JPS585658A - 免疫血清学的検査試薬用担体 - Google Patents
免疫血清学的検査試薬用担体Info
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- JPS585658A JPS585658A JP10419881A JP10419881A JPS585658A JP S585658 A JPS585658 A JP S585658A JP 10419881 A JP10419881 A JP 10419881A JP 10419881 A JP10419881 A JP 10419881A JP S585658 A JPS585658 A JP S585658A
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- monomer
- test reagent
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は光学的測定装置に適用する免疫血清学的検査試
薬ｃ以下検査試薬と記す。）用担体に関する。
薬ｃ以下検査試薬と記す。）用担体に関する。
近年、医療分野に於て疾病の診断のために微量物質、Ｉ
￥１に抗原及び抗体を迅速、簡便、精度よく定量するこ
とが非常に重要な課題となっている０さらに血液が被検
体の場合にはできるだけ少量の自液で検査定量できる方
法が望まれており、特に小児科領域での免疫化学的測定
の場合にはその要求が非常に強いのが現状である。
￥１に抗原及び抗体を迅速、簡便、精度よく定量するこ
とが非常に重要な課題となっている０さらに血液が被検
体の場合にはできるだけ少量の自液で検査定量できる方
法が望まれており、特に小児科領域での免疫化学的測定
の場合にはその要求が非常に強いのが現状である。
抗原又は抗体などの血清学的活性物質を担体Ｋ１１着あ
るいは結合させて（以下本操作を感作と記す）免疫血清
学的凝集反応若しくＦｉ凝集抑制反応を行い、対応する
抗体又は抗原などの存在を検査する免疫血清学的検査は
簡便かつ鋭敏な方法であり広く利用されている。この検
査試薬用担体としてポリスチレンなどの重合体粒子を用
いることはよく知られたことである。さらにスルホン酸
基、アばド基などの官能基で変性した重合体粒子も用い
られている（例えば、特開昭５５−１３１００８号公報
、特公昭５６−９１６１号公報）。これらの検査試薬用
担体に要求される性能としては抗原又は抗体などを検査
試薬用担体に感作した検査試薬のラテックス状態でのコ
ロイド化学的安定性と免疫血清学的凝集反応性とが挙け
られる。しかし検査試薬のラテックス状態でのコロイド
化学的安定性を向上させると免疫血清学的凝集反応性社
低下しく感度の低下）、逆に免疫血清学的凝集反応性を
高めるためにコロイド化学的安定性を低下させると非特
異的に凝集し実用に供し得なくなる。このように互いに
相反するコロイド化学的安定性と免疫血清学的凝集反応
性とを同時に満足させる検査試薬用担体を得ることは従
来極めて困難であった。
るいは結合させて（以下本操作を感作と記す）免疫血清
学的凝集反応若しくＦｉ凝集抑制反応を行い、対応する
抗体又は抗原などの存在を検査する免疫血清学的検査は
簡便かつ鋭敏な方法であり広く利用されている。この検
査試薬用担体としてポリスチレンなどの重合体粒子を用
いることはよく知られたことである。さらにスルホン酸
基、アばド基などの官能基で変性した重合体粒子も用い
られている（例えば、特開昭５５−１３１００８号公報
、特公昭５６−９１６１号公報）。これらの検査試薬用
担体に要求される性能としては抗原又は抗体などを検査
試薬用担体に感作した検査試薬のラテックス状態でのコ
ロイド化学的安定性と免疫血清学的凝集反応性とが挙け
られる。しかし検査試薬のラテックス状態でのコロイド
化学的安定性を向上させると免疫血清学的凝集反応性社
低下しく感度の低下）、逆に免疫血清学的凝集反応性を
高めるためにコロイド化学的安定性を低下させると非特
異的に凝集し実用に供し得なくなる。このように互いに
相反するコロイド化学的安定性と免疫血清学的凝集反応
性とを同時に満足させる検査試薬用担体を得ることは従
来極めて困難であった。
４ＩＫ近年、免疫血清学的検査の分野において抗原又は
抗体などの微量物質を定性的だけではなく定量的に測定
することが重要な課題となっている。従来は検査試薬を
ラテックス状態でガラス板上で被検体と混合し反応させ
、検査試薬の凝集状態を肉眼で観察することＫよって検
査目的物質を定性的に検出してい九が、この凝集状態を
内眼で観察することの代りに光学的測定装置、例えば分
光光度計、濁度計、準弾性光散乱測定装置などを用いて
光学的特性値を測定することによって定量的に検出しよ
うとする試みが多くなされている０例えば検査試薬が凝
集する現象を利用して上置液の濁度の減少率を測定する
方法及び検査試薬の凝集による吸光度や散乱強度を測定
する方法などが知られている（ＣＲＯＡＴＩＣＡ Ｃ
ＨＥＭＩＣＡ ＡＣＴＡ４２（１９７０３Ｐ。
抗体などの微量物質を定性的だけではなく定量的に測定
することが重要な課題となっている。従来は検査試薬を
ラテックス状態でガラス板上で被検体と混合し反応させ
、検査試薬の凝集状態を肉眼で観察することＫよって検
査目的物質を定性的に検出してい九が、この凝集状態を
内眼で観察することの代りに光学的測定装置、例えば分
光光度計、濁度計、準弾性光散乱測定装置などを用いて
光学的特性値を測定することによって定量的に検出しよ
うとする試みが多くなされている０例えば検査試薬が凝
