TR201802117T4 - Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörleri ve bunların kanser tedavisinde kullanımı. - Google Patents

Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörleri ve bunların kanser tedavisinde kullanımı. Download PDF

Info

Publication number
TR201802117T4
TR201802117T4 TR2018/02117T TR201802117T TR201802117T4 TR 201802117 T4 TR201802117 T4 TR 201802117T4 TR 2018/02117 T TR2018/02117 T TR 2018/02117T TR 201802117 T TR201802117 T TR 201802117T TR 201802117 T4 TR201802117 T4 TR 201802117T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
amine
tert
notch
pyridine
cancer
Prior art date
Application number
TR2018/02117T
Other languages
English (en)
Inventor
Radtke Freddy
Lehal Rajwinder
Reinmüller Viktoria
Zhu Jieping
Original Assignee
Ecole Polytechnique Fed Lausanne Epfl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ecole Polytechnique Fed Lausanne Epfl filed Critical Ecole Polytechnique Fed Lausanne Epfl
Publication of TR201802117T4 publication Critical patent/TR201802117T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/351—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom not condensed with another ring
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/73—Unsubstituted amino or imino radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/075—Ethers or acetals
    • A61K31/085—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon
    • A61K31/09—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon having two or more such linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/27—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by etherified hydroxy groups
    • C07C205/35—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by etherified hydroxy groups having nitro groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C07C205/36—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by etherified hydroxy groups having nitro groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring or to carbon atoms of six-membered aromatic rings being part of the same condensed ring system
    • C07C205/38—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by etherified hydroxy groups having nitro groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring or to carbon atoms of six-membered aromatic rings being part of the same condensed ring system the oxygen atom of at least one of the etherified hydroxy groups being further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring, e.g. nitrodiphenyl ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/78—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/80—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of non-condensed six-membered aromatic rings
    • C07C217/82—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of non-condensed six-membered aromatic rings of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C217/90—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton having amino groups and etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of non-condensed six-membered aromatic rings of the same non-condensed six-membered aromatic ring the oxygen atom of at least one of the etherified hydroxy groups being further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring, e.g. amino-diphenylethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C07D213/643—2-Phenoxypyridines; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/40—Regulators of development
    • C12N2501/42—Notch; Delta; Jagged; Serrate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, kanserlerin tedavisinde ve/veya önlenmesinde 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'den (I3), onun türevlerinden oluşan gruptan seçilen Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörlerinin kullanımı ile ilgilidir.

