JP6239598B2 - 薬物複合体、複合体形成方法、およびその使用 - Google Patents

Description

近年、抗体（または、一本鎖可変フラグメントのような抗体フラグメント）をペイロード（payload）薬物と結合させ、抗体−薬物複合体、またはＡＤＣと称される免疫複合体の形態にできることが見出された。抗体は、ＡＤＣの標的細胞への結合をもたらす。その後、ＡＤＣは細胞によって内在化されることが多く、薬物が放出され、細胞が処理される。このターゲティングのため、副作用は全身的な薬物投与の副作用よりも低い可能性がある。

概要
ある態様は、活性薬物複合体、活性薬物複合体の製造方法、およびその使用を提供する。

ある態様は、式Ｉ：

［式中、
Ａは、標的部分であり、
Ｂは、第二の標的部分を含んでいてよい補助的部分であるか、またはＢは存在せず、
Ｌ^１は、少なくとも１個のＮ（窒素）原子を含む基を含み、
Ｄは、それぞれ独立して選択され、ここで、各Ｄは活性薬物を含み、
Ｌ^２は、それぞれ独立して、リンカーであり、ここで、少なくとも１個のＬ^２はＬ^１に結合し、そして
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。］
で示される構造を有する活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ある態様は、式Ｉａ：

［式中、
Ｘが、Ｎ（窒素）またはＣＨであり、
Ｙが、Ｎ（窒素）またはＣＨであり、
ｍが、０、１、または２であり、
Ｌが、リンカーであるか、または存在せず、そして
Ｌ^１Ａが、リンカーであるか、または存在しない。］
で示される構造を有する活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ある態様は、式Ｉａａ

［式中、
Ａは、標的部分であり、
Ｂは、第二の標的部分を含んでいてよい補助的部分であるか、またはＢは存在せず、
Ｄは、それぞれ独立して選択され、ここで、各Ｄは活性薬物を含み、
Ｌ^２は、それぞれ独立して、リンカーであり、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、ＸはＮ（窒素）またはＣＨであり、そしてＬ^１Ａはリンカーであるか、または存在しない。］
で示される構造を有する活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ある態様は、式Ｉａｂ

［式中、
Ａは、標的部分であり、
Ｂは、第二の標的部分を含んでいてよい補助的部分であるか、またはＢは存在せず、
Ｄは、それぞれ独立して選択され、ここで、各Ｄは活性薬物を含み、
Ｌ^２は、それぞれ独立して、リンカーであり、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、ＸはＮ（窒素）またはＣＨであり、そしてＬ^１Ａはリンカーであるか、または存在しない。］
で示される構造を有する活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ある態様は、
式Ｉ−Ａのアミンを式Ｉ−Ｂのジアルデヒドと反応させて、

式Ｉａａの活性薬物複合体を得る化学的合成法を提供する。

ある態様は、式ＩＩ−Ａの化合物を式ＩＩ−Ｂの化合物と反応させて、

式Ｉａｂの活性薬物複合体を得る化学的合成法を提供する。

ある態様において、
は、

であってよい。ある態様において、Ｌは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−を含む。ある態様において、Ｌは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であってよい。ある態様において、Ｌは存在しなくてもよい。ある態様において、Ｌは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−を含む。ある態様において、Ｌは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であってよい。ある態様において、Ｌは−Ｃ（＝Ｏ）−であってよい。

ある態様において、Ｌ^１Ａは、−（ＣＨ_２）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、Ｌ^１Ａは、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、Ｌ^１Ａは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、またはＰＡＢを含む。ある態様において、Ｌ^１Ａは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、またはそれらの組み合わせを含む。

ある態様において、構成要素Ａは、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）を含む。ある態様において、構成要素Ａは、抗体フラグメント、サロゲート、または変異体を含む。ある態様において、構成要素Ａは、タンパク質リガンドを含む。ある態様において、構成要素Ａは、タンパク質骨格を含む。ある態様において、構成要素Ａは、ペプチドを含む。ある態様において、構成要素Ａは、小分子リガンドを含む。ある態様において、構成要素Ａは、少なくとも１個の修飾されたｎ−ブチルＬ−α−アミノ酸残基を含む。

ある態様において、Ｌ^２は非切断型ユニットを含む。ある態様において、非切断型ユニットは、−（ＣＨ_２）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、非切断型ユニットは、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、Ｌ^２は切断型ユニットを含み。ある態様において、切断型ユニットはペプチドを含み。ある態様において、Ｌ^２は、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）−、Ｏ（酸素）、Ｓ（硫黄）、−ＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、ＰＡＢ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎなどからなる群より選択される少なくとも１個の構成要素を含む。ある態様において、Ｌ^２は、−（ＣＨ_２）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、Ｌ^２は、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある態様において、Ｌ^２は、少なくとも１個のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、またはＰＡＢを含む。ある態様において、Ｌ^２は、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、またはそれらの組み合わせを含む。

ある態様は、本明細書に開示および記載される活性薬物複合体を含む組成物を提供する。ある態様において、組成物の＞７０％が２種以内の活性成分からなる。ある態様において、組成物の＞６０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、組成物の＞５０％が２種以内の活性成分からなる。ある態様は、本明細書に開示および記載される活性薬物複合体を含む組成物を提供する。ある態様において、組成物の＞７０％が２種のみの活性成分からなる。ある態様において、組成物の＞６０％が２種のみの活性成分からなる。ある態様において、組成物の＞５０％が２種のみの活性成分からなる。

図１は、従来のトラスツズマブ−エムタンシンの２工程複合体形成反応の生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図２は、従来のトラスツズマブ−エムタンシンの１工程複合体形成反応の生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図３は、従来のＮＨＳ法を用いてトラスツズマブと化合物３４を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図４は、選択的複合体形成法を用いてトラスツズマブと化合物３４を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図５は、選択的複合体形成法を用いてトラスツズマブと化合物６７を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図６は、１：４の薬剤／抗体比で、選択的複合体形成法を用いて、トラスツズマブと化合物６２を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図７は、１：６の薬剤／抗体比で、選択的複合体形成法を用いて、トラスツズマブと化合物６２を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

図８は、１：７．５の薬剤／抗体比で、選択的複合体形成法を用いて、トラスツズマブと化合物６２を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図９は、選択的複合体形成法を用いて、トラスツズマブと化合物４９を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図１０は、選択的複合体形成法を用いてトラスツズマブと化合物７３を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図１１は、非選択的リンカーを用いてトラスツズマブと化合物６０を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラム、および適するリンカーを用いてトラスツズマブと化合物６０を反応させた生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図１２は、トラスツズマブ−化合物５５の抗体−薬物複合体に対するＳＫ−ＢＲ−３細胞の生存能を示す。 図１３は、トラスツズマブ−化合物６１の抗体−薬物複合体に対するＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の生存能を示す。 図１４は、トラスツズマブ−化合物６７の抗体−薬物複合体に対するＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の生存能を示す。 図１５は、トラスツズマブ−化合物６２の抗体−薬物複合体に対するＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の生存能を示す。 図１６は、トラスツズマブ−化合物５５の抗体−薬物複合体に対するＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の生存能を示す。

詳細な説明
ある態様は、活性薬物複合体を提供する。ある態様において、活性薬物複合体は、薬物複合体である。ある態様において、薬物複合体は、標的化分子を含む。ある態様において、標的化分子はモノクローナル抗体（ｍＡＢ）を含む。ある態様において、薬物複合体は、スペーサーまたは多官能性リンカーを含む。ある態様において、スペーサーは、Ｎ（窒素）原子を含む基によりｍＡＢに結合している。ある態様において、多官能性リンカーは、Ｎ（窒素）原子を含む基によりｍＡＢに結合している。ある態様において、スペーサーまたは多官能性リンカーは、要すれば補助的部分（auxiliary moiety）に結合していてよい。ある態様において、補助的部分は、ｍＡＢおよびペプチドのような第二の標的化分子であり得る。ある態様において、補助的部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのような親水性ポリマーであり得る。ある態様において、スペーサーまたは多官能性リンカーは、Ｎ（窒素）原子を含む基を含み得る。ある態様において、スペーサーまたは多官能性リンカーは、Ｎ（窒素）原子を含む環状基を含み得る。

ペイロードを含むポリペプチドを誘導体化する複合体形成法は、リシン側鎖とのアミド結合の形成により達成され得る。同様の反応性を有する多数のリシン側鎖アミンが存在するため、この複合体形成法は、極めて複雑な不均一混合物を製造し得る。本明細書に記載の組成物および方法は、リシンを介する複合体を提供し、ある態様において、リシンの増強された選択性が、不均一性のより低い混合物をもたらし得る。

略語
本明細書で用いる、通常の有機化学における略語は以下に定義される。

用語“薬学的に許容される塩”は、化合物の生物学的有効性および特性を保持する塩を意味し、それは、医薬における使用に生物学的にも、または他の方法にも望ましくない塩ではない。多くの場合に、本明細書に記載の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれらに類似の基の存在に基づいて酸性および／または塩基性塩を形成し得る。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸と形成され得る。塩が由来し得る無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。塩が由来し得る有機酸としては、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイヒ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機塩基と形成され得る。塩が由来し得る無機塩基としては、例えばナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムなどが挙げられる。特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩類である。塩が由来し得る有機塩基としては、例えば、一級、二級、および三級アミン類、天然に生じる置換アミン類を含む置換アミン類、環状アミン類、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられ、とりわけイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、およびエタノールアミンが挙げられる。多くのそのような塩が当技術分野で公知であり、１１、１９８７年９月１１日に公開されたＷＯ８７／０５２９７、Ｊｏｈｎｓｔｏｎらに記載されている（参照によりその全体を本明細書中に包含させる）。

本明細書で用いる“Ｃ_ａ−Ｃ_ｂ”または“Ｃ_ａ−ｂ”（ここで、“ａ”および“ｂ”は、整数である。）は、特定の基における炭素原子の数を意味する。すなわち、該基は、“ａ”ないし“ｂ”（その数を含む）個の炭素原子であり得る。故に、例えば“Ｃ_１−Ｃ_４アルキル”または“Ｃ_１−４アルキル”基は、１ないし４個の炭素を有する全てのアルキル基、すなわちＣＨ_３−、ＣＨ_３ＣＨ_２−、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２−、（ＣＨ_３）_２ＣＨ−、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）−、および（ＣＨ_３）_３Ｃ−を意味する。

本明細書で用いる用語“ハロゲン”または“ハロ”は、元素周期表第７列の放射線安定原子（radio-stable atom）のいずれか１つ、例えば、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味し、フッ素および塩素が好ましい。