集する現象を利用して上置液の濁度の減少率を測定する
方法及び検査試薬の凝集による吸光度や散乱強度を測定
する方法などが知られている（ＣＲＯＡＴＩＣＡ Ｃ
ＨＥＭＩＣＡ ＡＣＴＡ４２（１９７０３Ｐ。
４５７〜４６６、 Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
１２（１９７５１−Ｐ。
１２（１９７５１−Ｐ。
３４９〜３５１、特開昭５３−２４０１５％同５４−１
０９４９４など）。これらの方法は検査試薬の免疫血清
学的凝集反応による反応系の吸光度。
０９４９４など）。これらの方法は検査試薬の免疫血清
学的凝集反応による反応系の吸光度。
散乱光強度などの光学的特性値を測定することによって
定量化しようとするものであるが、いずれの方法も凝集
反応による反応系の光学的特性の変化が小さいために精
度、再現性などに問題があつ九〇また検査試薬の光学的
特性の経時変化がしはしは起シ、実用上支障を生じると
いう問題もあった。
定量化しようとするものであるが、いずれの方法も凝集
反応による反応系の光学的特性の変化が小さいために精
度、再現性などに問題があつ九〇また検査試薬の光学的
特性の経時変化がしはしは起シ、実用上支障を生じると
いう問題もあった。
本発明者らは上記問題を改善すべく鋭意研究した結果、
光学的測定装置に適用する検査試薬用担体として有用な
重合体粒子を見出し本発明を完成した。
光学的測定装置に適用する検査試薬用担体として有用な
重合体粒子を見出し本発明を完成した。
本発明の目的は良好なコロイド化学的安定性と免疫血清
学的凝集反応性を具備し凝集反応又は凝集抑制反応によ
る反・応系の光学的特性の変化を光学的測定装置によシ
側足し、検査目的物質の定量的検出を良好な感度でもっ
て可能ならしめる検査試薬用担体を提供することＫある
。
学的凝集反応性を具備し凝集反応又は凝集抑制反応によ
る反・応系の光学的特性の変化を光学的測定装置によシ
側足し、検査目的物質の定量的検出を良好な感度でもっ
て可能ならしめる検査試薬用担体を提供することＫある
。
本発明和従って、芳香族ビニル化合物を主成分とする単
量体を乳化重合するに際して、乳化剤を該単量体１００
重量部に対して０．０５重量部以下使用し又は使用しな
いで得られた重合体粒子からなることを特徴とする光学
的測定装置に適用する検査試薬用担体が提供される。
量体を乳化重合するに際して、乳化剤を該単量体１００
重量部に対して０．０５重量部以下使用し又は使用しな
いで得られた重合体粒子からなることを特徴とする光学
的測定装置に適用する検査試薬用担体が提供される。
以下に本発明の詳細な説明する〇
本発明の検査試薬用担体である重合体粒子は芳香族ビニ
ル化合物を主成分とし、好ましくは７０〜１００重量Ｘ
、特に好ましくは９５〜１００重量％の芳香族ビニル化
合物を含有する単量体を重合した重合体粒子である〇 芳香族ビニル化合、物としては例えばスチレン、α−メ
チルスチレン、ｉニルトルエン、ハロゲン化スチレンな
どを挙げることができ、好ましくはスチレンである。こ
れらの芳香族ビニル化合物を併用することもできる〇 上記芳香族ビニル化合物と共重合できる単量体としては
１例えばアクリル酸メチル、アクリル酸ブチル、アクリ
ル酸２−エチルヘキシルなどのアクリル酸エステル、メ
タクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、メタクリル酸
うクリルなどのメタクリル酸エステル、塩化ビニル、塩
化ビニリデンなどのハロゲン化１ニル化合物、アクリロ
ニトリル、メタクリロニトリルなどのシアノエチレン化
合物、アクリル酸、メタクリル酸などのモノカルボン酸
、イタコン酸、マレイン酸、フマール酸などのジカルボ
ン酸、イタコン酸モノメチルエステル、マレイン酸モノ
ラクリルエステルなどのジカルボン酸モノエステルなど
があり、これらを併用することもできる。
ル化合物を主成分とし、好ましくは７０〜１００重量Ｘ
、特に好ましくは９５〜１００重量％の芳香族ビニル化
合物を含有する単量体を重合した重合体粒子である〇 芳香族ビニル化合、物としては例えばスチレン、α−メ
チルスチレン、ｉニルトルエン、ハロゲン化スチレンな
どを挙げることができ、好ましくはスチレンである。こ
れらの芳香族ビニル化合物を併用することもできる〇 上記芳香族ビニル化合物と共重合できる単量体としては
１例えばアクリル酸メチル、アクリル酸ブチル、アクリ
ル酸２−エチルヘキシルなどのアクリル酸エステル、メ
タクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、メタクリル酸
うクリルなどのメタクリル酸エステル、塩化ビニル、塩
化ビニリデンなどのハロゲン化１ニル化合物、アクリロ
ニトリル、メタクリロニトリルなどのシアノエチレン化
合物、アクリル酸、メタクリル酸などのモノカルボン酸
、イタコン酸、マレイン酸、フマール酸などのジカルボ
ン酸、イタコン酸モノメチルエステル、マレイン酸モノ
ラクリルエステルなどのジカルボン酸モノエステルなど
があり、これらを併用することもできる。
また１本発明の検査試薬用担体である重合体粒子の粒子
径＃ｉ、特に限定するものではないが。
径＃ｉ、特に限定するものではないが。
通常粒子径分布は狭い方が望ましく、平均粒子径として
は１１〜２４ｍが好ましく、％に好ましくはα２〜１．
３μｍである。平均粒子径がαＩ ７ｍ未満もしくは２
μｍを越えた場合は光学的特性値を測定するときにＭｆ
が低下する傾向がある。
は１１〜２４ｍが好ましく、％に好ましくはα２〜１．
３μｍである。平均粒子径がαＩ ７ｍ未満もしくは２
