JP6373760B2 - Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路の阻害剤及びがんの治療におけるその使用 - Google Patents

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Description

本発明は、がんの治療及び／又は予防におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路の阻害剤、特に６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ＣＡＳ番号２１８４５７−６７−１）及びその誘導体の使用に関する。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は発生、細胞生存及び細胞増殖における細胞運命を制御する分子回路の重要な要素である（非特許文献１）。この経路の異常活性化は腫瘍形成の一因となる。Ｎｏｔｃｈファミリーの成員は、増え続けるがんのがん遺伝子として解明されている。ヒトがんにおけるＮｏｔｃｈの役割は近年、ヒトがんにおけるＮｏｔｃｈ遺伝子の活性化突然変異及び増幅の存在、並びにＮｏｔｃｈシグナル伝達経路の遺伝子が潜在的治療標的となり得ることの実証によって明らかにされている。Ｎｏｔｃｈ経路における主要な治療標的の１つがＮｏｔｃｈ受容体であり、γ−セクレターゼ阻害剤がＮｏｔｃｈ分子の発がん性（細胞内）ドメインの生成を防ぎ、Ｎｏｔｃｈ活性を抑制することが明らかになっている。
このシグナル伝達経路の複雑な仕組みの分析は著しい進展を遂げているが、Ｎｏｔｃｈ阻害剤に利用可能な選択肢は極めて限られている。しかしながら、Merck Sharp & Dohme Corpのγ−セクレターゼ阻害剤ＭＫ０７５２等の先駆的なＮｏｔｃｈ阻害剤群が、既にいくつかのがん型について臨床試験中である。ＭＫ０７５２及び合成小分子であるＲＯ４９２９０９７（Roche）はＮｏｔｃｈシグナル伝達経路を阻害し、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路が過剰活性化した腫瘍細胞において成長停止及びアポトーシスの誘導を引き起こし得る。
現在市場に出ている又は調査中のＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻止するγ−セクレターゼ阻害剤の使用の欠点の１つは、アミロイド前駆体タンパク質等の付加的な標的の範囲の広さ、及びＮｏｔｃｈシグナル伝達を４つ全てのリガンド（Ｎｏｔｃｈ１、２、３及び４）を介して阻止する非選択性である。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を４つ全ての受容体を介して阻止するその能力のために、γ−セクレターゼ阻害剤は腸内で杯状細胞の化生を引き起こすことが知られている。加えて、血液悪性疾患及び固形腫瘍の一部がＮｏｔｃｈ受容体に突然変異（染色体転座等）を有し、γ−セクレターゼ複合体による切断とは独立してドミナントアクティブ型のＮＩＣＤの構成的発現をもたらす。したがって、これらの腫瘍はγ−セクレターゼ阻害剤治療に応答することができない。
Shih IeM, Wang TL in Cancer Res 2007;67(5):1879-82
したがって、がんの治療及び／又は予防に有用な更なる特異的かつ選択的なＮｏｔｃｈシグナル伝達経路の阻害剤を同定及び開発することが依然として必要とされている。
本発明は、がんの治療及び／又は予防に使用される、式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）：
式Ｉ
又はＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、その塩、溶媒和物、互変異性体、異性体に関する。
本発明の更なる目的は、式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）若しくはＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、互変異性体、異性体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供することである。
本発明は更に、がんを治療及び／又は予防する方法に使用される単回用量又は複数回用量の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）又はＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つを、任意に試薬及び／又は使用説明書とともに含むキットに関する。
本発明の更なる目的は、細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路のｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏでの阻害への式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）又はＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つの使用を提供することである。
本発明の別の目的はＮｏｔｃｈ依存性がんの被験体を治療する方法を提供することである。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ＣＡＳ番号２１８４５７−６７−１）がＮＩＣＤ媒介Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化を阻止することを示す図である。Ａ）Ｎ１−ＨｅＬａ細胞にｐｃＤＮＡ３．Ｎｏｔｃｈ１発現プラスミド、ｐＧＬ４．２６−１２×ＣＳＬルシフェラーゼ及びＳＶ４０ ｒｅｎｉｌｌａプラスミドを共トランスフェクトした。ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞を９６ウェルプレートにおいて１：１の比率（２００００細胞／ウェル：２００００細胞／ウェル）で同時培養し、ＤＭＳＯ又は２μＭ、５μＭ及び１０μＭのＩ３並びにＤＡＰＴで２４時間処理した。Ｎｏｔｃｈ経路活性化を、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達駆動ルシフェラーゼレポーターアッセイを定量化することによって測定した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴを用いたＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイの処理は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化の濃度依存的な減少を引き起こす。Ｂ）ＨｅＬａ細胞にＮＩＣＤをトランスフェクトし、ＤＭＳＯ又は２μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ及び４０μＭの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理した。対照として、同時培養細胞を５μＭ、１０μＭ、２０μＭ及び４０μＭのＤＡＰＴによっても処理した。Ｎｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて経路活性化を測定した。ＮＩＣＤ発現細胞の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はシグナル伝達の軽減をもたらしたが、ＤＡＰＴ処理はＮＩＣＤによって媒介されるＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化に影響を有しなかった。Ｃ）ＤＬ４：Ｎ１及びＤＬ４：Ｎ２同時培養アッセイを、Ｉ３及びＤＡＰＴ（各１０μＭ）で２４時間処理した。ＤＬ４−Ｎ１及びＤＬ４−Ｎ２駆動経路活性化に対する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴの影響を、Ｎｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼ活性によって測定した。Ｉ３処理及びＤＡＰＴ処理の両方が、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２誘導経路活性化を阻止する。Ｄ）６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、Ｎｏｔｃｈ１（ＮＩＣＤ）及びＮｏｔｃｈ２（Ｎ２−ＩＣＤ）の細胞内ドメインによる経路活性化を阻害する。 Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介阻害が、ＭＡＭＬ１濃度の増大によって回避され得ることを示す図である。ＨｅＬａ細胞に、８００ｎｇのＮＩＣＤ＋３μｇのｐＣＤＮＡ３．１又は８００ｎｇのＮＩＣＤ＋１μｇのＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧ又は８００ｎｇのＮＩＣＤ＋３μｇのＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧ発現ベクターを共トランスフェクトした。Ｎｏｔｃｈ経路活性化を測定するために、ｐＧＬ４．２６−１２×ＣＳＬルシフェラーゼプラスミドも細胞に導入した。ＳＶ４０ ｒｅｎｉｌｌａを内部対照として使用した。異なる組合せ及び量のプラスミドをトランスフェクトした細胞を、ＤＭＳＯ又は漸増濃度の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（１μＭ、２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭ）で２４時間処理した。１２×ＣＳＬ駆動ルシフェラーゼ活性を、二重ルシフェラーゼアッセイ系を用いて測定した。ＭＡＭＬ１の非存在下で、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）はＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化を阻止することができたが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のＮｏｔｃｈ阻害効果はＭＡＭＬ１量の増大によって減少した。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がヒトがん細胞株においてＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻害し、その標的遺伝子を下方調節することを示す図である。Ａ）ＲＰＭＩ ８４０２細胞をＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴ（１０μＭ）で２４時間処理し、Ｎｏｔｃｈ標的遺伝子、Ｈｅｓ１、ｃＭｙｃ及びＤｔｘ１の発現をｑＲＴ−ＰＣＲによって分析した。データをハウスキーピング遺伝子であるＨＰＲＴに対して正規化した。Ｂ）６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理細胞に由来する全細胞溶解物をウエスタンブロットによって分析した。ＮＩＣＤ（Ｖａｌ１７４４）、Ｈｅｓ１及びｃＭｙｃに対する抗体を用いて、ＮＩＣＤ及びＮｏｔｃｈ標的遺伝子のタンパク質レベルを決定した。Ｃ及びＤ）ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株ＨＰＢ ＡＬＬ及びＫＯＰＴＫ１をＤＭＳＯ又は６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で２４時間処理した。ＮＩＣＤ（Ｖａｌ１７４４）及びＨｅｓ１特異的抗体を用いてウエスタンブロット分析を行った。チューブリンをローディング対照とした。Ｅ）ＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理ＰＡＮＣ１細胞（膵がん細胞株）に由来する全細胞溶解物をウエスタンブロットによって分析した。Ｈｅｓ１特異的抗体を用いてＨｅｓ１タンパク質レベルを決定した。スチューデント両側ｔ検定を用いて統計分析を行った。＊＝ｐ値＜０．０５。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がヒトがん細胞において増殖阻止を誘導することを示す図である。ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株ＲＰＭＩ ８４０２及びＫＯＰＴＫ１、及び膵がん細胞株ＰＡＮＣ１、並びにｎＲａｓ駆動黒色腫細胞を９６ウェルプレートに播種し、１０μＭ濃度の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで数日間処理した。その成長阻害効果を等量のＤＭＳＯで処理した細胞と比較した。Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイを用いて、ＲＰＭＩ ８４０２及びＫＯＰＴＫ１の成長動態を最大６日間追跡し、ＰＡＮＣ１及びｎＲａｓ黒色腫細胞を４日間モニタリングした。ＲＰＭＩ ８４０２、ＫＯＰＴＫ１、ＰＡＮＣ１及びｎＲａｓ黒色腫細胞の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、その成長能の有意な低減を引き起こした。スチューデントｔ検定を用いて統計分析を行った。＊＝ｐ値＜０．０５。ｎｓ＝有意差なし。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がヒトがん細胞のＮＩＣＤ依存性成長を阻止することを示す図である。Ａ）ＤＮＤ４１−親細胞及びＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞を、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで２４時間処理した。ウエスタンブロット分析をＨｅｓ１タンパク質についてＨｅｓ１特異的抗体を用いて行った。ＤＡＰＴ及び６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の両方が、ＤＮＤ４１−親細胞においてＨｅｓ１の下方調節を引き起こした。ＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞は、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理した場合にのみＨｅｓ１の下方調節を示した。Ｂ）５０００個のＤＮＤ４１−親細胞を９６ウェルプレートに播種し、ＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで処理した。Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ読み取り値を用いて親細胞株の成長動態を５日間にわたって追跡した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴの両方によるＤＮＤ４１−親細胞株の処理が増殖停止を引き起こした。Ｃ）同様に、ＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞をＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで処理し、その成長動態をＡｌａｍａｒ ｂｌｕｅ読み取り値を用いて５日間にわたってモニタリングした。ＤＡＰＴによるＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞の処理はその増殖に対して有意な影響を有さなかったが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は増殖停止を誘導した。Ｄ）ヒト乳がん細胞株ＨＣＣ１１８７はＳＥＣ２２Ｂ−Ｎｏｔｃｈ２染色体転座を有し、そのためγ−セクレターゼ複合体による切断とは独立して構成的に活性な形態のＮＩＣＤの発現をもたらす。この突然変異により、この細胞株はγ−セクレターゼ阻害剤処理に非感受性となる。Ｅ）１ウェル当たり２０００個のＨＣＣ１１８７細胞を９６ウェルプレートに播種した。細胞をＤＭＳＯ、γ−セクレターゼ阻害剤ＤＡＰＴ及びＩ３で６日間処理した。Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ読み取り値を０日目、２日目、４日目及び６日目に得た。８回の反復を各々の処理及び時点で用いた。γ−セクレターゼ阻害剤ＤＡＰＴによるＨＣＣ１１８７ヒト乳がん細胞株の処理は、ＤＭＳＯ処理対応物と比較して成長動態を変化させなかったが、Ｉ３処理は統計的に有意な細胞増殖の阻害を引き起こした。ｐ値はスチューデントｔ検定を用いて算出した。＊＝ｐ値＜０．０５。ｎｓ＝有意差なし。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病細胞株及びヒト乳がん細胞株ＨＣＣ１１８７においてＧ０／Ｇ１細胞周期停止及びアポトーシスを誘導することを示す図である。Ａ）ヒト白血病細胞株（ＲＰＭＩ８４０２、ＣＵＴＬ１、ＫＯＰＴＫ１、ＴＡＬＬ１及びＨＰＢＡＬＬ）をＩ３（１０μＭ）で処理した。フローサイトメトリーを用いてＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ陽性（アポトーシス）細胞集団の割合を測定した。Ｂ）細胞周期の分析：ＲＰＭＩ８４０２、ＫＯＰＴＫ１及びＴＡＬＬ１細胞株をＩ３（１０μＭ）で処理し、Ｋｉ６７及びヘキスト染色で染色して細胞周期の状態を決定した。細胞周期の分析から、Ｉ３処理が細胞周期のＧ０／Ｇ１期で停止した細胞の２０％〜３０％の増大を引き起こすことが示唆される。Ｃ）ＨＣＣ１１８７細胞をＤＭＳＯ又は１０μＭのＩ３で処理し、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色を用いてアポトーシス集団の割合を測定した。Ｄ）Ｉ３処理したＨＣＣ１１８７細胞を細胞周期の状態について分析した。Ｋｉ６７及びヘキスト染色から、Ｉ３がＨＣＣ１１８７細胞においてＧ０／Ｇ１停止を誘導することが明らかになった。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が脾臓におけるＮｏｔｃｈ２シグナル伝達表現型の遺伝子喪失を模倣することを示す図である。脾臓におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達の喪失は、脾臓中の辺縁帯Ｂ（ＭＺＢ）細胞の低減をもたらす。Ａ）実験計画の概略図。Ｂ）マウス（ｎ＝２）を油又は２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で７日間連続して処理した。脾臓を８日目に分析した。Ｂ２２０特異的抗体を用いて、脾臓中のＢ細胞を同定した。Ｂ細胞コンパートメント内のＭＺＢ細胞を、ＣＤ２３及びＣＤ２１細胞表面マーカーに対する抗体を用いて検出した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるマウスの処理は、脾臓におけるＭＺＢ細胞の割合の顕著な低減を引き起こす。Ｃ）６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、ビヒクル処理動物と比較して脾臓中のＭＺＢ細胞の絶対数の低減を引き起こす。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理がマウスにおいて白血病発症の潜伏期間を延長することを示す図である。Ａ）ＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスに、１×１０６個のＨＰＢ ＡＬＬ（ルシフェラーゼ発現）細胞を注射した。１５日目に、白血病細胞が骨髄中で樹立した。マウスを油又は６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で毎日処理した。マウスを２７日目にＣａｌｉｐｅｒ ＩＶＩＳ（Xenogen）ライブイメージングシステムを用いてイメージングした。赤色及び青色はルシフェラーゼシグナルの強度を示し、白血病細胞の数と相関する。Ｂ）６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、異種移植アッセイにおいてＲＰＭＩ ８４０２白血病細胞成長を阻止する。ＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスに、５×１０５個のＲＰＭＩ ８４０２（ルシフェラーゼ発現）細胞を移植した。Ｃａｌｉｐｅｒ ＩＶＩＳ（Xenogen）ライブイメージングシステムを用いて白血病の進行を追跡した。１３日目に、油（ｎ＝３）又は６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ｎ＝４）を用いた毎日の処理を開始した。動物を２７日間（実験のエンドポイント）処理した。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理がＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２マウス乳腺腫瘍を阻止することを示す図である。Ａ）ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２乳腺腫瘍及び正常年齢適合乳腺（Ｍ．Ｇ）におけるＨｅｓ１タンパク質発現レベルを、抗Ｈｅｓ１抗体を用いて比較した。ウエスタンブロット分析から、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２乳腺腫瘍におけるＨｅｓ１タンパク質の非常に高い発現が示された。チューブリンをローディング対照とした。Ｂ）ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２乳腺腫瘍の単一細胞懸濁液を調製し、１×１０６個の細胞をレシピエントＦＶＢマウスの切除脂肪織（cleared fat pad）に注射した。腫瘍形成を定期的にモニタリングした。腫瘍が体積１００ｍｍ３〜３００ｍｍ３まで発生した時点で、マウスを油（ｎ＝２）又は２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ｎ＝２）で処理した。腫瘍体積を６日〜７日毎に測定した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理したマウスは、油処理マウスと比較して遅い腫瘍進行を示した。 ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の化学的誘導体のＮｏｔｃｈ阻害活性を示す図である。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の種々の化学的誘導体を、ＤＬ４−Ｎ１同時培養アッセイにおいて試験し、Ｎｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いてＮｏｔｃｈ活性レベルを測定した。誘導体Ｉ３−Ａ、Ｉ３−Ｂ、Ｉ３−Ｃ、Ｉ３−Ｅ、Ｉ３−Ｇ、Ｉ３−Ｈ、Ｉ３−Ｍ及びＩ３−Ｎは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）と同程度の抗Ｎｏｔｃｈ活性を示すが、誘導体Ｉ３−Ｆ及びＩ３−Ｉでは活性が増強するようである。
本明細書中に記載されるものと同様又は等価の方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することができるが、好適な方法及び材料を下記に記載する。本明細書中で言及される全ての公報、特許出願、特許及び他の参照文献は、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書中で論考される公報及び出願は、本願の出願日前のそれらの開示のためにのみ提示される。本明細書中のいかなる内容も、本発明が先行発明に基づいて、かかる公報に先行する権利を有しないことを認めるものと解釈されてはならない。加えて、材料、方法及び実施例は例示のみを目的とし、限定を意図するものではない。
抵触の場合は、定義を含む本明細書が優先される。別途定義されない限り、本明細書に使用される技術用語及び科学用語は全て、本明細書の主題が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、下記の定義は本発明の理解を助けるために与えられるものである。
本明細書で使用される場合、「含む（comprise/comprising）」という用語は概して、１つ又は複数の特徴又は構成要素を含む（include/including）、すなわちその存在を許容するという意味で使用される。「含む」（"comprise" and "comprising"）という用語は、より制限的な「からなる」（"consist" and "consisting"）という用語も包含する。
本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、文脈上そうではないと明らかに指示されない限り、数量を特定していない単数形（the singular form "a", "an" and "the"）は複数の指示対象（references）を含む。
解釈を容易にするために、本明細書全体を通して使用される「本発明の化合物（複数の場合もあり）」又は「本発明による化合物（複数の場合もあり）」という用語は、化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ＣＡＳ番号２１８４５７−６７−１）、該Ｉ３の誘導体、化合物Ｉ３又は誘導体の塩又は溶媒和物、並びに化合物Ｉ３の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体及びラセミ体を含む異性体、化学修飾されたＩ３化合物、及び該Ｉ３化合物の誘導体を指す。
本明細書で使用される場合、「被験体」という用語は当該技術分野でよく認識されており、イヌ、ネコ、ラット、マウス、サル、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ラクダ、最も好ましくはヒトを含む哺乳動物を指す。一部の実施形態では、被験体は治療を必要とする被験体又はがん等の疾患若しくは障害を有する被験体とすることができる。しかしながら、他の実施形態では、被験体は正常な被験体又はがんに対する治療を既に受けている被験体である。この用語は特定の年齢又は性別を指示するものではない。このため、男女を問わず、成人、小児及び新生児の被験体が包含されることが意図される。
本明細書で使用される「がん」、「がん細胞」、「細胞増殖性疾患」及び「細胞増殖性障害」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す又は説明するものである。本発明によると、がんは脳腫瘍、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、結腸直腸腫瘍、腎腫瘍、肺腫瘍、肉腫又は黒色腫を含む固形腫瘍、及び白血病等の血液を侵す液性腫瘍を指すのが好ましい。より好ましくは、本発明によると、がんはＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫、乳がん、膵がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、腫瘍血管新生、結腸直腸がんを含む群から選択されるＮｏｔｃｈ依存性がんである。代替的には、Ｎｏｔｃｈ依存性がんはγ−セクレターゼ阻害剤治療に抵抗性を示す。γ−セクレターゼ阻害剤治療の例は、１）進行性固形腫瘍を有する患者の治療におけるγセクレターゼ阻害剤ＲＯ４９２９０９７及びセジラニブマレイン酸塩（ＮＣＴ０１１３１２３４）、２）再発性又は難治性固形腫瘍、ＣＮＳ腫瘍、リンパ腫又はＴ細胞白血病を有する若年患者の治療におけるγ−セクレターゼ阻害剤ＲＯ４９２９０９７（ＮＣＴ０１０８８７６３）、３）早期乳がんを治療するタモキシフェン又はレトロゾールと組み合わせたＭＫ−０７５２の研究（ＮＣＴ００７５６７１７）、４）進行性（Advances）又は転移性肉腫を有する患者の治療におけるＧＤＣ−０４４９及びＲＯ４９２９０９７（ＮＣＴ０１１５４４５２）、５）ＩＶ期又は再発性非小細胞肺がんを有する患者の治療におけるＲＯ４９２９０９７及びエルロチニブ塩酸塩（ＮＣＴ０１１９３８８１）、６）既に治療した前立腺がんを有する患者の治療におけるビカルタミド及びＲＯ４９２９０９７（ＮＣＴ０１２００８１０）、７）再発性侵襲性神経膠腫を有する患者の治療におけるＲＯ４９２９０９７（ＮＣＴ０１２６９４１１）、８）Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ＡＬＬ）を有する患者に対するＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害剤（ＮＣＴ００１００１５２）、及び９）転移性結腸直腸がんを有する患者の治療におけるＲＯ４９２９０９７（ＮＣＴ０１１１６６８７）を含む。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は進化的に保存されており、この経路の基本的な分子プレーヤーはリガンド（Ｄｅｌｔａ及びＪａｇｇｅｄ）、Ｎｏｔｃｈ受容体及び転写因子である（非特許文献１）。Ｎｏｔｃｈは膜貫通ヘテロ二量体受容体であり、ヒト及び齧歯動物においては４つの異なる成員（Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３及びＮｏｔｃｈ４）が存在する。生理学的条件では、Ｎｏｔｃｈリガンドのその受容体への結合によって、α−セクレターゼ（腫瘍壊死因子−α変換酵素とも呼ばれる）及びγ−セクレターゼの両方によるタンパク分解的切断のカスケードによりＮｏｔｃｈ受容体の細胞内ドメイン（Ｎｏｔｃｈ−ＩＣＤ）が放出されることでＮｏｔｃｈシグナル伝達が開始する。次いで、放出された細胞内Ｎｏｔｃｈ−ＩＣＤが核内に移行し、そこで主に普遍的転写因子ＣＢＦ１、ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｈａｉｒｌｅｓｓ、Ｌａｇ−１（ＣＳＬ）との結合によって遺伝子発現を変調する。この結合によりＣＳＬ複合体に対する転写活性化因子が動員され、それが転写抑制因子から活性化因子へと変換され、いくつかの下流のエフェクターが刺激される。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の生理学的機能は、発生及び腫瘍形成における幹細胞の維持、細胞運命の指定及び分化の調節等、多面的である。
がんにおいては、Ｎｏｔｃｈ受容体遺伝子座での染色体転座、点突然変異及び染色体増幅等の分子遺伝学的変化は、Ｎｏｔｃｈ経路の構成的活性化の既知の機構である。異なる機構にも関わらず、これらは全て細胞内Ｎｏｔｃｈ−ＩＣのレベルの増大をもたらす。Ｎｏｔｃｈの発がん能は、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）において初めて発見された。Ｎｏｔｃｈ１シグナル伝達はＴ細胞前駆細胞の正常な発生に必須であり、分子遺伝学的変化によるＮｏｔｃｈ１シグナル伝達の構成的活性化はＴ−ＡＬＬと関連する。例えば、（７；９）染色体転座によるヒトＮｏｔｃｈ１の細胞外部分の中間部欠失は、Ｔ−ＡＬＬ症例の約１％と関連し、Ｎｏｔｃｈ１の活性化点突然変異はＴ−ＡＬＬ症例の約５０％に存在する。Ｔ細胞白血病／リンパ腫の形成がＮｏｔｃｈ−ＩＣＤトランスジェニックマウスモデルにおいて観察され、Ｔ−ＡＬＬ発症におけるＮｏｔｃｈ活性化の因果的役割が示された。非小細胞肺がんにおいては、染色体転座（１５；１９）が一部の腫瘍において同定され、この転座が腫瘍におけるＮｏｔｃｈ３転写を高めると考えられる。卵巣がんにおいては、Ｎｏｔｃｈ３遺伝子増幅が腫瘍の約１９％で生じることが見出され、Ｎｏｔｃｈ３の過剰発現が漿液性卵巣癌の半数以上で見出されている。同様に、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化が乳がんの発症において示されている。動物モデルでは、構成的に活性なＮｏｔｃｈ４発現がマウスにおいて乳腺腫瘍を引き起こし、Ｎｏｔｃｈ１活性化突然変異がＴ−ＡＬＬの発症に寄与する。近年の研究から、トランスジェニックマウスにおける活性化Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ３の過剰発現が乳腺発達を阻止し、マウス乳房腫瘍を誘導することが更に示されている。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化は乳がん細胞の肺及び骨への転移にも関与している。Ｎｏｔｃｈ３の過剰発現はマウスモデルにおいて脈絡叢腫瘍形成を誘導するのに十分であり、或る特定のタイプの脳腫瘍の発生におけるＮｏｔｃｈ３の役割が示唆される。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の新規のモジュレーター（阻害剤）を同定するハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を行うことを目的として、出願人らは経路のリガンド−受容体媒介活性化を誘導する同時培養アッセイを確立した。ＤＬ４−Ｎ１リガンド−受容体媒介経路活性化は、腫瘍血管新生等の病態生理学的状態における重要な役割及びＴ細胞白血病の誘導におけるＮｏｔｃｈ１受容体の役割を果たすため、特にＮｏｔｃｈリガンドＤＬ４及びＮｏｔｃｈ１受容体を用いて同時培養アッセイを確立した。このアッセイはＤＬ４リガンド及びＮｏｔｃｈ１受容体の発現及びそれらの相互作用に依存するため、リガンド−受容体相互作用誘導Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を制御的に詮索する機会をもたらす。９６ウェルプレート及び３８４ウェルプレートフォーマットへのこのアッセイの縮小化は、出願人らがこのアッセイをＨＴＳの実施に適合させるのに役立つ。ｓｉＲＮＡ又は小分子ライブラリーのスクリーニングへのこの同時培養アッセイの使用は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を経路に沿って種々の工程で変調することが可能なタンパク質又は化学化合物の同定を
