JP6623418B2 - ウシの健康のための、２５−ヒドロキシビタミンｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤の組合せ - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

［発明の簡単な説明］
本発明は、ウシ飼料に用いる２５−ヒドロキシビタミンＤ（「２５−ＯＨ Ｄ３」および／または「２５−ＯＨ Ｄ２」）および抗酸化剤／抗炎症剤（アスコルビン酸、ビタミンＥ、およびカロテノイド）の組合せに関する。栄養補助剤の本組合せは、卵巣の健康および健康的な循環１７−βエストラジオールレベルに寄与するので、搾乳牛の生産寿命を長くし得る。

［発明の背景］
卵巣疾患についての一動物モデルは、家禽である。家畜の産卵雌鶏は、高い罹患率で卵巣癌を発病するおそれがある。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ ２０１３ Ｎａｔｕｒｅ １３：４３２−４３６、およびＷａｌｚｅｍ ｅｔ ａｌ ２０１４ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ５：１９９−２０６参照。雌鶏の卵巣癌の進行、ならびに転移成長および腹水の位置は、女性で観察されるものと類似している。

一部の家禽品種は、過食に関連する肥満を経験する。通常、農家は、肥満の有害な結末を予防するために、群れに与える食物の量を制限することとなる。しかしながら、多くの場合、群れの所望の成長を確実にすることとなる、与える飼料の適切な量を決定することは、困難である。そして、摂食制限条件下では、個体は攻撃的になり、他の鳥を傷つけるだけでなく、自身が肥満化するおそれがある。

生殖発育中に過食した雌のブロイラー畜種は、大きな黄色の卵胞を過剰に生産するだけでなく、より多数の黄色の閉鎖卵胞を生じ、そして一般的に、いくつかの生殖の問題、例えば卵胞閉鎖、軟殻卵または膜様卵の生産、二黄卵、卵黄性腹膜炎（腹腔における卵黄の存在）、複数卵日（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｇｇ ｄａｙｓ）、および産卵不順（ｏｖｉｐｏｓｉｔｉｏｎ ｎｏｔ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が挙げられる不規則性産卵および不完全卵症候群（ＥＯＤＥＳ：ｅｒｒａｔｉｃ ｏｖｉｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｅｇｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を示して、非種卵（ｕｎｓｅｔｔａｂｌｅ ｅｇｇ）の生産が増大する。

管理下研究により、自発的摂食（すなわち、ブロイラー畜種雌鶏が、飽食するまで給餌される）は、産卵が悪く、死亡率および異常な卵巣構造（主に明白な階層卵胞閉鎖（ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ａｔｒｅｓｉａ））の割合が高くなることが報告された。摂食制限された雌鶏と対照的に、自発的摂食はまた、肥満の増強；肝臓トリアシルグリセロールの蓄積；ならびに血漿グルコース、非エステル型脂肪酸、超低密度リポタンパク質、トリアシルグリセロール、リン脂質、セラミド、およびスフィンゴミエリンの濃度上昇を含む代謝性調節不全を誘導した。

さらに、肝臓の循環セラミドおよびスフィンゴミエリンの蓄積、ならびに肝臓および脂肪組織における炎症誘発性ＩＬ−１β発現の上方制御は全身的に、飼料飽食雌鶏における脂肪毒性の進行を明らかにした。セラミドは重要な中間体であり、これは、特定の栄養分（すなわち、飽和脂肪）および炎症性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α、ＴＮＦα）を細胞機能の調節に関連付け、かつインシュリンシグナル伝達およびミトコンドリア機能に拮抗する。さらに、特に易感受性の細胞型に及ぼす毒性効果の結果として、セラミドは、心臓、膵臓、および血管に損傷を与える能力を有する。飼料飽食雌鶏における卵胞閉鎖、卵巣の退行、および循環エストラジオールレベルの低下が挙げられる、卵巣の機能障害の原因となる脂肪毒性はさらに、セラミドの蓄積およびＩＬ−１βの上方制御、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、ならびにスフィンゴミエリナーゼ転写物量によって例示されたが、階層卵胞内のプロテインキナーゼＡｋｔ活性化を抑制した。ゆえに、インビボ証拠により、過食誘発性卵胞閉鎖を媒介する際のセラミドおよびＩＬ−１βの作用、ならびにブロイラー雌鶏における卵巣退縮の進行が正確に概説された。

