실기의 수를 저감시킬 수 있다. 예를 들어, 글루코아밀라아제를 작용시키는 경우에는 α-말토실헤스페리딘 이상의 고분자를 가수분해하여 글루코오스를 생성시킴과 동시에 α-글루코실헤스페리딘을 생성시켜 축적시킬 수 있다. 또한, β-아밀라아제를 작용시킬 경우에는 α-말토트리오실헤스페리딘 이상의 고분자를 가수분해하여 말토오스를 생성시킴과 동시에 α-글루코실헤스페리딘과 α-말토실헤스페리딘을 포함하는 혼합물을 생성시켜 축적시킬 수 있다.
한편, 당전이효소 반응 후에 얻어지는 α-글리코실헤스페리딘과 헤스페리딘을 함유하는 효소반응액에 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제를 동시에, 또는 그 중 하나를 먼저 하고 순차적으로 작용시킴으로써, α-글리코실헤스페리딘의 루티노오스 구조에서의 글루코오스로 등몰 이상 α-결합된 글루코오스를 이탈시키고, α-글리코실헤스페리딘을 α-글루코실헤스페리딘으로 변환시켜 α-글루코실헤스페리딘 함량을 높임과 동시에, 수용성이 낮은 헤스페리딘을 수용성이 높은 7-O-β-모노글루코실헤스페레틴으로 바꿈으로써, 수용성이 높은 글리코실헤스페레틴으로 할 수 있다.
당전이효소와 마찬가지로, 글루코아밀라아제와 α-L-람노시다아제에 대해서도, 그들 효소량과 효소반응시간은 밀접한 관계에 있으며, 통상 경제성의 관점에서 약 5 내지 약 150시간, 바람직하게는 약 10 내지 약 100시간, 보다 바람직하게는 약 20 내지 약 80시간에서 효소반응을 종료시키는 효소량을 사용하는 효소의 종류에 따라 적절히 설정하면 된다. 또한, 고정화된 α-L-람노시다아제를 사용하여 배치식으로 반복적으로 반응시키거나, 연속식으로 끊기는 일 없이 반응시키는 것도 적절하게 실시할 수 있다.
(환원제 처리)
환원제 처리란, 환원제를 사용하여 글리코실헤스페레틴의 잡맛을 유의적으로 저감시키기 위한 처리를 의미하며, 후술하는 환원제를 (가) 헤스페리딘 및 전분 부분 분해물을 함유하는 수용액을 조제하는 공정, (나) 얻어진 수용액에 당전이효소를 작용시켜 α-글루코실헤스페리딘을 포함하는 글리코실헤스페레틴을 생성시키는 공정, 및 (다) 생성된 글리코실헤스페레틴을 채취하는 공정 중 하나 또는 둘 이상의 공정에서 사용하거나, 상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정 전의 시발원료 및/또는 상기 공정 후의 결과물에 그 소정량을 첨가하는 것을 의미한다.
환원제는 본 발명의 소기의 목적을 달성할 수 있는 한, 특별한 제한은 없고, 이 분야에서 범용적인 무기계 및 유기계의 환원제 중 어느 것이든 사용할 수 있다. 그러나, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 주로 인간에게 적용하는 것을 전제로 하는 것이기 때문에 안전성이 높고, 안정성, 취급성이 뛰어난 환원제를 사용하는 것이 바람직하다.
바람직하게 사용되는 환원제의 구체적인 예로서는 예를 들면, 하이드록실아민류, 하이드라진계 화합물, 이산화염소, 수소, 수소화합물(황화수소, 수소화붕소 나트륨, 수소화알루미늄 리튬, 수소화알루미늄 칼륨 등), 황화합물(이산화황, 이산화 티오우레아, 티오황산염, 아황산염, 황산철, 과황산나트륨, 과황산칼륨, 과황산암모늄, 아황산칼슘 등), 아질산염, 염화주석, 염화철, 요오드화칼륨, 과산화수소, 희석 과산화벤조일, 하이드로퍼옥사이드, 아염소산나트륨 등 아염소산염 등의 무기계 환원제를 예시할 수 있으며, 또는, 페놀류, 아민류, 퀴논류, 폴리아민류, 포름산과 그 염류, 옥살산과 그 염류, 구연산과 그 염류, 이산화 티오우레아, 환원성 당질, 과산화벤조일, 과황산벤조일, 수소화 디이소부틸알루미늄, 카테킨, 케르세틴, 토코페롤, 몰식자산과 그 에스테르, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디티오트레이톨, 환원형 글루타티온, 및 폴리페놀류 등의 유기계 환원제를 예시할 수 있다. 상기 무기계 및 유기계의 환원제는 그들 중 1종 또는 2종 이상을 적절히 조합하여 사용할 수 있다.
상기 무기계와 유기계의 환원제 중, 전자의 환원제는 종래품이 본래 가지고 있던 잡맛이 유의적으로 저감되고 이취(異臭)도 저감된 고품질의 글리코실헤스페레틴을 제공할 수 있으므로, 보다 바람직하게 사용할 수 있다. 또한, 그 이유는 확실하지 않지만, 이하와 같이 추정된다. 즉, 유기계 환원제는 유기물이기 때문에, 그 자체가 잡맛이나 착색의 원인이 될 우려가 있으며, 유기계 환원제 혹은 그 분해물이 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조공정에서 완전히 제거되지 않고 잔존하여, 그들이 글리코실헤스페레틴의 품질에 부정적인 영향을 주기 때문이 아닐까라고 생각된다.
무기계 환원제 중, SO2 -이온, HSO3 -이온, SO3 2-이온, S2O4 2 -이온 또는 S2O7 2 -이온과 금속 이온으로 이루어지는, 소위 아황산염(아황산염류라고도 한다.)은 안전성, 안정성 및 취급성 점에서도 우수하기 때문에, 본 발명에서 보다 바람직하게 사용할 수 있는 환원제이다. 특히, 무기계 환원제인 아황산 나트륨, 아황산 칼륨, 아황산 수소나트륨, 차아황산 나트륨, 차아황산 칼륨, 피로아황산 나트륨, 피로아황산 칼륨, 메타아황산 나트륨, 메타아황산 칼륨, 메타중아황산 나트륨, 및 메타중아황산 칼륨 등의 아황산염은 본 발명에서 가장 바람직하게 사용할 수 있다.
또한, 상기 환원제는 글리코실헤스페레틴의 제조공정에서의 1공정, 또는 그 공정 전의 시발원료 및/또는 공정 후의 결과물에 대해 적용되지만, 2이상의 공정 또는 그들 공정 전의 시발원료 및/또는 공정 후의 결과물에 그 적당량을 적절하게 조금씩 나눠 사용할 경우에는 보다 적은 양의 환원제로 효율적으로 본 발명의 소기의 목적을 달성할 수 있다.
상기 환원제의 첨가량으로서는 합계로, 상기 (가) 내지 (다)의 각각의 공정에서, 상기 (나) 효소반응 후(당전이효소 이외에 다른 효소를 사용하는 경우에는 그들 모든 효소반응 종료 후를 의미한다)에 얻어지는 효소반응액 질량에 대해, 통상 0.001% 이상, 바람직하게는 0.01 내지 3%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 0.5%에 상당하는 범위로부터 선택되는 양이 사용된다. 또한, 환원제를 상기 (다)의 공정보다 전에 첨가하는 경우에는 통상, 잔존하는 환원제는 정제공정에서 실질적으로 제거되기 때문에, 최종 제품으로서 얻어지는 글리코실헤스페레틴 중에는 실질적으로 검출되지 않는다. 상기 전체공정에서 첨가되는 환원제의 양은 효소반응 후에 얻어지는 효소반응액 질량에 대해 통상, 합계로 0.001% 이상, 바람직하게는 0.01% 이상, 보다 바람직하게 0.01 내지 1%의 범위가 되도록, 1회 내지는 복수회로 나눠서 첨가된다. 첨가할 때의 온도는 통상 상기 (가) 내지 (다)의 공정에서 채용되고 있는 온도이지만, 별도로 그 온도를 웃도는 온도로 하는 것도 가능하다. 구체적으로는 실온 이상의 온도, 바람직하게는 50℃ 이상, 보다 바람직하게는 70℃ 이상, 보다 바람직하게는 80℃ 이상, 더욱 바람직하게는 90 내지 120℃를 예시할 수 있다.
(정제방법)
이렇게 하여 얻어지는 효소반응용액은 그대로 본 발명의 글리코실헤스페레틴으로서 사용할 수 있다. 그러나, 통상, 효소반응용액은 이 분야에서 공지된 분별방법, 여과방법 다공성 합성수지 등을 사용하는 정제방법, 농축방법, 분무방법, 건조방법 등의 1종 또는 2종 이상의 수단을 적절히 조합하여 액상, 고체상, 분말상 등의 형태로 있는 글리코실헤스페레틴으로 할 수 있다.
상기 다공성 합성수지로서는 다공성이고 넓은 흡착 표면적을 가지며, 또한 비이온성인 스티렌-디비닐벤젠 중합체, 페놀-포르말린 수지, 아크릴레이트 수지, 메타아크릴레이트 수지 등의 합성수지를 의미하며, 예를 들면 시판되고 있는 Rohm & Haas사제의 상품명 : 앰버라이트 XAD-1, 앰버라이트 XAD-2, 앰버라이트 XAD-4, 앰버라이트 XAD-7, 앰버라이트 XAD-8, 앰버라이트 XAD-11, 및 앰버라이트 XAD-12 등의 수지; 미쓰비시화학 주식회사제의 상품명 : 다이야이온 HP-10, 다이야이온 HP-20, 다이야이온 HP-30, 다이야이온 HP-40, 다이야이온 HP-50, 다이야이온 HP-2MG, 세파비즈 SP70, 세파비즈 SP207, 세파비즈 SP700, 세파비즈 SP800 등의 수지; 및 IMACTI사제의 상품명 : 이맥티 Syn-42, 이맥티 Syn-44 및 이맥티 Syn-46 등의 수지를 예시할 수 있다.