もたらし得る。例えば、ｓｉＲＮＡ又は小分子ライブラリーを使用するＨＴＳでは、シグナル送信細胞又はシグナル受容細胞において作用することが可能な経路のモジュレーターを得ることができる。リガンド及び受容体の細胞膜への再循環又は輸送における小分子又はタンパク質媒介変化はＮｏｔｃｈ経路を潜在的に阻止することができ、このアッセイを用いて研究され得る。加えて、このアッセイはリガンド−受容体相互作用、Ｎｏｔｃｈ受容体のＡＤＡＭ１０／１７媒介Ｓ２切断若しくはγ−セクレターゼ触媒Ｓ３切断、活性型のＮｏｔｃｈの核移行を阻止することが可能なタンパク質若しくは化学的実体、又は転写活性化複合体を阻止することが可能な実体を同定する助けとなり得る。
出願人らは、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を経路に沿って異なるレベルで阻止することが可能ないくつかの化学物質の同定をもたらす、３つの異なる化学化合物ライブラリー（Ｍｉｃｒｏｓｏｕｒｃｅ ＮＩＭＤＳ、Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ及びＭａｙｂｒｉｄｇｅ Ｈｉｔ
ｆｉｎｄｅｒ）をスクリーニングすることができた。
内部対照としてのＮｏｔｃｈ非依存性ｒｅｎｉｌｌａ系の使用により、出願人らは細胞毒性化学化合物を除外し、それにより偽陽性ヒット率を制限することが可能となった。加えて、この細胞ベースのアッセイは、更なるヒット検証用の化学化合物の細胞透過性に関連する問題を回避するのにも役立った。
ＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイ系の開発はＨＴＳ推進の基盤を築いた。このアッセイは、Ｎｏｔｃｈ経路の新規のモジュレーター（阻害剤）を同定するロバストかつ高感度な読み取り系をもたらした。
出願人らは、Ｎｏｔｃｈ経路活性化を阻止する能力についていくつかの化学化合物を同定した。中でも、化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ＣＡＳ番号２１８４５７−６７−１）を、Ｎｏｔｃｈ経路活性化を阻止するその能力のために同定した。
このため、本発明は、がんの治療及び／又は予防に使用される式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）に関する：
式Ｉ
本発明は、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（ＣＡＳ番号：２１８４５７−６７−１）の循環寿命（circulating lifetimes）を延長する化学修飾体も包含する。ポリペプチド系の薬物を含む薬物を一時的又は可逆的にペグ化する方法の非限定的な例は、米国特許第４，９３５，４６５号（１９９０年６月１９日登録）及び同第６，３４２，２４４号（２００２年１月２９日登録）、並びに米国特許出願公開第２００６／００７４０２４号に提示されている。当業者は、典型的にはＰＥＧ系試薬に関する更なる詳細を、例えば国際公開第２００５０４７３６６号、米国特許出願公開第２００５１７１３２８号及びＮＥＫＴＡＲ ＰＥＧ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｃａｔａｌｏｇ（商標）２００５−２００６（Nektar Therapeutics，San Carlos，Calif.）の記載に見ることができる。
本発明は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有する上記Ｉ３の化学的誘導体を更
に包含する。出願人らは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びその誘導体が核内の転写活性化複合体でのＮｏｔｃｈシグナル伝達を標的とし、上述の突然変異によりγ−セクレターゼ阻害剤に抵抗性を示すヒト腫瘍が、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）治療に応答することが期待されることを示した。加えて、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は選択的にＮｏｔｃｈシグナル伝達を標的とすることにより、そのオフターゲット毒性効果を制限するようである。
これらの誘導体は全て以下の共通構造を有する：
上記誘導体においてＸがＯであり、３（又はパラ）位がＮＨ２であるのが好ましい。
最も好ましくは、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有する誘導体が、
式ＩＩ
（式中、ｍは１〜４から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、ここでＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニ
ル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル又は（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＹはＮ又はＣＨであり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ及び（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル等の芳香族及び複素環式芳香族からなる群から選択される）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル等の芳香族及び複素環式芳香族からなる群から選択される）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（ここで、Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル等の複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３からなる群から選択される）であり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数である）；
式ＩＩＩ
（式中、ｍは１〜４から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ４、Ｒ１５は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＹはＮ又はＣＨであり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（ここで、Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数である）；
式ＩＶ
（式中、ｍは１〜４から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ４はＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルであり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３であり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＹはＮ又はＣＨであり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（ここで、Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数である）；
式Ｖ
（式中、ｍは１〜４から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり
、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数である）；
式ＶＩ
（式中、ｍは１〜４から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ４、Ｒ１５は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フ
ェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数である）；
式ＶＩＩ
（式中、ｍは１〜３から選択される整数であり、
ＷはＨ及びハロゲンから選択され、ハロゲンはＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
Ｒ４はＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルであり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数である）；
式ＶＩＩＩ
（式中、複素環式芳香族はアミノピロール、アミノフラン、アミノチオフラン又はピリミジンであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり
、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、ここでＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル又は（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数である）；
式ＩＸ
（式中、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
複素環式芳香族はアミノピロール、アミノフラン、アミノチオフラン又はピリミジンであり、
Ｒ４、Ｒ１５は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルの群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
式Ｘ
（式中、複素環式芳香族はアミノピロール、アミノフラン、アミノチオフラン又はピリミジンであり、
Ｒ４はＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３アルケニル、アルキニルであり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＸはＯ、Ｓ、ＣＲ５Ｒ６、ＮＲ７、ＮＨＣＯＲ８又はＮＨＳＯ２Ｒ９であり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は各々独立してＨ、フェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、２−又は３−ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジル、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、Ｒ８及びＲ９は各々独立してフェニル、２置換、３置換若しくは４置換フェニル、２−若しくは３−ナフチル、又はピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
ＺはＨ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は各々独立してＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の群から選択される）、ＮＨＣＯＲ１２（ここで、Ｒ１２は（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＣＯＯＲ１３（ここで、Ｒ１３はＨ、（ＣＨ２）ｎＣＨ３、フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリルを含む群から選択される芳香族及び複素環式芳香族である）、ＮＨＳＯ２Ｒ１４（Ｒ１４はフェニル、２置換、３置換又は４置換フェニル、ナフチル、ピロリル、フラニル、チオフラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンジルを含む群から選択される複素環式芳香族、（ＣＨ２）ｎＣＨ３である）であり、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数である）
を含む非限定的な群から選択される。
更により好ましくは、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有する誘導体が、
式ＩＩｄ
４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、
式ＩＩＩａ
４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）アニリン、
式ＩＶａ
６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＩｅ
６−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＩｆ
４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、
式ＩＩｇ
６−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＩｈ
６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＩＩｂ
４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン、
式ＩＩｉ
３−フルオロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、
式ＩＩｊ
６−（４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＶｂ
４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）アニリン、
式ＩＶｃ
４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、
式ＩＩＩｃ
６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
式ＩＩｋ
４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）アニリン、
式ＩＩｌ
４−（４−イソプロピルフェノキシ）アニリン、及び、
式ＩＩｍ
６−（４−（２，４，４−トリメチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
の群から選択される。
本発明は、化合物Ｉ３の塩又は溶媒和物、化学修飾されたＩ３化合物及び本発明の上記Ｉ３化合物の誘導体にも関する。これらの塩及び／又は溶媒和物は薬学的に許容可能であるのが好ましい。本発明によると、薬学的に許容可能な塩は酸性の無機若しくは有機化合物、又はアルカリ性の無機若しくは有機化合物から生じる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」という表現は、特定の化合物の遊離酸及び塩基の生物学的有効性を保持し、生物学的に又は別の点で有害ではない塩を指す。
他に規定のない限り、化合物Ｉ３の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体及びラセミ体を含む全ての異性体、化学修飾されたＩ３化合物及び本発明の上記Ｉ３化合物の誘導体が本発明の一部として企図されることを更に理解されたい。本発明は、光学的に純粋な形態及びラセミ混合物を含む混合物で立体異性体を含む。異性体は、光学的に純粋な若しくは光学的に濃縮された（optically enriched）出発物質を反応させるか、又は本発明の化合物の異性体を分離することによって従来の技法を用いて調製することができる。
「ラセミ体」は鏡像異性体の混合物を指す。
「立体異性体」（単数又は複数）は、１つ又は複数の立体中心のキラリティーが異なる化合物を指す。立体異性体には鏡像異性体及びジアステレオマーが含まれる。化合物Ｉ３、化学修飾されたＩ３化合物及び本発明の上記Ｉ３化合物の誘導体は、１つ若しくは複数の不斉中心又は非対称置換を有する二重結合を有する場合に立体異性体形態で存在しても
よく、したがって個々の立体異性体又は混合物として生成することができる。他に指定のない限り、この表現は個々の立体異性体及び混合物を含むことを意図する。立体化学を決定し、立体異性体を分離する方法は当該技術分野で既知である（Advanced Organic Chemistry, 4th ed., J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992の第４章の論考を参照されたい）。
「互変異性体」は、エノール−ケト互変異性体及びイミン−エナミン互変異性体等の陽子の位置が異なる化合物の代替形態、又はピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾール及びテトラゾール等の環−ＮＨ−部分及び環＝Ｎ−部分の両方に結合した環原子を含有するヘテロアリール基の互変異性体形態を指す。
化合物Ｉ３、化学修飾されたＩ３化合物及び本発明の上記Ｉ３化合物の誘導体が荷電基を含有する場合、好適な対イオンが有機酸又は無機酸に由来することは当業者には既知である。かかる対イオンとしては、ハロゲン化物イオン（塩化物イオン、臭化物イオン、フッ化物イオン、ヨウ化物イオン等）、硫酸イオン、リン酸イオン、酢酸イオン、コハク酸イオン、クエン酸イオン、乳酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、パルミチン酸イオン、コール酸イオン、グルタミン酸イオン、グルタル酸イオン、酒石酸イオン、ステアリン酸イオン、サリチル酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ソルビン酸イオン、ピクリン酸イオン、安息香酸イオン、桂皮酸イオン等が挙げられる。極性部分が負荷電基である場合、好適な対イオンはナトリウムイオン、アンモニウムイオン、バリウムイオン、カルシウムイオン、銅イオン、鉄イオン、リチウムイオン、カリウムイオン及び亜鉛イオン等から選択される。
驚くべきことに、化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は潜在的Ｎｏｔｃｈ阻害剤として同定された。興味深いことに、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、ＮＩＣＤ媒介経路活性化を阻止することが見出された（図１）。ＮＩＣＤ媒介Ｎｏｔｃｈ活性化を軽減するその能力のために、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、ＤＡＰＴ（ａ−γ−セクレターゼ阻害剤、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル−Ｌ−アラニル）］−（Ｓ）−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル）に抵抗性を示すＮＩＣＤを過剰発現する白血病細胞株の増殖を阻止することが可能である（図５）。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のＮｏｔｃｈ阻害能を、ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株（図３）及びＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ｇｅｎｅＣｈｉｐアレイ（データは示さない）におけるＮｏｔｃｈ標的遺伝子の下方調節によって更に確認した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＣ２Ｃ１２細胞のＭＨＣ発現多核筋管への分化を誘導することができるということから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の抗Ｎｏｔｃｈ役割が更に確認された（データは示さない）。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によって生じるＮｏｔｃｈ経路の阻害は、或る特定のレベルを超えるＭＡＭＬ１の過剰発現によって回避することができる。例えば、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、８００ｎｇのＮＩＣＤ及び１μｇのＭＡＭＬ１を細胞に一時的に導入した場合にシグナル伝達を阻止することが可能であったが、ＭＡＭＬ１の量を３μｇまで増大させると、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は経路活性化を阻止することが可能ではなくなった（図２）。これらのデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＮｏｔｃｈ転写活性化複合体を妨げ、それによりシグナル伝達活性化を阻害し得ることが示唆される。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が依然として経路活性化を阻止するレベルでのＭＡＭＬの導入による顕微鏡的研究から、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理が核内コンパートメントにおけるＮＩＣＤ、ＭＡＭＬ１及びＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋの
共局在化を妨げないことが示された（データは示さない）。理論に束縛されるものではないが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の考え得る作用機構の１つは、コアＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋ−ＮＩＣＤ−ＭＡＭＬ１複合体への転写活性化補助因子の動員を中断し得る。したがって、機能的転写活性化複合体の形成に関与する付加的な活性化補助因子の状態を依然として決定する必要がある。生理学的条件下では、ＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋ−ＮＩＣＤ−ＭＡＭＬ１複合体の形成に続いて、ＣＢＰ／ｐ３００ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）が複合体へと動員され、その自己アセチル化並びにヒストン３及び４のアセチル化がもたらされる。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びその誘導体をｉｎ ｖｉｖｏ状況で更に調査し、マウスにおけるそのＮｏｔｃｈ阻害作用及び毒性副作用を決定した。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達は腸内の正常な恒常性の維持に必須である。腸内のＮｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２シグナル伝達の遺伝子除去又は薬理学的阻害は腸内で杯状細胞化生をもたらした。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）はＮｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２媒介シグナル伝達を阻止することが観察されたため、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理したマウスは杯状細胞化生を発生することが期待された。驚くべきことに、２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）での７日間（異種移植の場合は１ヶ月超）のマウスの処理は腸内恒常性を乱さず、杯状細胞蓄積のいかなる兆候も示さなかった（データは示さない）。この予期せぬ結果は２つの理由に起因し得る。１つの考え得る説明は、使用する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の濃度（２５ｍｇ／ｋｇ）が腸内でＮｏｔｃｈ経路活性化を阻止するのに十分でないということであり得る。また、第２のより説得力のある説明は、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２シグナル伝達の下流の転写活性化複合体の組成の違いであり得る。これらの考え得る違いのために、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２媒介シグナル伝達は、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理に対して異なる感度を有し得る。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達は造血系の調節に重要な役割を果たす。例えば、ＤＬ４−Ｎｏｔｃｈ１シグナル伝達は胸腺におけるＴ細胞発生に必須である。Ｎｏｔｃｈ２及びＭＡＭＬ１媒介経路活性化は脾臓における辺縁帯Ｂ（ＭＺＢ）細胞発生に重要である。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が脾臓においてＮｏｔｃｈ依存性ＭＺＢ細胞発生を損なうことができるか否かを検討するために、Ｃ５７Ｂｌ６マウスを２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で７日間処理し、８日目に分析した。Ｂ２２０、ＣＤ２１及びＣＤ２３に対する抗体を用いたフローサイトメトリー分析から、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理が脾臓におけるＭＺＢ細胞の割合及び絶対数の低減を引き起こすことが明らかになった（図７）。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の抗がん活性をヒト疾患、すなわちＴ細胞白血病及び乳がんの移植モデルにおいて調査した。これらの研究において、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は極めて侵攻性の強い型の白血病細胞株の進行及び転移を遅らせる卓越した能力を示した（図８）。加えて、乳がんを固形腫瘍のモデルとして使用する予備研究において、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はマウスにおける腫瘍進行の阻止をもたらした（図９）。
化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）はＮＩＣＤ媒介シグナル伝達を阻止する能力を示した。したがって、この化合物はＮｏｔｃｈ駆動腫瘍がγ−セクレターゼ阻害剤治療に抵抗性を示すがんにおいて有用である。
本発明は、式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）若しくは本明細書に記載のＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、互変異性体、異性体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。適切な担体については、これらを記載する標準的文献、例えば"Comprehensive Medicinal Chemistry", Pergamon Press 1990の第５巻、第２５．２章及び"Lexikon der Hilfsstoffe fuer Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete”, by H.P. Fiedler, Editio Cantor, 2002に言及することができる。「薬学的に許容可能な担体」という用語は、概して安全であり、許容可能な毒性を有する医薬組成物の調製に有用な担体又は賦形剤を意味する。許容可能な担体には、獣医学的使用及びヒト医薬品への使用に許容可能なものが含まれる。本明細書及び特許請求の範囲で使用される「薬学的に許容可能な担体」には、１つ及び２つ以上の両方のかかる担体が含まれる。任意に、本発明の医薬組成物は、がん治療用の化学療法剤を含む非限定的な群から選択される１つ又は複数の付加的な活性剤を更に含む。かかる化学療法剤は、例えばアルトレタミン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、ペントスタチン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、タキソール（Taco）、テモゾロミド、チオグアニン（Tioguanine/Thioguanine）、チオテパ、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビンを含む群から選択され得る。
がんの治療及び／又は予防に使用される本発明の化合物、すなわち６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びその誘導体は、治療的投与のために様々な配合物及び製剤に組み込むことができる。より具体的には、本明細書に提示の１つ又は複数の化合物は、適切な薬学的に許容可能な担体と組み合わせることによって医薬組成物へと配合することができ、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、顆粒、糖衣錠、ゲル、スラリー、軟膏、溶液、坐剤、注射液、吸入剤及びエアロゾル等の固体状、半固体状、液体状又は気体状の調製物へと配合することができる。このため、化合物の投与は経口投与、口腔内投与、直腸投与、非経口投与、腹腔内投与、皮内投与、経皮投与、頭蓋内投与及び／又は気管内投与を含む様々な方法で達成することができる。さらに、化合物は全身的にではなくデポー配合物又は持続放出配合物で局所的に投与することができる。化合物に一般的な賦形剤、希釈剤又は担体を配合することができ、錠剤へと圧縮するか、又は簡便な経口投与のためにエリキシル剤若しくは溶液として配合するか、又は筋肉内経路若しくは静脈内経路で投与することができる。化合物は経皮投与することができ、持続放出投与形態等として配合することができる。化合物は単独で投与しても、互いに組み合わせて投与してもよく、又は他の既知の化合物と組み合わせて使用してもよい。本発明に使用される好適な配合物は、Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company (1985) Philadelphia, PA, 17th ed.)（引用することにより本明細書の一部をなす）に見られる。さらに、薬物送達方法の簡潔な概説については、Langer, Science (1990) 249:1527-1533（引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。
担体材料と組み合わせて単回投与形態を作製することができる本明細書に提示の化合物の量は、治療対象の疾患、それを必要とする被験体及び特定の投与方法に応じて異なる。しかしながら、一般指針としては、本発明の化合物の好適な単位用量は、例えば好ましくは０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、１ｍｇ〜約５００ｍｇ及び１ｍｇ〜約３００ｍｇの活性化合物を含有することができる。別の例では、単位用量は１ｍｇ〜約１００ｍｇである。かかる単位用量は１日２回以上、例えば１日２回、３回、４回、５回又は６回、好ましく
は７０ｋｇのヒト成人への総投与量が１回の投与につき被験体の体重１ｋｇ当たり０．００１ｍｇ〜約１５ｍｇの範囲となるように１日１回又は２回投与することができる。好ましい投与量は、１回の投与につき被験体の体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜約１．５ｍｇであり、かかる療法は数週間又は数ヶ月、場合によっては数年にわたっていてもよい。しかしながら、この分野の当業者には十分理解されているように、任意の特定の患者に特異的な用量レベルは、使用する特定の化合物の活性；治療を受ける個体の年齢、体重、全身状態、性別及び食生活；投与の時間及び経路；排出率；先に投与された他の薬物；並びに療法を行う特定の疾患の重症度を含む様々な因子に依存することを理解されたい。典型的な投与量は、１日１回若しくは１日複数回服用の１個の１ｍｇ〜約１００ｍｇ若しくは１ｍｇ〜約３００ｍｇの錠剤、又は比例的に増加する含量の活性成分を含有する１日１回服用の１個の徐放性カプセル若しくは錠剤である。徐放効果は異なるｐＨ値で溶解するカプセル材料、浸透圧により徐々に放出するカプセル、又は任意の他の既知の制御放出手段によって得ることができる。当業者に明らかなように、これらの範囲外の投与量を用いる必要がある場合もある。
本発明は、がんの治療及び／又は予防に使用される本発明の化合物を更に提供する。