商業的ブロイラー畜種の群れにおいて厳密に実施される給餌レジメンの制限にも拘らず、畜種雌鶏は、過食の性質が本来備っているため、依然として非常に過食し易い。さらに、畜種農場管理者は、産卵を開始する前と開始してから、そして産卵ピークに向けて、産卵ピーク中と産卵ピーク後に、いつ、どのように給餌するかが問われる。生殖効率の悪影響および有害効果を改善するために、畜種農場管理者がどの管理ツールおよび栄養ツールをどのように利用かつ実施し得るかを尋ねる基本的な問題は、太り過ぎの雌鶏の肥満と関連した。

家禽、ブタにおける骨健康を促進するために、そしてヒトにおけるビタミンＤ欠乏症用に、Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（２５−ＯＨ−Ｄ３の登録商標；ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、スイスから入手可能）が用いられてきた。国際公開第２００８／０３１６０２号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ，ＢＶ）は、その、乳牛における乳熱のための使用を記載している。

また、２５−ＯＨ Ｄ３およびカンタキサンチンの組合せが、家禽に用いられてきた。国際公開第２０１０／０５７８１１号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ，ＢＶ）は、家禽において、産卵能力、受胎能の向上に、そして胚死亡率の引下げに用いるために、この組合せを記載している。当該組合せは、商標ＭＡＸＩＣＨＩＣＫの下で市販されている。当該特許公報において、アスコルビン酸および高レベルのビタミンＥの包含も、過食に関連する肥満の悪影響を改善するための用途も、言及されていない。

ビタミンＣ（アスコルビン酸）は多くの場合、家禽飼料において補助剤として含まれない。というのも、ニワトリは、正常な飼育条件下で、十分なビタミンＣを生産することができるからである。しかしながら、ビタミンＣは、一部の特定の条件において、例えば熱ストレス状況において、用いられてきた。

ビタミンＥは一般に、家禽飼料に加えられる。家禽種に推奨される用量は、動物の齢に応じて、約５０〜１００ＩＵ／飼料ｋｇに及ぶ傾向がある。

国際公開第１４／１９１１５３号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ Ｂ．Ｖ）は、カンタキサンチン、およびビタミンＣ、ビタミンＥ、セレンの少なくとも１つの組合せを教示しており、場合によっては、チモール、オイゲノール、バニリン、およびガンマ−テルピネンの少なくとも１つが、特に、群れがワクチン接種と関連するストレスに曝される場合、免疫状態、骨の健康、骨格の発達および成長、ならびに飼料転換を向上させることができる。

国際公開第１４／２０２４３３号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ Ｂ．Ｖ）は、内部の卵品質を向上させるための、すなわち卵黄を包み込む卵黄膜の強度を増強するための、カンタキサンチンおよび２５−ＯＨ Ｄ３の組合せを教示している。アスコルビン酸を当該組合せに加えることも、過食に関連する肥満の悪影響の改善に用いることも、教示していない。

ウシにおける卵巣疾患の発症を予防し、または遅延させて、生殖寿命を長くする必要がある。

［発明の詳細な説明］
本発明に従って、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ３および／または２５−ＯＨ Ｄ２）および抗酸化剤／抗炎症剤の組合せは、家禽において、卵巣の健康、特に多嚢胞性卵巣症候群に有益であり得ることが見出された。ウシ、特に乳牛は、類似した疾患、嚢胞性卵巣疾患（ＣＯＤ）を患うので、本発明の一態様は、ウシのＣＯＤを予防し、処置し、かつ／または改善するための、２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤の使用である。

また、２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤の組合せは、１７−βエストラジオールのレベルを維持することができること、そして産卵雌鶏の生殖寿命を維持することが見出された。１７−βエストラジオールは、ウシ受胎能にとっても重要な循環ホルモンであるので、本発明の別の態様は、ウシ、特に搾乳牛および育種に用いられる乳牛において１７−βエストラジオールのレベルを維持するための、２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤の組合せの使用である。