Description

Tarifnamede ve istemlerde kullanildigi sekliyle, "bir” tekil formlari, aksi açikça belirtilmedigi sürece çogul referanslari içermektedin Okumanin kolay olmasi açisindan, tarifname boyunca kullanilan terimleri I3 bilesigi, kimyasal olarak tadil edilmis I3 bilesikleri ve bahsedilen I3 bilesiklerinin türevlerinin enantiyomerleri, stereoizomerleri, rotamerleri, tautomerleri ve rasematlari dahil olmak üzere 6-(4-Tert-Butilfenoksi) bilesiginin ya da türevlerinin bahsedilen l3, tuzlarinin ya da solvatlarinin türevleri anlamina gelmektedir.
Burada kullanildigi sekliyle "kisi, varlik terimleH teknikte iyi bilinmektedir ve köpek, kedi, siçan, fare, maymun, inek, at, keçi, koyun, domuz, deve ve en çok tercihen bir insani içeren bir memeliyi belirtmektedir. Bazi düzeneklerde varlik, tedaviye ihtiyaç duyan bir varlik veya kanser gibi bir hastalik veya rahatsizliga sahip bir varliktir. Bununla birlikte, diger düzeneklerde varlik, normal bir varlik veya kansere karsi halihazirda tedavi görmüs bir varlik olabilir. Terim belirli bir yas veya cinsiyete isaret etmemektedir. Bu nedenle, yetiskin, çocuk ve yeni dogan ki$, ister erkek olsun ister kadin olsun, kapsanmasi amaçlanmaktadir.
Burada kullanildigi sekliyle "kanser", "kanser hücreleri", bozukluklar" terimleri, tipik olarak düzensiz hücre büyümesi ile karakterize edilen memelilerdeki fizyolojik durumu ifade etmektedir veya tarif etmektedin Mevcut bulusa göre kanser, tercihen lösemi gibi kani etkileyen, beyin, gögüs, prostat, kolorektum, böbrek, akciger, sarkom veya melanom gibi kati tümörlere ve sivi tümörlere atifta bulunmaktadir. Daha da tercihen mevcut bulusa göre kanserler, T hücresi akut Ienfoblastik lösemi (T-ALL), kronik miyeloid lösemi (KML), kronik Ienfositik lösemi (CLL), Mantle hücreli Ienfoma, gögüs kanseri, pankreas kanseri, prostat kanseri, melanoma, beyin tümörleri, tümör anjiyojenezi, kolorektal kanserinden olusan gruptan seçilen Notch'a bagli kanserlerdir. Alternatif olarak Notch'a bagli kanser, y- sekretaz inhibitörü tedavisine dirençlidir. y-sekretaz inhibitörü tedavisine örnekler sunlari içermektedir: 1) Gama sekretaz inhibitörü RO4929097 ve ileri kati tümörleri olan hastalarin tedavisinde (NCT01131234) Cediranib Maleat, 2) Relapsli veya Refrakter Solid Tümörler, CNS Tümörleri, Lenfoma veya T-Hücreli Lösemi (NCT01088763) ile Genç Hastalarin Tedavisinde Gama Sekretaz Onleyicisi RO4929097, 3) Erken evre meme kanserini tedavi etmek için Tamoksifen veya Letrozol ile kombinasyon halinde MK- Advances veya metastatik sarkoma'ya sahip hastalarin tedavisinde GDC- Evre IV veya tekrarlayan Küçük Hücreli Olmayan Akciger KanseH Erlotinib Hidroklorür, 6) Daha önce tedavi edilen prostat kanseri (NCT01200810) olan hastalarin tedavisinde Bicalutamide ve RO4929097, 7) Tekrarlayan invaziv Gliomali hastalarin tedavisinde RO T hücre Akut Lenfoblastik Lösemi/Lenfoma (ALL) (NCT00100152) olan hastalar için Notch sinyalizasyon yolagi inhibitörü ve 9) Metastatik kolorektal kanserli hastalarin tedavisinde RO.
Notch sinyalizasyon yolagi evrimsel olarak korunmustur ve bu yolagin temel moleküler oyunculari Iigandlardir (Delta ve Jagged), Notch reseptörleri ve transkripsiyon faktörleridir transmembran heterodimerik bir reseptördür ve insanlarda ve kemiricilerde dört farkli üye olarak bulunur (Notchl, Notch& N0tch3 ve Notch4). Fizyolojik bir durumda, Notch Iigandinin reseptörüne baglanmasi Notch reseptörünün hücre içi alanini (Notch-ICD) serbest birakarak, hem u-sekretaz hem de y- sekretaz (tümör nekroz faktörü u dönüstürme enzimi olarak da adlandirilir) ile bir proteolitik bölünme vasitasiyla Notch sinyalizasyonunu uyarmaktadir. Salinan hücre içi Notch-ICD daha sonra gen ekspresyonunu esas olarak her yerde bulunan bir transkripsiyon faktörü CBFl, kilsiz bastirici, Lag-1 (CSL) ile baglayarak modüle eden çekirdege translokasyon yapmaktadir. Bu baglanma, transkripsiyon aktivatörlerini CSL bilesimine dahil eder ve bir transkripsiyonel baskilayicidan bir aktive ediciye dönüstürür ve bu aktive edici birkaç asagi akim efektörünü açmaktadir. Notch sinyalizasyonunun fizyolojik fonksiyonlari, kök hücrelerin bakimi, hücre akibetinin spesifikasyonu ve gelismede ve ayrica onkogenezideki farklilasmanin regülasyonu da dahil olmak üzere çok yönlüdür.
Kanserlerde, Notch reseptör yerindeki kromozomal translokasyon, nokta mutasyonlari ve kromozomal amplifikasyon gibi moleküler genetik degisiklikler, Notch yolaginin yapisal aktivasyonu için bilinen mekanizmalardir. Farkli mekanizmalara ragmen, hepsi hücre içi Notch-IC seviyelerinde artisa neden olmaktadir. Notch'un onkojenik potansiyeli, ilk olarak insan T hücresi akut Ienfoblastik lösemi'de (T-ALL) kesfedilmistir.
Notchl sinyalizasyonu, T hücresinin atalarinin normal gelisiminde esas teskil etmekle birlikte, moleküler genetik degisiklikler nedeniyle Notchl sinyalizasyonunun kurucu aktivasyonu T-ALL ile iliskilidir.Ornegin, (7;9) kromozomal translokasyona bagli lnsan Notchl'in hücre disi kisminin interstisyel delesyonlari T-ALL vakalarinin ~% 1'i ile iliskilidir ve Notchl'in aktive edici nokta mutasyonlari T-ALL vakalarinin yaklasik % SO'sinde mevcuttur. T-hücrey gözlenmistir; bu, T-ALL gelisiminde Notch aktivasyonunun nedensel bir rolünü göstermistir. Küçük hücreli olmayan akciger kanserinde kromozomal translokasyon (15;19) tümörlerin bir alt grubunda tanimlanmistir ve translokasyonun tümörlerde Notch3 transkripsiyonunu yükselttigi düsünülmektedir.
Yumurtalik kanserinde, Notch3 gen amplifikasyonunun tümörlerin yaklasik % 19'unda meydana geldigi ve N0tch3'ün asin ekspresyonunun yumurtalik seröz kanserlerinin yarisindan çogunda bulunmustur. Benzer sekilde, Notch sinyalizasyon aktivasyonu meme kanseri gelisiminde gösterilmistir. Hayvan modellerinde, yapisal olarak aktif N0tch4 ekspresyonu farelerde meme tümörlerine neden olmaktadir ve Notchl aktive edici mutasyonlar T-ALL gelisimine katkida bulunmaktadir. Yeni bir çalisma, aktive edilmis Notchl ve Notch3'ün transjenik farelerde asiri ekspresyonunun meme bezi gelisimini bloke ettigini ve fare gögüs tümörlerini baslattigim göstermektedir. Notch sinyalizasyon aktivasyonu meme kanseri hücrelerinin akciger ve kemik metastazlarinda da rol oynamaktadir. Notch3'ün asiri ekspresyonu, bir fare modelinde koroid pleksus tümörü olusumunu uyarmak için yeterli olup, bazi beyin tümörlerinin gelisiminde Notch3'ün rolü oldugunu düsündürmektedin Notch sinyalizasyonunun yeni modülatörlerini (inhibitörleri) tanimlamak için Yüksek Verimli Tarama (HTS) yapmayi amaçlayan Basvuru Sahipleri, yolagin bir Iigand reseptör aracilikh aktivasyonunu uyarmak için bir birlikte kültür testi hazirlamislardir. Birlikte kültür testi, Notch ligand DL4 ve Notchl reseptörünü kullanarak belirlenmistir, çünkü DL4-N1 anjiyojenezi ve Notchl reseptörünün T hücresi Iöseminin uyarmasindaki rolü gibi patofizyolojik kosullarda önemli bir rol oynamaktadir. Bu test, DL4 ligandi ve Notchl reseptörü arasindaki ekspresyona ve etkilesime bagli oldugundan, Iigand reseptör etkilesimleriyle baslayan Notch sinyalizasyonunu kontrollü bir sekilde sorgulama olanagi saglamaktadir. Bu testin 96 oyuklu plaka ve 384 oyuklu plaka formatina minyatürize edilmesi, Basvuru Sahiplerine bu testin HTS'yi gerçeklestirmesi için uyarlanmasina yardimci olmustur. Bu birlikte kültür testinin siRNA veya küçük molekm kütüphanelerini taramak için kullanilmasi, yolagin yanisira farkli asamalardaki Notch sinyalizasyonunu modüle edebilen proteinlerin veya kimyasal bilesiklerin tanimlanmasina yol açabilmektedir. Ornegin, siRNA veya küçük molekül kütüphanelerini kullanan bir HTS, sinyal gönderen veya sinyal alan hücrelerde hareket edebilen yolagin modülatörlerim verebilmektedir. Ligandlarin ve reseptörlerin plazma membranina geri dönüsümünde veya tasinmasinda küçük molekül veya protein aracilikli degisiklikler potansiyel olarak Notch yolagini bloke edebilmektedir ve bu test kullanilarak incelenebilmektedir. Bu test ayni zamanda Iigand reseptörü etkilesimlerini, ADAM10/17 aracilikli SZ bölünmesini veya Notch reseptörünün y-sekretaz katalizH 53 bölünmesini bloke edebilen proteinleri veya kimyasal varliklari, Notch'un aktif formunun nükleer translokasyonunu veya transkripsiyonel aktivasyon bilesimini bloke edebilen varliklari belirlemeye yardimci olabilmektedir.
Basvurucu sahipleri ayrica, yolagin yanisira farkh seviyelerde Notch sinyalizasyonunu bloke edebilen çesitli kimyasallarin tanimlanmasina yol açan üç farkli kimyasal bilesik kütüphanesi (Microsource NIMDS, Prestwick ve Maybridge Hit bulucu) tarayabilmislerdir.
Notch'dan bagimsiz renilla sisteminin bir iç kontrol olarak kullanilmasi, Basvuru Sahiplerine sitotoksik kimyasal bilesikleri elimine etmeleri, böylece yanlis pozitif isabet oranini sinirlandirmalari için izin vermistir. Buna ek olarak bu hücre bazli test, ayrica, daha etkin isabet dogrulamasi için kimyasal bilesiklerin hücre geçirgenligi ile ilgiH sorunlari önlemeye yardimci olmustur.
DL4 N1 birlikte kültür testi sisteminin gelistirilmesi, bir HTS çalisma süresinin temelini atmistir. Bu test, Notch yolaginin yeni modülatörlerini (inhibitörleri) tanimlamak için saglam ve hassas bir okuma sistemi saglamistir.
Basvuru Sahipleri Notch yolaginin aktivasyonunu bloke etme kabiliyetleri nedeniyle çesitli kimyasal bilesikler tespit etmislerdir. Bunlarin arasinda, Notch yolagi aktivasyonunu bloke etme kabiliyeti için 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- etmislerdir.
Dolayisiyla mevcut bulus, bir kanserin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilmak üzere Formül I`in 3/3** f :3.
Formüll 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'iyle (I3)ilgilidir.
Mevcut bulus ayni zamanda, dolasim ömrünü uzatmak için 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) (CAS numarasi: 218457-67-1) kimyasal degisimlerini kapsamaktadir. Polipeptit bazli ilaçlar dahil olmak üzere geçici olarak veya tersinir pegile edici ilaçlar Için yöntemlerin sinirlayici olmayan yayinlanmis) ve 6, ve saglanmaktadir. Teknikte uzman bir kisi, genel olarak, ve NEKTAR PEG Reagent Catalog® 2005-2006 (Nektar Therapeutics, San Carlos, Calif.) üzerinde listelenenlerde, PEG esash reaktifler hakkinda daha fazla ayrinti bulacaktir.
Mevcut bulus ayrica Notch sinyalizasyon yolagi inhibisyon özelliklerine sahip bahsedilen I3`ün kimyasal türevlerim kapsamaktadir. Basvuru sahipleri, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3)ve türevlerinin, çekirdegin transkripsiyonel aktivasyon kompleksinde Notch sinyalizasyonunu hedefledigini, yukarida belirtilen mutasyonlardan dolayi y-sekretaz inhibitörlerine dirençli olan insan tümörlerinin, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisine cevap vermesi beklendigini göstermistir. Ek olarak, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3), Notch sinyalizasyonunu seçici olarak hedef aldigi için hedef disi toksik etkilerini sinirlamaktadir.
Bu türevlerin hepsi takip eden ortak yapiyi paylasmaktadir: Tercihen, bahsedilen türevlerde X (T dur ve pozisyon 3 (veya para) NH2'dir. Asagida Notch sinyalizasyon yolagi inhibisyon özelliklerine sahip asagidaki türevler açiklanmaktadir H3 , f Y `ç Formül II buradaki m, 1 ila 4 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R1, R2, R3, R4'ün her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI, (CHnnCHs alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0, S, CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6, R7, R8, R9 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI veya (CthCHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Y N veya CH'din Z H, N02, OH, NRlORllldir, burada R10 ve Rll her biri bagimsiz olarak H ve (CHz) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCORlZ'dir, burada R12, (CHz) nCH& fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13idir, burada R13, H, (CH2) nCH3, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve10 heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-3 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftilI pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinih imidazolil, benzil, (CHz) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; FormüIIII buradaki m, 1 ila 4 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R4, R15'in her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI, (CHzMCHa alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0. S. CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9”dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil veya (CthCHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftiL veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CthKH3 içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Y N veya CH'din olarak H ve (CHz) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCORR”dir, burada R12, (CHz) nCHs, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, C00R135dir, burada R13, H, (CHz) nCH3, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-, 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanH, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CHz) nCHg gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidin Formül IV buradaki m, 1 ila 4 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R4, H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolih benzil, izopropil, tertBütiI, (CthcHg alkenil, alkinil'din alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Y N veya CH'din X 0, S, CRsR6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI veya (CthCHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde10 fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftih veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CthßHg içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; 2 H, NO; OH, NRlORll'dir, burada R10 ve R11 her biri bagimsiz olarak H ve (CH2) nCHs'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCORQ'dir, burada R12, (CH2) nCH3, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13'dir, burada R13, H, (CH2) nCHg, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-3 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidiniL imidazolil, benzil, (CH2) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Formül V buradaki m, 1 ila 4 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R1, R2, R3, R4'ün her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI, (CHnnCHs alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0, S, CRsR6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil veya (CthCHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftiL veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CthCHg içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; 2 H, N02, OH, NRlORllidir, burada R10 ve R11 her biri bagimsiz olarak H ve (CH2) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCOR12idir, burada R12, (CH2) nCH$ fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13'dir, burada R13, H, (CH2) nCH$ fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-, 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidiniL imidazolil, benzil, (CH2) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; ait indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Formül VI buradaki m, 1 ila 4 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R4, R15'in her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil, (CthCHg alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0, S, CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI veya (CthßHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftiL veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CthßHg içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; olarak H ve (CH2) nCHs'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCOR12'dir, burada R12, (CH2) nCHL fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13'dir, burada R13, H, (CH2) nCHL fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-, 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidiniL imidazolil, benzil, (CH2) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Formül VII buradaki m, 1 ila 3 arasindan seçilmis bir tamsayidir; W, il ve halojenlerden seçilmektedir; halojen, F-, Cl-, Br- veya I- arasindan seçilmektedir; R4, H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolih benzil, izopropil, tertBütil, (CthCHs alkenil, alkinil'din alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X Oi S, CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil veya (CthßHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftiL veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CH2MKH3 içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Z H, N02, OH, NRlORll'dir, burada R10 ve Rll her biri bagimsiz olarak H ve (CHz) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCOR12'dIr, burada R12, (CH2) nCHL fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13ldir, burada R13, H, (CHz) nCH$ fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzRl4'diri burada R14 fenil, 2-, 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinih imidazolil, benzil, (CH2) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; R?) O `Hatemammatic-Z Formül VII burada heteroaromatik bir aminopirrol, aminofüran, aminotiofüran veya bir pirimidindir; R1, R2, R3, R4'ün her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil, (CHnnCHs alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; R7, R8, R9 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil veya (CthCHa'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; olarak H ve (CH2) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCOR12'dir, burada R12, (CH2) nCH$ fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13'dir, burada R13, H, (CH2) nCH3, fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-, 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinih imidazolil, benzil, (CH2) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; RW `Heteroaromatic Z Formül IX burada alt indis n, bagimsiz olarak 1 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; heteroaromatik bir aminopirrol. aminofüran, aminotiofüran veya bir pirimidindir; R4, R15'in her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI, (CH2MCH3 alkenil, alkinil'den olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0, S, CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütiI veya (CthCHg'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftih veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, (CH2L&H3 içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n. bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; olarak H ve (CHz) nCHg'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCORlZ'dir, burada R12, (CH2) nCHL fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, COOR13ldir, burada R13, H, (CHz) nCH& fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'dIri burada R14 fenil, 2-3 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinih imidazolil, benzil, (CHz) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; ggîßx //âv/X\Hmsmmnmmm z Formül X burada heteroaromatik bir aminopirrol, aminofüran, aminotiofüran veya bir pirimidindir; R4, H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftilI pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolih benzil, izopropil, tertBütil, (CthCHs alkenil, alkinil'din alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila. 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; X 0, S, CR5R6, NR7, NHCOR8 veya NHSOZR9'dur; burada R5, R6 ve R7 her biri bagimsiz olarak H, fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3- naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzil, izopropil, tertBütil veya (CthßHs'den olusan gruptan seçilen bir gruptan seçilmektedir, R8 ve R9'un her biri bagimsiz bir sekilde fenil, 2-, 3- veya 4- sübstitüentli fenil, 2- veya 3-naftih veya pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil, benzili (CH2)A]h içeren gruptan seçilen heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; olarak H ve (CHz) nCHa'ten olusan gruptan seçilmektedir, NHCORlZ'dir, burada R12, (CHz) nCH& fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, CO0R13ldir, burada R13, H, (CHz) nCHL fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinil, imidazolil gibi aromatik ve heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir, NHSOzR14'diri burada R14 fenil, 2-3 3- veya 4, ikame edilmis fenil, naftil, pirolil, furanil, tiofuranil, pirimidinih imidazolil, benzil, (CHz) nCH3 gibi heteroaromatiklerden olusan gruptan seçilmektedir; alt indis n, bagimsiz olarak 0 ila 15 arasinda seçilmis bir tamsayidir; Ayrica asagidakilerden olusan gruptan seçilen Notch sinyalizasyon yolagi bloke etme özelliklerine sahip türevler açiklanmaktadir: Forlmül II d 4-(4-(tert-pentil) fenoksi) anilin, 4-(4-sikl0heksil fenoksi) anilin, 6-(4-((3r, 5r, 7r)-adamantan-1-il) fenoksi) piridin-3-amin, 3; N Nm Formül II e 6-(3-(tert-bütil) fenoksi) piridin-3-amin, Formül III a Formül II f 4-(4-(tert-butil) fenoksi) -3-fl0r0anilin, Formül II 9 6-(4-(tert-pentil) fenoksi) piridin-3-amin, R_f\_û ûNHe Formül ll h 6-(4-bütilfenoksi) piridin-S-amin, N*** Formül iii b 4-(4-Sikl0heksil fenoksi) -3-fl0roanilin, Formül II i 3-FIOr0-4-(4-(tert-pentiI) fenoksi) anilin, Formülll 6-(4-(2-Metil-pentan-2-il) fenoksi) piridin-3-amin, Formül IV b 4-(4-((3r, Sr, 7r) -Adamantan-l -il) fenoksi) anilin, Formül IV c 4-(4 -((3r, 5r, 7r) -Adamantan-l-il) fenoksi) -3-fl0r0anilin, ir“m/ Formül III c6-(4-sikl0heksil fenoksi) piridIn-3-amin, »ITIÂÄK [#4 k" off-i "m, Formül II k 4-(4-(tert-butil) fenoksi) anilin, A.1 w.. J \/ \.\ 4 S &I S Y 4-(4-izopropilfen0ksi) anilin, ve Formül II m10 6-(4-(2,4,4-trimetilpentan- 2-il) fenoksi) piridin-3-amin.
Bulus ayrica bilesik l3'ün tuzlari veya solvatlari, kimyasa modifiye I3 bilesikleri ve bulusa ait bahsedilen I3 bilesiklerinin türevleri ile ilgilidir. Tercihen bu tuzlar ve/veya solvatlar farmasötik açidan kabul görmektedirler.
Mevcut bulusa göre, farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlar, asitli inorganik veya organik bilesikler veya alkalin inorganik veya organik bilesiklerden üretilmektedir. Burada kullanildigi sekliyle "farmasötik açidan kabul gören tuz" ifadesi, belirtilen bilesigin serbest asitlerinin ve bazlarinin biyolojik etkinligini koruyan ve biyolojik olarak veya baska sekilde sakincali olmayan bir tuzu belirtmektedin Aksi belirtilmedigi takdirde. bilesik I3'ün enantiyomerleri, stereoizomerleri, rotamerleri, totomerleri ve rasematlan, kimyasal modifiye l3 bilesikleri ve bulusa ait bahsedilen I3 bilesiklerinin türevleri dahil olmak üzere tüm izomerlerin açiklandigi anlasilmaktadir. Bulus, rasemik karisimlar da dahil olmak üzere optik olarak saf biçimde ve karisim halinde stereoizomerleri içermektedir. lzomerler, optik olarak saf veya optik olarak zenginlestirilmis baslangiç materyallerini reaksiyona sokarak veya mevcut bulusa ait bilesiklerin izomerlerini ayirarak geleneksel teknikler kullanilarak hazirlanabilmektedir. stereosentrenin kiralitesinde farkli olan bilesiklere karsilik gelmektedir. Stereoizomerlere enantiomerler ve diastereomerler dahildir. Mevcut bulusa ait bahsedilen I3 bilesiklerinin l3, kimyasal modifiye l3 bilesikleri ve türevleri, asimetrik ikameli bir çift baga veya bir veya daha fazla asimetrik merkeze sahip olduklari takdirde stereoizomerik formda mevcut olabilirler ve bu nedenle özgün stereoizomerler veya karisimlar halinde üretilebilirler . Aksi belirtilmedigi takdirde, açiklama, özgün stereoizomerleri ve karisimlan içermektedir. Stereokimyanin belirlenmesi ve stereoizomerlerin ayristirilmasi için yöntemler teknikte iyi bilinmektedir (bakiniz Advanced Organic Chemistry, adli kitabin 4. Bölümü üzerine tartisma, 4. Baski, J. March, John Wiley ve Sons, New York, 1992). “Totomer”, bir enoI-ketol ve imin-enamin totomerleri gibi bir protonun pozisyonunda farklilik gösteren bir bilesigin alternatif formlarina veya hem bir halka -NH- parçasina hem de halka =N- parçasina bagli pirazollen imidazoller, benzimidazoller, triazoller ve tetrazoller gibi bir halka atomu içeren heteroaril gruplarinin totomerik formlarina karsilik gelmektedir.
Teknikte uzman kisiler, eger bilesik I3, bulusun bahsedilen I3 bilesiklerinin kimyasal modifiye I3 bilesikleri ve türevleH, yüklü grup içeriyorsa, uygun bir tersyükün, bir organik veya inorganik asitten türetilecegini bileceklerdir. Bu gibi tersyükünler halid (klorür, bromür, florür, iyodür gibi), sülfat, fosfat, asetat, süksinat, sitrat, laktat, maleat, fumarat, palmitat, kolat, glutamat, glutarat, tartrat, stearat, salisilat, metansülfonat, benzensülfonat, sorbat, pikrat, benzoat, sinnamat ve benzerlerini kapsamaktadir.
