JP2006329958A - 測定試薬用担体粒子及び測定試薬 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 フェニル基を有する重合性単量体に由来するセグメントと、フェニル基とスルホン酸塩とを有する重合性単量体に由来するセグメントとを有する共重合体からなる担体粒子(A)と、フェニル基を有する重合性単量体に由来するセグメントと、フェニル基とスルホン酸リチウム塩を有する重合性単量体に由来するセグメントとを有する共重合体からなる担体粒子(B)とを含有し、粒子(A)及び粒子(B)は、平均粒子径が0.01〜1.5μmであり、かつ、互いに異なる平均粒子径を有し、粒子(A)は、粒子表面のスルホン酸基量が、0.005〜0.3μmol/m2であり、粒子(B)は、サイクリックボルタンメトリ測定による粒子表面のスルホン酸リチウム荷電量が、−10〜−30μAである測定試薬用担体粒子。
【選択図】なし
Description
免疫血清学的検査試薬用の担体として用いられる重合体粒子に要求される性能としては、抗原又は抗体等を重合体粒子に感作した状態のラテックス(以下、感作ラテックスという)中での重合体粒子のコロイド化学的安定性と免疫血清学的凝集反応性とが挙げられる。
また、医療現場においては、上記の各種検査後の血液等の医療廃棄物問題がにわかにクローズアップされ医療保険同様に社会問題化している。このため、RF、CRP、ASO等の一般検査項目については勿論のこと、癌マーカー、梅毒、肝炎、エイズ等の感染ウイルスに関連する項目についても、今まで以上に低濃度域で再現性良く検出できる測定試薬が求められている。これらの検査に用いられる自動分析機では、めざましい技術革新により、少量検体、少量試薬使用が可能となり、上記問題が改善されつつあるが、これら自動分析機に搭載し使用される測定試薬に用いられる不溶性担体粒子には満足しうるものが未だ開発されていない。
0.005μmol/m2未満であると、非特異凝集が発生し、0.3μmol/m2を超えると、表面基の異なる担体粒子(B)と混合する際に、凝集反応性が低下し、感度が鈍くなる。好ましい下限は0.02μmol/m2、好ましい上限は0.25μmol/m2である。上記範囲内とすることで、低濃度領域において高い検出感度を実現することができるとともに、試薬安定性を向上させることが可能となる。
なお、上記スルホン酸基量は、Jounal of Colloid and Intarface Sciencs、49(3)425、1974に記載されている測定方法により求めることができる。
なお、本発明において、担体粒子のサイクリックボルタンメトリ測定による粒子表面のスルホン酸リチウム荷電量は、以下のようにして測定する。即ち、透析セルロースチューブ膜に濾過処理後ラテックスを注入後、自動注廃水及び攪拌機能付ガラス円筒管透析装置(積水化学工業社製)を用い、7日間連続処理したラテックスを10%に調整後5mL採取し、蒸留水にて2〜10%濃度に希釈した試料を用い、W(作用電極、特殊カーボン電極)で、Ref(Ag・AgCl)電極、C(対極電極、Pt)を用い、−1〜1Vまでサイクリックボルタンメトリ(CV)を測定する。
上記粒子径分布は、下記式で定義される担体粒子の変動係数(Cv値)が10%以下であることが好ましく、より好ましくは5%以下であり、特に好ましくは3%以下である。
変動係数(Cv値)=(粒子径の標準偏差/平均粒子径)×100
上記担体粒子(A)を製造する方法としては、例えば、溶媒として水が仕込まれた反応器内に、上記フェニル基を有する重合性単量体、及び、上記フェニル基とスルホン酸塩とを有する重合性単量体を加え、重合開始剤を添加し、窒素雰囲気化で攪拌しながら加熱して共重合を行う方法等が挙げられる。
また、上記担体粒子(B)を製造する方法としては、例えば、溶媒として水が仕込まれた反応器内に、上記フェニル基を有する重合性単量体、及び、上記フェニル基とスルホン酸 リチウム塩とを有する重合性単量体を加え、重合開始剤を添加し、窒素雰囲気化で攪拌しながら加熱して共重合を行う方法等が挙げられる。
上記乳化剤としては特に限定されず、例えば、エーテル型、エーテルエステル型、エステル型、含窒素型等のノニオン性(非イオン性)界面活性剤;カルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩等のアニオン性(陰イオン性)界面活性剤、脂肪族4級アンモニウム塩等のカチオン性(陽イオン性)界面活性剤;ベタイン型、アミノカルボン酸塩型等の両面界面活性剤等が挙げられる。これらの乳化剤は、単独で用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記乳化剤を用いた場合には、重合後の後処理工程において、例えば、重合後に透析等を行うことにより乳化剤を除去することが好ましい。
上記抗原としては、例えば、各種抗原、レセプター、酵素等が挙げられ、より具体的には、β2マイクログロブリン、C−反応性蛋白質(CRP)、ヒトフィブリノーゲン、フェリチン、リウマチ因子(RA)、α−フェトプロテイン(AFP)、マイコプラズマ抗原、HBs抗原等が例示される。
本発明の測定試薬用担体粒子に、被測定物質と特異的に結合する物質を担持する方法としては特に制限されず、従来公知の方法により、物理的及び/又は化学的結合により担持させればよい。