μｍを越えた場合は光学的特性値を測定するときにＭｆ
が低下する傾向がある。
上記重合体粒子は単量体１００重量部に対して乳化剤を
０．０５重量部以下使用し又は使用しないで、好ましく
は乳化剤を０．０２重量部以下使用し又は使用しないで
乳化重合することによりラテックス状態で得られるもの
である。乳化剤を０．０５重量部を越えて用いた場合は
、検査試薬として被検体と抗原−抗体反応を行ない光学
的測定装置で反応系の光学的特性値を測定してもその精
度が悪くかつ再現性４悪いために被検体中の抗原又は抗
体を定量的に測定することができない。このような理由
から乳化剤を使用しない乳化重合により製造する方法が
最も好ましい。
０．０５重量部以下使用し又は使用しないで、好ましく
は乳化剤を０．０２重量部以下使用し又は使用しないで
乳化重合することによりラテックス状態で得られるもの
である。乳化剤を０．０５重量部を越えて用いた場合は
、検査試薬として被検体と抗原−抗体反応を行ない光学
的測定装置で反応系の光学的特性値を測定してもその精
度が悪くかつ再現性４悪いために被検体中の抗原又は抗
体を定量的に測定することができない。このような理由
から乳化剤を使用しない乳化重合により製造する方法が
最も好ましい。
上記重合体粒子の製造方法の実施態様としては芳香族ビ
ニル化合物を主成分とする単量体１００重量部にアル碑
ルメルカプタンα２〜２０重量部を混合し、これを過硫
酸塩０．１〜５重量部、乳化剤０〜α０５重量部を含む
ホヤに一括して又は連続的にもしくは逐
次添加して重合する方法を挙けることができる。
ニル化合物を主成分とする単量体１００重量部にアル碑
ルメルカプタンα２〜２０重量部を混合し、これを過硫
酸塩０．１〜５重量部、乳化剤０〜α０５重量部を含む
ホヤに一括して又は連続的にもしくは逐
次添加して重合する方法を挙けることができる。
単量体１００重量部にアルキルメルカプタン０．２〜ｚ
Ｏ重量部を混合する際、単量体に一括混合してもよいし
単量体の一部にアルキルメルカプタンを混合してアルキ
ルメルカプタンを混合しない単量体と同時に一括して又
は連続的にもしくは逐次添加してもよい。アルキルメル
カプタンがα２重量部未満の場合は重合中に多量の凝固
物が生成しやすく、？−０重量部を越える量を加えて本
重合中に凝固物が生成しやすくなる０アルキルメルカプ
タンとしては例えばｎ −オクチルメルカプタン、ｎ−
デシルメルカプタン％ ｎ−ドデシルメルカプタ／％
ｔ−）’ｆデシルメルカプタンどの長鎖アルキルメルカ
プタンがあり、アル中ル基の炭素数は８〜１６が適当で
ある。
Ｏ重量部を混合する際、単量体に一括混合してもよいし
単量体の一部にアルキルメルカプタンを混合してアルキ
ルメルカプタンを混合しない単量体と同時に一括して又
は連続的にもしくは逐次添加してもよい。アルキルメル
カプタンがα２重量部未満の場合は重合中に多量の凝固
物が生成しやすく、？−０重量部を越える量を加えて本
重合中に凝固物が生成しやすくなる０アルキルメルカプ
タンとしては例えばｎ −オクチルメルカプタン、ｎ−
デシルメルカプタン％ ｎ−ドデシルメルカプタ／％
ｔ−）’ｆデシルメルカプタンどの長鎖アルキルメルカ
プタンがあり、アル中ル基の炭素数は８〜１６が適当で
ある。
過硫酸塩としては例えば過硫酸アンモニウム、過硫酸カ
リタム。過９Ｌ酸ナすリクムなどを挙げることができる
。使用量は０．１〜５重量部が好ましい。α１重量部未
満では重合速度が著しく遅くなる。５重量部を越えて用
いると重合体粒子の粒子径分布が広くなり好ましくない
。
リタム。過９Ｌ酸ナすリクムなどを挙げることができる
。使用量は０．１〜５重量部が好ましい。α１重量部未
満では重合速度が著しく遅くなる。５重量部を越えて用
いると重合体粒子の粒子径分布が広くなり好ましくない
。
重合温度は５０〜１００℃が好ましく、ｒｔに６０〜９
０℃が好ましい。５０’Ｃ未満の温度では重合速度が遅
く重合体粒子の粒子径分布が広くなる傾向がある。
０℃が好ましい。５０’Ｃ未満の温度では重合速度が遅
く重合体粒子の粒子径分布が広くなる傾向がある。
単量体とフルキルメルカプタンの混合物は連続的Ｋ又は
逐次添加することが望ましい。混合物を３時間未満で添
加し終ると、得られた重合体粒子を検査試薬用担体とし
て用いた場合、経時的に感度が低下しやすくなる。ｔ′
ｆｉ−添加が２０時間を越えると重合体粒子の粒子径分
布が広くなる場合があり好ましくない。好ましくけ１０
〜１５時間で連続的に又は逐次添加することである。
逐次添加することが望ましい。混合物を３時間未満で添
加し終ると、得られた重合体粒子を検査試薬用担体とし
て用いた場合、経時的に感度が低下しやすくなる。ｔ′
ｆｉ−添加が２０時間を越えると重合体粒子の粒子径分
布が広くなる場合があり好ましくない。好ましくけ１０
〜１５時間で連続的に又は逐次添加することである。
上記混合物の添加は重合溶液の液面上よ少滴下または流
下して行なってもよいし、また液面下より注入してもよ
い。また、混合物の添加は所定の時間内に均等Ｋかっ連
続的に行なわれるが、場合によシ実質的に連続添加と見
なし得る程度に間欠的にすなわち逐次添加してもよい。
下して行なってもよいし、また液面下より注入してもよ
い。また、混合物の添加は所定の時間内に均等Ｋかっ連
続的に行なわれるが、場合によシ実質的に連続添加と見
なし得る程度に間欠的にすなわち逐次添加してもよい。
乳化剤を使用する場合の乳化剤としてはドデシルベンゼ
ンスルホン酸ナトリウム、ラクリル硫酸ナトリウム、ラ
クリル硫酸アンモニタム。
ンスルホン酸ナトリウム、ラクリル硫酸ナトリウム、ラ
