JP6207198B2 - 診断試薬用ラテックス粒子及びその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、診断試薬用ラテックス粒子及びその製造方法に関する。

ポリスチレンラテックス粒子等の芳香族ビニル重合体粒子は、診断試薬用担体として好適に用いられている。診断試薬用担体としてのラテックス粒子は乳化重合により製造される、平均粒径値が０．１〜０．５μｍの粒子が一般的に用いられている。より大きな粒径のラテックス粒子を調製する場合、重合時の条件を変更して大粒径化を行う必要がある。例えば、乳化重合時に（１）乳化剤の量を少なくする、（２）重合開始剤の量を少なくする、（３）無機電解質を添加する、などの技術が提案されている。

（１）及び（２）の方法は、重合時の安定性が低下して凝集物が発生し、良好な分散性を有するラテックス粒子が得られにくい。また、得られたラテックス粒子の粒度分布が広がる欠点がある。（３）の方法として、例えば特許文献１には無機電解質の存在下での乳化重合により、０．２μｍ以上の大粒径ラテックス粒子を得る方法が開示されている。また、特許文献２には二価金属硫酸塩の存在下での乳化重合により、１．０〜１０μｍの単分散ビニル重合体粒子の製造方法が開示されている。

しかし、特許文献１に開示される最大の粒径値は０．３μｍ程度である。また、特許文献２に開示される１．０μｍを超える粒子は沈降速度が大きいため、診断試薬として用いた場合の凝集度合いの測定が困難となり診断試薬用担体として用いることはできない。さらに、特許文献１及び特許文献２の方法は乳化剤を使用する製造方法であるため、重合後に得られたラテックス粒子の表面及びラテックス溶液中に残存する乳化剤が、ラテックス粒子を診断試薬用担体とする際に妨害反応を起こす。

例えば、重合時に使用した乳化剤の一部はラテックス粒子表面に吸着または化学結合しているため、ラテックス粒子に抗原または抗体などを感作することが困難になる。また、ラテックス溶液中に遊離して存在する乳化剤は、ラテックス粒子に抗原または抗体などを感作する際にラテックス粒子同士を凝集させてしまうことがある。また、感作ラテックス粒子が得られた場合でも非特異的反応を起こしやすくなる。ラテックス粒子表面及びラテックス溶液中に含まれる乳化剤は、イオン交換法や透析法で除くことは可能だが、これらの工程によってラテックス粒子の安定性が悪くなり診断試薬として使用できなくなる場合がある。

その他に熱可塑性樹脂粒子、耐熱性樹脂粒子、トナー材料粒子、紙用組成物用粒子等の工業材料としてのラテックス粒子の製造方法が提案されている。しかし、これらの製造方法は、特許文献１及び特許文献２のように乳化剤を使用している場合が多いこと、診断試薬として用いるには不適当な特殊な組成、官能基または構造を有する粒子の製造方法であること、粒子が分散するラテックス溶液の状態で製造物が得られないこと等から、診断試薬用担体の製造方法としては不適当である。

診断試薬用担体としてのラテックス粒子を製造するための方法としては、乳化剤を用いないソープフリー重合法による製造方法がある。特許文献３には原子価が二価の金属の酸化物または水酸化物の存在下で行う、スチレンのソープフリー重合法が開示されている。この方法によれば、平均粒径値が０．１〜１．５μｍのラテックス粒子を得ることができるとしている。しかし、特許文献３の方法は重合再現性が悪く、また、重合反応が終了した後、反応系のｐＨを調整してアルカリ条件下で加熱を行う必要があるなど操作が煩雑である。

従来の診断試薬用担体としてのラテックス粒子を大粒径化、例えば０．５〜１．０μｍのラテックス粒子を得るためには、以下の条件を満たした製造方法が必要である。即ち、診断試薬用担体に適した素材である芳香族ビニル単量体を重合してラテックス粒子を得る方法であること、乳化剤を用いないソープフリー重合法であること、粒度分布が良好な単分散性を有するラテックス粒子が得られること、良好な重合再現性を有し操作が簡単な方法であることである。