攪拌機、冷却コイル、温度検出器、ジャケット等を装備したガラス反応器(容量2L)に、表1に記載した組成で水、スチレン及びスチレンスルホン酸塩、スチレンスルホン酸リチウム塩を仕込み、窒素置換したのち、攪拌しながら反応温度を71〜73℃に制御して48時間共重合反応を行なった。重合開始剤としては過硫酸カリウムを用い、過硫酸カリウム0.5gを蒸留水10gに溶解し水溶液として使用した。得られたラテックスを取り出し、ペーパー濾紙にて濾過した。濾過処理後、得られた試料1〜8の担体粒子の平均粒子径、粒子径分布、及び、サイクリックボルタンメトリ測定による担体粒子表面のスルホン酸リチウム荷電量を測定した。なお、担体粒子の平均粒子径は、透過型電子顕微鏡にて担体粒子を撮影し、直接続された画像解析装置により測定した。
結果を表1に示した。
試料1の担体粒子を固形分濃度が10%濃度となるようにグリシン緩衝液に分散させたものを、8mLガラス管に250μL注入し、次いで、抗ヒトCRP山羊血清(DAKO社製、タンパク質濃度18mg/mL;以下、抗体溶液という)170μLを添加し、37℃で1時間攪拌し、担体粒子に抗ヒトCRP山羊抗体を吸着させた後、BSA(牛血清アルブミン)を1%含むグリシン緩衝液(pH8.5)2080μLを加え、37℃にて60分攪拌してブロッキング処理を行った。次にブロッキング処理品を、8mL遠心管に分取し、18000rpmで40分間遠心分離処理した後、上清を廃棄し、BSA含有グリシン緩衝液(pH8.5)に再分散させて、余剰抗体を除去するための洗浄処理を2回繰り返し行なった後、BSA含有グリシン緩衝液(pH8.5)を2.5mL添加し、超音波処理した後、更にBSA含有グリシン緩衝液(pH8.5)を追加し、最終液量を5mLにし、測定試薬とした。
得られた測定試薬を表2に示した混合比で混合することにより、混合測定試薬を作製した。
試料1〜8の担体粒子を用いた測定試薬を混合せずそのまま使用した。
(1)試薬性能(感度)評価
上記の方法にて調製した各測定試薬を用いて以下の測定条件にて、CRP濃度0.08〜20mg/dLの検体測定時の吸光度変化量を測定した。
測定機種:日立7150形自動分析装置
検体:3μL
希釈液:270μL(1%BSA含有グリシン緩衝液(pH8.5))
測定試薬:90μL
測定波長:800nm
測光ポイント:2ポイント30−50p
なお、測定結果を図1〜4に示した。なお、比較例12については、重合中にクリーム状となったことから、測定は行わなかった。
Claims (4)
- フェニル基を有する重合性単量体に由来するセグメントと、フェニル基とスルホン酸塩とを有する重合性単量体に由来するセグメントとを有する共重合体からなる担体粒子(A)と、フェニル基を有する重合性単量体に由来するセグメントと、フェニル基とスルホン酸リチウム塩を有する重合性単量体に由来するセグメントとを有する共重合体からなる担体粒子(B)とを含有する測定試薬用担体粒子であって、
前記担体粒子(A)及び前記担体粒子(B)は、平均粒子径が0.01〜1.5μmであり、かつ、互いに異なる平均粒子径を有し、
担体粒子(A)は、粒子表面のスルホン酸基量が、0.005〜0.3μmol/m2であり、
担体粒子(B)は、サイクリックボルタンメトリ測定による粒子表面のスルホン酸リチウム荷電量が、−10〜−30μAである
ことを特徴とする測定試薬用担体粒子。 - 担体粒子(A)と担体粒子(B)との混合比率が、固形分概算の重量比でA/B=1/10〜10/1であることを特徴とする請求項1記載の測定試薬用担体粒子。
- 担体粒子(A)及び担体粒子(B)は、乳化剤の不存在化で共重合して得られるものであることを特徴とする請求項1又は2記載の測定試薬用担体粒子。
- 請求項1、2又は3記載の測定試薬担体粒子に、被測定物質と特異的に結合する物質を担持させてなることを特徴とする測定試薬。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN103616510A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-03-05 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 乙型肝炎表面抗体测定试剂盒以及检测方法 |
Citations (3)
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WO2002079782A1 (fr) * | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | Reactif et procede pour l'immunoanalyse de l'elastase 1, et procede de detection de pathologie pancreatique |
WO2003005031A1 (fr) * | 2001-07-02 | 2003-01-16 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Latex a particules supports pour reactif d'essai, et reactif d'essai |
JP2004212383A (ja) * | 2002-12-20 | 2004-07-29 | Sekisui Chem Co Ltd | 測定試薬用担体粒子及び測定試薬 |
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CN103616510A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-03-05 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 乙型肝炎表面抗体测定试剂盒以及检测方法 |
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