また、本発明に従って、伝統的に抗酸化剤と考えられる生物活性物質もまた、卵巣の健康に有益である抗炎症活性を有することが見出された。

２５−ＯＨ Ｄ２および２５−ＯＨ Ｄ３は、投与後、同じように作用し得るので、別々に、抗酸化剤／抗炎症剤と組み合わせて用いられてもよいし、２５−ＯＨ Ｄ３および２５−ＯＨ Ｄ２の双方の混合物が、抗酸化剤／抗炎症剤と組み合わせて用いられてもよいと想定される。一緒に用いられるならば、２５−ＯＨ Ｄ３：２５−ＯＨ Ｄ２の比率は、本発明の重要な部分ではない。２５−ＯＨ Ｄ３のみが用いられるのが好ましい。

本発明の抗酸化剤／抗炎症剤は、アスコルビン酸、ビタミンＥ、およびカロテノイドの組合せを含む。カロテノイドは、リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される少なくとも１つである。最も好ましいのは、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン、およびゼアキサンチンである。ゆえに、本発明の一態様は、２５−ＯＨ Ｄ３、上述のカロテノイドの１つまたは複数、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組合せである。別の実施形態は、２５−ＯＨ Ｄ２、上述のカロテノイドの１つまたは複数、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組合せである。別の実施形態は、２５−ＯＨ Ｄ３、２５−ＯＨ Ｄ２、上述の１つまたは複数、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組合せである。

［組成物］
本発明の別の態様は、
ａ）２５−ＯＨ Ｄ、
ｂ）リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択されるカロテノイド、
ｃ）ビタミンＥ、
ｄ）アスコルビン酸、
の組合せであり、
ｅ）場合によってはさらに、
ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビオチン、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、およびセレンからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、卵巣の健康を増強するための、ウシ飼料への添加用の２５−ＯＨ Ｄ３である。好ましくは、少なくともビタミンＤは、更なる生物活性成分である。時折、更なる生物活性成分として、少なくともビタミンＤおよびセレンが挙げられる。場合によっては、全ての更なる生物活性成分が加えられる。

更なる態様は、卵巣の健康を増強するための、ウシ飼料への添加用の、２５−ＯＨ Ｄ、本発明の１つまたは複数のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組合せであり、これは、場合によってはさらに、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。時折、更なる生物活性成分として、ビオチンが挙げられる。時折、更なる生物活性成分として、ビタミンＤおよびビオチンが挙げられる。時折、更なる生物活性成分として、場合によっては上述の全ての生物活性成分が挙げられる。

［プレミックス］
本発明の別の態様が、２５−ＯＨ Ｄ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、および上述のカロテノイドの１つまたは複数の組合せを含む、ウシ飼料用のプレミックスである。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。プレミックスおよび以降の栄養補助剤は、卵巣と関連する有害な症状、好ましくはＣＯＤを向上させる／改善する。一部の実施形態において、プレミックスまたは以降の栄養補助剤はまた、
ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を含む。時折、更なる生物活性成分として、少なくともビタミンＤおよびセレンが挙げられる。場合によっては、全ての更なる生物活性成分が加えられる。

本発明の別の態様は、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの更なる生物活性成分をさらに含む栄養補助剤用のプレミックスである。時折、更なる生物活性成分として、ビオチンが挙げられる。時折、更なる生物活性成分として、ビタミンＤおよびビオチンが挙げられる。時折、更なる生物活性成分として、場合によっては上述の全ての生物活性成分が挙げられる。

別の態様において、本発明の２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤は、完全な飼料が給餌されることで、ビタミン／ミネラル欠乏性ではない全てのウシに用いられる。ゆえに、本発明の２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／組合せは、ビタミン欠乏症または他の栄養欠乏症を治すように作用することはない。これは、前掲の生理学的投薬と考えられ得る。

一部の実施形態において、本発明の２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤は、基礎飼料への唯一の添加成分である。