Sasirtici bir sekilde, kimyasal bilesik olan 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) potansiyel Notch inhibitörü olarak tanimlanmaktadir. ilginç bir sekilde, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) NICD aracilikli yolagin aktivasyonunu bloke ettigi bulunmustur (sekil 1). 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amini (l3), NICD aracilikli Notch aktivasyonunu zayiflatma kabiliyeti nedeniyle, DAPT'ye (a-y- sekretaz inhibitörü, N-[N-(3,5 -difluorofenasetiI-L-alanil)] - (S)-fenilglisin t-butil ester) dirençli NICD asiri eksprese eden lösemi hücre hatlarinin çogalmasini bloke edebilmektedir (sekil SL 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin'in (I3) Notch önleme potansiyeli, insan T-ALL hücre hatlarinda (Seki 3) ve Affymetrix genChip dizisinde (veri gösterilmemistir) Notch hedef genlerinin azaltarak düzenlenmesi ile daha da dogrulanmistir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) C2C12 hücrelerini MHC'ye eksprese eden çok çekirdekH miyotlara farklilasmasina neden olmasi, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) anti-Notch rolünü dogrulamistir (veriler gösterilmemistir). 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) neden oldugu Notch yolagi inhibisyonu, belirli seviyelerin üstünde MAMLl'in asiri ekspresyonu ile kurtarilabilmektedir. Ornegin, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) 800 ng NICD ile sinyali bloke edebilmis ve 1 ug MAMLl hücrelere geçici olarak dahi edilmistir, ancak MAMLl miktari 3 ug'ye yükseldiginde, 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) artik yolagin aktivasyonunu bloke edememistir. Bu veriler, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) Notch transkripsiyonal aktivasyon bilesigine müdahale edebilecegini, dolayisiyla sinyalizasyon aktivasyonunu inhibe ettigini göstermektedir. 6- (4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (13) yolagin aktivasyonunu hala bloke edebildigi seviyelerde MAML'nin getirilmesi ile yapilan mikroskopik çalismalar, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisinin alt nükleer bölmelerde NICD, MAMLl ve CSL/RBP-jk'nin birlikte lokalizasyonunu bloke edemedigini ortaya koymustur (veriler gösterilmemistir). Teoriye bagli kalmaksizin, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) muhtemel eth mekanizmalarindan biri, çekirdek CSL/RBP-jk-NICD-MAMLl bilesigine transkripsiyonel koaktivatörlerin alinmasini bozmak olabilmektedir. Bu nedenle, islevsel transkripsiyonal aktivasyon bilesiginin olusumunda rol oynayan ek koaktivatörlerin durumunun hala belirlenmesi gerekmektedir.
Fizyolojik kosullar altinda, CSL/RBP-jk-NICD-MAMLl bilesiminin olusumunu takiben, CBP/p, otomatik asetilasyona ve histon'un (3 ve 4) asetilasyonuna yol açan bilesige yönlendirilmektedir. 6-(4-Tert-Bütilfen0ksi) Piridin-3-Amin (l3) ve bunlarin türevleri ayrica, canli içi sartlarinda, Notch inhibitörü ve farelerde toksik yan etkileri belirlemek üzere arastirilmistir. Notch sinyalizasyonu bagirsakta normal homeostazin korunmasi için gereklidir. Bagirsakta Notchl ve Notch2 sinyalizasyonunun genetik ablasyon veya farmakolojik olarak inhibisyonu bagirsakta goblet hücresi metaplazine yol açmkatadir. 6-(4-Tert-Bütilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) Notchl ve Notch2 aracilikli sinyalizasyonu bloke ettigi gözlendiginden, 6-(4-Tert-Bütilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilen farelerin goblet hücresi metaplazi gelistirmesi beklenmekteydi. Sasirtici bir sekilde, 7 gün boyunca 25 mg/kg 6-(4-Tert-Bütilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile farelerin tedavisi (ksenotransplantlar durumunda bir aydan fazla), bagirsak homeostazini rahatsiz etmemis ve goblet hücresi birikimi belirtisi göstermemistir (veri gösterilmemistir). Bu beklenmedik sonuç iki nedenden dolayi olabilmektedir. Olasi bir açiklama, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) konsantrasyonunun (25mg/kg) bagirsaktaki Notch yolaginin aktivasyonunu bloke etmek için yeterH olmadigi seklinde olabilir. Bununla birlikte, ikinci bir maku açiklama, Notchl ve Notch2 sinyalizasyonunun asagi akisindah transkripsiyonal aktivasyon bilesiklerinin bilesimindek farkliliklar olabilir. Bu olasi farkliliklar nedeniyle, Notchl ve Notch2 aracilikli sinyalizasyon, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisine karsi farkli duyarlilik gösterebilmektedir.
Notch sinyalizasyonu, hematopoietik sistemin düzenlenmesinde önemli bir rol oynamaktadir. Ornegin, timustaki T hücresi gelisiminde DL4-N0tch1 sinyalizasyonu gereklidir. Notch2 ve MAMLl aracilikli yolagin aktivasyonu, dalakta Marjinal Bölge B (MZB) hücrelerinin gelisimi için kritik önem tasimaktadir. 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin”in (I3) dalaktaki Notch'a bagli MZB hücresi gelisimini etkileyip etkilemedigini Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmis ve 8. günde analiz edilmistir. 8220, CD21 ve CD23'e kary antikorlari kullanarak yapilan akis sitometrisi analizleri, 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisinin dalakta MZB hücrelerinin yüzdesini ve mutlak sayisini azalttigini ortaya koymustur (sekil ?L insan hastaliklari, yani T-hücresi lösemi ve gögüs kanseri için nakil modellerinde 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3- Amin'in (I3) anti-kanser aktivitesi arastirilmistir. Bu çalismalarda, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3), çok agresif formdaki lösemi hücre hatlarinin ilerlemesini ve metastazini yavaslatmak için kayda deger bir yetenek göstermistir (sekil 8). Ek olarak, kati tümörlerin bir modeH olarak meme kanseri kullanilan bir ön çalismada, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi farelerde tümör ilerlemesinde bir engel olusturmustur (sekil 9). 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) kimyasal bilesigi, NICD aracilikli sinyalizasyonu engelleme kabiliyetini göstermistir. Bu nedenle, bu bilesik, Notch odakli tümörlerin y-sekretaz inhibitörü tedavisine dirençli oldugu kanserlerde yararlidir.
Mevcut bulus, ayni zamanda, burada tarif edildigi üzere Notch sinyalizasyon yolagi inhibe etme özelliklerine sahip olan formül I'e ait 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) veya bunun türevlerinden birini içeren farmasötik bir bilesim veya farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, solvatlari, totomerler, izomerleri ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici madde de saglamaktadir. Uygun tasiyicilar konusunda, örnegin "Comprehensive Medicinal Chemistry", Cilt 'in 25. bölümüne, Pergamon Press 1990, ve "Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete", by H.P. Fiedler, Editio Cantor, 2002'ye gibi, bunlari açiklayan standart literatüre referans yapilabilir. genellikle güvenli olan ve kabul edilebilir toksisiteye sahip olan bir farmasötik bilesim hazirlamada kullanisli olan bir tasiyici veya yardimci madde anlamina gelmektedir. Kabul edilebilir tasiyicilar, veterinerlikte kullanim için oldugu kadar insan farmasötik kullanimi için de kabul edilebilir tasiyicilari içermektedir. Tarifnamede ve istemlerde kullanilan "farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyicN' hem bir hem de birden fazla tasiyiciyi kapsamaktadir. istege bagli olarak, bu bulusun farmasötik bilesimi, kanseri tedavi etmek için kemoterapötik maddeler içeren sinirlayici olmayan grup arasindan seçilen bir veya daha fazla ilave aktif maddeyi de içermektedir. Bu gibi kemoterapötik maddeler, örnegin Altretamin, Bleomisin, Busülfan, Kapesitabin, KarbOpIatin, Karmustin, Klorambübil, Sisplatin, Kriptribin, Crisantaspaz, Siklofosfamid, Sitarabin, Dakarbazin, Daunorubisin, Doksorubisin, Epirubisin, Etopozid, Fludarabin, Fluorourasil, Gemsitabin, Idarubisin, Ifosfamid, Irinotekan, Lomustin, Melfalan, Mercaptopurin, Metotreksat, Mitomisin, Mitoksantron, Oksaliplatin, Pentostatin, Prokarbazin, Streptozosin, Tako, Temozolomidi Tiyoguanin/Thioguanin, Tiyotepa, Topotekan, Treosulfan, Vinblastin, Vinkristin, Vindezin ve Vinorelbin'den olusan grup arasindan seçilebilir.
Kanserlerin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilan bulusa ait bilesikler, yani 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ve türevleri, terapötik uygulama için çesitH formülasyonlara ve ilaçlara dahil edilebilir. Daha özel olarak, burada saglanan bir veya daha fazla bilesik(ler), farmasötik açidan kabul gören uygun tasiyicilarla kombinasyon halinde farmasötik bilesimler halinde formüle edilebilir ve tabletler, kapsüller, haplar, tozlar, granüller, drajeler, jeller, bulamaçlar, merhemler, solüsyonlar, fitiller, enjeksiyonlar, inhalanlar ve aerosoller gibi kati, yari kati, sivi veya gaz halindeki müstahzarlar halinde formüle edilebilir. Bu nedenle, bilesiklerin uygulanmasi oral, bukkal, rektal, parenteral, intraperitoneal, intradermal, transdermal, intrakranyal ve/veya intratrakeal uygulama da dahil olmak üzere çesitli sekillerde saglanabilmektedir. Dahasi, bilesik, bir depo veya sürekli salinan formülasyonda, sistemik olmayan bir yoldan uygulanabilir. Bilesikler, ortak eksipiyanlar, seyrelticiler veya tasiyicilar ile formüle edilebilir ve tabletler halinde sikistirilabilir veya uygun oral uygulama için iksirler veya çözeltiler halinde formüle edilebilir veya intramusküler veya intravenöz yollarla uygulanabilir.
Bilesikler, transdermal olarak verilebilir ve sürekli salim dozaj formlari ve benzerleri olarak formüle edilebilir.
Bilesikler, tek basina, birbirleriyle kombinasyon halinde verilebilir veya bilinen diger bilesiklerle kombinasyon halinde kullanilabilir. Mevcut bulusta kullanilmak için uygun formülasyonlar, referans olarak mevcut bulusa katilan Remington's Pharmaceutical Sciences'da (Mack Publishing Company (1985) Philadelphia, PA, 17'nci baski) bulunmaktadir.
Ayrica, ilaç verme yöntemlerinin kisaca gözden geçirilmesi olarak mevcut bulusa katilmistir.
Tek bir dozaj formunun üretilmesi için bir tasiyici materyal ile kombine edilebilen, burada saglanan bir bilesik miktarL tedavi edilen hastaliga, buna ihtiyaç duyan kisiye ve özel uygulama yönteminde bagli olarak degisecektir. Bununla birlikte, genel bir kilavuz olarak, mevcut bulusun bilesikleri için uygun birim dozlar, örnegin tercihen 0,1 mg ila yaklasik 1000 mg arasinda, 1 mg ila yaklasik 500 mg arasinda ve 1 mg ila 300 mg arasinda aktif bilesik ihtiva edebilmektedir. Baska bir örnekte birim doz 1 mg ila yaklasik 100 mg arasindadir. Bu tür dozlar, günde bir defadan fazla, örnegin günde 2, 3, 4, 5 veya 6 kez, ancak tercihen günde 1 veya 2 kez uygulanabilir, böylece 70 kg'lik bir yetiskin insan için toplam dozaj, uygulama basina kg agirliginin her biri için 0,001 ila yaklasik 15 mg araligindadir. Tercih edilen bir dozaj, her uygulama için kg agirlik basina 0,01 ila 1,5 mg arasindadir ve bu terapi birkaç hafta veya ay, bazi durumlarda ise yillara kadar uzayabilmektedir. Bununla birlikte, herhangi bir hasta için spesifik doz seviyesinin, kullanilan spesifik bilesigin aktivitesi de dahil olmak üzere çesitli faktörlere bagli olacagi anlasilacaktir; tedavi edilen bireyin yasi, vücut agirligi, genel saglik durumu, cinsiyeti ve beslenme sekli; uygulama zamani ve yolu; bosaltim hizi; daha önce uygulanan diger ilaçlar; ve terapiye gören belirli hastaligin ciddiyetin bu alanda uzman olanlar tarafindan iyi anlasilmaktadir. Tipik bir dozaj, günde bir kez alinan 1 mg ila 100 mg tablet veya 1 mg ila 300 mg veya günde birden çok veya bir kez alinan zaman salinimli kapsül veya tablet ve orantili olarak daha yüksek bir aktif madde içerigi olabilir.
Zamanla saalinim etkisi, farkli pH degerlerinde çözülen kapsü materyalleri, ozmotik basinç ile yavas yavas salinan kapsüller veya bilinen herhangi bir kontrollü salinim araciyla elde edilebilir. Bazi durumlarda teknik alanda uzman kisilerce anlasilacak olan bu araliklarin disindaki dozajlarin kullanilmasi gerekebilir.
Mevcut bulus ayrica kanserlerin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilmak üzere bulusa ait bir bilesik saglamaktadir.
Burada kullanilan kanserler Notch'a bagili kanserlerdir ve T hücre-Akut Ienfoblastik lösemi (T-ALL), kronik miyeloid lösemi (KML), kronik lenfositik lösemi (CLL), mantle hücreli Ienfoma, meme kanseri, pankreas kanseri, prostat kanseri, melanoma, beyin tümörleri, tümör anjiyojenezi ve kolorektal kanseri içeren sinirlayici olmayan gruptan seçilmektedir.
Tercihen, mevcut bulusa ait bilesikler (6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3), bunun türevleri), Notch'a bagli kanserlerin y-sekretaz inhibitörü tedavisine dirençli kanserlerin tedavisinde de kullanilabilmektedir. y-sekretaz inhibitörü tedavisine dirençli Notch sinyalizasyonuna bagli insan tümörleri NICD, Notch hedef genlerin seviyeleri yaninda Notch reseptörünün ve Notch yolaginin diger bilesenlerinin mutasyon durumuna göre belirlenebilmektedir.
Mevcut bulus ayrica, kanser tedavisi ve/veya önlenmesi içim bahsedilen yöntem, bulusa ait 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin- 3-Amin (I3), türevleri veya farmasötik bilesiminin, bunlari ihtiyaci olan bir kisiye verilmesini içeren bir yöntem saglamaktadir.
Baska bir düzenekte mevcut bulus, yukari regülasyonlu bir Notch sinyalizasyon yolagi aktivitesi ile iliskili bir hastaligin tedavisine yönelik bir metot saglamaktadir; bahsedilen yöntem, bulusa ait 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin- 3-Amin (l3), bunun bir türevini veya farmasötik bilesimim ihtiyaci olan bir kisiye vermekten olusmaktadir.
Mevcut bulusa ait bilesiklerin günlük dozu, tedavi edilen konakçiya, uygulanan belirli uygulama yoluna ve tedavi edilen hastaligin ciddiyetine ve türüne bagli olarak mutlaka degisecektir. Buna göre, en uygun doz, herhangi bir hastayi tedavi eden pratisyen tarafindan belirlenebilir. Dahasi, klinik tedavi uzmani veya tedavi eden hekim, bireysel hasta yaniti ile birlikte terapiyi baslatma, kesme, ayarlama veya sonlandirma islemini nasil ve ne zaman yapacagini bilecektir.
Mevcut bulusun yönteminde kullanilan herhangi bir bilesik için terapötik açidan etkili bir doz baslangiçta hücre kültürü testleri, hayvan modelleri veya insan deneklerin mikrodozisyonundan tahmin edilebilir.
Burada kullanildigi sekliyle "tedavi" hem terapötik tedavi hem de profilaktik veya koruyucu önlemleri belirtmektedir.
Tedaviye ihtiyaç duyan kisiler arasinda, kanser gibi bozuklugun halihazirdaki bozukluklarinin yani sira, kanser gibi bozuklugun önlenecegi durumlar da vardir. Dolayisiyla, burada tedavi edilecek memeli hayvan, kanser gibi bozukluga sahip oldugu teshisi konmus olabilir veya hastaliga yatkinligi olan veya kansere karsi duyarli olan bir varlik olabilir. hastalik veya bozuklugun tedavisinde etkili bir ilacin miktarini belirtmektedir. Kanser durumunda, ilacin terapötik olarak etkili miktari tümör veya kanser hücrelerinin sayisim azaltabilir, tümör boyutunu düsürebilir; kanser hücrelerinin periferik organlara sizmasini önler (yani, bir dereceye kadar yavaslatir ve tercihen durdurur); tümör metastazini inhibe eder (yani, bir dereceye kadar yavaslatir ve tercihen durdururl; bir dereceye kadar tümör büyümesini inhibe eder; ve/veya bir dereceye kadar kansere bagli semptomlardan bir veya daha fazlasini hafifletir. Mevcut bulusa ait bilesiklerin mevcut kanser hücrelerinin büyümesini ve/veya öldürmesim önleyebildigi ölçüde sitostatik ve/veya sitotoksik olabilir. kütlesinin, kanser hücrelerinin grubunun veya patolojinin diger özelliginin büyümesi veya ilerlemesi veya mitoz aktivitesinde klinik olarak önemli bir degisikligi önlemek veya tercihen en az yaklasik yüzde 30, tercihen en az yüzde 50, tercihen en az yüzde 70, tercihen en az yüzde 80, tercihen en az % 90 oraninda azaltmak için yeterli bir miktarda kullanilmaktadir. istege bagli olarak, mevcut bulusa ait bilesikler, standart radyoterapi ve/veya standart kemoterapi gibi geleneksel tedavilerle kombinasyon halinde hücre proliferat hastaliklarina karsi (örnegin, ayni zamanda veya hemen hemen ayni zamanda veya birbiri ardina) kullanilabilir. Standart radyoterapi ve kemoterapi es zamanli kemoradyoterapi olabilir.
Bu nedenle, istege bagli olarak, standart radyoterapi ve/veya kemoterapi, mevcut bulusun bilesiginin terapötik olarak etkili bir miktarinin veya bunun içeren farmasötik bilesimlerin uygulanmasindan önce, ayni anda veya sonrasinda gerçeklestirilebilir. ve radyoterapi) ayni zamanda ya da hemen hemen ayni zamanda, örnegin birbiri ardina, ya da ayni gün içinde verildiginde kullanilmaktadir. etmek için kanser tedavisinin bir parçasi olarak iyonize radyasyonun kullanimini ifade etmektedir. iyonize edici radyasyon tercihen y isinlamasidir. Radyoterapiyi ameliyat, kemoterapi, hormon terapisi veya bunlarin kombinasyonlari ile birlestirmek de siklikla görülmektedir. En yaygin kanser türleri genellikle radyoterapi ile tedavi edilebilmektedir.
Kesin tedavi amaci (iyilestirici, destekleyici, cerrahi öncesi veya palyatif), tümör türüne, Iokasyonuna ve evreye ve buna ihtiyaç duyan hastanin genel sagligina bagli olacaktir. kemoterapötik/kimyasal maddelerin kullanildigi bir kanser tedavisi ile ilgilidir. Bir kemoterapötik madde, genellikle kanseri tedavi etmek için kullanilan bir farmasötik maddeyi belirtmektedir. Kanseri tedavi etmek için kemoterapötik maddeler arasinda örnegin Altretamin, Bleomisin, Busülfan, Kapesitabin, Karboplatin, Karmustin, Klorambübil, Sisplatin, Kriptribin, Crisantaspaz, Siklofosfamid, Sitarabin, Dakarbazin, Daunorubisin, Doksorubisin, Epirubisin, Etopozid, Fludarabin, Fluorourasil, Gemsitabin, Idarubisin, Ifosfamid, Mitomisin, Mitoksantron, Oksaliplatin, Pentostatin, Prokarbazin, Streptozosin, Tako, Temozolomid, Tiyoguanin/Thioguanin, Tiyotepa, Topotekan, Treosulfan, Vinblastin, Vinkristin, Vindezin ve Vinorelbin bulunmaktadir.
Bir kemoterapötik madde, bu bulusa göre bir bilesik ile kombinasyon halinde kullanildigi zaman, bu ayni anda uygulama için bu iki maddenin bir bilesimini içeren bir ilaç formunda kullanilabilir veya her biri maddelerden birini içeren ayri dozaj formlari seklinde kullanilabilir, ve ikinci durumda, bireysel dozaj formlari sirayla, yani bulusa ait bilesik ile bir dozaj formu, ardindan kemoterapötik madde içeren bir dozaj formu (veya bunun tam tersi) kullanilabilin iki ayri dozaj formunun bu düzenlemesi düsünülerek bir kit formunda saglanabilmektedir. istege bagli olarak mevcut bulusa ait bilesikler, örnegin segmental rezeksiyon (biyopsi veya brüt rezeksiyon) vasitasiyla kanser gibi hücre proliferat hastaliklarina karsi bir tümör hacminin klasik olarak ortadan kaldirilmasiyla kombinasyon halinde kullanilabilir. tümör kütlesinin çikarilmasi, ablasyonu veya rezeksiyonunu belirtmektedir. Çikarma islemi kimyasal, radyasyonla veya cerrahi olabilir. Tercihen, bahsedilen çikarma ablasyon veya rezeksiyon gibi cerrahi islemdir. Rezeksiyon “segmental rezeksiyon" (veya segmentektomi), bir organin veya bezin bir kismini bir varliktan çikarmak için cerrahi bir islem olabilir. Ayrica bu, bir tümörü ve çevresindeki normal dokuyu çikarmak için de kullanilabilir. Tümör çikartma (debulikasyon) maddesi, tümör kütlesinin çikarilmasi için de kullanilabilir. kütlesinden öldürülmesine izin verecek herhangi bir molekülü (örnegin kimyasal, biyolojik) veya herhangi bir harici/çevresel maddeyi (örnegin y isinlamasi) veya geleneksel cerrahiyi içermektedir (örnegin yukarida belirtildigi gibi FL10 ve FL1- hücreleri ).
Mevcut bulusun bir baska amaci, kanserlerin tedavisi ve/veya önlenmesi için bir yöntemde kullanilmak üzere bir veya daha fazla miktarda 6-(4-Tert-Butilfenoksi) PiridIn-3-Amin (I3)veya Notch sinyalizasyon yolagi inhibisyon özelliklerine sahip olan türevlerinden bir veya daha fazla doz içeren bir kit veya bu bulusa ait farmasötik bilesimdir. Kit ayrica bir veya daha fazla kemoterapötik madde dozunu içerebilir. istege bagli olarak, kit, ayrica reaktifler ve/veya kullanim talimatlari içerebilir.
Genel olarak, kit, bir kap ve bir kap üzerine veya bununla baglantili bir etiket veya prospektüs içerir. Uygun kaplar arasinda, örnegin, siseler, tüpler, siringa vs. bulunmaktadir.
Kaplar, cam veya plastik gibi çesitli malzemelerden olusturulabilir. Kap, durumun tedavisinde etkili farmasötik bilesimi tutar ve steril bir erisini deligine sahip olabilir (örnegin, kap intravenöz bir solüsyon torbasi ya da bir hipodermik enjeksiyon ignesi ile delinebilen bir tipaya sahip bir sisedir). Etiket ya da. prospektüs, bilesimin kanser gibi tercih edilen durumun tedavisinde kullanildigini göstermektedir.
Mevcut bulus, bulusa ait bilesiklerin laboratuar ortamindaki veya canli içindeki hücrelerdeki Notch sinyalizasyon yolagim inhibe etmek için kullanimi ile de ilgilidir. Genellikle bahsedilen hücreler kanser hücreleridir.
Ayrica, Notchia bagli kanser için bir varligin tedavisine yönelik bir yöntem de öngörülmüs olup, bu yöntem asagidakileri içermektedih i) söz konusu varligin biyolojik bir örneginden elde edilen kanser hücrelerinde, kanser Notch sinyalizasyon yolagina bagli olup olmadiginin belirlenmesi, ii) ve bahsedilen varlik, Formül Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) veya Notch sinyalizasyon yolagini önleme özelliklerine sahip olan türevlerinden bin veya bulusa ait bir farmasötik bilesim uygulanarak kanserin Notch'a bagli kansere dayali olarak tedavi edilmesi.
Genellikle, kanser hücrelerindeki Notch sinyalizasyon yolagina baglilik, teknikte bilinen herhangi bir yöntemle belirlenmektedir. Bir örnek olarak, bu yöntem, burada tarif edilen bir laboratuar ortamindaki y-sekretaz bilesimi aktivite deneylerinden olusabilmektedir.
Bu tedavi yöntemi, ayrica, en az bir geleneksel kanser tedavisinin uygulanmasini içerebilir. Gelenkesel kanser tedavisi, Formül I'e ait 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3- Amin (I3) veya Notch sinyalizasyon yolagi inhibisyon özelliklerine sahip olan türevlerinden biri veya mevcut bulusun farmasötik bilesiminin terapötik olarak etkili miktarinin verilmesinden önce, ayni anda veya sonra verilmektedir.
Genellikle, geleneksel kanser tedavisi radyoterapi ve/veya kemoterapiden olusmaktadir.
Mevcut bulus ayni zamanda, bulusa ait bilesiklerin, GO/Gl hücre döngüsü duraksamasini baslatarak, bir hücredeki apoptozu hem laboratuar ortaminda hem de çanli içinde olmak üzere provoke etmeye yönelik bir yöntemde kullanimi ile ilgilidir.
Teknikte uzman kisiler. burada tarif edilen bulusun, spesifik olarak tarif edilenlerden baska varyasyonlara ve modifikasyonlara duyarli olduklarini anlayacaklardir. Bulus ayni zamanda, bu tarifnamede atifta bulunulan veya belirtilen tek tek veya toplu adimlari, özellikleri, bilesimleri ve bilesikleri ve bahsedilen adimlarin veya özelliklerin herhangi bir ve tüm kombinasyonlarini veya herhangi iki veya daha fazlasini içermektedir. Mevcut açiklama, bundan dolayi, ekteki istemler tarafindan gösterilen bulusun kapsami sinirlayici olmayan ve gösterilen her yönüyle ele alinacaktir. Yukaridah açiklama, asagidaki Orneklere atifta bulunularak daha iyi anlasilacaktir. Bu gibi Ornekler, mevcut bulusun uygulanma yöntemlerinin örnekleridir.
ORNEKLER Yapilar ve raportör gen testleri: Fare DL4-IRES dsRED cDNA, bir pENTRl vektörüne (Invitrogen®) klonlanmis ve son olarak Gateway klonlama stratejisi (Invitrogen) kullanilarak bir hedef lentivirüs vektörüne yerlestirilmistir. Fosfogliserat kinaz (PGK) düzenleyicisi, DL4 proteininin ekspresyonunu baslatmistir. DL4-lentiviral parçaciklar. DL4-Ientivirüs vektörü, Gag/pol ekspresyon plazmidinin ve viral örtü proteinlerini kodlayan plazmidin kotransfeksiyonundan 293T hücrelerde üretilmistir. Notchl proteinini asiri üretmek için, fare tam uzunlukta Notchl cDNA bir pCDNA3 1-IRES-puromisin vektöründe klonlanmistir. Notchl cDNA'si, Hindlll ve Xbal sinirlama bölgeleri arasinda IRES- puromisin'in akis yönünde klonlanmistir. Bir CMV hizlandiricisi, Notchl proteininin ekspresyonunu kontrol etmistir.
Notch sinyalizasyon aktivasyonunu ölçmek için, CSL/RBP-jk konsensüs DNA baglama dizileri, pGL4 lusiferaz vektörü'nde (Promega) bir kafa-kuyruk uyarlamasinda klonlanmis ve böylece 12xCSL/RBP-jjk lusiferaz vektörü olarak adlandirilmistir.
Kimyasal bilesik tarama testinde Notch yolagi aktivasyonunu belirlemek için, 12xCSL/RBP-jk konsensüs DNA baglama dizileri, pGL4.26.lusiferaz vektörü (Promega) içine klonlanmistir.
Transfeksiyonun etkinligi için bir iç kontrol olarak, SV40 Renilla vektörü kullanilmistir (Promega).
NICD-GFP asiri üretme çalismalari pEGFP-Cl-NICD ekspresyon plazmidi kullanilarak gerçeklestirilmistir. MAMLl-FLAG'i eksprese eden FLAG-CMVZ plazmidi, Boston'daki Harvard Tip Okulu'ndan Dr. Lizi Wu'den nazik bir hediye omustur.