クリル硫酸アンモニタム。
ドデシルジフェニルオキサイドジスルホン酸ナトリウム
などの陰イオン乳化剤およびポリオ命シエチレンラ９リ
ルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェノールエー
テルなどの非イオン性乳化剤などを挙げることができ、
これらは単独又は組合せて用いることができる。これら
の内、特に好ましい乳化剤はドデシルベンゼンスルホン
酸ナトリウム、ラクリル硫酸ナトリウム。
などの陰イオン乳化剤およびポリオ命シエチレンラ９リ
ルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェノールエー
テルなどの非イオン性乳化剤などを挙げることができ、
これらは単独又は組合せて用いることができる。これら
の内、特に好ましい乳化剤はドデシルベンゼンスルホン
酸ナトリウム、ラクリル硫酸ナトリウム。
ドデシルジフェニルオキサイドジスルホン酸ナトリウム
である。
である。
重合終了後に必要に応じて脱型量体のためのストリッピ
ングもしくは接縦調整のための希釈または濃縮を行なう
ことができる。また、上記によシ得られるラテッス中の
重合体粒子を検査試薬用担体として用いる場合、通常感
作前に遠心分離、限外濾過などの方法でラテックス中に
混在する低分子量重合体や不純物を除去する操作を行な
う。なお本発明の検査試薬用担体及び感作するととＫよ
り得られる検査試薬は１通常水中に分散した状ｍ％すな
わちラテックス状態で保存するが、凍結乾燥しておいて
もよい。凍結乾燥するためにはラテックスに安定剤とし
て各穫アミノ酸類、特にグリシン及びグルタミン酸ナト
リウムをそれぞれ０．２〜２重量％並びにデキストラン
をα３〜３重量％を加えて液体窪素あるいは液体空気中
などで急速凍結してから凍結乾燥する。
ングもしくは接縦調整のための希釈または濃縮を行なう
ことができる。また、上記によシ得られるラテッス中の
重合体粒子を検査試薬用担体として用いる場合、通常感
作前に遠心分離、限外濾過などの方法でラテックス中に
混在する低分子量重合体や不純物を除去する操作を行な
う。なお本発明の検査試薬用担体及び感作するととＫよ
り得られる検査試薬は１通常水中に分散した状ｍ％すな
わちラテックス状態で保存するが、凍結乾燥しておいて
もよい。凍結乾燥するためにはラテックスに安定剤とし
て各穫アミノ酸類、特にグリシン及びグルタミン酸ナト
リウムをそれぞれ０．２〜２重量％並びにデキストラン
をα３〜３重量％を加えて液体窪素あるいは液体空気中
などで急速凍結してから凍結乾燥する。
上記検査試薬用担体ＫＭ原又は抗体を感作することによ
って得られる検査試薬と被検体とを混合し、抗原−抗体
反応を行ない、光学的測定装置を用いて定量的に検査目
的物質を検出する方法は特に限定するものではないが、
例えば本発明者らが見出した次記の方法が好ましいもの
ということができる。
って得られる検査試薬と被検体とを混合し、抗原−抗体
反応を行ない、光学的測定装置を用いて定量的に検査目
的物質を検出する方法は特に限定するものではないが、
例えば本発明者らが見出した次記の方法が好ましいもの
ということができる。
すなわち上記検査試薬用担体に抗原又は抗体を愚作した
検査試薬と被検体とを液体媒体中で反応せしめ１次いで
該反応混合物中の該検査試薬の濃度がα０５重量％以下
になるように希釈し。
検査試薬と被検体とを液体媒体中で反応せしめ１次いで
該反応混合物中の該検査試薬の濃度がα０５重量％以下
になるように希釈し。
この希釈され九反応混合物に１９０〜６００ｎｍの波長
の光を照射して光学的特性値を測定し、あらかじめ同様
の方法で求めである既知量の検査目的物質と光学的測定
値との関係と比較することによる抗原又は抗体の定量的
測定方法である。
の光を照射して光学的特性値を測定し、あらかじめ同様
の方法で求めである既知量の検査目的物質と光学的測定
値との関係と比較することによる抗原又は抗体の定量的
測定方法である。
この方法は検査試薬量及び被検体量が微量であってもそ
の反応混合物を希釈する工程を含むために十分に光学的
特性値を測定することができ小児科領域などにおける貴
重な被検体を節約することができる。まえ、抗原−抗体
反応を比較的高濃度で行なうために１反応完了までに要
する時間が短かく迅速に定量的に高精度で測定すること
ができ、また従来実用化されていた放射免疫反応による
定量的測定と異なり非常に安全な方法である。さらにこ
の方法は単に抗原又は抗体のみではなくハプテンのごと
き不完全抗原も高精度で定量的に測定することができる
。
の反応混合物を希釈する工程を含むために十分に光学的
特性値を測定することができ小児科領域などにおける貴
重な被検体を節約することができる。まえ、抗原−抗体
反応を比較的高濃度で行なうために１反応完了までに要
する時間が短かく迅速に定量的に高精度で測定すること
ができ、また従来実用化されていた放射免疫反応による
定量的測定と異なり非常に安全な方法である。さらにこ
の方法は単に抗原又は抗体のみではなくハプテンのごと
き不完全抗原も高精度で定量的に測定することができる
。
なお１本発明の検査試薬用担体以外の担体を用いてこの
測定方法を適用しても良好な結果を得ることができない
。
測定方法を適用しても良好な結果を得ることができない
。
次にこの測定方法を詳細に説明する。
本発明の検査試薬用担体に抗原又は抗体を感作する方法
＃ｉ過常用いられている方法を適用することがてき、抗
原又は抗体が物理的に吸着さｔｔテイテもＬ＜＊また化
学的に結合されていてもよい０さらにハプテンのような