特開昭５９−２２９０４号公報 特開昭６３−２５４１０４号公報 特開昭５８−１９８５０８号公報

本発明は、第２族の金属を粒子中に含有する診断試薬用ラテックス粒子を提供することを目的とする。また本発明はソープフリー重合法を用いた上記診断試薬用ラテックス粒子の製造方法を提供することを目的とする。特に、平均粒径値が０．５〜１．０μｍで良好な単分散性を有する上記診断試薬用ラテックス粒子、及び良好な重合再現性を有し操作が簡単な上記診断試薬用ラテックス粒子の製造方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、ラテックス粒子に第２族の金属を含有させることにより、上記課題を解決した。また第２族の金属塩及び特定の塩類を溶解した分散媒中で芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行うことより、上記課題を解決した。即ち、本発明は以下のとおりである。

[１]第２族の金属を含有する芳香族ビニル重合体からなる診断試薬用ラテックス粒子であって、前記第２族の金属のラテックス粒子中の含有量が、０．００５〜０．０５重量％である診断試薬用ラテックス粒子。
[２]第２族の金属が、マグネシウムである[１]に記載の診断試薬用ラテックス粒子。
[３]診断試薬用ラテックス粒子の平均粒径値が、０．５〜１．０μｍである[１]または [２]に記載の診断試薬用ラテックス粒子。
[４]第２族の金属の硫酸塩、アルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物の存在下で芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行うことを特徴とする[１]〜 [３]のいずれかに記載の診断試薬用ラテックス粒子の製造方法。
[５]第２族の金属の硫酸塩、アルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物を分散媒に溶解させる工程１、分散媒に芳香族ビニル単量体を添加する工程２、重合開始剤の存在下でソープフリー重合を行う工程３、を含む[１]〜 [３]のいずれかに記載の診断試薬用ラテックス粒子の製造方法。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子は、平均粒径値が０．５〜１．０μｍの単分散性の診断試薬用ラテックス粒子であり、測定性能に優れたラテックス試薬を調整できる。また、本発明の診断試薬用ラテックス粒子の製造方法によれば、上記の診断試薬用ラテックス粒子を、粒度分布の単分散性を損なうことなく、かつ簡単な操作で再現性よく製造できる。

ＨＢｓ抗体量と吸光度の関係を示す検量線図

本発明は、第２族の金属を含有する芳香族ビニル重合体からなる診断試薬用ラテックス粒子である。第２族の金属とは、周期律表第２族の金属であり、具体的にはマグネシウム、カルシウム、ストロンチウム、バリウムである。好ましい第２族の金属はマグネシウム、カルシウムであり、より好ましい第２族の金属はマグネシウムである。

本発明でいう「ラテックス粒子が第２族の金属を含有する」とは、第２族の金属がラテックス粒子の表面または粒子内部に存在すること、かつ第２族の金属が、通常の診断試薬の製造工程及び使用工程の環境下において遊離、脱離又は剥離しない状態でラテックス粒子表面又は内部に存在することを意味する。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子は、上記の第２族の金属のラテックス粒子中の含有量が０．００５〜０．０５重量％である。第２族の金属の含有量が０．００５重量％未満の場合、及び第２族の金属の含有量が０．０５重量％を超える場合、平均粒径値が０．５〜１．０μｍの単分散粒子となりにくく、試薬性能が低下する場合がある。好ましい第２族の金属の含有量は０．００７〜０．０４重量％である。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子の平均粒径値は、下限が０．５μｍ、上限が１．０μｍであることが好ましい。平均粒径値が０．５μｍ未満の場合、及び平均粒径値が１．０μｍを越える場合、試薬性能が低下する場合がある。より好ましくは平均粒径値の下限が０．５５μｍ、上限が０．９５μｍである。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子は、粒径値の変動係数（ＣＶ値）が好ましくは５％以下である。粒径値の変動係数（ＣＶ値）は、透過型電子顕微鏡によりラテックス粒子像を撮影し、得られた撮影画像について粒子個数１０００個以上を画像解析して求めることができる。
ＣＶ値（％）＝(標準偏差／平均値)×１００