다공성 합성 흡착제를 사용하는 정제방법에 의한 경우, 효소반응액을 다공성 합성 흡착제를 충전한 칼럼에 통액(通液)하면, 글리코실헤스페레틴은 다공성 합성 흡착제에 흡착되는 것에 반해, 잔존하는 전분 부분 분해물이나 수용성 당류 등은 흡착되지 않고 그대로 칼럼에서 유출된다. 이 때, 글리코실헤스페레틴인 헤스페리딘, 7-O-β-글루코실헤스페레틴 및 α-글리코실헤스페리딘은 통상, 거동을 함께 하며, 다공성 합성 흡착제에 의해 그들을 개별적으로 분리할 수는 없다. 그러나, 조작은 번잡해지며 수율은 저하되지만, 다공성 합성 흡착제를 충전한 칼럼에 선택적으로 흡착된 글리코실헤스페레틴을 희(希)알칼리, 물 등의 용매로 세정한 후, 비교적 소량의 유기용매 또는 유기용매와 물의 혼합액, 예를 들면 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 등을 통액하면, α-글리코실헤스페리딘이 칼럼에서 최초로 용출되며, 이어 통액량을 늘리거나 유기용매 농도를 높임으로써 미반응 헤스페리딘이 용출된다. 이렇게 하여 얻어진 글리코실헤스페레틴 함유 용출액을 증류처리하여 유기용매를 증류제거한 후, 원하는 농도까지 농축하면, 헤스페리딘 함량이 저감된 본 발명의 글리코실헤스페레틴이 얻어진다. 또한, 상기 유기용매에 의한 글리코실헤스페레틴의 용출조작은 동시에 다공성 합성 흡착제의 재생조작도 되기 때문에, 사용할 다공성 합성 흡착제의 반복 사용을 가능하게 하는 장점이 있다.
또한, 효소반응 종료 후, 효소반응액을 다공성 합성 흡착제에 접촉시킬 때까지의 사이에, 예를 들면, 반응액을 가온하여 생기는 불용물을 여과하여 제거하거나, 규산 알루민산 마그네슘, 알루민산 마그네슘 등으로 처리하여 반응액 중의 단백성 물질 등을 흡착제거하거나, 강산성 이온교환수지(H형), 중염기성 또는 약염기성 이온교환수지(OH형) 등으로 처리하여 탈염하는 등의 정제방법을 조합하여, 글리코실헤스페레틴 함량을 높인 액상의 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 제조할 수 있다.
또한, 상기 액상의 글리코실헤스페레틴을 공지의 건조방법으로 건조시켜 분말화함으로써 분말상의 글리코실헤스페레틴으로 하는 것도 임의다.
이와 같이 하여, 종래품의 단점이었던 특유의 잡맛이 효과적으로 유의하게 저감된 글리코실헤스페레틴을 제조할 수 있다. 한편, 본 발명자들이 확인한 바에 따르면, 상기 환원제 처리를 하지 않은 종래품 특유의 잡맛은 상기 정제방법을 적용한 것만으로는 실질적으로 변화하지 않는다. 즉, 종래품의 제조공정에서 일반적으로 사용되고 있는, 예를 들면 상기 다공성 합성 흡착제를 사용하는 정제방법은 전분 부분 분해물이나 수용성 당류 뿐만 아니라, 수용성 염류 등의 협잡물도 동시에 제거할 수 있는 장점을 가지고 있지만, 이러한 정제방법을 어떻게 구사하든지, 종래품 특유의 잡맛을 유의적으로 저감하는 것은 곤란하다. 예상되는 이유로서, 글리코실헤스페레틴 중에 포함되는 잡맛의 원인물질은 다공성 합성 흡착제에 대한 흡탈착의 거동이 글리코실헤스페레틴과 마찬가지이며, 글리코실헤스페레틴과 분리할 수 없기 때문은 아닐까라고 생각된다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있으며, 전기전도도도 낮고, 전기전도도에 관여하는 이온성 화합물 함량이 저감되어 있다. 또한, 이온성 화합물로서는 예를 들면 원재료인 헤스페리딘에 본래 포함되어 있는 나리루틴, 디오스민, 네오폰시린, 혹은 효소반응 생성물인 글루코실 나리루틴, 글루코실 네오폰시린 등의 화합물이나 그 분해물, 혹은 그 분해물과 밀접한 관련성을 갖는 화합물, 나아가서는 글리코실헤스페레틴의 제조원료에서 유래하거나, 또는 그 제조공정에서 부차적으로 생성되는 것으로 생각되는, 본 발명에서 지표로 하고 있는 퍼퓨랄을 비롯하여, 퍼퓨릴알코올 및 하이드록시메틸퍼퓨랄 등의 퍼퓨랄류나 그 염류 등의 외에, 용액상태에서, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨 등의 금속의 양이온을 유리하는 화합물 등을 들 수 있다. 또한, 상기 나리루틴, 디오스민, 네오폰시린, 글루코실 나리루틴, 글루코실 네오폰시린 등의 성분은 통상적으로 본 발명의 글리코실헤스페레틴에 미량이지만 포함되어 있다.
이상에서 설명한 바와 같이, 퍼퓨랄 함량이 유의적으로 저감된 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 고품질의 글리코실헤스페레틴이다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조방법에 의해, 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있는 메커니즘은 확실하지 않지만, 추정하면 이하와 같다.
(1) 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 제조함에 있어서, 그 제조원료에서 유래하여 잡맛의 원인물질이 존재하며, 그들에게 환원제가 작용하여 그 원인물질이 마스크, 분해 내지는 수식됨으로써, 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있다.
(2) 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조공정에서, 환원제가 잡맛의 원인물질이 생성되는 것을 저감 내지는 억제하거나, 생성된 잡맛의 원인물질이 마스크, 분해 내지는 수식됨으로써, 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있다.
(3) 상기 (1) 및 (2)에 나타내는 잡맛의 원인물질이 환원제에 의해 수식을 받아, 다공성 합성 흡착제 등에 의한 정제공정에서 글리코실헤스페레틴과 분리하기 쉬워지며, 그 결과 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법은 글리코실헤스페레틴 함유물과 환원제를 접촉시킴에 따른, 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법이다. 또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법에서 말하는 글리코실헤스페레틴 함유물이란, 글리코실헤스페레틴을 주성분으로 포함하는 글리코실헤스페레틴 함유물 전반을 의미한다. 또한, 당해 방법에 따르면, 글리코실헤스페레틴 함유물의 착색도 효과적으로 현저하게 저감할 수 있다. 글리코실헤스페레틴 함유물과 환원제와의 접촉은 고체상에 접촉시키는 것보다, 물 등의 적절한 용매를 사용하여 용액상태 또는 현탁상태에서 실시하는 것이 좋다. 또한, 상기 환원제를 접촉시키는 글리코실헤스페레틴으로서는 헤스페리딘, α-글리코실헤스페리딘 및 7-O-β-글루코실헤스페레틴으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 글리코실헤스페레틴을 예시할 수 있다. 상기 글리코실헤스페레틴 함유물로서는 건조고형물당, 글리코실헤스페레틴을 통상 70% 이상 100% 미만, 보다 바람직하게는 80% 이상 100% 미만, 더욱 바람직하게는 90% 이상 100% 미만 함유하는 글리코실헤스페레틴을 예시할 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법에서 사용하는 환원제는 본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조방법에서와 동일한 것을 사용할 수 있다. 또한, 환원제의 사용량은 글리코실헤스페레틴의 건조고형물당 통상 0.00001% 이상, 바람직하게는 0.0001 내지 0.5%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.4%, 보다 더욱 바람직하게는 0.001 내지 0.3%의 범위에서 첨가하고, 그들을 균일하게 혼합하여 글리코실헤스페레틴과 환원제를 접촉시킴으로써, 종래품 특유의 잡맛을 유의적으로 저감할 수 있다.
이렇게 하여 얻어지는 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 예를 들면 액상, 페이스트상, 고체상, 과립상, 분말상 등의 각종 형태로서 제공할 수 있다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴의 제조방법 및 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법에 의해 얻어지는 글리코실헤스페레틴은 자체가 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색도 현저하게 저감되고, 나아가서는 냄새도 현저하게 저감되어 있으며, 게다가 열안정성에도 우수하기 때문에, 예를 들어 80 내지 100℃의 고온에서 30분간 이상 가열하여도 또한, 당해 글리코실헤스페레틴을 함유시키는 공정 또는 이를 함유시킨 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 실온 내지는 실온을 약간 웃도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간에 걸쳐 보존하여도, 종래품을 사용한 경우에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색, 나아가서는 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 특징이 발휘된다. 따라서, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 신맛, 짠맛, 떫은 맛, 맛있는 맛, 쓴맛 등의 맛을 갖는 각종 물질과도 잘 조화하며, 내산성, 내열성도 크기 때문에, 특정 보건용 식품 등의 건강보조식품 등을 포함하는 음식물 전반을 포함하는, 예를 들면 조미료, 화과자, 양과자, 빙과, 음료(녹차, 홍차, 허브 티 등의 차 음료, 과즙 음료, 청량 음료, 커피, 코코아, 드링크제 등), 알코올류(일본주, 양주 등), 스프레드, 페이스트, 절임식품, 병·통조림, 축육가공품, 어육·수산가공품, 우유·계란가공품, 야채가공품, 과실가공품, 곡류가공품 등 광범위하게 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 가축, 가금, 꿀벌, 누에, 물고기 등의 사육동물을 위한 사료, 물고기용 먹이 등에 비타민 P 강화제, 기호성 개선 등의 목적으로 배합하여 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 요즘 주목을 받고 있는, 이른바 미용 식품으로서, 또한 각종 미용식품이나 음식품에도 적절히 배합하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 로션, 크림, 유액, 젤, 분말, 페이스트, 블록 등의 형태로, 비누, 화장비누, 한방비누, 피부세척가루, 세안 크림, 세안 폼, 페이셜 린스, 바디 샴푸, 바디 린스, 샴푸, 린스, 헤어세정가루 등의 청정용 화장품; 세트 로션, 헤어 블로우, 치크(tiques), 헤어 크림, 포마드, 헤어 스프레이, 헤어 리퀴드, 헤어 토닉, 헤어 로션, 양모제, 머리염색제, 두피용 트리트먼트 등의 두발 화장품; 화장수, 배니싱 크림, 에몰리언트 크림, 에몰리언트 로션, 팩용 화장료(젤리상의 필오프 타입, 젤리상의 닦아내기형, 페이스트상의 씻어내기형, 분말상 등), 클렌징 크림, 콜드 크림, 핸드 크림, 핸드 로션, 유액, 보습액, 애프터 쉐이빙 로션, 쉐이빙 로션, 프리 쉐이빙 로션, 애프터 쉐이빙 크림, 애프터 쉐이빙 폼, 프리 쉐이빙 크림, 화장용 오일, 베이비 오일 등의 기초 화장품; 파운데이션(액상, 크림상, 고체형 등), 탤컴 파우더, 베이비 파우더, 바디 파우더, 퍼퓸 파우더, 메이크업 베이스, 분(크림상, 페이스트상, 액상, 고체형, 분말 등), 아이 섀도우, 아이 크림, 마스카라, 눈썹용 펜슬, 속눈썹 화장료, 볼연지, 볼 화장수 등의 메이크업 화장품; 향수, 고형 향수, 분말 향수, 오데 코롱, 퍼퓸 코롱, 오드 뚜왈렛 등 방향 화장품; 선탠 크림, 선탠 로션, 선탠 오일, 자외선차단 크림, 자외선차단 로션, 자외선차단 오일 등의 선탠 또는 자외선차단 화장품; 매니큐어, 페디큐어, 네일 컬러, 네일 래커, 에나멜 리무버, 네일 크림, 손톱 화장료 등의 손톱 화장품; 아이라이너 화장품; 립스틱, 립크림, 립밤, 립글로스 등의 입술 화장품; 구취방지제, 치약, 구강청결제 등의 구강 화장품; 바스 솔트, 바스 오일, 목욕용 화장료 등의 입욕용 화장품; 나아가서는 피부미용제, 미백제, 노화 억제제/방지제 등에 배합하여 이용하는 것도, 나아가서는
자외선 흡수제, 열화(劣化)방지제 등으로서 플라스틱 제품 등에 배합하여 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다. 또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 담배, 트로키(Troche), 간유 드롭, 복합 비타민제, 구강청량제, 구강 방향정, 가글제, 경관 영양제, 내복약, 주사제 등의 각종 고체상, 페이스트상, 액상의 기호품, 감수성 질환의 예방·치료제 등의 감수성 질환제 등에 적절히 배합하여 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다. 또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품에도 바람직하게 적용할 수 있다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴은 상기 여러 가지 조성물 또는 물품의 총질량에 대해, 통상 약 0.0001% 이상, 바람직하게는 약 0.001 내지 약 50%, 보다 바람직하게는 약 0.01 내지 약 30%, 더욱 바람직하게는 약 0.01 내지 약 20%, 보다 더욱 바람직하게는 약 0.01 내지 약 10%의 범위에서 사용된다.
