JP6138511B2 - フィラグリン産生促進剤 - Google Patents
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ヒト正常表皮角化細胞NHEK(DSファーマバイオメディカル KJB-101)について、正常ヒト表皮角化細胞用無血清培地(DSファーマバイオメディカル KJB-200)を用いて24wellプレートに5×104 cells/wellの濃度で播種し、37℃、5%CO2−95%airの条件で培養した。播種から48時間後に試験培地に交換し、2日乃至3日に一度培地交換を行いながらさらに1週間培養した。培養終了後、リアルタイムPCRによってフィラグリンの遺伝子発現量を測定した。前記試験培地には、0.3重量%のセリシン、1.2mMの塩化カルシウムを添加し、それぞれのフィラグリン産生促進作用について調べた。
セリシンによるNMF増加効果を調べるために、皮膚(顔面)への連用試験を行った。顔面左側(セリシン区)にはセリシン0.5%水溶液を、顔面右側(対照区)にはRO水(逆浸透膜を通した水)を、1日2回、朝と夜に適量塗布し、連用4週間後に角質サンプルをテープストリップングにより採取して、NMFに特徴的なセリンの含有率を調べた。角質サンプルの採取に際しては塗布物の直接的な影響を避けるため、測定の15分以上前に洗顔を行った。採取した角質サンプルは、50体積%メタノール/50体積%RO水にて12時間以上振とうして抽出し、アミノ酸分析を行った。
セリシンによるNMFの産生促進作用は、セリシンと異なるメカニズムで作用する成分を組合せることで相乗的に増強されることが期待される。そこで、NMF産生の場である角化細胞の増殖を促進する成分、および、NMF産生促進(フィラグリン遺伝子の発現を促進)する成分の探索を行った。
培養後のPHK-16-0bを回収し、トリパンブルーの排除能を指標に生細胞の数をカウントした。その結果セリシン、フィチン酸、ビタミンD3はいずれもPHK 16-0bの増殖を促進し、ビタミンD3が最も強力な作用を示した。結果を図4に示す。
培養後のPHK16-0bを回収し、フェノール・クロロホルムを使用してRNAを抽出、リアルタイムPCRによってフィラグリン遺伝子の発現量を調べた。その結果、セリシンとフィチン酸がPHK16-0bのフィラグリン遺伝子発現を促進することが示された。結果を図5に示す。
セリシン、フィチン酸、ビタミンDおよびそれらの組み合わせについて、肌の水分状態の改善効果を調べるために、4週間の皮膚(上腕部)への連用試験を行った。
上腕内側の左右各3点(計6点)に対し、試験液を4週間、朝と夜の1日2回塗布し、定期的に水分量および水分蒸散量を測定した。試験液は、RO水、フィチン酸(175μM)、フィチン酸(175μM)+ビタミンD3(6.6μM)、セリシン(0.6重量%)、フィチン酸(175μM)+セリシン(0.6重量%)、フィチン酸(175μM)+ビタミンD3(6.6μM)+セリシン(0.6重量%)、をそれぞれ添加した。
塗布物の直接的な影響を避けるため、測定の15分以上前に洗顔料にて前記上腕を洗浄した。ついで、塗布した部分の四隅および中央の計5か所を、各点について測定し、平均値を算出した。水分量の測定には、SKICON−200EX(IBS社)を使用した。
塗布物の直接的な影響を避けるため、測定の15分以上前に洗顔料にて前記上腕を洗浄した。ついで、塗布した部分の中央付近2か所を、各点について測定し、平均値を算出した。水分蒸発量の測定には、Cutometer MPA580(Tewameter TM300、日本代理店:株式会社インテグラル)を使用した。
表皮水分量は、連用2週目以降に変化が現れた。セリシンやフィチン酸、フィチン酸+ビタミンDを連用し続けた場合には、水分量に大きな変化は見られなかった。しかし、フィチン酸やフィチン酸+ビタミンDにセリシンを組合せることで、水分量は大きく増加し、相乗的な作用を示した。とくに、セリシン+フィチン酸+ビタミンDを組合せた場合に、最も高い値を示した。結果を図6に示す。
また、水分蒸散量を連用前後で比較すると、セリシンやフィチン酸を塗布することで水分蒸散量の減少が認められた。とくに、セリシン+フィチン酸+ビタミンDを組合せた場合に、最も低い値を示した。結果を図7に示す。
製法:油性成分および水性成分をそれぞれ混合均一化して75℃に加熱したのち、水性成分に油性成分を添加して乳化し、撹拌しながら冷却した。
製法:油性成分および水性成分をそれぞれ混合均一化して75℃に加熱したのち、水性成分に油性成分を添加して乳化し、撹拌しながら冷却した。
製法:油性成分および水性成分をそれぞれ混合均一化して75℃に加熱したのち、水性成分に油性成分を添加して乳化し、撹拌しながら冷却した。
Claims (3)
- セリシンと、フィチン酸と、ビタミンDとを有効成分とする、フィラグリン産生促進剤。
- 前記セリシンが、重量平均分子量5,000〜100,000である、請求項1に記載のフィラグリン産生促進剤。
- 皮膚外用用としての、請求項1または2に記載のフィラグリン産生促進剤。
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