本発明の診断試薬用ラテックス粒子は、芳香族ビニル重合体からなる診断試薬用ラテックス粒子であることが好ましい。芳香族ビニル重合体は、芳香族ビニル単量体を重合して得られる重合体であることが好ましい。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子を構成する芳香族ビニル単量体としては、スチレン、メチルスチレン、ジメチルスチレン、エチルスチレン、イソプロピルスチレン、クロロスチレン、クロロメチルスチレン、ブロムスチレン、ビニルトルエン、ビニルキシレン、ビニルナフタレン、スチレンスルホン酸、スチレンスルホン酸塩、メチルスチレンスルホン酸塩、エチルスチレンスルホン酸塩等の非架橋性芳香族ビニル単量体、ジビニルベンゼン、トリビニルベンゼン、ジビニルトルエン、ジビニルキシレン、ジビニルエチルベンゼン、ジビニルナフタレン、ジビニルアントラセン等の架橋性芳香族ビニル単量体等が挙げられる。好ましくは非架橋性芳香族ビニル単量体である。より好ましくはスチレン、スチレンスルホン酸塩である。本発明の診断試薬用ラテックス粒子は、上記の二種以上の芳香族ビニル単量体から構成されてもよい。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子を構成する単量体としては、上記芳香族ビニル単量体と、芳香族ビニル単量体と共重合可能な単量体（以下、「共重合単量体」と記載する場合がある）の共重合体から構成されてもよい。共重合単量体としては、好ましくはアクリル酸、メタクリル酸、及びこれらのエステル類等のアクリル化合物またはメタクリル化合物が挙げられる。共重合単量体は二種類以上を用いてもよい。共重合単量体を用いる場合の好ましい添加量の上限は、芳香族ビニル単量体１００重量部に対して２０重量部である。２０重量部を超える場合、診断試薬として用いた場合の反応性が低下する場合がある。より好ましくは芳香族ビニル単量体のみから構成される場合である。

本発明は、上記の「第２族の金属を含有する診断試薬用ラテックス粒子」を製造するための方法を含む（以下、本発明方法ともいう）。本発明方法としては、一種以上の第２族の金属の硫酸塩、一種以上のアルカリ金属のリン酸塩、及び一種以上のアルカリ金属の水酸化物の存在下で芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行う方法である（以下、第２族の金属の硫酸塩、アルカリ金属のリン酸塩、及びアルカリ金属の水酸化物をまとめて単に「塩類」と記載する場合がある）。

本発明方法に用いる第２族の金属の硫酸塩は、周期律表第２族元素の硫酸塩であり、具体的には、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸ストロンチウム、硫酸バリウム等が挙げられる。好ましくは硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、より好ましくは硫酸マグネシウムである。第２族の金属の硫酸塩は二種類以上を用いてもよい。

本発明方法に用いるアルカリ金属のリン酸塩としては、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸リチウム、又はこれらの一水素塩及び二水素塩等が挙げられる。好ましくはリン酸カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムである。アルカリ金属のリン酸塩は二種類以上を用いてもよい。

本発明方法に用いるアルカリ金属の水酸化物としては、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。好ましくは水酸化カリウム、水酸化ナトリウムである。アルカリ金属の水酸化物は二種類以上を用いてもよい。

上記塩類の総濃度の好ましい下限は０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、上限は５０ｍｍｏｌ／Ｌである。０．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満の場合は平均粒径値が小さくなり、５０ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合は平均粒径値が大きくなり、凝集物が発生しやすくなる。より好ましい下限は１ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましい上限は２０ｍｍｏｌ／Ｌである。

本発明方法は、上記塩類の存在下で、上記芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行う製造方法である。本明細書における「ソープフリー重合法」の用語は、本発明の分野で一般的に理解されている意味を有する。すなわち、単量体を重合させる際、単量体が乳化可能な量の界面活性剤等の乳化剤を共存させることなく、単量体に難溶性であり分散媒に易溶性の重合開始剤を用いて行う公知の重合法である。