DL4 ve N1 kararli HeLa hücrelerinin üretilmesi: DL4 ve Nl kararli hücre hatlarini üretmek için, HeLa hücreü ATCC'den satin alinmistir (katalog # CCL-2). DL4 sabit hatlar olusturmak için, hücreler DL4-Ientiviral parçaciklari ile transforme edilmistir. DL4 sabit klonlari, puromisin kullanilarak seçilmistir. Yüksek DL4 ekspresyon klonlan, Fluoresansla aktive hücre ayirma (FACS) ile DL4'e karsi antikorlar kullanilarak siralanmistir. N1 kararli hat olusturmak için, hücre, CMV düzenleyicisinin kontrolü altinda fare tam uzunlukta Notchl içeren bir pCDNA3.1 + (Invitrogen) plazmid ile transfekte edilmistir. Notchl eksprese eden klonlari seçmek için bir IRES puromisin kaseti Notchl cDNA'nin asagi yönünde klonlanmistir. Yüksek Notchl seviyelerini eksprese eden HeLa hücreleri, anti-Notchl antikorlari kullanilarak FACS ile zenginlestirilmistir. DL4 ve Nl-HeLa hücreleri, DMEM (GIBCO, Invitrogen), % 10 FCS ve 10 ug/ml puromisin (Sigma) Içinde kültürlenmistir.
Yüksek Verimli Tarama ve Veri Analizlerh Kimya kütüphanesi taramasi için, birlikte kültür testi asagidaki sekilde gerçeklestirilmistir.
Nl-HeLa hücreleri, 16 ug pGL4.26.12xCSL.Iusiferaz vektör/plaka, 4 ug Notchl eksprese plazmid/plaka ve 200 ng SV40 Renilla vektör/plaka ile H) cm doku kültürü kaplarinda birlikte transfekte edilmistir. DL4- ve Nl-HeLa hücreleri, kullanilarak plakadan ayrilmistir. Her iki hücre popülasyonu sayilmis ve 1:1 oraninda (384 oyuklu bir plakada 5,000 5,000 hücre/oyuk) karistirilmis ve çok açih Combi plaka dagiticisi kullanilarak 384 oyuklu plakalara (beyaz, berrak taban, Corning) dagitilmistir. Test plakalan, 10uM'Iik bir nihai konsantrasyon saglamak üzere kimyasal bilesik kütüphaneleri (Microsource NIMDS, Maybridge Hitfinder ve Prestwick) ile önceden dagitilmistir (otomatik Biomek 3000 sivi tutucu kullanilarak). Nihai tahlil hacmi 22 uls olmustur.
Yirmi dört saat sonra, büyüme ortami aspire edilmis ve hücreler, oda sicakliginda 10 dakika, boyunca 1x Pasif liziz tamponu ile çözünmüstür. Lusiferaz aktivitesi Lusiferaz Testi Reaktifi II kullanilarak ölçülmüs ve Renilla degerleri Stop ve Glow reaktifi (Çift Iusiferaz tahlil sistemi, Cat # E1980, Promega) kullanilarak belirlenmistir. Lusiferaz ve renilla Okumalari, Tecan® FSOO (Tecan) çok plakali okuyucu kullanilarak gerçeklestirilmistir. Tüm sivi isleme adimlari (ortamin aspirasyonu, pasif liziz tamponu, Lusiferaz Testi Reaktifi II ve Stop ve Glow reaktifleri dagitimi), ELF406 sivi isleyici kullanilarak gerçeklestirilmistir.
Veri analizleri, Ecole Polytechnique Federale de Lausanne'da (EPFL) Biyomoleküler Tarama Tesisinde (BSF) yerlesik analiz yazilimlari kullanilarak gerçeklestirilmistir.
RNA ekstraksiyonu Toplam RNA, TRIzol® ekstraksiyon kiti (Invitrogen) kullanilarak hücrelerden çikarilmistir. Kisaca, 1x106 hücreler buz soguklugunda 1x PBS ile yikanmis ve nükleoprotein bilesiklerini ayristirmak için oda sicakliginda 5 dakika boyunca 1 ml TRIzol® çözeltisi içinde çözdürülmüstür. Çözünen hücreler daha sonra 200 ul kloroform ile tedavi edilmis ve 15- saniye boyunca kuvvetlice çalkalanmis ve oda sicakliginda 2-3 dakika boyunca inkübe edilmistir. Numuneler, Eppendorf masa üstü santrifüj kullanilarak 4 °C'de 10 dakika boyunca 14000 rpm`de santrifüje tabi tutulmustur. Santrifugasyonu takiben, üstteki sulu faz yeni eppendorf tüplerine aktarilmistir. Toplam RNA'yi çökeltmek için, ayrilan sulu faza 500 ul izomil alkol ilave edilmis ve oda sicakliginda 10 dakika boyunca inkübe edilmistir. Numunelerin 4 °C'de 10 dakika santrifüj edilmesiyle bir RNA peleti elde edilmistir.
Elde edilen RNA peleti 1 ml buz soguklugunda % 75 etanol ile yikanmis ve 4 °C'de 14000 rpm'de döndürülmüstür. RNA peleti fazla etanolden kurutulmus ve 40 pl DPEC su içinde yeniden süspanse edilmistir. cDNA sentezh Hücreden çikarilan toplam RNA, ters transkripsiyon reaksiyonu ile cDNA sentezlemek için kullanilmistir. Ters transkripsiyon SuperScriptIM RT (Invitrogen) kullanilarak gerçeklestirilmistir. RNA konsantrasyonu, NanoDr0p®ND-1000 spektrofotometre (Witec AG) kullanilarak ölçülmüs ve 500 ng toplam RNA, 10 mM dNTP karisimi ve 100 ng rasgele primer ile karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, 65 °C'de 5 dakika boyunca inkübe edilmis ve hizli bir sekilde buz üzerinde 1 dakika boyunca inkübe edilmistir. Buz üzerinde inkübe edildikten sonra, 5x First Strand tamponu ve 0,1M DTT ilave edilmis ve karisim, 25 °C'de 2 dakika boyunca inkübe edilmistir. Ters transkripsiyon reaksiyonunu baslatmak için 200U SuperScripTM II RT, reaksiyon karisimina ilave edilmis ve 42 °C'de 50 dakika boyunca inkübe edilmistir. Reaksiyon karisimi, 75 °C'de 15 dakika boyunca inkübe edilerek reaksiyon durdurulmustur.
Western blot analizleri: Hücreler, 4 °C'de 30 dakika boyunca RIPA tamponu (50 mM Tris.Cl, pH 7,5, 150 mM NaCI, % l nonidet P-40, % 0,5 sodyum deoksikolat ve % içinde çözünmüstür. Çözünen hücreler, 4 °C'de 14000 rpm'de atiklari çikarmak için santrifüje tabi tutulmustur. Süpernatan yeni bir eppendorf tüpüne aktarilmistir. Protein konsantrasyonu Spektrofotometre (Ultrospec 3000 pro) kullanilarak Bradford testi ile tamamlanmistir. 40 ug protein, 5 dakika boyunca 99 °C'de isitilarak 1x SDS jel yükleme tamponu (100 mM Tris.Cl, pH 6,8, denatüre edilmistir. Denatüre protein numuneleri, akrilamid jel üzerine yükleninceye kadar buz üzerinde depolanmistir.
Numuneler, Tris-glisin elektroforez tamponu (25mM Tris, 250mM glisin, % içinde % 8 veya % 10 akrilamid jeli üzerinde çalistirilmistir. Akrilamid jel üzerinde ayrildiktan sonra, protein numuneleri, transfer tamponu (39 mM glisin, 48 mM Tris bazi, % 0,037 505 ve % 20 metanol) kullanilarak PVDF zarina (PEQ lab, katalog numarasi 39-3010) aktarilmistir.
Kairsimdaki protein miktarini inceleme (Immünoblotlama) için zarlar 96 5 süt ile bloke edilmis ve birincil antikorlarla. 4 °C 'de gece boyunca inkübe edilmistir. Zar, 5 dakika boyunca (3 kez) 1x TBST (1x TBS + % 0,5 tween 20) ile yikanmis ve oda sicakliginda bir saat boyunca HRP-konjuge sekonder antikorlar ile inkübe edilmistir. Sinyal, Super Signal West kemilüminesan substratla (Thermo Scientific, katalog numarasi 34077) tespit edilmistir. rmmünofloresan boyama: lmmünofloresan boyama yapmak için HeLa hücreleri veya C2C12 hücreleri kapak folyolarinda yetistirilmistir. Hücreler 1x buz soguklugundaki PBS ile yikanmis, oda sicakliginda 5 dakika boyunca % 4 PFA ile sabitlenmis ve % 0.3 Triton X-lOO kullanilarak geçirgenlestirilmistir. Daha sonra geçirgenlestirilen hücreler oda sicakliginda 20 dakika boyunca antikorlar ile oda sicakliginda inkübe edilmistir. Birincil antikorlari tespit etmek için Alexa FIuor-488 konjüge ikinci antikorlar kullanilmistir. Hücreler DAPI ile zit olacak sekilde renklendirilmis ve flüoresan montaj ortamina monte edilmistir. Floresan görüntüler Zeiss Axioplan mikroskop kullanilarak EPFL'dekI Bioimaging ve optik çekirdek tesislerinde görüntülenmis ve yakalanmistir.
Tablo 1: Antikorlarin ve çalisilan seyreltmelerin listesi.
Antikorlar Uygulama Seyreltme Kaynak Anti-Val 1744 Anti-Notchl (C- WB 1 1000 Santa Cruz, sc-6014 Anti-RBP-Jk IF 1 500 28713 Anti-FLAG-MZ IF 1 500 Sigma, F1804 Santa Cruz, sc- Anti-Hesl (H-140) WB 1 500 25392 Anti-Delta 4 gibi . _ . :100 Produced in-house sitometrisi Anti-Notchl . . . :50 Produced in-house sitometrisi Anti-Tübülin WB :3000 Sigma, Anti-Miyozin agir HRP ile konjuge HRP ile konjuge edilmis anti fare WB :3000 GEhealthcare,NA931V HRP ile konjuge edilmis anti WB :3000 GEhealthcare,NA934V tavsan IgG”si Alexa FIuor-488 ikincil Ab Anti-8220 - Akis Pacific mavisi sitometrisi Anti-CD21-FITC . _ . :200 eBioscience sitometrisi Anti-CD23-PE _ _ . :400 BD Pharmingen sitometrisi Anti-TCR ß-APC Akis . _ eF780 sitometrisi Anti-CD4-FITC _ _ _ :800 Produced in-house sitometrisi Anti-CD8-Alexa Akis 648 sitometrisi Anti-CD71-PE . _ . :800 eBioscience sitometrisi Anti-Ter119-APC Akis eF780 sitometrisi Anti-AnnexinV-CyS . s _ . 1:50 BD Pharmingen sitometrisi C2C12 Miyoblast farklilasma testi: C2C12 hücreleri, yetistirme ortami (% 10 serum) varliginda kollajen kapli kapak folyosu üzerinde yetistirildi. Miyoblast farklilasmasini baslatmak için, hücreler, farklilasma ortaminin (% 2 at serumu) varliginda veya büyüme ortami + Notch i nhibitörlerinin varliginda 3 gün boyunca 96 100 hücre doluluk orani oluncaya kadar yetistirilmistir. 3 gün sonra hücreler buzla soguklugunda 1x PBS ile yikanmistir ve % 4 PFA ile sabitlenmistir. lmmunofloresan boyama, bölüm 2.2.6'da (lmmünofloresan boyama) açiklandigi üzere anti-MHC antikor kullanilarak gerçeklestirilmistir.
Akis sitometrisi analizleri: Floresan aktiflesmis hücre ayirma (FACS) analizleri, Akis Sitometrisi çekirdek tesisinde (EPFL) akis sitometrisi için CyAnTM ADP alet platformunda gerçeklestirilmistir. DL4 ve N1- HeLa hücrelerindeki DL4 ve Notch 1 ekspresyonlari, sirasiyla anti-DL4 ve anti-NI antikorlari kullanilarak belirlenmistir.
Timusta T hücre gelisimi, CD4, CD8 ve TCRß'ya karsi antikorlar kullanilarak arastirilmistir. MZB hücresi gelisimi, 8220, CD21 ve CD23`e karsi antikorlar kullanilarak izlenmistir. Kisaca& timus ve dalaktan tek bir hücre süspansiyonu hazirlanmistin 1x106 hücre, 50 ul boyama ortamina (% 2 NCS ve 25mM HEPES ile takviye edilmis HBSS) süspanse edilmis ve buz üzerinde 30 dakika boyunca inkübe edilerek uygun antikor kombinasyonlan ile boyanmistir.
Apoptotik hücrelerin yüzdesini hesaplamak için AnnexinV ve 7AAD boyamasi yapilmistir. Timik hücreler 300 ul 1x AnnexinV baglama tamponu (BD Biosciences, San Diego, ABD) içinde süspanse edilmis ve 10 ul AnnexinV-CyS antikoru ve 10 ul 7AAD (BD Biosciences, San Diego, ABD) ile inkübe edilmistir.
Numuneler 15 dakika boyunca oda sicakliginda inkübe edilmistir. FACS, bir saatlik antikor boyamasi ile gerçeklestirilmistir.
Akis sitometrisi analizleri canli hücreler üzerinde öne saçilim (FSC) ve yana saçilim (SSC) üzerine kapilama yapilarak gerçeklestirilmistir. Veriler FIowJo yazilimi (Tree Star, Ashland, OR) ile analiz edilmistir.
Notch inhibitörü ile tedavi edilen hücrelerin büyüme kinetiklerini belirlemek için Alamarblue® çogalma testleri gerçeklestirilmistir. Alamarblue®, hücreye geçirgen bir substrat rezazürinden olusmaktadir. Metabolik olarak aktif ve çogalan hücrelerde, canli hücrelerin asli bir azaltici gücü nedeniyle rezazürin resorufine dönüstürülür ve kirmizi bir flüoresans üretir. Bu nedenle resorufinin üretimi, hücre popülasyonunun canliliginin bir göstergesi olarak islev görmektedin Proliferasyon testleri 96 oyuklu bir plakada 5000 hücre/oyuk ekim ile gerçeklestirilmistir. Hücreler, farkli zaman araliklari için DMSO veya Notch inhibitörleri ile tedavi edilmistir. Her zaman araligi için yapilan her tedavi 8 tekrarlamada gerçeklestirilmistir. Büyüme kinetigim belirlemek için, 10 ul Alamarblue® (Invitrogen) her oyuga ilave edilmis ve 4 saat boyunca inkübe edilmistir. Alamarblue okumasi, Tecan F çoklu plakali okuyucu kullanilarak gerçeklestirilmistir.
Hematoksilin ve Eozin boyama: Organlar toplanarak, gece boyunca 4 °C'de % 4 paraformaldehid (PFA) içinde sabitlenmis ve parafin içine gömülmüstür. Doku bölgeleri, azalan konsantrasyonda etanol (% 100 - % 70) ve son olarak damitilmis su kullanilarak cilasi alinmis ve hidrojene edilmistir. Kesitler, Hematoksilin ile 5 dakika boyunca boyanmis, yaklasik 20 saniye boyunca asit alkolle durulanmis ve sonra akan suda 10 dakika durulanmistir. Kesitler daha sonra Eozin ile 5 dakika boyunca boyanmis, suda yikanmis ve artan konsantrasyonda etanol (% 70 - % 100) kullanilarak kurutulmus ve ksilen çözeltisinde temizlenmistir. Kesitler montaj solüsyonu kullanilarak monte edilmistir. Hematoksilin ve Eozin boyali kesitler görüntülenmis ve görüntüler Leica DMl4000 mikroskobu kullanilarak yakalanmistir.
Alcian mavisi yöntemi ile boyama: Bagirsak dokusu buz soguklugunda 1xPBS ile yikanmis, % 4 PFA içinde sabitlenmistir. Dokular parafine gömülmüs ve 4 mikrona kadar kesitlendirilmistir. Bagirsak kesitleri 60 °C'de deparafinize edilmis ve azalan konsantrasyonda alkol (% 100 - yikanmistir. Alcian mavisi yöntemi ile boyama, oda sicakliginda 30 dakika boyunca akan suda yikanmis ve son olarak 5 dakika nükleer hizli kirmizi çözeltiye kar$ boyanarak gerçeklestirilmistir. Doku bölgeleri daha sonra, % 100 alkolle kurutulmus akan suda yikanmis ve ksilen çözeltisinde temizlenmistir. Monte edilen kesitlere daha sonra bakilmis ve görüntüler Leica DMI4000 mikroskobu kullanilarak yakalanmistir.
Deney fareleri: Fareler, Lozan, EPFL Hayvan Tesisi 'de tutulmus ve yetistirilmistir. C57Blö fareleri, kimyasal bilesiklerin bagirsak toksisitesini degerlendirmek için kullanilmistir.
William J Muller, McGiIl Universitesi, Montreal'den MMTV- ErbBZ/Neu-IRES Cre (FVB arka plani) fareleri elde edilmis ve MMTV-ErbBZ/Neu özel primerler kullanilarak genotiplenmistir (Ursini-Siegel ve digerleri, 2008). NOD/SCIDyc4- fareleri The Jackson Laboratory (ABD) `den alinmis ve Lozan, EPFL Hayvan Tesisi'nde tutulmus ve yetistirilmistir.
Marjinal Bölge B hücresi gelisiminde bagirsak toksisitesi ve C57816 farelerine yag veya 5-7 gün boyunca günde bir kez, 25 mg/kg I3 veya 10 mg/kg CPA ile intra peritoneal (i.p) olarak enjekte edildi. Fareler, 0. günde, 3. günde ve 5. günde bir tartma baskülü kullanilarak tartilmistih 8. günde, bagirsak dokusu, dalak ve timus, analizler için toplanmistir.
Tümör transplantasyon testi: lnsan lösemik hücre hatlari RPMI 8402 ve HPB ALL, bir CMV düzenleyicisinin asagi akis yönünde eksprese edilen Iusiferaz genini ihtiva eden bir lentivirüs ile transforme edilmistiL ALL (1 x 106), 100 ul buz soguklugunda 1xPBS'de süspanse edilmis ve transplantasyon yapilincaya kadar buz üzerinde tutulmustur. NOD/SCIDyc-W' farelerine insana ait lösemi hücre hatlari ile intravenöz (i.v) enjeksiyon yoluyla transplantasyon yapilmistir. Fareler, Caliper IVIS (Xenogen) canli görüntüleme sistemi kullanilarak tümör gelisimi açisindan izlenmistir. Kisacasi, Iusiferaz substrat Iüsiferin (Biosynth, L-8820), 1xPBS içerisinde çözündürülmüs ve 150 mg/kg vücut agirligi konsantrasyonunda farelere (intra peritoneal) enjekte edilmistir. Fareler, liperferin enjeksiyonundan 5 dakika sonra Caliper IVIS canli görüntüleme sistemi kullanilarak görüntülenmistir. 13. ve 15. günlerde, fareler günlük olarak yag veya 25 mg/kg yakalanmistir.
Primer MMTV-ErbBZ/Neu meme tümörleri farelerden toplanmis ve tek bir hücre süspansiyonu hazirlanmistir. 1 XIO6 primer tümör hücresi 50 ul 1x PBS içinde süspanse edilmis ve buz üzerinde tutulmustur. Uç haftalik alici FVB fareleri, endojen epitelyumlarindan temizlenmis ve tüm hücreler bos yag yastigina enjekte edilmistir. Alici farelerde tümör gelisimi izlenmis ve tümör hacimleri dijital kaliper kullanilarak ölçülmüstür. Tümör hacimleri asagidaki formül kullanilarak hesaplanmistir: 2 x uzunluk x (genislik)Ä Tümör yaklasik 100 mm3'lük bir hacme eristikten sonra alici fareler, iki günde bir yag veya 25 mg/kg I3 ile tedavi edilmistir.
Test gelisimi: Notch yolaginin yeni modülatörlerini tanimlamak için, Basvuru Sahipleri, HeLa hücrelerini eksprese eden DL4 Iigandinin N1 HeLa hücreleri ile kültürlendigi ve böylece Notch yolaginin aktive oldugu bir kokültürün tayinini gerçeklestirmistir. Bir DL4 ve N1 HeLa hücre ortak kültür sistemi, ligand ve reseptör eksprese eden hücreler arasindaki hücre-hücre iletisiminin fizyolojik kosullarini taklit etmektedir. Kontrollü bir reseptör-ligand test sisteminin laboratuar ortaminda üretimL Basvuru Sahiplerinin, Notch sinyalizasyon yogunlugunu y- sekretaz inhibitörleri ile modifiye etmelerini ve izlemelerim saglamistit DL4:N1 HeLa hücre birlikte kültürü Notch sinyalizasyonunu aktive etmesi Bir birlikte kültür testi hazirlamak için, Basvuru SahiplerL kararli HeLa hücre hatlarini eksprese eden DL4 ve N1'i saptamistir. Kisaca, HeLa hücreleri, PGK düzenleyicisinin asagi akiminda DL4 cDNA ihtiva eden bir Ientivirüs ile transforme edilmistir. D4 eksprese eden hücre popülasyonu, floresansla aktive edilmis hücre ayirmasi ile zenginlestirilmistir. Benzer sekilde, Nl kararli HeLa hücre hatti, bir fare Nl cDNA'sini içeren bir plazmid, bunu takiben bir IRES Puromisin seçim kaseti kullanilarak saptanmistir. Bu sistem, Basvuru Sahiplerinin, puromisin kullanilarak seçtiklerinde sadece Notchl eksprese eden klonlarim seçmelerine izin vermistir. ilgili hücre hatlarindaki DL4 ve N1 proteinlerinin ekspresyon seviyeleri, anti-DL4 ve anti-Nl antikorlari kullanilarak tespit edilmistir. Akis sitometrisi ile protein seviyelerinin nicellestirilmesi, ebeveyn HeLa hücreleriyle karsilastirildiginda DL4 ve Nl'in yüksek düzeyde ekspresyonunu göstermistir (veriler gösterilmemistir).
Kararli hücre hatlarinin Notch yolagi aktivasyon potansiyelini degerlendirmek için DL4 ve N1 kararli HeLa hücreleri (sirasiyla DL4-HeLa ve Nl-HeLa), 6 oyuklu bir plakada 1:1 oraninda birlikte kültürlenmis ve hücre doluluk orani artana kadar büyümüstür. Kültürlenmis hücreler, DMSO veya DAPT (10 uM) ile 24 saat boyunca tedavi edilmistir. Karsilastirma için ebeveyn HeLa hücreleri DL4-HeLa hücreleri ile birlikte kültürlenmis ve DAPT varliginda veya yoklugunda 24 saat boyunca büyütülmüstür. VEL1744 antikorlari kullanilarak Notchl'in aktif formu (NICD) için Western blot analizleri gerçeklestirilmis ve ebeveyn HeLa hücreleri DL4 HeLa hücreleri ile birlikte kültürlendiginde HeLa hücrelerinde düsük endojen Notchl seviyesi olusturan sadece orta düzeyde NICD saptanmistir (veri gösterilmemistir). Ote yandan, ligand (DL4- HeLa hücreleri) yoklugunda veya GSI (DAPT) varliginda, Notch sinyalizasyonunda bir kayip oldugunu gösteren NICD seviyelen tespit edilmemistir (veri gösterilmemistir). Bununla birlikte, DL4- ve Nl-HeLa hücrelerinin birlikte kültürleri, DAPT tedavisi ile bloke edilebilen, anlamli ölçüde daha yüksek NICD seviyeleri ortaya koymustur (veri gösterilmemistir). N1-HeLa hücrelerine tam uzunlukta Notchl cDNA'nin geçici olarak sokulmasi, artmis NICD protein seviyeleri tarafindan gösterildigi gibi birlikte kültür testinin dayanikliligini arttirmistir (veri gösterilmemistir). N1 bölünmesinin DAPT ile inhibe edilmesi, Notch sinyalizasyon etkinligindeki artisi ortadan kaldirabilmektedir (veri gösterilmemistir). Bu sonuçlar, GSI inhibisyonuna cevap veren DL4 N1 birlikte kültür testinde Notch yolagi aktivasyonunun yüksek düzeylerine ulasabilecegini dogrulamistin 6 delikli plaka formatinda DL4 N1 birlikte kültür testinin olusturulmasi, Basvuru Sahiplerinin, reseptör-ligand etkilesim aracilikli Notch sinyalizasyon aktivasyonunu degerlendirmelerine izin vermistir. Birlikte kültür sisteminin GSI (DAPT) tedavisi, Notch sinyalini tetikleyen reseptör- Yüksek verimli tarama (HTS) bagdasik testinin olusturulmasi Baslangiçta, DL4 N1 birlikte kültür testi 6 oyuklu bir plakada olusturulmustur. Yüksek verimli tarama (HTS) olusturmak için, test sistemi, 384 oyuklu plaka formatinda saglam bir sekilde çalisacak sekilde daha da uygun hale getirilmistir.
Test, kimyasal bilesik kütüphanelerinin taranmasi için 384 plaka formatina ölçeklendirilmistir. Bunu basarmak için, N1- HeLa hücreleri bir raportör plazmidleri ve Nl ekspresyon vektörü ile transfekte edilmistir. Oniki saat sonra, kimyasal bilesikler, negatif ve pozitif kontroller olarak DMSO ve DAPT ile birlikte bir 384 oyuklu plaka içinde dagitilmistir. DL4 ve karistirilmis ve çok damlali Combi plaka dagiticisi kullanilarak 384 oyuklu plakalara ilave edilmistir. Lusiferaz okumasi, çift lusiferaz test sistemi kullanilarak ölçülmüstür.
Deneyin tekrarlanabilirligini uygun hale getirmek ve belirlemek için plakanin yarisi DMSO (192 oyuk) ile tedavi edilmis ve ikinci yarisi da 10 uM DAPT (192 oyuk) ile tedavi edilmistir. DAPT tedavisi, Notch sinyalizasyon aktivasyonunun kat azaltarak düzenlemesine neden olmustur. Bu test için Z' degeri 0.5'den büyüktü. Bir 2' degerinin > 0,5 olmasi, bir HTS çalisma süresi için testlerin güvenilirligini ve tekrarlanabilirligini dogrulamaktadir.
Yeni bir Notch sinyalizasyon inhibitörü olarak 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) l3'ün, Notch sinyalizasyonunun NICD aracilikli aktivasyonunu inhibe etmesi: Notch engelleyici aktiviteyi dogrulamak ve I3 bilesiginin ICSO degerini belirlemek için DL4 N1 birlikte kültür test sistemi kullanilmistir. Birlikte kültür testindeki hücreler, artan bir konsantrasyonda I3 (2 - 10 uM) ile 24 saat boyunca tedavi edilmistir. Notch yolaginin aktivasyonu, Notch odakli bir gösterildigi üzere, I3, alt uM araliginda bir ICSO degeri ile konsantrasyona bagli bir biçimde Notch sinyalizasyonunu bloke etmektedir.
NICD'nin asiri sentezlenmesinin Notch sinyalizasyonun I3 aracilikli inhibisyonunu kurtarip kuramayacagini belirlemek için, HeLa hücreleri, bir NICD ekspresyon plazmiti ve 12xCSL Transfekte edilen hücreler, artan bir konsantrasyonda I3 ve DAPT ile tedavi edilmistir. Sasirtici bir sekilde, I3 ile NICD eksprese eden hücrelerin tedavisi, DAPT'nin sinyalizasyon aktivasyonunda herhangi bir etkisi olmadigi halde, yolagin aktivasyonunu doza bagimli bir sekilde bloke edebilir (SekH 53 kIivaj olayinin akis yönündeki aktivitesinden kaynaklandigini düsündürmektedir.
Bir sonraki Basvuru Sahipleri, I3'ün diger Notch reseptörleH vasitasiyla yolagin aktivasyonunu engelleyip engelleyemeyeceklerini veya Notchl sinyalizasyonuna özgü olup olmadigini arastirmislardir. Buna deginmek için Notch sinyalizasyonunun DL4 N1 veya DL4:N2 Iigand reseptör çiftlen vasitasiyla aktive edildigi bir birlikte kültür testi kullanilmistir. Bu iki birlikte kültür testinde I3 ile hücrelerin tedavisi, DL4 N1 ve DL4 N2 ligand reseptör çiftleH araciligiyla Notch sinyalizasyonunun inhibisyonuna neden olmustur (Sekil 1C). Benzer sekilde I3, Notchl-hücre içi etki alani (NICD) ve N0tch2-hücre içi nüfuz alani (N2-ICD) yolagin aktivasyonunu bloke edebilmektedir ve bu da I3'ün NICD aracilikli aktivasyona özgü olmadigini göstermektedir (SekH 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin, NICD'nin nükleer NICD ile transfekte edilmis HeLa hücrelerinden alinan laboratuar ortami verileri, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- Amin'in (I3) S3 klivaj olayinin akis yönünde hareket ederek Notch sinyalizasyonunu bloke ettigin akla getirmektedir. Bu, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) etki mekanizmasi ile ilgili birçok olasiligi ortaya çikarmaktadin Ornegin, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, NICD'nin nükleer Iokalizasyonunu bozabilir. inhibisyonun ikinci muhtemel bir mekanizmasi çekirdegin transkripsiyonal aktivasyon kompleksinin bir veya daha fazla bireysel bilesenin hedeflenmesi olabilir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- Amin'in (I3) NICD'nin nükleer tasinmasinda bir etkisi olup olmadigini test etmek için, HeLa hücresi bir NICD-GFP füzyon yapisi ile transfekte edilmis ve DMSO ve 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmistir. Bu, Basvuru Sahiplerinin, hücre içinde füzyon proteinin tasinmasini takip etmelerine izin vermistir. Paralel olarak, Notch ile yönlendirilen lusiferaz ölçümü ile 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli yolagin inhibisyonu belirlenmistir (veri gösterilmemistir).
Mikroskopik çalismalar, DMSO ile tedavi edilen hücrelerde NICD-GFP füzyon proteininin çekirdege translokasyon yaptigim ve 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3)üzerinde karasiz olmadigini göstermistir (veriler gösterilmemistir). Bu veri, mekanizmasi olarak NICD'nin nükleer olarak dislanmasini ekarte etmektedir.
Belirli bir esigin üzerindeki MAMLl'in asiri ekspresyonu, 6- (4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (l3) ile baslatilan Notch sinyalizasyon inhibisyonunu kurtarabilin Notch sinyalizasyonunun 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3)aracilikli blokajinin NICD'nin nükleer olarak ekarte edilmesini içermediginden, Basvuru Sahipleri, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) etkilesimi ve dolayisiyla NICD, MAMLl ve CSL-RBP-jk'yi (çekirdek transkripsiyonel aktivasyon kompleksinin tüm bölümleri) alt nükleer lokalizasyonunu bloke edip etmedigini ele almistir. Bunu çözmek için, HeLa hücreleri, 800 ng NICD-GFP plazmid, 1 ug MAMLl-FLAG ekpresyon vektörü ile birlikte transfekte edildi ve kapak fisleri üzerine büyütüldü. Transfekte edilen HeLa hücreleri 24 saat boyunca DMSO veya 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) (10 uM) ile tedavi edilmistir. 6-(4-Tert- Buti I fenoksi ) PI ri di n-3-Ami n' i ri (I 3) NI CD ve MAMLI konsantrasyonunda Notch aktivasyonunu bloke etme kabiliyeti, Notch odakli lüsiferaz ölçümü ile dogrulanmistir (veri gösterilmemistir). islemden sonra, hücreler % 4'lük PFA ile sabitlenmis, % 1 BSA ile bloke edilmis ve FLAG etiketli MAMLI ve CSL-RBP-jk'ye karsi antikorlarla boyanmistir. NICD-GFP füzyon proteini, GFP proteinini izlenerek görsellestirildi.
Tek basina eskprese edildiginde, NICD-GFP proteini, çekirdekte yaygin bir sekilde lokalizedir ve 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, nükleer lokalizasyonunu degistirmemistir. Bununla birlikte, NICD-GFP ve MAMLl'in asin ekspresyonu, her iki proteinin de alt nükleer bölmelere (muhtemelen nükleer cisimler) birlikte lokalize edilmesine yol açmistir. Hücrelerin 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, NICD-GFP ve MAMLl'in alt nükleer bölmeye translokasyon ve birlikte Iokalizasyonu bozmamistir (veriler gösterilmemistir).