本明細書で用いる“アルキル”は、完全飽和である（すなわち、二重または三重結合を含まない）直鎖または分枝状炭化水素を意味する。アルキル基は、１ないし２０個の炭素原子を有し得る（本明細書に記載される場合は、“１ないし２０”のような数値範囲は、所定の範囲の各整数を意味する。例えば、本明細書の定義は、数の範囲が明示されない用語“アルキル”の場合も包含するが、“１ないし２０個の炭素原子”とは、アルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などから、２０個までの（２０個を含む）炭素原子から構成され得ることを意味する）。アルキル基はまた、１ないし９個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルも意味し得る。アルキル基はまた、１ないし４個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。該アルキル基は、“Ｃ_１−４アルキル”または同様の記載で示され得る。例示のみの目的で、“Ｃ_１−４アルキル”とは、アルキル鎖中に１ないし４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち、該アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチルからなる群より選択される。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、三級ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いる“アルコキシ”は、式−ＯＲ(式中、Ｒは、上記のアルキルである。)のような“Ｃ_１−９アルコキシ”のような基を意味し、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、１−メチルエトキシ（イソプロポキシ）、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、およびｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いる“アルキルチオ”は、式−ＳＲ(式中、Ｒは、上記のアルキルである。)のような“Ｃ_１−９アルキルチオ”のような基を意味し、メチルメルカプト、エチルメルカプト、ｎ−プロピルメルカプト、１−メチルエチルメルカプト（イソプロピルメルカプト）、ｎ−ブチルメルカプト、イソブチルメルカプト、ｓｅｃ−ブチルメルカプト、ｔｅｒｔ−ブチルメルカプトなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いる“アルケニル”は、１個またはそれ以上の二重結合を含む直鎖または分枝状炭化水素鎖を意味する。アルケニル基は、本明細書の定義は、数の範囲が明示されない用語“アルケニル”の場合も包含するが、２ないし２０個の炭素原子を有し得る。アルケニル基はまた、２ないし９個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルケニルでもあり得る。アルケニル基はまた、２ないし４個の炭素原子を有する低級アルケニルであってもよい。該アルケニル基は、“Ｃ_２−４アルケニル”または同様の記載で示され得る。例示のみの目的で、“Ｃ_２−４アルケニル”とは、アルケニル鎖中に２ないし４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち、該アルケニル鎖は、エテニル、プロペン−１−イル、プロペン−２−イル、プロペン−３−イル、ブテン−１−イル、ブテン−２−イル、ブテン−３−イル、ブテン−４−イル、１−メチル−プロペン−１−イル、２−メチル−プロペン−１−イル、１−エチル−エテン−１−イル、２−メチル−プロペン−３−イル、ブタ−１，３−ジエニル、ブタ−１，２，−ジエニル、およびブタ−１，２−ジエン−４−イルからなる群より選択される。典型的なアルケニル基としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いる“アルキニル”は、１個またはそれ以上の三重結合を含む直鎖または分枝状炭化水素鎖を意味する。アルキニル基は、本明細書の定義は、数の範囲が明示されない用語“アルキニル”の場合も包含するが、２ないし２０個の炭素原子を有し得る。アルキニル基はまた、２ないし９個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキニルでもあり得る。アルキニル基はまた、２ないし４個の炭素原子を有する低級アルキニルであってもよい。該アルキニル基は、“Ｃ_２−４アルキニル”または同様の記載で示され得る。例示のみの目的で、“Ｃ_２−４アルキニル”とは、アルキニル鎖中に２ないし４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち、該アルキニル鎖は、エチニル、プロピン−１−イル、プロピン−２−イル、ブチン−１−イル、ブチン−３−イル、ブチン−４−イル、および２−ブチニルからなる群より選択される。典型的なアルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、およびヘキシニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用語“芳香族”は、パイ電子共役系を有する環または環系を意味し、炭素環式芳香族（例えば、フェニル）およびヘテロ環式芳香族基（例えば、ピリジン）の両方を包含する。該用語は、環系全体が芳香族性を提供する単環式または縮合多環式（すなわち、隣接する原子対を共有する環）基を包含する。

本明細書で用いる“アリールオキシ”および“アリールチオ”は、ＲＯ−およびＲＳ−（ここでは、Ｒは、上記に定義のアリールである。）のような“Ｃ_６−１０アリールオキシ”または“Ｃ_６−１０アリールチオ”などを意味し、フェニルオキシが挙げられるが、これに限定されない。

“アラルキル”または“アリールアルキル”は、“Ｃ_７−１４アラルキル”などのような、アルキレンを介して置換基として結合するアリール基であり、ベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、およびナフチルアルキルが挙げられるが、これらに限定されない。ある場合において、アルキレン基は、低級アルキレン基（すなわち、Ｃ_１−４アルキレン基）である。

本明細書で用いる“ヘテロアリール”は、１個またはそれ以上のヘテロ原子、すなわち窒素、酸素および硫黄を含むが、これに限定されない炭素以外の元素を環の骨格上に含む、芳香環または環系（すなわち、２個の隣接原子を共有する２個またはそれ以上の縮合環）を意味する。ヘテロアリールが環系であるとき、該環系のそれぞれの環は、芳香族性である。ヘテロアリール基が５−１８員環（すなわち、炭素原子およびヘテロ原子を含む、環骨格を構成する原子の数）であってよいが、本明細書の定義は、数値範囲が記載されていない用語“ヘテロアリール”の場合も包含する。ある態様において、ヘテロアリール基は、５ないし１０員環または５ないし７員環である。ヘテロアリール基は、 “５−７員のヘテロアリール”、“５−１０員のヘテロアリール”または同様の記載で示され得る。ヘテロアリール環の例としては、フリル、チエニル、フタラジニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、インドリル、イソインドリル、およびベンゾチエニルが挙げられるが、これらに限定されない。

“ヘテロアラルキル”または“ヘテロアリールアルキル”は、アルキレン基を介して置換基として結合するヘテロアリール基である。例としては、２−チエニルメチル、３−チエニルメチル、フリルメチル、チエニルエチル、ピロリルアルキル、ピリジルアルキル、イソキサゾリルアルキル、およびイミダゾリルアルキルが挙げられるが、これらに限定されない。ある場合において、アルキレン基は、低級アルキレン基（すなわち、Ｃ_１−４アルキレン基）である。

本明細書で用いる“カルボシクリル”は、環系の骨格中に炭素原子のみを含む非芳香族性環式環または環系を意味する。カルボシクリルが環系であるとき、２個またはそれ以上の環が、それらが一体となって縮合環、架橋環またはスピロ縮合環を構成し得る。カルボシクリルは、環系の少なくとも１個の環が芳香族ではないとの条件で、任意の飽和度を有していてもよい。故に、カルボシクリルとしては、シクロアルキル、シクロアルケニル、およびシクロアルキニルが挙げられる。カルボシクリル基は、本明細書の定義が、用語“カルボシクリル”が数値範囲を示さずに記載される場合を包含するが、３ないし２０個の炭素原子を有していてよい。カルボシクリル基は、３ないし１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのカルボシクリルであってもよい。カルボシクリル基は、３ないし６個の炭素原子を有するカルボシクリルでもあり得る。該カルボシクリル基は、“Ｃ_３−６カルボシクリル”または同様の記載で示され得る。カルボシクリル環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、２，３−ジヒドロ−インデン、ビシクロ［２．２．２］オクタニル、アダマンチル、およびスピロ［４．４］ノナニルが挙げられるが、これらに限定されない。

“（カルボシクリル）アルキル”は、置換基として、アルキレン基を介して結合するカルボシクリル基であり、例えば、“Ｃ_４−１０（カルボシクリル）アルキル”などであり、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロプロピルエチル、シクロプロピルブチル、シクロブチルエチル、シクロプロピルイソプロピル、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチル、シクロヘキシルエチル、シクロヘプチルメチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ある場合において、アルキレン基は低級アルキレン基である。

本明細書で用いる“シクロアルキル”は、完全飽和カルボシクリル環または環系を意味する。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。

本明細書で用いる“シクロアルケニル”は、少なくとも１個の二重結合を有するカルボシクリル環または環系であって、該環系中に芳香族環がないものを意味する。例としては、シクロヘキセニルが挙げられる。

本明細書で用いる“ヘテロシクリル”は、環骨格中に少なくとも１個のヘテロ原子を含む、非芳香族環式環系または環系を意味する。ヘテロシクリルは、縮合、架橋またはスピロ結合により共に結合されていてよい。ヘテロシクリルは、環系中の少なくとも１個の環が芳香族ではないとの条件で、任意の飽和度を有していてもよい。ヘテロ原子は、環系中の非芳香族環または芳香環のいずれかに存在していてよい。ヘテロシクリル基は、本明細書の定義が、用語“ヘテロシクリル”が数値範囲を示さずに記載される場合を包含するが、３ないし２０員環（すなわち、炭素原子およびヘテロ原子を含む、環骨格を構成する原子数）であってよい。ヘテロシクリル基はまた、３ないし１０員環を有する中程度のサイズのヘテロシクリルであってよい。ヘテロシクリル基はまた、３ないし６員環を有するヘテロシクリルであってもよい。該ヘテロシクリル基は、“３−６員のヘテロシクリル”または同様の記載で示され得る。好ましい６員の単環式ヘテロシクリルにおいて、ヘテロ原子は、１ないし３個のＯ、ＮまたはＳから選択され、好ましい５員の単環式ヘテロシクリルにおいて、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される１または２個のヘテロ原子から選択される。ヘテロシクリル環の例としては、アゼピニル、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジオキソラニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、オキシラニル、オキセパニル、チエパニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ジオキソピペラジニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピロリジオニル、４−ピペリドニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、１，３−ジオキシニル、１，３−ジオキサニル、１，４−ジオキシニル、１，４−ジオキサニル、１，３−オキサチアニル、１，４−オキサチイニル、１，４−オキサチアニル、２Ｈ−１，２−オキサジニル、トリオキサニル、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジニル、１，３−ジオキソリル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオリル、１，３−ジチオラニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリジノニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、１，３−オキサチオラニル、インドリニル、イソインドリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロ−１，４−チアジニル、チアモルホリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンズイミダゾリジニル、およびテトラヒドロキノリンが挙げられるが、これらに限定されない。

“（ヘテロシクリル）アルキル”は、置換基として、アルキレン基を介して結合するヘテロシクリル基である。例としては、イミダゾリニルメチルおよびインドリニルエチルが挙げられるが、これに限定されない。

本明細書で用いる“アシル”は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルである。）を意味する。限定されない例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、およびアクリルが挙げられる。

“Ｏ−カルボキシ”基は、“−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ”基(式中、Ｒは、本明細書で定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。)を意味する。

“Ｃ−カルボキシ”基は、“−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”基(式中、Ｒは、本明細書で定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。)を意味する。限定しない例としては、カルボキシル（すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）が挙げられる。

“シアノ”基は、“−ＣＮ”基を意味する。

“シアナト”基は、“−ＯＣＮ”基を意味する。

“イソシアナト”基は、“−ＮＣＯ”基を意味する。

“チオシアナト”基は、“−ＳＣＮ”基を意味する。

“イソチオシアナト”基は、“−ＮＣＳ”基を意味する。

“スルフィニル”基は、“−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ”基(式中、Ｒは、本明細書で定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。)を意味する。

“スルホニル”基は、“−ＳＯ_２Ｒ”基(式中、Ｒは、本明細書で定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。)を意味する。

“Ｓ−スルホンアミド”基は、“−ＳＯ_２ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｎ−スルホンアミド”基は、“−Ｎ（Ｒ_Ａ）ＳＯ_２Ｒ_Ｂ”基（式中、Ｒ_ＡおよびＲ_ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。）を意味する。

“Ｏ−カルバミル”基は、“−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｎ−カルバミル”基は、“−Ｎ（Ｒ_Ａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｏ−チオカルバミル”基は、“−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“ウレア”基は、“−Ｎ（Ｒ_Ａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｎ−チオカルバミル”基は、“−Ｎ（Ｒ_Ａ）Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｃ−アミド”基は、“−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“Ｎ−アミド”基は、“−Ｎ（Ｒ_Ａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。

“アミノ”基は、“−ＮＲ_ＡＲ_Ｂ”基(式中、Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、それぞれ独立して、本明細書に定義の通り、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−７カルボシクリル、Ｃ_６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、および５−１０員のヘテロシクリルから選択される。) を意味する。限定しない例としては、遊離アミノ（すなわち、−ＮＨ_２）が挙げられる。

“アミノアルキル”基は、アルキレン基を介して結合するアミノ基を意味する。

“アルコキシアルキル”基は、アルキレン基を介して結合するアルコキシ基を意味し、例えば“Ｃ_２−８アルコキシアルキル”などである。

本明細書で用いる「置換された基」は、非置換の親基に由来し、そこに、１個またはそれ以上の水素原子が別の原子または基に交換されている基である。特記しない限り、基が“置換”されていると記載されるとき、それは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_７カルボシクリル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、Ｃ_３−Ｃ_７−カルボシクリル−Ｃ_１−Ｃ_６−アルキル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、５−１０員のヘテロシクリル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、５−１０員のヘテロシクリル−Ｃ_１−Ｃ_６−アルキル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、アリール（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、アリール（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、５−１０員のヘテロアリール（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、５−１０員のヘテロアリール（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル（所望によりハロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、およびＣ_１−Ｃ_６ハロアルコキシで置換されていてよい）、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル（すなわち、エーテル）、アリールオキシ、スルフヒドリル（メルカプト）、ハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル（例えば、−ＣＦ_３）、ハロ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ（例えば、−ＯＣＦ_３）、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、アミノ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、ニトロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、アシル、シアナト、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、スルフィニル、スルホニル、およびオキソ（＝Ｏ）から独立して選択される１個またはそれ以上の置換基で置換されていることを意味する。基が“所望により置換されていてよい”と記載されるときは、該基は、上記の置換基で置換され得る。

