JP6859570B2 - ヒト機能性食品用の２５−ヒドロキシビタミンｄおよび酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせ - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、ヒト機能性食品、医薬品、および栄養補助食品で使用するための、２５−ヒドロキシビタミンＤ（「２５−ＯＨ Ｄ３」および／または「２５−ＯＨ Ｄ２」）ならびに酸化防止剤／抗炎症剤（アスコルビン酸、ビタミンＥ、およびカロテノイド）の組み合わせに関する。栄養補助剤のこの組み合わせは、摂食亢進および関係する肥満に関連する様々な副作用を防ぐ。本発明はまた、２５−ヒドロキシビタミンＤおよび酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせを含有する機能性食品、機能性食品プレミックス、医薬品、および食品にも関する。
［発明の背景］

本出願は、２０１５年１月１５日に提出された米国仮特許出願第６２／１０３７６９号明細書および２０１５年５月８日に提出された欧州特許第１５１６６９３７．１号明細書の優先権を主張し、これらの両方は、参照によって本明細書においてこれによって組み込まれる。

摂食亢進（食べ過ぎること）およびその関係する肥満は、ヒトにおいて様々な問題を引き起こすことがある。これらの問題は、卵巣機能不全および不妊ならびに心臓血管系および血糖系に関係する代謝障害を含む。

興味深いことに、女性の卵巣疾患の動物モデルの１つは、家禽である。家畜産卵鶏は、高い有病率で卵巣癌を発症する唯一の非ヒト動物である。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ ２０１３ Ｎａｔｕｒｅ １３：４３２−４３６およびＷａｌｚｅｍ ｅｔ ａｌ ２０１４ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ５：１９９−２０６を参照されたい。雌鳥卵巣癌の進行ならびに転移性増殖および腹水症の場所は、女性において観察されるものに類似している。

家禽の中には摂食亢進に関係する肥満を経験する品種もある。一般に、飼育業者は、肥満の有害な事象を予防するために群れに与えるえさの量を制限するであろう。しかしながら、群れの所望される成長を確実にするだろう提供するべき飼料の適切な量を決定するのが困難であることが多く、また制限された給餌条件下で、個体が攻撃的になることがあり、他の鳥を傷つけるだけではなく、それら自体が肥満になることがある。

生殖発生の間に過食したメスのブロイラー種畜は、過剰な大きな黄色卵巣濾胞を生じるだけではなく、より多くの閉鎖黄色卵胞をも生成し、卵胞閉鎖、殻の薄いまたは薄く透き通った卵、二黄卵の産生、卵黄性腹膜炎（腹腔中に黄卵が存在する）、卵が複数個ある日、および順番どおりに行われない産卵などのようないくつかの生殖性の問題を含む不規則な産卵および欠陥卵症候群（ＥＯＤＥＳ）を共通して見せ、非種卵の産生の増加をもたらす。

対照試験は、任意の給餌（すなわち飽和に至るまで給餌したブロイラーの種畜雌鳥）が、不良な卵産生、高い死亡率、および異常な卵巣の構造（主として明白な序列卵胞閉鎖）をもたらしたことを報告した。飼料を制限した雌鳥とは対照的に、任意の給餌はまた、体脂肪蓄積の増進；肝臓トリアシルグリセロール蓄積；ならびに血漿グルコース、非エステル化脂肪酸、超低密度リポタンパク質、トリアシルグリセロール、リン脂質、セラミド、およびスフィンゴミエリンの濃度の上昇を含む代謝調節異常をも誘発した。

さらに、肝臓および循環セラミドおよびスフィンゴミエリンの蓄積ならびに肝臓および脂肪組織における炎症促進性ＩＬ−１β発現のアップレギュレーションは、飼料飽和雌鳥において脂肪毒性の発症を全身的に示した。セラミドは、ある栄養素（すなわち飽和脂肪）および炎症性サイトカイン（たとえば腫瘍壊死因子−α、ＴＮＦα）を細胞機能および拮抗性インスリンシグナル伝達およびミトコンドリア機能の調節に関連づける、鍵となる中間体である。さらに、特に感受性の細胞型に対するその毒作用の結果として、セラミドは、心臓、膵臓、および血管系に損傷を与える能力を有する。飼料飽和雌鳥における、卵胞閉鎖、卵巣退縮、および循環エストラジオールレベルの低下を含む障害性の卵巣機能不全に至る脂肪毒性は、セラミド蓄積ならびにＩＬ−１β、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、およびスフィンゴミエリナーゼ転写物の存在量のアップレギュレーションによってさらに例証されたが、序列卵胞内でプロテインキナーゼＡｋｔ活性化を抑制した。インビボにおける証拠は、したがって、ブロイラー雌鳥における過食誘発性の卵胞閉鎖および卵巣退化の進行を媒介する際のセラミドおよびＩＬ−１βの作用を定めた。

商用ブロイラー種畜の群れにおいて厳密に実行された制限給餌レジメンにもかかわらず、種畜雌鳥は本来摂食亢進であることにより、それでもなお非常に過食しやすい。さらに、種畜飼育場管理者は、卵産生の前および初めのうちにならびに産生のピークに向けて、その間に、およびその後にいつどのように給餌するかに直面している。過体重の雌鳥における肥満に関連する生殖効率の有害で有毒性の影響を寛解させるために、どのような管理および栄養学的ツールを種畜飼育場管理者がどのように適用し、実行することができるかについて基本的で根本的な問題がある。

Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（２５−ＯＨ−Ｄ３についての登録商標；ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能）は、家禽、豚において骨の健康を促進するためにおよびヒトにおけるビタミンＤ欠乏症に対して使用されてきた。

２５−ＯＨ Ｄ３およびカンタキサンチンの組み合わせもまた、家禽において使用されてきた。国際公開第２０１０／０５７８１１号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ，ＢＶ）は、家禽において孵化、繁殖力、および胚死亡の低下を改善するのに使用されるこの組み合わせを記載する。この組み合わせは、商標ＭＡＸＩＣＨＩＣＫの下で利用可能である。アスコルビン酸を含みかつビタミンＥレベルが高いことも、摂食亢進に関係する肥満の副作用を寛解させるために使用することも、この特許公報において言及されていない。

ニワトリが通常の飼育条件下で十分なビタミンＣを産生することができるので、ビタミンＣ（アスコルビン酸）は、家禽食餌にサプリメントとして含まれないことが多い。しかしながら、ビタミンＣは、熱ストレスのある状況においてなどのように、ある特定の条件において使用されてきた。

ビタミンＥは、家禽飼料に対して一般に追加される。家禽種について推奨される用量は、動物の年齢に依存して、約５０〜１００ＩＵ／飼料１ｋｇの範囲にわたる傾向がある。

国際公開第１４／２０２４３３号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ Ｂ．Ｖ）は、本質的な卵の品質を改善するための、すなわち卵黄を包む卵黄膜の強度を強化する、カンタキサンチンおよび２５−ＯＨ Ｄ３の組み合わせを教示する。この組み合わせにアスコルビン酸を追加する教示も、摂食亢進に関係する肥満の副作用を寛解させることにおけるその使用についての教示もない。