Benzer sekilde, CSL/RBP-jk'nin yeri bu proteine özgü antikorlar kullanilarak arastirilmistir. Sekil 22C'de gösterildigi üzere, MAMLl-FLAG ve CSL/RBP-jk alt nükleer bölmelerde birlikte lokalize edilmis ve 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi çekirdegindeh dagilimlarini degistirmemistir (veri gösterilmemistir). Bu veriler, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisinin çekirdekte Notch transkripsiyonel aktivasyon kompleksinin bilesenlerinin birlikte lokalizasyonunu bozmadigini akla getirmektedir. Bununla birlikte, kompleksin çesitli bilesenleri arasindaki etkilesimi bloke edip etmediginin arastirilmasi gerekmektedir.
Basvuru Sahipleri, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) hareket mekanizmasini daha ayrintili arastirmak için, 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) transkripsiyonel aktivasyon kompleksinin bilesenlerini hedef alabilecegini öne sürmüstür. Bu hedef proteinin asiri ekspresyonu, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (l3) bilesigini titre edebilir ve böylece 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile baslayan yolagin inhibisyonunu kurtarabilir. Bu soruna deginmek için, HeLa hücreleri 800 ng NICD-GFP plazmid ile ve artan miktarda (0,1 ve 3 ug) MAMLl-FLAG ekspresyon vektörü ile birlikte transfekte edilmistir. Notch yolagi aktivasyonu, 12xCSL Iusiferaz piazmidinin eklenmesiyle ölçülmüstür. SekH 2'de gösterildigi üzere, yalniz NICD veya NICD + lpg MAMLl ile transfekte edilmis HeLa hücrelerinde, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, Notch sinyalizasyonunu konsantrasyona bagli bir sekilde bloke edebilmektedir. Bununla birlikte, MAMLl plazmidi miktari 3ug'ye yükseltildiginde, 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (l3) tedavisi artik Notch sinyalizasyonunun aktivasyonunu bloke edememistir (Sekil 2).
Bu nedenle, belirli bir esigin üzerindeki MAMLl'in asiri ekspresyonu, Notch yolaginin 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin- 3-Amin (I3) aracilikli inhibisyonunu kurtarabilmektedir. Bu veriler, MAMLl'in kendisinin 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin- 3-Amin (I3) bilesiginin hedefi olabilecegini düsündürmektedir.
MAMLl konsantrasyonunda bir artis, inhibitörü titre edip sinyalizasyon yolaginin tikanmasini bloke edecektir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, insan kanser hücre hatlarindaki Notch sinyalizasyonunu azaltmaktadir: Notch sinyalizasyonunun anormal bir sekilde harekete geçirilmesi, insan kanserlerinde tümörün baslamasinda ve/veya tümörden korunmasinda önemli bir rol oynamaktadir. 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisinin insan kanseri hücrelerindeki Notch sinyalizasyonunu bloke edip etmeyecegim belirlemek için çesitli kanser hücre hatlari (T-ALL hücre hatlari RPMI 8402, HPBALL, KOPTKl ve pankreatik kanser hücre hatti PANC1) 24 saat boyunca 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin- 3-Amin (I3) ile tedavi edilmistir. Notch sinyalizasyonundaki etki Notch hedef genlerin ekspresyon seviyelerinin ölçülmesi ile tespit edilmistir. 24 saat boyunca insan kanseri hücre hatlarinin (RPMI 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi ve Notch hedef genlerinin qRT-PCR veya Western blot analizleri ile yapilan analizleri, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (IBL mRNA'daki Hesl,cMyc ve Dtxl gibi Notch hedef genlerin ve protein seviyelerinin istatistiksel olarak önemli bir azaltarak düzenlenmesini baslattigini göstermistir (Sekil 3).
Notch hedef genlerin azaltarak düzenlenmesi, düsük NICD seviyeleri ile korelasyon göstermektedir (Sekil 38, C ve D). insan T-ALL hücre hatlarinin ve PANCl pankreatik kanser hücre hattinin 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavisi, Notch sinyalizasyonunda bir azaltarak düzenlemeye neden olmustur, Basvurucular, yolagin bu inhibisyonunun kanser hücrelerinde büyümenin duraksamasina dönüsüp dönüsmeyecegini sorgulamaktadir. Bu amaçla, RPMI 8402, KOPTKl, PANCl ve nRas odakli melanom hücre hatlari, birkaç gün için 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) varliginda veya yoklugunda yetistirilmis ve proliferatif indeks, Alamar mavisi testi kullanilarak ölçülmüstür. Buna ek olarak, bilinen Notch mutasyonu olmayan B-lenfosit RAJI hücre hatlari bir kontrol olarak kullanilmistir (veri gösterilmemistir). Sekil 4'te gösterildigi üzere, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ve DAPT tedavisi, T-ALL hücre hatlari RPMI 8402, KOPTKI ve pankreatik kanser hatti PANCl`de belirgin bir çogalma blogunu baslamistir. Benzer sekilde, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3), nRas odakli melanoma hücre hatlarinin büyümesini önemli ölçüde inhibe etmistir (Sekil 4). Bununla birlikte, Notch'tan bagimsiz RAJI hücrelerinin çogalma& üzerinde ne DAPT ne de 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) herhangi bir etkiye sahip degildir (veri gösterilmemistir). 6-(4-Tert-Bütilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) yok ise DAPT, insan T-ALL hücresini ve meme kanseri hücre hattini asiri sentezleyen NICD'de Notch sinyalizasyonunu bloke etmemektedir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3), Notch yolaginin NICD aracilikli aktivasyonunu bloke edebilmektedir (sekil 1). 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (l3) ayrica NICD asiri sentezleyen hücrelerde bir çogalma blogu baslatip baslatmayacagini belirlemek için DND41-NICD hücre hattim olusturmak üzere insan T-ALL hücre hatti DND41 (DND41-beyeyn), bir NICD eksprese eden lentivirüs ile transdüksiyonlandi. Bu iki hücre hatti, DMSO, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ve DAPT ile tedavi edilmistir. DND41-ebeceyn hücre hattinin DAPT' ve 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (l3) ile tedavisi, DMSO ile tedavi edilen hücrelere kiyasla Hesl'in bir azaltarak düzenlemesine yol açmistir. Bununla birlikte, DND41-NICD hücreleri, DMSO, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- Amin (I3) ve DAPT ile tedavi edildiginde, sadece 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) yok ise DAPT tedavi& Hesl'in azalarak düzenlenmesine neden olmustur (Sekil 5A).
Buna ek olarak, bu iki hücre hatti da 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ve DAPT'nin anti-proliferatif etkileri için birkaç gün boyunca izlenmistir. Hem 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) hem de DAPT tedavisinin DND41-Ebeveyn hücre hattinda önemli bir çogalma bloguna (Sekil SB) neden oldugu halde, sadece 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3), DND41-NICD hücrelerinde büyümenin duraksamasini baslatabilmistir (Sekil SC). Bu veriler, 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) bilesiginin, insan kanser hücrelerinde NICD aracilikli yolagin aktivasyonunu ve proliferasyonunu bloke edebilecegi fikrini daha da güçlendirmektedin 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Aminin (I3) NICD aracilikh yolagin aktivasyonunu ve insan kanser hücrelerinin proliferasyonunu bloke edebilecegi fikrini daha da güçlendirmek için, HCC1187 insan meme kanseri hücre hatlari bu bilesikle tedavi edildi. HCC1187 hücre hatti, SECCZZB-Notchz kromozomal translokasyonuna sahiptir, böylelikle, N2-ICD'nin yapisal olarak aktif formunu üretmektedir (sekil 5D). Bu mutasyona bagli olarak, HCC1187 hücre dizileri DAPT gibi y- sekretaz inhibitörlerine cevap vermemektedir. Sekil 5E'de görüldügü üzere, DAPT tedavisi HCC1187 hücre hatlarinin proliferasyonunu inhibe etmezken, 6-(4-Tert-Bütilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, bu hücre hattinda önemli ölçüde bir çogalma blogu baslatmistir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Aminin (I3), insan T hücresi akut lenfoblastik lösemi hücre hatlarinda GO/Gl hücre döngüsü duraksamasini ve apoptozu uyarmaktadir: Sekil 4 ve 5'de gösterildigi üzere, insan lösemi hücre hatlari ve insan gögüs kanseri hücre hatlarinin 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi proliferasyonunu olumsuz sekilde düzenlemektedir. Bu 6-(4-Tert-Bütilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli proliferatif durdurma, hücre döngüsünün farkli evrelerinde apoptoz veya hücre döngüsü duraksamasinin baslatilmasina bagli olabilir. Buna ek olarak, y-sekretaz inhibitörlerini kullanarak Notch sinyalizasyonunun inhibisyonunu, insan TALL hücre hatlarinda GO/Gl hücre döngüsü duraksamasini baslattigini gösterilmistir. Bu nedenle 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli proliferatif duraksama hücre döngüsü ve apoptoz analizleri için sorumlu mekanizmalari aydinlatmak için yapilmistir. insan TALL hücre hatlari (RPMI ve insan meme kanseri hücre hatti HCC1187, 2 gün veya 7 gün boyunca 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) veya DMSO ile tedavi edilmistir. Hücrenin ölümünü arastirmak için Annexin V boyamasi uygulanmis ve apoptotik (AnnexinV pozitif) hücre popülasyonu orani, 7 günlük tedaviden sonra akis sitometriü analizleri ile belirlenmistir. Sekil 6A'da gösterildigi üzere, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, RPMI8402, CUTLI, KOPTKI, TALL1 ve HPB ALL'de önemli apoptozu uyarmaktadir. Benzer sekilde, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin- 3-Amin insan meme kanseri hücre hatti HCC1187'de apoptozu uyarmaktadir (sekil 6C).
Apoptozun baslatilmasina ilaveten, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilen insan Iösemik hücre hatlari ve gögüs kanseri hücre hatlarinda gözlemlenen poliferatif duraksama, hücre döngüsünün GO/Gl evresindeki hücre döngüsü duraksamasina bagli gibi gözükmektedir. Lösemik hücre hatlari (RPMI ve meme kanseri hücre hatlari, 48 saat boyunca 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmis ve hücre döngüsü durumu Ki67 ve Hoechst boyasi kullanilarak belirlenmistir. Sekil GB ve 6D'de gösterildigi üzere, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin- 3-Amin (I3), Notch sinyalizasyonunun inhibisyonu nedeniyle normal olarak gözlenen bir fenotip olan hücre döngüsünün GO/Gl fazinda bir duraksamaya neden olmaktadir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli Notch sinyali inhibisyonu, C2C12 miyoblast farklilasmasini uyarmaktadir: Farkli sistemlerde 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) PIridin-3-Amin'in (I3) Notch inhibisyon potansiyelini daha fazla dogrulamak için C2C12 miyoblast farklilasmasi fonksiyonel bir test olarak kullanilmistir. C2C12 miyoblastlarindaki Notch yolagi aktivasyonu, Notch sinyalizasyonunun uyarilmasi, farklilasmalara neden olurken onlari ayirt edilemeyen bir durumda tutmaktadir. C2C12 miyoblastlari, DMSO, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ve DAPT ile tedavi edilmis ve 3 gün boyunca % 100 hücre doluluk oranina kadar yetistirilmistir. Üç gün sonra hücreler belirlenmis ve Miyozin Agir Zincir (MHC) proteinine karsi antikorlarla boyanmistir.
Hücre çekirdegi DAPI ile karsit boynamistir. DAPT ve 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilen hücreler, çok çekirdekli MHC pozitif miyotlara (veri gösterilmemistir) baslarken, % 10 serum (büyüme ortami) varliginda yetistirilen C2C12 miyoblastlar, bunlarin farklilasmamis hallerini korumaktadirlar. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3), Wnt ve Hedgehog sinyalleme kaskadlarini engellememektedir 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) kimyasal bilesiginin aktivitesi ile ilgili endiselerden biri Notch sinyalizasyon yolagina karsi spesifisitesidir. 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) diger gelisimsel yolagi da bloke edip edemeyecegini test etmek için Basvuru Sahipleri, Wnt ve Hedgehog sinyalizasyon yolagini bloke etme yetenegim test ettiler. Ozetle, Wnt sinyalizasyonunun ölçülmesi için, HeLa hücreleri, TCF/LEF baglanma bölgelerinden olusan bir düzenleyici içeren bir plazmid ile transfekte edildi ve böylece bir lusiferaz geninin ekspresyonunu baslatmistir (TOP- bir plazmid HeLa hücrelerine birlikte transfekte edilmistir.
Birlikte transfekte edilen hücreler, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) kimyasal bilesiginin varliginda veya yoklugunda inkübe edilmistir. ß-katenin geçici olarak uygulanmasi, ß-katenin-TCF/LEF odakli lüsiferaz aktivitesi ile ölçülen Wnt sinyalizasyonunun bir artarak düzenlenmesine yol açmaktadir. Onemli bir husus, aktif Wnt sinyalizasyonuna sahip hücrelerin 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Plridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmesi, Wnt yolaginin aktivasyonunu bloke etmemektedir (veri gösterilmemistir).
Benzer bir strateji kullanarak, Hedgehog sinyalizasyonu, Glil transkripsiyon faktörünün eklenmesiyle HeLa hücrelerinde aktive edilmis ve yolagin aktivasyonu, lüsiferaz ekspresyonunu sürükleyen Glil baglanma bölgeleri içeren bir düzenleyici sekansi kullanilarak izlenmistir. Bu hücrelerin 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (l3) ile tedavi edilmesi Hedgehog sinyalizasyon kaskadini bloke etmemisri (veri gösterilmemistir). Birlikte ele alindiginda, bu veriler, 6-(4- Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) kimyasal bilesiginin diger gelisimsel yollari bozmadigi ve Notch sinyalizasyon inhibisyonu için spesifik olabilecegini düsündürmektedir.
Bununla birlikte, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'e (I3) karsi Wnt ve Hedgehog sinyalizasyonunun direncinin hücre tipine özgü olup olmadigi veya genel bir olgu olup olmadigi belirlenmelidir.
C57BL6 farelerindeki 6-(4-tert-butilfenoksi) Piridin-3-Amin,in (l3) laboratuar ortamindaki etkileri: Notch sinyalizasyonu, gelisme sirasinda çesitli organlarin homeostazini düzenlemektedir. Ornegin Notchl aracilikh yolagin aktivasyonu timusta T hücresi gelisimi için gereklidir (Radtke ve digerleri, 1999). Bununla birlikte, Notchl odakli T hücresi gelisiminin MAMLl'e bagli oldugu görülmemektedir, çünkü MAMLl kaybi farelerde T hücresi gelisimini bozmamaktadir. Bunun nedeni, MAML1 ve MAMLl'in kaybi nedeniyle MAML2 ve MAML3 ailesi üyelerinin telafi edici bir mekanizma& olabilir. Dalakta, MZB hücresi gelisimi için Notch2 odakh sinyalizasyon sadece MAML1 vasitasiyla gereklidir. Notch2 ve MAMLl'in genetik ablasyon kaybi MZB hücrelerinin gelisiminde bir engel olusturmaktadir (Wu ve digerleri, 2007, Saito ve digerleri, 2003,). Buna ek olarak, Notchl ve Notch2 vasitasiyla Notch sinyalizasyonu, kripto bölmenin bakimi için gereklidir. Bagirsakta Notchl ve N0tch2'nin bilesik bir genetik ablasyonu goblet hücresi metaplazine yol açmaktadir.
Bu nedenle, basvuru sahipleri, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) yukarida bahsedilen Notch odakli gelisim süreçlerini etkileyip etkilemedigini arastirmislardir.
Laboratuar ortamindaki kültür testlerinde, kimyasal bilesik 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3), Notchl ve Notch2 aracilikli yolakli aktivasyonunu bloke edebilmistir. Bu nedenle, Basvurucular, farelerin 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmesinin bagirsakta bir goblet hücresi metaplazi olusturabilecegini varsaymaktadir. Bu hipotezi test etmek için, farelere, intra peritoneal (I p) olarak 7 ardisik gün boyunca 25 mg/kg 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) enjekte edilmistir. 8. günde, hayvanlar sakrifiye edilmis ve bagirsak dokulari sabitlenmis ve parafin içine gömülmüstür. Histolojik analizler goblet hücrelerin boyanmasi için Alcian mavisi yöntemi kullanilarak yapilmistir.
Sasirtici bir sekilde, laboratuar ortamindaki kültürlerde Notchl ve Notch2 aracilikli yolagin aktivasyonunu bloke etme kabiliyetine ragmen, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilen farelerin bagirsak dokusu bozulmamis mimaride tamamen normaldir ve goblet hücresi metaplazisi belirtisi göstermemistir (verir gösterilmemistir). Benzer sekilde, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) vücut agirligi degisikliklerine etkisi de izlenmistir. Farelere 5 ardisik gün boyunca 25 mg/kg 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin- 3-Amin (I3) enjekte edilmis ve vücut kütlesi degisiklikleri kaydedilmistir. Farelerin 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- Amin (I3) ile tedavisi, vücut agirliginda bir kayba neden olmamistir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, MZB hücresi gelisiminde bir blogu uyarmaktadir: Basvurucular, N0tch2 sinyalizasyonunun 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli inhibisyonunun dalakta MZB hücresi gelisiminde bir bloga yol açmasi gerektigini varsaymaktadir. MZB hücresi gelisimi, 8220, CD21 ve CD23'e yönelik antikorlarla splenositlerin akis sitometrisi boyamasi ile degerlendirilmistir. Sekil 7B`de gösterildigi üzere farelerin 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmesi, dalaktaki MZB hücre popülasyonunun yüzdesinde bir azalmaya yol açmaktadir. Buna ek olarak, dalaktaki MZB hücre popülasyonunun kaybi MZB hücrelerinin mutlak sayisini da yansitmaktadir (sekil 7C).
Bu nedenle, MZB hücresi gelisiminde 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) aracilikli blok, N0tch2 ve MAMLl fenotim kaybini taklit etmektedir. Bununla birlikte, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) Notch önleyici etkisini sadece MAMLl vasitasiyla uygulayip uygulamadigini veya diger MAML ailesi üyeleri araciligiyla Notch sinyallemesini engelleyip engelleyemeyecegini görmek gerekmektedir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisi, bir ksenotransplantasyon modelinde insan T hücre Iösemisinin tümör büyümesini yavaslatmaktadir: Yolagin farkli bilesenleri içindeki aktive edici mutasyonlara bagli Notch sinyalizasyonunun aktive edilmesinin, insan T hücresi akut lenfoblastik lösemilerin % 50'sinden fazlasina neden oldugu bilinmektedir. Bu nedenle, Basvuru Sahipleri canli içi Notch odakli insan T hücresi Iösemisinde kimyasal bilesik 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) anti- kanser aktivitesini arastirmaya karar vermislerdir. Bu amaca ulasmak için, insan Iösemisinin ksenon-transplant modelleri NOD/SCIDycv- fareleri kullanilarak olusturulmustur. Bu amaçla insan T-ALL hücre hatlari HPB ALL ve RPMI 8402 kullanilmistir.
HPB ALL hücre hatti, heterodimerizasyon alanindaki bir L1575P mutasyonunu Notchl reseptörünün PEST alanindaki bir eklemeyi barindirmaktadir ve böylece Notchl sinyalizasyonunu esas olarak aktive etmektedir. Benzer sekilde, RPMI 8402 hücreleri, heterodimerizasyon alanindaki 1584 a.a kalintisina bir ekleme ve ayrica E3 ligaz FBW7'de bir inaktivasyon mutasyonu (R465H) nedeniyle liganda bagimsiz Notch sinyalizasyon aktivasyonu sergilemektedir. Bu iki hücre hattinin Notch hedef genlerinin proliferasyonu ve/veya azalarak düzenlenmesi açisindan laboratuar ortamindaki kültür analizlerinde 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisine yanit oldugu bulunmustur. Bu hücre hatlarinin bir ksenotransplant ortaminda lösemi olusturup olusturmadigini belirlemek için, her hattan bir milyon hücre NOD/SCIDyc-F farelerine intravenöz (i.v) olarak enjekte edilmistir. Hayvanlar, % 100 penetrans ile lösemi gelistirmis ve transplantasyondan sonraki 4 hafta içinde ölmüstür.
RPMI 8402 ve HPB ALL hücrelerinin, bir ksenotransplantasyon tesitnde lösemi gelistirdigi gösterdiginde, Iusiferaz genini esas olarak eksprese eden bir Ientivirüs ile transforme edildi. Bu, Basvuru Sahiplerine, Caliper IVIS (Xenogen) cani görüntü algilama sistemini kullanarak farelerde lösemi ilerlemesini görsellestirmek ve izlemek için izin vermistiL Tespit edilen tümörlerde 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3- Amin'in (I3) anti-kanser etkililigini saptamak için bir bakim test gerçeklestirilmistir. Bir milyon HPB ALL hücresi, NOD/SCIDyc-F farelerine enjekte edilmistir (i.v). Fareler, gelisimi açisindan izlenmistir. Hastalik 15 gün civarinda olustuktan sonra fareler iki gruba ayrilmistir. Bir grup bir kontrol olarak yag ile tedavi edilmis ve ikinci grup 25 mg/kg 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile günlük olarak tedavi edilmistir. Sekil 8A'da gösterildigi üzere, yag ile tedavi edilen fareler, % 100 nüfuzlu lösemi gelistirirken, 6- (4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmis farelerde lösemi, yag ile tedavi edilen gruptaki ile ayni oranda ilerlememistir (Sekil 8A).
Benzer sekilde, bir ön testte, NOD/SCIDyc-F farelerine, 5 x 105 RPMI 8402 hücreleri nakledilmis ve hastaligin olusumunu takiben yag ya da 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmistir. Sekil 8B'de gösterildigi üzere, yagla tedavi edilen hayvanlarda lösemi gelisirken, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmis fareler hastaliga yakalanmadan iyilesmislerdir. Ayrica histolojik analizler, yagla tedavi edilen farelerde lösemik hücrelerin karacigere sizmak için ilerledigini ortaya çikarmistir, ancak 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilen farelerde karacigerde herhangi bir metastatik lezyon gelismemistir (veri gösterilmemistir). Bu hayvanlar, 27 gün boyunca kimyasal bilesik 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3- Amin (I3) ile tedavi edildiginden bagirsaktaki herhangi bir toksisiteyi tespit etmek için bagirsak dokusu analiz edilmistir. Bagirsak dokusunun Alcian mavisi yöntemi ile boyanmasi, goblet hücre sayilari ve bagirsak mimarisinde herhangi bir anormallik göstermemistir (veri gösterilmemektedir).
Basvuru Sahiplerinin insan lösemisi için ksenon- transplantasyon modelinden elde ettigi veriler birlikte ele alindiginda, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) önceden belirlenmis bir löseminin hastaligin ilerlemesim yavaslatma kabiliyetine sahip oldugunu düsündürmektedir. Tümör progresyonunu etkileme kabiliyeti nedeniyle, I3 bir anti- kanser ajani olarak daha ileri gelisim için uygun bir aday olabilmektedir.
MMTV-ErbBZ fare meme tümörleri Notch sinyalizasyon aktivasyonu ve 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (l3) meme tümörü progresyonuna etkisi sergilemektedir. lnsan gögüs kanserinde, Notch 1 ve Jagged 1 proteinlerinin yüksek seviyeleri gögüs kanseri hastalarinin düsük hayatta kalimlari ile bagdasmaktadir. Ek olarak, meme kanserinde Notch sinyalizasyonunun etkinlestirilmesi de kemik ve akciger metastazini kolaylastirmaktadir. Bu nedenle, meme kanserinde kimyasal bilesik 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) anti-kanser potansiyelini belirlemek Için, bir meme kanseri model arastirilmistir. ErbB2'nin asiri sentezlenmesim tetikleyen fare meme tümörü virüsü (MMTV), fare meme tümörlerine neden oldugu bilinmektedir. MMTV-ErbBZ transjenik fareleri, akciger metastaz gelisimiyle birlikte yaklasik 5-6 ay gecikmeli gögüs tümörleri gelistirmektedir. MMTV-ErbBZ fare meme tümörlerinin özelliklerinden biri agirlikli olarak sinyalizasyonunun fare meme kök hücrelerinden luminal hücre farklilasmasina yol açtigi bilinmektedir. Bu nedenle, Basvurucu Sahipleri, MMTV-ErbBZ meme tümörlerinde Notch yoalginin aktivasyonunun kismen lümen epitel hücre farklilasmasini destekleyerek tümör olusumuna katkida bulunabilecegini varsaymaktadirlar. Bu amaçla, Basvuru Sahipleri, MMTV-ErbBZ-IRES-Cre meme tümörlerinde Notch sinyalizaston aktivasyon seviyelerini, Hesl'in Western boyamasi ile ölçülerek incelemistir. Sekil 9A'da gösterildigi üzere, MMTV-ErbBZ odakli meme tümörleri, yasa uygun normal meme bezlerine kiyasla çok yüksek seviyelerde Hesl proteini eksprese etmektedir. MMTV-ErbBZ meme tümörleri, meme kanseri gelisimine 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin'in (I3) etkisini arastirmak için, MMTV-ErbBZ transgeni tasiyan FVB farelerden toplanmistir. Tek bir hücre süspansiyonu hazirlanmis ve alici bir FVB faresinin bos bir yag pedinin içine 5X105 tümör hücresi enjekte edilmistir. Bir kere el muayenesi ile hissedilebilen tümörler gelistikten sonra alici fareler, deney bitene kadar iki günde bir ya yag ya da 25 mg/kg 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavi edilmistir. Tümör hacmi ölçülmüs ve düzenli araliklarla kaydedilmistir. On sonuçlar, 6-(4-Tert-Butilfen0ksi) Piridin- 3-Amin (I3) ile tümör tasiyan alici farelerin tek basina yag ile tedavi edilen farelere kiyasla önemli ölçüde tümör büyümesinin geriledigine neden oldugunu göstermistir (SekH 98). Bu veriler, 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) belirlenmis meme kanseri büyümesini yavaslatma yetenegine sahip oldugunu göstermistir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) birincil insan T hücresi akut Ienfoblastik lösemilerde Notch sinyalizasyonunu bloke etmektedir: Konu ile ilgili patolojik bir kosulda 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) Notch inhibisyon etkisini daha ayrintili olarak arastirmak için, Notch sinyalizasyonunun aktivasyonu için birincil insan TALL örneklen sekillendirilmistir. Notch aktif formunun (NICD) birikimi yolagin aktivasyonunun biyolojik belirteçleri olarak kullanilmistir. Birincil insan TALL'in birtakim birikimi onkojenik NICD sergilemis ve bu tümörlerin 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) ile tedavisi bu proteinin azalarak düzenlenmesine yol açmistir. Dahasi, bu birincil insan TALL örneklerinde NICD'nin azalarak düzenlenmesi proliferatif bir duraksama ile iliskilidir (veri gösterilmemistir). Tersine, tespit edilebilir NICD seviyeleH göstermeyen birincil insan TALL örnekleri, 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) tedavisine yanit vermemistir (veri gösterilmemistir).