あるラジカル命名法は、文脈によって異なるが、モノラジカルまたはジラジカルの何れも包含し得ることが理解されるべきである。例えば、置換基が、分子の他の部分に２つの結合点を必要とするとき、置換基はジラジカルであると理解される。例えば、２つの結合点を必要とするアルキルとして特定される置換基としては、−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−などのようなジラジカルが挙げられる。他のラジカル命名法は、ラジカルが、“アルキレン”または“アルケニレン”のようなジラジカルであることを明確に記載する。

置換基がジラジルカル（すなわち、分子の他の部分に２つの結合点を有する）であることが示されるとき、他に特記しない限り、置換基は、任意の指向性配置(directional configuration)で結合し得ることが理解されるべきである。故に、例えば、−ＡＥ−または

で示される置換基としては、Ａが分子の最左の結合点に結合するように、ならびにＡが分子の最右の結合点に結合する場合のように配向される置換基が挙げられる。

本明細書で用いる“対象”は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、非ヒト霊長類または鳥類、例えば、ニワトリ、ならびに何れかの他の脊椎動物または無脊椎動物を意味する。

化合物
当業者は、本明細書に記載されるいくつかの構造が、動態的にも他の化学的構造によっても正しく示され得る、化合物の共鳴構造または互変異性体であり得ることを認識するだろう。当業者は、そのような構造が、そのような化合物のサンプルの極めて少量部分を表しているだけであり得ることを理解する。そのような共鳴構造または互変異性体は本明細書中に示されないが、かかる化合物は、示される構造の範囲内であると考えられる。

同位体が記載される化合物に存在し得る。本明細書に具体的または一般的に記載される化合物中に存在するそれぞれの化学元素は、該元素の何れかの同位体であり得る。例えば、本明細書に具体的または一般的に記載される化合物において、水素原子は、明示的に記載されるか、または化合物中に存在することが理解され得て、かかる各水素原子は、水素−１（プロチウム）および水素−２（重水素）を含むが、これらに限定されない水素のいずれかの同位体である。故に、本明細書中の化合物への言及は、文脈中これと異なる記載がない限り、全ての可能性のある同位体形態を包含する。

結合方法、スペーサーおよびリンカーによる
いくつかの態様は、スペーサーまたは多官能性リンカーを介する標的分子の結合方法を提供する。ある態様において、スペーサーまたは多官能性リンカーは、Ｎ（窒素）原子を含む基を包含し得る。ある態様において、該方法は、単一工程または連続的結合方法を包含する。ある態様において、薬物複合体は、スペーサーまたは多官能性リンカーを包含する。ある態様において、スペーサーまたは多官能性リンカーは、ペプチドまたはジスルフィド結合のような非切断型または切断型ユニットを包含し得る。

有用性および適応症
いくつかの態様は、本明細書に開示または記載される活性薬物複合体を必要とする患者における処置方法であって、該患者にそれを投与することを含む方法を提供する。ある態様において、患者は、癌、免疫疾患、感染症または糖尿病のような代謝性疾患を有し得る。

いくつかの態様は、本明細書に開示または記載される活性薬物複合体を個人に投与することを含む、診断またはイメージング法を提供する。

構造
いくつかの態様は、式Ｉ

［式中、
Ａは、標的部分であり得て、
Ｂは、第二の標的部分を含んでいてよい補助的部分であるか、水溶性ポリマーであるか、またはＢは存在せず、
Ｌ^１は、１個のＮ（窒素）原子を含む基であり、
Ｄは、それぞれ独立して選択され、ここで、各Ｄは活性薬物であり、
Ｌ^２は、それぞれ独立して、リンカーであり、ここで、少なくとも１個のＬ^２はＬ^１に結合し、そして
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。］
で示される構造を有する活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ある態様において、Ａは、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）であり得て、より具体的には、Ａはヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。

ある態様において、Ａは、抗体フラグメント、サロゲート、または変異体であり得る。

ある態様において、Ａは、タンパク質リガンドであり得る。

ある態様において、Ａは、タンパク質骨格であり得る。

ある態様において、Ａはペプチドであり得る。

ある態様において、Ａは小分子リガンドであり得る。

ある態様において、Ｂは、親水性ポリマーであり得る。ある態様において、親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などであり得る。ある態様において、Ｂは、生分解性ポリマーであり得る。ある態様において、生分解性ポリマーは、構造化されていないタンパク質、ポリアミノ酸、ポリペプチド、多糖類およびそれらの組み合わせであり得る。

ある態様において、Ｂは、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）であり得る。

ある態様において、Ｂは、抗体フラグメント、サロゲート、または変異体であり得る。

ある態様において、Ｂは、タンパク質リガンドであり得る。

ある態様において、Ｂは、タンパク質骨格であり得る。

ある態様において、Ｂはペプチドであり得る。

ある態様において、Ｂは、ＲＮＡまたはＤＮＡであり得る。

ある態様において、Ｂは、ＲＮＡまたはＤＮＡフラグメントであり得る。

ある態様において、Ｂは、小分子リガンドであり得る。

ある態様において、Ｄは、生物学的活性化合物であり得る。

ある態様において、Ｄは薬物であり得る。

ある態様において、Ｄは、化学療法薬であり得る。

ある態様において、Ｄは、天然生成物であり得る。

ある態様において、Ｄは、免疫モジュレーターであり得る。

ある態様において、Ｄは、チューブリンバインダーであり得る。

ある態様において、Ｄは、ＤＮＡ−アルキル化剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、抗エピジェネティック薬であり得る。

ある態様において、Ｄは、タンパク質合成阻害剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、抗代謝剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、酵素阻害剤であり得る。

ある態様において、Ｄは、ペプチドであり得る。

ある態様において、Ｄは、ペプチド模倣薬であり得る。

ある態様において、ＤはｓｉＲＮＡであり得る。

ある態様において、Ｄは、アンチセンスＤＮＡであり得る。

ある態様において、Ｄは、ＤＮＡインターカレーター(intercalactor)であり得る。

ある態様において、Ｌ^２は、スペーサーまたは多官能性リンカーを含み得る。ある態様において、Ｌ^２は、スペーサーおよび多官能性リンカーを含み得る。ある態様において、Ｌ^２は多官能性リンカーを含み得る。ある態様において、各Ｌ^２はリンカーであり得て、ここで、リンカーは、生物学的条件下で切断型または非切断型であり得る。ある態様において、リンカーは酵素により切断され得る。ある態様において、Ｌ^２はリンカーを含み得る。

ある態様において、Ｌ^１は、少なくとも１個のＮ（窒素）原子を含む環式基を含む。ある態様において、Ｌ^１は、少なくとも２個のＮ（窒素）原子を含む環式基を含む。ある態様において、Ｌ^１は、少なくとも１個のＮ（窒素）原子およびスペーサーを含む環式基を含む。ある態様において、Ｌ^１は、少なくとも２個のＮ（窒素）原子およびスペーサーを含む環式基を含む。ある態様において、スペーサーは、アミド結合によりｍＡＢに結合している。ある態様において、スペーサーは、アミン結合を介してｍＡＢに結合している。

ある態様において、Ａは、少なくとも１個の修飾ｎ−ブチル Ｌ−α−アミノ酸を包含する。ある態様において、少なくとも１個の修飾Ｌ−リシン残基は、複合体形成前のペプチドのＬ−リシン残基に由来する。ある態様において、Ｌ^１の少なくとも１個の窒素は、複合体形成前のペプチドの少なくとも１個の修飾ｎ−ブチル Ｌ−α−アミノ酸に由来する。ある態様において、ＡおよびＬ^１は一体となって、少なくとも１個の修飾Ｌ−リシン残基を含む。ある態様において、複合体形成前のペプチドのＬ−リシン残基の側鎖の末端窒素は、Ｌ^１の少なくとも１個のＮ（窒素）原子である。ある態様において、Ａは、Ｌ^１の少なくとも１個のＮ（窒素）原子を提供する、複合体形成前のペプチドのＬ−リシン残基の側鎖の−（ＣＨ_２）_４−を含む。ある態様において、Ａは、修飾ｎ−ブチル Ｌ−α−アミノ酸残基を含む。

ある態様において、リンカーはペプチドであり得る。

ある態様において、リンカーはオリゴ糖を含み得る。例えば、リンカーはキトサンを含み得る。ある態様において、Ｌ^２は、リンカーおよび−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含み得る。ある態様において、Ｌ^２は、リンカーおよび−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含み得る。

ある態様において、リンカーは、−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含み得る。

ある態様において、リンカーは、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含み得る。

ある態様において、リンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢなどを含み得る。

ある態様において、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢなどの何れかの組み合わせを含み得る。

ある態様において、スペーサーは、ペプチドを含み得る。

ある態様において、スペーサーはオリゴ糖を含み得る。例えば、スペーサーはキトサンを含み得る。

ある態様において、スペーサーは、−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含み得る。ある態様において、Ｌ^１は、４−炭素架橋および−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含む構成成分を含み得る。

ある態様において、スペーサーは、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。) を含み得る。ある態様において、Ｌ^１は、４−炭素架橋および−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。)を含む構成成分を含み得る。

ある態様において、スペーサーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢなどを含み得る。

ある態様において、スペーサーは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢなどの何れかの組み合わせであり得る。

ある態様において、Ｌ^１は、
などを含み得るが、これらに限定されない。

ある態様において、式Ｉの構造を有する薬物複合体は、式Ｉａ：

［式中、Ｘは、Ｎ（窒素）、ＣＨ−またはＣＨ−Ｃ（＝Ｏ）−である。Ｙは、Ｎ（窒素）、ＣＨ−またはＣＨ−ＣＨ_２−である。ｍは、０、１、または２であり得る。そして、Ｌ^１Ａは、リンカーであり得るか、または存在しない。Ｌは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であるが、これに限定されない。］
で示される構造を有する

ある態様において、構成要素Ａは、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）を含む。ある態様において、構成要素Ａは、抗体フラグメント、サロゲート、または変異体を含む。ある態様において、構成要素Ａはタンパク質リガンドを含む。ある態様において、構成要素Ａは、タンパク質骨格を含む。ある態様において、構成要素Ａはペプチドである。ある態様において、構成要素Ａは小分子リガンドを含む。ある態様において、構成要素Ａは、少なくとも１個の修飾Ｌ−アラニン残基を含む。ある態様において、構成要素Ａは、少なくとも２個の修飾Ｌ−アラニン残基を含む。ある態様において、少なくとも１個のＬ^２は、−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。) を含む。ある態様において、少なくとも１個のＬ^２は、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。) を含む。ある態様において、少なくとも１個のＬ^２は、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢを含む。ある態様において、少なくとも１個のＬ^２は、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、またはそれらの組み合わせを含む。ある態様において、Ｌ^１は、−Ｃ（＝Ｏ）−を含む。ある態様において、Ｌ^１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−を含む。ある態様において、Ｌ^１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であり得る。ある態様において、Ｌ^１は、−Ｃ（＝Ｏ）−である。ある態様において、少なくとも１個のＬ^２は、

を含む。

ある態様において、式Ｉの構造を有する薬物複合体は、

(式中、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）−、Ｏ（酸素）、Ｓ（硫黄）、−ＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、ＰＡＢ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎなどからなる群より選択される少なくとも１個の構成成分である。)
で示される構造を有する。

ある態様において、リンカーは、−（ＣＨ_２）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。) を含み得る。

ある態様において、リンカーは、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−(式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。) を含み得る。

ある態様において、リンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢなどを含み得る。

ある態様において、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢなどの何れかの組み合わせなどを含み得る。

複合体形成方法の説明
一般的方法Ａ：ある態様は、式Ｉ−Ａのアミンと式Ｉ−Ｂのジアルデヒドを反応させて、式（Ｉａｂ）の活性薬物複合体を提供することを含む化学的合成法を提供する。