国際公開第１４／１９１１５３号パンフレット（ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ Ｂ．Ｖ）は、カンタキサンチンならびにビタミンＣ、ビタミンＥ、セレンの少なくとも１つならびに任意選択でチモール、オイゲノール、バニリン、およびガンマ−テルピネンの少なくとも１つの組み合わせが、特に群れがワクチン接種に関連するストレスを受けやすい場合に、免疫の状態、骨の健康、骨格の発達および成長、ならびに飼料効率を改善することができることを教示する。

ヒトにおいて卵巣疾患および心血管系に関係する問題を予防するまたは発病を遅延させるならびに摂食亢進に関連する体重増加を調整する必要性がある。
［発明の詳細な説明］

本発明に従って、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ３および／または２５−ＯＨ Ｄ２）ならびに酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせが、卵巣の健康、特に多嚢胞性卵巣症候群に役立つことができることが分かった。卵巣の健康に役立つことに加えて、２５−ＯＨ Ｄおよび酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせは、心血管系および代謝の健康に役立ち、食べ過ぎる人々において体重増加を調整することができる。本発明に従って、酸化防止剤として以前より考えられてきた生理活性剤もまた、卵巣および心血管系の健康に役立つ抗炎症性活性をも持つこともまた分かった。

２５−ＯＨ Ｄ２および２５−ＯＨ Ｄ３が投与後に同様に作用し得るので、どちらとも酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて別々に使用されてもよいまたは２５−ＯＨ Ｄ３および２５−ＯＨ Ｄ２の両方の混合物が酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて使用されてもよいことが想定される。一緒に使用される場合、２５−ＯＨ Ｄ３：２５−ＯＨ Ｄ２の比は本発明の重要な部分ではない。２５−ＯＨ Ｄ３が単独で使用されることは好ましい。

本発明の酸化防止剤／抗炎症剤は、アスコルビン酸、ビタミンＥ、およびカロテノイドの組み合わせを含む。カロテノイドは、リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される少なくとも１つである。最も好ましいのは、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン、およびゼアキサンチンである。したがって、本発明の一態様は、２５−ＯＨ Ｄ３、１つまたは複数の前述のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせである。別の実施形態は、２５−ＯＨＤ２、１つまたは複数の前述のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせである。別の実施形態は、２５−ＯＨＤ３、２５−ＯＨＤ２、１つまたは複数の前述のもの、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせである。

［組成物］
本発明の他の態様は、２５−ＯＨ Ｄ、１つまたは複数の前述のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせであり、この組み合わせは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビオチン、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、およびセレンからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分を任意選択でさらに含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。好ましくは、少なくともビタミンＤは、さらなる生理活性成分である。場合によっては、さらなる生理活性成分は、少なくともビタミンＤおよびセレンを含む。ある場合には、さらなる生理活性成分がすべて追加される。

さらなる態様は、２５−ＯＨ Ｄ、本発明の１つまたは複数のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせであり、この組み合わせは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分を任意選択でさらに含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。場合によっては、さらなる生理活性成分は、ビオチンを含む。時には、さらなる生理活性成分は、ビタミンＤおよびビオチンを含む。時には、さらなる生理活性成分は、任意選択の前述の生理活性成分をすべて含む。

［機能性食品、医薬品、健康補助食品］
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ２または２５−ＯＨ Ｄ３またはその混合物、アスコルビン酸、ビタミンＥ、および１つまたは複数の前述のカロテノイドの組み合わせを含む、健康補助食品などのような機能性食品または医薬品である。

さらに別の実施形態は、２５−ＯＨ Ｄ、１つまたは複数の前述のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせを含む、健康補助食品などのような機能性食品または医薬品であり、この組み合わせは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分を任意選択でさらに含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。場合によっては、さらなる生理活性成分は、少なくともビタミンＤおよびセレンを含む。ある場合には、さらなる生理活性成分がすべて追加される。

別の実施形態は、２５−ＯＨ Ｄ、１つまたは複数の前述のカロテノイド、ビタミンＥ、およびアスコルビン酸の組み合わせを含む、健康補助食品などのような機能性食品または医薬品であり、この組み合わせは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分を任意選択でさらに含む。場合によっては、さらなる生理活性成分は、ビオチンを含む。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。場合によっては、さらなる生理活性成分は、ビタミンＤおよびビオチンを含む。場合によっては、さらなる生理活性成分は、任意選択の前述の生理活性成分をすべて含む。

［プレミックス］
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、および１つまたは複数の前述のカロテノイドの組み合わせを含む、栄養補助食品またはビタミン補助剤などのような機能性食品のためのプレミックスである。好ましくは、２５−ＯＨ Ｄは、２５−ＯＨ Ｄ３である。プレミックスおよび補助機能性食品は、卵巣に関連する有害な状態、詳細には多嚢胞性卵巣症候群を改善する／寛解させる。いくつかの実施形態では、プレミックスまたは補助機能性食品がまた、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分をも含む。場合によっては、さらなる生理活性成分は、少なくともビタミンＤおよびセレンを含む。ある場合には、さらなる生理活性成分がすべて追加される。

本発明の別の態様は、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる生理活性成分をさらに含む機能性食品のためのプレミックスである。場合によっては、さらなる生理活性成分は、ビオチンを含む。場合によっては、さらなる生理活性成分は、ビタミンＤおよびビオチンを含む。場合によっては、さらなる生理活性成分は、任意選択の前述の生理活性成分をすべて含む。

本発明の機能性食品または医薬品を使用する場合、人は、標準的に食べてもよくまたは食べ過ぎてもよく、卵巣、心臓血管系、および代謝系に影響を与え、かつ非カロリー制限食を食べることに通常関連する悪影響を経験する程度が低いまたは全く経験しないであろう。