本明細書で使用される場合、がんは好ましくはＮｏｔｃｈ依存性がんであり、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫、乳がん、膵がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、腫瘍血管新生及び結腸直腸がんを含む非限定的な群から選択される。
好ましくは、本発明の化合物（６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）、その誘導体）は、Ｎｏｔｃｈ依存性がんがγ−セクレターゼ阻害剤治療に抵抗性を示す場合のがんの治療にも使用することができる。γ−セクレターゼ阻害剤治療に抵抗性を示すＮｏｔｃｈシグナル伝達依存性ヒト腫瘍は、Ｎｏｔｃｈ標的遺伝子ＮＩＣＤのレベル、並びにＮｏｔｃｈ受容体及びＮｏｔｃｈ経路の他の構成要素の突然変異状態によって決定することができる。
本発明は、がんを治療及び／又は予防する方法であって、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）、その誘導体又は本発明の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法も提供する。
別の実施形態では、本発明は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路活性の上方調節と関連する疾患を治療する方法であって、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）、その誘導体又は本発明の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法を提供する。
本発明の化合物の１日用量は治療を受ける宿主、特定の投与経路、並びに治療対象の病気の重症度及び種類に応じて変える必要がある。したがって、最適な投与量は任意の特定の患者を治療する実行者によって決定され得る。さらに、臨床医又は治療を行う医師は個々の患者の応答と併せた療法の開始、中断、調節又は終了の方法及び時期を知っていることに留意されたい。
本発明の方法に使用する任意の化合物について、治療的に効果的な用量を初めに細胞培養アッセイ、動物モデル又はヒト被験体のマイクロドージングから推定することができる。
本明細書で使用される「治療」は、治療的処置及び予防的（prophylactic or preventative）手段の両方を指す。治療を必要とする被験体には、既にがん等の障害を有する被験
体及びがん等の障害が予防されている被験体が含まれる。したがって、本明細書で治療を受ける哺乳動物、好ましくはヒトは、がん等の障害を有すると診断されていても、又はがん等の障害の素因がある若しくは影響を受けやすいものであってもよい。
「治療的に有効な量」という用語は、哺乳動物における疾患又は障害の治療に効果的な薬物の量を指す。がんの場合、薬物の治療的に有効な量は腫瘍又はがん細胞の数を低減し、腫瘍サイズを低減し；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害し（すなわち、或る程度遅らせ、好ましくは停止させ）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、或る程度遅らせ、好ましくは停止させ）；腫瘍成長を或る程度阻害し；及び／又はがんと関連する症状の１つ又は複数を或る程度緩和することができる。本発明の化合物が既存のがん細胞の成長を予防し及び／又は死滅させ得る範囲で、化合物は細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性であってもよい。「治療的に有効な量」という表現は標的細胞塊、がん細胞群の成長若しくは進行若しくは有糸分裂活性、又は病変の他の特徴の臨床的に有意な変化を少なくとも約３０％、好ましくは少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％予防又は好ましくは低減するのに十分な量を意味するように本明細書で使用される。
任意に、本発明の化合物は、標準的放射線療法及び／又は標準的化学療法等の従来の治療と組み合わせて（例えば、同時若しくはほぼ同時に又は順次に）細胞増殖性（proliferative）疾患に対して使用することができる。標準的放射線療法及び化学療法は併用化学放射線療法であってもよい。
したがって、任意に、標準的放射線療法及び／又は化学療法は、治療的に有効な量の本発明の化合物又はそれを含有する医薬組成物の投与の前、それと同時に又はその後に行うことができる。
「併用化学放射線療法」という用語は、これら２つの治療（化学療法及び放射線療法）が同時又はほぼ同時に、例えば順次に又は同じ日に行われる場合に使用される。
「標準的放射線療法」という用語は、悪性細胞を制御するがん治療の一環としての電離放射線の使用を指す。電離放射線はγ線であるのが好ましい。放射線療法を外科手術、化学療法、ホルモン療法又はそれらの組合せと組み合わせるのも一般的である。最も一般的ながん型は通常は放射線療法で治療することができる。正確な治療意図（根治的、アジュバント、ネオアジュバント又は苦痛緩和）は腫瘍型、位置及び病期、並びにそれを必要とする被験体の全身状態によって決まる。
「標準的化学療法」という用語は概して、特定の化学療法剤／化学剤を用いたがんの治療を指す。化学療法剤は、がんの治療に一般に使用される医薬品を指す。がんの治療用の化学療法剤としては、例えばアルトレタミン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、ペントスタチン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、タキソール、テモゾロミド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン又はビノレルビンが挙げられる。
化学療法剤を本発明による化合物と組み合わせて使用する場合、これら２つの薬剤の組合せを含有する同時投与用の製剤の形で使用しても、又は各々が薬剤の１つを含有する別
個の投与形態の形で使用してもよく、後者の場合、個々の投与形態を例えば順に使用する、すなわち本発明の化合物を含む一方の投与形態の後に化学療法剤を含有する投与形態を使用することができる（又はその逆）。２つの別個の投与形態のこの実施形態は、キットの形態で着想及び提供され得る。
また、任意に本発明の化合物を、例えば部分切除（生検又は完全切除）による従来の腫瘍塊の除去と組み合わせて、がん等の細胞増殖性疾患に対して使用することができる。
「腫瘍塊の除去」という用語は、被験体からの腫瘍塊の任意の除去、摘除又は切除を指す。除去は化学的除去、放射線除去又は外科的除去であり得る。該除去は摘除又は切除等の外科的除去であるのが好ましい。切除は、被験体から器官又は腺の一部を除去する外科的手法である「部分切除」（又は区域切除）であってもよい。切除は腫瘍及びその周囲の正常組織を除去するのにも用いられ得る。腫瘍減量剤（Debulking agent）を腫瘍塊の除去に使用してもよい。「腫瘍減量剤」という用語は、腫瘍塊のがん細胞（例えば上述のＦＬ１０細胞及びＦＬ１−細胞）の死滅を可能にする任意の（例えば化学的、生物学的）分子若しくは任意の外部／環境要因（例えばγ線）又は従来の外科手術を含む。
本発明の別の目的は、がんを治療及び／又は予防する方法に使用される単回用量又は複数回用量の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）若しくはＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、又は本発明の医薬組成物を含むキットである。キットは単回用量又は複数回用量の化学療法剤を更に含み得る。任意に、キットは試薬及び／又は使用説明書を含んでいてもよい。
概して、キットは容器と、容器上の又は付随したラベル又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えばボトル、バイアル、シリンジ等が挙げられる。容器はガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器には病態の治療に効果的な医薬組成物が入れられ、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は静脈注射用溶液バッグ又は皮下注射針を通すことができる栓を有するバイアルであり得る）。ラベル又は添付文書には、組成物ががん等の選択された病態の治療に使用されることが表示される。
本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路の阻害への本発明の化合物の使用にも関する。通常は、該細胞はがん細胞である。
Ｎｏｔｃｈ依存性がんの被験体の治療方法であって、ｉ）上記被験体の生体サンプルから得られるがん細胞において、がんがＮｏｔｃｈシグナル伝達経路依存性であるか否かを決定することと、ｉｉ）上記被験体を、がんがＮｏｔｃｈ依存性がんであるか否かに基づいて、治療的に有効な量の式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）若しくはＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、又は本発明の医薬組成物を投与することによって治療することとを含む、治療方法も想定される。
通常は、がん細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路依存性は当該技術分野で既知の任意の方法によって決定される。例としては、この方法は本明細書に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ γ−セクレターゼ複合体活性アッセイであり得る。
本治療方法は、少なくとも１つの従来のがん治療を行うことを更に含み得る。従来のがん治療は、治療的に有効な量の式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）若しくはＮｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有するその誘導体の１つ、又は本発明の医薬組成物の投与の前に、それと同時に又はその後に行われる。
通常は、従来のがん治療は放射線療法及び／又は化学療法である。
本発明は、Ｇ０／Ｇ１細胞周期停止を誘導することによって細胞においてｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏでアポトーシスを誘発する方法における本発明の化合物の使用にも関する。
本明細書中に記載される本発明に、具体的に記載した以外の変更及び修正の余地があることが当業者には理解される。本発明が、その趣旨と基本的な特徴から逸脱することなく、全てのかかる変更及び修正を包含することを理解されたい。本発明は、本明細書中で個々に又はまとめて言及された又は示された全ての工程、特徴、組成物及び化合物、並びにあらゆる組み合わせ、又は任意の２つ以上の上記工程又は特徴も含む。したがって、本開示は、示される全ての態様において非限定的であるとみなされ、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲に示されるが、本発明の意義及び均等範囲内に含まれる全ての変更が本明細書に包含されることが意図される。
様々な参照文献が本明細書全体にわたって引用されるが、それらは各々、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
以上の説明は、以下の実施例を参照してより完全に理解される。しかしながら、かかる実施例は本発明を実施する方法の一例であり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
実施例１
構築物及び遺伝子レポーターアッセイ：
マウスＤＬ４−ＩＲＥＳ ｄｓＲＥＤ ｃＤＮＡをｐＥＮＴＲ１ベクター（Invitrogen（商標））にクローニングし、最終的にＧａｔｅｗａｙクローニング戦略（Invitrogen）を用いて目的レンチウイルスベクターにシャトルした（shuttled）。ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターによってＤＬ４タンパク質の発現が駆動された。ＤＬ４−レンチウイルス粒子を、２９３Ｔ細胞においてＤＬ４−レンチウイルスベクター、Ｇａｇ／ｐｏｌ発現プラスミド及びウイルスエンベロープタンパク質をコードするプラスミドの共トランスフェクションによって作製した。Ｎｏｔｃｈ１タンパク質を過剰発現するために、マウス完全長Ｎｏｔｃｈ１ ｃＤＮＡをｐＣＤＮＡ３．１−ＩＲＥＳ−ピューロマイシンベクターにクローニングした。Ｎｏｔｃｈ１ ｃＤＮＡをＩＲＥＳ−ピューロマイシンの上流のＨｉｎｄＩＩＩ及びＸｂａＩ制限部位間にクローニングした。ＣＭＶプロモーターによってＮｏｔｃｈ１タンパク質の発現を制御した。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化を測定するために、ＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋコンセンサスＤＮＡ結合配列を頭−尾配置でｐＧＬ４ルシフェラーゼベクター（Promega）にクローニングし、１２×ＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｊｋルシフェラーゼベクターと名付けた。化学化合物スクリーニングアッセイにおいてＮｏｔｃｈ経路活性化を決定するために、１２×ＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋコンセンサスＤＮＡ結合配列をｐＧＬ４．２６．ルシフェラーゼベクター（Promega）にクローニングした。トランスフェクション効率の内部対照として、ＳＶ４０ Ｒｅｎｉｌｌａベクター（Promega）を使用した。
ｐＥＧＦＰ−Ｃ１−ＮＩＣＤ発現プラスミドを用いてＮＩＣＤ−ＧＦＰ過剰発現研究を行った。ＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧを発現するＦＬＡＧ−ＣＭＶ２プラスミドは、ハーバード大学医学大学院（Boston）のLizi Wu博士から寄贈された。
ＤＬ４安定ＨｅＬａ細胞及びＮ１安定ＨｅＬａ細胞の生成：
ＤＬ４安定細胞株及びＮ１安定細胞株を生成するために、ＨｅＬａ細胞をＡＴＣＣから購入した（カタログ番号ＣＣＬ−２）。ＤＬ４安定株を生成するために、細胞にＤＬ４−レンチウイルス粒子によって形質導入を行った。ピューロマイシンを用いてＤＬ４安定クローンを選択した。高ＤＬ４発現クローンを、ＤＬ４に対する抗体を用いて蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）により選別した。Ｎ１安定株を生成するために、細胞にＣＭＶプロモーターの制御下でマウス完全長Ｎｏｔｃｈ１を含有するｐＣＤＮＡ３．１＋（Invitrogen）プラスミドをトランスフェクトした。Ｎｏｔｃｈ１発現クローンを選択するために、ＩＲＥＳピューロマイシンカセットをＮｏｔｃｈ１ ｃＤＮＡの下流にクローニングした。高レベルのＮｏｔｃｈ１を発現するＨｅＬａ細胞を、抗Ｎｏｔｃｈ１抗体を用いたＦＡＣＳによって濃縮した。ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞をＤＭＥＭ（GIBCO，Invitrogen）、１０％ＦＣＳ及び１０ｕｇ／ｍｌのピューロマイシン（Sigma）中で培養した。
ハイスループットスクリーニング及びデータ分析：
化学ライブラリースクリーニングのために、同時培養アッセイを以下のように行った。１０ｃｍ組織培養皿において、Ｎ１−ＨｅＬａ細胞に１プレート当たり１６μｇのｐＧＬ４．２６．１２×ＣＳＬ．ルシフェラーゼベクター、１プレート当たり４μｇのＮｏｔｃｈ１発現プラスミド、及び１プレート当たり２００ｎｇのＳＶ４０ Ｒｅｎｉｌｌａベクターを共トランスフェクトした。ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞を、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ（１×ＰＢＳ）を用いてプレートから剥離した。両方の細胞集団を計数し、１：１の比率（３８４ウェルプレートにおいて５０００：５０００細胞／ウェル）で混合し、マルチドロップＣｏｍｂｉプレートディスペンサーを用いて３８４ウェルプレート（白色、クリアボトム、Corning）に分注した。アッセイプレートに、化学化合物ライブラリー（Ｍｉｃｒｏｓｏｕｒｃｅ ＮＩＭＤＳ、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｈｉｔｆｉｎｄｅｒ及びＰｒｅｓｔｗｉｃｋ）を最終濃度が１０μＭとなるまで（自動化Ｂｉｏｍｅｋ ３０００リキッドハンドラーを用いて）予め分注した。最終アッセイ容量は２２μｌとした。２４時間後、成長培地を吸引し、細胞を１×Ｐａｓｓｉｖｅ溶解バッファーにより室温で１０分間溶解させた。ルシフェラーゼアッセイ試薬ＩＩを用いてルシフェラーゼ活性を測定し、Ｓｔｏｐ ａｎｄ Ｇｌｏｗ試薬（二重ルシフェラーゼアッセイ系、カタログ番号Ｅ１９８０、Promega）を用いてＲｅｎｉｌｌａ値を決定した。ルシフェラーゼ読み取り値及びｒｅｎｉｌｌａ読み取り値はＴｅｃａｎ（商標）Ｆ５００（Tecan）マルチプレートリーダーを用いて得た。全ての液体処理工程（培地の吸引、Ｐａｓｓｉｖｅ溶解バッファー、ルシフェラーゼアッセイ試薬ＩＩ及びＳｔｏｐ ａｎｄ Ｇｌｏｗ試薬の分注）を、ＥＬＦ４０６リキッドハンドラーを用いて行った。
スイス連邦工科大学ローザンヌ校（ＥＰＦＬ）の生体分子スクリーニング施設（ＢＳＦ）の内製分析ソフトウェアを用いてデータ分析を行った。
ＲＮＡ抽出
ＴＲＩｚｏｌ（商標）抽出キット（Invitrogen）を用いて全ＲＮＡを細胞から抽出した。簡潔に述べると、１×１０６個の細胞を氷冷１×ＰＢＳで洗浄し、１ｍｌのＴＲＩｚｏｌ（商標）溶液を用いて室温で５分間溶解させ、核タンパク質複合体を解離させた。次いで、溶解細胞を２００μｌのクロロホルムで処理し、１５秒間〜３０秒間激しく振盪し、室温で２分間〜３分間インキュベートした。サンプルを、エッペンドルフ卓上遠心分離機を用いて４℃で１０分間、１４０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心分離後、上部の水相を新たなエッペンドルフチューブに移した。全ＲＮＡを沈殿させるために、５００μｌのイソアミルアルコールを分離水相に添加し、室温で１０分間インキュベートした。サンプルを４℃で１０分間遠心分離することによってＲＮＡペレットを得た。得られたＲＮＡペレットを１ｍｌの氷冷７５％エタノールで洗浄し、４℃、１４０００ｒｐｍで沈降させた。ＲＮＡペレットの過剰のエタノールを乾燥させて除去し、４０μｌのＤＰＥＣ水に再懸濁
した。
ｃＤＮＡ合成：
細胞から抽出した全ＲＮＡを使用して、逆転写反応によってｃＤＮＡを合成した。逆転写はＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ（Invitrogen）を用いて行った。ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）ＮＤ−１０００分光光度計（Witec AG）を用いてＲＮＡ濃度を測定し、５００ｎｇの全ＲＮＡを１０ｍＭ ｄＮＴＰミックス及び１００ｎｇのランダムプライマーと混合した。反応ミックスを６５℃で５分間インキュベートし、氷上で１分間急速インキュベートした。氷上でのインキュベーション後、５×ファーストストランドバッファー及び０．１Ｍ ＤＴＴを添加し、ミックスを２５℃で２分間インキュベートした。逆転写反応を開始するために、２００ＵのＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐ（商標）ＩＩ ＲＴを反応ミックスに添加し、４２℃で５０分間インキュベートした。反応ミックスを７５℃で１５分間インキュベートすることによって反応を停止させた。
ウエスタンブロット分析：
細胞をＲＩＰＡバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ．Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム及び０．１％ＳＤＳ）に４℃で３０分間溶解させた。溶解細胞を４℃、１４０００ｒｐｍで遠心分離して残屑を除去した。上清を新たなエッペンドルフチューブに移した。タンパク質濃度を、分光光度計（Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ ３０００ ｐｒｏ）を用いてブラッドフォードアッセイによって決定した。４０μｇのタンパク質を、１×ＳＤＳゲルローディングバッファー（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ．Ｃｌ（ｐＨ６．８）、２００ｍＭ ＤＴＴ、４％ＳＤＳ、０．２％ブロモフェノール、２０％グリセロール）中で、９９℃で５分間加熱することによって変性させた。変性タンパク質サンプルをアクリルアミドゲルでのローディングまで氷上で保管した。サンプルを８％又は１０％アクリルアミドゲルで、Ｔｒｉｓ−グリシン電気泳動バッファー（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、２５０ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ）中で泳動した。アクリルアミドゲルでの分離の後、タンパク質サンプルを、転写バッファー（３９ｍＭグリシン、４８ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基、０．０３７％ＳＤＳ及び２０％メタノール）を用いてＰＶＤＦ膜（PEQ lab、カタログ番号３９−３０１０）に転写した。
免疫ブロットのために、膜を５％ミルクでブロッキングし、一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。膜を１×ＴＢＳＴ（１×ＴＢＳ＋０．５％ｔｗｅｅｎ ２０）で５分間（３回）洗浄し、ＨＲＰ結合二次抗体とともに室温で１時間インキュベートした。Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ化学発光基質（Thermo Scientific、カタログ番号３４０７７）を用いてシグナルを検出した。
免疫蛍光染色：
免疫蛍光染色を行うために、ＨｅＬａ細胞又はＣ２Ｃ１２細胞をカバーガラス上で成長させた。細胞を１×氷冷ＰＢＳで洗浄し、４％ＰＦＡを用いて室温で５分間固定し、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を用いて透過化した。続いて、透過化細胞を１％ＢＳＡを用いて室温で２０分間ブロッキングした。細胞を適切な一次抗体とともに室温で１時間インキュベートした。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−４８８結合二次抗体を使用して、一次抗体を検出した。細胞をＤＡＰＩで対比染色し、蛍光マウンティング培地にマウントした。ＥＰＦＬの生体イメージング光学コア施設でZeissのＡｘｉｏｐｌａｎ顕微鏡を用いて蛍光像を表示し、取り込んだ。
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞分化アッセイ：
Ｃ２Ｃ１２細胞を成長培地（１０％血清）の存在下、コラーゲンコーティングカバーガラス上で成長させた。筋芽細胞分化を誘導するために、細胞を１００％コンフルエンシーまで分化培地（２％ウマ血清）の存在下又は成長培地＋Ｎｏｔｃｈ阻害剤の存在下で３日間成長させた。３日後、細胞を１×氷冷ＰＢＳで洗浄し、４％ＰＦＡで固定した。２．２．６節（免疫蛍光染色）で説明したように、抗ＭＨＣ抗体を使用して免疫蛍光染色を行った。
フローサイトメトリー分析：
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析を、ＥＰＦＬのフローサイトメトリーコア施設でフローサイトメトリー用のＣｙＡｎ（商標）ＡＤＰ装置プラットホームで行った。ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞におけるＤＬ４及びＮｏｔｃｈ１の発現を、それぞれ抗ＤＬ４抗体及び抗Ｎ１抗体を用いて決定した。胸腺におけるＴ細胞発生をＣＤ４、ＣＤ８及びＴＣＲβに対する抗体を用いて調査した。ＭＺＢ細胞発生をＢ２２０、ＣＤ２１及びＣＤ２３に対する抗体を用いてモニタリングした。簡潔に述べると、単一細胞懸濁液を胸腺及び脾臓から調製した。１×１０６個の細胞を、５０μｌの染色培地（２％ＮＣＳ及び２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したＨＢＳＳ）に懸濁し、適切な抗体の組合せを用いて氷上で３０分間インキュベートすることによって染色した。
アポトーシス細胞の割合を定量化するために、ＡｎｎｅｘｉｎＶ及び７ＡＡＤ染色を行った。胸腺細胞を３００μｌの１×ＡｎｎｅｘｉｎＶ結合バッファー（BD Biosciences，San Diego，USA）に懸濁し、１０μｌのＡｎｎｅｘｉｎＶ−Ｃｙ５抗体及び１０μｌの７ＡＡＤ（BD Biosciences，San Diego，USA）とともにインキュベートした。サンプルを室温で１５分間インキュベートした。ＦＡＣＳを１時間の抗体染色によって行った。
生細胞に対するフローサイトメトリー分析を、前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）についてゲーティングすることによって行った。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Tree Star，Ashland，OR）によって分析した。
Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ増殖アッセイ：
Ａｌａｍａｒｂｌｕｅ（商標）増殖アッセイを行い、Ｎｏｔｃｈ阻害剤処理細胞の成長動態を決定した。Ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ（商標）は細胞透過性基質レザズリンからなる。代謝的に活性な増殖性細胞中では、レザズリンは生細胞固有の還元力のためにレソルフィンに変換され、赤色蛍光を生じる。したがって、レソルフィンの生成は細胞集団の生存能力の指標となる。
増殖アッセイを、１ウェル当たり５０００個の細胞を９６ウェルプレートに播種することによって行った。細胞を異なる時間間隔でＤＭＳＯ又はＮｏｔｃｈ阻害剤により処理した。全ての時間間隔での各処理は８反復で行った。成長動態を決定するために、１０μｌのＡｌａｍａｒ ｂｌｕｅ（商標）（Invitrogen）を各ウェルに添加し、４時間インキュベートした。Ｔｅｃａｎ Ｆ５００（Tecan）マルチプレートリーダーを用いてＡｌａｍａｒｂｌｕｅ読み取り値を得た。
ヘマトキシリン・エオシン染色：
臓器を摘出し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて４℃で一晩固定し、パラフィン包埋した。組織切片を脱ろうし（dewaxed）、漸減濃度のエタノール（１００％→７０％）を用いて、最終的には蒸留水に水和させた。切片をヘマトキシリンで５分間染色し、酸アルコールで約２０秒間リンスした後、流水で１０分間リンスした。次いで、切片をエオシンで５分間染色し、水で洗浄し、漸増濃度のエタノール（７０％→１００％）で脱水し、キシレン溶液で清浄した。マウンティング溶液を用いて切片をマウントした。ヘマトキシリン・エオシン染色切片を観察し、Ｌｅｉｃａ ＤＭＩ４０００顕微鏡を用いて画像を取り込んだ。
Ａｌｃｉａｎ ｂｌｕｅ染色：
腸組織を氷冷１×ＰＢＳで洗浄し（flushed）、４％ＰＦＡで固定した。組織をパラフィン包埋し、厚さ４ミクロンの切片にした。腸切片を６０℃で脱パラフィンし、漸減濃度のアルコール（１００％→７０％）を用いて水和し、最終的に蒸留水で洗浄した。Ａｌｃｉａｎ ｂｌｕｅ染色を室温で３０分間行い、流水で洗浄し、最終的にｎｕｃｌｅａｒ ｆａｓｔ ｒｅｄ溶液で５分間対比染色した。次いで、組織切片を流水で洗浄し、１００％アルコールで脱水し、キシレン溶液で清浄した。次いで、マウントした切片を観察し、Ｌｅｉｃａ ＤＭＩ４０００顕微鏡を用いて画像を取り込んだ。
実験マウス：
ＥＰＦＬ（Lausanne）の動物施設でマウスを飼育し、繁殖させた。Ｃ５７Ｂｌ６マウスを使用して、化学化合物の腸管毒性を評価した。ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ−ＩＲＥＳ Ｃｒｅ（ＦＶＢバックグラウンド）マウスは、マギル大学（Montreal）のWilliam J Muller博士から提供され、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ特異的プライマーを用いて遺伝子型を決定した（Ursini-Siegel et al., 2008）。ＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスはThe Jackson Laboratory（USA）から購入し、ＥＰＦＬ（Lausanne）の動物施設で飼育し、繁殖させた。
腸管毒性及び辺縁帯Ｂ細胞発生に対する影響：
Ｃ５７Ｂｌ６マウスに、油又は２５ｍｇ／ｋｇのＩ３又は１０ｍｇ／ｋｇのＣＰＡを５日間〜７日間にわたって１日１回腹腔内（ｉ．ｐ）注射した。０日目、３日目及び５日目
に体重計を用いてマウスを秤量した。８日目に、腸組織、脾臓及び胸腺を分析のために摘出した。
腫瘍移植アッセイ：
ヒト白血病細胞株ＲＰＭＩ ８４０２及びＨＰＢ ＡＬＬに、ＣＭＶプロモーターの下流に構成的に発現されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するレンチウイルスによって形質導入を行った。ヒト白血病細胞株ＲＰＭＩ ８２０４（０．５×１０６個〜１×１０６個の細胞）及びＨＰＢ ＡＬＬ（１×１０６個）を１００μｌの氷冷１×ＰＢＳに懸濁し、移植まで氷上で維持した。ＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスにヒト白血病細胞株を静脈内（ｉ．ｖ）注射によって移植した。マウスを、Ｃａｌｉｐｅｒ ＩＶＩＳ（Xenogen）ライブイメージングシステムを用いて腫瘍発生についてモニタリングした。簡潔に述べると、ルシフェラーゼ基質ルシフェリン（Biosynth、Ｌ−８８２０）を１×ＰＢＳに溶解し、マウスに１５０ｍｇ／ｋｇ（体重）の濃度で（腹腔内）注射した。マウスを、ルシフェリン注射の５分後にＣａｌｉｐｅｒ ＩＶＩＳライブイメージングシステムを用いてイメージングした。
１３日目〜１５日目に、マウスを油又は２５ｍｇ／ｋｇのＩ３で毎日処理した。画像は実験の最後に取り込んだ。
原発性ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ乳腺腫瘍をマウスから摘出し、単一細胞懸濁液を調製した。１×１０６個の原発性腫瘍細胞を５０μｌの１×ＰＢＳに懸濁し、氷上で維持した。３週齢のレシピエントＦＶＢマウスの内因性上皮を除去し、腫瘍細胞を空脂肪織（empty fat pad）に注射した。レシピエントマウスにおける腫瘍発生をモニタリングし、デジタルキャリパーを用いて腫瘍体積を測定した。以下の式を用いて腫瘍体積を算出した：２×長さ×（幅）２。腫瘍の体積が約１００ｍｍ３に到達した時点で、レシピエントマウスを油又は２５ｍｇ／ｋｇのＩ３で１日おきに処理した。
アッセイ開発
Ｎｏｔｃｈ経路の新規のモジュレーターを同定するために、出願人らは、ＤＬ４リガンドを発現するＨｅＬａ細胞をＮ１ ＨｅＬａ細胞とともに培養し、それによりＮｏｔｃｈ経路を活性化する同時培養アッセイを確立した。ＤＬ４ ＨｅＬａ細胞及びＮ１ ＨｅＬａ細胞同時培養系の使用は、リガンド発現細胞と受容体発現細胞との間の細胞間連絡の生理学的条件を模倣する。制御受容体−リガンドアッセイ系のｉｎ ｖｉｔｒｏ生成により、出願人らはＮｏｔｃｈシグナル強度をγ−セクレターゼ阻害剤によって変更し、モニタリングすることが可能となった。
ＤＬ４：Ｎ１ ＨｅＬａ細胞同時培養はＮｏｔｃｈシグナル伝達を活性化する
同時培養アッセイを設定するために、出願人らはＤＬ４発現安定ＨｅＬａ細胞株及びＮ１発現安定ＨｅＬａ細胞株を確立した。簡潔に述べると、ＨｅＬａ細胞にＰＧＫプロモーターの下流にＤＬ４ ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスによって形質導入を行った。Ｄ４発現細胞集団を蛍光活性化細胞選別によって濃縮した。同様に、Ｎ１安定ＨｅＬａ細胞株を、マウスＮ１ ｃＤＮＡを含有するプラスミドに続いてＩＲＥＳピューロマイシン選択カセットを用いて確立した。この系によって、出願人らは、ピューロマイシンを使用して選択する場合にＮｏｔｃｈ１発現クローンのみを選択することが可能となった。それぞれの細胞株におけるＤＬ４タンパク質及びＮ１タンパク質の発現レベルを、抗ＤＬ４抗体及び抗Ｎ１抗体を用いて検出した。フローサイトメトリーによるタンパク質レベルの定量化から、親ＨｅＬａ細胞と比較して高レベルのＤＬ４及びＮ１の発現が示された（データは示さない）。
安定細胞株のＮｏｔｃｈ経路活性化能を評価するために、ＤＬ４安定ＨｅＬａ細胞及び