一般的方法Ｂ：ある態様は、式ＩＩ−Ａのアミンと式ＩＩ−Ｂの活性化カルボキシル成分を反応させて、式（Ｉａ”）の活性薬物複合体を提供することを含む化学的合成法を提供する。

アミノ基と選択的に反応して６員環を形成するとき、例としては、

などが挙げられるが、これらに限定されない。

ある態様において、薬物複合体は、アミノ酸、アミノ酸残基、アミノ酸類縁体、および修飾アミノ酸からなる群より選択される１個またはそれ以上の構成成分を含み得る。

本明細書で用いる用語“標的部分”は、生物学的部分またはそのフラグメントと結合または相互作用する構造を意味する。

ある態様において、標的部分は、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）であり得る。ある態様において、標的部分は、抗体フラグメント、サロゲート、または変異体であり得る。ある態様において、標的部分は、タンパク質リガンドであり得る。ある態様において、標的部分は、タンパク質骨格であり得る。ある態様において、標的部分は、ペプチドであり得る。ある態様において、標的部分は、ＲＮＡまたはＤＮＡであり得る。ある態様において、標的部分は、ＲＮＡまたはＤＮＡフラグメントであり得る。ある態様において、標的部分は、小分子リガンドであり得る。

ある態様において、標的部分は、Janthur et al., “Drug Conjugates Such as Antibody Drug Conjugates (ADCs)、Immunotoxins and Immunoliposomes Challenge Daily Clinical Practice,” Int. J. Mol. Sci, 2012, 13, 16020-16045に記載される抗体フラグメントであり得る。該文献の記載は、引用によりその全体を本明細書中に包含させる。ある態様において、標的部分は、Trail, PA, “Antibody Drug Conjugates as Cancer Therapeutics,” Antibodies 2013, 2, 113-129に記載の抗体フラグメントであり得る。該文献の記載は、引用によりその全体を本明細書中に包含される。

ある態様において、標的部分は、ＨｕＭ１９５−Ａｃ−２２５、ＨｕＭ１９５−Ｂｉ−２１３、Ａｎｙａｒａ（ナプツモマブ・エスタフェナトクス；ＡＢＲ−２１７６２０）、ＡＳ１４０９、ゼバリン（イブリツモマブ チウキセタン）、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ−０６２、ノイラジアブ（Neuradiab）、ＣＤＸ−１３０７、ＣＲ０１１−ｖｃＭＭＡＥ、トラスツズマブ−ＤＭ１（Ｒ３５０２）、ベクサール（トシツモマブ）、ＩＭＧＮ２４２、ＩＭＧＮ３８８、ＩＭＧＮ９０１、^１３１Ｉ−ラベツズマブ、ＩＭＭＵ−１０２（^９０Ｙ−エピラツズマブ）、ＩＭＭＵ−１０７（^９０Ｙ−クリバツズマブテトラキセタン）、ＭＤＸ−１２０３、ＣＡＴ−８０１５、ＥＭＤ２７３０６３（ｈｕ１４．１８−ＩＬ２）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥＭＤ２７３０６６；ｈｕＫＳ−ＩＬ２）、^１８８Ｒｅ−ＰＴＩ−６Ｄ２、コタラ、Ｌ１９−ＩＬ２、Ｔｅｌｅｕｋｉｎ（Ｆ１６−ＩＬ２）、Ｔｅｎａｒａｄ（Ｆ１６−^１３１Ｉ）、Ｌ１９−^１３１Ｉ、Ｌ１９−ＴＮＦ、ＰＳＭＡ−ＡＤＣ、ＤＩ−Ｌｅｕ１６−ＩＬ２、ＳＡＲ３４１９、ＳＧＮ−３５、またはＣＭＣ５４４であり得る。ある態様において、標的部分は、ＨｕＭ１９５−Ａｃ−２２５、ＨｕＭ１９５−Ｂｉ−２１３、Ａｎｙａｒａ（ナプツモマブ・エスタフェナトクス；ＡＢＲ−２１７６２０）、ＡＳ１４０９、ゼバリン（イブリツモマブ チウキセタン）、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ−０６２、Ｎｅｕｒａｄｉａｂ、ＣＤＸ−１３０７、ＣＲ０１１−ｖｃＭＭＡＥ、トラスツズマブ−ＤＭ１（Ｒ３５０２）、ベクサール（トシツモマブ）、ＩＭＧＮ２４２、ＩＭＧＮ３８８、ＩＭＧＮ９０１、^１３１Ｉ−ラベツズマブ、ＩＭＭＵ−１０２（^９０Ｙ−エピラツズマブ）、ＩＭＭＵ−１０７（^９０Ｙ−クリバツズマブテトラキセタン）、ＭＤＸ−１２０３、ＣＡＴ−８０１５、ＥＭＤ２７３０６３（ｈｕ１４．１８−ＩＬ２）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥＭＤ２７３０６６；ｈｕＫＳ−ＩＬ２）、^１８８Ｒｅ−ＰＴＩ−６Ｄ２、コタラ、Ｌ１９−ＩＬ２、Ｔｅｌｅｕｋｉｎ（Ｆ１６−ＩＬ２）、Ｔｅｎａｒａｄ（Ｆ１６−^１３１Ｉ）、Ｌ１９−^１３１Ｉ、Ｌ１９−ＴＮＦ、ＰＳＭＡ−ＡＤＣ、ＤＩ−Ｌｅｕ１６−ＩＬ２、ＳＡＲ３４１９、ＳＧＮ−３５またはＣＭＣ５４４の抗体部分を含み得るか、これらからなり得るか、または本質的にこれらからなり得る。

ある態様において、標的部分は、ブレンツキシマブ・ベドチン、トラスツズマブ・エムタンシン、イノツズマブ・オゾガマイシン、ロルボツズマブ・メルタンシン、グレンバツムマブ・べドチン、ＳＡＲ３４１９、モキセツモマブ・シュードトクス、モキセツモマブ・シュードトクス、ＡＧＳ−１６Ｍ８Ｆ、ＡＧＳ−１６Ｍ８Ｆ、ＢＩＩＢ−０１５、ＢＴ−０６２、ＩＭＧＮ−３８８、またはＩＭＧＮ−３８８であり得る

ある態様において、標的部分は、ブレンツキシマブ・ベドチン、トラスツズマブ・エムタンシン、イノツズマブ・オゾガマイシン、ロルボツズマブ・メルタンシン、グレンバツムマブ・べドチン、ＳＡＲ３４１９、モキセツモマブ・シュードトクス、モキセツモマブ・シュードトクス、ＡＧＳ−１６Ｍ８Ｆ、ＡＧＳ−１６Ｍ８Ｆ、ＢＩＩＢ−０１５、ＢＴ−０６２、ＩＭＧＮ−３８８、またはＩＭＧＮ−３８８の抗体部分を含み得るか、これらからなり得るか、または本質的にこれらからなり得る。

ある態様において、標的部分は、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、ゲムツズマブ、ミラツズマブ、トラスツズマブ、グレンバツムマブ、ロルボツズマブまたはラベツズマブを含み得るか、これらからなり得るか、または本質的にこれらからなり得る。

本明細書で用いる用語“ペプチド”は、アミノ酸、アミノ酸残基、アミノ酸類縁体、および修飾アミノ酸からなる群よりそれぞれ独立して選択される１個またはそれ以上の構成成分を含む構造を意味する。該構成成分は、典型的に、アミド結合を介して互いに結合される。

本明細書で用いる用語“アミノ酸”は、天然に存在するアミノ酸、アミド結合形成に利用可能な窒素およびカルボン酸を有する分子、一般式ＮＨ_２−ＣＨＲ−ＣＯＯＨの分子または親アミノ酸を担持するペプチド内の残基を含み、ここで、“Ｒ”は多くの種々の側鎖の一つである。“Ｒ”は、天然に存在するアミノ酸に見られる置換基であり得る。“Ｒ”はまた、天然に存在するアミノ酸のものではないものに関連する置換基でもよい。

本明細書で用いる用語“アミノ酸残基”は、他のアミノ酸を結合したとき、水分子の喪失後に残るアミノ酸の部分を意味する。

本明細書で用いる用語“アミノ酸類縁体”は、アミノ酸親化合物の構造誘導体を意味し、これは、しばしば一元素が異なる。

本明細書で用いる用語“修飾アミノ酸”は、２０種の遺伝子によりコードされたアミノ酸の１つに対応しない、“Ｒ”置換基を担持するアミノ酸を意味する。

本明細書で用いる遺伝子によりコードされたＬ−エナンチオマーアミノ酸の略語は、下記の通り慣用的表記に従っている。Ｄ−アミノ酸は小文字で示し、例えばＤ−プロリン＝ｐなどである。

活性薬物複合体におけるあるアミノ酸残基は、顕著に有害に影響することなく他のアミノ酸残基と置き換えることができ、多くの場合ペプチドの活性を増強させさえする。すなわち、好ましい態様によりまた意図されるのは、構造内の少なくとも１個の定義されるアミノ酸残基が他のアミノ酸残基またはその誘導体および／または類縁体で置換されている、活性薬物複合体の改変または変異形態である。好ましい態様において、アミノ酸置換は保存的であり、すなわち、置換アミノ酸残基は、置換されるアミノ酸残基と類似の物理的および化学的特性を有すると認識され得る。

保存的アミノ酸置換を決定する目的で、アミノ酸は、アミノ酸側鎖の物理的−化学的特長に主に依存して、親水性および疎水性の２つの主カテゴリーに都合よく分類され得る。これらの２つの主カテゴリーは、さらに、アミノ酸側鎖の特徴によりさらに明瞭に定義されたサブカテゴリーに分類され得る。例えば、親水性アミノ酸の群は、酸性、塩基性および極性アミノ酸にさらに細分できる。疎水性アミノ酸の群は、非極性および芳香族アミノ酸にさらに細分できる。アミノ酸の種々のカテゴリーの定義は次のとおりである。

用語“親水性アミノ酸”は、Eisenberg et al., 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142の標準化コンセンサス疎水性尺度に従い、０未満の疎水性を示すアミノ酸を意味する。遺伝子によりコードされた親水性アミノ酸は、Ｔｈｒ(Ｔ)、Ｓｅｒ(Ｓ)、Ｈｉｓ(Ｈ)、Ｇｌｕ(Ｅ)、Ａｓｎ(Ｎ)、Ｇｌｎ(Ｑ)、Ａｓｐ(Ｄ)、Ｌｙｓ(Ｋ)およびＡｒｇ(Ｒ)を含む。

用語“疎水性アミノ酸”は、Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:1.25-142の標準化コンセンサス疎水性尺度に従い、０を超える疎水性を示すアミノ酸を意味する。遺伝子によりコードされた疎水性アミノ酸は、Ｐｒｏ(Ｐ)、Ｉｌｅ(Ｉ)、Ｐｈｅ(Ｆ)、Ｖａｌ(Ｖ)、Ｌｅｕ(Ｌ)、Ｔｒｐ(Ｗ)、Ｍｅｔ(Ｍ)、Ａｌａ(Ａ)、Ｇｌｙ(Ｇ)およびＴｙｒ(Ｙ)を含む。

用語“酸性アミノ酸”は、７未満の側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を意味する。酸性アミノ酸は、典型的に、水素イオンの喪失により、生理的ｐＨで負に荷電した側鎖を有する。遺伝子によりコードされた酸性アミノ酸は、Ｇｌｕ(Ｅ)およびＡｓｐ(Ｄ)を含む。

用語“塩基性アミノ酸”は、７を超える側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を意味する。塩基性アミノ酸は、典型的に、ヒドロニウムイオンとの結合により、生理的ｐＨで正に荷電された側鎖を有する。遺伝子によりコードされた塩基性アミノ酸は、Ｈｉｓ(Ｈ)、Ａｒｇ(Ｒ)およびＬｙｓ(Ｋ)を含む。