図１は、２５−ＯＨ Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラーの種畜雌鳥のグルコースクリアランスおよびインスリン分泌を示す図である。雌鳥は、３週間の給餌の後に羽の静脈を通して一用量のグルコース（０．５ｇ／ｋｇ ＢＷ）を注入した。血液サンプルは、グルコース注入の後に示される時点で羽の静脈のカニューレ挿入を通して収集した、ｎ＝３。 図２は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラーの種畜雌鳥の組織インターロイキン−１β含有量および血漿ＩＬ−６レベルを示す図である。組織および血液サンプルは、１０週間の給餌治験の後に収集した。上付きの文字が異なる平均値は、有意差がある（Ｐ＜０．０５）、ｎ＝３。 図３は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤包含と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラーの種畜雌鳥の組織ＳＴＡＴ−３活性化を示す図である。組織および血液サンプルは、１０週間の給餌治験の後に収集した。上付きの文字が異なる平均値は、有意差がある（Ｐ＜０．０５）、ｎ＝３。 図４〜６は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤包含と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラー雌鳥の検死の間に撮った写真を示す図である。雌鳥は、１０週間の給餌治験の後に検死させた。 図４〜６は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤包含と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラー雌鳥の検死の間に撮った写真を示す図である。雌鳥は、１０週間の給餌治験の後に検死させた。 図４〜６は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤包含と組み合わせた、制約なしの飼料摂取に応じたブロイラー雌鳥の検死の間に撮った写真を示す図である。雌鳥は、１０週間の給餌治験の後に検死させた。 図７は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の卵産生に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す図である。 図８は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す図である。 図９は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す図である。 図１０は、制限されたまたは制約なしの飼料摂取下で２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を食事により補充した死んだ雌鳥の心臓の全体の形態を示す一連の写真を示す図である。 図１１は、制限されたまたは制約なしの飼料摂取下で２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を食事により補充した死んだ雌鳥の心臓の全体の形態を示す一連の写真を示す図である。 図１２は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥のＥＧＣに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す一連の心電図（ＥＧＣ）を示す図である。矢印は、パターンの不規則性を示す。 図１３は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の不整脈のＥＣＧパターンに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す一連のＥＧＣを示す図である。 図１４は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥（３５週齢）の心線維症に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す写真およびグラフを示す図である。 図１５は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の血漿ＩＬ−６およびＩＬ−１β濃度に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す図である。 図１６は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥（３５週齢）の心臓細胞アポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す写真である。 図１６は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥（３５週齢）の心臓細胞アポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す写真である。

本明細書および請求項の全体にわたって使用されるように、下記の定義が適用される。「２５−ＯＨ Ｄ」は、２５−ヒドロキシビタミンＤの任意の形態（すなわち２５−ＯＨ Ｄ２もしくは２５−ＯＨ Ｄ３またはそのミックスのいずれか）を指す。２５−ＯＨ Ｄ３は、詳細には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を指し、２５−ＯＨ Ｄ２は、詳細には２５−ヒドロキシビタミンＤ２を指す。

「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、または組み合わせのいずれかを意味する。単独で使用されるビタミンＤ３が、好ましい。

「摂食亢進」は、過度の摂食であり、人が摂取するカロリーが、彼らのエネルギー消費よりも大きい。

「体重増加の寛解」は、本明細書において記載される２５−ＯＨ Ｄおよび酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせを摂取しながら制約なしに食べる場合に体重増加の量が有意に低いことを意味する。カロリー栄養制限食を食べることと比較して好ましい体重増加があってもよい。

「アスコルビン酸」および「ビタミンＣ」は、本明細書および請求項の全体にわたって区別なく使用される。

「基礎食」は、家禽がビタミンおよびミネラルが十分となるように飼料により十分なビタミンおよびミネラルが家禽に補充されることを意味する。

「２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤」は、人が本明細書において示される服用量の範囲で、ビタミンまたはミネラルの欠乏症または不足を被らないように十分なビタミンおよびミネラルを提供する食餌に加えて投与される、２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＥ、本発明のカロテノイド（次のパラグラフを参照）、およびアスコルビン酸の組み合わせを意味する。任意選択で、好ましくは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、およびその組み合わせからなる群から選択されるさらなる生理活性成分は、２５−ＯＨＤ３、ビタミンＥ、カンタキサンチン、およびアスコルビン酸の組み合わせに対して追加される。

「本発明のカロテノイド」は、リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンの少なくとも１つを意味する。リコピン、アスタキサンチン、ルテイン、およびゼアキサンチンの少なくとも１つが最も好ましい。多くの場合、ルテインおよびゼアキサンチンは、一緒に投与される。

［１．卵巣の問題］
２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＥ、本発明の１つまたは複数のカロテノイド、およびアスコルビン酸を含む機能性食品、栄養補助食品、または医薬組成物の使用は、卵巣の健康に特に寄与することができることが本発明に従って分かった。本発明の機能性食品、栄養補助食品、または医薬品の使用は、多嚢胞性卵巣症候群に関連するこれらの状態のそれぞれを和らげる、低下させる、寛解させる、または排除することができる。

家禽、特に産卵鶏は、ヒト卵巣の健康について認識されている実験モデルである。たとえばＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ ２０１３“Ｔｈｅ ｈｅｎ ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ”Ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｒｅｖｉｅｗｓ／ｃａｎｃｅｒ １３：４３２−４３６およびＷａｌｚｅｍ ｅｔ ａｔ ２０１４“Ｏｂｅｓｉｔｙ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｅｍａｌｅ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｂｉｒｄｓ ａｎｄ Ｍａｍｍａｌｓ”Ａｄｖ．Ｎｕｔｒ ５：１９９−２０６を参照されたい。したがって、家禽研究において収集されたデータは、ヒトに適用可能である。

１．多嚢胞性卵巣症候群の症状：多嚢胞性卵巣症候群の女性は、多くの場合、肥満、インスリン抵抗性、高トリグリセリド血症、セラミドおよび非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）の循環濃度の増加、ならびにＩＬ−１βを含む全身性のインフラモゲン（ｉｎｆｌａｍｍｏｇｅｎ）の１つまたは複数などのような症状を経験する。２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および本発明のカロテノイドの組み合わせが、これらの症状を寛解させることができることが分かった。

したがって、本発明の別の態様は、ヒト多嚢胞性卵巣症候群の予防、ヒト多嚢胞性卵巣症候群の治療、多嚢胞性卵巣症候群の発症の遅延、および多嚢胞性卵巣症候群の症状の寛解からなる群から選択される使用の少なくとも１つのための、２５−ＯＨ Ｄ３、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにリコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドの組み合わせの使用である。

本発明の別の態様は、多嚢胞性卵巣症候群を発症する危険性のある人において、ヒト多嚢胞性卵巣症候群を治療する、多嚢胞性卵巣症候群の症状を寛解させる、または多嚢胞性卵巣症候群の発症を遅延させるための方法であって、多嚢胞性卵巣症候群を有するまたは多嚢胞性卵巣症候群を発症する危険性のある人に２５−ヒドロキシビタミンＤ３、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにリコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、ベータ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドを含む組み合わせの有効量を投与するステップを含む方法である。好ましい方法では、前述の人は、リコピン、アスタキサンチン、クリプトキサンチン、およびルテインからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドが投与される。