不完全抗原を感作するときに検査試薬用担体をカップリ
ング剤などで化学的に変性した後感作してもよい。
＃ｉ過常用いられている方法を適用することがてき、抗
原又は抗体が物理的に吸着さｔｔテイテもＬ＜＊また化
学的に結合されていてもよい０さらにハプテンのような
不完全抗原を感作するときに検査試薬用担体をカップリ
ング剤などで化学的に変性した後感作してもよい。
検査試薬と被検体を反応させる液体媒体としては水が最
適であるが、水と水溶性有機溶媒との混合物も使用する
ことができ、水溶性有機溶媒としては例えばメタノール
、エタノール、アセトンなどを挙げることができる。
適であるが、水と水溶性有機溶媒との混合物も使用する
ことができ、水溶性有機溶媒としては例えばメタノール
、エタノール、アセトンなどを挙げることができる。
検査試薬と被検体を反応させるときの液体媒体中の検査
試薬濃度は通常０．０５重量％以上、好ましくはαｌ〜
５重量％、特４’１ＦｔＬ＜Ｆｉｏ、３〜２重量％であ
る。検査試薬濃度が高い程、反応時間は短く＆シ検査目
的物に対する感度が向上するが、５重量％を越えると操
作上の誤差が生じやすくなる。反応は通常１時間以内に
終了する。
試薬濃度は通常０．０５重量％以上、好ましくはαｌ〜
５重量％、特４’１ＦｔＬ＜Ｆｉｏ、３〜２重量％であ
る。検査試薬濃度が高い程、反応時間は短く＆シ検査目
的物に対する感度が向上するが、５重量％を越えると操
作上の誤差が生じやすくなる。反応は通常１時間以内に
終了する。
反応終了後、反応混合物中の検査試薬濃度が０、ＯＳ重
量％以下通常０．００２〜０．０５重量％になるように
緩衝液などで希釈し％１９０〜６００ ａｍの波長の光
を照射して光学的特性値を測定する。希釈した反応混合
物中の検査試薬濃度が０．０５重量％を越えると光学的
測定値の信頼性が低下する。
量％以下通常０．００２〜０．０５重量％になるように
緩衝液などで希釈し％１９０〜６００ ａｍの波長の光
を照射して光学的特性値を測定する。希釈した反応混合
物中の検査試薬濃度が０．０５重量％を越えると光学的
測定値の信頼性が低下する。
また光学的特性値を測定するために照射する光の波長が
１９０〜６００ ｎｍ以外の場合は被検体中の検査目的
物質の量の多少による光学的特性値の違いがほとんどな
く検査目的物質の定量を行なうことができない。好まし
い波長は２００〜６００ ａｍ特に２５０〜５００ｎｍ
である０希釈した反応混合物の光学的特性値を測定する
ときの反応混合物の光路長は特に限定するものではない
が検査試薬及び被検体の使用量及び測定の容易さを考慮
するとα５〜１００４４？に２〜５闘が好ましい。
１９０〜６００ ｎｍ以外の場合は被検体中の検査目的
物質の量の多少による光学的特性値の違いがほとんどな
く検査目的物質の定量を行なうことができない。好まし
い波長は２００〜６００ ａｍ特に２５０〜５００ｎｍ
である０希釈した反応混合物の光学的特性値を測定する
ときの反応混合物の光路長は特に限定するものではない
が検査試薬及び被検体の使用量及び測定の容易さを考慮
するとα５〜１００４４？に２〜５闘が好ましい。
上記によって測定した光学的特性値はあらかじめ同様の
方法で求めである既知量の検査目的物質と光学的特性値
との関係と比較することによって被検体中の検査目的物
質の量を求めることができる。
方法で求めである既知量の検査目的物質と光学的特性値
との関係と比較することによって被検体中の検査目的物
質の量を求めることができる。
本発明の検査試薬用担体は、コロイド化学的安定性と免
疫血清学的凝集反応性を具備し、抗原−抗体反応による
凝集反応又は凝集抑制反応を光学的測定装置で測定し検
車目的物質の定量的検出を良好な感度で可能とすること
ができ極めて優れた検査試薬用担体である。
疫血清学的凝集反応性を具備し、抗原−抗体反応による
凝集反応又は凝集抑制反応を光学的測定装置で測定し検
車目的物質の定量的検出を良好な感度で可能とすること
ができ極めて優れた検査試薬用担体である。
次に本発明の実施例を示す。なお実施例に於いて部及び
％は重量による。
％は重量による。
実施例１及び比較例１
（重合体粒子の製造）
攪拌機、冷却コイル、温度検出器、ジャケットなどを装
備したステンレス製反応器（容量５４）を窒素置換し九
。次いで試料番号ｌ、２゜４及び５の場合μ第１表記載
の成分を仕込み攪拌しながら８０℃で２４時間重合した
。ｆた試デシルベンゼンスルホン酸ナトリウムヲ仕込ミ
８０℃にした後、スチレン、メタクリル酸及びｔ−ドデ
シルメルカプタンの混合液を１０時間かけて連続的に仕
込みさらに９０℃で３時間重合し九〇いずれの場合も重
合転化率は９８％以上であった。得られたラテックスを
水酸化ナトリクムで参Ｂ９に調整し、さらにスチームス
トリッピング及び減圧蒸留で残留未反応単量体を除去し
た。得られたラテックスの重合体粒子の平均粒子径を第
１！！に示す。重合体粒子の粒子径は比較的揃っていた
。
備したステンレス製反応器（容量５４）を窒素置換し九
。次いで試料番号ｌ、２゜４及び５の場合μ第１表記載
の成分を仕込み攪拌しながら８０℃で２４時間重合した
。ｆた試デシルベンゼンスルホン酸ナトリウムヲ仕込ミ
８０℃にした後、スチレン、メタクリル酸及びｔ−ドデ
シルメルカプタンの混合液を１０時間かけて連続的に仕
込みさらに９０℃で３時間重合し九〇いずれの場合も重
合転化率は９８％以上であった。得られたラテックスを
水酸化ナトリクムで参Ｂ９に調整し、さらにスチームス
トリッピング及び減圧蒸留で残留未反応単量体を除去し
た。得られたラテックスの重合体粒子の平均粒子径を第
１！！に示す。重合体粒子の粒子径は比較的揃っていた