用語“極性アミノ酸”は、２個の原子により共有されている電子の対が、原子の一方により近接して維持された少なくとも１個の結合を有するが、生理的ｐＨでは荷電していない、側鎖を有する親水性アミノ酸を意味する。遺伝子によりコードされた極性アミノ酸は、Ａｓｎ(Ｎ)、Ｇｌｎ(Ｑ)、Ｓｅｒ(Ｓ)およびＴｈｒ(Ｔ)を含む。

用語“非極性アミノ酸”は、生理学的ｐＨで荷電しておらず、２個の原子により共有されている電子の対が、一般に２個の原子のそれぞれに均等に維持された結合を有する側鎖を有する疎水性アミノ酸(すなわち、側鎖は極性ではない)を意味する。遺伝子によりコードされた非極性アミノ酸はＬｅｕ(Ｌ)、Ｖａｌ(Ｖ)、Ｉｌｅ(Ｉ)、Ｍｅｔ(Ｍ)、Ｇｌｙ(Ｇ)およびＡｌａ(Ａ)を含む。

用語“芳香族性アミノ酸”は、少なくとも１個の芳香族またはヘテロ芳香環を有する側鎖を有する疎水性アミノ酸を意味する。ある態様において、該芳香族またはヘテロ芳香環は、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＮＯ、−ＮＨ_２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−Ｃ(Ｏ)Ｒ、−Ｃ(Ｏ)ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ、−Ｃ(Ｏ)ＮＨ_２、−Ｃ(Ｏ)ＮＨＲ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲＲなど(ここで、Ｒは、それぞれ独立して、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、置換（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_６−Ｃ_２６）アルカリール、置換（Ｃ_６−Ｃ_２６）アルカリール、５−２０員のヘテロアリール、置換５−２０員のヘテロアリール、６−２６員のアルコヘテロアリールまたは置換６−２６員のアルコヘテロアリールである。）のような１個またはそれ以上の置換基を含み得る。遺伝子によりコードされた芳香族アミノ酸は、Ｐｈｅ(Ｆ)、Ｔｙｒ(Ｙ)およびＴｒｐ(Ｗ)を含む。

用語“脂肪族アミノ酸”は、脂肪族炭化水素側鎖を有する疎水性アミノ酸を意味する。遺伝子によりコードされた脂肪族アミノ酸は、Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）およびＩｌｅ（Ｉ）を含む。

アミノ酸残基Ｃｙｓ（Ｃ）は、他のＣｙｓ(Ｃ)残基または他のスルファニル含有アミノ酸とジスルフィド架橋を形成できる点で、独特である。Ｃｙｓ(Ｃ)残基(および−ＳＨ含有側鎖を有する他のアミノ酸)が、ペプチド内で、還元的遊離−ＳＨまたは酸化的ジスルフィド架橋形態で存在できる能力は、Ｃｙｓ(Ｃ)残基がペプチドの正味の疎水性または親水性特徴のいずれに寄与するかに影響する。Ｃｙｓ(Ｃ)は、Eisenberg(上記のEisenberg, 1984)の標準化コンセンサス尺度に従い０.２９の疎水性を示すが、好ましい態様の目的で、Ｃｙｓ(Ｃ)は、上に定義した一般的分類に関わらず、極性親水性アミノ酸として分類されることが理解されるべきである。

当業者には当然であるが、上に定義したカテゴリーは相互排他的ではない。すなわち、２種またはそれ以上の物理的−化学的特性を示す側鎖を有するアミノ酸が、複数カテゴリーに包含され得る。例えば、Ｔｙｒ(Ｙ)のような極性置換基でさらに置換された芳香族部分を有するアミノ酸側鎖は、芳香族疎水性特性と極性または親水性特性の両方を示すことができ、それゆえに芳香族および極性カテゴリーの両方に包含され得る。任意のアミノ酸の適切な分類は、とりわけ本明細書に提供した詳細な記載に照らして、当業者には明らかであり得る。

上に定義したカテゴリーは、遺伝子によりコードされたアミノ酸の観点で例示されているが、アミノ酸置換は、遺伝子によりコードされたアミノ酸に限定される必要はなく、ある態様において、限定されないのが好ましい。ある態様において、該活性薬物複合体は、遺伝子によりコードされないアミノ酸を含み得る。すなわち、天然に存在する遺伝子によりコードされたアミノ酸に加えて、該活性薬物複合体におけるアミノ酸残基は、天然に存在する非コード化アミノ酸および合成アミノ酸で置換され得る。

該活性薬物複合体のために有用な置換を提供する、ある一般に見られるアミノ酸としては、β−アラニン(β−Ａｌａ)および３−アミノプロピオン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸(Ｄｐｒ)、４−アミノ酪酸などのような他のオメガ−アミノ酸；α−アミノイソ酪酸(Ａｉｂ)；ε−アミノヘキサン酸(Ａｈａ)；δ−アミノ吉草酸(Ａｖａ)；Ｎ−メチルグリシンまたはサルコシン(ＭｅＧｌｙ)；オルニチン(Ｏｒｎ)；シトルリン(Ｃｉｔ)；ｔ−ブチルアラニン(ｔ−ＢｕＡ)；ｔ−ブチルグリシン(ｔ−ＢｕＧ)；Ｎ−メチルイソロイシン(ＭｅＩｌｅ)；フェニルグリシン(Ｐｈｇ)；シクロヘキシルアラニン(Ｃｈａ)；ノルロイシン(Ｎｌｅ)；ナフチルアラニン(Ｎａｌ)；４−フェニルフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン(Ｐｈｅ(４−Ｃｌ))；２−フルオロフェニルアラニン(Ｐｈｅ(２−Ｆ))；３−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））；４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））；ペニシラミン(Ｐｅｎ)；１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸(Ｔｉｃ)；β−２−チエニルアラニン(Ｔｈｉ)；メチオニンスルホキシド(ＭＳＯ)；ホモアルギニン(ｈＡｒｇ)；Ｎ−アセチルリシン(ＡｃＬｙｓ)；２，４−ジアミノ酪酸(Ｄｂｕ)；２，３−ジアミノ酪酸(Ｄａｂ)；ｐ−アミノフェニルアラニン(Ｐｈｅ(ｐＮＨ_２))；Ｎ−メチルバリン(ＭｅＶａｌ)；ホモシステイン(ｈＣｙｓ)、ホモフェニルアラニン(ｈＰｈｅ)およびホモセリン(ｈＳｅｒ)；ヒドロキシプロリン(Ｈｙｐ)、ホモプロリン(ｈＰｒｏ)、Ｎ−メチル化アミノ酸およびペプトイド(Ｎ−置換グリシン)が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書に具体的に記載していない他のアミノ酸残基は、ここに提供する定義に照らして、その観察される物理的および化学的特性に基づき、容易に分類され得る。

上に定義したカテゴリーに従う遺伝子によりコードされたアミノ酸および一般的非コード化アミノ酸の分類を、下記の表２にまとめる。表２は説明のみを目的とし、本明細書に記載する活性薬物複合体の置換に使用され得るアミノ酸残基および誘導体の網羅的リストであることを意図しないことが理解されるべきである。

本明細書に具体的に記載していない他のアミノ酸残基は、ここに提供する定義に照らして、その観察される物理的および化学的特性に基づき、容易に分類され得る。

ほとんどの場合、本活性薬物複合体のアミノ酸は、Ｌ−エナンチオマーアミノ酸で置換され得るが、置換はＬ−エナンチオマーアミノ酸に限定されない。ある態様において、ペプチドは、有利に少なくとも１個のＤ−エナンチオマーアミノ酸を含む。このようなＤ−アミノ酸を含むペプチドは、Ｌ−アミノ酸だけからなるペプチドよりも口腔、消化管または血清での分解に対してより安定であると考えられる。

ある態様において、ここに提供する組成物および方法は、標的とするリシン側鎖アミノ基の増大した選択性を提供し得る。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞８０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞７０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞６０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞５０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞４０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞３０％が、２種以内の活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞８０％が、２種のみの活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞７０％が、２種のみの活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞６０％が、２種のみの活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞５０％が、２種のみの活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞４０％が、２種のみの活性成分からなる。ある態様において、本明細書に開示および記載の活性薬物複合体を含む組成物の＞３０％が、２種のみの活性成分からなる。

１工程複合体形成法−ジアルデヒド還元的アミノ化
一般的複合体形成法Ｉ：
バッファー（ｐＨ３．０−８．０）中の０．５−５０ｍｇ／ｍＬの標的分子Ａの溶液に、２−６当量のジアルデヒド成分および２−５０当量のＮａＢＣＮＨ３を添加した。反応を、０−４０℃にて、０．５−５０時間、緩やかに撹拌または振盪しながら行い、ＨＩＣ−ＨＰＬＣでモニターした。得られた粗ＡＤＣ生成物に、本願出願時の技術水準の方法を用いて、脱塩、バッファー交換／製剤化、および要すれば、精製のような必要な下流工程を行った。最終ＡＤＣ生成物を、ＨＩＣ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、および要すればＬＣ−ＭＳにより同定した。平均ＤＡＲを、ＵＶ吸収および／またはＭＳ分光学により計算した。

一般的スキームＩにより製造され得る化合物の例としては、以下の一般的化合物が挙げられるが、これに限定されない。

一般的複合体形成法ＩＩ：
０−３０％有機溶媒含有バッファー（ｐＨ６．０−９．０）中の０．５−５０ｍｇ／ｍＬの標的分子Ａの溶液に、０．１−１０当量の活性カルボン酸成分を少しずつまたは連続的に添加した。反応を、０−４０℃にて、０．５−５０時間、緩やかに撹拌または振盪しながら行い、ＨＩＣ−ＨＰＬＣでモニターした。得られた粗ＡＤＣ生成物に、本願出願時の技術水準の方法を用いて、脱塩、バッファー交換／製剤化、および要すれば、精製のような必要な下流工程を行った。最終ＡＤＣ生成物を、ＨＩＣ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、および要すればＬＣ−ＭＳにより同定した。平均ＤＡＲを、ＵＶ吸収および／またはＭＳ分光学により計算した。

一般的複合体形成法ＩＩ（段落０１６７）におけるある活性カルボン酸成分は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ_３、−ＯＲ（Ｒ＝置換アルキル、置換アリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環）、ＳＲ（Ｒ＝アルキル、アリール、置換アリール）、−ＯＮ（Ｒ^１）Ｒ^２、ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−、およびＲＳＯ_２−Ｏ−から選択される脱離基Ｇを保持する。

ある活性カルボン酸成分は、一般的複合体形成法ＩＩに従い式Ｉの活性薬物複合体を提供するために、以下の基から選択されるが、これに限定されない。

ある態様において、一般的複合体形成法ＩＩに従い製造される式Ｉの活性薬物複合体は、以下の構造を有するが、これに限定されない。



など。

実施例
一般的合成法
一般的方法Ａ−ＨＡＴＵ仲介アミド結合形成
酸(アミンに対して１．１当量)の無水ＤＭＦ溶液に、ＨＡＴＵ(酸に対して１当量)およびＤＩＥＡ(酸に対して２当量)を添加し、混合物を室温で１分撹拌した。次いで、混合物をアミンのＤＭＦ溶液に添加し、反応混合物を反応が完了するまで室温で撹拌した(ＬＣ／ＭＳによりモニター)。溶媒を減圧下で除去し、残渣を所望により逆相ＨＰＬＣで精製して、最終純粋生成物を得た。

一般的方法Ｂ−ＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成
無水ＤＭＦ中のカルボン酸(１．１当量)、アミンおよびＨＯＡｔ(１．１当量)の撹拌溶液に、ＤＩＣ(１．１当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。反応が完了したら(ＬＣ／ＭＳによりモニター)、溶媒を減圧下で除去し、残渣を所望により逆相ＨＰＬＣで精製して、最終純粋生成物を得た。

一般的方法Ｃ−ＨＣｌ／ジオキサンを用いる酸感受性保護基(Ｂｏｃ、ＴＨＰ、ｔ−Ｂｕ)の除去
酸感受性保護基含有化合物を４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサンに溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、溶液を減圧下で濃縮し、残渣を冷エーテルで２回洗浄した。必要であれば、逆相ＨＰＬＣで精製した。