［２．代謝の問題］
摂食亢進に関連する、本発明の飼料／プレミックスの使用を通して和らげる、低下させる、または排除することができる代謝の問題は、
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス
ｂ）血漿異脂肪血症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、およびセラミド）の寛解
ｃ）肝臓、脚、胸肉、および心臓におけるトリグリセリドおよびセラミド蓄積の寛解
ｄ）組織炎症促進性ＩＬ−１β産生および血漿ＩＬ−６濃度の抑制
ｅ）心臓におけるＳＴＡＴ−３（シグナルトランスデューサーおよび転写活性化因子３）のリン酸化のアップレギュレーションによる心臓の保護および心機能の強化
ｆ）心臓への免疫細胞の浸潤の抑制
ｇ）腹水症の発生の減少を含む。

これらの前述の観察され改善された状態は、死亡率の低下、インスリンシグナル伝達の改善、脂肪毒性の発達および全身性炎症の減少、ならびに食糧過負荷誘発性の心臓の病気の発生に対する心臓保護メカニズムの活性化をもたらす。

［３．心血管系の問題］
群れの中の鳥は、「急死」を経験することがある。「急死」は、個々の鳥が以前にサインまたは疾病または外傷を示すことなく死んだことを意味する。鳥は、健康に見えるが、短い期間に羽を叩き、脚を動かして急に死に、その間、鳥は、しばしばひっくり返ってあおむけになる。鳥はまた、横向きまたはうつぶせになって死んでいるのが見つかるかもしれない。肉眼的病変は特にない。最近の研究は、死んだ鳥が心筋細胞および心内膜下プルキンエ細胞において病変を有し、これが診断を助け得ることを示す。

発明者らは、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせありまたはなしの制約なしにおよび制限食を給餌された群れにおいて、実施例３において詳述されるようにこの現象をさらに調査した。発明者らの結果のうちのいくつかを下記に示す。

制約なしに給餌された鳥において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を給餌された急死した鳥は、体重がより重かったが、相対的な肝臓、腹部の脂肪、および心臓の重量がより低かったことが本発明に従って分かった。急死の鳥では、制約なしの給餌が、心臓の順応性肥大を引き起こし、肥大性増殖の中には、病理学的に心室拡大に発達し得るものもある。その結果、心臓は、末梢組織に酸素を送るための血液供給の必要性を満たすためにポンプ機能を維持するためのより高い収縮性を必要とする。この状態が、心不全を引き起こしたかもしれない。

重要なことには、発明者らは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が、制約なしに給餌された鳥において心臓病を発病させる進行を弱め、その結果として、心不全の発生を減少させることが分かった。したがって、本発明の別の態様は、心不全に至ることがある心臓の問題の数を低下させる２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の使用である。

制限されたおよび制約なしに給餌された鳥において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を用いた鳥は、順応性肥大性増殖をそれほど示さず、ほとんどの過度の食糧が筋肉に分配され得、その結果として、ポンプ機能の増加のための心臓の肥大性増殖が、より高い成長速度（筋肉）に対する酸素供給の必要性を満たすことができず、したがって、不整脈および機能不全を引き起こし得るという仮説を支持する。

２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の包含は、下記の効果
・死んだ鳥の検死において観察される心臓の病的状態（拡大、心嚢液貯留、破裂）の発生の減少
・ＥＣＧパターンの不規則な発生の量の減少
・制約なしに給餌されたブロイラー雌鳥の不整脈の減少
・心臓の病的状態によって誘発される急死の改善
・制約なしに給餌された雌鳥における心線維症の寛解
・制約なしに給餌された雌鳥における慢性全身性炎症の寛解
・飼料摂取が制限されたまたは制約なしの雌鳥における心臓細胞アポトーシスの寛解
を有することが分かった。

したがって、２５ＯＨ Ｄ３＋酸化防止剤は、心臓血管系を保護することができる。補足の２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の使用は、関連する有毒性の影響を寛解させ、様々な心血管系の有益性を有する。したがって、本発明は、
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス
ｂ）血漿異脂肪血症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、およびセラミド）の寛解
ｃ）肝臓、脚、筋肉、および心臓におけるトリグリセリドおよびセラミド蓄積の寛解
ｄ）組織炎症促進性ＩＬ−１β産生および血漿ＩＬ−６濃度の抑制
ｅ）心臓におけるＳＴＡＴ−３（シグナルトランスデューサーおよび転写活性化因子３）のリン酸化のアップレギュレーションによる心臓の保護および心機能の強化
ｆ）心臓への免疫細胞の浸潤の抑制
ｇ）腹水症の発生の減少
ｈ）心血管系の問題による死亡の発生の減少
ｉ）心臓の病的状態（拡大、心嚢液貯留、破裂）の発生の減少
ｊ）ＥＣＧパターンの不規則な発生の量の減少
ｋ）不整脈の発生の減少
ｌ）心線維症の寛解
ｍ）慢性全身性炎症の寛解、ならびに
ｎ）心臓細胞アポトーシスの寛解
ｏ）インスリン抵抗性および／または血中グルコース調節の改善
からなる群から選択される、少なくとも１つの心血管系の有益性のための２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の使用を含む。

［３．用量］
本発明の一態様では、本発明の２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせが、ビタミンが不十分な個人ではなくビタミンが十分な個人に投与される。ビタミンが十分な状態は、好ましくは、人に最低量のビタミンおよびミネラルを少なくとも供給するバランス食によるものである。本発明の組み合わせは、したがって、好ましくは、基本食に加えて使用される。

２５−ＯＨ Ｄ３：２５−ＯＨ Ｄ３は、１日服用量中に存在し、１μｇ〜５０μｇ、好ましくは約５μｇ〜２５μｇである。いくつかの実施形態では、１０μｇが、使用される。

ビタミンＥ：１日服用量の量は、５〜７５０ｍｇ／日、好ましくは１０〜６００ｍｇ／日、より好ましくは１日当たり１００〜５００ｍｇの範囲にわたることができる。いくつかの実施形態では、４００ｍｇが、使用される。

アスコルビン酸：アスコルビン酸の量は、１〜１０００ｍｇ／日、好ましくは１００〜１０００ｍｇ／日の範囲にわたることができる。より好ましくは、アスコルビン酸の量は、２００〜１０００ｍｇ／日の範囲にわたることができる。

リコピン：リコピンの量は、１〜１５０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５〜３５ｍｇ／日である。

アスタキサンチン：アスタキサンチンの量は、１〜１５０ｍｇ／日、好ましくは２〜５０ｍｇ／日、より好ましくは５〜２０ｍｇ／日の範囲にわたることができる。

β−クリプトキサンチン β−クリプトキサンチンの量は、１〜１００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは２〜３０ｍｇ／日、より好ましくは５〜１５ｍｇ／日である。

ベータ−カロテン ベータ−カロテンの量は、１〜１００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは２〜２０ｍｇ／日、より好ましくは５〜１５ｍｇ／日である。

ゼアキサンチン：ゼアキサンチンの量は、１〜６０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは２〜２０ｍｇ／日、より好ましくは３〜１０ｍｇ／日である。