Bu veriler, NICD birikiminin Notch yolagi aktivasyonunun biyolojik belirteçleri olarak kullanilabilecegini ve Notch inhibitörü 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'i (I3) kullanarak tedavi sonucunu önceden haber verebilecegini göstermektedir. 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) farkli türevleri DL4-N1 birlikte kültür testinde Notch sinyalizasyon aktivasyonunu bloke etme yetenegi sergilemektedir: Notch inhibitörü aktivitesinin yani sira ebeveyn 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) bilesiginin etkinligim arttirmak için, I3'ün farkli kimyasal türevleri, DL4-N1 birlikte kültür testiyle test edilmistir. 6-(4-Tert- Butilfenoksi) Piridin-3-Amin'in (I3) 40'tan fazla farkh kimyasal türevinin taranmasi, birlikte kültür testinde Notch yolagi aktivasyonunu bloke etme kabiliyetleri için asagidaki bilesikleri vermistir (sekil 10). I3-A) 6-(4- sikloheksilfenoksi) piridin-3-amin, I3-B) 6-(4-(tert-Pentil) utilfenoksi) piridin-3-amin, I3-E) 4-(4-(tert-pentil) fenoksi) 1-il) fenoksi) piridin-3-amin, I3-H) 6-(3-(tert-butil) (tert-bütil) fenoksi) -3-fl, I3- trimetilpentan-Z-il) fenoksi) piridin-3-amin, I3-L) 4-(4- sikloheksilfenoksi) -3-fl0r0anilin, I3-M) 3-flor0-4-(4-(tert- pentil) fenoksi) anilin, I3-N) 6-(4-(2-metilpentan-2-il) fenoksi) piridin-3-amin, I3-O) 4-(4-((3r, 5r, 7r) -adamantan- 1-il) fenoksi) anilin, I3-P) 4-(4-((3r, 5r, 7r) -adamantan-l- il) fenoksi) -3-flor0anilin Sekil 10'da gösterildigi üzere, bu türevlerin bazilari (I3-A, ebeveyn bilesigi I3'e kiyaslanabilir seviyelere kadar bloke ederken, türevler I3-F ve I3-I, artmis aktiviteye sahip gim görünmektedir.
Türevin Kimyasal Sentezi ve Bunlarin Belirteçleri 4-(2-metilpentan-2-il) fenol tolüen (25 mL) ve DCM (5 mL) içerisinde süspanse edilmis ve 0 °C'ye kadar sogutulmustur. Tolüen 2M MegAl çözeltisi (7 mL 14.01 mmol, 2.30 esdeger miktarda) damla damla ilave edilmis ve böylece baslangiç materyali çözülmüstür. Oda sicakliginda saat boyunca karistirildiktan sonra reaksiyon karisimi tekrar 0 °C'ye sogutulmus ve damla damla TMSOSOüJg (1.1 mL 6.09 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Oda sicakliginda 3 gün karistirildiktan sonra reaksiyon, karisimin buzlu suya dökülmesiyle sogutulmustur. % 40 H3PO4 ile asitlestirildikten sonra ürün etil asetat (3x) ile özümlendi ve organik katmanlar, H3PO4-asidik doymus sulu NaCl çözeltisi ile yikanmistir. Çözücü düsük basinç altinda 30 °C'de giderilmistir. Elde edilen ham ürün flas kolon kromatografiü (SiO2; DCM/petroleter 111 ila 2:1) ile saflastirilarak basliktaki bilesik renksiz bir yag olarak elde edilmistir (188 mg, yaklasik % 90 (NMR ile) saflik ile, 0,95 mmol, % 15 verim Genel Prosedür A: Ayri ayri nitropiridinler veya nitrobenzenler ve özel fenoller DMF veya DMSO içerisinde çözündürülmüstür. Susuz K2C03 ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, aksi belirtilmedikçe, konversiyon islemi tamamlanincaya kadar oda sicakliginda karistirilmistir. Daha sonra reaksiyon, HzO ilave edilerek söndürülmüs ve ürün, EtOAc veya Et20 ile özümlenmistir. Organik katmanlar, 1M sulu NaOH çözeltisi (1x) ve daha sonra doymus sulu NaCI çözeltisi (1x) ile yikanmistir. Çözücü düsük basinç altinda 30 °C'de kuruyana kadar giderilmistir. Kalinti, DCM içerisinde çözündürülmüs ve inorganik tuzlari uzaklastirmak için pamuk vasitasiyla süzülmüstür. Ham ürün, uygun baslik bilesikleri verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle saflastirilmistir (l3-n, l3-nA ila l3-nP). 2-(4-(tert-bütil) fenoksi) -S-nitropiridin, l3-n Prosedür A izlenerek DMF ( içinde 2-kl0ro-5- tertbütilfenol (611 mg, 4.07 mmol, 1.29 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 14 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (820 mg, 3.01 mmol, % 95 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100 ila 1:50) saflastirilmistir. Rf = .
CwHuNzoy [M+H]+ , bulunan 6 9.06 (d, J = 2.8 Hz, lH 2-(4-sikloheksilfenil) -5-nitropiridin, l3-nA Prosedür A izlenerek DMF (6 mL) içinde 2-kI0r0-5-nitr0piridin sikloheksilfenol (417 mg, 2.37 mmol, 1.25 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 27 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (600 mg, 2.01 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100 ila 1:75) saflastirilmistir. R f = . bulunan: 6 9.06 (d, J = 2.9 Hz, 1H, aromatik H), 8.46 (dd, J = 9.1, 2.9 Hz, 1H, 26.19. -nitr0-2-(4-(tert-pentil) fenoksi) piridin, l3-nB Prosedür A izlenerek DMF (6 mL) içinde 2-kl0ro-5-nitr0piridin pentifenol (397 mg, 2.42 mmol, 1.27 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 7 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (530 mg, 1,85 mmol, % 97 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100) saflastirilmistir. Rr :.
CwHumzoý [M+H]+ , bulunan 6 9.07 - 9.05 (m, 1H, (d, J = 8.6 Hz, 2H, aromatik H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 2H, aromatik H), 6.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H, aromatik H), 1.67 1-(tert-bütil)-4-(4-nitrofenoksi) benzen, I3-nC Prosedür A izlenerek DMF ( içinde 4-fl0ronitrobenzen pentifenol (671 mg, 4.46 mmol, 1.26 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 52 saat boyunca karistirilmistir. EtOAc ile özümlemeden sonra, ham ürün açik sari bir kati madde (530 mg, 1.85 mmol, % 97 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100) saflastirilmistir. R f = .
CidhßN03+ [M+H]+ , bulunan: 6 8.24 - 8.16 (m, 2H, 2-(4-bütilfenoksi)-5-nitr0piridin, I3-nD Prosedür A izlenerek DMF ( içinde 2-kl0r0-5- bütilfenol (126 mg, 0.84 mmol, 1.29 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 6 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (190 mg, 0.70 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAc/petroleter 1:100) saflastirilmistir. Rf = .
CuHuNzoý [M+H]+ , bulunan 6 9.05 (dd, J = 2.9, 0.6 Hz, 1H, aromatik H), 8.46 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, 1H, aromatik HL 6 167.27, 1-nitr0-4-(4-(tert-pentil) fenoksi) benzen, l3-nE Prosedür A izlenerek DMF (6 mL) içinde 4-fl0r0nitrobenzen (318 mg, 2.25 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ve 4-ters-pentilfenol (460 mg, 2.28 mmol, 1.24 esdeger miktarda) çözündürülmüstür. edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (533 mg, 1.87 mmol, % 83 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAc/petroleter 1 100) saflastirilmistir. Ri = 0.70 (EtOAc/PE bulunan: 6 8.25 - 8.14 (m, (m, 4H, aromatik H), 1.66 (q, J = 7.4 Hz, 2H, Ar- l-sikloheksil-4-(4-nitrofenoksi) benzen, l3-nF VÂ/û/Oû`jqo210 Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 4-fl0r0nitr0benzen sikloheksilfenol(519 mg, 2.94 mmol, 1.28 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 48 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün açik sari bir kati madde (640 mg, 2.15 mmol, % 93 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100 ila 1:50) saflastirilmistir. Rf = .
CmHmNOý [M+HP , bulunam 6 8.31 - 8.11 (m, 2H, aromatik H), 7.26 (d, J = 2.3 Hz, 2H, aromatik H), 7.13 - 26.99, 26.23. 2-(4-((3r, 5r, 7r) -adamantan-l-il) fenoksi)-5-nitropiridin, Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 2-kl0r0-5-nitr0piridin (546 mg, 2.39 mmol, 1.26 esdeger miktarda) çözündürülmüstür. edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 42 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (664 mg, 1.89 mmol, kantitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz: EtOAc/petroleter 1 100 ila 1:50) saflastirilmistir. Rr = . (thBNZOf [M+H]+ , bulunan: 6 9.06 (d, J = 2.8 Hz, 1H, adamantil H), 1.94 (d, J = 3.0 Hz, 5H, adamantil H), 1.87 - 6 167.19, 2-(3-(tert-bütil) fenoksi) -5-nitropiridin, l3-nH Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 2-kl0r0-5-nitr0piridin (358 mg, 2.38 mmol, 1.26 esdeger miktarda) çözündürülmüstün edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 70 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (512 mg, 1.88 mmol, % 99 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1:100) saflastirilmistir. Ri = .
CuHNNzOý [M+H]+ , bulunan 6 9.08 - 9.04 (m, 2H, Hz, 1H, aromatik H), 7.17 (t, J = 2.1 Hz, 1H, aromatik H), 1-(4-(tert-butil) fenoksi)-2-floro-4-nitr0benzen, I3-nl Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 3,4- difluoronitrobenzen (401 mg, 2.52 mmol, 1.00 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 19 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir yag (722 mg, 2.52 mmol, % 99 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAc/petroleter 1:50) saflastirilmistir. Rf = .
CmHuFNOý [M+HP , bulunam 6 8.07 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 2H, aromatik H), 6.96 (dd, J = 9.1, 8.0 Hz, 1H, aromatik HL 6 153.35, 1-(4-sikloheksilfenoksi)-2-floro-4-nitrobenzen, I3-nJ Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 3,4- difluoronitrobenzen (509 mg, 3.20 mmol, 1.00 esdeger miktarda) miktarda) çözündürülmüstür. Susuz K2C03 (664 mg, 4.81 mmol, 1.50 esdeger miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 23 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (1002 mg, 3.18 mmol, % 99 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1:50) saflastirilmistir. Rf = .
C1ýü9FNOf [M+H]+ , bulunan 6 8.09 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 2H, aromatik H), 6.96 (dd, J = 9.1, 8.0 Hz, 1H, aromatik HL sikloheksil H), 1.52 - 1.20 (m, SH, sikloheksil H). 13C NMR 2-flor0-4-nitro-l-(4-(tert-pentiI) fenoksi) benzen, l3-nK Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 3,4- difluoronitrobenzen (502 mg, 3.16 mmol, 1.00 esdeger miktarda) miktarda) çözündürülmüstür. Susuz K2C03 (656 mg, 4.75 mmol, 1.50 esdeger miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 22 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün açik sari bir yag (943 mg, 3.11 mmol, % 99 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAc/petroleter 1:50) saflastirilmistir. Rr = .
Ciüü, bulunan: 8 8.08 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 2H, aromatik H), 6.95 (dd, J = 9.1, 8.0 Hz, 1H, aromatik HL 2-(4-(2-metilpentan-2-il) fenoksi)-5-nitropiridin, I3-nL Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 4-(2-metilpentan-2-il) nitropiridin (57 mg, 0.36 mmol, 1.23 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 27 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (86 mg, 0.29 mmol, % 98 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1:50) saflastirilmistir. R f = . canNZOy [M+H]+ , bulunan 6 9.07 (d, J = 2.7 Hz, 1H, (3r, Sr, 7r)-1-(4-(4-nitrofenoksi) fenil) adamantan, I3-nM Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 4-flor0nitrobenzen (600 mg, 2.63 mmol, 1.22 esdeger miktarda) çözündürülmüstün edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 20 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün açik sari bir kati madde (736 mg, 2.11 mmol, % 98 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; EtOAc/petroleter 1 100 ila 1:50) saflastirilmistir. R f = .
Czýh, bulunan: 6 8.27 8.10 (m, 2H, (3r, Sr, 7r)-1-(4-(2-fl0r0-4-nitrofenoksi) fenil) adamantan, Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 3,4-diflor0nitr0benzen (533 mg, 2.34 mmol, 1.23 esdeger miktarda) çözündürülmüstün edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 4 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati (703 mg, 1.91 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAc/petroleter 1 100) saflastirilmistir. Rr = 0.69 (EtOAc/PE bulunan: 6 8.08 (dd, J = 36.17, 29.02. 2-(4-izopr0pilfenoksi)-5-nitropiridin, l3-n0 Prosedür A izlenerek DMSO (6 mL) içinde 2-kl0r0-5-nitr0piridin propilfenol (331 mg, 2.43 mmol, 1.27 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, oda sicakliginda 24 saat boyunca karistirilmistir. EtzO ile özümlemeden sonra, ham ürün açik sari bir kati madde (490 mg, 1.90 mmol, % 99 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; Et0Ac/petr0leter 1:100) saflastirilmistir. Rf = .
CMHßNzoý [M+H]+ , bulunan 8 9.04 (d, J = 3.4 HZ, 1H, -nitro-2-(4-(2,4,4-trimetilpentan-2-iI) fenoksi) piridin, I3- Prosedür A izlenerek DMSO (5 mL) içinde 2-Kl0ro-5-nitr0piridin oktilfenol (495 mgI 2.40 mmol, 1.25 esdeger miktarda) miktarda) ilave edilmis ve reaksiyon karisimi, 40 °C'de 28 saat boyunca karistirilmistir. Et20 ile özümlemeden sonra, ham ürün renksiz bir kati madde (598 mg, 1.82 mmol, % 95 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz EtOAC/petroleter 1:50) saflastirilmistir. Rr = .
CwHßNzoy [M+H]+ , bulunan 6 9.07 (d, J = 2.8 Hz, 1H, 9H, ArC(CH 5 167.24, Genel Prosedür B: Ayri ayri nitro türevleri (I3-n, I3-nA ila I3-nP) önce MeOH veya tolüende çözülmüs veya MeOH içinde aktiflestirilmis karbon tozu üzerinde katalitik miktarda Pd'nin (% 10) bir süspansiyonuna dogrudan eklenmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi, dönüsüm tamamlanincaya kadar oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi daha sonra Celite ile filtrelenmistir. Çözücü düsük basinç altinda 30 °C`de kuruyana kadar giderilmis ve ham ürün, uygun baslik bilesikleri verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle saflastirilmistir (I3, I3-A ila I3-P). 6-(4-(tert-bütil) fenoksi) piridin-3-amin, I3 Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (82 mg, 0.08 mmol Pd, 0.07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna I3-n (300 mg, 1.10 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise Hz (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, açik bej renginde kati madde (250 mg, 1.03 mmol, % 94 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/MeOH % 1) saflastirilmistir. Rf = .
C1Hh, bulunan: 8 7.69 (d, J = 3.0 Hz, 1H, 31.52. 6-(4-sikloheksilfenoksi) piridin-3-amin, I3-A Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (47 mg, 0.04 mmol Pd, 0.07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna I3-nA (201 mg, 0.67 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 5 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, bej renkte bir kati madde (190 mg, 0.71 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SIOz, DCM/MeOH % 1) saflastirilmistir. Rr = .
C, bulunan: 6 7.70 (d, J = 2.9 Hz, 1H, sikloheksil H), 1.49 - 1.15 (m, 5H, sikloheksil H). 13C NMR 6-(4-(tert-pentil) fenoksi) piridin-3-amin, I3-B Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (52 mg, 0.05 mmol Pd, 0.07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna I3-nB (200 mg, 0.70 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 3 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, bej renkte bir kati madde (107 mg, 0.42 mmol, % 60 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz, DCM/MeOH % CidJmN20+ [M+H]+ , bulunan: 6 7.73 (d, J = 2.9 Hz, 1H, 4-(4-(tert-bütil) fenoksi) anilin, I3-C Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (59 mg, 0.06 mmol Pd, 0.07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna I3-nC (300 mg, 1.11 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 3.5 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, koyu sari renkte bir yag (244 mg, 1.01 mmol, % 91 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; etil 6-(4-bütilfenoksi) piridin-3-amin, l3-D Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (53 mg, 0.05 mmol Pd, 0,08 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna l3-nD (170 mg, 0.62 mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 1.5 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, kahverengi renkte bir yag (133 mg, 0.55 mmol, % 88 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/MeOH % 1) saflastirilmistir. Rf = .
Cidh, bulunan: 6 7.69 (d, J = 3.1 HZ, 1H, 4-(4-(tert-pentil) fenoksi) anilin, I3-E miktarda), MeOH (10 inL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (5 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (53 mg, 0.05 mmol Pd, 0.08 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 3 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, bej renginde bir yag (293 mg, 1.15 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz DCM/MeOH % 4) saflastirilmistir. Rr = . CiübzNÄy [M+H]+ 256.1696 için hesaplanan 4-(4-sikloheksilfenoksi) anilin, I3-F miktarda) tolüen (5 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (10 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (38 mg, 0.04 mmol Pd, 0.03 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, bej renginde kati madde (315 mg, 1.18 mmol, kantitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon 6 156.87, 6-(4-((3r, 5r, 7r) -adamantan-l-il) fenoksi) piridin-3-amin, miktarda) tolüen (10 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (10 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (56 mg, 0.05 mmol Pd, 0.07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (3x) ile temizlendi ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 3 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün renksiz kati madde (176 mg, 0.55 mmol, % 69 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/MeOH % 0 ila % 1) saflastirilmistir. R f = . CqudhO 6 7.71 (d, J = 3.0 Hz, 1H, .87, 29.02. 6-(3-(tert-bütil) fenoksi) piridin-3-amin, I3-H miktarda), MeOH (10 inL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (5 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (44 mg, 0.04 mmol Pd, 0.03 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (5x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, açik kahverengi bir yag madde (303 mg, 1.25 mmol, % 94 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOz DCM/MeOH % 0 ila % 1) saflastirilmistir. Ri = .
Cidh, bulunan: 6 7.92 (d, J = 3.0 Hz, 1H, aromatik H), 7.24 (d, J = 3.0 Hz, 1H, aromatik H), 7.01 4-(4-(tert-bütil) fenoksi)-3-floroanilin, l3-I miktarda), MeOH (13 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (2 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (56 mg, 0.05 mmol Pd, 0.03 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (5x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 1,5 saat boyunca karistirilmistir.
Ham ürün, renksiz kati madde (455 mg, 1.75 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM) saflastirilmistir. Rf = . CuýhgFNO+ [M+H]+260.1445 için hesaplanan HRMS (m, 2H, aromatik H), , 4-(4-sikloheksilfenoksi) -3-floroanilin, I3-J miktarda), MeOH (14 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (3 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (46 mg, 0.04 mmol Pd, 0.03 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, soluk gül renkli kati madde (489 mg, 1.71 mmol, % 98 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/petroleter 1:1 ila 2:1) saflastirilmistir. Rf = .
CigHziFNO+[M+H]+ , bulunan: 6 7.19 ? 7.10 (m, 2H, (m, 2H, aromatik H), 6.51 (dd, J = 12.1, 2.7 Hz, lH aromatik H), 6.41 (ddd, J: 8.6, 2.7, 1.2 Hz, lH, aromatik H), 3-floro-4-(4-(tert-pentil) fenoksi) anilin, l3-K miktarda), MeOH (13 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (2 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (28 mg, 0.03 mmol Pd, 0.03 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisinu oda sicakliginda 1.5 saat boyunca karistirilmistir.
Ham ürün, turuncu renkli bir yag (463 mg, 1.69 mmol, kanitatif verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; etil asetat/petroleter 1:10 ila 1 7.5) saflastirilmistir. Rr = .
C, bulunan 6 7.26 - 7.17 (m, 2H, 9.26. 6-(4-(2-metilpentan-2-il) fenoksi) piridin-3-amin, I3-L Prosedür B izlenerek, I3-nL (50 mg, 0.17 mmol, 1.00 esdeger miktarda), MeOH (12 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (3 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (31 mg, 0.03 mmol Pd, 0.17 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 1.5 saat boyunca karistirilmistir.
Ham ürün, açik turuncu renkli bir yag (39 mg, 0.14 mmol, % 87 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (SiOg DCM/MeOH % 1) saflastirilmistir. Rf = . CnHzýbO+ [M+H]+271.1805 için hesaplanan HRMS (ESI), bulunan: 6 7.73 - 6.94 (m, 2H, aromatik H), 6.74 (d, J = 8.6 Hz, lH 4-(4 -((3r, Sr, 7r) -adamantan-l-il) fenoksi) anilin, l3-M miktarda), tolüen (15 mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (10 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (126 mg, 0.12 mmol Pd, 0,07 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 19 saat boyunca karistirilmistir.
Ham ürün, bej renkli kati madde (538 mg, 1.68 mmol, % 96 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon - 6 156.59, 4-(4-((3r, 5r, 7r) -adamantan-l-il) fenoksi) -3-floroanilin, miktarda), tolüen (10mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (10 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (143 mg, 0.13 mmol Pd, 0.09 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 7 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, renksiz kati madde (510 mg, 1.51 mmol, % 97 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM) saflastirilmistir. Rf = . CzýbsFNO+ [M+H]+338.1915 için hesaplanan HRMS (m, 2H, aromatik H), 6.92 (t, J = 8.8 Hz, 1H, aromatik H), adamantil H), 1.89 (d, J = 2.9 Hz, 5H, adamantil H), 1.83 - 6 156.60, 6-(4-izopropilfenoksi) piridin-3-amin, l3-0 Prosedür B izlenerek, MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (76 mg, 0.07 mmol Pd, 0.09 esdeger miktarda) mmol, 1.00 esdeger miktarda) ilave edilmistir. Sise H2 (6x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 1 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, bej renkli kati madde (150 mg, 0.66 mmol, % 84 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/MeOH % 1) saflastirilmistir. Rf = .
ClanN20+ [M+H]+ . bulunan: 6 7.70 (cl, J = 2.9 Hz, 1H, 6-(4-(2,4,4-trimetilpentan-2-il) fenoksi) piridin-3-amin, I3-P miktarda), tolüen (4mL) içerisinde çözündürülmüs ve MeOH (15 mL) içinde aktiflestirilmis karbon tozu (78 mg, 0.07 mmol Pd, 0.09 esdeger miktarda) üzerinde bir Pd (% 10) süspansiyonuna ilave edilmistir. Sise Hz (5x) ile temizlenmis ve reaksiyon karisimi oda sicakliginda 2 saat boyunca karistirilmistir. Ham ürün, renksiz kati madde (235 mg, 0.79 mmol, % 91 verim) halinde baslik bilesigi verecek sekilde flas kolon kromatografisiyle (Si02; DCM/MeOH, % 2) saflastirilmistir. hesaplanan HRMS (ESI), 93 (m, 2H, aromatik H), 6.99 - 6. 8.6, 0.7 Hz, 1H, aromatik H), Ar-C(CH3)Ä}12C(CH3)3L (S, 9H, Ar-C(CH3)Ã}üC(CH 3)3L 1.36 (5, 138.70, aromatik H), 6.71 (dd, 13C NMR (101 MHZ, CDCI3 .v 5› n. 1.. . .
DL:: N1 birlikle kultur DL4.N1 birlikte kültür DL4.N1 birîikle kultur 2 .I 5 .r i C 4. `J J Ü N...
Aiamar mavisi okunmasi Alamar mavisi okunmasi mRNA ekspresyonunda kat degisimi Tiiîizisiri 4. Gün 2. Gün 4. Gün 6. Gün RPME &JC-3 2;) ::vw ;744) 549:(:J3 &xx 3'- 55 55.1:: 53 KC& Tamiiêin 4 _ayaga 55.". ` 2. Gün 4. Gün 6. Gun nRas melanoma hücreleri Alamar mavisi okunmasi Alamar mavisi okunmasi Alamar mavisi okunmasi Annexin V pozilif hücrelerin yüzdesi g' Annexin V pozitif hücrelerin yüzdesi 3. Gün 4,.. [BAD: E insan lösemik hücre hatlarinda apoptozu indüklemesi. :. l3 tedavi ßi_ HCC1187 hücre hatti barinaginin SECZZ - Notch2 lranslokasyonur wmaimmemgw Sis' »xx-sah :Ms i::~ "fi ram( »â ?xîcêçh 2 55022 - Notch2 translokasyonu ":;ê'imü ;gam Ve..“ 1 --iw mac 0.Gün 2.(3uri` 4.Gün 6.Gün sinin` insan Iösemik hücre hatlarinda GO / G1 hücre döngüsünün duraksamasrna neden olmasi. ücre döngüsünün GO / Gl fazindaki hücrelere orani v. 9 ,3 r' : 2 F:: 0 "55] %1 ir; l3 tedavi sinin HC01187 hücrelerinde GO l (31 hücre döngüsü duraksamasini indüklemesi Hücre döngüsünün GO / G1 fazindaki hücrelere orani A` 0. Gün i 1 ç i : :8.GündekiAnalizler Ji 8: + ir ir ir ir 7 gün boyunca ardisik 7 enjeksiyon B) Dalaktaki MZB hücrelerinin yüzdesi C), Dalaktaki MZB hücrelerinin kesinsayilari Yag tedavisi Kesin hücre sayisi (milyon) N HPB ALL lösemik hücreleri ile transplantasyon yapilan ve g) RPMI 8402 lösemik hücreleri ile transplantasyon yapilan \. › yag veya I3 iletedavi edilen NOD/SCIDVC'” fareleri yag veya [3 ile tedavi edilen NOD/SCIDyc* fareleri Yag tedavisi yapilan grup 13 tedavisi yapilan grup . Gün Yag tedavisi Tedavi 15 günde baslamistir 27. Gün A; MMTV-ErbBZ fare meme tümörlerinde 5) MMTV-ErbBZ'ye bagli meme tümörlerinin Notch sinyalizasyonaktivasyonu l3 tedavisi tümörlerin ilerlemesini bloke etmektedir riêß' MMW-Erê? s .. %99- 34k& .- ~ , d ?li...1 g 1/ E "At-Yag tedavisi f -. , 'I .@.IStedavisi 50 ma +3 :-. $ Bagil lusiferaz aktivitesi 1.Gün 7. Gün 14› Gün 21.Gün DMSO = Dimetil süifoksit DAPT = N-[N-(3,5 -difluorofenasetiI-L-aIanil)] - (S).fenilglisin t-butil ester l3-A= 6-(4-sikloheksilfenoksi) piridin-S-amin l3-H= 6-(3-(tert-butil) fenoksi) pirIdIn-S-amin 'r l3'ün kimyasal türevleri