또한, 본 명세서에서 말하는 감수성 질환이란, 글리코실헤스페레틴에 의해 예방 또는 치료되는 질환 전반을 의미하며, 예를 들면, 글리코실헤스페레틴에 의해 예방 또는 치료되는, 바이러스성 질환, 세균성 질환, 외상성 질환, 면역성 질환, 류머티즘, 당뇨병, 알레르기성 질환, 지질대사이상증, 순환기 질환, 악성 종양 등의 글리코실헤스페레틴 감수성 질환을 예시할 수 있다. 글리코실헤스페레틴 감수성 질환의 예방제, 치료제는 그 목적에 따라 그 형상을 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 분무제, 점안제, 점비제, 가글제, 주사제 등의 액제, 연고, 습포제, 크림과 같은 페이스트제, 나아가서는 가루제, 산제, 과립, 정제, 캡슐제 등의 고형제 등을 예시할 수 있다. 제제의 조제에 있어서는 필요에 따라 다른 성분, 예를 들면 약효 성분, 생리활성물질, 항생물질, 보조제, 증량제, 부형제, 안정제, 착색제, 착향제, 보존제, 살균제, 정균제 등의 1종 또는 2종 이상을 병용하는 것도 임의이다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴의 투여량은 함량, 투여경로, 투여빈도, 증상 등에 따라 적절히 조절할 수 있다. 통상 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 건조고형물 환산으로, 성인 1일당 약 0.001 내지 약 10g, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 5g, 보다 바람직하게는 약 0.05 내지 약 1g의 범위에서 사용된다.
본 발명의 글리코실헤스페레틴을 각종 조성물에 배합하는 방법으로서는 그들 각종 조성물이 완성될 때까지의 공정에서, 예를 들면 혼화, 반죽, 용해, 침지, 침투, 산포, 도포, 분무, 주입 등의 공지의 1종 또는 2종 이상의 방법을 단독으로 또는 적절하게 조합하여 사용할 수 있다. 상기 각종 조성물이란, 예를 들면 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 예시할 수 있다. 상기 각종 조성물에 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 배합한 것은 종래품을 배합한 것에 비해, 상술한 온도 범위에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존한 경우에도, 잡맛과 착색은 물론, 냄새가 효과적으로 현저하게 저감되어 있는 실익이 얻어진다. 또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 고품질이며 안전성이 높은 천연형 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 또는 자외선 흡수제 등으로 하여 각종 화합물 또는 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
이하, 본 발명의 글리코실헤스페레틴에 대해 실험에 의해 더욱 상세하게 설명한다.
<실험 1 : 분말상 글리코실헤스페레틴의 물성>
후술하는 실시예 1의 방법에 있어서, 환원제로서 피로아황산나트륨을 0.1, 0.09, 0.07 또는 0.04% 사용한 것 이외에는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 4종류의 분말상 글리코실헤스페레틴(피험시료 5 내지 8 : 본 발명)을 조제함과 동시에, 대조군으로서 실시예 1, 3, 4 및 5의 방법에서, 환원제를 사용하지 않는 것 이외는 그들 실시예의 방법과 동일한 방법으로 4종류의 분말상 글리코실헤스페레틴(피험시료 1 내지 4 : 종래품)을 조제하였다. 또한, 피험시료 1 내지 4 중, 피험시료 1은 후술하는 참고예 1에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴과 동등품이다.
(1) 퍼퓨랄의 함량
피험시료 1 내지 8의 각각에 대해, 하기 순서 및 장치를 사용하여 퍼퓨랄 함량을 구하였다.
<A. 시료의 조제>
(가) 50mL 공전삼각플라스크에 피험시료인 상기 분말상 글리코실헤스페레틴 중 어느 하나를 건조고형물 환산으로 0.5g 채취한다.
(나) 이어서, 탈이온수 5.0mL를 각 분말상 글리코실헤스페레틴에 첨가하여 용해하고, 대용(surrogate)물질(분석시에, 피험시료의 회수율을 조사하기 위한 지표)로서 농도 0.0025%의 시클로헥사놀 20μL를 첨가한다.
(다) 또한, 염화나트륨을 1.5g 첨가하여 용해하고, 디에틸에테르(시약 특급, 와코순약공업주식회사 판매)를 3mL 첨가하여 700rpm으로 10분간 교반한다.
(라) 전량을 분액 깔때기에 옮겨담고, 10분간 정치한 후, 디에틸에테르상(diethyl ether layer)을 회수하여, 황산나트륨무수염으로 탈수한 후, 질소 기류하에 약 200μL가 될 때까지 농축한다.
(마) 농축액 1μL를 채취하여 GC/MS 분석장치에 제공한다.
(바) 대조군으로서, 분말상 글리코실헤스페레틴 대신에 시약급 퍼퓨랄(시약 특급, 도쿄화성공업주식회사 판매)를 사용한 것 이외는 피험시료와 같은 방법으로 (가) 내지 (마)의 처리를 실시한다.
<GC/MS 분석조건>
·GC/MS분석장치 : 「Clarus SQ8T GC/MS」(퍼킨엘머사제)
·칼럼 : VF-WAXms [칼럼길이 30m×내경 0.25mm, 막두께 0.25μm](AGILENT J&W사제)
·검출기 : 질량분석기
·캐리어 : 헬륨가스
·선속도 : 35cm/초
·승온조건 : 40℃에서 3분간 유지하며, 40℃~80℃까지 5℃/분의 비율로 승온하고, 80℃~200℃까지 10℃/분의 비율로 승온하며, 200℃에서 7분간 유지하고, 200℃~220℃까지 10℃/분의 비율로 승온한 후, 220℃에서 8분간 유지한다.
·대용(surrogate)물질 : 시클로헥사놀(시약 일급, 카타야마화학공업주식회사 판매)
·내부표준물질 : 헨에이코산(GC용 표준물질, 도쿄화성공업주식회사 판매)
·추출용매 : 디에틸에테르(시약 특급, 와코순약공업주식회사 판매)
<B. 시료 중의 퍼퓨랄의 정량>
GC/MS 분석법으로 얻어진, 대조군인 시약 특급 퍼퓨랄(와코순약주식회사 판매)에 대한 측정 데이터를 근거로 검량선을 작성하고, 이에 기초하여 피험시료의 퍼퓨랄 함량을 구하였다.
(2) 4-VA의 함량
피험시료 1 내지 8 각각에 대해, 하기 시약, 순서 및 장치를 사용하여 4-VA 함량을 측정하였다. 또한, 그 측정방법은 2006년 7월 28일자, 식품안전부기준 발 제0728008호 후생노동성 의약식품국 식품안전부 기준심사과장 통지 「청량 음료수 중의 벤젠에 대해」에 준하여 실시하였다.
<A. 시약, 각종 용액의 조제>
(가) 염화나트륨(수질시험용, 와코순약공업주식회사 판매)
(나) 시클로헥사놀 표준원액의 조제
시클로헥사놀(시약 일급, 카타야마화학공업주식회사 판매)을 메탄올(약국방 일반 시험법용)에 용해하여 0.01 질량% 시클로헥사놀 용액(이하, 「시클로헥사놀 표준원액」이라고 한다.)을 조제하였다.
(다) 내부 표준액
상기 시클로헥사놀 표준원액과 메탄올을 사용하여 0.0004 질량% 시클로헥사놀 용액(이하,「내부표준액 1」이라고 한다.) 및 0.00004 질량% 시클로헥사놀 용액(이하,「내부표준액 2」라고 한다.)을 조제하였다.
(라) 표준 원액의 조제
4-VA(와코순약공업주식회사 판매)를 메탄올에 용해하여, 0.0005 질량% 4-VA 용액(이하, 「표준액 A」라고 한다) 및 0.00005 질량% 4-VA 용액(이하, 「표준액 B」라고 한다.)을 각각 조제하였다.
(마) 검량선 작성용 표준원액의 조제
상기 표준액 A, B, 상기 내부표준액 1 및 메탄올을 사용하여, 4-VA 농도가 0.05, 0.1, 0.2, 0.5 또는 1.0μg/mL인 5종류의 검량선 작성용 혼합 표준원액을 조제하였다.