ルテイン：ルテインの量は、１〜１００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは２〜２０ｍｇ／日、より好ましくは６〜１２ｍｇ／日である。

カンタキサンチン：カンタキサンチンの量は、３０ｍｇ／日を超過するべきではない。

［代表的な毎日の処方１：］
２５−ＯＨ Ｄ３：５〜２５μｇ、好ましくは１０μｇ
ビタミンＥ ４００ｍｇ
アスコルビン酸：１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜１０００
クリプトキサンチン：１０ｍｇ

［代表的な毎日の処方＃２：］
２５−ＯＨ Ｄ３：５〜２５μｇ、好ましくは１２．５μｇ
ビタミンＥ：１０ｍｇ
アスコルビン酸：１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜１０００
ルテイン ６〜１２ｍｇ
（任意選択）ゼアキサンチン：６ｍｇ

［代表的な毎日の処方＃３］
２５−ＯＨ Ｄ３：５〜２５μｇ、好ましくは１２．５μｇ
ビタミンＥ：２００〜６００ｍｇ、好ましくは３００〜５００ｍｇ
アスコルビン酸：１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜１０００
リコピン：２０ｍｇ

［代表的な毎日の処方＃４］
２５−ＯＨ Ｄ３：５〜２５μｇ、好ましくは１０μｇ
ビタミンＥ：２００〜６００ｍｇ、好ましくは３００〜５００ｍｇ
アスコルビン酸：１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜１０００
アスタキサンチン：２０ｍｇ

［代表的な毎日の処方＃５］
２５−ＯＨ Ｄ３：５〜２５μｇ、好ましくは１２．５μｇ
ビタミンＥ：２００〜６００ｍｇ、好ましくは３００〜５００ｍｇ
アスコルビン酸：１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜１０００
ベータカロテン：１０ｍｇ

好ましい比は、以下のものを含む。

［任意選択のさらなる成分］
上記に列挙される機能性食品、栄養補助食品、または医薬組成物のそれぞれに、さらなる成分の少なくとも１つが追加されてもよい。好ましくは少なくとも１つの、より好ましくは２つ以上の下記の成分が追加される。他の実施形態では、下記の成分がすべて、追加される。
ビタミンＤ３−ビタミンＤ３の量は、１〜１００μｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは１〜５０μｇ／日、より好ましくは５〜２５μｇ／日である。
ビタミンＢ２：ビタミンＢ２の量は、０．５〜３００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５〜１００ｍｇ／日、より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日である。
ナイアシン：ナイアシンの量は、１〜３００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５〜１００ｍｇ／日、より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日である。
パントテン酸：パントテン酸の量は、１〜３００ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５〜１００ｍｇ／日、より好ましくは１０〜５０ｍｇ／日である。
葉酸：葉酸の量は、５０〜１００μｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは４００〜８００μｇ／日、より好ましくは４００〜６００μｇ／日である。
ビオチン：ビオチンの量は、５μｇ〜１０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは３０μｇ〜５ｍｇ／日、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／日である。
亜鉛：亜鉛の量は、１〜４０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５〜４０ｍｇ／日、より好ましくは１０〜２０ｍｇ／日である。
銅：銅の量は、０．４〜１０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは０．７〜５ｍｇ／日、より好ましくは０．９〜３ｍｇ／日である。
マンガン：マンガンの量は、１〜１０ｍｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは１〜５ｍｇ／日、より好ましくは１〜３ｍｇ／日である。
セレン：セレンの量は、２０〜４００μｇ／日の範囲にわたることができ、好ましくは５０〜２００μｇ／日、より好ましくは５０〜１００μｇ／日である。

プレミックスは、前述の用量および好ましい用量を提供するように作製することができる。本発明の一部を形成する１つのプレミックスは、１グラムのプレミックスが１キログラムの機能性食品、栄養補助食品、または医薬組成物に対して追加され、結果として生じる機能性食品、栄養補助食品、または医薬組成物が上記の所与の服用量のいずれかにおいて記載される服用量を含有するように製剤される。個々の成分の量は、もちろん、１キログラムのプレミックスが１メートルトンの機能性食品、栄養補助食品、または医薬組成物に対して追加され、結果として生じる飼料が上記の所与の服用量のいずれかにおいて記載される服用量を含有するように変動させることができる。下記の実施例においてこれを詳細に例説する。

［製剤］
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および本発明による少なくとも１つのカロテノイドならびに機能性食品に許容され得るキャリヤの組み合わせを含む機能性食品組成物に関する。

本明細書において使用される用語「機能性食品」は、食品産物、食料品、健康補助食品、栄養補助剤、または食品産物もしくは食料品のためのサプリメント組成物を含む。したがって、別の実施形態では、本発明が、機能性食品に関し、機能性食品が、食品産物、食料品、健康補助食品、栄養補助剤、または食品産物もしくは食料品のためのサプリメント組成物である。

本明細書において使用されるように、用語「食品産物」は、任意の食品またはヒトが消費するのに適した食品を指す。食品産物は、調製済みのおよびパッケージされた食品（たとえばマヨネーズ、サラダドレッシング、パン、またはチーズ食品）であってもよい。本明細書において使用されるように、用語「食料品」は、ヒトの消費にふさわしい任意の物質を指す。用語「健康補助食品」は、１回のまたは複数回の用量単位でパッケージされた、ヒトの食事の補充のための少量の化合物を指す。健康補助食品は、一般に、わずかな量のカロリーしか提供しないが、他の微量栄養素（たとえばビタミンまたはミネラル）を含有してもよい。用語「栄養補助剤」は、カロリーの供給源と組み合わせて健康補助食品を含む組成物を指す。いくつかの実施形態では、栄養補助剤が、食事代替品またはサプリメント（たとえば栄養バーもしくはエネルギーバーまたは栄養飲料もしくは濃縮物）である。

食品産物または食料品は、たとえば、アルコールを含まない飲料およびアルコール飲料などのような飲料ならびに飲料水および流動食に追加される液体調製物であり、アルコールを含まない飲料は、たとえば、ソフトドリンク、スポーツ飲料、たとえばオレンジジュース、リンゴジュース、およびグレープフルーツジュースなどのようなフルーツジュース、レモネード、茶、ニアウォーター飲料、ならびにミルクならびにたとえばヨーグルト飲料およびダイエットドリンクなどのような他の乳製品飲料である。別の実施形態では、食品産物または食料品が、本発明に従う組成物を含む固形または半固形食を指す。これらの形態は、ケーキおよびクッキーなどのような焼いた食べ物、プディング、乳製品、菓子、スナック食品、または冷凍菓子もしくは冷凍ノベルティ商品（たとえばアイスクリーム、ミルクセーキ）、調製済みの冷凍食品、キャンディー、スナック製品（たとえばチップス）、スープ、スプレッド、ソース、サラダドレッシング、調製済みの肉製品、チーズ、ヨーグルト、および任意の他の脂肪または油含有食品などのような流動食、ならびに食品成分（たとえば小麦粉）を含むことができるが、これらに限定されない。用語「食品産物」または「食料品」はまた、機能性食品および調製済みの食品産物を含み、後者は、ヒトの消費について承認された任意のあらかじめパッケージされた食品を指す。