重合開始剤としては、過硫酸塩、過酸化物、アゾ化合物等が挙げられる。過硫酸塩としては、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム等が挙げられる。過酸化物としては、過酸化水素、ｔ−ブチルヒドロパーオキサイド、ｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート、ｔ−ブチルパーオキシピバレート等が挙げられる。アゾ化合物としては、２、２’−アゾビス（２−メチルプロパンアミジン）ジヒドロクロライド、２、２’−アゾビス｛２−［１−（２−ヒドロキシエチル）−２−イミダゾリン−２−イル］プロパン｝ジヒドロクロライド、２、２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］、２、２’−アゾビス（１−イミノ−１−ピロリジノ−２−メチルプロパン）ジヒドロクロライド、２、２’−アゾビス｛２−メチル−Ｎ−［１、１−ビス（ヒドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチル］プロピオンアミド｝、２、２’−アゾビス［２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオンアミド］、４、４’−アゾビス−４−シアノ吉草酸、及びこれらの塩類等が挙げられる。特に好ましい重合開始剤は過硫酸塩である。重合開始剤の濃度の好ましい下限は０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、上限は１．０ｍｍｏｌ／Ｌである。０．１ｍｍｏｌ／Ｌより小さい場合は粒径が小さくなり、１．０ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合は重合反応が速すぎるために温度制御が困難になる。

本発明方法のより好ましい製造方法は、塩類を分散媒に溶解させる工程１、分散媒に芳香族ビニル単量体を添加する工程２、重合開始剤の存在下でソープフリー重合を行う工程３を含む製造方法である。

この製造方法では、まず分散媒に上記の塩類を溶解させる（工程１）。好ましい分散媒は、水または水と水溶性有機溶媒の混合溶媒である。より好ましくは水である。塩類の溶解方法としては、塩類を同時に分散媒に添加して溶解させる方法、各塩類を順次添加して溶解させる方法等が挙げられる。より好ましくはアルカリ金属の水酸化物を最後に溶解させる方法である。アルカリ金属の水酸化物を最後に溶解させることにより、第２族の金属の硫酸塩及びアルカリ金属のリン酸塩を析出させることなく溶解できる場合がある。塩類を溶解後、芳香族ビニル単量体を分散媒に添加する（工程２）。添加方法に特に制限はなく、一括添加してもよいし滴下等の方法により逐次添加してもよい。次に上記の重合開始剤を添加し重合開始剤の存在下でソープフリー重合を行う（工程３）。

重合反応としては、重合開始剤からフリーラジカルを発生させるための公知の手段を用いることができる。好ましくは加温により重合反応を行う方法である。好ましい重合温度の下限は５０℃、上限は９０℃である。重合温度が５０℃未満の場合、重合反応に長時間を要し粒度分布の単分散性を損なう可能性がある。また重合温度が９０℃を超える場合、凝集物が発生する可能性がある。なお上記の工程１〜３を通じて乳化剤の添加は行わない。

本発明の診断試薬用ラテックス粒子に、測定対象物質と特異的に反応する公知の抗体、抗原または核酸などの物質を感作させることにより、診断試薬を調製できる。感作方法は公知の物理吸着法または化学結合法等を用いることができる。また必要に応じて公知のブロッキング処理等を行ってもよい。

ラテックス粒子に感作させる抗体としては、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を用いることができる。また、抗体の種類としては、免疫グロブリンやＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又はＦｖ等の抗体フラグメント等も用いることができる。

本発明のラテックス粒子により得られた診断試薬によって測定できる物質は、血液、血清、血漿、尿、髄液、又は細胞若しくは組織破砕液などの生体試料に含まれる、公知の測定対象物質等が挙げられる。