(바) 검량선 작성용 표준액의 조제
20mL 헤드 스페이스 바이알 5개에 각각 초순수를 10mL 첨가하고, 추가로 상기 5종류의 검량선 작성용 혼합표준원액 중 어느 하나를 10μL 첨가한 후, 염화나트륨 3.0g을 첨가하여, 바로 마개로 밀폐하고 교반용해하여 5종류의 검량선 작성용 표준액을 조제하였다.
<B. 피험시료의 조제>
20mL 헤드 스페이스 바이알 8개에 피험시료 1 내지 8 중 어느 하나를 건조고형물 환산으로 0.20g 정밀하게 잰 후, 여기에 초순수를 첨가하여 전량을 10.0g으로 하고, 교반 용해하였다. 얻어진 수용액에 상기 내부표준액 2를 10μL 첨가하고, 또한 염화나트륨을 3.0g 첨가한 후, 바로 마개로 밀폐하고 교반용해하여 피험시료 1 내지 8 중 어느 하나를 포함하는 8종류의 피험시료를 조제하였다.
<C. 4-VA의 정량방법>
(가) 측정조건
<GC/MS 분석조건>
·GC/MS 분석장치 :「Clarus SQ8T GC/MS」(퍼킨엘머사제)
·헤드 스페이스 샘플러 :「TurboMatrix Trap 40」
·칼럼 : VF-WAXms [칼럼길이 30m × 내경 0.25mm, 막두께 0.25μm)(AGILENT J&W사제)
·검출기 : 질량분석기
·캐리어 : 헬륨가스
·선속도 : 35cm/초
·칼럼 주입구 온도 : 200℃
·승온조건 : 40℃에서 3분간 유지하며, 40℃~80℃까지 5℃/분의 비율로 승온하고 80℃~200℃까지 10℃/분의 비율로 승온하며, 200℃에서 7분간 유지하고 200℃~220℃까지 10℃/분의 속도로 승온하고, 추가로 220℃에서 8분간 유지한다.
·바이알 오븐온도 : 60℃
·니들 온도 : 140℃
·트랜스퍼 라인 온도 : 205℃
·바이알 가열시간 : 30분간
<검출법>
·이온화[Electron Impact(EI)]법
·SIM 선택 이온(Selected Ion Monitoring)
m/z 134, 119(4-VA)
m/z 82, 57[시클로헥사놀(시약 일급, 카타야마화학공업 주식회사 판매)]
(나) 4-VA의 정량
상기 8종류의 피험시료 및 상기 5종류의 검량선 작성용 혼합표준액에서의 4-VA와 내부표준(시클로헥사놀)의 피크 높이 비와, 별도로 작성해 놓은 4-VA의 검량선에 기초하여, 상기 피험시료에서의 4-VA 농도를 구하고, 그에 기초하여 피험시료 1 내지 8에서의 4-VA 함량을 산출하였다.
(3) 색조와 착색도
피험시료 1 내지 8의 수용액 각각에 대해, 색조를 육안으로 관찰함과 동시에, 하기 순서에 의해 착색도를 구하였다. 즉, 피험시료 1 내지 8 각각에 대해 1w/w% 수용액으로 하여, 그 40mL를 밀폐용기(50mL 용량) 중에서 100℃에서 30분간 가열한 후, 27℃로 하고, 폭 1cm의 셀에 넣어 분광광도계(상품명「UV-2600」, 시마즈제작소제)에 의해 파장 420nm에서의 흡광도(OD420nm) 및 파장 720nm에서의 흡광도(OD720nm)를 측정하여, 양 파장에서의 흡광도 차(OD420nm-OD720nm)를 구하여, 그 값을 착색도로 하였다.
(4) 전기전도도
피험시료 1 내지 8 각각에 대해 1w/w% 수용액이 되도록 순수에 용해하고, 밀폐용기 중에서 100℃에서 30분간 가열한 후, 20℃로 냉각하고, 20℃에서의 전기전도도를 전기전도도계(상품명 『CM-50AT』, 도아디케이케이사제)에 의해 측정하였다.
(5) 이온성 화합물의 함량
이온성 화합물을 정량하는 것은 용이하지 않기 때문에, 간편법으로서, 하기 수법에 따라 양이온 금속원소의 함량을 구하였다. 즉, 피험시료 1 내지 8 각각에 대해, 약 0.5g을 50mL 용기(상품명『팔콘 튜브』, 니혼벡톤디킨슨사제)에 정확하게 재서, 초순수 20mL에 가열 용해하고, 여기에 정밀분석용 60w/w% 질산수용액을 0.54mL 첨가하여, 70℃에서 14시간 동안 가열하고, 실온까지 냉각한 후, 초순수로 전량을 50mL로 하여, 하기 분석장치와 측정조건하에서 금속원소 함량을 구하였다. 또한, 대조군은 초순수만을 사용하였다.
<장치 및 측정조건>
·유도결합 플라즈마 발광 분광분석장치 : 『CIROS-120』　　　 　　　　　　　　　　　　　　　 (Spectro사제)
·플라즈마 전력 : 1,400W
·플라즈마 가스(Ar) : 13.0L/분
·보조가스(Ar) : 1.0L/분
·네블라이저 가스(Ar) : 1.0L/분
·펌프 동작 : 1.0mL/분
·금속원소 함량(ppm)의 산출방법 :
{(피험시료의 측정값) - (대조군의 측정값)} × 희석 배율
상기 (1) 내지 (5)의 결과를 표 1에 나타낸다. 또한, 피험시료 1 내지 8의 글리코실헤스페레틴의 조성은 실시예 1, 3, 4 또는 5에 나타내는 것과 실질적으로 동등하기 때문에, 표 1에는 그 기재를 생략하였다.
Figure 112016091894079-pct00004
표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 피험시료 1 내지 4의 퍼퓨랄 함량은 모두 300ppb 초과이었던 반면, 피험시료 5 내지 8은 모두 약 10ppb이었다. 또한, 피험시료 1 내지 4의 4-VA 함량은 모두 40ppb 초과이었던 반면, 피험시료 5 내지 8은 모두 약 2ppb 이하이었다.
또한, 표 1에 나타낸 바와 같이, 피험시료 1 내지 4(대조군)의 수용액의 색조(육안관찰에 의한)는 담황색이었지만, 피험시료 5 내지 8(본 발명)의 수용액은 대조군에 비해 분명히 옅은 색조이었다. 또한, 분광광도계에 의한 착색도는 피험시료 1 내지 4의 수용액의 착색도는 모두 0.24 이상이었던 반면, 피험시료 5 내지 8의 수용액은 모두 0.20 이하로 낮은 값이었다. 또한, 피험시료 5 내지 8의 착색도는 사용한 환원제의 양이 많은 것일수록 낮은 값을 나타내었다.
또한, 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 피험시료 1 내지 4의 수용액의 전기 전도도는 약 11 내지 약 12μS/cm와 10μS/cm 초과이었던 반면, 피험시료 5 내지 8의 수용액은 약 3 내지 약 7μS/cm와 10μS/cm 미만이었다.
또한, 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 피험시료 5 내지 8의 금속원소(칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨) 함량은 모두 피험시료 1 내지 4에 비해 분명히 낮고, 이 결과는 전기전도도의 측정결과와도 잘 일치하였다.
이상의 결과로부터, 환원제를 이용하여 제조된 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 퍼퓨랄 함량, 4-VA 함량, 착색도가 유의적으로 저감되고 전기전도도나 금속원소 함량도 분명히 저감되어 있는 것으로 판명되었다.
<실험 2 : 관능시험>
본 발명의 글리코실헤스페레틴과 종래품을 사용하여 하기의 관능시험을 실시하였다.
(1) 관능시험의 개요와 피험시료의 조제
본 발명의 글리코실헤스페레틴의 대표적인 예로서, 실험 1에서 사용한 피험시료 5 내지 8 중, 퍼퓨랄 함량, 착색도, 전기전도도 및 금속원소함량의 각각이 중간에 위치하는 값을 나타낸 피험시료 6과, 종래품의 대표적인 예로서, 실험 1에서 사용한 피험시료 1 내지 4 중, 퍼퓨랄 함량, 착색도, 전기전도도 및 금속원소 함량이 가장 낮은 값을 나타낸 피험시료 1을 사용하여, 28 내지 59세의 건강한 남녀 8명(여성 2명, 남성 6명)을 패널로 하는 하기 (2)에 나타내는 관능시험을 실시하였다. 즉, 종래품(피험시료 1)과 본 발명의 글리코실헤스페레틴(피험시료 6)을 각각 1w/w% 수용액이 되도록 실온에서 RO수(역삼투막을 통과한 물)에 용해하여, 비가열 피험시료 1, 6으로 하고, 이들은 하기 시험에 제공할 때까지 밀폐용기 안에 보관하였다. 또한, 비가열 피험시료 1, 6을 각각 용기에 넣어 밀폐하고, 비등수욕 중에서 30분간 가열하고, 실온까지 냉각한(이하,「가열처리」라고 한다.) 것을 가열 피험시료 1, 6으로 하였다.
(2) 관능시험
각 패널리스트에게, 실온으로 조정한 상기 (1)에서 얻은 비가열 피험시료 1, 6(각 10mL) 및 가열 피험시료 1, 6(각 10mL)에 대해, 시음 전에, (a)착색과 (b)냄새를 각자에게 평가하게 하였다. 그 후, 각 패널리스트에게는 각 피험시료를 시음하기 전에 백비탕으로 입을 헹구게 한 후, (c)쓴맛(떫은 맛, 아린 맛, 수렴맛을 포함), (d)뒷맛, 및 (e)시음시의 냄새에 대해 각자 평가하게 하였다. 평가 기준은 하기 표 2(표 중,「종래품」이란「피험시료 1」을 의미한다.)에 나타내는 바와 같으며, 비가열 피험시료 6에 대해서는 비가열 피험시료 1을 대조군으로 하고, 가열 피험시료 6에 대해서는 가열 피험시료 1을 대조군으로 하여, 상기 (a) 내지 (e)의 평가항목에 대해 각 패널리스트에게 평가하게 하였다. 결과는 각각 표 3, 표 4에 나타낸다.