本発明の健康補助食品は、任意の適した方式で送達されてもよい。好ましい実施形態では、健康補助食品が、経口送達用に製剤される。本発明の健康補助食品の成分は、経口消費用の許容され得る賦形剤および／またはキャリヤ中に含有される。キャリヤ、したがって健康補助食品自体の実際の形態は、重要ではない。キャリヤは、液体、ゲル、ジェルキャップ、カプセル、粉末、固形タブレット（コーティングもしくは非コーティング）、茶、またはその他同種のものであってもよい。

健康補助食品は、好ましくは、タブレットまたはカプセルの形態をしている。適した賦形剤および／またはキャリヤは、マルトデキストリン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、結晶セルロース、デキストロース、米粉、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスポビドン、スクロース、植物ガム、ラクトース、メチルセルロース、ポビドン、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、およびその他同種のもの（その混合物を含む）を含む。好ましいキャリヤは、炭酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、マルトデキストリン、およびその混合物を含む。様々な成分ならびに賦形剤および／またはキャリヤは、従来の技術を使用して混合され、所望の形態に形成される。本発明のタブレットまたはカプセルは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する腸溶コーティングでコーティングされてもよい。胃ではなく小腸で溶解する、適した腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。製剤および投与のための技術についてのさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版において見つけられてもよい。

他の実施形態では、健康補助食品が、食品または飲料に消費者が追加するのに適した粉末または液体として提供される。たとえば、いくつかの実施形態では、健康補助食品が、たとえば、飲料の中に混合することによってまたはたとえばプディング、トッピング、ソース、ピューレ、調理済みのシリアル、もしくはサラダドレッシングなどのような半固形食の中にかき混ぜることによってまたはその他に、たとえば、消費直前に放出されるように食品容器または飲料容器のキャップの中に密封された食品に追加することによって使用されることになる粉末の形態で個人に投与することができる。健康補助食品は、とりわけ健康補助食品によって食事に追加されるカロリーの数値を制限することが望ましい場合、１つまたは複数の不活性成分を含んでいてもよい。たとえば、本発明の健康補助食品はまた、たとえば、ハーブ、促進剤、着色剤、甘味剤、調味料、不活性成分、およびその他同種のものを含む任意選択の成分を含有してもよい。

下記の非限定的な実施例は、本発明をよりよく例証するために提供される。

［実施例］
［実施例１］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種畜雌鳥（ＲＯＳＳ ３０８）を研究のために商用の群れから得た。基礎ブロイラー種畜産卵飼料は、表１に示されるように製剤した。計算した栄養素組成を表２に示す。

食事に、酸化防止剤／抗炎症剤（ビタミンＥ、アスコルビン酸、カンタキサンチン）および豊富なレベルの選択したビタミンと組み合わせた６９ｍｃｇ／食事１ｋｇの２５−ＯＨ Ｄ３を補ったまたは補わなかった。雌鳥は、以下のように給餌レジメン（制限および制約なし）に従って３つの治療群に無作為に振り分けた。
基礎食−制限された給餌（１４０ｇ／日）
基礎食−制約なしの給餌
基礎食−制約なしの給餌＋６９ｍｃｇ／食事１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤

雌鳥は、１４時間：１０時間の明：暗周期および２５±３℃の温度の制御された部屋の中に置いた金網のかごに個々に収容した。水は制約なしに飲むことができた。実験期間を１０週間続けた。給餌治験の３週間後に、何羽かの鳥を関連する血漿パラメーター分析に使用した。実験の終わりに、雌鳥は、さらなる研究：
組織形態の検死
脂質およびスフィンゴ脂質プロファイルの判定−血清および組織
組織炎症促進性サイトカインの判定
インスリン抵抗性の判定
骨強度分析のための脛骨の収集
ミオパシー分析のための心臓（心筋症）ならびに骨格筋（胸および大腿）の回収
のための組織サンプル収集用に安楽死させ、屠殺した。

［実施例２］
［結果および議論］
［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、過食したブロイラー雌鳥の体脂肪蓄積および腹部の脂肪を抑制した］
種畜雌鳥は、肝臓、脂肪組織、および発達中の卵母細胞の卵黄に大量の過剰エネルギー（トリグリセリドの形態で）を保存することができる。脂質生成（すなわちグルコースのトリグリセリドへの変換）は、主として鳥の肝臓において行われ、解糖、クエン酸回路、および脂肪酸合成を含む一連の連鎖酵素触媒反応を伴う。肝臓の脂質生成は、栄養およびホルモンの両方の制御を受けやすく、食事の変化に非常に応答性である。脂肪組織は、主として脂質の貯蔵部位として果たし、脂質生成活性がほとんどない。鳥における肝臓対脂肪組織の脂質生成能力の差異は、鍵となる転写因子、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１）の発現の作用によるものである。ＳＲＥＢＰ−１についての遺伝子は、肝臓において高度に発現されるが、脂肪組織においてずっと少ない。さらに、脂肪酸シンターゼ、リンゴ酸酵素、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ＡＴＰクエン酸リアーゼ、およびステロイル（ｓｔｅｒｏｙｌ）ＣｏＡデサチュラーゼ１などのような多くの脂質生成酵素遺伝子の発現は、ＳＲＥＢＰ−１によって直接影響を及ぼされる。