Claims (13)

ISTEMLER
1. Notch'a bagli kanserin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilmak üzere bir bilesik olup, özelligi Notch sinyalizasyon yolagi inhibisyon özelliklerine sahip bahsedilen bilesigin asagidakilerden olusan gruptan seçilmesidir: Formül l'e ait 6-(4-Tert-Butilfenoksi) Piridin-3-Amin (I3) Formüll Formül IIla' ya ait 4- (4- sikloheksilfenoksi) anilin, Formül III Formül IVa'ya ait 6-(4-((3r, 5r, 7r)-adamantan-1-il) fenoksi) piridin-3-amin, Formül IV a Formül Ile' ye ait 6- (3- (tert- butil) fenoksi) piridin-B-amin Formül H Formül IIf'ye ait 4-(4-(tert-butil) fenoksi)-B-floroanilin Formül H Formül Ilg' ye ait 6- (4- (tert- -Pentil) )fenoksi) piridin-3-amin, Formül H Formül Ilh'ye ait 6-(4-Butilfen0ksi) piridin-B-amin, Formül II h Formül Ili'ye ait 3-Fl0r0-4-(4-(tert-pentiI) fenoksi) anilin, Formül II i Formül IIIb'ye ait 4-(4-Sikloheksilfenoksi)-3-floroanilin Formül III b Formül IVb'ye ait 4-(4-((3r, 5r, 7r) -Adamantan-l-il) fenoksi) Formül IVb Formül Illc'ye ait 6-(4-sikloheksilfenoksi) piridin-3-amin, Formül III c veya bunlarin tuzlarindan, solvatlarindan, totomerlerinden veya stereoizomerlerinden birinden.
2. Isteni l'in kullanimi için bilesik olup, özelligi Notch'a bagli kanserin, T hücre-Akut lenfoblastik lösemi (T-ALL), kronik miyeloid lösemi (KML), kronik Ienfositik lösemi (CLLL mantle hücreli Ienfoma (MCL), meme kanseri, pankreas kanseri, prostat kanseri, melanoma, beyin tümörleri, tümör anjiyogenezi, ve kolorektal kanseri içeren gruptan seçilmesidir.
3. Istem 1 ila 2'den herhangi birinin kullanimi için bilesik olup, özelligi. Notch'a bagli kanserin, y-sekretaz inhibitörü
4. Istem 1'e ait farmasötik bir bilesik olup, özelligi; farmasötik açidan kabul gören tuzlari, solvatlari, totomerleri veya bunlarin stereoizomerleri ile farmasötik olarak kabul gören bir tasiyici içermesidir.
5. Istem 1 ila 3'den herhangi birine göre bir kit Olup, özelligi Notch'a bagli kanserin, istege bagli olarak, reaktifler ve/veya kullanim talimatlari ile tedavisinde ve/Veya önlenmesinde kullanilmak üzere istem 1 ila 3'ün herhangi birinin bir veya daha fazla dozunu içermesidir.
6. Istem 5'e ait kit olup, özelligi bu kitin ayrica, bir ya da daha çok kemoterapötik madde dozunu içermesidir.
7. Istem 1 ila 3'ten herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi laboratuar ortamindaki hücrelerdeki Notch sinyalizasyon yolagini inhibe etmek için kullanilmasidir.
8. Istem 7'nin kullanimi için bir bilesik olup, özelligi hücrelerin, kanser hücreleri olmasidir.
9. Istem l'e göre, Notch'a bagli kanserin tedavisinde ve/Veya önlenmesinde kullanilmak üzere bir bilesik olup, özelligi kanser hücrelerindeki Notch sinyalizasyon yOIagi inhibisyon özelliklerinin laboratuar ortaminda bir y-sekret az bilesigi aktivite testi ile bel i rl enmesi di r.
10. Istem l'e göre, Notch'a bagli kanserin tedavisinde ve/Veya önlenmesinde kullanilmak üzere bir bilesik olup, özelligi Notch'a bagli kanserin bahsedilen tedavisinin ve/veya önlenmesinin ayrica en az bir geleneksel kanser tedavisi içermesi di r.
11. Istem lO'un kullanimi için bilesik olup, özelligi geleneksel kanser tedavisinin, istem 1 'deki bir bilesigin terapötik olarak etkili miktarinin veya istem 4'ün farmasötik bilesiminin verilmesinden önce, ayni anda veya sonra uygulanmasidir.
12. Istem lO veya ll'in kullanimi için bilesik olup, özelligi geleneksel kanser tedavi si ni n radyoterapi ve/veya kemoterapiden olusmasidir.
13.Istem l'e göre notch ile iliskili kanserin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilmak için bir bilesik olup, özelligi; bahsedilen notch ile iliskili kanserin, artarak düzenlenmis bir notch sinyalizasyon yolagi aktivitesi ile baglantili olmasidir.
TR2018/02117T 2011-12-21 2012-12-21 Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörleri ve bunların kanser tedavisinde kullanımı. TR201802117T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11010130.0A EP2606884A1 (en) 2011-12-21 2011-12-21 Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201802117T4 true TR201802117T4 (tr) 2018-03-21