(평가기준)
Figure 112016091894079-pct00005
(3) 관능시험의 결과
Figure 112016091894079-pct00006
Figure 112016091894079-pct00007
또한, 표 3, 4에 나타낸 평가결과에는 종래품(가열/비가열 피험시료 1 : 대조군) 자체에 대한 (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛 및 (e)냄새의 평가결과를 나타내고 있지 않지만, 평가기준에 나타낸 바와 같이, 표 3 및 표 4에 나타낸 평가결과는 종래품을 기준으로 하여 본 발명의 글리코실헤스페레틴을 평가한 것이므로, 종래품의 평가결과는 각 평가항목에 대해, 평가기준에 나타낸 점수(5단계 평가)로 말하면, 중간인 「3」이다.
한편, 표 3의 평가 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 비가열 피험시료 6, 즉 가열처리를 하지 않은 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛, 및 (e)냄새의 각 평가항목에 대해, 5단계 평가에서 최고인「1」로 평가한 패널 수는 각각 8명 중, 4명, 3명, 0명, 3명, 및 4명(총 14명)이었다. 한편, 표 4의 평가결과에 나타내는 가열 피험시료 6, 즉 가열처리한 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛 및 (e)냄새의 평가항목에 대해, 5단계 평가에서 최고인 「1」로 평가한 패널 수는 각각 8명 중, 4명, 5명, 7명, 4명, 및 4명(총 24명)이었다.　이 결과는 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛, 착색 뿐만 아니라, 냄새가 효과적으로 저감된 고품질의 글리코실헤스페레틴임을 나타내고 있다.
같은 방법으로, 표 3의 평가결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 비가열 피험시료 6(가열처리를 하지 않은 본 발명의 글리코실헤스페레틴)은 (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛 및 (e)냄새의 평가항목에 대해, 5단계 평가에서 최저인「5」 및 그 최저레벨보다 1단계 높은「4」라고 평가한 패널 수는 모두 0명(총 0명) 이었다.　한편, 표 4의 평가결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 가열피험시료 6(가열처리한 본 발명의 글리코실헤스페레틴)은 (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛 및 (e)냄새의 평가항목에 대해 5단계 평가에서 최저인「5」및 그 최저레벨보다 1단계 높은「4」라고 평가한 패널 수는 모두 0명(총 0명)이었다.　이 결과는 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛, 착색뿐만 아니라 냄새가 효과적으로 저감된 고품질의 글리코실헤스페레틴임을 나타내고 있다.
이들 결과로부터, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 가열/비가열을 불문하고, (a)착색, (b)냄새, (c)쓴맛, (d)뒷맛 및 (e)냄새 등 모든 평가항목에서 현저하게 뛰어날 뿐만 아니라, 그 우열의 차이는 가열한 경우, 보다 현저한 차이로 나타나는 것이 판명되었다.
또한, 상기 실험 2의「(1) 피험시료의 조제」에 나타낸 피험시료 5, 7 및 8에 대해서도 실험 2의「(2) 관능시험」과 동일한 관능시험에 제공한 결과, 상기 피험시료 6과 거의 동등한 결과가 얻어졌다.
이와 같이, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품 특유의 쓴맛(떫은 맛, 아린 맛, 수렴맛을 포함)과 뒷맛, 즉 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이 현저하게 저감되어 있는 것이 판명되었다.　또한, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 냄새도 현저하게 저감되어 있는 것이 판명되었다.
<실험 3 : 글리코실헤스페레틴의 잡맛, 착색과 퍼퓨랄 및 4-VA 함량과의 관계>
글리코실헤스페레틴의 잡맛, 착색과 퍼퓨랄 및 4-VA 함량과의 관계를 조사할 목적으로 하기의 시험을 실시하였다.
(1) 피험시료의 조제
후술하는 실시예 4의 방법 및 참고예 1의 방법에 준하여, 본 발명의 글리코실헤스페레틴(이하,「시료 A」라고 한다.)과 종래품(이하,「시료 B」라고 한다.)을 조제하였다.　이어서, 편의상 시료 A, B를 적절한 비율로 배합하여, 퍼퓨랄 함량이 단계적으로 다른 표 5에 나타내는 3종류의 글리코실헤스페레틴 시료(이하,「피험시료 9 내지 11」이라고 한다.)를 조제하였다.
(2) 퍼퓨랄 및 4-VA의 함량　
실험 1의 (1)과 (2)에 나타낸 측정방법에 따라, 피험시료 9 내지 11의 퍼퓨랄 함량과 4-VA 함량을 각각 측정하였다.
(3) 착색 판정 시험　
28 내지 57세의 건강한 남녀 9명(여성 2명, 남성 7명)을 패널로 하고, 피험시료 9 내지 11 및 시료 B(이하, 「대조군」이라고 한다.)를 사용하여 착색에 대한 평가시험을 실시하였다.　즉, 피험시료 9 내지 11 및 대조군을 각각 증류수에 1w/w% 수용액이 되도록 실온에서 용해하고, 이를 각 패널리스트에게 육안으로 관찰하게 하여, 각 패널리스트가 각 피험시료에 대해 대조군에 비해「착색이 저감되어 있다」고 평가한 경우에는「판정 A1」,「착색이 저감되지 않았다」고 평가한 경우에는 「판정 B1」이라고 판정하게 하여, 그 결과를 표 5에 나타내었다.
(4) 관능시험　
상기 남녀 9명을 패널로 하여, 피험시료 9 내지 11 및 대조군의 잡맛에 대해 관능시험을 실시하였다.　즉, 피험시료 9 내지 11 및 대조군을 각각 증류수에 1w/w% 수용액이 되도록 실온에서 용해하고, 이를 각 패널리스트에게 시음하게 하여, 각 패널리스트가 각 피험시료에 대해 대조군에 비해「잡맛이 개선되어 있다」고 평가한 경우에는「판정 A2」,「잡맛이 개선되지 않았다」고 평가한 경우에는「판정 B2」라고 판정하게 하며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.
Figure 112016091894079-pct00008
표 5의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 글리코실헤스페레틴의 잡맛은 퍼퓨랄 함량 200ppb 부근을 경계로 현저하고 유의적으로 개선되어 있으며, 4-VA 함량 30ppb 부근을 경계로 현저하고 유의적으로 개선되어 있다.　또한, 글리코실헤스페레틴의 착색에 대해서도 마찬가지였다.　이들 결과로부터, 퍼퓨랄 함량과 4-VA 함량은 잡맛이 유의적으로 저감되고 게다가 착색이 현저하게 저감된 글리코실헤스페레틴을 준별하기 위한 지표로 할 수 있으며, 퍼퓨랄 함량이 200ppb 이하, 4-VA 함량이 30ppb 이하인 것을 준별하면, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되고 게다가 착색도 현저하게 저감된 글리코실헤스페레틴이 얻어지는 것이 강하게 시사되었다.
그리고, 상술한 실험 1의 표 1, 후술하는 실시예 1 내지 7, 및 참고예 1에 나타난 복수의 분말상 글리코실헤스페레틴의 잡맛과, 퍼퓨랄 함량 및 4-VA 함량과의 관계에 대해 취합한 것을 하기 표 6에 나타낸다.　표 6 중, 본 발명의 글리코실헤스페레틴인 피험시료 5 내지 8, 및 실시예 1 내지 7의 분말상 글리코실헤스페레틴(이하, 총칭하여「본 발명의 피험시료」라고 한다.)의 퍼퓨랄 함량은 191ppb 이하이고, 4-VA 함량은 28.7ppb 이하이며, 그들은 모두, 종래품 특유의 잡맛이 유의적으로 저감되어 있다.　이에 반해, 대조군 1 내지 5의 피험시료 1 내지 4, 및 참고예 1의 분말상 글리코실헤스페레틴(이하, 총칭하여「대조군의 피험시료」라고 한다.)의 퍼퓨랄 함량은 308ppb 이상이고, 4-VA 함량은 40.0ppb 이상이며, 그들은 모두 종래품 특유의 잡맛을 가지고 있었다.
상기 표 6에 정리된 실험 및 실시예, 참고예의 결과는 실험 3의 결과와 잘 정합하며, 이들 일련의 결과에 기초하여 퍼퓨랄 함량 및/또는 4-VA 함량을 지표로 하여 퍼퓨랄 함량이 200ppb 미만 및/또는 4-VA 함량이 30ppb 미만인 것을 준별하면, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감된 글리코실헤스페레틴을 얻을 수 있다고 판단된다.
Figure 112016091894079-pct00009
이상 서술한 실험결과로부터, 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있고 게다가 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있기 때문에, 그 자체가 잡맛이 유의적으로 저감되고 착색 그리고 냄새도 현저하게 저감된 음식품으로서 매우 유용함과 동시에, 종래품에서는 그 잡맛 때문에, 혹은 잡맛과 착색 그리고 냄새 때문에 사용할 수 없거나, 불가피하게 품질저하를 초래했었던, 각종 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 플라스틱 제품 등의 용도로도 문제없이 사용할 수 있게 되었다.
이하, 본 발명을 실시예 및 참고예에 기초하여 더욱 상세히 설명하는데, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
1 규정 수산화나트륨 수용액 4질량부를 80℃로 가온하고, 이 온도를 유지하면서 헤스페리딘 1질량부 및 덱스트린(DE20) 7질량부를 첨가하며, 30분간 교반하면서 용해시켜 pH를 9.0으로 하고, 여기에 지오바실러스·스테아로서모필러스 Tc-91주(일본국 (우편번호: 305-8566) 이바라기현 츠쿠바시 히가시 1쵸메 1번지 1 중앙 제6소재의 독립행정법인 제품평가기술기반기구 특허생물기탁센터 수탁번호 FERM BP-11273 기탁일 : 1973년 7월 30일) 유래의 CGTase를 덱스트린 그램당 30단위 첨가하고, pH 6.9, 50℃로 유지하면서 18시간 동안 반응시켜, 헤스페리딘의 약 70%를 α-글리코실헤스페리딘으로 변환시켰다.　이어서, 얻어진 효소반응액에 대해, 환원제인 피로아황산나트륨을 0.05% 첨가하고, 100℃에서 30분간 가열함과 동시에, 잔존하는 효소를 가열 비활성화시킨 후, 글루코아밀라아제(상품명『글루코팀』, 나가세켐텍스사제)를 효소반응액의 고형분 그램당 100단위 첨가하여, pH 5.0, 55℃로 유지하면서 5시간 동안 반응시켜, α-글루코실헤스페리딘을 생성시켰다.　얻어진 효소반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 비활성활시키고, 여과하여, 여과액을 다공성 합성 흡착제, 상품명『다이야이온 HP-10』(미츠비시화학주식회사 판매)을 충전한 칼럼에 SV2로 통액하였다.　그 결과, 용액 중의 α-글루코실헤스페리딘과 미반응 헤스페리딘이 다공성 합성 흡착제에 흡착되며, D-글루코오스, 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다.　이어, 칼럼에 정제수를 통액하고, 칼럼을 세척한 후, 에탄올 수용액 농도를 단계적으로 높이면서 다시 통액하여, α-글루코실헤스페리딘 함유 분획을 채취하여 감압농축하고 분말화하여 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 고형물당 원료인 헤스페리딘 질량에 대해 약 70%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 80.0%, 헤스페리딘 12.3%, 기타 성분 7.7%를 함유하고 있었다.