制約なしに給餌された種畜雌鳥は、給餌が制限された種畜雌鳥よりも多く腹部の脂肪を増大させた。２５−ＯＨＤ３および酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充は、体重および組織重量に対する、特に、相対的な脂肪組織重量（体脂肪蓄積）に対する制約なしの給餌の有毒性の影響を寛解させた（表４）。制約なしに給餌された雌鳥の脛骨の強度は、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤によって強化された。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、死亡を低下させ、卵産生、卵巣の形態、および血漿１７βエストラジオールレベルを改善した］
エストラジオールの分泌は、排卵に成功した卵胞の特徴である。ゴナドトロピンの排卵前の急上昇を引き起こすことにおけるその役割に加えて、エストラジオールは、重要な卵巣内の成長、分化、および生存因子である。２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の包含は、制約なしの飼料摂取下の鳥において、死亡ならびに卵巣の変性および卵巣腫瘍様の形態の発生を低下させ、卵産生を増加させ、血漿エストラジオールレベルを持続させた。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は障害性のグルコースクリアランスおよびインスリン感受性を寛解させた］
２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の食事への包含は、１０週間過食した雌鳥における空腹時血糖値および非エステル化脂肪酸レベルの寛解によって証拠づけられるように、インスリン抵抗性を改善する（表６）。グルコースクリアランス試験において、やせた雌鳥は、グルコース注入後３０〜６０分間で非常に速いクリアランス速度を示し、反対に肥満の雌鳥は、３０〜９０分間、クリアランス速度が非常に遅かった（図１）。インスリン分泌において、肥満の雌鳥は、やせた雌鳥と比較した場合、空腹状態でグルコース注入後に高い血漿インスリンレベルを示した（図１）。グルコースクリアランスおよびグルコース誘発性のインスリン分泌はともに、３週間過食した雌鳥において２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の包含によって正常になった（図１）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は異脂肪血症を寛解した］
制約なしに給餌された雌鳥は、血漿トリグリセリド、セラミド、およびスフィンゴミエリンレベルを上昇させた。しかしながら、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせを補充すると、制約なしに給餌された雌鳥の血漿中のこれらの脂質代謝物質のレベルが低下した（表６）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、組織トリグリセリドの蓄積およびセラミド含有量を低下させた］
肝臓、心臓、および脚の筋肉におけるトリグリセリドおよびセラミドの蓄積は、制約なしに給餌された雌鳥よりも、補足の２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤を給餌された雌鳥において低かった（表７）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は過食したブロイラー雌鳥において組織炎症促進性ＩＬ−１β産生および血漿ＩＬ−６濃度を下げた］
肥満に関連する炎症は、脂肪組織、肝臓、脚の筋肉および胸肉、ならびに心臓において、循環ＩＬ−６レベルおよびＩＬ−１β産生の抑制によって証拠づけられるように、食事による２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の補充によって寛解した（図２）。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は制約なしに給餌されたブロイラー種畜雌鳥において脂肪毒性を寛解させた］
肥満の主要な合併症は、インスリン抵抗性の発症であり、これにより、インスリンがその主な標的組織、骨格筋および肝臓における食後の栄養素貯蔵を誘起することができなくなる。理論によって束縛されることを望むものではないが、２つの有望なメカニズムが、脂肪の蓄えの増加がどのように身体の全体にわたって全体的なインスリン感受性に影響を与え、末梢組織におけるインスリンシグナル伝達のダウンレギュレーションの一因となるかを説明し得るように思われる。第１に、細胞または組織への栄養素の送達は、それらの貯蔵能力を超過しており、したがって、これは、インスリン作用を阻害する代謝物質の生成に至る。特に重要なことに、トリアシルグリセロールおよびセラミドなどのような脂質誘導体は、特定のインスリンシグナル伝達中間体を阻害し、したがって、食後のグルコース取込みおよび／またはグリコーゲン合成をブロックすることが示された。制約なしに給餌されたブロイラー種畜メスの場合、末梢組織におけるこれらの代謝物質の持続的な蓄積は、おそらく、雌鳥の至る所でのインスリン抵抗性の状態の持続および脂肪毒性発症の一因となるであろう。第２に、体脂肪蓄積の増加は、脂肪細胞からまたは脂肪パッドに浸潤しているマクロファージから産生される炎症促進性サイトカインの循環レベルの上昇によって特徴付けられる慢性炎症性状態を誘発する。これらの炎症媒介物質は、インスリンシグナル伝達に直接拮抗し、また異化プロセスをも誘発し、したがって、インスリン応答性の器官への栄養素代謝物質の送達をさらに増加させることが示された。

全体として、過剰な飽和脂肪酸の形成、そのため非脂肪組織における脂質の蓄積に至るグルコースの供給過剰は、活性化された炎症応答および脂肪毒性発症と一緒に、代謝調節に関係するシグナル伝達経路を阻害する活性脂質（スフィンゴ脂質）の細胞レベルを上昇させる。特に、セラミドは、過剰な栄養素（すなわち飽和脂肪酸）および炎症性サイトカインの両方をインスリン抵抗性の誘発に関連づける推定上の中間体である。さらに、セラミドは、様々な異なる細胞型において毒性であり、心臓、膵臓、および血管系に損傷を与えることがある。さらに、２５−ヒドロキシＤ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、飽和に至るまで給餌したブロイラー種畜雌鳥において起こる体脂肪蓄積の増加から結果として生じる代謝および内分泌調節異常ならびに炎症促進性応答の有毒性の影響を寛解させるのに有効であった。

［２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、過食したブロイラー雌鳥において心臓の病的状態、腹水症、および炎症を寛解させる］
心臓は、過剰の脂質蓄積により機能不全になり得る。その制約なしの給餌により促進された心臓におけるトリグリセリド蓄積は、心臓の脂肪酸利用率の増加によりトリグリセリドに適応的にエステル化されることを示唆した。そのうえ、心臓のセラミド含有量もまた、制約なしの給餌の結果として増加した。セラミドは、脂肪毒性心筋症において心臓毒となり、これは、免疫細胞のより多くの心臓浸潤によって証拠づけられるように炎症応答を誘起した（表９）。

心肥大は、心臓に対する仕事量の増加に対する適応応答を臨床的に示す。しかしながら、神経因子およびホルモン因子への心臓の応答もまた、後負荷または血管抵抗の増加と無関係に肥大性の変化を刺激することがある。食糧過負荷誘発性心臓代償性増殖は、ブロイラー種畜雌鳥において起こった（表８）。心肥大は適応不良になり得、最終的に、病的な状態に発展し、心不全に至る。これらの結果は、心臓における脂肪毒性発症および肥大性増殖が炎症応答を誘起する傾向があるという事実を支持した。

リン酸化ＳＴＡＴ−３（シグナルトランスデューサーおよび転写活性化因子３）の心臓保護的な役割は、近年ますます明らかになりつつある。興味深いことに、２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせは、給餌制限の種畜雌鳥よりも大きな、心臓におけるＳＴＡＴ−３の活性化（すなわちＳＴＡＴ−３のリン酸化）を誘発し（図３）、最も低い活性化は、制約なしに給餌されたブロイラー種畜雌鳥において観察された。心膜、心室拡大、および腹水内での濾出液の発生は、２５−ヒドロキシＤ３および酸化防止剤／抗炎症剤の組み合わせを補った場合に制約なしに給餌された種畜雌鳥において軽減された。

［実施例３］
［心筋症治験］
［材料および方法］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種畜雌鳥（ＲＯＳＳ ３０８）を研究のために商用の群れから得た。基本的なブロイラー種畜産卵飼料は、表１２に示されるように製剤した。計算した栄養素組成を表１３に示す。