一般的方法Ｄ−Ｆｍｏｃ基の除去
Ｆｍｏｃ含有化合物を２−５％ピペリジンのＤＭＦ溶液に溶解した。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。必要であれば、逆相ＨＰＬＣで精製した。

一般的方法Ｅ−還元的アルキル化
アミンをＤＭＦに溶解し、アルデヒド(５当量)を添加し、その後、ナトリウムシアノボロハイドライド(５当量)を添加した。ＨＯＡｃを添加して、反応混合物のｐＨを４〜５に調整した。混合物を、反応が完了するまで室温で撹拌した(１〜４時間、ＨＰＬＣでモニター)。必要であれば、逆相ＨＰＬＣで精製した。

一般的方法Ｆ−鹸化−エステルからのＭｅ／Ｅｔの除去
ＭｅＯＨ中のエステルの撹拌溶液に、１Ｍ ＬｉＯＨ水溶液を、混合物のｐＨが約１３〜１４になるまで添加し、反応混合物を、反応が完了するまで室温で撹拌した(〜１６時間、ＨＰＬＣでモニター)。クエン酸(〜１０％水溶液)を添加して反応物を中和し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を所望によりＲＰ−ＨＰＬＣで精製するかまたは次工程に直接用いた。

一般的方法Ｇ−ビス(ｐ−ニトロフェニル)カーボネートでのヒドロキシル／フェノール基活性化
ＴＨＦ／ＤＭＦ(２／１)中のアルコール／フェノールの撹拌溶液に、ビス(ｐ−ニトロフェニル)カーボネート(３〜５当量)、続いてＤＩＥＡ(２〜４当量)を添加し、反応混合物を室温で出発物質の大部分が消費されるまで撹拌した。反応の進行をＬＣ／ＭＳによりモニターした。粗生成物を所望によりフラッシュカラムクロマトグラフィーまたは沈殿と洗浄により精製した。

一般的方法Ｈ−アミンと環状無水物(グルタル酸無水物またはコハク酸無水物)の反応
アミン含有化合物をＤＭＦに溶解した。グルタル酸無水物(３当量)を添加し、その後、ＤＩＥＡ(４当量)を添加した。反応混合物を室温で出発物質の大部分が消費されるまで撹拌した。反応の進行をＬＣ／ＭＳによりモニターした。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、純粋カルボン酸を得た。

一般的方法Ｉ−ｐ−ニトロフェニルカーボネート(例えばＦｍｏｃＶＣ−ＰＡＢ−ＰＮＰ)でのカルバメートの形成
アミン含有化合物をＤＭＦに溶解し、アルキル／アリールｐ−ニトロフェニルカーボネート(１.５当量)を添加し、その後、ＤＩＥＡ(２当量)およびＨＯＢｔ(触媒、５％)を添加した。反応混合物をアミンの大部分が消費されるまで室温で撹拌した。反応の進行をＬＣ／ＭＳによりモニターした。粗生成物を場合によりＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、純粋カルバメートを得た。

一般的方法Ｊ−酸からの活性化エステル(例えば、ＮＨＳ)の形成
酸をＤＣＭに溶解し、必要であればＤＭＦを添加して溶解を助けた。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド(１．５当量)、その後、ＥＤＣ．ＨＣｌ(１．５当量)を添加した。反応混合物を酸の大部分が消費されるまで室温で１時間撹拌した。反応の進行をＲＰ−ＨＰＬＣでモニターした。混合物をＤＣＭで希釈し、クエン酸(１０％水溶液)および塩水で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮乾固した。粗生成物を所望によりＲＰ−ＨＰＬＣまたはシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。

活性薬物複合体形成のための一般的スキーム
複合体形成法Ａ。活性化環状カルボン酸を介するＬｙｓ残基上のコンジュゲーション

環状カルボン酸部分は、環状酸が直接結合されないときでも、直鎖カルボン酸誘導体から容易に得られ得る。例えば、

複合体形成法Ｂ。活性化環状カルボン酸を介するＬｙｓ残基上のコンジュゲーション

実験の記載
工程１。薬物リンカー構築物合成(−Ｌ２−Ｄ)
薬物リンカー構築物合成の方法としては以下が挙げられるが、これに限定されない。
方法１−１：カルバメート結合を介して結合したリンカーおよび薬物。以下の一般的方法を用いた。
活性化およびカルバメート形成のために一般的方法ＧおよびＩ、さらなる誘導体化のための保護基の除去のために一般的方法Ｃ、ＤおよびＦ。

方法１−２：還元的アルキル化を介して結合したリンカーおよび薬物(一般的方法Ｅ）

方法１−３。ヒドロキサメートの形成を介してアルコキシアミノリンカーに結合したカルボン酸部分を含む活性分子(一般的方法ＡまたはＢ)、その後の保護基の除去。

ヒドロキサム酸である活性分子について、構築物が酵素開裂条件下でヒドロキサム酸を遊離するため、上記方法をなお使用できる。対応するカルボン酸から反応を開始する必要がある。

工程２。官能基のＬ１−(Ｌ２−Ｄ)への導入
複合体形成反応に適する官能基の導入方法は、以下であるが、これらに限定されない。
方法２−１。カルボン酸を導入するために環状無水物と反応させるための遊離アミノ基担持化合物(一般的方法Ｈ)

方法２−２。カルボン酸を導入するために二酸と反応させるための遊離アミノ基担持化合物(一般的方法Ｂ）

方法２−３。遊離カルボン酸を復活させるためのカルボン酸保護基除去(一般的方法Ｃ、Ｆ)

または

方法２−４。出発物質として直鎖カルボン酸を用いる環状カルボン酸部分の導入

ＮＨＳエステル（２０ｍｇ）を、アセトニトリル／水（６／４、ｖ／ｖ）に溶解し、ピペリジン ４−カルボン酸（１２ｍｇ）の飽和重炭酸ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣで直接精製して、所望の生成物を凍結乾燥後に、白色固体として得た（１８ｍｇ）。ＭＳ実測値：１２６１．５(Ｍ＋Ｈ)^＋。

方法２−５。カルボン酸部分担持ジアルデヒドでの１級アミンの還元的アルキル化（一般的方法Ｅ）

アミン(ＮＨ_２−Ａｈｘ−マイタンシノール)(２０ｍｇ)をアセトニトリル(２ｍＬ)に溶解し、１ｍＬのＮａＯＡｃ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ＝４．０）を添加した。ジアルデヒド(０．５Ｍ水溶液、０．２ｍＬ)、続いてＮａＣＮＢＨ_３(１０ｍｇ)を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣで直接精製して、所望の酸を凍結乾燥後に、白色固体として得た（１６ｍｇ）。ＭＳ実測値：７９０.５(Ｍ＋Ｈ)^＋。

ジアルデヒドカルボン酸を次のスキームに従い、合成した。

エステル、２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸、２−エトキシｌ−３，４−ジヒドロ−エチルエステルを文献(Chem Communications, (1) 25-26, 1998)に記載の方法に従い合成し、一般的方法Ｆを使用して鹸化し、その後、室温で１時間、１Ｎ ＨＣｌ水溶液で処理した。ジアルデヒド水溶液を、さらに精製することなく直接用いた。

工程３。複合体形成前の最終官能基導入
複合体形成反応前の最終官能基の導入方法は、以下であるが、これらに限定されない。
方法３−１。カルボン酸のその対応する活性化形態への活性化

Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ_３、−ＯＲ(Ｒ＝アルキル、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換ヘテロアリール)、ＳＲ(Ｒ＝置換アルキル、置換アリールヘテロアリール、置換アリール、置換ヘテロアリール)、−ＯＮ(Ｒ^１)Ｒ^２(Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒから選択され、Ｒ＝Ｈ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換ヘテロアリールであるか、またはＲ^１およびＲ^２は一体となって環状構造を形成するか、またはＲ^１＝Ｒ^２＝（＝Ｃ−Ｒ）、ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−、およびＲＳＯ_２−Ｏ−(Ｒ＝アルキル、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換ヘテロアリールである。)から選択される脱離基である。

カルボン酸を、活性化形態を提供する種々の方法を使用して活性化できる。例えば、カルボン酸を、次の方法を用いて活性化できる：Ａ)Tetrahedron 61 (2005) 10827−10852；Ｂ)Beckwith, A. L. J. In The Chemistry of Amides; Zabicky, J., Ed.; Synthesis of Amides; Interscience: London, 1970; pp 105−109；Ｃ)Handbook of Reagents for Organic Synthesis: Activating Agents and Protecting Groups; Pearson, A. J., Roush, W. R., Eds.; Wiley: New York, 1999; pp 370−373；Ｄ)Lloyd−Williams, P., Albericio, F., and Giralt, E. (1997). Chemical approaches to the synthesis of peptide and proteins (Series ed. C. W. Rees). CRC Press, New York；Ｅ)Peptide chemistry: A practical textbook: By M Bodansky. Springer−Verlag, Heidelberg. 1988；およびＦ)The practice of peptide synthesis, 2nd ed., by M. Bodansky and A. Bodansky, Springer−Verlag, New York(それらは各々、引用によりその全体を本明細書に包含される)。

方法３−２。複合体形成反応のためのジアルデヒド部分の導入
エトキシピラン誘導体を酸水溶液で処理して、所望のジアルデヒドを得た。

実施例Ｉ。化合物１０の合成

スキームＩ。試薬および条件：i. ＳＯＣｌ_２、ＥｔＯＨ；ii. ＤＥＰＣ、ＴＦＡ、ＤＣＭ；iii. ＴＦＡ、ＤＣＭ；iv. ＢｒＯＰ、ＤＣＭ、ＤＩＥＡ；ｖ. ＴＦＡ、ＤＣＭ；iv 。ＤＩＥＡ、ＤＣＭ、ＨＯＢｔ。

化合物１（２３．４ｇ、８１．５３ｍｍｏｌ）の乾燥ＥｔＯＨ溶液（２００ｍＬ）に、ＳＯＣｌ_２（１００ｍＬ）を０℃で添加した。混合物を一晩撹拌し、溶媒を真空下の蒸発により除去した。残渣をさらに精製することなく直ぐに次工程に用いた。化合物２（８１．５３ｍｍｏｌ）、化合物３（５０ｇ、１６３．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１５０ｍＬ）溶液に、ＤＥＰＣ（１５．９ｇ、９７．８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（４１ｇ、０．４０８ｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を２時間、０℃で撹拌した。その後、混合物を一晩、室温で撹拌した。溶媒を真空下の蒸発により除去した。残渣を酢酸エチル−トルエン（２：１、９００ｍＬ）で希釈し、１Ｍ ＫＨＳＯ_４、水、飽和ＮａＨＣＯ_３および塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、残渣を得て、これをカラム(ヘキサン：酢酸エチル：ＤＣＭ＝５：１：１)で精製して、３８ｇの化合物４を得た。

Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（３０．６ｇ、０．１４２ｍｏｌ）、化合物５（２５ｇの化合物４から）のＤＣＭ溶液（４００ｍＬ）に、ＢｒＯＰ（２８ｇ、７０．８７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３０ｇ、０．２３６ｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を遮光し、０．５時間、０℃で撹拌した。混合物を４８時間、室温で撹拌した。溶媒を真空下の蒸発により除去した。残渣を酢酸エチル−トルエン（３：１、９００ｍＬ）で希釈し、１Ｍ ＫＨＳＯ_４、水、飽和ＮａＨＣＯ_３および塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、残渣を得て、これをシリカゲルカラム（ヘキサン：酢酸エチル：ＤＣＭ＝３：１：１）で精製して、２２ｇの化合物７を得た。

化合物７（４０ｇ、６６．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（６００ｍＬ）に、ＬｉＯＨ（１４ｇ、０．３３ｍｏｌ）の水（３００ｍＬ）中の混合物を１０℃未満で添加した。混合物を５日、２５℃で撹拌した。ＴＨＦを蒸発により除去した。水層をＥｔ_２Ｏ(２００ｍＬ×３)で洗浄した。水層を０℃にて１Ｎ ＨＣｌでｐＨ２まで酸性化し、混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を水および塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、残渣を得て、これをＰｒｅｐ−ＨＰＬＣで精製して、１４ｇの化合物８を得た。