또한, 본 품의 퍼퓨랄 함량은 12ppb, 4-VA 함량은 2ppb, 착색도는 0.19, 및 전기전도도는 약 6μS/cm이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.4ppm, 약 0.05ppm, 약 0.1ppm 및 약 0.1ppm 함유하고 있었다.
본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저히 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도 범위나 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 사용한 경우에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되고 게다가 착색이나 냄새도 현저히 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 사료, 물고기용 먹이, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 2
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
1 규정 수산화나트륨 수용액 4질량부를 80℃로 가온하고, 이 온도를 유지하면서, 여기에 헤스페리딘 1질량부, 덱스트린(DE10) 4질량부 및 아황산나트륨 0.06질량부를 순차적으로 첨가하고, 30분간 교반하면서 용해하며, 0.01 규정 염산용액으로 중화한 후, 즉시 지오바실러스·스테아로서모필러스 Tc-91주(독립행정법인 제품평가기술기반기구, 특허생물기탁센터 수탁번호 FERM BP-11273) 유래의 CGTase를 덱스트린 그램당 20단위 첨가하여, pH 6.0, 75℃로 유지하고 교반하면서 24시간 반응시켰다.　얻어진 효소반응액을 샘플링하여 HPLC로 분석한 결과, 헤스페리딘의 약 69%가 α-글리코실헤스페리딘로 변환하고 있었다.　이어서, 얻어진 효소반응액에 환원제로서 피로아황산나트륨을 0.03%가 되도록 첨가하여, 90℃에서 120분간 가열한 후, 글루코아밀라아제(상품명『글루코팀』, 나가세켐텍스제)를 당해 중간생성물 그램당 50단위 첨가하고, pH 5.0, 55℃로 유지하면서 10시간 동안 반응시켜 α-글루코실헤스페리딘을 생성시켰다.　얻어진 효소반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 비활성화시키고, 여과하여, 여과액을 다공성 합성 흡착제, 상품명『다이야이온 HP-10』(미츠비시화학주식회사 판매)을 충전한 칼럼에 SV2로 통액하였다.　그 결과, 용액중의 α-글루코실헤스페리딘과 미반응 헤스페리딘이 다공성 합성 흡착제에 흡착되며, 당류나 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다.　이어서, 칼럼에 정제수를 통액하고, 칼럼을 세척한 후, 에탄올 수용액 농도를 단계적으로 높이면서 다시 통액하고, α-글루코실헤스페리딘 함유 분획을 채취하여, 감압 농축하고 분말화하여, 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 고형물당 원료의 헤스페리딘 질량에 대해 약 68%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 77.0%, 헤스페리딘 15.5%, 기타 성분 7.5%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 11ppb이며, 4-VA 함량은 1.5ppb, 착색도는 0.14, 그리고 전기전도도는 약 4μS/cm이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.4ppm, 약 0.06ppm, 약 0.1ppm 및 약 0.1ppm 함유하고 있었다.
본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저히 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도범위나 그를 밑도는 온도에서, 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 사용한 경우에 비해, 잡맛이 유의적으로 저감되며, 나아가서는 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안정성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 3
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
1 규정 수산화나트륨 수용액 4질량부를 80℃로 가온하고, 이 온도를 유지하면서, 이에 환원제로서 아황산나트륨 0.1질량부, 헤스페리딘 1질량부 및 덱스트린(DE10) 4질량부를 순차적으로 첨가하고, 30분간 교반하면서 용해하며, 여기에 0.01 규정 염산용액을 첨가하여 중화한 후, 즉시 지오바실러스·스테아로서모필러스 Tc-91주(독립행정법인 제품평가기술기반기구, 특허생물기탁센터 수탁번호 FERM BP-11273) 유래의 CGTase를 덱스트린 그램당 20단위 첨가하여, pH 6.0, 75℃로 유지하고, 교반하면서 24시간 동안 반응시킨 결과, 헤스페리딘의 약 72%가 α-글리코실헤스페리딘으로 변환하고 있었다.　얻어진 효소반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 비활성시키고, 여과하여, 여과액을 다공성 합성 흡착제, 상품명『다이야이온 HP-20』(미츠비시화학주식회사 판매)을 충전한 칼럼에 SV2로 통액하였다.　그 결과, 용액 중의 α-글리코실헤스페리딘과 미반응 헤스페리딘이 다공성 합성 흡착제에 흡착되고, D-글루코오스, 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다.　이어서, 칼럼에 정제수를 통액하고, 칼럼을 세척한 후, 에탄올 수용액 농도를 단계적으로 높이면서 다시 통액하고 α-글리코실헤스페리딘 함유 분획을 채취하여, 감압 농축하고, 분말화하여 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 고형물당 원료인 헤스페리딘 질량에 대해 약 71%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글리코실헤스페리딘 76.0%, 헤스페리딘 18.5%, 기타 성분 5.5%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 10ppb, 4-VA 함량은 3.0ppb, 착색도는 0.17, 그리고 전기전도도는 약 4μS/cm이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.3ppm, 약 0.04ppm, 약 0.1ppm 및 약 0.05ppm 함유하고 있었다.
본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저히 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도 범위나 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 이용한 경우에 비해, 잡맛이 유의적으로 저감되고 게다가 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(항감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품 포함), 및 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 4
<분말상 글리코실헤스페레틴>
헤스페리딘 1질량부, 덱스트린(DE8) 10질량부, 및 환원제로서 피로아황산나트륨 0.05질량부를 물 50질량부에 첨가하고, pH 9.5, 90℃에서 70분간 가열한 후, 지오바실러스·스테아로서모필러스 Tc-91주(독립행정법인 제품평가기술기반기구, 특허생물기탁센터 수탁번호 FERM BP-11273) 유래의 CGTase를 덱스트린 그램당 30단위 첨가하여, pH 8.2, 65℃로 유지하고, 교반하면서 40시간 동안 유지하면서, 이 효소반응이 종료하기 직전에, 효소반응액에 환원제로서 피로아황산나트륨을 0.05%가 되도록 첨가하고, 85℃에서 가열하여 효소를 비활성화시킨 후, 글루코아밀라아제(상품명『글루코팀』, 나가세켐텍스사제)를 효소반응액 고형물 그램당 100단위 첨가하고, pH 5.0, 55℃로 유지하면서 5시간 반응시켜, α-글루코실헤스페리딘을 생성시켰다.　얻어진 효소반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 비활성화시켰다.　이어서, 얻어진 효소반응액에 α-L-람노시다아제로서 헤스페리디나아제(상품명『가용성 헤스페리디나아제 <타나베> 2호』, 타나베제약제)를 0.5질량부 첨가하고, pH 4로 조정하며, 55℃에서 24시간 반응시켜, 얻어진 효소반응액에 피로아황산나트륨 0.01질량부를 첨가하고, 가열하여 효소를 비활성화시킨 후, 여과하여, 여과액을 다공성 합성 흡착제, 상품명『다이야이온 HP-10』(미츠비시화학주식회사 판매)을 충전한 칼럼에 SV2로 통액하였다.　그 결과, 용액 중의 α-글루코실헤스페리딘, 7-O-β-글루코실헤스페레틴, 및 미반응 헤스페리딘이 다공성 합성 흡착제에 흡착되며, D-글루코오스, 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다.　이어서, 칼럼에 정제수를 통액하고 칼럼을 세척한 후, 에탄올 수용액 농도를 단계적으로 높이면서 다시 통액하고, α-글루코실헤스페리딘 함유 분획을 채취하여, 감압 농축하고, 분말화하여 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 고형물당 원료인 헤스페리딘 질량에 대해 약 70%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 81.9%, 헤스페리딘 0.5%, 7-O-β-글루코실헤스페레틴 8.9%, 및 기타 성분 8.7%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 9ppb, 4-VA 함량은 2.0ppb, 착색도는 0.16, 그리고 전기전도도는 약 4μS/cm이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.3ppm, 약 0.03ppm, 약 0.05ppm, 및 약 0.05ppm 함유하고 있었다.
본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저하게 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도 범위 또는 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 사용한 경우에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되고 나아가 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(항감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품 포함), 및 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 5
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
헤스페리딘 50질량부와 환원제로서 차아황산나트륨 1질량부를 0.25N 수산화나트륨 수용액 90질량부에 80℃로 가열 용해하며, DE8의 덱스트린 150질량부를 첨가하여 용해하고, pH 9.0으로 조정한 후, 지오바실러스·스테아로서모필러스 Tc-91 주(독립행정법인 제품평가기술기반기구, 특허생물기탁센터 수탁번호 FERM BP-11273) 유래의 CGTase를 덱스트린 1질량부당 15단위 첨가하고, 60℃까지 가온하면서 pH 8.3으로 조정하여, 6시간 반응시켰다.　그 후, pH 7.0로 조정하고, 68℃로 가온하여 40시간 반응시켰다.　효소반응 종료 후, 효소를 가열 비활성화시킨 후, 여과하여 효소반응액을 얻었다.　효소반응액을 HPLC로 분석한 결과, 반응전 액 중의 헤스페리딘의 72%가 α-글루코실헤스페리딘으로 변환하고 있으며, 나머지 28%는 미반응인 채였다.　효소반응액에 α-L-람노시다아제로서 헤스페리디나아제(상품명『가용성 헤스페리디나아제 <타나베> 2호』, 타나베제약제)를 2질량부 첨가하여 pH 4로 조정하고, 55℃에서 24시간 반응시킨 후, 글루코아밀라아제(상품명『글루코팀』, 나가세켐텍스사제)를 1질량부 첨가하고, 다시 55℃에서 24시간 반응시켰다.　효소반응 종료 후, 얻어진 효소반응액을 가열하여 효소를 가열 비활성화시키고, 중간극성 다공성 흡착수지(상품명『앰버라이트 XAD-7』, Rohm and Haas사제)를 충전한 칼럼에 걸어, 칼럼을 수세하고, 80v/v% 에탄올 수용액으로 수지흡착성분을 용출하였다.　용출액 중의 에탄올을 제거한 후, 동결건조시켜, α-글루코실헤스페리딘 82.0%, 7-O-β-글루코실헤스페레틴 8.0%, 헤스페리딘 1.0%, 및 기타 성분 9.0%를 포함하는 분말상 글리코실헤스페레틴을 얻었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 10ppb, 4-VA 함량은 1.5ppb, 착색도는 0.15, 그리고 전기전도도는 10μS/cm 미만이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.4ppm, 약 0.04ppm, 약 0.1ppm 및 약 0.2ppm 함유하고 있었다.