Ｎ１安定ＨｅＬａ細胞（それぞれＤＬ４−ＨｅＬａ及びＮ１−ＨｅＬａ）を６ウェルプレートにおいて１：１の比率で同時培養し、コンフルエンシーまで成長させた。同時培養細胞をＤＭＳＯ又はＤＡＰＴ（１０μＭ）で２４時間処理した。比較のために、親ＨｅＬａ細胞もＤＬ４−ＨｅＬａ細胞とともに同時培養し、ＤＡＰＴの存在下又は非存在下で２４時間成長させた。ＶＡＬ１７４４抗体を用いた活性型のＮｏｔｃｈ１（ＮＩＣＤ）のウエスタンブロット分析を行ったが、親ＨｅＬａ細胞をＤＬ４ ＨｅＬａ細胞と同時培養した場合に僅かなレベルのＮＩＣＤのみが明らかとなり（データは示さない）、ＨｅＬａ細胞中の低レベルの内因性Ｎｏｔｃｈ１が説明された。一方、リガンドの非存在下（ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞）又はＧＳＩの存在下（ＤＡＰＴ）では、ＮＩＣＤレベルは検出されず、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の喪失が示された（データは示さない）。しかしながら、ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞の同時培養により、顕著に高いレベルのＮＩＣＤが明らかになったが、これはＤＡＰＴ処理によって阻止することができる（データは示さない）。Ｎ１−ＨｅＬａ細胞への完全長Ｎｏｔｃｈ１ ｃＤＮＡの一時的導入により、ＮＩＣＤタンパク質レベルの増大によって示されるように、同時培養アッセイのロバスト性が更に高められた（データは示さない）。ＤＡＰＴによるＮ１切断の阻害は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性の増大を取り消すことができる（データは示さない）。これらの結果から、高レベルのＮｏｔｃｈ経路活性化が、ＧＳＩ阻害に応答するＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイにおいて達成され得ることが確認された。
６ウェルプレートフォーマットでのＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイの確立により、出願人らは受容体−リガンド相互作用媒介Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化を評価することが可能となった。同時培養系のＧＳＩ（ＤＡＰＴ）処理は、受容体−リガンド相互作用駆動Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を阻止することができる。
ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）適合アッセイの確立
初めに、ＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイを６ウェルプレートにおいて確立した。ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を設定するために、３８４ウェルプレートフォーマットで確実に奏功するようにアッセイ系を更に最適化した。
アッセイを化学化合物ライブラリーのスクリーニングのために３８４ウェルプレートフォーマットへと縮小した。これを達成するために、Ｎ１−ＨｅＬａ細胞にレポータープラスミド及びＮ１発現ベクターをトランスフェクトした。１２時間後、化学化合物を陰性対照及び陽性対照としてＤＭＳＯ及びＤＡＰＴとともに３８４ウェルプレートに分注した。ＤＬ４−ＨｅＬａ細胞及びＮ１−ＨｅＬａ細胞を１：１の比率（５０００：５０００細胞／ウェル）で混合し、マルチドロップＣｏｍｂｉプレートディスペンサーを用いて３８４ウェルプレートに添加した。二重ルシフェラーゼアッセイ系を用いてルシフェラーゼ読み取り値を測定した。アッセイを最適化し、その再現性を決定するために、プレートの半分をＤＭＳＯで処理し（１９２ウェル）、もう半分を１０μＭ ＤＡＰＴで処理した（１９２ウェル）。ＤＡＰＴ処理はＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化の１０倍の下方調節をもたらした。このアッセイのＺ’値は０．５よりも高かった。０．５を超えるＺ’値により、ＨＴＳ推進用のアッセイの信頼性及び再現性が確認される。
実施例２
新規のＮｏｔｃｈシグナル伝達阻害剤としての６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）
Ｉ３はＮｏｔｃｈシグナル伝達のＮＩＣＤ媒介活性化を阻害する：
Ｎｏｔｃｈ阻害活性を立証し、Ｉ３化合物のＩＣ５０値を決定するために、ＤＬ４：Ｎ１同時培養アッセイ系を使用した。同時培養アッセイにおける細胞は、漸増濃度のＩ３（２μＭ→１０μＭ）で２４時間処理した。Ｎｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いてＮｏｔｃｈ経路の活性化を測定した。図１Ａに示されるように、Ｉ３はＮｏ
ｔｃｈシグナル伝達をより低いμＭ範囲でのＩＣ５０値で濃度依存的に阻止する。
ＮＩＣＤの過剰発現がＮｏｔｃｈシグナル伝達のＩ３媒介阻害を回避し得るか否かを決定するために、ＨｅＬａ細胞にＮＩＣＤ発現プラスミド及び１２×ＣＳＬルシフェラーゼ構築物を共トランスフェクトした。トランスフェクト細胞を漸増濃度のＩ３及びＤＡＰＴで処理した。驚くべきことに、Ｉ３によるＮＩＣＤ発現細胞の処理は経路活性化を用量依存的に阻止することができたが、ＤＡＰＴはシグナル伝達活性化に対して影響を有しなかった（図１Ｂ）。このデータから、Ｎｏｔｃｈ経路のＩ３媒介阻害がＳ３切断事象の下流のその活性によるものであることが示唆される。
次に、出願人らはＩ３が他のＮｏｔｃｈ受容体を介して経路活性化を阻止することができるか否か、又はそれがＮｏｔｃｈ１シグナル伝達に特異的であるか否かを調査した。これに対処するために、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達がＤＬ４：Ｎ１又はＤＬ４：Ｎ２リガンド受容体対を介して活性化される同時培養アッセイを用いた。これら２つの同時培養アッセイにおけるＩ３による細胞の処理は、ＤＬ４：Ｎ１及びＤＬ４：Ｎ２リガンド−受容体対の両方を介したＮｏｔｃｈシグナル伝達の阻害を引き起こした（図１Ｃ）。同様に、Ｉ３はＮｏｔｃｈ１−細胞内ドメイン（ＮＩＣＤ）及びＮｏｔｃｈ２−細胞内ドメイン（Ｎ２−ＩＣＤ）によっても経路活性化を阻止することができ、Ｉ３がＮＩＣＤ媒介活性化に特異的でないことが示唆された（図１Ｄ）。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミンはＮＩＣＤの核局在化を阻止しない：
ＮＩＣＤトランスフェクトＨｅＬａ細胞によるｉｎ ｖｉｔｒｏデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＮｏｔｃｈシグナル伝達を、Ｓ３切断事象の下流に作用することによって阻止することが示唆された。これにより、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の作用機構に関していくつかの可能性が指摘される。例えば、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はＮＩＣＤの核局在化を損ない得る。第２の考え得る阻害機構は、核内の転写活性化複合体の１つ又は複数の個々の構成要素の標的化であり得る。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＮＩＣＤの核輸送に影響を与えるか否かを試験するために、ＨｅＬａ細胞にＮＩＣＤ−ＧＦＰ融合構築物をトランスフェクトし、ＤＭＳＯ及び６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理した。これにより、出願人らは細胞内での融合タンパク質の輸送を追跡することが可能となった。並行して、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介経路阻害をＮｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼ測定によって決定した（データは示さない）。顕微鏡的研究から、ＤＭＳＯ処理細胞においてＮＩＣＤ−ＧＦＰ融合タンパク質が核内に移行し、これが６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理によって乱されないことが示された（データは示さない）。このデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の作用機構としてＮＩＣＤの核排除が除外される。
或る特定の閾値を超えるＭＡＭＬ１の過剰発現は、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）誘導Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害を回避し得る：
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介阻止がＮＩＣＤの核排除に関与しないため、出願人らは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＮＩＣＤ、ＭＡＭＬ１及びＣＳＬ−ＲＢＰ−ｊｋ（コア転写活性化複合体の全ての部分）の相互作用、ひいては核内局在性を阻止するか否かに対処した。これを解決するために、ＨｅＬａ細胞に８００ｎｇのＮＩＣＤ−ＧＦＰプラスミド、１μｇのＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧ発現ベクターを共トランスフェクトし、カバーガラス上で成長させた。トランスフェクトＨｅＬａ細胞をＤＭＳＯ
又は６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）（１０μＭ）で２４時間処理した。Ｎｏｔｃｈ活性化をこの濃度のＮＩＣＤ及びＭＡＭＬ１で阻止する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の能力を、Ｎｏｔｃｈ駆動ルシフェラーゼ測定によって検証した（データは示さない）。処理後、細胞を４％ＰＦＡで固定し、１％ＢＳＡでブロッキングし、ＦＬＡＧ標識ＭＡＭＬ１及びＣＳＬ−ＲＢＰ−ｊｋに対する抗体を用いて染色した。ＧＦＰタンパク質をトレーシングすることによってＮＩＣＤ−ＧＦＰ融合タンパク質を可視化した。単独で発現される場合、ＮＩＣＤ−ＧＦＰタンパク質は核内に拡散して局在化し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はその核局在化を変更しなかった。しかしながら、ＮＩＣＤ−ＧＦＰ及びＭＡＭＬ１の過剰発現は、核内コンパートメント（場合によっては核小体）への両方のタンパク質の共局在化をもたらした。細胞の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、ＮＩＣＤ−ＧＦＰ及びＭＡＭＬ１の核内コンパートメントへの移行及び共局在化を乱さなかった（データは示さない）。
同様に、ＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋの位置を、このタンパク質に特異的な抗体を用いて調査した。図２２Ｃに示されるように、ＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧ及びＣＳＬ／ＲＢＰ−ｊｋは核内コンパートメントに共局在化し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はそれらの核内での分散を乱さなかった（データは示さない）。このデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理が核内でのＮｏｔｃｈ転写活性化複合体の構成要素の共局在化を乱さないことが示唆される。しかしながら、それが複合体の様々な構成要素間の相互作用を阻止するか否かは依然として調査する必要がある。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の作用機構を更に調査するために、出願人らは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が転写活性化複合体の構成要素の１つを標的とし得るとの仮説を立てた。この標的タンパク質の過剰発現によって６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化合物が飽和し（titrate out）、それにより６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）誘導経路阻害が回避され得る。この問題に対処するために、ＨｅＬａ細胞に８００ｎｇのＮＩＣＤ−ＧＦＰプラスミド及び漸増量（０μｇ、１μｇ及び３μｇ）のＭＡＭＬ１−ＦＬＡＧ発現ベクターを共トランスフェクトした。Ｎｏｔｃｈ経路活性化を、１２×ＣＳＬルシフェラーゼプラスミドを導入することによって測定した。図２に示されるように、ＮＩＣＤ単独又はＮＩＣＤ＋１μｇのＭＡＭＬ１をトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞において、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はＮｏｔｃｈシグナル伝達を濃度依存的に阻止することができる。しかしながら、ＭＡＭＬ１プラスミドの量を３μｇまで増大させると、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はＮｏｔｃｈシグナル伝達の活性化を阻害することが可能ではなくなった（図２）。したがって、或る特定の閾値を超えるＭＡＭＬ１の過剰発現は、Ｎｏｔｃｈ経路の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介阻害を回避し得る。このデータから、ＭＡＭＬ１自体が６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化合物の標的となり得ることが示唆される。ＭＡＭＬ１濃度の増大は阻害剤を飽和させることにより、シグナル伝達カスケードを阻止不可能にすることが可能であり得る。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、ヒトがん細胞株においてＮｏｔｃｈシグナル伝達を減少させる：
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の異常活性化は、腫瘍発生及び／又はヒトがんの維持において重要な役割を果たす。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（
Ｉ３）処理がヒトがん細胞においてＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻止することができるか否かを決定するために、様々ながん細胞株（Ｔ−ＡＬＬ細胞株ＲＰＭＩ ８４０２、ＨＰＢＡＬＬ、ＫＯＰＴＫ１及び膵がん細胞株ＰＡＮＣ１）を６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で２４時間処理した。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達に対する影響を、Ｎｏｔｃｈ標的遺伝子の発現レベルを測定することによって決定した。ヒトがん細胞株（ＲＰＭＩ ８４０２、ＨＰＢＡＬＬ、ＫＯＰＴＫ１及びＰＡＮＣ１）の２４時間の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理、及び続くｑＲＴ−ＰＣＲ又はウエスタンブロット分析によるＮｏｔｃｈ標的遺伝子の分析から、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が、ｍＲＮＡレベル及びタンパク質レベルでＨｅｓ１、ｃＭｙｃ及びＤｔｘ１等のＮｏｔｃｈ標的遺伝子の統計的に有意な下方調節を誘導することが示された（図３）。Ｎｏｔｃｈ標的遺伝子の下方調節はＮＩＣＤレベルの低下と相関する（図３Ｂ、図３Ｃ及び図３Ｄ）。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるヒトＴ−ＡＬＬ細胞株及びＰＡＮＣ１膵がん細胞株の処理はＮｏｔｃｈシグナル伝達の下方調節を誘導したため、出願人らはこの経路の阻害ががん細胞の成長停止につながるか否かを問題とした。この目的で、ＲＰＭＩ ８４０２、ＫＯＰＴＫ１、ＰＡＮＣ１及びｎＲａｓ駆動黒色腫細胞株を、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の存在下又は非存在下で数日間成長させ、それらの増殖指数をＡｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイを用いて測定した。加えて、既知のＮｏｔｃｈ突然変異を有しないＢ−リンパ球ＲＡＪＩ細胞株を対照として使用した（データは示さない）。図４に示されるように、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴ処理は、Ｔ−ＡＬＬ細胞株ＲＰＭＩ ８４０２、ＫＯＰＴＫ１及び膵がん株ＰＡＮＣ１において有意な増殖阻止を誘導した。同様に、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、ｎＲａｓ駆動黒色腫細胞株の成長を有意に阻害した（図４）。しかしながら、ＤＡＰＴも６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）も、Ｎｏｔｃｈ非依存性ＲＡＪＩ細胞の増殖に対して何ら影響を有しなかった（データは示さない）。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、ＮＩＣＤ過剰発現ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株及び乳がん細胞株においてＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻止するが、ＤＡＰＴは阻止しない
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、Ｎｏｔｃｈ経路のＮＩＣＤ媒介活性化を阻止することができる（図１）。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＮＩＣＤ過剰発現細胞においても増殖阻止を誘導することができるか否かを決定するために、ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株ＤＮＤ４１（ＤＮＤ４１−親）にＮＩＣＤ発現レンチウイルスによって形質導入を行い、ＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞株を生成した。これら２つの細胞株をＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで処理した。ＤＡＰＴ及び６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるＤＮＤ４１−親細胞株の処理は、ＤＭＳＯ処理細胞と比較してＨｅｓ１の下方調節をもたらした。しかしながら、ＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞をＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで処理した場合、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のみがＨｅｓ１の下方調節を引き起こし、ＤＡＰＴ処理は引き起こさなかった（図５Ａ）。加えて、これら２つの細胞株を、数日間にわたって６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴの抗増殖効果についてもモニタリングした。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理及びＤＡＰＴ処理の両方がＤＮＤ４１−親細胞株において有意な増殖阻止を引き起こす一方で（図５Ｂ）、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）しかＤＮＤ４１−ＮＩＣＤ細胞にお
いて成長停止を誘導することが可能でないことが観察された（図５Ｃ）。このデータにより、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化合物がヒトがん細胞においてＮＩＣＤ媒介経路活性化及び増殖を阻止することができるという考えが更に裏付けられる。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がヒトがん細胞のＮＩＣＤ媒介経路活性化及び増殖を阻止することができるという考えを更に裏付けるために、ＨＣＣ１１８７ヒト乳がん細胞株をこの化合物で処理した。ＨＣＣ１１８７細胞株はＳＥＣＣ２２Ｂ−Ｎｏｔｃｈ２染色体転座を有するため、構成的に活性な形態のＮ２−ＩＣＤを生成する（図５Ｄ）。この突然変異のために、ＨＣＣ１１８７細胞株はＤＡＰＴ等のγ−セクレターゼ阻害剤に応答しない。図５Ｅに示されるように、ＤＡＰＴ処理はＨＣＣ１１８７細胞株の増殖を阻害しなかったが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はこれらの細胞株の増殖阻止を有意に誘導した。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病細胞株においてＧ０／Ｇ１細胞周期停止及びアポトーシスを誘導する：
図４及び図５に示されるように、ヒト白血病細胞株及びヒト乳がん細胞株の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は増殖を負に調節する。この６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介増殖停止は、細胞周期の異なる段階におけるアポトーシス又は細胞周期停止の誘導に起因し得る。加えて、γ−セクレターゼ阻害剤を用いたＮｏｔｃｈシグナル伝達の阻害はヒトＴＡＬＬ細胞株においてＧ０／Ｇ１細胞周期停止を誘導することが示された。したがって、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介増殖停止に関与する機構を更に解明するために、細胞周期及びアポトーシスの分析を行った。ヒトＴＡＬＬ細胞株（ＲＰＭＩ８４０２、ＫＯＰＴＫ１、ＴＡＬＬ１、ＣＵＴＬ１及びＨＰＢ ＡＬＬ）及びヒト乳がん細胞株ＨＣＣ１１８７を、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）又はＤＭＳＯで２日間又は７日間処理した。細胞死を調査するために、７日間の処理後にＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色を行い、アポトーシス（ＡｎｎｅｘｉｎＶ陽性）細胞集団の割合をフローサイトメトリー分析によって決定した。図６Ａに示されるように、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はＲＰＭＩ８４０２、ＣＵＴＬ１、ＫＯＰＴＫ１、ＴＡＬＬ１及びＨＰＢ ＡＬＬにおいて有意なアポトーシスを誘導する。同様に、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミンはヒト乳がん細胞株ＨＣＣ１１８７においてアポトーシスを誘導する（図６Ｃ）。
アポトーシスの誘導に加えて、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理したヒト白血病細胞株及び乳がん細胞株において観察された増殖停止は、細胞周期のＧ０／Ｇ１期の細胞周期停止にも起因するようである。白血病細胞株（ＲＰＭＩ８４０２、ＫＯＰＴＫ１及びＴＡＬＬ１）及び乳がん細胞株を、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で４８時間処理し、Ｋｉ６７及びヘキスト染色を用いて細胞周期の状態を決定した。図６Ｂ及び図６Ｄに示されるように、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の阻害により通常観察される表現型である細胞周期のＧ０／Ｇ１期での停止を誘導する。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害はＣ２Ｃ１２筋芽細胞分化を誘導する：
種々の系における６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のＮｏｔｃｈ阻害能を更に確認するために、Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞分化を機能的アッセ
イとして用いた。Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞におけるＮｏｔｃｈ経路活性化は、それらを未分化状態に保持し、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の解消はそれらの分化を誘導する。Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞をＤＭＳＯ、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）及びＤＡＰＴで処理し、１００％コンフルエンシーまで３日間成長させた。３日後、細胞を固定し、ミオシン重鎖（ＭＨＣ）タンパク質に対する抗体で染色した。細胞核をＤＡＰＩで対比染色した。１０％血清（成長培地）の存在下で成長させたＣ２Ｃ１２筋芽細胞は未分化状態を維持し、ＤＡＰＴ及び６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理した細胞は、多核ＭＨＣ陽性筋管への分化を開始した（データは示さない）。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、Ｗｎｔ及びヘッジホッグシグナル伝達カスケードを妨げない
化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の活性に関する関心の１つは、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路に対するその特異性である。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が他の発生経路も阻止し得るか否かを試験するために、出願人らは、Ｗｎｔ及びヘッジホッグシグナル伝達経路を阻止するその能力を試験した。要約すると、Ｗｎｔシグナル伝達を測定するために、ＨｅＬａ細胞にＴＣＦ／ＬＥＦ結合部位からなるプロモーターを含有するプラスミドをトランスフェクトし、それによりルシフェラーゼ遺伝子（ＴＯＰ−ルシフェラーゼ）の発現を駆動した。Ｗｎｔ経路を活性化するために、β−カテニンをコードするプラスミドをＨｅＬａ細胞に共トランスフェクトした。共トランスフェクトした細胞を、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化学化合物の存在下又は非存在下でインキュベートした。β−カテニンの一時的導入は、β−カテニン−ＴＣＦ／ＬＥＦ駆動ルシフェラーゼ活性によって測定されるＷｎｔシグナル伝達の上方調節をもたらす。重要なことには、Ｗｎｔシグナル伝達が活性化した細胞の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、Ｗｎｔ経路活性化を阻止しない（データは示さない）。
同様の戦略を用いて、ヘッジホッグシグナル伝達をＨｅＬａ細胞においてＧｌｉ１転写因子を導入することによって活性化し、ルシフェラーゼ発現を駆動するＧｌｉ１結合部位を含有するプロモーター配列を用いて経路活性化をモニタリングした。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるこれらの細胞の処理は、ヘッジホッグシグナル伝達カスケードを阻害しなかった（データは示さない）。まとめると、これらのデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化学化合物が他の発生経路を損なわず、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害に特異的であり得ることが示唆される。しかしながら、依然として６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）に対するＷｎｔ及びヘッジホッグシグナル伝達の抵抗性が細胞型特異的であるか否か、又はそれが一般現象であるか否かを決定する必要がある。
Ｃ５７ＢＬ６マウスにおける６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のｉｎ ｖｉｖｏ効果：
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達は発生中のいくつかの器官の恒常性を調節する。例えば、Ｎｏｔｃｈ１媒介経路活性化は胸腺におけるＴ細胞発生に必須である（Radtke et al., 1999）。しかしながら、ＭＡＭＬ１の喪失がマウスにおけるＴ細胞発生を乱さなかったことから、Ｎｏｔｃｈ１駆動Ｔ細胞発生はＭＡＭＬ１に依存性ではないようである。これはＭＡＭＬ１の喪失に対するＭＡＭＬ２及びＭＡＭＬ３ファミリー成員による代償機構によるものであり得る。脾臓においては、ＭＡＭＬ１のみによるＮｏｔｃｈ２駆動シグナル伝達がＭＺＢ細胞発生に必要とされる。Ｎｏｔｃｈ２及びＭＡＭＬ１の遺伝子除去喪失は、ＭＺＢ細胞発生の阻止を引き起こす（Wu et al., 2007、Saito et al., 2003）。加えて、Ｎ
ｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２の両方を介したＮｏｔｃｈシグナル伝達が腺窩コンパートメントの維持に必須である。腸内でのＮｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２の複合遺伝子除去は杯状細胞化生をもたらす。出願人らはしたがって、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が上述のＮｏｔｃｈ依存性発生プロセスを損ない得るか否かを調査した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養アッセイでは、化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２媒介経路活性化を阻止することが可能であった。したがって、出願人らは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるマウスの処理が腸の杯状細胞化生をもたらし得ると仮定した。この仮説を試験するために、マウスに２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）を７日間連続して腹腔内（ｉ．ｐ）注射した。８日目に動物を屠殺し、腸組織を固定し、パラフィン包埋した。杯状細胞を染色するＡｌｃｉａｎ ｂｌｕｅを用いて組織学的分析を行った。驚くべきことに、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ２媒介経路活性化の両方をｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物において阻止するその能力にも関わらず、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理マウスの腸組織は、構造が無傷であり、杯状細胞化生を示さずに完全に正常であった（データは示さない）。同様に、体重変化に対する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の影響もモニタリングした。マウスに５日間連続して２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）を注射し、体重変化を記録した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるマウスの処理は、体重の減少を引き起こさなかった。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理はＭＺＢ細胞発生の阻止を誘導する：
出願人らは、Ｎｏｔｃｈ２シグナル伝達の６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介阻害が、脾臓においてＭＺＢ細胞発生の阻止をもたらすと仮定した。ＭＺＢ細胞発生をＢ２２０、ＣＤ２１及びＣＤ２３に対する抗体を用いた脾細胞のフローサイトメトリー染色によって評価した。図７Ｂに示されるように、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるマウスの処理は脾臓におけるＭＺＢ細胞集団の割合の低減をもたらす。加えて、脾臓におけるＭＺＢ細胞集団の喪失はＭＺＢ細胞の絶対数にも反映される（図７Ｃ）。
したがって、ＭＺＢ細胞発生における６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）媒介阻止は、Ｎｏｔｃｈ２及びＭＡＭＬ１表現型の喪失を模倣するものである。しかしながら、依然として６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）がＭＡＭＬ１のみを介してそのＮｏｔｃｈ阻害効果を発揮するか否か、又はそれが他のＭＡＭＬファミリー成員も介してＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻止し得るか否かを確かめる必要がある。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理は、異種移植モデルにおいてヒトＴ細胞白血病の腫瘍成長を遅らせる：