。
以下余白
（熱会合免疫グロブリンＧ感作検査試薬の調製）１７１
５Ｍリン酸塩緩衝１１（ｐＨ７，２）１容と生理食塩液
３容との混合液（以下ＰＢＳと記す）に実施例１及び比
較例１で得た試料番号１〜５号のラテックスの重合体粒
子の濃度がα２５％になるように懸濁し、これに熱会合
免疫グロブリンＧの２００５ｐｌｄ液を等景趣え、室温
で６０分間保ち感作した。感作後１ａＯＯＯｒｐｍ３０
分関連心して重合体粒子を分取し、ＰＢＳで洗浄した後
希釈液（牛血清アルブばン０．１％を含むＰＢＳ）Ｋ重
合体粒子の濃度がα２５％になるように懸濁して、熱会
合免疫グロブリンＧ感作検査試薬を得た。
５Ｍリン酸塩緩衝１１（ｐＨ７，２）１容と生理食塩液
３容との混合液（以下ＰＢＳと記す）に実施例１及び比
較例１で得た試料番号１〜５号のラテックスの重合体粒
子の濃度がα２５％になるように懸濁し、これに熱会合
免疫グロブリンＧの２００５ｐｌｄ液を等景趣え、室温
で６０分間保ち感作した。感作後１ａＯＯＯｒｐｍ３０
分関連心して重合体粒子を分取し、ＰＢＳで洗浄した後
希釈液（牛血清アルブばン０．１％を含むＰＢＳ）Ｋ重
合体粒子の濃度がα２５％になるように懸濁して、熱会
合免疫グロブリンＧ感作検査試薬を得た。
（リフマチ因子の測定）
リフマチ因子陽性血清を１０名分混合してプール血清を
調製し、これをＰＢＳで１：１Ｇ％１：２Ｇ、１：４０
％ １：８０，１：１６Ｇ及びｌ：８２０に希釈した。
調製し、これをＰＢＳで１：１Ｇ％１：２Ｇ、１：４０
％ １：８０，１：１６Ｇ及びｌ：８２０に希釈した。
この希釈血清５０μｍに前記検査試薬を５０＃Ｊ加え３
１℃で６０分反応させ、これＫＰＢＳＬ１５−を添加希
釈後石英セル（光路長Ｓｕ＞Ｋ入れ分光光度計（日立製
作所製モデル２０Ｇ−２θ型）を使用し吸光度を測定し
た。測定波長ａ、３００ｆｉｍを用いた０測定値は検査
試。
１℃で６０分反応させ、これＫＰＢＳＬ１５−を添加希
釈後石英セル（光路長Ｓｕ＞Ｋ入れ分光光度計（日立製
作所製モデル２０Ｇ−２θ型）を使用し吸光度を測定し
た。測定波長ａ、３００ｆｉｍを用いた０測定値は検査
試。
薬＃ｃｐｎｓ７ｔ、ｚ２ｓ＊を加えた本のの吸光度を基
準ｓｒ Ｌ ｓ各希釈液の吸光度との差を求めた。結果
を第１１￥ＩＫ示す０第１図から明らかなように実施例
１の試料番号１〜３で得た重合体粒子を使用した検査試
薬ａ Ｑ ’７−ｆチ因子陽性血清の希釈率によって吸
光度の差が大きく変化していることがわかる。これに対
して比較例１の試料番号４〜５を使用した検査試薬はリ
フマチ因子陽性血清の希釈率による吸光度の差が小さい
ことがわかる０すなわちリフマチ因子（抗体）量と吸光
度変化に相関関係が存在することを示しており、あらか
じめ第１図のように標準検量線を作成しておき被検体を
用いて同様に吸光度を測定することにより被検体中の抗
体量を高精度で測定できることがわかる。
準ｓｒ Ｌ ｓ各希釈液の吸光度との差を求めた。結果
を第１１￥ＩＫ示す０第１図から明らかなように実施例
１の試料番号１〜３で得た重合体粒子を使用した検査試
薬ａ Ｑ ’７−ｆチ因子陽性血清の希釈率によって吸
光度の差が大きく変化していることがわかる。これに対
して比較例１の試料番号４〜５を使用した検査試薬はリ
フマチ因子陽性血清の希釈率による吸光度の差が小さい
ことがわかる０すなわちリフマチ因子（抗体）量と吸光
度変化に相関関係が存在することを示しており、あらか
じめ第１図のように標準検量線を作成しておき被検体を
用いて同様に吸光度を測定することにより被検体中の抗
体量を高精度で測定できることがわかる。
実施例２
（重合体粒子の製造）
実施例１．試料番号３と同様にしてスチレン９８％、メ
タクリル酸２％を重合し、平均粒子径０．７μｍの重合
体粒子を得た。
タクリル酸２％を重合し、平均粒子径０．７μｍの重合
体粒子を得た。
（抗β、ミクログロブリン抗体感作検査試薬の調製）濃
度）００．−μｆ／ｘｔの抗β１イクログロプリン抗体
のＰＢＳｉＩ液と上記重合体粒子の濃度がα６２％体粒
子を分取しＰＢＳで洗浄した後希釈液（牛自清アルプぐ
ン０．１％を含むＰＢＳ＞Ｋ重合体粒子濃度がα６２％
になるように＠濁して抗β、イクロクロプリン抗体感作
検査試薬を得た０（β、＜クログロブリン濃度定） 上記で調整した検査試薬５０μＪを小試験管にとりこれ
に第２図に示す濃度のβ！イクログｐプリｙのＰＢＳ溶
液５０μＪを加え混合し室温にて６０分間保った後ＰＢ
Ｓ Ｌｌ ５１１４を添加１石英セル（光路長Ｓｍａｌ
ｌ） Ｋ入れ３７０ ｍｍ及び６００ ｎｏｇの波長の
吸光度を分光光度計を用いて測定した。
度）００．−μｆ／ｘｔの抗β１イクログロプリン抗体
のＰＢＳｉＩ液と上記重合体粒子の濃度がα６２％体粒
子を分取しＰＢＳで洗浄した後希釈液（牛自清アルプぐ
ン０．１％を含むＰＢＳ＞Ｋ重合体粒子濃度がα６２％
になるように＠濁して抗β、イクロクロプリン抗体感作
検査試薬を得た０（β、＜クログロブリン濃度定） 上記で調整した検査試薬５０μＪを小試験管にとりこれ
に第２図に示す濃度のβ！イクログｐプリｙのＰＢＳ溶
液５０μＪを加え混合し室温にて６０分間保った後ＰＢ
Ｓ Ｌｌ ５１１４を添加１石英セル（光路長Ｓｍａｌ
ｌ） Ｋ入れ３７０ ｍｍ及び６００ ｎｏｇの波長の
吸光度を分光光度計を用いて測定した。
その結果を第２図に示す。この結果からＩｔ ｔクログ
ロブリン量と吸光度差との間に相関関係が存在すること
がわかる。
ロブリン量と吸光度差との間に相関関係が存在すること
がわかる。
実施例１
（熱会合免疫グロブリンＧ感作検査試薬の調整）濃度ｓ