（実施例１）
本発明に用いる塩類の存在下で二種類の芳香族ビニル単量体を用いたソープフリー重合を行った。
温度センサー、撹拌装置、窒素導入管、滴下ロート、還流冷却管を装着した２Ｌセパラブルフラスコに純水（分散媒）１２００ｇを仕込んだ。分散媒を撹拌しながら、０．１ｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム・７水和物（第２族の金属の硫酸塩：和光純薬製特級）水溶液６ｍＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素カリウム（アルカリ金属のリン酸塩：和光純薬製特級）水溶液１５ｍＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌの水酸化カリウム（アルカリ金属の水酸化物：和光純薬製特級）水溶液１０ｍＬをこの順に分散媒に添加して溶解した（塩類の総濃度２．５２ｍｍｏｌ／Ｌ）。セパラブルフラスコに窒素ガスを通気した後に昇温を開始し、７５℃に達した時点でスチレン（芳香族ビニル単量体：和光純薬製特級）１５０ｇ 、スチレンスルホン酸ナトリウム（芳香族ビニル単量体：東ソー製）０．２０ｇ、及び過硫酸カリウム（重合開始剤：メルク製）０．２０ｇを分散媒に添加し、４０時間、７５℃で重合反応を行った。

ラテックス粒子の平均粒径値及び粒度分布を測定した。得られた重合物（ラテックス粒子を含むラテックス）を回収し、透過型電子顕微鏡（日本電子製ＪＥＭ１０１０型）によりラテックス粒子像を撮影した。得られた撮影画像をＩｍａｇｅ ＨｙｐｅｒII（デジモ
製）を用いて粒子個数１０００個以上を画像解析して、平均粒径値及び粒径値の変動係数（ＣＶ値）を測定した。平均粒径値は０．５８μｍ、粒径値のＣＶ値は４．９％であった。ＣＶ値が単分散性の指標である５％以下であり、粒度分布が単分散性のラテックス粒子が得られたことが確認できた。用いた塩類の濃度、平均粒径値、粒度分布の変動係数を表１に示す。

次にラテックス粒子中の第２族の金属（マグネシウム）の含有量を測定した。得られた重合物（ラテックス粒子を含むラテックス）２ｍLを遠心処理（８０００ｒｐｍ×１０分）し上清を除去した。沈降物に、重合時と同濃度の第２族の金属（０．１ｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム・７水和物）を含む水溶液２ｍＬに再分散した。再び遠心処理し上清を除去した。沈降物に純水２ｍLを添加して再分散し遠心処理した。純水の添加、再分散及び遠心処理を合計３回繰り返した。沈降物に純水２ｍLを添加して再分散させた後、分散液全量を９５℃で２時間乾固した。乾燥させたラテックス粒子１ｇを加熱して炭化し、硝酸処理してＩＣＰ―ＡＥＳ（高周波誘導結合プラズマ発光分光分析法）によりマグネシウム含有量（重量％）を求めた（検出限界０．００５％）。得られた結果を表１に示す。

（実施例２〜４）
実施例１で用いた塩類の濃度を変更した以外は実施例１と同様の操作により重合反応を行い実施例２〜４とした。用いた塩類の濃度、平均粒径値、粒径値のＣＶ値及び第２族の金属の含有量を表１に示す。いずれも平均粒径値が０．５８〜０．９２μｍで粒度分布が単分散性のラテックス粒子が得られた。

（比較例１〜７）
実施例２で用いた塩類の全てを用いないまたは一部を用いない以外は実施例２と同様の操作により重合反応を行い比較例１〜４とした。また、実施例４で用いた塩類の一部を用いない以外は実施例４と同様の操作により重合反応を行い比較例５〜７とした。用いた塩類の種類、濃度、平均粒径値及び粒径値のＣＶ値を表１に示す。比較例１は塩類を全く含まない系、比較例２は第２族の金属の硫酸塩及びアルカリ金属のリン酸塩のみを用いた系、比較例３は第２族の金属の硫酸塩及びアルカリ金属の水酸化物のみを用いた系、比較例４はアルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物のみを用いた系で実施した。また、比較例５は第２族の金属の硫酸塩のみを用いた系、比較例６はアルカリ金属のリン酸塩のみを用いた系、比較例７はアルカリ金属の水酸化物のみを用いた系で実施した。いずれの比較例においても平均粒径値が０．５μｍ未満と小さく、粒度分布の単分散性が悪かった。また、比較例２及び比較例５では凝集物が発生して、分散したラテックス粒子が得られなかった。また比較例３では、第２族の金属の硫酸塩を用いたにも関わらず、ラテックス粒子中に第２族の金属は検出できなかった。