化合物８（３ｇ）のＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）に、化合物９（３ｇ、一般的方法Ｊに従い、Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−ＯＨからＥＤＣおよびペンタフルオロフェノールを用いて製造）を添加した。ＤＩＥＡ（２．６ｍＬ）を添加し、次いでＨＯＢｔ(触媒１００ｍｇ)を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムで精製して、化合物１０を、白色粉末（３．１ｇ）として得た。Ｃ_３５Ｈ_６４Ｎ_４Ｏ_９のＭＳ ｍ／ｚ計算値６８４.５、実測値７０７.６(［Ｍ＋Ｎａ］^＋)。

実施例ＩＩ−１。化合物１３の合成

スキームＩＩ−１。試薬および条件：i. ＤＩＣ／ＨＯＡｔ、ＤＭＦ、室温、１６時間；ii. ＨＣｌ／ジオキサン

アミノ酸スルホンアミド誘導体１１を、既報の方法（ARKIVOC 2004 (xii) 14-22、またはWO 2007146695）に従い、Ｂｏｃ保護アミノ酸およびシクロプロピル／メチルスルホンアミドを用いて合成し、その後、Ｂｏｃを除去した（一般的方法Ｃ）。

化合物１３を、上記の一般的方法を用いて下記の通りに合成した：Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（化合物１）とアミン１１との間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）、その後の、Ｂｏｃの除去（一般的方法Ｃ）。最終化合物を、逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物１３を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_４２Ｈ_７０Ｎ_６Ｏ_９ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値 ８３４．５、実測値８３５．６（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＩ−２。化合物１６の合成

スキームＩＩ−２。試薬および条件：i. ＤＩＣ／ＨＯＡｔ、ＤＭＦ、室温、１６時間；ii. ＨＣｌ／ジオキサン。

アミノ酸スルホンアミド誘導体１４を、既報の方法（ARKIVOC 2004 (xii) 14-22、またはWO 2007146695）に従い、Ｂｏｃ保護アミノ酸およびシクロプロピル／メチルスルホンアミドを用いて合成し、その後、Ｂｏｃを除去した（一般的方法Ｃ）。

化合物１６を、上記の一般的方法を用いて下記の通りに合成した：Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（化合物１０）とアミン１４との間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）、その後の、Ｂｏｃの除去（一般的方法Ｃ）。最終化合物を、逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物１６を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_４１Ｈ_７０Ｎ_６Ｏ_１０ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値 ８３８．５、実測値８３９．６（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＩ−３。化合物２０の合成

スキームＩＩＣ。試薬および条件：i. ビス（ニトロフェニル）カーボネート、ＤＩＥＡ、ＴＨＦ／ＤＭＦ、室温；ii. ６−アミノヘキサノン酸、ＮａＨＣＯ_３（水溶液）；iii. ＨＣｌ／ジオキサン（４Ｎ）；iv. ＨＣＨＯ、ＮａＣＮＢＨ_３、ＤＭＦ、ＨＯＡｃ；

フェノール１６（１ｍｍｏｌ）を３当量のビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートで処理して、活性化カーボネート１７を形成した(一般的方法Ｇ)。粗生成物をさらに精製することなく直接使用した。６−アミノヘキサン酸(５当量)を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液(５ｍＬ)に溶解し、溶液を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。クエン酸(１０％水溶液)を添加して反応物を酸性化し(ｐＨ＝４〜５)、その後ＥｔＯＡｃ(１５０ｍＬ)で希釈した。有機層を乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濃縮して、粗生成物１８を得て、これを次の方法に付した：Ｂｏｃ除去(一般的方法Ｃ)、ＨＣＨＯを使用する還元的アルキル化。最終生成物をＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、化合物２０を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_４８Ｈ_８１Ｎ_７Ｏ_１３ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値９９５．６、実測値９９６．４([Ｍ＋Ｈ]^＋)。

実施例ＩＩＩ。アルコキシアミンリンカー２４、２５、２６、および２７の合成

スキームＩＩＩ。試薬および条件：i. ＳＯＣｌ_２、ＴＨＦ、１時間；ii. Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＮａＨＣＯ_３、ＤＭＦ、室温、４８時間；iii. ＮＨ_２ＮＨ_２．Ｈ_２Ｏ、ＨＯＡｃ、ＤＭＦ。

実施例ＩＩＩ−１。化合物２４の合成
撹拌中のＦｍｏｃ−ＶＡ−ＰＡＢ（２１）（Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-859）（９ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）に、塩化チオニル（１８ｍｍｏｌ）を滴下した。添加の完了後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ分析（酢酸エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）が、反応の完了を示した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄して、化合物２２をわずかに黄色がかった固体として得た（８．８ｇ）。

化合物２２（６．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。Ｎ−ヒドロキシ−フタルイミド（３．２ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで固体ＮａＨＣＯ_３（３．４ｇ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ＴＬＣ分析は、ほとんどの化合物６１が消費されたことを示した。その後、反応物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３ｘ２００ｍＬ）および塩水（２００ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、化合物２３を褐色固体として得て、それをさらなる精製なしに直接用いた。

上記の工程からの粗化合物２３をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。ＨＯＡｃ（６ｍＬ）を添加し、次いでヒドラジン水和物（５ｍＬ）を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳは、反応の完了を示した。次いで、反応混合物を、１Ｌの水を含むビーカーに撹拌しながら注いだ。沈殿した固体を濾過により集め、水で２回洗浄して、化合物２４を白色固体として得た（純度＞８５％、直接使用可能）。純粋な化合物６３を、ＲＰ−ＨＰＬＣ精製後に得た。Ｃ_３０Ｈ_３４Ｎ_４Ｏ_５のＭＳ ｍ／ｚ 計算値５３０．３、実測値 ５３１．４（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＩＩ−２。化合物２５の合成
化合物２５を、化合物２５の合成について上記の方法を用いて、化合物Ｆｍｏｃ−ＶＣ−ＰＡＢ（Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-859）から出発して合成した。Ｃ_３３Ｈ_４０Ｎ_６Ｏ_６のＭＳ ｍ／ｚ 計算値６１６．３、実測値６１７．５（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＩＩ−３。化合物２６の合成
化合物２６を、化合物２６の合成について上記の方法を用いて、化合物 Ｆｍｏｃ−Ａ−ＰＡＢ（既報の方法に従い合成： Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-859）から出発して合成した。Ｃ_２５Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ_４のＭＳ ｍ／ｚ 計算値４３１．２、実測値４３２．６（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＩＩ−４。化合物２７の合成
化合物２７を、化合物２７の合成について上記の方法を用いて、化合物 Ｆｍｏｃ−Ａｈｘ−ＰＡＢから出発して合成した。Ｃ_２８Ｈ_３１Ｎ_３Ｏ_４のＭＳ ｍ／ｚ 計算値４７３．２、実測値４７４．３（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＩＶ。−Ｌ^１−（Ｌ^２−Ｄ）−の合成

スキームＩＶ。試薬および条件：i. ＤＩＣ、ＨＯＡｔ、ＤＭＦ、室温；ii. ピペリジン、ＤＭＦ；iii. グルタル酸無水物、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温；iv. ＥＤＣ、ＨＯＳｕ、ＤＣＭ、ＤＭＦ、室温。v. ピペリジン４−カルボン酸、ＮａＨＣＯ_３、ＭｅＣＮ／水。

実施例ＩＶ−１。化合物３２の合成
化合物３２を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：オーリスタチン（Auristatin）Ｆと化合物２４との間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）、その後の、Ｆｍｏｃ除去（一般的方法Ｄ）、グルタル酸無水物との反応（一般的方法Ｈ）、および酸の対応するＮＨＳエステルへの変換（一般的方法Ｊ）。

ＮＨＳエステル（２０ｍｇ）を、アセトニトリル／水（６／４、ｖ／ｖ）中に溶解し、ピペリジン ４−カルボン酸（１２ｍｇ）の飽和重炭酸ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、直接ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、所望の生成物を凍結乾燥後に、白色固体として得た（１８ｍｇ）。ＭＳ 実測値１２６１．５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

実施例ＩＶ−２。化合物３４の合成

化合物３４を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物ジメチルオーリスタチンＦと化合物２６との間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）、その後、Ｆｍｏｃの除去（一般的方法Ｄ）、およびＨＡＴＵを用いる酸３３とのアミド形成（一般的方法Ａ）、その後、鹸化して、メチルエステルを除去（一般的方法Ｆ）。最終化合物を、逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物３４を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_６４Ｈ_１０１Ｎ_９Ｏ_１５のＭＳ ｍ／ｚ 計算値１２３５．７、実測値１２３６．４（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例Ｖ −Ｌ^１−（Ｌ^２−Ｄ）−の合成

実施例Ｖ−１。化合物４８の合成

スキームＩＸ。試薬および条件：i. ＤＩＥＡ、ＨＯＢｔ（５％）、ＤＭＦ、室温、４８時間；ii. ピペリジン、ＤＭＦ。

化合物４８を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物１３とＦｍｏｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＰＮＰとの間のカルバメート形成（一般的方法Ｉ）、その後、Ｆｍｏｃを除去して（一般的方法Ｄ）、中間体化合物４７を得て、それを、化合物３４の合成について記載の方法と同様の方法を用いて、最終化合物に変化させた。最終化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物４８を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_７１Ｈ_１１０Ｎ_１２Ｏ_１８ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値１４５０．８、実測値１４５１．７（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例Ｖ−２。化合物４９の合成

化合物４９を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物１３とアルデヒド５０を、還元的アルキル化条件化で反応させ（一般的方法Ｅ）、次いでＭｅ エステルを除去した（一般的方法Ｆ）。最終化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物４９を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_５５Ｈ_９１Ｎ_７Ｏ_１４ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値１１０５．６、実測値１１０６．４（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例Ｖ−３。化合物５５の合成

スキームＶ−３。試薬及び条件：i. ビス（ニトロフェニル）カーボネート、ＤＩＥＡ、ＴＨＦ／ＤＭＦ、室温；ii. ピペリジン ４−カルボン酸、ＮａＨＣＯ_３（水溶液）；iii. ＨＣｌ／ジオキサン（４Ｎ）；iv. ＨＣＨＯ、ＮａＣＮＢＨ_３、ＤＭＦ、ＨＯＡｃ。

フェノール５１（１ｍｍｏｌ）を、３当量のビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートで処理して、活性化カーボネート５２を形成した（一般的方法Ｇ）。粗生成物をさらに精製することなく直接用いた。ピペリジン ４−カルボン酸（５当量）を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）に溶解し、該溶液を添加した。反応混合物を室温にて８時間撹拌した。クエン酸（１０％水溶液）を添加して、反応物を酸性化し(ｐＨ＝４〜５)、次いでＥｔＯＡｃ(１５０ｍＬ)で希釈した。有機層を乾燥させ(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濃縮して、粗生成物５３を得て、これを次の方法に付した：Ｂｏｃ除去（一般的方法Ｃ）、ＨＣＨＯを使用する還元的アルキル化（一般的方法Ｅ）。最終化合物を逆相ＨＰＬＣで精製して、化合物５５を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_５０Ｈ_８１Ｎ_７Ｏ_１３ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値１０１９．６、実測値１０２０．８([Ｍ＋Ｈ]^＋)。

実施例Ｖ−４。化合物６０の合成

スキームＶ−４。試薬および条件：i. ｔ−ブチルブロモ酢酸、Ｋ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、室温、２時間；ii. ＨＣｌ／ジオキサン（４Ｎ）；iii. ＨＣＨＯ、ＮａＣＮＢＨ_３、ＨＯＡｃ、ＤＭＦ。

撹拌中、化合物５９（０．２ｍｍｏｌ、１９０ｍｇ）の無水ＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に、ｔ−ブチルブロモ酢酸（０．３ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、固体の炭酸カリウム（５５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、反応の完了を確認した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸水溶液および塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮乾固させて、粗化合物５７を得て、それを以下の方法に付した：Ｂｏｃおよびｔ−Ｂｕの除去（一般的方法Ｃ）、およびＨＣＨＯを用いる還元的アルキル化（一般的方法Ｅ）。最終化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物５９を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_４５Ｈ_７４Ｎ_６Ｏ_１２ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値９２２．５、実測値９２３．７（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