経路の種々の構成要素における活性化突然変異によるＮｏｔｃｈシグナル伝達の活性化が、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病の５０％超を引き起こすことが知られている。したがって、出願人らは、Ｎｏｔｃｈ駆動ヒトＴ細胞白血病における化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のｉｎ ｖｉｖｏでの抗がん活性を調査することにした。この目的を達成するために、ヒト白血病の異種移植モデルをＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスを用いて確立した。ヒトＴ−ＡＬＬ細胞株ＨＰＢ ＡＬＬ及びＲＰＭＩ ８４０２をこの目的で使用した。ＨＰＢ ＡＬＬ細胞株は、Ｎｏｔ
ｃｈ１受容体のヘテロ二量体化ドメイン内にＬ１５７５Ｐ突然変異及びＰＥＳＴドメイン内に挿入を有し、それによりＮｏｔｃｈ１シグナル伝達を構成的に活性化する。同様に、ＲＰＭＩ ８４０２細胞は、ヘテロ二量体化ドメインの１５８４ａ．ａ残基での挿入、更にはＥ３リガーゼＦＢＷ７での不活性化突然変異（Ｒ４６５Ｈ）のためにリガンド非依存的なＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化を示す。これらの細胞株の両方が、増殖及び／又はＮｏｔｃｈ標的遺伝子の下方調節の点でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養アッセイにおいて６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理に応答することが見出された。これらの細胞株が異種移植状況で白血病を確立するか否かを決定するために、各々の株に由来する１００万個の細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスに静脈内（ｉ．ｖ）注射した。動物は１００％浸透度で白血病を発症し、移植後４週間以内に死亡した。
ＲＰＭＩ ８４０２細胞株及びＨＰＢ ＡＬＬ細胞株が異種移植アッセイにおいて白血病を発生することが示された時点で、ルシフェラーゼ遺伝子を構成的に発現するレンチウイルスによって形質導入を行った。これにより、出願人らがマウスにおいてＣａｌｉｐｅｒ ＩＶＩＳ（Xenogen）ライブイメージング検出システムを用いて白血病の進行を可視化し、モニタリングすることが可能となった。確立された腫瘍における６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の抗がん有効性を決定するために、維持実験を行った。１００万個のＨＰＢ ＡＬＬ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスに（ｉ．ｖ）注射した。ルシフェラーゼ発現白血病細胞を検出することによって、マウスを白血病の発症についてモニタリングした。疾患が１５日目前後で確立されると、マウスを２つの群に分けた。一方の群を対照として油で処理し、第２の群を２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で毎日処理した。図８Ａに示されるように、油で処理したマウスは１００％浸透度で白血病を発症し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理マウスにおける白血病は、油処理群と同じ速度では進行しなかった（図８Ａ）。
同様に、予備実験において、ＮＯＤ／ＳＣＩＤγｃ−／−マウスに５×１０５個のＲＰＭＩ ８４０２細胞を移植し、疾患の確立後に油又は６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で処理した。図８Ｂに示されるように、油で処理した動物は白血病を発症したが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理マウスは疾患を有しなかった。さらに、組織学的分析から、油処理マウスでは白血病細胞が進行して肝臓に浸潤したが、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理マウスでは肝臓にいかなる転移性病変も発生しなかったことが明らかになった（データは示さない）。これらの動物を化学化合物６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で２７日間処理してから、腸組織を分析して腸における任意の毒性を検出した。腸組織のＡｌｃｉａｎ ｂｌｕｅ染色では、杯状細胞数及び腸構造のいかなる異常も示されなかった（データは示さない）。
まとめると、ヒト白血病の異種移植モデルによる出願人らのデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が既に確立された白血病の疾患進行を遅らせる能力を有することが示唆される。腫瘍進行に影響を与えるその能力のために、Ｉ３は抗がん剤としての更なる開発の好適な候補となり得る。
ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２マウス乳腺腫瘍は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達活性化及び乳腺腫瘍進行に対する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の影響を示す。
ヒト乳がんでは、高レベルのＮｏｔｃｈ１タンパク質及びＪａｇｇｅｄ１タンパク質が乳がん患者の低い生存率に関連している。加えて、ヒト乳がんにおけるＮｏｔｃｈシグナル伝達の活性化は骨及び肺への転移も促進する。したがって、乳がんにおける化学化合物
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の抗がん能を決定するために、乳がんのマウスモデルを調査した。ＥｒｂＢ２のマウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）駆動過剰発現はマウス乳腺腫瘍を引き起こすことが知られている。ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２トランスジェニックマウスは、約５ヶ月〜６ヶ月の潜伏期間で乳腺腫瘍を発生するとともに肺転移を発生する。ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２マウス乳腺腫瘍の特徴の１つは、主に管腔上皮細胞型の存在である。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達はマウス乳腺幹細胞からの管腔細胞分化を駆動することが知られている。したがって、出願人らは、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２乳腺腫瘍におけるＮｏｔｃｈ経路の活性化が、管腔上皮細胞分化に有利に働くことによって腫瘍形成に一部寄与し得ると仮定した。この目的で、出願人らは、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２−ＩＲＥＳ−Ｃｒｅ乳腺腫瘍におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化のレベルを、Ｈｅｓ１レベルをウエスタンブロットにより測定することによって調査した。図９Ａに示されるように、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２駆動乳腺腫瘍は、年齢適合正常乳腺と比較して非常に高いレベルのＨｅｓ１タンパク質を発現する。乳がん発生に対する６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の影響を調査するために、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２乳腺腫瘍を、ＭＭＴＶ−ＥｒｂＢ２導入遺伝子を有するＦＶＢマウスから摘出した。単一細胞懸濁液を調製し、５×１０５個の腫瘍細胞をレシピエントＦＶＢマウスの空脂肪織に注射した。触診可能な腫瘍が発生した時点で、レシピエントマウスを油又は２５ｍｇ／ｋｇの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）で実験が終了するまで１日おきに処理した。腫瘍体積を一定間隔で測定し、記録した。予備実験結果から、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）による腫瘍担持レシピエントマウスの処理が、油単独で処理したマウスと比較して有意な腫瘍成長遅延を引き起こすことが示された（図９Ｂ）。このデータから、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）が確立された乳がんの成長を遅らせる能力を有することが示された。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）は、原発性ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病においてＮｏｔｃｈシグナル伝達を阻止する：
関連病態における６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）のＮｏｔｃｈ阻害効果を更に調査するために、一次ヒトＴＡＬＬサンプルをＮｏｔｃｈシグナル伝達の活性化についてプロファイリングした。活性型のＮｏｔｃｈ（ＮＩＣＤ）の蓄積を経路活性化のバイオマーカーとして用いた。いくつかの一次ヒトＴＡＬＬが発がん性ＮＩＣＤの蓄積を示し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）によるこれらの腫瘍の処理はこのタンパク質の下方調節をもたらす。さらに、これらの一次ヒトＴＡＬＬサンプルにおけるＮＩＣＤの下方調節は増殖停止と相関する（データは示さない）。対照的に、検出可能なレベルのＮＩＣＤを示さない一次ヒトＴＡＬＬサンプルは、６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）処理に対して応答しなかった（データは示さない）。
これらのデータから、ＮＩＣＤの蓄積をＮｏｔｃｈ経路活性化のバイオマーカーとして用いることができ、Ｎｏｔｃｈ阻害剤６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）を用いた治療成果を予測することができることが示される。
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の種々の誘導体は、ＤＬ４−Ｎ１同時培養アッセイにおいてＮｏｔｃｈシグナル伝達活性化を阻止する能力を示す：
親６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）化合物のＮｏｔｃｈ阻害活性及び有効性を高めるために、Ｉ３の種々の化学的誘導体をＤＬ４−Ｎ１同時培養アッセイにおいて試験した。６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン（Ｉ３）の４０個を超える種々の化学的誘導体のスクリーニングにより、以下の化合物が同時培養アッセイにおいてＮｏｔｃｈ経路活性化を阻止するその能力のため
に得られた（図１０）。
Ｉ３−Ａ） ６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン
Ｉ３−Ｂ） ６−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン（ＣＡＳ番号１０３６５３３−９１−１）
Ｉ３−Ｃ） ４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）アニリン（ＣＡＳ番号５６７０５−８９−６）
Ｉ３−Ｄ） ６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン
Ｉ３−Ｅ） ４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン（ＣＡＳ番号３２８０３２−８１−１）
Ｉ３−Ｆ） ４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）アニリン（ＣＡＳ番号７０６８２−６４−３）
Ｉ３−Ｇ） ６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン
Ｉ３−Ｈ） ６−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン（ＣＡＳ番号１０９８３６６−４３−８）
Ｉ３−Ｉ） ４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン（ＣＡＳ番号９４６７８５−７７−９）
Ｉ３−Ｊ） ４−（４−イソプロピルフェノキシ）アニリン
Ｉ３−Ｋ） ６−（４−（２，４，４−トリメチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン
Ｉ３−Ｌ） ４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン
Ｉ３−Ｍ） ３−フルオロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン
Ｉ３−Ｎ） ６−（４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン
Ｉ３−Ｏ） ４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）アニリン
Ｉ３−Ｐ） ４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン
図１０に示されるように、これらの誘導体の一部（Ｉ３−Ａ、Ｉ３−Ｂ、Ｉ３−Ｃ、Ｉ３−Ｅ、Ｉ３−Ｇ、Ｉ３−Ｈ、Ｉ３−Ｍ及びＩ３−Ｎ）は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を親化合物Ｉ３と同等レベルまで阻止したが、誘導体Ｉ３−Ｆ及びＩ３−Ｉは活性の向上を有するようである。
実施例３
誘導体及びその前駆体の化学合成
４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノール
４−ブチリルフェノール（１０００ｍｇ、６．０９ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（２５ｍＬ）及びＤＣＭ（５ｍＬ）に懸濁し、０℃まで冷却した。トルエン中の２Ｍ Ｍｅ３Ａｌ溶液（７ｍＬ、１４．０１ｍｍｏｌ、２．３０当量）を滴加し、それにより出発物質を溶解した。室温で１５時間撹拌した後、反応混合物を再度０℃まで冷却し、ＴＭＳＯＳＯ２ＣＦ３（１．１ｍＬ、６．０９ｍｍｏｌ、１．００当量）を滴加した。室温で３日間撹拌した後、混合物を氷水に注ぐことによって反応をクエンチした。４０％Ｈ３ＰＯ４による酸性化の後、生成物を酢酸エチル（３×）で抽出し、有機層をＨ３ＰＯ４酸性
飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。溶媒を減圧下、３０℃で除去した。得られた粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／石油エーテル１：１→２：１）によって精製して、表題化合物を無色の油として得た（１８８ｍｇ、純度約９０％（ＮＭＲによる）、０．９５ｍｍｏｌ、収率１５％）。Ｒｆ＝０．６０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１２Ｈ１７Ｏ−に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ−Ｈ］− １７７．１２７９、実測：１７７．１２８４。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４〜７．１８（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．８２〜６．７６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、５．１２（ｓ、１Ｈ、ＯＨ）、１．６０〜１．５２（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．２７（ｓ、６Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．１６〜１．０１（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、０．８３（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．０３、１４２．２９、１２７．１１、１１４．８５、４７．３５、３７．２５、２９．２３、１８．０９、１４．９０。
基本手順Ａ：
それぞれのニトロピリジン又はニトロベンゼン及び特定のフェノールをＤＭＦ又はＤＭＳＯに溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３を添加し、反応混合物を特に明記しない限り完全に変換するまで室温で撹拌した。次いで、反応をＨ２Ｏの添加によってクエンチし、生成物をＥｔＯＡｃ又はＥｔ２Ｏで抽出した。有機層を１Ｍ ＮａＯＨ水溶液（１×）、その後飽和ＮａＣｌ水溶液（１×）で洗浄した。減圧下、３０℃で溶媒を乾燥除去させた。残渣をＤＣＭに溶解し（resolved）、コットンを通して濾過し、無機塩を除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、対応する表題化合物（Ｉ３−ｎ、Ｉ３−ｎＡ〜Ｉ３−ｎＰ）を得た。
２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（５０１ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（６１１ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ、１．２９当量）をＤＭＦ（６．０ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（６５４ｍｇ、４．７３ｍｍｏｌ、１．５０当量）を添加し、反応混合物を室温で１４時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００→１：５０）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（８２０ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ、収率９５％）。Ｒｆ＝０．４０（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１５Ｈ１７Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７３．１２３４、実測：２７３．１２２９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．５３〜７．４２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１７〜７．０５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．３５（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．２０、１５０．４９、１４８．９８、１４５．２６、１４０．２９、１３４．９５、１２６．９９、１２０．８４、１１１．３８、３４．７２、３１．５７。
２−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＡ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−シクロヘキシルフェノール（４１７ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ、１．２５当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（３９７ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ、１．５２当量）を添加し、反応混合物を室温で２７時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００→１：７５）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（６００ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．３５（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ
１：２０）。Ｃ１７Ｈ１９Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２９９．１３９０、実測：２９９．１３９２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３１〜７．２２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０７（ｄｄ、Ｊ＝８．７、２．３Ｈｚ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．５８〜２．５１（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、２．０１〜１．６４（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．５６〜１．１０（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．１８、１５０．７１、１４５．８８、１４５．１７、１４０．２２、１３４．８９、１２８．３０、１２１．１２、１１１．３０、４４．０８、３４．５９、２６．９５、２６．１９。
５−ニトロ−２−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン、Ｉ３−ｎＢ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３０３ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ペンチルフェノール（３９７ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ、１．２７当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（４０３ｍｇ、２．９２ｍｍｏｌ、１．５３当量）を添加し、反応混合物を室温で７時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（５３０ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、収率９７％）。Ｒｆ＝０．３１（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１６Ｈ１９Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２８７．１３９０、実測：２８７．１３８１。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０７〜９．０５（ｍ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４５（ｄｄ、Ｊ＝９．４、２．４Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．６７（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．３１（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．７３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．１７、１５０．４６、１４７．３４、１４５．２０、１４０．２７、１３４．９０、１２７．５６、１２０．７２、１１１．２８、３７．８９、３７．０６、２８．５５、９．２６。
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−４−（４−ニトロフェノキシ）ベンゼン、Ｉ３−ｎＣ
手順Ａに従って、４−フルオロニトロベンゼン（５００ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（６７１ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ、１．２６当量）をＤＭＦ（６．０ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（８５７ｍｇ、６．２０ｍｍｏｌ、１．７５当量）を添加し、反応混合物を室温で５２時間撹拌した。ＥｔＯＡｃで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（８６０ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ、収率８９％）。Ｒｆ＝０．７２（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：９）。Ｃ１６Ｈ１８ＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７２．１２８１、実測：２７２．１２７２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２４〜８．１６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４９〜７．３９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０６〜６．９７（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、１．３５（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６３．８２、１５２．２９、１４８．５９、１４２．５４、１２７．２７、１２６．０３、１２０．１５、１１６．９８、３４．６７、３１．５８。
２−（４−ブチルフェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＤ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（１０３ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ブチルフェノール（１２６ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．２９当量）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（１４３ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、１．５９当量）を添加し、反応混合物を室温で６時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（１９０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．３３（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１５Ｈ１７Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７３．１２３４、実測：２７３．１２２６。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０５（ｄｄ、Ｊ＝２．９、０．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３２〜７．２１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１１〜７．０２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．００（ｄｄ、Ｊ＝９．０、０．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．６９〜２．６０（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．７０〜１．５７（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．３９（ｄｑ、Ｊ＝１４．６、７．３Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、０．９５（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．２７、１５０．７５、１４５．２２、１４０．８６、１４０．３０、１３４．９２、１２９．９１、１２１．２２、１１１．３２、３５．２１、３３．６７、２２．５１、１４．０８。
１−ニトロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ベンゼン、Ｉ３−ｎＥ
手順Ａに従って、４−フルオロニトロベンゼン（３１８ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ペンチルフェノール（４６０ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、１．２４当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（４６５ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ、１．４９当量）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（５３３ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、収率８３％）。Ｒｆ＝０．７０（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１７Ｈ２０ＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２８５．１３６５、実測：２８５．１３５９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２５〜８．１４（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４４〜７．３２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０６〜６．９６（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、１．６６（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．３１（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．７１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６３．８１、１５２．２４、１４６．９４、１４２．５６、１２７．９１、１２６．０１、１２０．０６、１１６．９９、３７．８９、３７．０６、２８．６３、９．２７。
１−シクロヘキシル−４−（４−ニトロフェノキシ）ベンゼン、Ｉ３−ｎＦ
手順Ａに従って、４−フルオロニトロベンゼン（３２５ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−シクロヘキシルフェノール（５１９ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ、１．２８当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（５１３ｍｇ、３．７２ｍｍｏｌ、１．６１当量）を添加し、反応混合物を室温で４８時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００→１：５０）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（６４０ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、収率９３％）。Ｒｆ＝０．５５（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１８Ｈ２０ＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２９８．１４３８、実測：２９８．１４４２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３１〜８．１１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１３〜６．９２（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、２．５７〜２．５０（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、２．０９〜１．６７（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．５９〜１．１８（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６３．８９、１５２．６１、１４５．５８、１４２．５７、１２８．６６、１２６．０４、１２０．４９、１１６．９９、４４．１４、３４．７２、２６．９９、２６．２３。