図１は、２５−ＯＨ Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤と組み合わせた、不断給餌による飼料摂取に応じた、ブロイラー畜種雌鶏のグルコースクリアランスおよびインシュリン分泌を示す。雌鶏は、摂食の３週後に羽の静脈を通して単回用量のグルコース（０．５ｇ／体重ｋｇ）が注射された。血液サンプルは、グルコース注入後の示された時点にて、羽の静脈のカニューレ挿入によって収集された（ｎ＝３）。 図２は、２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤と組み合わせた、不断給餌による飼料摂取に応じた、ブロイラー畜種雌鶏の組織インターロイキン−１β含有量および血漿ＩＬ−６レベルを示す。組織サンプルおよび血液サンプルは、摂食治験の１０週後に収集された。上付き文字が異なる平均値は有意に異なる（Ｐ＜０．０５、ｎ＝３）。 図３は、家禽において、家禽腹部に見られる腹水および卵巣の奇形の写真を示す。 図４は、飼料摂取が制限された、または不断給餌によるブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６およびＩＬ−１β濃度に及ぼす、２５−ＯＨ−Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤の食事補助の効果を示すグラフである。

明細書および特許請求の範囲の全体を通して用いられるように、以下の定義を適用する。

「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、または組合せを意味する。ビタミンＤ３のみが用いられるのが好ましい。

「アスコルビン酸」および「ビタミンＣ」は、明細書および特許請求の範囲の全体を通して、互換的に用いられる。

「基礎飼料」は、用いられる食物が、十分なビタミンおよびミネラルを動物に供給して、ウシがビタミンおよびミネラルで充実することを意味する。

「ウシ」は、乳牛、特に酪農業界において育てられている、または育種目的の乳牛を意味する。これはまた、その生殖可能性のために用いられる他の種、例えばバッファロー、ヤク、またはジャコウウシをも含む。

「２５−ＯＨ−Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤」は、基礎飼料への付加物としての飼料中の、明細書に記載される投薬量範囲にて投与される２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＥ、カロテノイド、およびアスコルビン酸の組合せを意味する。場合によっては、そして好ましくは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびそれらの組合せからなる群から選択される更なる生物活性成分は、２５−ＯＨＤ３、ビタミンＥ、カロテノイド、およびアスコルビン酸の組合せに加えられる。

「２５−ＯＨ Ｄ」は、あらゆる形態の２５−ヒドロキシビタミンＤ（すなわち、２５−ＯＨ Ｄ２もしくは２５−ＯＨ Ｄ３、またはそれらの混合物）を指す。２５−ＯＨ Ｄ３は、具体的に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を指す；２５−ＯＨ Ｄ２は、具体的に２５−ヒドロキシビタミンＤ２を指す。

「本発明のカロテノイド」は、リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンの少なくとも１つを意味する。最も好ましいのは、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン、およびゼアキサンチンの少なくとも１つである。多くの場合、ルテインおよびゼアキサンチンは、一緒に投与される。

［卵巣の問題］
本発明に従って、２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＥ、本発明の１つまたは複数のカロテノイド、およびアスコルビン酸を含む飼料の使用が、卵巣の健康に特異的に関与することが見出された。

卵巣の退化、大きな卵胞閉鎖もしくは腫瘍、または他の異常な形態、例えば卵墜を示す雌鶏において、産卵率が過去の記録よりも低くなる傾向がある。血漿脂質、ならびにセラミドもしくはインシュリンおよびレプチンのレベル、または組織のサイトカインおよび脂質の含有量等について、肥満および関連する調節不全を示す雌鶏は、迅速な卵巣退化および他の異常があることにより、産卵率が低下する傾向があり、これは容易に監視され得る。

ヒトにおける多嚢胞性卵巣症候群として、例えば以下の１つまたは複数の徴候が挙げられる：肥満、インシュリン抵抗性、高トリグリセリド血症、セラミドおよび非エステル型脂肪酸（ＮＥＦＡ）の循環濃度の増大、ならびにＩＬ−１βを含む全身性インフラモーゲン（ｉｎｆｌａｍｍｏｇｅｎ）。

乳牛において、多嚢胞性卵巣症候群に類似した症状が、嚢胞性卵巣疾患（ＣＯＤ）と呼ばれ、卵巣機能の最も一般的な異常であることから、酪農牛が不妊となると考えられている。ＣＯＤの乳牛は、出産間隔が長くなり、かつ受胎あたりの授精回数が増大する傾向があり、殺処分されるリスクがより大きい。ＣＯＤは伝統的に、卵巣の１つにおける、直径が２．５ｃｍ以上の大きな卵胞様構造体の、少なくとも１０日間存続する存在と定義されている。疾患の病因は完全には理解されていないが、卵胞嚢胞の進行は、エストラジオールに対する視床下部の不応答性が関与するようである（Ｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ ２０１５ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５６：６４−７４参照）。