Family

ID=47722321

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/02117T TR201802117T4 (tr) 2011-12-21 2012-12-21 Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörleri ve bunların kanser tedavisinde kullanımı.

Country Status (26)

Country Link
US (5) US9296682B2 (tr)
EP (3) EP2606884A1 (tr)
JP (4) JP6373760B2 (tr)
CN (3) CN107434779B (tr)
AU (1) AU2012356033B2 (tr)
BR (1) BR112014015105B1 (tr)
CA (1) CA2859740C (tr)
CY (1) CY1119964T1 (tr)
DK (1) DK2793884T3 (tr)
ES (1) ES2660782T3 (tr)
HK (1) HK1203396A1 (tr)
HR (1) HRP20180348T1 (tr)
HU (1) HUE036583T2 (tr)
IL (1) IL233285A0 (tr)
LT (1) LT2793884T (tr)
MX (1) MX355632B (tr)
NO (1) NO2793884T3 (tr)
PL (1) PL2793884T3 (tr)
PT (1) PT2793884T (tr)
RS (1) RS56907B1 (tr)
RU (1) RU2631611C2 (tr)
SG (2) SG11201403418VA (tr)
SI (1) SI2793884T1 (tr)
TR (1) TR201802117T4 (tr)
WO (1) WO2013093885A1 (tr)
ZA (1) ZA201404965B (tr)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2606884A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers
CN114058582A (zh) 2015-01-26 2022-02-18 菲特治疗公司 用于诱导造血细胞分化的方法和组合物
WO2016154255A1 (en) * 2015-03-23 2016-09-29 University Of Miami Inhibitors of the notch transcriptional activation complex and methods for use of the same
WO2017079673A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Fate Therapeutics, Inc. Genomic engineering of pluripotent cells
CN115927199A (zh) 2015-11-04 2023-04-07 菲特治疗公司 用于诱导造血细胞分化的方法和组合物
WO2017100498A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Johns Hopkins University Isolation of fusion-competent myoblasts and therapeutic applications thereof related to muscular dystrophy
CN105541703A (zh) * 2016-01-27 2016-05-04 吉林大学 一种含吡啶结构的三胺单体及其制备方法
WO2017158190A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Ecole polytechnique fédérale de Lausanne (EPFL) Enhancers of notch signaling and their use in the treatment of cancers and malignancies medicable by upregulation of notch
WO2017179883A1 (ko) 2016-04-12 2017-10-19 주식회사 엘지화학 화합물 및 이를 포함하는 유기 전자 소자
IT201600132360A1 (it) 2016-12-29 2018-06-29 Univ Degli Studi Roma La Sapienza Inibitori di notch per uso nel trattamento della leucemia linfoblastica acuta a cellule t
JP7282036B2 (ja) * 2017-02-24 2023-05-26 ゼニオプロ ゲーエムベーハー 新規の芳香族化合物
WO2018154118A2 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Reinmueller Viktoria Novel aromatic compounds
EP3462349A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-03 Koninklijke Philips N.V. Assessment of notch cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression
TW202010737A (zh) * 2018-06-21 2020-03-16 瑞士商西萊絲蒂亞生物科技股份有限公司 胺基二芳基醚的製備方法
MX2021003773A (es) 2018-10-02 2021-07-16 Frequency Therapeutics Inc Composiciones farmacéuticas y métodos relacionados con los agentes terapéuticos óticos.
SG11202111191YA (en) 2019-04-08 2021-11-29 Frequency Therapeutics Inc Combination of chir99021 and valproic acid for treating hearing loss
BR112021020226A2 (pt) * 2019-04-10 2021-12-07 Cellestia Biotech Ag Inibidores de via de sinalização notch e uso dos mesmos no tratamento de cânceres
AU2020272113A1 (en) 2019-04-10 2021-10-28 Cellestia Biotech Ag Compounds for the treatment of oncovirus induced cancer and methods of use thereof
CN111153817B (zh) * 2020-01-20 2021-02-02 四川大学 苯氧基-n-苯基苯胺衍生物及其应用
WO2021197333A1 (zh) * 2020-03-31 2021-10-07 浙江养生堂天然药物研究所有限公司 药物组合及其用途
US20230338347A1 (en) 2020-09-16 2023-10-26 Cellestia Biotech Ag New Use of Inhibitors of the Notch Signalling Pathway
EP4255409A1 (en) 2020-12-07 2023-10-11 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer
EP4008324A1 (en) 2020-12-07 2022-06-08 Cellestia Biotech AG Combinations comprising an inhibitor of an anti-apoptotic protein, such as bcl-2, bcl-xl, bclw or mcl-1, and a notch signaling pathway inhibitor for treating cancer
TW202313020A (zh) 2021-06-02 2023-04-01 瑞士商西萊絲蒂亞生物科技股份有限公司 自體免疫及發炎性疾病的治療方法
WO2023079132A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Cellestia Biotech Ag Pharmaceutical combinations for treating cancer
EP4223292A1 (en) 2022-02-07 2023-08-09 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer
WO2024012414A1 (en) * 2022-07-11 2024-01-18 Westlake University Use of a fbxo42 specific inhibitor in treating notch signaling-dependent disease

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8430252D0 (en) 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4816373A (en) * 1986-01-31 1989-03-28 Mitsubishi Paper Mills, Ltd. Method of producing images
US4959377A (en) * 1989-06-29 1990-09-25 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Inc. Phenoxypyridinamine compounds which are use as a dermatological composition
AU4633893A (en) * 1992-06-17 1994-01-04 University Of Massachusetts Medical Center Liposomal formulations for administering to cancer patients
US5935924A (en) 1994-04-15 1999-08-10 Genentech, Inc. Treatment of congestive heart failure
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6692919B1 (en) * 1997-07-23 2004-02-17 Yale University Activated forms of notch and methods based thereon
WO2000042012A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Bayer Corporation φ-CARBOXYARYL SUBSTITUTED DIPHENYL UREAS AS RAF KINASE INHIBITORS
ME00275B (me) * 1999-01-13 2011-02-10 Bayer Corp ω-KARBOKSIARIL SUPSTITUISANI DIFENIL KARBAMIDI KAO INHIBITORI RAF KINAZE
WO2000064484A2 (en) 1999-04-23 2000-11-02 Alza Corporation Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome
JP2001089412A (ja) * 1999-09-22 2001-04-03 Otsuka Pharmaceut Co Ltd ベンゼン誘導体またはその医薬的に許容される塩
ES2331177T3 (es) * 2001-12-14 2009-12-23 Exelixis, Inc. Inhibidores de adam-10 humana.
WO2003095448A1 (en) * 2002-05-06 2003-11-20 Bayer Pharmaceuticals Corporation Pyridinyl amino pyrimidine derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders
EP1525221A1 (en) * 2002-08-03 2005-04-27 Lorantis Limited Conjugate of notch signalling pathway modulators and their use in medical treatment
US7314959B2 (en) * 2003-08-07 2008-01-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Amino thiol compounds and compositions for use in conjunction with cancer therapy
US20050214250A1 (en) 2003-11-06 2005-09-29 Harris J M Method of preparing carboxylic acid functionalized polymers
EP1824503A1 (en) * 2004-11-10 2007-08-29 Hubrecht Laboratorium Treatment of an intestinal adenoma and/or adenocarcinoma by inhibition of notch pathway activation
GB0518232D0 (en) * 2005-09-07 2005-10-19 Merck Sharp & Dohme New methods
PE20090321A1 (es) * 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
CN102137669A (zh) 2008-06-03 2011-07-27 弗雷森纽斯医疗护理德国有限责任公司 包含γ分泌酶调节剂的药物组合物
WO2010033655A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Complegen, Inc. Compounds and methods for pkc theta inhibition
US20100292193A1 (en) * 2009-04-10 2010-11-18 The Regents Of The University Of California Radioprotective drugs
EP2606884A1 (en) 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers

Also Published As

Publication number Publication date
CN107434779B (zh) 2021-07-13
SG10201605984RA (en) 2016-09-29
JP6373760B2 (ja) 2018-08-15
US20160266095A1 (en) 2016-09-15
US20140329867A1 (en) 2014-11-06
BR112014015105B1 (pt) 2021-11-16
IL233285A0 (en) 2014-08-31
CN107434779A (zh) 2017-12-05
DK2793884T3 (en) 2018-03-05
US20180224429A1 (en) 2018-08-09
EP3332783A1 (en) 2018-06-13
ZA201404965B (en) 2017-04-26
US10054581B1 (en) 2018-08-21
PL2793884T3 (pl) 2018-05-30
US20210382038A1 (en) 2021-12-09
LT2793884T (lt) 2018-02-26
RU2631611C2 (ru) 2017-09-25
NO2793884T3 (tr) 2018-04-28
CY1119964T1 (el) 2018-12-12
HRP20180348T1 (hr) 2018-04-06
RU2014127753A (ru) 2016-02-10
JP2020125314A (ja) 2020-08-20
JP2021120399A (ja) 2021-08-19
PT2793884T (pt) 2018-02-26
JP2015506345A (ja) 2015-03-02
HK1203396A1 (en) 2015-10-30
MX355632B (es) 2018-04-25
MX2014007544A (es) 2014-11-10
JP2018172433A (ja) 2018-11-08
EP2606884A1 (en) 2013-06-26
US9296682B2 (en) 2016-03-29
HUE036583T2 (hu) 2018-07-30
CN104136027A (zh) 2014-11-05
RS56907B1 (sr) 2018-05-31
US20190219566A1 (en) 2019-07-18
BR112014015105A8 (pt) 2017-06-27
JP6887701B2 (ja) 2021-06-16
US11085918B2 (en) 2021-08-10
AU2012356033A1 (en) 2014-08-07
WO2013093885A1 (en) 2013-06-27
CA2859740A1 (en) 2013-06-27
NZ627559A (en) 2016-06-24
ES2660782T3 (es) 2018-03-26
CA2859740C (en) 2023-07-25
AU2012356033B2 (en) 2017-08-03
BR112014015105A2 (pt) 2017-06-13
CN104136027B (zh) 2017-05-24
EP2793884B1 (en) 2017-11-29
US10274481B2 (en) 2019-04-30
SG11201403418VA (en) 2014-07-30
SI2793884T1 (en) 2018-03-30
EP2793884A1 (en) 2014-10-29
CN113616648A (zh) 2021-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201802117T4 (tr) Notch sinyalizasyon yolağının inhibitörleri ve bunların kanser tedavisinde kullanımı.
Farooqi et al. Overview of the oncogenic signaling pathways in colorectal cancer: Mechanistic insights
Marcucci et al. Anti-cancer stem-like cell compounds in clinical development–an overview and critical appraisal
Ganser et al. Novel 3-azaindolyl-4-arylmaleimides exhibiting potent antiangiogenic efficacy, protein kinase inhibition, and antiproliferative activity
JP2022519929A (ja) Ｒａｄ５１及びｐａｒｐ阻害薬の併用に関連した出願
Chang et al. Design and synthesis of 1, 2-bis (hydroxymethyl) pyrrolo [2, 1-a] phthalazine hybrids as potent anticancer agents that inhibit angiogenesis and induce DNA interstrand cross-links
Guo et al. Notch signaling, hypoxia, and cancer
WO2023064669A2 (en) Inhibitors of the mtdh-snd1 protein complex for cancer therapy
Chen et al. Discovery of 1 H-Imidazo [4, 5-b] pyridine Derivatives as Potent and Selective BET Inhibitors for the Management of Neuropathic Pain
Yuan et al. Pioneering 4, 11-Dioxo-4, 11-dihydro-1 H-anthra [2, 3-d] imidazol-3-ium Compounds as Promising Survivin Inhibitors by Targeting ILF3/NF110 for Cancer Therapy
Hu et al. Discovery of Highly Potent and Efficient CBP/p300 Degraders with Strong In Vivo Antitumor Activity
WO2022156727A1 (zh) 治疗肿瘤的组合物及方法
NZ627559B2 (en) Inhibitors of notch signalling pathway and use thereof in treatment of cancers
WO2023141648A1 (en) 2-fluoroethyl procarbazine compounds
West A Chemical Biology Approach to the Cell Type Selective Killing of Glioblastoma Tumor Cells
Weatherbee Exploiting DNA Repair and ER Stress Response Pathways to Induce Apoptosis in Glioblastoma Multiforme: A Dissertation