２−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＧ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−アダマンチルフェノール（５４６ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１．２６当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（６６２ｍｇ、４．７９ｍｍｏｌ、２．５３当量）を添加し、反応混合物を室温で４２時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００→１：５０）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（６６４ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．３６（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ２１Ｈ２３Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３５１．１７０３、実測：３５１．１７０１。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４５（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．５２〜７．３９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１６〜７．０６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．１３〜２．１０（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．９４（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、５Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８７〜１．７０（ｍ、５Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．１９、１５０．５１、１４９．１８、１４５．２０、１４０．２６、１３４．８９、１２６．５３、１２０．８３、１１１．３２、４３．３５、３６．８２、３６．１８、２９．０２。
２−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＨ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１．００当量）及び３−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（３５８ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ、１．２６当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（４２０ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ、１．６０当量）を添加し、反応混合物を室温で７０時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（５１２ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、収率９９％）。Ｒｆ＝０．３７（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１５Ｈ１７Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７３．１２３４、実測：２７３．１２３２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０８〜９．０４（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４７（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３９（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３３（ｄｄｄ、Ｊ＝７．９、１．８、１．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１７（ｔ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１（ｄｄ、Ｊ＝９．１、０．５Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９８（ｄｄｄ、Ｊ＝７．９、２．４、１．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．３４（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．２１、１５３．８８、１５２．７６、１４５．２６、１４０．３１、１３４．９３、１２９．５０、１２３．１７、１１８．６２、１１８．４７、１１１．２８、３５．０２
、３１．３６。
１−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−２−フルオロ−４−ニトロベンゼン、Ｉ３−ｎＩ
手順Ａに従って、３，４−ジフルオロニトロベンゼン（４０１ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（４７７ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、１．２６当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（５２２ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ、１．５０当量）を添加し、反応混合物を室温で１９時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：５０）によって精製し、表題化合物を無色の油として得た（７２２ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ、収率９９％）。Ｒｆ＝０．５４（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１６Ｈ１７ＦＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２９０．１１８７、実測：２９０．１１９４。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０７（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．９６（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、２．７、１．５Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４９〜７．３８（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０９〜６．９９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、８．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．３５（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．３５、１５２．２３、１５１．９３、１５１．８２、１５０．８４、１４８．７０、１４２．４０、１４２．３３、１２７．２９、１２０．６８、１２０．６４、１１９．３８、１１７．７３、１１７．７１、１１３．２８、１１３．０５、３４．６５、３１．５４。
１−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−２−フルオロ−４−ニトロベンゼン、Ｉ３−ｎＪ
手順Ａに従って、３，４−ジフルオロニトロベンゼン（５０９ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−シクロヘキシルフェノール（６９１ｍｇ、３．９３ｍｍｏｌ、１．２３当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（６６４ｍｇ、４．８１ｍｍｏｌ、１．５０当量）を添加し、反応混合物を室温で２３時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：５０）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（１００２ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、収率９９％）。Ｒｆ＝０．５１（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１８Ｈ１９ＦＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋
３１６．１３４３、実測：３１６．１３４８。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０９（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．９７（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、２．７、１．４Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３３〜７．２２（ｍ、２
Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０８〜６．９９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、８．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．５８〜２．５１（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．９８〜１．７３（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．５２〜１．２０（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．３５、１５２．５１、１５２．０１、１５１．９０、１５０．８４、１４５．６８、１４２．３９、１４２．３２、１２８．６７、１２０．７０、１２０．６６、１１９．７３、１１７．７０、１１７．６８、１１３．３０、１１３．０８、４４．０９、３４．６９、２６．９７、２６．２１。
２−フルオロ−４−ニトロ−１−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ベンゼン、Ｉ３−ｎＫ
手順Ａに従って、３，４−ジフルオロニトロベンゼン（５０２ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−ペンチルフェノール（６９３ｍｇ、４．２２ｍｍｏｌ、１．３４当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（６５６ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ、１．５０当量）を添加し、反応混合物を室温で２２時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：５０）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（９４３ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ、収率９９％）。Ｒｆ＝０．６１（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１７Ｈ１９ＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋
３０４．１３４３、実測：３０４．１３３２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０８（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．９６（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、２．７、１．５Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４２〜７．３５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０７〜６．９９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９５（ｄｄ、Ｊ＝９．１、８．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．６６（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．３１（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．７１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．４０、１５２．１９、１５１．９８、１５１．８７、１５０．８８、１４７．１１、１２７．９７、１２０．７１、１２０．６８、１１９．３４、１１７．７３、１１７．７１、１１３．１１、３７．９２、３７．０８、２８．６４。
２−（４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＬ
手順Ａに従って、４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノール（５２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１．００当量）及び２−クロロ−５−ニトロピリジン（５７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．２３当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（６６ｍ
ｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．６５当量）を添加し、反応混合物を室温で２７時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：５０）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（８６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、収率９８％）。Ｒｆ＝０．５０（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：１０）。Ｃ１７Ｈ２１Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３０１．１５４７、実測：３０１．１５４５。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０７（ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４５〜７．３５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１４〜７．０５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９９（ｄｄ、Ｊ＝９．０、０．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．６５〜１．５４（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．３２（ｓ、６Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．１９〜１．０５（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、０．８４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．１７、１５０．４３、１４７．６９、１４５．２１、１４０．２６、１３４．９０、１２７．４４、１２０．７２、１１１．２９、４７．２７、３７．７４、２９．０７、１８．０８、１４．８７。
（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−１−（４−（４−ニトロフェノキシ）フェニル）アダマンタン、Ｉ３−ｎＭ
手順Ａに従って、４−フルオロニトロベンゼン（３０３ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−アダマンチルフェノール（６００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ、１．２２当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（４５０ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ、１．５２当量）を添加し、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００→１：５０）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（７３６ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ、収率９８％）。Ｒｆ＝０．７３（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：１０）。Ｃ２２Ｈ２４ＮＯ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋
３５０．１７５１、実測：３５０．１７６０。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２７、８．１０（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４６〜７．３５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０８〜６．９５（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、２．１３〜２．１０（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．９３（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、６Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８８〜１．７０（ｍ、６Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６３．８５、１５２．３０、１４８．８６、１４２．５３、１２６．８６、１２６．８５、１２６．０３、１２０．１８、１１７．００、４３．４０、３６．８２、３６．１７、２９．０３。
（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−１−（４−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）フェニル）アダマンタン、Ｉ３−ｎＮ
手順Ａに従って、３，４−ジフルオロニトロベンゼン（３０３ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−アダマンチルフェノール（５３３ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ、１．２３当量）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（３９５ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ、１．５０当量）を添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（７０３ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．６９（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：１０）。Ｃ２２Ｈ２２ＦＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＡＰＰＩ） ［Ｍ］＋ ３６７．１５８４、実測：３６７．１５８１。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０８（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．９６（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、２．７、１．５Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４６〜７．３６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０６〜７．００（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９５（ｄｄ、Ｊ＝９．１、８．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．１７〜２．０７（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．９２（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、５Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８７〜１．７１（ｍ、５Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．３６、１５３．３５、１５２．２４、１５２．２１、１５１．９９、１５１．８８、１５０．８５、１５０．８３、１４８．９８、１２６．８９、１２０．７０、１２０．６６、１１９．４４、１１９．４２、１１７．７２、１１７．７０、１１３．３０、１１３．０７、４３．３８、３６．８１、３６．１７、２９．０２。
２−（４−イソプロピルフェノキシ）−５−ニトロピリジン、Ｉ３−ｎＯ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３０３ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−イソプロピルフェノール（３３１ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、１．２７当量）をＤＭＦ（６．０ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（３９８ｍｇ、２．８８ｍｍｏｌ、１．５１当量）を添加し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：１００）によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た（４９０ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、収率９９％）。Ｒｆ＝０．４０（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１４Ｈ１５Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５９．１０７７、実測：２５９．１０７２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０４（ｄ、Ｊ＝３．４Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４４（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３７〜７．２８（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１２〜７．０６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０３〜６．９７（ｍ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、２．９６（ｈｅｐｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨ（ＣＨ３）２）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ、ＣＨ（ＣＨ３）２）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１
６７．０８、１５０．６７、１４６．４９、１４５．０２、１４０．１８、１３４．８１、１２７．８４、１２１．１１、１１１．２４、３３．６２、２４．０３。
５−ニトロ−２−（４−（２，４，４−トリメチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン、Ｉ３−ｎＰ
手順Ａに従って、２−クロロ−５−ニトロピリジン（３０３ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、１．００当量）及び４−ｔｅｒｔ−オクチルフェノール（４９５ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ、１．２５当量）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）に溶解した。無水Ｋ２ＣＯ３（４２６ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ、１．６１当量）を添加し、反応混合物を４０℃で２８時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏで抽出した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／石油エーテル１：５０）によって精製し、表題化合物を無色の固体として得た（５９８ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、収率９５％）。Ｒｆ＝０．６５（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：１０）。Ｃ１９Ｈ２５Ｎ２Ｏ３ ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋
３２９．１８６０、実測：３２９．１８５４。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．０７（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、８．４５（ｄｄ、Ｊ＝９．１、２．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．５２〜７．４０（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．１４〜７．０３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、１．７６（ｓ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）、１．４０（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）、０．７５（ｓ、９Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６７．２４、１５０．４９、１４８．１２、１４５．３０、１４０．２９、１３４．９２、１２７．７８、１２０．５７、１１１．１５、５７．２８、３８．６３、３２．５５、３１．９３、３１．６２。
基本手順Ｂ：
それぞれのニトロ誘導体（Ｉ３−ｎ、Ｉ３−ｎＡ〜Ｉ３−ｎＰ）を初めにＭｅＯＨ若しくはトルエンに溶解するか、又はＭｅＯＨ中の触媒量のＰｄ（１０％）活性炭粉末の懸濁液に直接添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を完全に変換するまで室温で撹拌した。次いで、反応混合物をセライトを通して濾過した。溶媒を減圧下、３０℃で除去し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、対応する表題化合物（Ｉ３、Ｉ３−Ａ〜Ｉ３−Ｐ）を得た。
６−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎ（３００ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、１．００当量）を、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（８２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）によって精製して、表題化合物を薄ベージュ色の固体として得た
（２５０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、収率９４％）。Ｒｆ＝０．４０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１５Ｈ１９Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２４３．１４９２、実測：２４３．１４８７。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６９（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３９〜７．３１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０３（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．００〜６．９３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７２（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４８（ｓ、１Ｈ、ＮＨ２）、１．３１（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．６２、１５３．２８、１４６．３３、１３８．８２、１３４．０６、１２６．８６、１２６．４７、１１９．２４、１１２．３６、３４．３３、３１．５２。
６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ａ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＡ（２０１ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、１．００当量）を、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（４７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）によって精製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た（１９０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．３６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１７Ｈ２１Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２６９．１６４８、実測：２６９．１６４３。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７０（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２２〜７．１３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０４（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１〜６．９２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７３（ｄｄ、Ｊ＝８．８、０．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．３６（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．５１〜２．４４（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．９７〜１．６７（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．４９〜１．１５（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８８、１５３．６１、１４３．４７、１３８．６７、１３４．２１、１２７．９２、１２６．９６、１１９．６８、１１２．３８、４３．９９、３４．６８、２７．０１、２６．２５。