ゆえに、本発明の一態様は、ウシのＣＯＤを改善するための、２５−ＯＨＤおよび抗酸化剤／抗炎症剤の使用である。

［１７−βエストラジオールレベルの低下の改善］
本発明に従って、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ３および／または２５−ＯＨ Ｄ２）および抗酸化剤／抗炎症剤の組合せが、１７−βエストラジオールレベルの低下を改善することが見出された。

ゆえに、本発明の一態様は、ウシの１７−βエストラジオールレベルの低下を改善することによって生産寿命を延ばすための、２５−ＯＨ Ｄおよび抗酸化剤／抗炎症剤の使用であり；好ましくは、ウシは、搾乳牛、または畜種として維持される乳牛である。

１７−βエストラジオールは、発情行動を誘導する、乳牛中の内因性ホルモンである。多くの乳牛は容易には、出産後に発情期に再び入らないし、発情期の長さは、授精を確実にするほど十分に長くない。ゆえに、２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の組合せは、乳牛において、より高いレベルの１７−βエストラジオールを維持する一助となり得る。

３．用量
本発明の一態様において、本発明の２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の組合せは、ビタミン欠乏個体ではなくビタミン充実個体に投与される。ビタミン充実状態は、好ましくは、少なくとも最小量のビタミンおよびミネラルをヒトに供給する、バランスのよい食事に起因する。ゆえに、本発明の組合せは好ましくは、基本の食事に加えて用いられる。

２５−ＯＨ Ｄ３：２５−ＯＨ Ｄ３は、１日の投薬量中に存在し、２５００ＩＵから４００００ＩＵ、好ましくは約２５０００ＩＵから３００００ＩＵである。

ビタミンＥ：１日の投薬量は、５００〜４０００ｍｇ／日、好ましくは１０００〜４０００ｍｇ／日に及んでよい。

アスコルビン酸：アスコルビン酸の量は、２５０〜５００ｍｇ／日に及んでよい。

リコピン：リコピンの量は、１５〜１２５０ｍｇ／日；好ましくは５００〜８００ｍｇ／日に及んでよい。

アスタキサンチン：アスタキサンチンの量は、１〜１５０ｍｇ／日、好ましくは２〜５０ｍｇ／日、より好ましくは５〜２０ｍｇ／日に及んでよい。

β−クリプトキサンチン：β−クリプトキサンチンの量は、１〜１００ｍｇ／日；好ましくは２〜３０ｍｇ／日；より好ましくは５〜１５ｍｇ／日に及んでよい。

ベータ−カロテン：ベータ−カロテンの量は、３００〜１０００ｍｇ／日；好ましくは５００〜８００ｍｇ／日に及んでよい。

ゼアキサンチン：ゼアキサンチンの量は、１〜６０ｍｇ／日；好ましくは２〜２０ｍｇ／日；より好ましくは３〜１０ｍｇ／日に及んでよい。

ルテイン：ルテインの量は、１から２００ｇ／日に及んでよく、好ましくは５０ｍｇ／日からである。

カンタキサンチン：カンタキサンチンの量は、２０ｍｇ／日を超えるべきでない。

［典型的な１日の配合 １：］
２５−ＯＨ Ｄ３：２５００〜４００００ＩＵ、好ましくは２５０００ＩＵ
ビタミンＥ：４０００ｍｇ
アスコルビン酸：２５０〜５００ｍｇ、好ましくは５００
クリプトキサンチン：１０ｍｇ

［典型的な１日の配合＃２：］
２５−ＯＨ Ｄ３：２５００〜４００００ＩＵ、好ましくは３００００ＩＵ
ビタミンＥ：１０００ｍｇ
アスコルビン酸：２５０〜５００ｍｇ、好ましくは５００
ルテイン：５００〜８００ｍｇ
（場合により）ゼアキサンチン：６ｍｇ

［典型的な１日の配合＃３］
２５−ＯＨ Ｄ３：２５００〜４００００ＩＵ、好ましくは３００００ＩＵ
ビタミンＥ：１０００〜３０００ｍｇ
アスコルビン酸：２５０〜５００ｍｇ
リコピン：２０ｍｇ