化合物６０を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物５９とイソニペコチン酸メチルとの間のＨＡＴＵ仲介アミド結合形成（一般的方法Ａ）、次いで、鹸化して、エステルからメチル基を除去（一般的方法Ｆ）。最終化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物６０を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_５１Ｈ_８３Ｎ_７Ｏ_１３ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値１０３３．６、実測値１０３４．７（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例Ｖ−５。化合物６１の合成

化合物６１を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物５９と化合物２６の間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）、次いで、Ｆｍｏｃの除去（一般的方法Ｄ）、酸６２を用いるＨＡＴＵ仲介アミド化反応（一般的方法Ａ）、および鹸化により、エステルからメチル基を徐去（一般的方法Ｆ）。最終化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、化合物６１を凍結乾燥後に、白色粉末として得た。Ｃ_６５Ｈ_１００Ｎ_１０Ｏ_１７ＳのＭＳ ｍ／ｚ 計算値１３２４．７、実測値１３２５．９（［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

実施例ＶＩ。複合体形成前の最終官能基の導入

化合物８５を、上記の一般的方法を用いて以下の通りに合成した：化合物８３と酸８６との間のＤＩＣ／ＨＯＡｔ仲介アミド結合形成（一般的方法Ｂ）。中間体８４をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、得られた純粋な生成物をアセトニトリル／水（６／４、ｖ／ｖ）中の１Ｎ ＨＣｌ水溶液（２０当量）で１時間処理した。粗生成物をさらに精製することなく直接用いた。ＭＳ 実測値：１１３６．６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

抗体−薬物複合体
一般的複合体形成法ＩＩ：
０−３０％有機溶媒含有バッファー（ｐＨ６．０−９．０）中の０．５−５０ｍｇ／ｍＬの標的分子Ａの溶液に、０．１−１０当量の活性カルボン酸成分を少しずつまたは連続的に添加した。反応を、０−４０℃にて、０．５−５０時間、緩やかに撹拌または振盪しながら行い、ＨＩＣ−ＨＰＬＣでモニターした。得られた粗ＡＤＣ生成物に、本願出願時の技術水準の方法を用いて、脱塩、バッファー交換／製剤化、および要すれば、精製のような必要な下流工程を行った。最終ＡＤＣ生成物を、ＨＩＣ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、および要すればＬＣ−ＭＳにより特性化した。平均ＤＡＲを、ＵＶ吸収および／またはＭＳ分光学により計算した。

トラスツズマブおよびエムタンシンを、米国特許番号第８，４３５，５２８号およびその引用文献に記載の条件下で、常套の２工程法を用いて、コンジュゲーションした。

トラスツズマブ−エムタンシン ２工程複合体形成反応の生成物を、以下の条件下でＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した：ＨＰＬＣ カラム：Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫゲル ブチル−ＮＰＲ、４．６ｍｍｘ３．５ｃｍ、２．５ｍｍ；バッファーＡ：２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１．５Ｍ 硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０；バッファーＢ：２０ｍＭ リン酸ナトリウム、２５％ ｖ／ｖ イソプロパノール（isopronal）、ｐＨ７．０；流速：１ｍｌ／分；勾配：１０分 １０％バッファーＢないし８０％バッファーＢ、４分 １００％バッファーＢ；２０μｌ サンプル。

図１は、トラスツズマブ−エムタンシンン ２工程複合体形成反応生成物のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示し、ここでは、ＤＡＲは、ＵＶ_２５２およびＵＶ_２８０に基づき、１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数を示す。コンジュゲートしない抗体（ＤＡＲ＝０）の量は、約１％である。

トラスツズマブおよびエムタンシンを、米国特許番号第４３５，５２８号およびその引用文献に記載の条件下で、常套の１工程法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−エムタンシン １工程複合体形成反応の生成物を、図２に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。コンジュゲートしない抗体（ＤＡＲ＝０）の量は、約１％である。

トラスツズマブおよび化合物３４を、米国特許番号第８，４３５，５２８号およびその引用文献に記載の条件下で、常套のＮＨＳ法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物３４ ＮＨＳ複合体形成反応の生成物を、図３に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。

トラスツズマブおよび化合物３４を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。サンプルを、２０時間反応後および４０時間反応後に取り出した。トラスツズマブ−化合物３４ 選択的複合体形成反応の生成物を、図４に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図４に示す通り、主として０、１および２であった。

トラスツズマブおよび化合物６７を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物６７ 選択的コンジュゲーション反応の生成物を、図５に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。

トラスツズマブおよび化合物６２を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションし、ここで、複合体形成反応に用いた化合物６２とトラスツズマブの比は、１：４であった。トラスツズマブ−化合物６２ 選択的複合体形成反応の生成物を、図６に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図６に示す通り、０（４％）、１（２９％）および２（４５％）であった。

トラスツズマブおよび化合物６２を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションし、ここで、複合体形成反応に用いた化合物６２とトラスツズマブの比は、１：６であった。トラスツズマブ−化合物６２ 選択的複合体形成反応の生成物を、図７に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図７に示す通り、０（３％）、１（２６％）および２（４７％）であった。

トラスツズマブおよび化合物６２を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションし、ここで、複合体形成反応に用いた化合物６２とトラスツズマブの比は、１：７．５であった。トラスツズマブ−化合物６２ 選択的複合体形成反応の生成物を、図８に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図８に示す通り、０（１％）、１（１８％）および２（４６％）であった。

トラスツズマブおよび化合物４９を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物４９ 選択的複合体形成反応の生成物を、図９に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図９に示す通り、０（１１％）、１（２６％）および２（４５％）であった。

トラスツズマブおよび化合物７３を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物７３ 選択的複合体形成反応の生成物を、図１０に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。１抗体当たりにコンジュゲートした薬物の数（ＤＡＲ）は、図１０に示す通りである。

トラスツズマブおよび化合物６０を、常套のＮＨＳ法を用いてコンジュゲーションした。非選択的リンカーと複合体形成したトラスツズマブ−化合物６０の生成物を、図１１に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。図１１に示す通り、非選択的リンカーを用いるとき、主なＡＤＣピークは観察されなかった。

トラスツズマブおよび化合物６０を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。最適リンカーと複合体形成したトラスツズマブ−化合物６０の生成物を、図１１に示す通り、ＨＩＣ−ＨＰＬＣを用いて分析した。図１１に示す通り、最適リンカーを用いるとき、２つの主なＡＤＣピークが観察された。

インビトロ細胞毒性実験
抗体−薬物複合体を細胞毒性について分析した。使用した細胞株は、ＳＫ−ＢＲ−３ヒト乳腺癌(ＨＥＲ２三重陽性)、ＨＣＣ１９５４ヒト腺管癌(ＨＥＲ２三重陽性)、ＭＣＦ７ヒト乳腺癌(ＨＥＲ２正常)、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８ヒト乳腺癌(ＨＥＲ２陰性)であった。これらの細胞はＡＴＣＣから入手可能であった。ＳＫ−ＢＲ−３細胞を、１０％ウシ胎児血清添加マッコイ５Ａ培地(Caisson Labs, North Logan, UT)で増殖させた。ＨＣＣ１９５４細胞を、１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ−１６４０培地(Caisson Labs, North Logan, UT)で増殖させた。ＭＣＦ７細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を、１０％ウシ胎児血清添加ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地(Caisson Labs, North Logan, UT)で増殖させた。ＳＫ−ＢＲ−３細胞、ＭＣＦ７細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を、約７，５００細胞／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングし、ＨＣＣ１９５４細胞を、約２０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングした。化合物または抗体−薬物複合体を同日にデュプリケートで添加した。７２時間、３７℃にてインキュベーション後、CellTiter-Glo(Promega, Madison, WI)を添加し、細胞生存能を、製造者のプロトコルに記載の通りに決定した。生存能パーセントは次の通りに決定した。
生存能％＝デュプリケートの平均発光値(処理ウェル)／未処理ウェルの平均発光値

トラスツズマブおよび化合物５５を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物５５ 選択的複合体形成反応の生成物を、図１２に示す通り、ＳＫ−ＢＲ−３細胞における細胞毒性について分析した。

トラスツズマブおよび化合物６１を、一般的複合体形成法ＩＩの条件下、選択的複合体形成法を用いてコンジュゲーションした。トラスツズマブ−化合物６１ 選択的複合体形成反応の生成物を、図１３に示す通り、ＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における細胞毒性について分析した。

図５について上記の通り、トラスツズマブおよび化合物６７ 選択的複合体形成の生成物を、図１４に示す通り、ＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における細胞毒性について分析した。

図６について上記の通り、トラスツズマブおよび化合物６２ 選択的複合体形成の生成物を、図１５に示す通り、ＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における細胞毒性について分析した。

図１２について上記の通り、トラスツズマブおよび化合物５５ 選択的複合体形成の生成物を、図１６に示す通り、ＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１９５４、ＭＣＦ７、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における細胞毒性について分析した。

Claims (6)

1. 式Ｉａｂ：
   ［式中、
   Ａは抗体または抗体フラグメントであり、
   Ｂは存在せず、
   は
   であり、
   Ｄは活性薬物であり、
   ｎは１であり、
   Ｌ ^１Ａ は存在しないかまたは−(ＣＨ _２ ) _ｎ’ −、−(ＣＨ _２ ＣＨ _２ Ｏ) _ｎ” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、ペプチドおよびオリゴ糖からなる群から選択され；
   Ｌ ^２ は存在しないかまたは−(ＣＨ _２ ) _ｎ”’ −、−(ＣＨ _２ ＣＨ _２ Ｏ) _ｎ”” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、ペプチド、オリゴ糖、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＡｓｎからなる群から選択され；
   ｎ’、ｎ”、およびｎ”’、およびｎ””の各々は独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。］
   を含む、活性薬物複合体またはその薬学的に許容される塩。
2. Ｌ^１Ａが−(ＣＨ_２)_ｎ’ −、−(ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ)_ｎ” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、ペプチド、オリゴ糖およびそれらの組み合わせからなる群より選択され、ここで、ｎ’およびｎ”が独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、請求項１に記載の活性薬物複合体。
3. Ｌ^２がペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ_２）−、Ｏ（酸素）、Ｓ（硫黄）、−ＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、ＰＡＢ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、−（ＣＨ_２）_ｎ”’ 、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ”” 、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ペプチド、オリゴ糖およびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１個の要素を含み、ここで、ｎ”’およびｎ””が独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、請求項１または２に記載の活性薬物複合体。
4. Ｌ ^２が、−（ＣＨ_２）_ｎ”’ −、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ”” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、ペプチド、オリゴ糖およびそれらの組み合わせからなる群より選択され、ここで、ｎ”’およびｎ””が独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の活性薬物複合体。
5. 式ＩＩ−Ａの化合物を式ＩＩ−Ｂの化合物と反応させて、
   ［式中、
   Ａは抗体または抗体フラグメントであり；
   Ｂは存在せず；
   ＸはＮであり；
   ＹはＣであり；
   Ｄは活性薬物であり；
   ｎは１であり；
   Ｌ ^１Ａ は存在しないかまたは−(ＣＨ _２ ) _ｎ’ −、−(ＣＨ _２ ＣＨ _２ Ｏ) _ｎ” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、ペプチドおよびオリゴ糖からなる群から選択され；
   Ｌ ^２ は存在しないかまたは−(ＣＨ _２ ) _ｎ”’ −、−(ＣＨ _２ ＣＨ _２ Ｏ) _ｎ”” −、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(Ａｃ)−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、ペプチド、オリゴ糖、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＡｓｎからなる群から選択され、
   ｎ’、ｎ”、ｎ”’およびｎ””の各々は独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
   Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ_３、−ＯＲ、ＳＲ、−ＯＮＲＲ、ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−、およびＲＳＯ_２−Ｏ−からなる群より選択され、そして
   Ｒは、所望により置換されていてよいアルキル、所望により置換されていてよいアリール、または置換ヘテロ環である。］
   請求項１に記載の活性薬物複合体を得る、化学的合成法。
6. 次のものからなる群から選択される、活性薬物複合体：