본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저히 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도범위나 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 사용한 경우에 비해, 잡맛이 유의적으로 저감되고 게다가 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(항감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 및 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 6
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
효소반응액에 대해, 환원제인 메타아황산칼륨을 0.001% 첨가한 것 이외에는 실시예 1과 동일한 방법으로, 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 고형물당 원료인 헤스페리딘 질량에 대해 약 69%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 79.5%, 헤스페리딘 13.8%, 기타 성분 6.7%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 180ppb, 4-VA 함량은 20ppb, 착색도는 0.23, 그리고, 전기전도도는 10μS/cm 미만이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.5ppm, 약 0.08ppm, 약 0.1ppm 및 약 0.3ppm 함유하고 있었다.
본 품은 실시예 1 내지 5에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴에 비해 뒤떨어지지만, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저하게 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도 범위 또는 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 이용한 경우에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되며 게다가 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서, 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 및 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 7
<분말상 글리코실헤스페레틴>　
메타아황산칼륨을 아황산수소나트륨으로 대신한 것 이외에는 실시예 6과 동일한 방법으로, 담황색의 분말상 글리코실헤스페레틴을 건조고형물당 원료인 헤스페리딘 질량에 대해 약 65%의 수율로 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 77.2%, 헤스페리딘 16.5%, 기타 성분 6.3%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 191ppb, 4-VA 함량은 28.7ppb, 착색도는 0.23, 그리고 전기전도도는 10μS/cm 미만이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 0.5ppm, 약 0.07ppm, 약 0.09ppm 및 약 0.4ppm 함유하고 있었다.
본 품은 실시예 1 내지 5에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴의 물성에 비하면 뒤떨어지지만, 본 품은 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있을 뿐만 아니라, 90 내지 100℃의 비교적 고온의 조건하에서 30분간 가열한 후에도, 종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있는 것은 물론, 착색이나 냄새도 효과적으로 현저하게 저감되어 있는 뛰어난 특성을 가지고 있다.　따라서, 본 품을 함유시킨 음식품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품을 포함), 또는 플라스틱 제품을 상기 온도 범위 또는 그를 밑도는 온도에서 수십분간 내지 수개월간 보유 또는 보존했을 때, 종래품을 사용한 경우에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되며, 나아가서는 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있다는 뛰어난 실익이 얻어진다.　또한, 본 품은 종래품과 마찬가지로, 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라, 안전성이 높은 천연형의 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식품, 기호품, 화장품, 의약품(감수성 질환제 등), 의약부외품, 화학품, 공업용 원료 및 자재, 사료, 물고기용 먹이, 의류자재, 잡화(일용품 포함), 및 플라스틱 제품 등의 각종 조성물에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 8
<글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법>　
후술하는 참고예 1에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴에 그 건조고형물당 아황산나트륨, 차아황산나트륨, 피로아황산칼륨, 또는 피로아황산나트륨을 0.03질량% 첨가하고, 균일하게 교반하며 가열하고, 정제하여 분말상 글리코실헤스페레틴을 얻었다.
본 방법은 참고예 1에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴에 환원제를 첨가하는 것뿐이라는 매우 간단한 수법이긴 하지만, 종래품 특유의 잡맛을 유의적으로 저감할 수 있는 뛰어난 장점을 가지고 있다.　본 방법에 의해 얻어지는 분말상 글리코실헤스페레틴은 잡맛이 유의적으로 저감되어 있을 뿐 아니라, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있기 때문에, 당해 분말상 글리코실헤스페레틴을 각종 음식품에 배합하여 가열처리, 혹은 용액상태로 한 후, 비교적 장기간에 걸쳐 가열보존한 경우에도, 본 품에 기인하는 잡맛은 말할 것도 없고, 착색 및 냄새가 효과적으로 현저하게 저감된다.
실시예 9
<혼합감미료>
이성화 액당 100질량부, 설탕 2질량부 및 실시예 1의 방법에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 1질량부를 80℃에서 30분간 가열처리하여 비타민 P 강화 액상 혼합감미료를 얻었다.
본 품은 종래품 특유의 잡맛, 착색, 냄새가 효과적으로 저감된 비타민 P 강화 액상 혼합감미료이다.　따라서, 본 품을 사용하여 각종 음식품을 가열조리하는 경우일지라도, 본 품에 기인하는 잡맛, 착색, 냄새가 신경이 쓰이지 않기 때문에, 음식물 소재의 풍미, 색조를 손상시키지 않는 장점이 얻어진다.
실시예 10
<하드캔디>
α,α-트레할로오스(등록상표『트레하』, 주식회사하야시바라 판매) 10질량부와 물 20질량부를 155℃의 감압하에서, 수분 약 2% 이하가 될 때까지 농축한 다음, 120℃까지 냉각하고, 여기에 구연산 0.5질량부 및 실시예 2의 방법에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 0.01질량부 및 레몬 향료를 적당량 혼화한 다음, 통상적인 방법에 따라 성형, 포장하여 비타민 P 강화 하드캔디를 얻었다.
본 품은 종래품을 사용하여 조제한 하드캔디와는 달리, 종래품 특유의 잡맛, 착색, 냄새가 효과적으로 저감되어 있기 때문에, 레몬 풍미와 하드캔디의 투명감이 손상되는 일이 없는 비타민 P 강화 하드캔디이다.
실시예 11
<캡슐제>　
아세트산 칼슘 모노하이드레이트 10질량부, L-젖산마그네슘 트리하이드레이트 50질량부, 말토오스 57질량부, 실시예 3의 방법에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 20질량부 및 에이코사펜타엔산 20% 함유 γ-시클로덱스트린 포접 화합물 12질량부를 균일하게 혼합하고, 과립성형기에 걸어 과립으로 한 후, 통상적인 방법에 따라 젤라틴 캡슐에 봉입하여 1 캡슐당 내용물을 150mg 함유하는 캡슐을 얻었다.
본 품은 실온 내지는 실온을 웃도는 온도에서 비교적 장기간에 걸쳐 보존한 후에도, 본 품에 기인하는 잡맛, 착색, 냄새의 증대 내지는 변화가 실질적으로 인정되지 않는 고품질의 혈중 콜레스테롤 저하제, 면역 부활제, 피부 미용제 등으로서, 감수성 질환의 예방제, 치료제, 건강증진용 음식물 등에 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 12
<목욕용제>　
DL-젖산나트륨 21질량부, 피루빈산나트륨 8질량부, 실시예 4의 방법으로 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 5질량부, 착색료 및 향료 적당량과 혼합하여 목욕용제를 얻었다.
본 품은 입욕용 온수에 100 내지 10,000배로 희석하여 사용된다.　본 품을 사용할 때에는 입욕용 온수가 순환식인 경우에도, 본 품을 온수에 투입하고 나서 1시간 이상 경과한 후에도, 투입 직후에 비해, 본 품에 기인하는 착색, 냄새의 증대 내지는 변화가 실질적으로 인정되지 않으며, 본 품에 배합된 향료의 향기가 손상되지 않는 고품질의 목욕용제이다.
실시예 13
<유액>　
폴리옥시에틸렌 베헤닐에테르 0.5질량부, 테트라올레인산 폴리옥시에틸렌 소르비톨 1질량부, 친유형 모노스테아린산 글리세린 1질량부, 피루빈산 0.5질량부, 베헤닐알코올 0.5질량부, 아보카도유 1질량부, 실시예 1의 방법에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 1질량부, 비타민 E 및 방부제 적당량을 통상적인 방법에 따라 가열용해하고, 여기에 L-젖산나트륨 1질량부, 1,3-부틸렌글리콜 5질량부, 카르복시비닐폴리머 0.1질량부, 및 정제수 85.3질량부를 첨가하며, 호모게나이저에 걸어 유화하고, 다시 향료 적당량을 첨가하여 교반하며, 혼합하여 유액을 제조하였다.
본 품은 실온 또는 실온을 약간 웃도는 온도 환경하에서 비교적 장기간 보존하여도, 본 품에 기인하는 잡맛, 착색, 냄새의 증대 내지는 변화가 실질적으로 인정되지 않고, 본 품에 배합된 향료의 향기가 손상되지 않는 고품질의 유액이다.
실시예 14
<비타민 P 강화제>
실시예 4의 방법에서 얻은 분말상 글리코실헤스페리딘 1질량부에 대해, 아 황산나트륨, 차아황산나트륨, 피로아황산칼륨, 및 피로아황산나트륨으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 합계로 0.0005질량부 첨가하고, 균일하게 혼합하여 건강보조음식물인 15종류의 비타민 P 강화제를 얻었다.
본 품은 모두, 실온 내지 비교적 고온의 환경하에서 수십분간 내지 수개월간 보존한 후, 녹차, 홍차, 커피, 코코아 등의 음료에 첨가하여 음용하여도, 본 품에 기인하는 잡맛, 착색, 냄새의 증대 내지는 변화가 실질적으로 인정되지 않고, 보존안정성 및 열안정성이 뛰어난 비타민 P 강화제이다.
실시예 15
<미용식품>
실시예 1 내지 7에서 얻은 분말상 글리코실헤스페레틴 중 어느 하나를 10 질량부, 수크로오스 3질량부, 말티톨 1질량부 및 덱스트린 15질량부를 교반혼합하고, 스틱 형태의 차광/방습성 포장용기에 5g씩 수용하여, 8종류의 본 발명의 분말상 미용식품을 얻었다.