ｏ ｏ ｓＰ／ｄの熱会合免疫グロブリンのＰＢＳ溶
液と実施例２で製造した重合体粒子の０．６２％懸濁液
を郷量づつ混合し室温にて６０分間保ち感作を行った。
ｏ ｏ ｓＰ／ｄの熱会合免疫グロブリンのＰＢＳ溶
液と実施例２で製造した重合体粒子の０．６２％懸濁液
を郷量づつ混合し室温にて６０分間保ち感作を行った。
感作後４０００ｒ’ｐｍ１５分間遠心分離して重合体粒
子を分取しＰＢＳで洗浄した後希釈液（牛血アルプイン
α１％を含むＰＢＳ）Ｋ重合体粒子濃度が０．６２％に
なるように懸濁して熱会合免疫グロブリンＧ感作検査試
薬を得た。
子を分取しＰＢＳで洗浄した後希釈液（牛血アルプイン
α１％を含むＰＢＳ）Ｋ重合体粒子濃度が０．６２％に
なるように懸濁して熱会合免疫グロブリンＧ感作検査試
薬を得た。
（見り！チ因子の測定）
実施例ＩＫ述べた方法に従って行った０測定＃１４ＧＯ
，５００，６００ａｍで行いプッンク（血清を添加しな
いもの）との吸光度差と血清中のリフマチ因子のａｍと
の関係を第３図に示す。
，５００，６００ａｍで行いプッンク（血清を添加しな
いもの）との吸光度差と血清中のリフマチ因子のａｍと
の関係を第３図に示す。
この結果からリフマチ因子（抗体）量と、吸光度差の間
に明白な相関関係が存在することがわかる。また短波長
側で測定する方がより鋭敏に測定できることを示してい
る。これらの事実から上述の方法を用いれば、被検体中
の抗原又は抗体の標準検量線をららかしめ作製しておけ
ば抗原−抗体反応によ抄生じた検査試薬凝集塊を含む被
検体液の吸光度を測定することにより目的とする被検体
中の抗原又は抗体量を高精度で定量することができるこ
とがわかる。
に明白な相関関係が存在することがわかる。また短波長
側で測定する方がより鋭敏に測定できることを示してい
る。これらの事実から上述の方法を用いれば、被検体中
の抗原又は抗体の標準検量線をららかしめ作製しておけ
ば抗原−抗体反応によ抄生じた検査試薬凝集塊を含む被
検体液の吸光度を測定することにより目的とする被検体
中の抗原又は抗体量を高精度で定量することができるこ
とがわかる。
【図面の簡単な説明】
第１図は実施例１及び比較例１で求めたリフマチ因子陽
性血清の希釈率と吸光度差の関係を示す。第２図は実施
例２で求めたβｆ（クログロブリン濃度と吸光度差の関
係を示す。第３図は実施例３て求め九り９マチ因子陽性
血清の希釈率と吸光度差の関係を示す。 特許出願人 日本合成ゴム株式会社 第１図 リウマチ因子陽性血清の者、釈率 第２図 （μＷ、ａｌｌ 、・ｊ２くりログロブリン濃度
性血清の希釈率と吸光度差の関係を示す。第２図は実施
例２で求めたβｆ（クログロブリン濃度と吸光度差の関
係を示す。第３図は実施例３て求め九り９マチ因子陽性
血清の希釈率と吸光度差の関係を示す。 特許出願人 日本合成ゴム株式会社 第１図 リウマチ因子陽性血清の者、釈率 第２図 （μＷ、ａｌｌ 、・ｊ２くりログロブリン濃度
Claims (1)
- 芳香族ビニル化合物を主成分とする単量体を乳化重合す
るに際して、乳化剤を該単量体１００重量部に対してα
０５重量部以下使用し又は使用しないで得られた重合体
粒子からなることを特徴とする光学的測定装置に適用す
る免疫血清学的検査試薬用担体〇
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10419881A JPS585658A (ja) | 1981-07-02 | 1981-07-02 | 免疫血清学的検査試薬用担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10419881A JPS585658A (ja) | 1981-07-02 | 1981-07-02 | 免疫血清学的検査試薬用担体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS585658A true JPS585658A (ja) | 1983-01-13 |
| JPH0228603B2 JPH0228603B2 (ja) | 1990-06-25 |
Family
ID=14374273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10419881A Granted JPS585658A (ja) | 1981-07-02 | 1981-07-02 | 免疫血清学的検査試薬用担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS585658A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62118256A (ja) * | 1985-11-19 | 1987-05-29 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 診断薬用担体粒子 |
| US5942124A (en) * | 1994-10-20 | 1999-08-24 | Labsystems, Oy | Magnetic particle transfer device |
| US6020211A (en) * | 1994-10-20 | 2000-02-01 | Labsystems Oy | Separation of magnetic microparticles involving a preconcentration step |