食事に、酸化防止剤（アスコルビン酸、カンタキサンチン）および豊富なレベルの選択したビタミンと組み合わせた６９ｍｃｇ ２５−ＯＨ Ｄ３／食事１ｋｇのＨｙ・Ｄ（登録商標）を補ったまたは補わなかった。雌鳥は、以下のように給餌レジメン（制限および制約なし）に従って治療群に無作為に振り分けた。
１．基礎食−制限された給餌（１４０ｇ／日）
２．基礎食−制限された給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／食事１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤
３．基礎食−制約なしの給餌
４．基礎食−制約なしの給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／食事１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤

［結果：］

図７は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の卵産生に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。表１５および図７から、以下のように結論づけることができる。
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、生存を促進することによって全体的な卵収量を改善した。
２．死んだ鳥では、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制約なしに給餌された鳥において卵収量および卵産生率に効果がなかったが、制限された鳥において卵収量および卵産生率を減少させた。しかしながら、群れ全体において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、卵収量を増加させたが、卵産生率は増加させなかった。
３．これらの結果は、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が、急死しやすい制限された鳥において、死亡への進行を加速し、したがって、生存をより長くするために、急死しやすい鳥を除外するよう群れをえり分けるものとして作用し、それによって群れの維持費を低下させたことを示唆した。

図８は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。

表１６および図８から、以下のように結論づけることができる。
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、鳥生存率を改善した。
２．制約なしに給餌された鳥において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を用いた死んだ鳥は、体重がより重かったが、相対的な肝臓、腹部脂肪、および心臓の重量は低く、ほとんどの過剰な食糧が筋肉に分配され得、それによって、ポンプ機能の増加のための心臓の順応性肥大性増殖は、より高い成長速度（筋肉）に対する酸素供給の必要性を満たすことができず、したがって、不整脈および機能不全を引き起こし得ることを示唆した。

５０週齢の制約なしの鳥における低い相対的な肝臓重量は、卵巣退縮が発症し、したがってエストロゲン分泌が減少し、卵黄蓄積のための肝臓における脂質合成の減少に至ったことによるように思われる。

図９は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。

図１０〜図１１は、制限されたまたは制約なしの飼料摂取下で２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を食事により補充した死んだ雌鳥の心臓の全体の形態を示す。

［表１７および１８ならびに図９〜１１からの結論および注釈：］
１．制約なしの給餌は、心臓の順応性肥大を引き起こし、肥大性増殖の中には、病理学的に心室拡大に発達し得るものもある。その結果、心臓は、末梢組織に酸素を送るための血液供給の必要性を満たすためにポンプ機能を維持するためにより高い収縮性を必要とし、したがって、心不全を引き起こし得る。
２．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、死んだ鳥において心臓の病的状態（拡大、心嚢液貯留、破裂）の発生を減少させた。
３．制限されたおよび制約なしに給餌された両方の鳥において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の鳥は、順応性肥大性増殖をそれほど示さなかった。これは、ほとんどの過度の食糧が筋肉に分配され得、その結果として、ポンプ機能の増加のための心臓の肥大性増殖が、より高い成長速度（筋肉）に対する酸素供給の必要性を満たすことができず、したがって、不整脈および機能不全を引き起こし得るという仮説を支持する。

［表１９ならびに図１２および１３からの結論および注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制約なしに給餌されたブロイラー雌鳥のＥＣＧパターンの不規則な発生（パターンＤ〜Ｇ）および不整脈を減少させ、心臓の病的状態によって誘発される急死を寛解させた。

図１４は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥（３５週齢）の心線維症に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。バーの上に文字がある平均値は、有意差がある（Ｐ＜０．０５）。

［図１４からの結論および注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制約なしに給餌された雌鳥において心線維症を寛解させた。

図１５は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥の血漿ＩＬ−６（上の図）およびＩＬ−１β濃度（下の図）に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。結果は、平均値±ＳＥＭで表現した（ｎ＝６）。バーの上に異なる文字がある平均値は、有意差がある（Ｐ＜０．０５）。

［図１５からの結論および注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制約なしに給餌された雌鳥において慢性全身性炎症を寛解させた。

図１６は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしのブロイラー雌鳥（３５週齢）の心臓細胞アポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食事による補充の効果を示す。結果は、平均値±ＳＥＭで表現した（ｎ＝３）。バーの上に異なる文字がある平均値は、有意差がある（Ｐ＜０．０５）。

［図１６からの結論および注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、飼料摂取が制限されたまたは制約なしの雌鳥において心臓細胞アポトーシスを寛解させた。

［結論：］
補足の２５−ＯＨ Ｄ３および酸化防止剤／抗炎症剤は、
・死亡率を低下させ、過食したブロイラー種畜雌鳥の卵巣機能、そのため生殖能を改善すること
・内分泌物（インスリン）シグナル伝達を改善すること
・脂肪毒性発症および全身性炎症を低下させること
・食糧過負荷誘発性の心臓の病気の発生に対する心臓保護メカニズムを活性化すること
によって、ブロイラー種畜メスの過食に関連する有毒性の影響を寛解させた。

Claims (7)

1. ２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにルテイン、ゼアキサンチン、およびカンタキサンチンからなる群から選択される１つまたは複数のカロテノイドを含む、ヒト使用に適した組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
2. ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、およびセレンからなる群から選択される少なくとも１つの生理活性成分をさらに含む、請求項１に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
3. 前記２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ Ｄ）が、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ Ｄ３）である、請求項１または２に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
4. ヒト多嚢胞性卵巣症候群を治療する、予防する、発病を遅延させるまたは症状を寛解させる際に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
5. 食欲過剰な人において体重増加を寛解させる際に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
6. 組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックスであって、
   ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス
   ｂ）血漿異脂肪血症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、およびセラミド）の寛解
   ｃ）肝臓、脚、胸肉、および心臓におけるトリグリセリドおよびセラミド蓄積の寛解
   ｄ）組織炎症促進性ＩＬ−１β産生および血漿ＩＬ−６濃度の抑制
   ｅ）心臓におけるＳＴＡＴ−３（シグナルトランスデューサーおよび転写活性化因子３）のリン酸化のアップレギュレーションによる心臓の保護および心機能の強化
   ｆ）心臓への免疫細胞の浸潤の抑制
   ｇ）腹水症の発生の減少
   ｈ）心血管系の問題の発生の減少
   ｉ）心臓の病的状態（拡大、心嚢液貯留、破裂）の発生の減少
   ｊ）ＥＣＧパターンの不規則な発生の量の減少
   ｋ）不整脈の発生の減少
   ｌ）心線維症の寛解
   ｍ）慢性全身性炎症の寛解
   ｎ）心臓細胞アポトーシスの寛解、ならびに
   ｏ）インスリン抵抗性および／または血中グルコース調節の改善
   からなる群から選択される少なくとも１つの心血管系の有益性を授ける際に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。
7. 障害性のグルコースクリアランスおよびインスリン感受性を改善する際に使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物、機能性食品、医薬組成物、またはプレミックス。

Images