６−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｂ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＢ（２００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．００当量）を、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で３時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ０．５％）によって精製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た（１０７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ、収率６０％）。Ｒｆ＝０．４１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１６Ｈ２１Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５７．１６４８、実測：２５７．１６４８。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ３）δ７．７３（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３４〜７．２３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０２〜６．９４（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．３５（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．６２（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．２７（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．７０（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８０、１５３．３６、１４４．７５、１３８．７２、１３４．３０、１２７．１９、１２６．９７、１１９．１３、１１２．５１、３７．６３、３７．０４、２８．６４、９．２６。
４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）アニリン、Ｉ３−Ｃ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＣ（３００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１．００当量）を、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０５当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；酢酸エチル／石油エーテル１：１００→１：１０）によって精製して、表題化合物を暗黄色の油として得た（２４４ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、収率９１％）。Ｒｆ＝０．７８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１６Ｈ２０ＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２４２．１５３９、実測：２４２．１５３０。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３３〜７．２７（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９１〜６．８４（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７２〜６．６６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４９（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．３１（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．５５、１４９．２４、１４５．０５、１４２．３０、１２６．４５、１２１．０８、１１６．９０、１１６．４９、３４．３３、３１．６６。
６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｄ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＤ（１７０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、１．００当量）を、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０８当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）によって精製して、表題化合物を褐色の固体として得た（１３３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、収率８８％）。Ｒｆ＝０．３８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１５Ｈ１９Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２４３．１４９２、実測：２４３．１４８５。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６９（ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２０〜７．０９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０３（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．００〜６．９１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７２（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．３６（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．６７〜２．５１（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．６６〜１．５２（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１
．４１〜１．３１（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、０．９３（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８３、１５３．５５、１３８．７５、１３８．２６、１３４．１２、１２９．４８、１２６．９０、１１９．７４、１１２．２８、３５．０２、３３．７４、２２．４０、１４．０２。
４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、Ｉ３−Ｅ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＥ（３１３ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０４当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で３時間撹拌した。粗生成物をＳｉＯ２薄層（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）を通した濾過によって精製して、表題化合物をベージュ色の油として得た（２９３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．０９（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ １：２０）。Ｃ１７Ｈ２２Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５６．１６９６、実測：２５６．１６９２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２９〜７．１９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９８〜６．８１（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７６〜６．６１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４７（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．６３（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．２８（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．７１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．４５、１４９．０８、１４３．２９、１４２．５５、１２７．０８、１２１．０４、１１６．７９、１１６．３３、３７．５０、３７．０６、２８．６９、９．２７。
４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）アニリン、Ｉ３−Ｆ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＦ（３５２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（５ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（３８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０３当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ）によって精製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た（３１５ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．８６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１８Ｈ２２ＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２６８．１６９６、実測：２６８．１６９２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１７〜７．０７（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９４〜６．８２（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７２〜６．６２（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４９（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．５１〜２．４４（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．９８〜１．６８（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．４６〜１．２１（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８７、１４９．１３、１４２．５３、１４２．０５、１２７．８１、１２１．０２、１１７．２２、１１６．３３、４３．
９０、３４．７９、２７．０５、２６．２７。
６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｇ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＧ（２７８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（１０ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（３×）でパージし、反応混合物を室温で３時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ０％→１％）によって精製して、表題化合物を無色の固体として得た（１７６ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、収率６９％）。Ｒｆ＝０．４３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３２１．１９６１、実測：３２１．１９５９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７１（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３７〜７．２９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０８〜６．９６（ｍ、３Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７４（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４０（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．１２〜２．０９（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．９３（ｄｄ、Ｊ＝９．７、３．０Ｈｚ、５Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８６〜１．７０（ｍ、５Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．７３、１５３．３７、１５１．３５、１４６．６５、１３８．７６、１３４．１５、１２８．１４、１２６．８６、１２６．０６、１２５．５４、１２４．８８、１１９．２９、１１２．４０、４３．３６、４３．２２、３６．８７、３６．８４、３５．８７、２９．０２。
６−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｈ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＨ（３６２ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（４４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０３当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（５×）でパージし、反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ０％→１％）によって精製して、表題化合物を薄褐色の油として得た（３０３ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、収率９４％）。Ｒｆ＝０．４４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１５Ｈ１９Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２４３．１４９２、実測：２４３．１４９３。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９２（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．４８〜７．４０（ｍ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３２（ｄｄｄ、Ｊ＝７．８、１．９、１．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２９〜７．２７（ｍ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１（ｄｄｄ、Ｊ＝８．０、２．４、１．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９２（ｄｄ、Ｊ＝８．６、０．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．４０（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．４８（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ
ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８１、１５５．６５、１５３．３１、１３８．６９、１３４．４０、１２９．１０、１２６．９９、１２０．８５、１１７．２３、１１６．６９、１１２．５４、３４．８９、３１．４１。
４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、Ｉ３−Ｉ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＩ（５０１ｍｇ、１．７３ｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１３ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０３当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（５×）でパージし、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ）によって精製して、表題化合物を無色の固体として得た（４５５ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．７６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）。Ｃ１６Ｈ１９ＦＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２６０．１４４５、実測：２６０．１４４２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３７〜７．２９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９４（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９１〜６．８５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．５２（ｄｄ、Ｊ＝１２．０、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．４２（ｄｄｄ、Ｊ＝８．６、２．７、１．３Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．６１（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．３３（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．５８、１５６．４４、１５４．１２、１４５．０２、１４４．４２、１４４．３３、１３４．８３、１３４．７１、１２６．４１、１２３．９２、１２３．９０、１１５．４３、１１０．９７、１１０．９３、１０３．９３、１０３．７２、３４．２５、３１．５９。
４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン、Ｉ３−Ｊ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＪ（５５０ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１２ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（４６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０３当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／石油エーテル １：１→２：１）によって精製して、表題化合物を薄ローズ色の固体として得た（４８９ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ、収率９８％）。Ｒｆ＝０．８１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１８Ｈ２１ＦＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２８６．１６０２、実測：２８６．１６１３。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１９〜７．１０（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９３（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９０〜６．８３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．５１（ｄｄ、Ｊ＝１２．１、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．４１（ｄｄｄ、Ｊ＝８．６、２．７、１．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．６６（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．５２〜２．４５（ｍ、１Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．９６〜１．７２（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ）、１．５３〜１．１８（ｍ、５Ｈ、シクロヘキシルＨ
）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．７４、１５６．５５、１５４．０９、１４４．３９、１４４．３０、１４２．０４、１３４．８６、１３４．７４、１２７．７９、１２３．８９、１１５．７６、１１０．９３、１１０．９０、１０３．９０、１０３．６９、４３．８０、３４．７２、２６．９９、２６．２２。
３−フルオロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、Ｉ３−Ｋ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＫ（４９７ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１３ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（２８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０２当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；酢酸エチル／石油エーテル１：１０→１：７．５）によって精製して、表題化合物をオレンジ色の油として得た（４６３ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ、定量的収率）。Ｒｆ＝０．２８（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル １：５）。Ｃ１７Ｈ２１ＦＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７４．１６０２、実測：２７４．１５９９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２６〜７．１７（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９２（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．８９〜６．８０（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．５１（ｄｄ、Ｊ＝１２．０、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．４２（ｄｄｄ、Ｊ＝８．７、２．７、１．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．６５（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．６１（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、１．２６（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、０．６９（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ
ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．６１、１５６．３７、１５４．１５、１４４．３４、１４４．２５、１４３．３４、１３４．９８、１３４．８６、１２３．９５、１２３．９２、１１５．４１、１１０．９８、１１０．９５、１０４．００、１０３．７８、３７．０７、２８．６８、９．２６。
６−（４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｌ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＬ（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１２ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（３１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．１７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）によって精製して、表題化合物を薄オレンジ色の油として得た（３９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、収率８７％）。Ｒｆ＝０．４１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１７Ｈ２３Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２７１．１８０５、実測：２７１．１７９６。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７３（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７
．３２〜７．２６（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０７（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１〜６．９４（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７４（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．３５（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．６１〜１．５１（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．２７（ｓ、６Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、１．１６〜１．０１（ｍ、２Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、０．８２（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８２、１５３．３２、１４５．１０、１３８．６７、１３４．３２、１２８．１２、１２７．０９、１２６．９９、１１９．６２、１１９．１３、１１２．５３、４７．３１、３７．４９、２９．１７、１８．０８、１４．９０。
４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）アニリン、Ｉ３−Ｍ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＭ（６１５ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（１５ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（１２６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０７当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で１９時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ）によって精製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た（５３８ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、収率９６％）。Ｒｆ＝０．３９（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）。Ｃ２２Ｈ２６ＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３２０．２００９、実測：３２０．２００６。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３２〜７．２５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９３〜６．８６（ｍ、４Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７２〜６．６５（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、３．５６（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．１４〜２．０６（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．９０（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、５Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８４〜１．７１（ｍ、５Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．５９、１４９．０２、１４５．３２、１４２．５１、１２５．９８、１２１．１０、１１６．８４、１１６．３４、４３．４５、３６．８８、３５．７８、２９．０７。