| US6040192A (en) * | 1993-02-01 | 2000-03-21 | Labsystems Oy | Method and means for magnetic particle specific binding assay |
| US6065605A (en) * | 1994-10-20 | 2000-05-23 | Labsystems Oy | Two-stage separation method |
| US6197597B1 (en) * | 1993-02-01 | 2001-03-06 | Labsystems Oy | Solid phase immunoassay with carriers matching the shape of sample wells |
| US6207463B1 (en) | 1994-10-20 | 2001-03-27 | Labsystems Oy | Separation device for microparticles involving a magnetic rod |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5428816A (en) * | 1977-08-03 | 1979-03-03 | Hoffmann La Roche | Immunological diagnostic reagent |
| JPS55131008A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-11 | Sekisui Chem Co Ltd | Preparation of latex |
| JPS5916816A (ja) * | 1982-07-16 | 1984-01-28 | Lion Corp | 外用組成物 |
-
1981
- 1981-07-02 JP JP10419881A patent/JPS585658A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5428816A (en) * | 1977-08-03 | 1979-03-03 | Hoffmann La Roche | Immunological diagnostic reagent |
| JPS55131008A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-11 | Sekisui Chem Co Ltd | Preparation of latex |
| JPS5916816A (ja) * | 1982-07-16 | 1984-01-28 | Lion Corp | 外用組成物 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62118256A (ja) * | 1985-11-19 | 1987-05-29 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 診断薬用担体粒子 |
| US6040192A (en) * | 1993-02-01 | 2000-03-21 | Labsystems Oy | Method and means for magnetic particle specific binding assay |
| US6197597B1 (en) * | 1993-02-01 | 2001-03-06 | Labsystems Oy | Solid phase immunoassay with carriers matching the shape of sample wells |
| US6447729B1 (en) | 1993-02-01 | 2002-09-10 | Labsystems Oy | Method and means for magnetic particle specific binding assay |
| US5942124A (en) * | 1994-10-20 | 1999-08-24 | Labsystems, Oy | Magnetic particle transfer device |
| US6020211A (en) * | 1994-10-20 | 2000-02-01 | Labsystems Oy | Separation of magnetic microparticles involving a preconcentration step |
| US6065605A (en) * | 1994-10-20 | 2000-05-23 | Labsystems Oy | Two-stage separation method |
| US6207463B1 (en) | 1994-10-20 | 2001-03-27 | Labsystems Oy | Separation device for microparticles involving a magnetic rod |
| US6448092B1 (en) | 1994-10-20 | 2002-09-10 | Thermo Labsystems Oy | Separation device for microparticles involving a magnetic rod |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0228603B2 (ja) | 1990-06-25 |
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