［典型的な１日の配合＃４］
２５−ＯＨ Ｄ３：２５００〜４００００ＩＵ、好ましくは２５０００ＩＵ
ビタミンＥ：２００〜６００ｍｇ、好ましくは３００〜５００ｍｇ
アスコルビン酸：２５０〜５００ｍｇ、好ましくは５００
アスタキサンチン：２０ｍｇ

［典型的な１日の配合＃５］
２５−ＯＨ Ｄ３：２５００〜４００００ＩＵ、好ましくは３００００ＩＵ
ビタミンＥ：２００〜６００ｍｇ、好ましくは３００〜５００ｍｇ
アスコルビン酸：２５０〜５００ｍｇ、好ましくは５００
ベータ−カロテン：５００〜８００ｍｇ

好ましい比率として、以下が挙げられる。

［場合による更なる成分］
先に記載される栄養補助剤、食物補助剤、または医薬組成物のそれぞれに、追加成分の少なくとも１つが加えられてよい。以下の成分の好ましくは少なくとも１つ、より好ましくは複数が加えられる。他の実施形態において、以下の成分の全てが加えられる。
ビタミンＤ３：ビタミンＤ３の量は、１〜１００μｇ／日；好ましくは１〜５０μｇ／日；より好ましくは５〜２５μｇ／日に及んでよい。
ビタミンＢ２：ビタミンＢ２の量は、０．５〜３００ｍｇ／日；好ましくは５〜１００ｍｇ／日；より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日に及んでよい。
ナイアシン：ナイアシンの量は、１〜３００ｍｇ／日；好ましくは５〜１００ｍｇ／日；より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日に及んでよい。
パントテン酸：パントテン酸の量は、１〜３００ｍｇ／日；好ましくは５〜１００ｍｇ／日；より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日に及んでよい。
葉酸：葉酸の量は、５０〜１００μｇ／日；好ましくは４００〜８００μｇ／日；より好ましくは４００〜６００μｇ／日に及んでよい。
ビオチン：ビオチンの量は、５μｇから１０ｍｇ／日；好ましくは３０μｇ〜５ｍｇ／日；より好ましくは０．１〜１ｍｇ／日に及んでよい。
亜鉛：亜鉛の量は、１〜４０ｍｇ／日；好ましくは５〜４０ｍｇ／日；より好ましくは１０〜２０ｍｇ／日に及んでよい。
銅：銅の量は、０．４〜１０ｍｇ／日；好ましくは０．７〜５ｍｇ／日；より好ましくは０．９〜３ｍｇ／日に及んでよい。
マンガン：マンガンの量は、１〜１０ｍｇ／日；好ましくは１〜５ｍｇ／日；より好ましくは１〜３ｍｇ／日に及んでよい。
セレン：セレンの量は、２０〜４００μｇ／日；好ましくは５０〜２００μｇ／日；より好ましくは５０〜１００μｇ／日に及んでよい。

プレミックスは、上記の用量、および好ましい用量を与えるように調製されてよい。本発明の一部を形成する一プレミックスが配合されて、１グラムのプレミックスが、１キログラムの栄養補助剤、食物補助剤、または医薬組成物に加えられて、生じた栄養補助剤、食物補助剤、または医薬組成物は、先のいずれかの所定の投薬量で記載される投薬量を含有する。勿論、個々の成分の量は変動してよいので、１キログラムのプレミックスが、１メートルトンの栄養補助剤、食物補助剤、または医薬組成物に加えられて、生じた飼料は、先のいずれかの所定の投薬量で記載される投薬量を含有する。この具体的な説明が、以下の実施例に記載されている。

以下の非限定的な実施例は、本発明をより十分に説明するために示される。

［実施例］
［実施例１］
合計３０羽の４５週齢のブロイラー畜種雌鶏（ＲＯＳＳ ３０８）を、研究用に市販されている群れから得た。ブロイラー畜種産卵用の基礎飼料を、表１に示すように配合した。算出した栄養組成を、表２に示す。