（実施例５及び６）
実施例２で用いた塩類の種類を変更した以外は実施例２と同様の操作により重合反応を行い実施例５及び６とした。用いた塩類の種類、濃度、平均粒径値、粒径値のＣＶ値及び第２族の金属の含有量を表１に示す。実施例５はアルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物を実施例２から変更して行ったが粒度分布の単分散性が良好なラテックス粒子が得られた。また、実施例６は第２族の金属の硫酸塩を実施例２から変更して行ったが、粒度分布の単分散性が良好なラテックス粒子が得られた。

（比較例８〜１１）
実施例２で用いた第２族の金属の硫酸塩を、本発明に用いる塩類以外の塩類に変更した以外は実施例２と同様の操作により重合反応を行い比較例８〜１１とした。用いた塩類の種類、濃度、平均粒径値、粒径値のＣＶ値及び第２族の金属の含有量を表１に示す。比較例８〜１０では平均粒径値が０．５μｍ未満と小さく、粒度分布の単分散性が悪かった。また、比較例１１では凝集物が発生して粒子が分散したラテックス粒子が得られなかった。また比較例９及び比較例１０では、第２族の金属の塩を用いたにも関わらず、ラテックス粒子中に２族の金属は検出できなかった。

（比較例１２〜１３）
実施例２と同様の塩類を用いかつ濃度を変更した以外は、実施例２と同様の操作により重合反応を行い、比較例１２及び比較例１３とした。用いた塩類の種類、濃度、平均粒径値、粒径値のＣＶ値及び第２族の金属の含有量を表１に示す。比較例１２及び比較例１３ではラテックス粒子中のマグネシウムの含有量が本発明の規定範囲外となり、粒度分布の単分散性が悪かった。

（比較例１４〜１５）
塩類として水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム用いかつ濃度を変更した以外は、実施例２と同様の操作により重合反応を行い、比較例１４及び比較例１５とした。用いた塩類の種類、濃度、平均粒径値、粒径値のＣＶ値及び第２族の金属の含有量を表１に示す。比較例１４及び比較例１５では、平均粒径値は０．７２〜０．９５μｍであったが、ラテックス粒子中にマグネシウムは検出できず、粒度分布の単分散性が悪かった。

以上の結果から、平均粒径値が０．５μｍ〜１．０μｍで、粒度分布の単分散性が良好なラテックス粒子を得るためには、粒子中に本発明の規定範囲内の第２族の金属を含有すること、及び本発明に規定する三種類の塩類を用いる必要があることが確認できた。

（評価１）
本評価では、同一条件で繰り返し重合を行った際の製造再現性を、得られたラテックス粒子の平均粒径値のバラツキを比較することで確認した。ラテックス粒子が得られなかった比較例２、５、１１を除く実施例及び比較例の条件で各１０回ずつ重合を行い、実施例１の方法により平均粒径値を測定した。重合反応１０回における平均粒径値の平均値（ｎ＝１０）及び平均粒径値のＣＶ値を表２に示す。実施例では平均粒径値のバラツキ度合いを表すＣＶ値が５％以下と良好であったのに対し、比較例ではＣＶ値が大きく重合再現性が悪かった。