본 품은 잡맛, 착색, 냄새가 효과적으로 저감되어 있으므로, 불쾌감 없이 일상적으로 경구 섭취하여 이용할 수 있다.　본 품은 하루당, 그 1 내지 2포를 물, 차, 홍차, 커피 등의 각종 음료나 다른 음식품에 첨가하여 일상적으로 경구 섭취할 수 있다.
실시예 16
<미용식품>　
실시예 14에서 얻은 15종류의 비타민 P 강화제 중 어느 하나를 2질량부, 말토오스 2질량부, 정제수 20질량부 및 적당량의 pH 조정제를 혼합 교반하며 pH 7.2로 조정하고, 정밀여과하여, 무균용기에 무균적으로 충전하여, 15종류의 본 발명의 액상 미용식품을 얻었다.
본 품은 잡맛, 착색, 냄새가 저감되어 있으므로, 불쾌감 없이 일상적으로 경구 섭취하여 이용할 수 있다.　본 품을 하루당 50 내지 200mL씩 일상적으로 경구 섭취함으로써, 피부를 건강한 상태로 유지할 수 있다.
<참고예 1>
<분말상　글리코실헤스페레틴>
종래의 분말상 글리코실헤스페레틴의 제조방법으로서, 실시예 1의 분말상 글리코실헤스페레틴의 제조방법에 있어서, 환원제로서 피로아황산나트륨을 사용하지 않는 것 이외에는 실시예 1과 동일한 방법으로, 분말상 글리코실헤스페레틴을 얻었다.　또한, 본 예에서 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴은 α-글루코실헤스페리딘 77.0%, 헤스페리딘 15.5%, 기타 성분 7.5%를 함유하고 있었다.
본 품의 퍼퓨랄 함량은 310ppb, 4-VA 함량은 40ppb, 착색도는 0.24, 그리고 전기전도도는 약 11μS/cm이었다.　또한, 본 품은 건조고형물당, 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨을 각각 약 3ppm, 약 0.2ppm, 약 0.4ppm 및 약 1ppm 함유하고 있었다.
이렇게 하여 얻어진 분말상 글리코실헤스페레틴의 적당량을 물에 용해하여 시음한 결과, 종래품 특유의 잡맛, 착색을 가지고 있으며, 불쾌한 냄새도 강하였다.
이와 같이, 본 발명에서 사용하는 환원제를 사용하지 않고 제조된 글리코실헤스페레틴은 본 발명에 따른 글리코실헤스페레틴에 비해 적어도 잡맛과 착색 및 냄새의 측면에서 확실히 뒤떨어졌다.
종래품에 비해 잡맛이 유의적으로 저감되어 있음과 동시에, 착색이나 냄새도 현저하게 저감되어 있는 본 발명의 글리코실헤스페레틴은 종래품의 제조공정 중 어느 하나의 공정에 환원제를 첨가하는 것만으로, 공업적으로 대량이면서 저렴하게 안정적으로 제공할 수 있기 때문에, 종래품이 적용되었던 분야는 물론, 종래품 특유의 잡맛 때문에, 혹은 잡맛과 착색 그리고 냄새 때문에 적용이 어렵거나 지장이 있었던 분야에서도, 지장없이 쉽게 적용가능하게 되었다. 이와 같이, 본 발명이 해당 분야에 미치는 영향은 지극히 크며, 본 발명의 산업상 이용가능성은 매우 크다.
특허생물기탁센터 FERMBP-11273 19730730

Claims (24)

  1. α-글리코실헤스페리딘과 함께, 헤스페리딘 및 7-O-β-글루코실헤스페레틴으로부터 선택되는 1종 또는 2종을 포함하여 이루어진 글리코실헤스페레틴 조성물로서, 글리코실헤스페레틴을 건조고형물당 90질량% 이상 100질량% 미만, α-글루코실헤스페리딘을 건조고형물당 90질량% 이하 함유하고, 또한 GC/MS 분석법으로 측정된 퍼퓨랄 함량이 건조고형물당 200ppb 미만인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    GC/MS 분석법으로 측정된 4-메톡시스티렌 함량이 건조고형물당 30ppb 미만인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    α-글루코실헤스페리딘을 건조고형물당 60질량% 이상 90질량% 이하 함유하는 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    1w/w% 수용액으로 하여, 이를 밀폐용기 중에서 100℃에서 30분간 가열한 후, 27℃로 조정하고, 폭 1cm의 셀에 넣어 분광광도계에 의해 파장 420nm 및 파장 720nm에서의 흡광도를 측정했을 때 양 파장에서의 흡광도의 차이가 0.24 미만인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    1w/w% 수용액으로 하여, 밀폐용기 중에서 100℃에서 30분간 가열한 후, 20℃로 했을 때의 전기전도도가 10μS/cm 미만인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    고주파 유도결합 플라즈마 발광 분광분석법으로 측정했을 때의 조성물의 고형물당의 칼슘, 칼륨, 마그네슘 및 나트륨의 함량이 각각 1ppm 이하, 0.1ppm 이하, 0.2ppm 이하 및 0.4ppm 이하인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    (가) 헤스페리딘 및 전분 부분 분해물을 함유하는 수용액을 조제하는 공정,
    (나) 얻어진 수용액에 당전이효소를 작용시켜 α-글루코실헤스페리딘을 포함하는 글리코실헤스페레틴을 생성시키는 공정, 및
    (다) 생성한 글리코실헤스페레틴을 채취하는 공정을 포함하는 글리코실헤스페레틴 조성물의 제조방법에 있어서,
    상기 (가) 내지 (다) 중 하나 또는 둘 이상의 공정에서 아황산염을 첨가하여 가열하는 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물의 제조방법.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 (나)의 공정에서 사용하는 당전이효소가 시클로말토덱스트린·글루카노트란스페라아제, α-글루코시다아제 및 α-아밀라아제로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서,
    상기 (나)의 공정에서 얻어진 효소반응액에 추가로 글루코아밀라아제 및 α-L-람노시다아제로부터 선택되는 1종 또는 2종을 작용시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  10. α-글리코실헤스페리딘과 함께, 헤스페리딘 및 7-O-β-글루코실헤스페레틴으로부터 선택되는 1종 또는 2종을 포함하여 이루어진 글리코실헤스페레틴 조성물과 아황산염을 접촉시켜 가열하는 공정에 의해, 글리코실헤스페레틴 조성물에 기인하는 잡맛을, 아황산염과 접촉시켜 가열하는 상기 공정을 실시하지 않은 경우와 비교하여, 저감시키는 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 조성물을 포함하여 이루어진 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    α-글리코실헤스페리딘이 α-글루코실헤스페리딘인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법.
  12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서,
    α-글리코실헤스페리딘의 함량이 글리코실헤스페레틴 조성물의 건조고형물당 50질량% 이상 100질량% 미만인 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법.
  13. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서,
    추가로, 글리코실헤스페레틴 함유물의 착색도 저감되는 것을 특징으로 하는 글리코실헤스페레틴 함유물의 잡맛 저감방법.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6499740B2 (ja) * 2016-10-13 2019-04-10 フォーデイズ株式会社 食品組成物
CN109312375B (zh) * 2018-04-25 2022-06-17 邦泰生物工程(深圳)有限公司 一种橙皮素的制备方法、橙皮素中间体的制备方法和用于制备橙皮素的生物酶
WO2020090137A1 (ja) * 2018-10-30 2020-05-07 太陽化学株式会社 容器詰飲料
WO2020138026A1 (ja) 2018-12-28 2020-07-02 株式会社林原 暑熱ストレス緩和剤
CN109652481A (zh) * 2018-12-29 2019-04-19 浙江工业大学 一种环糊精糖基转移酶在生产α-糖基橙皮苷中的应用
WO2022107735A1 (ja) 2020-11-17 2022-05-27 株式会社林原 水晶体硬度調節剤
CN116143745B (zh) * 2023-04-04 2023-08-22 华南理工大学 一种从柑橘皮中一步提取制备高纯度高活性橙皮素的方法
CN116870066B (zh) * 2023-08-08 2024-04-30 浙大城市学院 一种高效率制备衢枳壳总黄酮的方法及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013018779A1 (ja) 2011-08-01 2013-02-07 株式会社林原 α－グルコシルヘスペリジンの結晶とその用途

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3060227B2 (ja) * 1989-06-03 2000-07-10 株式会社林原生物化学研究所 α―グリコシル ヘスペリジンとその製造方法並びに用途
US5663223A (en) * 1994-08-11 1997-09-02 Zapata Technologies, Inc. Flavor protectant closure liner compositions
JP3833775B2 (ja) 1996-06-26 2006-10-18 株式会社林原生物化学研究所 酵素処理ヘスペリジンおよびその製造方法ならびに酵素処理ヘスペリジンの使用方法
WO1998042859A1 (en) * 1997-03-24 1998-10-01 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo PROCESS FOR PRODUCING α-MONOGLUCOSYLHESPERIDIN-RICH SUBSTANCE
JP3833811B2 (ja) 1997-03-24 2006-10-18 株式会社林原生物化学研究所 α−モノグルコシルヘスペリジン高含有物の製造方法
JP3060227U (ja) 1998-12-22 1999-08-17 株式会社日本標準 学習漢字一覧表
JP3549436B2 (ja) * 1999-04-08 2004-08-04 株式会社林原生物化学研究所 α−グリコシルヘスペリジンとその製造方法並びに用途
AR028394A1 (es) * 2000-05-12 2003-05-07 Coca Cola Co Jugos de fruta que tienen un flavor y duracion de la conservacion de la calidad aumentadas
JP4902151B2 (ja) * 2005-08-01 2012-03-21 株式会社林原生物化学研究所 ヘスペレチン−７−β−マルトシド及びその製造方法並びにその用途
WO2009096042A1 (ja) * 2008-01-31 2009-08-06 Kao Corporation 味噌
JP5197560B2 (ja) 2009-12-21 2013-05-15 株式会社 伊藤園 ヘスペリジン含有飲料
KR102554508B1 (ko) 2014-08-20 2023-07-13 가부시기가이샤하야시바라 경구 미용제

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013018779A1 (ja) 2011-08-01 2013-02-07 株式会社林原 α－グルコシルヘスペリジンの結晶とその用途

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