飼料に、抗酸化剤／抗炎症剤（ビタミンＥ、アスコルビン酸、カンタキサンチン）およびレベルを高めた選択ビタミンと組み合わせて、６９ｍｃｇ／飼料ｋｇの２５−ＯＨ Ｄ３を補い、または補わなかった。以下のような摂食レジメン（制限的、および不断的）に従う３つの処置群に、雌鶏をランダムに割り当てた。
基礎飼料−摂食制限（１４０ｇ／日）
基礎飼料−不断給餌による
基礎飼料−不断給餌による＋６９ｍｃｇ／飼料ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤

１４時間：１０時間の明：暗期間の、２５±３℃の温度に制御した部屋に置いたワイヤケージ内に、雌鶏を個々に収容した。水は、不断給餌により摂取可能であった。実験期間は、１０週間続いた。摂食治験の３週後に、一部の鳥を、関連する血漿パラメータ分析に用いた。実験終了後、雌鶏を安楽死させて、更なる研究用の組織サンプル収集のために犠牲にした。

［実施例２］
［結果および考察］
［２５ヒドロキシＤ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、死亡率を低くし、かつ産卵、卵巣の形態、および血漿１７βエストラジオールレベルを向上させた］
エストラジオールの分泌は、排卵卵胞が良好であるための特徴である。ゴナドトロピンの排卵前期サージをトリガーする役割に加えて、エストラジオールは、卵巣内部の成長、分化、および生存の重要な因子である。２５−ヒドロキシＤ３および抗酸化剤／抗炎症剤の包含は、鳥において、不断給餌による飼料摂取下で、死亡率、ならびに卵巣の退化および卵巣の腫瘍様形態の発生率を引き下げ、産卵を増やし、かつ血漿エストラジオールレベルを維持した。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、障害のあるグルコースクリアランスおよびインスリン感受性を改善した］
飼料の２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の包含により、１０週間の過食雌鶏において、空腹時の血漿グルコースおよび非エステル型脂肪酸のレベルの改善によって明示されるように、インシュリン抵抗性が改善する（表４）。グルコースクリアランス試験において、細身の雌鶏は、グルコース注入の３０〜６０分後、非常に急激なクリアランス率を示したが、逆に肥満した雌鶏は、３０〜９０分後、クリアランス率は非常に緩慢であった（図１）。インシュリン分泌において、肥満雌鶏は、断食状態下で、そしてグルコース注入後、細身の雌鶏と比較した場合に、より高い血漿インシュリンレベルを示した（図１）。グルコースクリアランスおよびグルコース誘発性インシュリン分泌の双方が、３週間の過食雌鶏において、２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の包含によって正された（図１）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、異脂肪血症を改善した］
不断給餌した雌鶏は、血漿トリグリセリド、セラミド、およびスフィンゴミエリンのレベルを高めた。しかしながら、２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の組合せの補助は、不断給餌した雌鶏の血漿中のこれらの脂質代謝物質のレベルを低くした（表５）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、組織のトリグリセリドおよびセラミドの蓄積含有量を引き下げた］
肝臓、心臓、および脚筋中のトリグリセリドおよびセラミドの蓄積は、不断給餌した雌鶏よりも、補助的に２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤を給餌した雌鶏で低かった（表６）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、過食ブロイラー雌鶏において、組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生および血漿ＩＬ−６の濃度を低下させた］
脂肪組織、肝臓、脚筋および胸筋、ならびに心臓における循環ＩＬ−６レベルおよびＩＬ−１β産生の抑制によって明示されるように、肥満関連炎症は、飼料の２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤の補助によって改善された（図２）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、不断給餌したブロイラー畜種雌鶏において、脂肪毒性を改善した］
肥満の中心的な合併症は、インシュリン抵抗性の進行である。このとき、インシュリンは、その一次標的組織、骨格筋および肝臓において、食後の栄養貯蔵を誘発することができない。理論に拘束されることを望むものではないが、末梢組織におけるインシュリンシグナル伝達のダウンレギュレーションに関与する、全身のインスリン感受性の全体に、脂肪蓄積の増大がどのように影響を及ぼすかについて、可能性のある２つの機構が説明し得るように思われる。第一に、細胞または組織への栄養の送達が、貯蔵能力を超えるので、インシュリン作用を阻害する代謝物質が生じる。特に重要なのは、脂質誘導体、例えばトリアシルグリセロールおよびセラミドが、特定のインシュリンシグナル伝達中間体を阻害することで、食後のグルコース吸収および／またはグリコーゲン合成を阻止することが示されたことである。不断給餌したブロイラー畜種の雌の場合、末梢組織におけるこれらの代謝物質の持続的蓄積がおそらく、雌鶏全体のインシュリン抵抗性の、そして細胞毒性の進行の状態の維持に関与する。第二に、肥満の増大は、脂肪細胞から、または脂肪体に浸潤するマクロファージから産生される炎症誘発性サイトカインの循環レベルの上昇によって特徴付けられる慢性的炎症状態を誘導する。これらの炎症性メディエータは、インシュリンシグナル伝達に直接拮抗すること、そしてまた、異化プロセスを誘導することにより、栄養代謝物質の、インシュリン反応器官への送達をさらに増大させることが示された。