（評価２）
本評価では、実施例１、実施例２、比較例１、比較例４、比較例１２及び比較例１３で得られたラテックス粒子を診断試薬用担体として用いた場合の評価を行った。
（１）ＨＢｓ抗原感作ラテックス粒子の調製
ＨＢｓ抗原２．０ｍｇ／ｍＬを溶解した３６ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ６．６）７．５ｍＬに、実施例及び比較例の各ラテックス粒子（固形分１０％（Ｗ／Ｖ））それぞれ１ｍＬを添加し、３０℃で６０分間攪拌した。この緩衝液に、ウシ血清アルブミン（以下「ＢＳＡ」）を１．０重量％含有する１００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）８．５ｍＬを添加し、３０℃で６０分間攪拌した。撹拌後、４℃で２０分間、１８０００ｒｐｍで遠心分離した。得られた沈殿物に、ＢＳＡを０．５重量％含有する１００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）２０ｍＬを添加した。得られた混合液を３０℃で７日間インキュベーションし、ＨＢｓ抗原感作ラテックス粒子を調製した。これを第１試薬とした。

（２）検体希釈用液の調製
ＢＳＡを１．０重量％含有する５０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、平均分子量５０万のポリエチレングリコールを、１．０重量％の濃度になるように溶解した。これを第２試薬とした。

（３）検量線の作成
０、１５０、３００、６００、１２００ｍＩＵ／ｍＬの各濃度のＨＢｓ抗体を含むヒト血清を検量線作成用の標準溶液とした。各標準溶液２０μＬと上記第２試薬１２０μＬを混合して３７℃で加温した後、上記第１試薬１２０μＬを添加して撹拌した。第１試薬添加後から１分後及び５分後の７５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の吸光度差（ΔＡｂｓ）を自動分析装置（日立製作所製自動分析装置７１７０）で測定した。得られた検量線を図１に示す。

（４）検体測定時の再現性
上記（３）における標準溶液２０μＬの代わりに、検体２０μＬを使用した以外は上記（３）と同様に操作し、得られたΔＡｂｓを上記検量線に外挿して、検体中のＨＢｓ抗体量を算出した。ＨＢｓ抗体陽性の血清（陽性検体）１０種類を各１０回測定した際の測定値の再現性（ＣＶ値）を表３に示す。実施例１及び２のラテックス粒子を用いた場合は、ＣＶ値が５％以下と良好な再現性を示した。比較例のラテックス粒子を用いた場合は、ＣＶ値がそれぞれ６％以上と再現性が悪かった。比較例のラテックス粒子を用いた場合は、標準溶液及び検体の測定は可能であるが、再現性試験におけるＣＶ値が有意に低いことが確認できた。また、他の実施例３〜６のラテックス粒子を用いた場合も、同様にＣＶ値が５％以下と良好な再現性を示した。

本発明によれば、平均粒径値が粒径０．５〜１．０μｍで単分散性の診断試薬用ラテックス粒子が提供できる。また、本発明方法によれば、特定の塩類を溶解させた分散媒中で芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行うことより、簡単な操作で、粒度分布の単分散性を損なうことなく、かつ再現性よく本発明の診断試薬用ラテックス粒子を製造できる。

Claims (5)

1. 周期律表第２族の金属を含有する芳香族ビニル重合体からなる診断試薬用ラテックス粒子であって、前記第２族の金属のラテックス粒子中の含有量が、０．００５〜０．０５重量％である診断試薬用ラテックス粒子。
2. 周期律表第２族の金属が、マグネシウムである請求項１に記載の診断試薬用ラテックス粒子。
3. 診断試薬用ラテックス粒子の平均粒径値が、０．５〜１．０μｍである請求項１または２に記載の診断試薬用ラテックス粒子。
4. 周期律表第２族の金属の硫酸塩、アルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物の存在下で芳香族ビニル単量体のソープフリー重合を行うことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の診断試薬用ラテックス粒子の製造方法。
5. 周期律表第２族の金属の硫酸塩、アルカリ金属のリン酸塩及びアルカリ金属の水酸化物を分散媒に溶解させる工程１、分散媒に芳香族ビニル単量体を添加する工程２、重合開始剤の存在下でソープフリー重合を行う工程３、
   を含む請求項１〜３のいずれかに記載の診断試薬用ラテックス粒子の製造方法。

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