４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、Ｉ３−Ｎ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＮ（５７０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（１０ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（１４３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０９当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で７時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ）によって精製して、表題化合物を無色の固体として得た（５１０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、収率９７％）。Ｒｆ＝０．６７（ＤＣＭ／Ｍ
ｅＯＨ １％）。Ｃ２２Ｈ２５ＦＮＯ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３３８．１９１５、実測：３３８．１９１６。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３２〜７．２３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９２（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．８９〜６．８１（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．５１（ｄｄ、Ｊ＝１２．０、２．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．４１（ｄｄｄ、Ｊ＝８．７、２．７、１．２Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．６４（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．１１〜２．０７（ｍ、３Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８９（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、５Ｈ、アダマンチルＨ）、１．８３〜１．７０（ｍ、５Ｈ、アダマンチルＨ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．６０、１５６．４７、１５４．１５、１４５．３７、１４４．３３、１４４．２４、１３４．９１、１３４．７９、１２５．９８、１２３．９７、１２３．９５、１１５．４７、１１０．９８、１１０．９５、１０３．９８、１０３．７６、４３．４３、３６．８６、３５．７６、２９．０６。
６−（４−イソプロピルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｏ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＯ（２０２ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ、１．００当量）をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（７６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０９当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（６×）でパージし、反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １％）によって精製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た（１５０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、収率８４％）。Ｒｆ＝０．４２（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１４Ｈ１７Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２２９．１３３５、実測：２２９．１３２６。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７０（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．２４〜７．１４（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０５（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０１〜６．９３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．３３（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、２．８９（ｈｅｐｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨ（ＣＨ３）２）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ、ＣＨ（ＣＨ３）２）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８８、１５３．５９、１４４．１９、１３８．６８、１３４．１９、１２７．５５、１２６．９７、１１９．７６、１１２．３５、７７．４８、７７．１６、７６．８４、３３．５７、２４．２０。
６−（４−（２，４，４−トリメチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、Ｉ３−Ｐ
手順Ｂに従って、Ｉ３−ｎＰ（２８３ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ、１．００当量）をトルエン（４ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のＰｄ（１０％）活性炭粉末（７８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ Ｐｄ、０．０９当量）の懸濁液に添加した。フラスコをＨ２（５×）でパージし、反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２％）によって精製して、表題化合物を
無色の固体として得た（２３５ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、収率９１％）。Ｒｆ＝０．４９（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４％）。Ｃ１９Ｈ２７Ｎ２Ｏ＋に関して計算されたＨＲＭＳ（ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２９９．２１１８、実測：２９９．２１１２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７３（ｄｄ、Ｊ＝３．０、０．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、７．３７〜７．２９（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、６．９９〜６．９３（ｍ、２Ｈ、芳香族Ｈ）、６．７１（ｄｄ、Ｊ＝８．６、０．７Ｈｚ、１Ｈ、芳香族Ｈ）、３．１０（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、１．７２（ｓ、２Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）、１．３６（ｓ、６Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）、０．７３（ｓ、９Ｈ、Ａｒ−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５６．８７、１５３．３９、１４５．４８、１３８．７０、１３４．３９、１２７．３７、１２６．９４、１１８．９６、１１２．４１、５７．２０、３８．３６、３２．５０、３１．９３、３１．６８。

Claims (16)

  1. Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路阻害特性を有する、下記式ＩＩ、式ＩＩＩ、若しくは式ＩＶで表される化合物、又は、その塩、溶媒和物、互変異性体若しくは異性体を有効成分として含有する、Ｎｏｔｃｈ依存性がんの治療用の及び／又は予防用の医薬であって、
    式ＩＩ
    （式ＩＩ中、ｍは、１〜４から選択される整数であり、
    Ｗは、Ｈ及びハロゲンから選択され、当該ハロゲンは、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立してＨ、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の基から選択され、下付き文字ｎは独立して０〜１５から選択される整数であり、
    Ｘは、Ｏ又はＮＲ７であり、ここでＲ７は、Ｈであり、
    Ｙは、Ｎ又はＣＨであり、
    Ｚは、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は、Ｈである）である。）
    式ＩＩＩ
    （式ＩＩＩ中、ｍは、１〜４から選択される整数であり、
    Ｗは、Ｈ及びハロゲンから選択され、当該ハロゲンは、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
    Ｒ４、Ｒ１５は各々独立してＨ、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の基から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
    Ｘは、Ｏ又はＮＲ７であり、ここでＲ７は、Ｈであり、
    Ｙは、Ｎ又はＣＨであり、
    Ｚは、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は、Ｈである）である。）
    式ＩＶ
    （式ＩＶ中、ｍは、１〜４から選択される整数であり、
    Ｗは、Ｈ及びハロゲンから選択され、当該ハロゲンは、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択され、
    Ｒ４は、Ｈ、イソプロピル、ｔｅｒｔブチル、（ＣＨ２）ｎＣＨ３の基から選択され、下付き文字ｎは独立して１〜１５から選択される整数であり、
    Ｘは、Ｏ又はＮＲ７あり、ここでＲ７は、Ｈであり、
    Ｙは、Ｎ又はＣＨであり、
    Ｚは、ＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０及びＲ１１は、Ｈである）である。）
    前記有効成分が、下記の群より選択される化合物、又は、その塩、溶媒和物、互変異性体若しくは異性体である、医薬。
    式Ｉの６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式Ｉ
    式ＩＩＩａの４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）アニリン、
    式ＩＩＩａ
    式ＩＶａの６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＶａ
    式ＩＩｅの６−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｅ
    式ＩＩｆの４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、
    式ＩＩｆ
    式ＩＩｇの６−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｇ
    式ＩＩｈの６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｈ
    式ＩＩｉの３−フルオロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、
    式ＩＩｉ
    式ＩＩＩｂの４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン、
    式ＩＩＩｂ
    式ＩＶｂの４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）アニリン、
    式ＩＶｂ
    式ＩＩＩｃの６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩＩｃ
    式ＩＩｋの４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）アニリン、
    式ＩＩｋ
    式ＩＩｄの４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、
    式ＩＩｄ
    式ＩＩｌの４−（４−イソプロピルフェノキシ）アニリン、
    式ＩＩｌ
    式ＩＩｍの６−（４−（２，４，４−トリメチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｍ
    式ＩＩｊの６−（４−（２−メチルペンタン−２−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、及び、
    式ＩＩｊ
    式ＩＶｃの４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン。
    式ＩＶｃ
  2. 前記有効成分が、下記の群より選択される化合物、又は、その塩、溶媒和物、互変異性体若しくは異性体である、請求項１に記載の医薬。
    式ＩＩＩａの４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）アニリン、
    式ＩＩＩａ
    式ＩＶａの６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＶａ
    式ＩＩｅの６−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｅ
    式ＩＩｆの４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェノキシ）−３−フルオロアニリン、
    式ＩＩｆ
    式ＩＩｇの６−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｇ
    式ＩＩｈの６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｈ
    式ＩＩｉの３−フルオロ−４−（４−（ｔｅｒｔ−ペンチル）フェノキシ）アニリン、
    式ＩＩｉ
    式ＩＩＩｂの４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン、
    式ＩＩＩｂ
    式ＩＶｂの４−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）アニリン、及び、
    式ＩＶｂ
    式ＩＩＩｃの６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン。
    式ＩＩＩｃ
  3. 前記有効成分が、下記の群より選択される化合物、又は、その塩、溶媒和物、互変異性体若しくは異性体である、請求項１に記載の医薬。
    式ＩＶａの６−（４−（（３ｒ，５ｒ，７ｒ）−アダマンタン−１−イル）フェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＶａ
    式ＩＩｈの６−（４−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−アミン、
    式ＩＩｈ
    式ＩＩＩｂの４−（４−シクロヘキシルフェノキシ）−３−フルオロアニリン、
    式ＩＩＩｂ
    式ＩＩＩｃの６−（４−シクロヘキシルフェノキシ）ピリジン−３−アミン。
    式ＩＩＩｃ
  4. 前記Ｎｏｔｃｈ依存性がんがＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、乳がん、膵がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、腫瘍血管新生及び結腸直腸がんを含む群から選択される、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の医薬。
  5. 前記Ｎｏｔｃｈ依存性がんがγ−セクレターゼ阻害剤治療に抵抗性を示す、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の医薬。
  6. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の医薬、及び、薬学的に許容される担体、を含む、Ｎｏｔｃｈ依存性がんの治療用の及び／又は予防用の医薬組成物。
  7. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の医薬の、単回用量又は複数回用量を、任意に試薬及び／又は使用説明書とともに含む、Ｎｏｔｃｈ依存性がんの治療用の及び／又は予防用のキット。
  8. 単回用量又は複数回用量の化学療法剤を更に含む、請求項７に記載のキット。
  9. 細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害のための、請求項１ないし請求項５のいずれか一項に記載の医薬の使用。
  10. 前記細胞ががん細胞である、請求項９に記載の使用。
  11. 細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路のｉｎ ｖｉｖｏ阻害のための、請求項１ないし請求項５のいずれか一項に記載の医薬。
  12. 前記細胞ががん細胞である、請求項１１に記載の医薬。
  13. Ｎｏｔｃｈ依存性がんの被験体の治療のための、請求項１ないし請求項５のいずれか一項に記載の医薬、又は請求項６に記載の医薬組成物であって、前記治療が、
    ｉ）前記被験体の生体サンプルから得られるがん細胞において、がんがＮｏｔｃｈシグナル伝達経路依存性であるか否かを決定することと、
    ｉｉ）前記被験体を、前記がんがＮｏｔｃｈ依存性がんであるか否かに基づいて、治療
    的に有効な量の、請求項１ないし請求項５のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項６に記載の医薬組成物、を投与することによって治療することと、
    を含む、医薬又は医薬組成物。
  14. がん細胞におけるＮｏｔｃｈシグナル伝達経路依存性を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ γ−セクレターゼ複合体活性アッセイによって決定する、請求項１３に記載の医薬又は医薬組成物。
  15. 前記治療が、少なくとも１つの放射線療法及び／又は化学療法を行うことを更に含む、請求項１３又は１４に記載の医薬又は医薬組成物。
  16. 前記放射線療法及び／又は化学療法を、前記治療的に有効な量の、請求項１ないし請求項５のいずれか一項に記載の医薬、又は請求項６に記載の医薬組成物、の投与の前に、それと同時に又はその後に行う、請求項１５に記載の医薬又は医薬組成物。
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2606884A1 (en) 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers
CA2974381A1 (en) 2015-01-26 2016-08-04 Fate Therapeutics, Inc. Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation
EP3282846A4 (en) * 2015-03-23 2018-09-26 University of Miami Inhibitors of the notch transcriptional activation complex and methods for use of the same
ES2953925T3 (es) 2015-11-04 2023-11-17 Fate Therapeutics Inc Ingeniería genómica de células pluripotentes
EP3371301A4 (en) 2015-11-04 2019-06-26 Fate Therapeutics, Inc. METHOD AND COMPOSITIONS FOR INDUCING THE DIFFERENTIATION OF HEMATOPOIETIC CELLS
WO2017100498A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Johns Hopkins University Isolation of fusion-competent myoblasts and therapeutic applications thereof related to muscular dystrophy
CN105541703A (zh) * 2016-01-27 2016-05-04 吉林大学 一种含吡啶结构的三胺单体及其制备方法
US10772876B2 (en) 2016-03-17 2020-09-15 Xeniopro GmbH Enhancers of Notch signaling and the use thereof in the treatment of cancers and malignancies medicable by upregulation of Notch
WO2017179883A1 (ko) 2016-04-12 2017-10-19 주식회사 엘지화학 화합물 및 이를 포함하는 유기 전자 소자
IT201600132360A1 (it) 2016-12-29 2018-06-29 Univ Degli Studi Roma La Sapienza Inibitori di notch per uso nel trattamento della leucemia linfoblastica acuta a cellule t
WO2018154118A2 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Reinmueller Viktoria Novel aromatic compounds
US11591289B2 (en) 2017-02-24 2023-02-28 Xeniopro GmbH Aromatic compounds
EP3462349A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-03 Koninklijke Philips N.V. Assessment of notch cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression
CA3102129A1 (en) * 2018-06-21 2019-12-26 Cellestia Biotech Ag Process for making amino diaryl ethers and amino diaryl ethers hydrochloride salts
MX2021003773A (es) 2018-10-02 2021-07-16 Frequency Therapeutics Inc Composiciones farmacéuticas y métodos relacionados con los agentes terapéuticos óticos.
MA55611A (fr) 2019-04-08 2022-02-16 Frequency Therapeutics Inc Association de chir99021 et d'acide valproïque pour traiter une perte auditive
SG11202110545TA (en) 2019-04-10 2021-10-28 Cellestia Biotech Ag Inhibitors of notch signalling pathway and use thereof in treatment of cancers
CA3134790A1 (en) * 2019-04-10 2020-10-15 Cellestia Biotech Ag Compounds for the treatment of oncovirus induced cancer and methods of use thereof
CN111153817B (zh) * 2020-01-20 2021-02-02 四川大学 苯氧基-n-苯基苯胺衍生物及其应用
US20230130144A1 (en) * 2020-03-31 2023-04-27 Natural Medicine Institute Of Zhejiang Yangshengtang Co., Ltd. Pharmaceutical combination and use thereof
WO2021237111A1 (en) * 2020-05-21 2021-11-25 Stemsynergy Therapeutics, Inc. Notch inhibitors and uses thereof
WO2022058418A1 (en) 2020-09-16 2022-03-24 Cellestia Biotech Ag New use of inhibitors of the notch signalling pathway
EP4008324A1 (en) 2020-12-07 2022-06-08 Cellestia Biotech AG Combinations comprising an inhibitor of an anti-apoptotic protein, such as bcl-2, bcl-xl, bclw or mcl-1, and a notch signaling pathway inhibitor for treating cancer
US20240041884A1 (en) 2020-12-07 2024-02-08 Cellestia Biotech Ag Pharmaceutical Combinations for Treating Cancer
CN117794536A (zh) 2021-06-02 2024-03-29 塞莱斯蒂亚生物技术股份公司 在治疗自身免疫性和炎症性疾病的方法中使用的化合物
EP4429661A1 (en) 2021-11-08 2024-09-18 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer
EP4223292A1 (en) 2022-02-07 2023-08-09 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer
WO2024012414A1 (en) * 2022-07-11 2024-01-18 Westlake University Use of a fbxo42 specific inhibitor in treating notch signaling-dependent disease

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8430252D0 (en) 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4816373A (en) * 1986-01-31 1989-03-28 Mitsubishi Paper Mills, Ltd. Method of producing images
US4959377A (en) * 1989-06-29 1990-09-25 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Inc. Phenoxypyridinamine compounds which are use as a dermatological composition
AU4633893A (en) * 1992-06-17 1994-01-04 University Of Massachusetts Medical Center Liposomal formulations for administering to cancer patients
US5935924A (en) 1994-04-15 1999-08-10 Genentech, Inc. Treatment of congestive heart failure
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6692919B1 (en) * 1997-07-23 2004-02-17 Yale University Activated forms of notch and methods based thereon
EP1140840B1 (en) 1999-01-13 2006-03-22 Bayer Pharmaceuticals Corp. -g(v)-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors
ME00275B (me) * 1999-01-13 2011-02-10 Bayer Corp ω-KARBOKSIARIL SUPSTITUISANI DIFENIL KARBAMIDI KAO INHIBITORI RAF KINAZE
EP1880736A1 (en) 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
JP2001089412A (ja) * 1999-09-22 2001-04-03 Otsuka Pharmaceut Co Ltd ベンゼン誘導体またはその医薬的に許容される塩
ES2331177T3 (es) * 2001-12-14 2009-12-23 Exelixis, Inc. Inhibidores de adam-10 humana.
WO2003095448A1 (en) * 2002-05-06 2003-11-20 Bayer Pharmaceuticals Corporation Pyridinyl amino pyrimidine derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders
AU2003255735A1 (en) * 2002-08-03 2004-02-23 Lorantis Limited Conjugate of notch signalling pathway modulators and their use in medical treatment
US7314959B2 (en) * 2003-08-07 2008-01-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Amino thiol compounds and compositions for use in conjunction with cancer therapy
US20050214250A1 (en) 2003-11-06 2005-09-29 Harris J M Method of preparing carboxylic acid functionalized polymers
AU2005302846A1 (en) * 2004-11-10 2006-05-18 Hubrecht Laboratorium Treatment of an intestinal adenoma and/or adenocarcinoma by inhibition of notch pathway activation
GB0518232D0 (en) * 2005-09-07 2005-10-19 Merck Sharp & Dohme New methods
PE20090321A1 (es) * 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
WO2009146875A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Pharmaceutical compositions comprising gamma secretase modulators
US8436025B2 (en) * 2008-09-19 2013-05-07 CompleGen Partners, Inc. Compounds and methods for PKC theta inhibition
US20100292193A1 (en) * 2009-04-10 2010-11-18 The Regents Of The University Of California Radioprotective drugs
EP2606884A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers

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