過剰な飽和脂肪酸を形成するグルコースの全体的な過剰供給、そしてそれに従う非脂肪組織における脂質の蓄積は、活性脂質（スフィンゴ脂質）の細胞レベルを上昇させ、これが、炎症反応の活性化および脂肪毒性の進行と共に、代謝調節に関係するシグナル伝達経路を阻害する。特に、セラミドは、過剰な栄養（すなわち、飽和脂肪酸）および炎症性サイトカインの双方をインシュリン抵抗性の誘導に関連させる、推定の中間体である。さらに、セラミドは、種々の異なる細胞型において毒性であり、心臓、膵臓、および血管に損傷を与えることができる。さらに、２５−ヒドロキシＤ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、飽食するまで給餌されたブロイラー畜種雌鶏において起こる肥満の増大に由来する、代謝性調節不全および内分泌調節不全、ならびに炎症誘発反応の悪影響を改善するのに有効であった。

［２５−ＯＨ Ｄ３および抗酸化剤／抗炎症剤は、過食ブロイラー雌鶏の心疾患罹患、腹水、および炎症を改善する］
心臓は、過剰な脂質蓄積のために、機能不全になるおそれがある。不断給餌は、心臓におけるトリグリセリド蓄積を促進した。このことは、心臓の脂肪酸利用能が増大して、トリグリセリドに適応的にエステル化されることを示唆した。また、心臓のセラミド含有量もまた、不断給餌の結果として増大した。セラミドは、脂肪毒性心筋症における心臓毒であり、これは、免疫細胞のより多くの心臓浸潤によって明示されるように、炎症反応を誘発した（表７）。

心肥大は、心臓への作業負荷の増大に対する臨床的適応反応を表す。しかしながら、神経因子およびホルモン因子に対する心臓の反応もまた、後負荷または血管抵抗の上昇から独立した肥大性変化を刺激し得る。食物過負荷誘発性の心臓の代償的成長が、ブロイラー畜種雌鶏において起こった。心肥大は不適応となって、最終的に病的状態に進行して、心不全の原因となるおそれがある。これらの結果により、心臓における脂肪毒性の発達および肥大成長が、炎症反応を誘発する傾向があるという事実が支持された。

図４は、飼料摂取が制限された、または不断給餌によるブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６（上のグラフ）およびＩＬ−１β濃度（下のグラフ）に及ぼす、２５−ＯＨ−Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤の食事補助の効果を示す。結果を、平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）で表した。バーの上の文字が異なる平均値は有意に異なる（Ｐ＜０．０５）。

［図４の結論および注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋抗酸化剤／抗炎症剤は、不断給餌した雌鶏において、慢性的全身性炎症を改善した。

Claims (4)

1. ウシ嚢胞性卵巣疾患（ＣＯＤ）の発症を処置し、予防し、もしくは遅延させ、もしくはＣＯＤの徴候を改善し、または１７−βエストラジオールの量を増大させるために飼料添加物として用いられる、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにリコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドを含む組成物。
2. ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、およびセレンからなる群から選択される、少なくとも１つの更なる生物活性成分をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記２５−ヒドロキシビタミンＤは、２５ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ Ｄ３）である、請求項１または２に記載の組成物。
4. ウシのＣＯＤの徴候を処置し、もしくは改善し、または１７−βエストラジオールの量を増大させる方法であって、ウシに、
   ２５−ヒドロキシビタミンＤ３、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにリコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドを含む組合せを投与すること
   を含む方法。

Images